JPS61146184A - ウロキナ−ゼの製造方法 - Google Patents
ウロキナ−ゼの製造方法Info
- Publication number
- JPS61146184A JPS61146184A JP26899684A JP26899684A JPS61146184A JP S61146184 A JPS61146184 A JP S61146184A JP 26899684 A JP26899684 A JP 26899684A JP 26899684 A JP26899684 A JP 26899684A JP S61146184 A JPS61146184 A JP S61146184A
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- urokinase
- molecular weight
- ultrafiltration
- pleated
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- Pending
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- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Separation Using Semi-Permeable Membranes (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、ウロキナーゼ含を液から高純度かつ高収率で
簡単に多量にウロキナーゼを回収する方法に関する。
簡単に多量にウロキナーゼを回収する方法に関する。
ウロキナーゼは人尿および腎細胞の組織培養液中に存在
する酵素であり、人血漿中に含まれるプラスミノーゲン
を賦活化してフィブリン溶解能を有するプラスミンを生
成する機能がある。この故にウロキナーゼは人尿等から
捕集して精製され、各種血栓症や心筋梗塞症等の治療に
広く臨床使用されている。のみならず、最近においては
制癌剤と併用することにより、制癌剤の薬効を向上せし
めることが知られている。しかも、ウロキナーゼは人間
の尿または腎細胞の組織培養液からの抽出精製物である
から、抗原性を有さないため、抗原抗体反応による副作
用がなく、広く賞用されている。
する酵素であり、人血漿中に含まれるプラスミノーゲン
を賦活化してフィブリン溶解能を有するプラスミンを生
成する機能がある。この故にウロキナーゼは人尿等から
捕集して精製され、各種血栓症や心筋梗塞症等の治療に
広く臨床使用されている。のみならず、最近においては
制癌剤と併用することにより、制癌剤の薬効を向上せし
めることが知られている。しかも、ウロキナーゼは人間
の尿または腎細胞の組織培養液からの抽出精製物である
から、抗原性を有さないため、抗原抗体反応による副作
用がなく、広く賞用されている。
ところで、ヒト尿などにはウロキナーゼがごく微量にし
か含まれていないので、効率よくウロキナーゼを分離、
濃縮、精製することが困難である。
か含まれていないので、効率よくウロキナーゼを分離、
濃縮、精製することが困難である。
たとえば、従来から繁用されている珪酸塩、珪藻土など
の鉱物を法自体に接触させてウロキナーゼを吸着、溶出
する方法、種々のイオン交換クロマトグラフィーによっ
て回収する方法においては操作性が繁雑であり、一度に
処理出来る尿も限られているため、微量成分であるウロ
キナーゼを多量に回収するにはコスト高になるという問
題点がある。
の鉱物を法自体に接触させてウロキナーゼを吸着、溶出
する方法、種々のイオン交換クロマトグラフィーによっ
て回収する方法においては操作性が繁雑であり、一度に
処理出来る尿も限られているため、微量成分であるウロ
キナーゼを多量に回収するにはコスト高になるという問
題点がある。
また、ファイバー状の高分子膜限外濾過モジュールを使
用する方法においては目づまりが起こるという問題点が
あり、さらに平膜状高分子膜限外濾過モジュールを使用
する方法においては、ウロキナーゼのように大量の溶液
を処理して精製回収するものにあっては、装置が大きく
なり過ぎるという問題点を有する。
用する方法においては目づまりが起こるという問題点が
あり、さらに平膜状高分子膜限外濾過モジュールを使用
する方法においては、ウロキナーゼのように大量の溶液
を処理して精製回収するものにあっては、装置が大きく
なり過ぎるという問題点を有する。
また、尿などには多量の不純物が存在するが、従来法で
は、これらがウロキナーゼと共に回収されやすいため、
後の精製において不利な面があるという問題点がある。
は、これらがウロキナーゼと共に回収されやすいため、
後の精製において不利な面があるという問題点がある。
本発明は、ウロキナーゼを微量しか含有せず、かつ多量
に不純物をも含む尿などの粗ウロキナーゼ溶液から、高
収率、高純度、低コスト、しかも簡単な操作でウロキナ
ーゼを製造する方法を提供することを目的とする。
に不純物をも含む尿などの粗ウロキナーゼ溶液から、高
収率、高純度、低コスト、しかも簡単な操作でウロキナ
ーゼを製造する方法を提供することを目的とする。
また、本発明はコンパクトな装置で、かつ大量の液を処
理しうるウロキナーゼを製造する方法を提供することを
目的とする。
理しうるウロキナーゼを製造する方法を提供することを
目的とする。
さらに本発明は、その高分子膜限外濾過モジュールが目
づまりしない方法を提供することを目的とする。
づまりしない方法を提供することを目的とする。
当該目的は、本発明、即ちウロキナーゼを含有する溶液
（粗ウロキナーゼ溶液）を非セルロース系の高分子膜に
よって作られたプリーツ型限外濾過モジュールを用いる
ことにより、ウロキナーゼより低分子物質および高分子
物質の少なくとも一方を排除することを特徴とするウロ
キナーゼの製造方法により達成される。
（粗ウロキナーゼ溶液）を非セルロース系の高分子膜に
よって作られたプリーツ型限外濾過モジュールを用いる
ことにより、ウロキナーゼより低分子物質および高分子
物質の少なくとも一方を排除することを特徴とするウロ
キナーゼの製造方法により達成される。
本発明にて使用されるウロキナーゼを含有する溶液は、
ウロキナーゼおよび夾雑物を含有する水溶液であれば特
に制限されることはなく、例えば、尿などのようにウロ
キナーゼの含量が微量で、かつ多量の不純物を含むもの
であってもよい。また、腎細胞培養により得られるウロ
キナーゼ含有溶液、遺伝子工学により発現したウロキナ
ーゼを含有する溶液等も勿論、本発明に使用しうる。
ウロキナーゼおよび夾雑物を含有する水溶液であれば特
に制限されることはなく、例えば、尿などのようにウロ
キナーゼの含量が微量で、かつ多量の不純物を含むもの
であってもよい。また、腎細胞培養により得られるウロ
キナーゼ含有溶液、遺伝子工学により発現したウロキナ
ーゼを含有する溶液等も勿論、本発明に使用しうる。
本発明で使用されるプリーツ型限外濾過モジュールとは
、ひた状を有する形態にあるモジュールをいう。
、ひた状を有する形態にあるモジュールをいう。
而して、本発明で使用される限外濾過膜としては、ウロ
キナーゼより低分子物質を除去するもの（即ち、低分子
側分子量分画用）とウロキナーゼより高分子物質を除去
するもの（即ち、高分子側分子量分画用）の一方または
双方を用いればよく、低分子側分子量分画用としては、
通常、ｌＸ１０４〜４Ｘ１０４ダルトンの限外濾過膜が
、また高分子側分子量分画用としては、通常、ｌＸ１０
５〜１×１０６ダルトンの限外濾過膜が使用される。当
該限外濾過膜は、非セルロース系の合成高分子膜よりな
るプリーツ型モジュールであればよく、例えばポリアク
リルニトリル系限外濾過膜、ポリスルホン系限外濾過膜
などがあげられる。
キナーゼより低分子物質を除去するもの（即ち、低分子
側分子量分画用）とウロキナーゼより高分子物質を除去
するもの（即ち、高分子側分子量分画用）の一方または
双方を用いればよく、低分子側分子量分画用としては、
通常、ｌＸ１０４〜４Ｘ１０４ダルトンの限外濾過膜が
、また高分子側分子量分画用としては、通常、ｌＸ１０
５〜１×１０６ダルトンの限外濾過膜が使用される。当
該限外濾過膜は、非セルロース系の合成高分子膜よりな
るプリーツ型モジュールであればよく、例えばポリアク
リルニトリル系限外濾過膜、ポリスルホン系限外濾過膜
などがあげられる。
ウロキナーゼ含有溶液を限外濾過膜に通じる際の条件は
、一般に次の通りである： 処理溶液のｐＨ：５〜８ 操作圧 ：１〜１５ｋｇ／ａ！ 本発明に関する限外濾過膜による処理は、ウロキナーゼ
の回収、製造の任意の工程にて行えばよい。本発明にお
いては、低分子側分子量分画用の濾過膜による処理と高
分子側分子量分画用の濾過膜による処理のいずれか一方
を行えばよいが、好ましくは両者の処理が行われる。両
者の処理を行う場合には、まず低分子側分子量分画用の
濾過膜による処理を行い、後に高分子側分子量分画用の
濾過膜による処理を行うことが好ましい。なお、例えば
基準分画分子量１０，０００〜２０，０００のプリーツ
型限外濾過モジュールを使って１回処理すれば、夾雑物
を簡単に除去でき、ウロキナーゼの純度上昇を期すこと
ができる。
、一般に次の通りである： 処理溶液のｐＨ：５〜８ 操作圧 ：１〜１５ｋｇ／ａ！ 本発明に関する限外濾過膜による処理は、ウロキナーゼ
の回収、製造の任意の工程にて行えばよい。本発明にお
いては、低分子側分子量分画用の濾過膜による処理と高
分子側分子量分画用の濾過膜による処理のいずれか一方
を行えばよいが、好ましくは両者の処理が行われる。両
者の処理を行う場合には、まず低分子側分子量分画用の
濾過膜による処理を行い、後に高分子側分子量分画用の
濾過膜による処理を行うことが好ましい。なお、例えば
基準分画分子量１０，０００〜２０，０００のプリーツ
型限外濾過モジュールを使って１回処理すれば、夾雑物
を簡単に除去でき、ウロキナーゼの純度上昇を期すこと
ができる。
かくして精製されたウロキナーゼの溶出液は常法により
脱塩、濃縮、高度精製の処理を行い、医薬品として使用
できるウロキナーゼとすることができる。
脱塩、濃縮、高度精製の処理を行い、医薬品として使用
できるウロキナーゼとすることができる。
本発明は、非セルロース系の高分子膜によって作られた
プリーツ型限外濾過モジュールを用いるという簡単な操
作によって、ウロキナーゼを微量しか含有せず、かつ多
量に不純物を含む尿などの粗ウロキナーゼ溶液から、高
収率、高純度、低コストでウロキナーゼを精製すること
が出来るという効果を有する。また、本発明に関する非
セルロース系の高分子膜によって作られたプリーツ型限
外濾過モジュールを用いることによって膜の目づまりが
なく、かつコンパクトな装置で大量の粗ウロキナーゼ溶
液を処理することができる。
プリーツ型限外濾過モジュールを用いるという簡単な操
作によって、ウロキナーゼを微量しか含有せず、かつ多
量に不純物を含む尿などの粗ウロキナーゼ溶液から、高
収率、高純度、低コストでウロキナーゼを精製すること
が出来るという効果を有する。また、本発明に関する非
セルロース系の高分子膜によって作られたプリーツ型限
外濾過モジュールを用いることによって膜の目づまりが
なく、かつコンパクトな装置で大量の粗ウロキナーゼ溶
液を処理することができる。
以下実施例により本発明の詳細な説明する。
実施例中のウロキナーゼの力価はプロラグらのフィブリ
ン平板法にて測定を行った。
ン平板法にて測定を行った。
実施例１
新鮮男子圧ａ、ｏｏｏｚをプリーツ型ポリアクリロニト
リル系限外濾過膜（分画分子量２０，０００）を用いて
濃縮し、液量を少量化するとともに、あらかじめ尿中の
夾雑物を除去した。
リル系限外濾過膜（分画分子量２０，０００）を用いて
濃縮し、液量を少量化するとともに、あらかじめ尿中の
夾雑物を除去した。
この濃縮液をＣＭ−セファデックスにて精製したところ
、その溶出液に比活性８．０ＯＯＩＵ／ｍｇタンパクの
ウロキナーゼを８５％の収率で得ることができた。また
、さらにＣＭ−セファロース ＣＬ６Ｂで高度精製した
ところ、最終的には８５，００ｏＩυ／ｍｇクンバクの
ウロキナーゼを得ることができた。
、その溶出液に比活性８．０ＯＯＩＵ／ｍｇタンパクの
ウロキナーゼを８５％の収率で得ることができた。また
、さらにＣＭ−セファロース ＣＬ６Ｂで高度精製した
ところ、最終的には８５，００ｏＩυ／ｍｇクンバクの
ウロキナーゼを得ることができた。
このように前処理としてプリーツ型限外濾過膜を使用す
ることによって、多量のウロキナーゼ含有液を目づまり
なく簡単に少量化できるとともに、夾雑物も除去できる
ため、後の精製工程において簡単に純度アンプすること
ができ、また液量が少量化されることによって、操作性
も繁雑さが改善された。
ることによって、多量のウロキナーゼ含有液を目づまり
なく簡単に少量化できるとともに、夾雑物も除去できる
ため、後の精製工程において簡単に純度アンプすること
ができ、また液量が少量化されることによって、操作性
も繁雑さが改善された。
実施例２
人尿より抽出した粗ウロキナーゼ溶液（比活性５００１
１Ｊ／ｍｇタンパク） ２，０００万ＩＵをプリーツ型
ポリスルホン系限外濾過膜（分画分子量１００万）を用
いて、膜による分離を行い、ウロキナーゼ以外の種々の
夾雑物（高分子タンパク発熱性物質等）を除去した。こ
の溶液をアンバーライト ＩＲＣ−５０を用いて精製し
たところ、比活性１５．０００ｒｌＪ／ｎｇタンパクの
ウロキナーゼを９０％の収率で得ることができた。
１Ｊ／ｍｇタンパク） ２，０００万ＩＵをプリーツ型
ポリスルホン系限外濾過膜（分画分子量１００万）を用
いて、膜による分離を行い、ウロキナーゼ以外の種々の
夾雑物（高分子タンパク発熱性物質等）を除去した。こ
の溶液をアンバーライト ＩＲＣ−５０を用いて精製し
たところ、比活性１５．０００ｒｌＪ／ｎｇタンパクの
ウロキナーゼを９０％の収率で得ることができた。
このように前処理としてプリーツ型限外濾過膜を用いる
ことによって、１ステツプで簡単に高収率で純度アップ
することができ、さらに精製することによって、比活性
８０，０ＯＯＩＵ／ｍｇタンパクのウロキナーゼを得る
ことができた。
ことによって、１ステツプで簡単に高収率で純度アップ
することができ、さらに精製することによって、比活性
８０，０ＯＯＩＵ／ｍｇタンパクのウロキナーゼを得る
ことができた。
実施例３
組織培養液２００１１をプリーツ型ポリアクリロニトリ
ル系限外濾過膜（分画分子量２０，０００）を用いて濃
縮し、液量を少量化するとともに、不純タンパク等を除
去した。
ル系限外濾過膜（分画分子量２０，０００）を用いて濃
縮し、液量を少量化するとともに、不純タンパク等を除
去した。
この濃縮液をＣＭ−セルロースにて精製したところ、比
活性２０，０００１υ／ｒａｇタンパクのウロキナーゼ
を９０％の収率で得ることができた。
活性２０，０００１υ／ｒａｇタンパクのウロキナーゼ
を９０％の収率で得ることができた。
このように前処理としてプリーツ型限外濾過膜を使用す
ることによって、効率よく簡単に純度アップすることが
でき、さらに精製することによって、比活性ＬＯ０，０
００１Ｕ／ｍｇタンパクのウロキナーゼを得ることがで
きた。
ることによって、効率よく簡単に純度アップすることが
でき、さらに精製することによって、比活性ＬＯ０，０
００１Ｕ／ｍｇタンパクのウロキナーゼを得ることがで
きた。
Claims (1)
- ウロキナーゼを含有する溶液を非セルロース系の高分子
膜によって作られたプリーツ型限外濾過モジュールを用
いることにより、ウロキナーゼより低分子物質および高
分子物質の少なくとも一方を排除することを特徴とする
ウロキナーゼの製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26899684A JPS61146184A (ja) | 1984-12-19 | 1984-12-19 | ウロキナ−ゼの製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26899684A JPS61146184A (ja) | 1984-12-19 | 1984-12-19 | ウロキナ−ゼの製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61146184A true JPS61146184A (ja) | 1986-07-03 |
Family
ID=17466213
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP26899684A Pending JPS61146184A (ja) | 1984-12-19 | 1984-12-19 | ウロキナ−ゼの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61146184A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5404418A (en) * | 1990-08-01 | 1995-04-04 | Mitsubishi Denki K.K. | Closed-loop feedback control system having an adaptive filter |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5824311A (ja) * | 1981-07-18 | 1983-02-14 | ザルトリウス・ゲゼルシヤフト・ミツト・ベシユレンクテル・ハフツング | 流体用の管形フイルタ部材及びその製法 |
| JPS5843787A (ja) * | 1981-09-10 | 1983-03-14 | Asahi Chem Ind Co Ltd | ウロキナ−ゼの回収方法 |
| JPS5928642U (ja) * | 1982-08-17 | 1984-02-22 | マツダ株式会社 | 気筒数制御エンジン |
-
1984
- 1984-12-19 JP JP26899684A patent/JPS61146184A/ja active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5824311A (ja) * | 1981-07-18 | 1983-02-14 | ザルトリウス・ゲゼルシヤフト・ミツト・ベシユレンクテル・ハフツング | 流体用の管形フイルタ部材及びその製法 |
| JPS5843787A (ja) * | 1981-09-10 | 1983-03-14 | Asahi Chem Ind Co Ltd | ウロキナ−ゼの回収方法 |
| JPS5928642U (ja) * | 1982-08-17 | 1984-02-22 | マツダ株式会社 | 気筒数制御エンジン |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5404418A (en) * | 1990-08-01 | 1995-04-04 | Mitsubishi Denki K.K. | Closed-loop feedback control system having an adaptive filter |
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