JPS63102679A - ウロキナ−ゼの回収方法 - Google Patents
ウロキナ−ゼの回収方法Info
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- JPS63102679A JPS63102679A JP24557686A JP24557686A JPS63102679A JP S63102679 A JPS63102679 A JP S63102679A JP 24557686 A JP24557686 A JP 24557686A JP 24557686 A JP24557686 A JP 24557686A JP S63102679 A JPS63102679 A JP S63102679A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
イ、利用分野
本発明はウロキナーゼの回収方法に関する。
口、従来技術
ウロキナーゼ璧人尿および腎細胞の組織培養液中に存在
する酵素であり、人血漿中に含まれるプラスミノーゲン
を賦活化してフィブリン溶解能を有するプラスミンを生
成する機能がある。この故にウロキナーゼは人尿等から
捕集して精製され、各種血栓症や心筋梗塞症等の治療に
広＜ Ｈ？、床使用されている。のみならず、最近にお
いては制癌剤と併用することにより、制癌剤の薬効を向
上せしめることが知られている。しかも、ウロキナーゼ
は人間の尿または腎細胞の組織培養液からの抽出精製物
であるから、抗原性を有さないため、抗原抗体反応によ
る副作用がなく、広（賞月されている。
する酵素であり、人血漿中に含まれるプラスミノーゲン
を賦活化してフィブリン溶解能を有するプラスミンを生
成する機能がある。この故にウロキナーゼは人尿等から
捕集して精製され、各種血栓症や心筋梗塞症等の治療に
広＜ Ｈ？、床使用されている。のみならず、最近にお
いては制癌剤と併用することにより、制癌剤の薬効を向
上せしめることが知られている。しかも、ウロキナーゼ
は人間の尿または腎細胞の組織培養液からの抽出精製物
であるから、抗原性を有さないため、抗原抗体反応によ
る副作用がなく、広（賞月されている。
ところで、ヒト尿などにはウロキナーゼがごく微量にし
か含まれていないので、効率よくウロキナーゼを分離、
濃縮、精製することが困難である。
か含まれていないので、効率よくウロキナーゼを分離、
濃縮、精製することが困難である。
たとえば、従来から繁用されている硅酸塩、珪藻土など
の鉱物を尿自体に接触させてウロキナーゼを吸着、溶出
する方法、種々のイオン交換クロマトグラフィーによっ
て回収する方法においては操作性が繁雑であり、一度に
処理出来る尿も限られているため、微量成分であるウロ
キナーゼを多量に回収するにはコスト高になるという問
題点がある。
の鉱物を尿自体に接触させてウロキナーゼを吸着、溶出
する方法、種々のイオン交換クロマトグラフィーによっ
て回収する方法においては操作性が繁雑であり、一度に
処理出来る尿も限られているため、微量成分であるウロ
キナーゼを多量に回収するにはコスト高になるという問
題点がある。
ハ１本発明が解決しようとする問題点
通常の限外濾過膜による濃縮回収では、ウロキナーゼの
一部が膜に取り込まれ、回収率が悪く（４０−５０％）
、精製は伴わない。
一部が膜に取り込まれ、回収率が悪く（４０−５０％）
、精製は伴わない。
そこで、尿中から効率良くウロキナーゼを回収するため
の処理方法を検討したところ、アルカリ処理したポリア
クリロニトリル系限外８１＃過膜を用いることにより、
原尿からウロキナーゼの４縮・精製が一度に行いうろこ
とを見出し、本発明を完成した。
の処理方法を検討したところ、アルカリ処理したポリア
クリロニトリル系限外８１＃過膜を用いることにより、
原尿からウロキナーゼの４縮・精製が一度に行いうろこ
とを見出し、本発明を完成した。
二０問題点を解決するための手段
本発明の原料である尿（蒸成中）には、ウロキナーゼは
１〜ｌ０ＩＬＩ／＋ｍｌ程度含有されている。
１〜ｌ０ＩＬＩ／＋ｍｌ程度含有されている。
担体となる限外濾過膜はポリアクリロニトリル系で、分
画分子量１万〜５万程度であることが好ましい、以下、
本発明に使用できる商品名の具体例を挙げる。
画分子量１万〜５万程度であることが好ましい、以下、
本発明に使用できる商品名の具体例を挙げる。
ダイセル化学工業■： ＩＩＩＵＹ−Ｈ（基準分画分子
量１万） 、ＤＵＹ−Ｍ（同２万） 、ＤｔｌＹ−門（
同４万）、ＰＬＳ４１Ａ１０９０ （同１万） 、ＰＬ
Ｓ−パＡ（同２万）、ＰＬＳ−ＬＡ１０９０ （同
４ 万）ミリポア社： ＰＴＧＣ（同１万） 、ＰＴＴ
に（同３万）アミコン社：１１１ＰＩＯ（同１万） 、
ｕ１ｐ３０（同３万）、ＨＩＰ５０（同５万） 、）ｌ
ＩＸ５０（同５万） 、Ｈ５１”１０（同１万） 、＋
ｌ５Ｐ３０（同３万） 、８５Ｐ５０（同５万） 、Ｈ
ＩＯＰＩＯ（同１万） 、Ｈ１０Ｘ５０ （同５万）１
４３７社： ＰＭＩＯ（同１万） 、ＸＭ５０ （同５
万）などが挙げられる。
量１万） 、ＤＵＹ−Ｍ（同２万） 、ＤｔｌＹ−門（
同４万）、ＰＬＳ４１Ａ１０９０ （同１万） 、ＰＬ
Ｓ−パＡ（同２万）、ＰＬＳ−ＬＡ１０９０ （同
４ 万）ミリポア社： ＰＴＧＣ（同１万） 、ＰＴＴ
に（同３万）アミコン社：１１１ＰＩＯ（同１万） 、
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ＩＯＰＩＯ（同１万） 、Ｈ１０Ｘ５０ （同５万）１
４３７社： ＰＭＩＯ（同１万） 、ＸＭ５０ （同５
万）などが挙げられる。
この限外濾ａ膜をアルカリで処理する。アルカリとして
は、０．１〜ＩＮ程度の水酸化物（ｐＨｌｏ〜１３程度
）が好ましく、より好ましくは水酸化ナトリウムを用い
る。
は、０．１〜ＩＮ程度の水酸化物（ｐＨｌｏ〜１３程度
）が好ましく、より好ましくは水酸化ナトリウムを用い
る。
その調製方法としては、限外濾過膜をアルカリ溶液で１
０〜６０分間循環させた後に１０〜２０時間静置し、次
いで冷精製水で洗浄した後に原尿をＷｉ環させる。これ
を数回くり返すことが好ましい。
０〜６０分間循環させた後に１０〜２０時間静置し、次
いで冷精製水で洗浄した後に原尿をＷｉ環させる。これ
を数回くり返すことが好ましい。
こうして調製した限外、濾過膜を用いて原尿を処理する
。
。
原尿をｐＨ６〜８に調整し、限外濾過膜に接触させ、限
外濾過膜により濃縮する。その条件としては、プリーツ
型モジュールで操作圧１〜５ ｋｇ ／ ｃｄ程度が好
ましい、この時、蒸成中のウロキナーゼが吸着する。
外濾過膜により濃縮する。その条件としては、プリーツ
型モジュールで操作圧１〜５ ｋｇ ／ ｃｄ程度が好
ましい、この時、蒸成中のウロキナーゼが吸着する。
Ｑ ’Ｘ６ ’ａはｐＨ６〜８、低イオン強度（例えば
、０、Ｏ１〜０．１Ｍ程度）の条件下で押し出せば、Ｉ
ＪＫ以外の尿蛋白（例えば、コロニー形成刺激因子、カ
リクレインなど）を回収することも可能である。
、０、Ｏ１〜０．１Ｍ程度）の条件下で押し出せば、Ｉ
ＪＫ以外の尿蛋白（例えば、コロニー形成刺激因子、カ
リクレインなど）を回収することも可能である。
τ農相液（未吸着液）を除去した後、当該膜をｐ）１６
〜８、低イオン強度（例えば０．００５〜０．０５Ｍ程
度）の条件下で洗浄した後、ｐＨ６〜８、イオン強度０
．０５〜０．２Ｍ程度の条件下で、膜に吸着していたウ
ロキナーゼを、好ましくは、前記した濃縮時の操作圧と
同程度で押し出しながら溶出させる。
〜８、低イオン強度（例えば０．００５〜０．０５Ｍ程
度）の条件下で洗浄した後、ｐＨ６〜８、イオン強度０
．０５〜０．２Ｍ程度の条件下で、膜に吸着していたウ
ロキナーゼを、好ましくは、前記した濃縮時の操作圧と
同程度で押し出しながら溶出させる。
かくして精製されたウロキナーゼの溶出液は常法により
脱塩、濃縮、高度精製の処理を行い、医薬品として使用
できるウロキナーゼとすることができる。
脱塩、濃縮、高度精製の処理を行い、医薬品として使用
できるウロキナーゼとすることができる。
ホ、効果
本発明の方法により
（１１ウロキナーゼ吸着のための尿処理は不要（２）
限外濾過膜γ７：ｉ縮液を押し出すだけで他の尿蛋白
と分離が節単にできる （３） ウロキナーゼの濃縮と精製が一度にできる （４） 限外濾過膜濃縮液は少量となっているので、
精製し５、他の蛋白取得等多目的に使えるなどの効果が
ある。
限外濾過膜γ７：ｉ縮液を押し出すだけで他の尿蛋白
と分離が節単にできる （３） ウロキナーゼの濃縮と精製が一度にできる （４） 限外濾過膜濃縮液は少量となっているので、
精製し５、他の蛋白取得等多目的に使えるなどの効果が
ある。
従って、ａ華な操作によってウロキナーゼを微量しか含
有せず、かつ多量に不純物を含む尿から高能率、高純度
、低コストでウロキナーゼを精製することができる。
有せず、かつ多量に不純物を含む尿から高能率、高純度
、低コストでウロキナーゼを精製することができる。
へ、実験例・実施例
実験例
本発明法と従来法（限外濾過法）によりウロキナーゼの
回収の程度を比較した（第１表）。
回収の程度を比較した（第１表）。
（本発明法）
実施例１に準じて行う。
・ （従来法）
実施例１において、アルカリ処理していない限外濾過膜
を用いてウロキナーゼを精製した。
を用いてウロキナーゼを精製した。
なお、ウロキナーゼの力価はプロラグらのフィブリン平
板法にて測定した。
板法にて測定した。
第 １ 表
実施例１
原尿をｐＨ６，０に調整し、参考例により調製したプリ
ーツ型ポリアクリロニトリル系限外濾過膜（分画分子量
２万、ダイセル−製）を用いて濃縮した後、０．０１
Ｍリン酸緩ｆｊｉ液（ｐＨ７，０）で押し出すことによ
り濃縮液を除去した。膜を０．０１ Ｍリン酸緩衝液（
ｐＨ７，０）で洗浄した後に０．０７５Ｍ硫酸アンモニ
ウムでウロキナーゼを溶出した。第２表に示す値を得た
。
ーツ型ポリアクリロニトリル系限外濾過膜（分画分子量
２万、ダイセル−製）を用いて濃縮した後、０．０１
Ｍリン酸緩ｆｊｉ液（ｐＨ７，０）で押し出すことによ
り濃縮液を除去した。膜を０．０１ Ｍリン酸緩衝液（
ｐＨ７，０）で洗浄した後に０．０７５Ｍ硫酸アンモニ
ウムでウロキナーゼを溶出した。第２表に示す値を得た
。
第２表
参考例
プリーツ型ポリアクリロニトリル系限外ろ過膜（分画分
子量２万、ダイセル−製）に０．５Ｎ水酸化ナトリウム
を３０分間循環させた後に１０時間静置し、冷精製水で
洗浄し、原尿を循環する。これを５回くり返した。
子量２万、ダイセル−製）に０．５Ｎ水酸化ナトリウム
を３０分間循環させた後に１０時間静置し、冷精製水で
洗浄し、原尿を循環する。これを５回くり返した。
Claims (1)
- アルカリ処理したポリアクリロニトリル系限外濾過膜に
原尿を接触させ、限外濾過による濃縮を行うことにより
尿中のウロキナーゼを膜に吸着させた後に濃縮液（未吸
着液）を除去し、次に膜を洗浄し、さらに膜に吸着した
ウロキナーゼを溶出させることを特徴とするウロキナー
ゼの回収方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24557686A JPS63102679A (ja) | 1986-10-17 | 1986-10-17 | ウロキナ−ゼの回収方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24557686A JPS63102679A (ja) | 1986-10-17 | 1986-10-17 | ウロキナ−ゼの回収方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63102679A true JPS63102679A (ja) | 1988-05-07 |
Family
ID=17135777
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP24557686A Pending JPS63102679A (ja) | 1986-10-17 | 1986-10-17 | ウロキナ−ゼの回収方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS63102679A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01141593A (ja) * | 1987-11-27 | 1989-06-02 | Green Cross Corp:The | ウロキナーゼの回収方法及びそれにより得られるウロキナーゼ含有画分 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5387400A (en) * | 1977-01-12 | 1978-08-01 | Mitsubishi Rayon Co Ltd | Collection of protein |
-
1986
- 1986-10-17 JP JP24557686A patent/JPS63102679A/ja active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5387400A (en) * | 1977-01-12 | 1978-08-01 | Mitsubishi Rayon Co Ltd | Collection of protein |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01141593A (ja) * | 1987-11-27 | 1989-06-02 | Green Cross Corp:The | ウロキナーゼの回収方法及びそれにより得られるウロキナーゼ含有画分 |
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