JPH0758293B2 - 抗ストレプトリジンｏ価の測定法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は抗ストレプトリジンＯ価の測定法に関し、更に
詳細にはリポソームを用いる抗ストレプトリジンＯ価の
測定法に関する。

〔従来の技術〕

ストレプトリジンＯは、Ａ群β−溶連菌が産生する菌体
外毒素であり、この菌に感染すると体内に抗ストレプト
リジンＯ抗体が産生される。この抗体は、感染の初期か
ら産生されるため、その存在の判定は、β−溶連菌によ
る感染症、例えばリウマチ熱、扁桃腺炎、猩紅熱、急性
糸球体腎炎等の診断に重要な意義をもつものである。

従来、抗ストレプトリジンＯ抗体の力価である抗ストレ
プトリジンＯ価を測定する方法としては、溶血阻止反応
を利用したランツ−ランダル（Rantz-Randall）法とマ
イクロタイター法および受身凝集反応を利用した方法と
があり、この中でランツ−ランダル法が日常検査に広く
用いられている。

〔発明が解決しようとする問題点〕

ランツ−ランダル法等の溶血阻止反応を利用した方法
は、ストレプトリジンＯが有する溶血活性を抗ストレプ
トリジンＯ抗体が中和することを原理とする測定法であ
り、新鮮なウサギ赤血球又はヒト型赤血球を用いるた
め、赤血球の安定性、ロツト差等により測定値の変動が
生じるという欠点があつた。

〔問題を解決するための手段〕

斯かる実情において、本発明者らは上記の問題点を解決
せんと鋭意研究をおこなつた結果、卵黄レシチンとこれ
と等モルのコレステロールのみから形成されるリポソー
ムは赤血球と同様ストレプトリジンＯによつて破壊され
ること及びこの性質を利用すれば検体中の抗ストレプト
リジンＯを測定することができることを見出し、本発明
を完成した。

したがつて、本発明は、卵黄レシチンとこれと等モルの
コレステロールのみから形成され、内部にマーカー物質
を封入したリポソーム及びストレプトリジンＯを検体中
に加えて反応させ、リポソーム中から放出されたマーカ
ー物質量を測定することを特徴とする抗ストレプトリジ
ンＯの測定法を提供するものである。

本発明において用いられるリポソームは、卵黄レシチン
及びコレステロールから常法によつて製造されるもので
あり、卵黄レシチンとこれと等モルのコレステロールの
みから常法によつて製造される。

このリポソームに封入するマーカー物質としては、リポ
ソームの破壊の程度を測定できる指標となり得るもので
あれば何れでもよいが、好適には、カルボキシフルオレ
セイン、スルホローダミンＢ等の螢光色素、あるいはβ
−ガラクトシダーゼ、グルコースオキシダーゼ等の酵素
が挙げられる。マーカー物質のリポソーム中への封入
は、例えば卵黄レシチン及びコレステロールからフイル
ム状のリポソーム形成物質を調製し、これにマーカー物
質を含有する水溶液を加えることによりおこなわれる。

本発明方法は、次の如くして実施される。

まず、ストレプトリジンＯを検体中に加え、反応させ
る。反応は通常、37℃で30分間程度おこなうのが好まし
い。次いで、この反応液中にマーカー物質封入リポソー
ムを加え、更に反応させる。この反応において、前段階
の反応で残つた過剰量のストレプトリジンＯがマーカー
物質封入リポソームを破壊し、対応する量のマーカー物
質が放出される。この反応は37℃で30分間程度おこなう
のが好ましい。

従つて、更に、この放出されたマーカー物質量を測定す
れば、検体中の抗ストレプトリジンＯ価を求めることが
できる。マーカーの測定にはマーカーの種類によつて、
一般の螢光法、酵素法等が採用される。

〔発明の効果〕

本発明方法は、赤血球の代りに脂質組成が一定で、しか
も安定なリポソームを使用するので測定値の変動が少な
く、更に測定対象がマーカー物質であるので正確な測定
を行うことができる。

〔実施例〕

次に実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明する。

実施例１ マイクロタイター法による測定： （１） リポソームの作製 5mMの卵黄レシチン−クロロホルム溶液を100μｌ、10mM
のコレステロール−クロロホルム溶液50μｌを10mlのナ
ス型フラスコに取り、溶媒のクロロホルムをエバポレー
ターで揮散させ、フラスコ内面にフイルム状物を付着形
成させた。次いで１〜２時間、減圧乾燥を行つた後、20
0mMカルボキシフルオレセイン−NaOH溶液200μｌを加え
て、ボルテツクスミキサーで激しく攪拌した後、未封入
のカルボキシフルオレセインを遠心により除去しリポソ
ームを得た。

（２） 測定方法 抗ストレプトリジンＯ抗体を含有する検体50μｌにスト
レプトリジンＯを20HU/ml含む水溶液25μｌを加え、37
℃で30分間インキユベートした。これに（１）で得たリ
ポソームの懸濁液（卵黄レシチン濃度0.5μM,コレステ
ロール濃度0.5μＭ）25μｌを加え、37℃で更に30分間
インキユベートした。最後にゼラチン−ベロナール緩衝
液100μｌを加えた後、マイクロタイタープレート用螢
光リーダーによりその螢光強度を求めた。（励起波長49
0nm、測定波長530nm）なお対照として検体の代りにゼラ
チン−ベロナール緩衝液50μｌを用いた。

（３） 結果（検量線） 抗ストレプトリジンＯ価96Todd単位の血清をゼラチン−
ベロナール緩衝液で、32倍、64倍、128倍、256倍に希釈
し、（１）および（２）の方法に従つて測定した結果を
図１に示した。この図から256倍希釈（0.375Todd単位）
から32倍希釈（3Todd単位）の範囲の測定が可能である
ことがわかる。

実施例２ 相関 実施例１−（１）で得たリポソームおよび実施例１に準
じた方法で検量線から求めた抗ストレプトリジンＯ価
と、ヒツジ赤血球を用いたRantz−Randall法で求めた抗
ストレプトリジンＯ価を、101の血清検体について比較
した結果を表１に示した。この結果から明らかなように
本発明法は従来方法と良い相関関係を示した。

【図面の簡単な説明】

第１図は、抗ストレプトリジンＯ抗体を含む血清（抗ス
トレプトリジンＯ価96Todd単位）の希釈培率と放出され
るマーカー量の関係を示す図面である。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】卵黄レシチンとこれと等モルのコレステロ
   ールのみから形成され、内部にマーカー物質を封入した
   リポソーム及びストレプトリジンＯを検体中に加えて反
   応させ、リポソーム中から放出されたマーカー物質量を
   測定することを特徴とする抗ストレプトリジンＯ価の測
   定法。