JPS6255091A - 新規抗生物質ｒｋ−１２０ａ及びｒｋ−１２０ｂ、その製造法並びに農園芸用殺菌剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔技術分野〕 本発明は、新規抗生物質Ｒに一／２ＯＡ及びＲに−１，
２０Ｂ並びにその製造法と、Ｒに一７２ＯＡ、Ｆｌに一
／λＯＢ又はその複合体を有効成分とする農園芸用殺菌
剤に関する。

なお、この抗生物質Ｒに一／２ＯＡ及びＲに一１２０Ｂ
は、本願に対応する中国特許出願において、”抗生物’
Ｘ５Ｐ−１２ＯＡ及びＳ　Ｐ　−１２０Ｂ”と呼称され
る物質とそれぞれ同一の物質である。

〔発明の背景〕

従来、ｉ園芸用殺菌剤として銅剤、水銀剤、砒素剤の如
き重金属化合物や有機塩素系薬剤、有機リン酸系薬剤等
が用いられてきたが、これらはいずれも動物や人体に有
害で、土壌に対する汚染があり九９−自然界Ｖｃｌ！４
留して長時開動・植物に作用し、これら薬剤による環境
汚染が重大な社会問題となり、その使用が禁止ないしは
制限さ、れている現状にある。しかしながら、稲の主要
病害ｔ−扛じめとする各種植物病！！は、対象薬剤の減
少や耐性菌の出現に伴って増加の傾向を示してお９、そ
の対策として対象病害に著効を示し、且つ安全性の高い
新たな長薬の開発が強く望まれている。

〔発明の目的〕

本発明の目的は、各洩植物病害に有効な抗生物質Ｒに一
１、２０Ａ及びＲに一／２０Ｂとその製造法を提供する
ことにある。更に、本発明の目的は、上記抗生物質Ｒに
一／２ＯＡ、Ｒに一／２０Ｆ３又はその複合体を有効成
分とする農園芸用殺菌剤を提供することにある。

〔発明の構成〕

本発明の抗生物質Ｒに一／２０Ａ及びＲに一１２０Ｆ３
ｎ、後述の理化学的性質を有する文献未載の新規な抗生
物質であり、又後述の散布試験において、稲の主要病害
である稲紋枯病、稲いもち病′＠：＃′ｉじめとして、
キエウリ灰色かび病、キ３−ツク炭痘病、ナシ黒斑病、
プドワ晩腐病等の各榴植物ｌｌ１ｊ！害に対して優れた
防除効果を奏し、且つ植物体に何ら薬害を及ぼさず、そ
の施用にあたり人体に何らの影＃を与えない優れた農園
芸用殺菌剤であるＯ 以下に、本発明の詳細な説明する。

く抗生物質ＲＫ−／２ＯＡ及びＲに一／２０ＢＣ）製造
さく使用する微生物） 本発明の抗生物質Ｒに一１２ＯＡ及びＲに一／２０Ｆ３
を生産する微生物はストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏ
ｍｙｅｅｓ）楓に属する抗生物質Ｒに一／２０Ａ及びＲ
に一／２０Ｂの生産能を有する１橿である。

その−例として、ストレプトミセス・エスピー・Ｒに一
／　２０　（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃａｓ　ｓｐ、　Ｒに
一／２０　）（ＦＥＲＭ　　Ｐ−７７１３）Ｃ以下’Ｒ
Ｋ−へＷ株１と称する。なおこめＲに一／２０株に、本
願に対応する中国特許出願において１ストレゾトミセス
・エスピー・ＳＰ−八ｕ１と呼称される株と同一の株で
ある。〕を挙げることができ、該微生物は、上記の特性
を有し、本発明の抗生物５ｆ［Ｒに一１、２０Ａ及びＲ
Ｋ−／２０Ｆ３’ｆｅ有利に生産する。ものであり、本
発明の製造法に有効に利用し得るものである６前記Ｒに
一／！θ株に、中華人民共和国・上溝＃に薬研究所で分
離さｎた菌株でめり、工業技術院・微生物工業技術研死
所のは生物受託査号に、微工研菌寄第７７／３号（ＦＥ
ＲＭ　　ｐ−７７／３）である。

Ｒに一／λＯ株は、ストレグトミセス属に属し、特許庁
産業別審査基準による培地上での発育状態及び生理的諸
性質は、次の如くである。

！、　形態的特徴 本菌株はオートミール寒天ｖＪ地、スターチ・イーヌト
寒天培地（組成後記〕上で極めてよく発育し、気中菌糸
、胞子の着生は豊富であり、気中菌糸は白ないしは淡灰
色を呈する。シェークロース硝酸塩寒天培地、イースト
麦芽寒天培地との発育は良好で気中菌糸および胞子の着
生は良好である。その池のグルコース・アス・平うギン
寒天培地、グリセリン・アヌ・Ｉライン寒天培地、スタ
ーチ・無機塩寒天培地、チロシン寒天培地、栄養寒天培
地、ベグトン・イースト・鉄寒天培地上での発育はある
が充分ではなく、グルコース・アス・やライン寒天培地
、栄養寒天培地およびペプトン・イースト・鉄寒天培地
では気中菌糸の発育は微弱かまたは認められない。

一般に可溶性色素の生成は微弱で微黄褐色系色素がわず
かに生産されるのが認められるが、チ寒天培地によるメ
ラニン様色素の生成は認められない。基底菌糸はその裏
面に特徴ある色調は呈せず、微菌ないし微褐色である。

気中菌糸は直状に発育し、それから分枝したものは強し
１螺旋状のいわゆるヌ／４イラルとなり、これが長し１
胞子鎖となる。胞子は長さｌｐ以内、巾約Ｏ９ｊμの球
状に近いだ円状で表面は平滑である。

糖による炭素源の資化試験ではし一アラビノーヌ、Ｄ−
フラクトース、ラフィノース、ラクトース、メルビオー
ヌをよく資化し、発育は良好でアル。０−グルコース、
シェークロース、４　／’／）−ル、Ｄ−マンニトール
では若干生育が劣るが発育する。Ｄ−キシロース、Ｌ−
ラムノーヌ上での発育は不良で、特にＬ−ラムノースで
は気中菌糸の生成が認められなし・。

グルコース・ペグトン・ゼラチン培地上では発育するが
、ゼラチンを液化しなし１゜脱脂乳に対しては完全にベ
グトン化し、透明に近し１液となる。スターチ・無機塩
寒天培地上での澱粉の加水分解は強いことが認められた
。

細胞ｖｉ！ｔ−塩酸で加水分解し、イー・母−クロマト
グラフによる細胞壁組成アミノ酸の検出ではし一ジアミ
ノピメリン酸が検出され、これは本菌がストレプトミセ
ス属であることを示している。　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　３゜■、　各種培地上での
諸性質 特許庁産業別審査基準に従い各種培地を調製し、接種後
３週間目に＊察した結果ｔ−次に記載する。色調の記載
はｒイヌクリグチイブ・カラー・ネイムズ・ディクショ
ナリ（Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｖｅｃｏｌｏｒ　ｎａｍｅｓ
　ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ　）　　第≠版の色名記号　　
４゜に従ったものである。

１、／ユクローヌ硝酸塩寒天培地 生　　育　　　　　　　良好 気中菌糸の着生　良好 気中菌糸の色　　４　ｂａ　　−セール基底菌糸の色　
　３　ｔｃ　　アン・ぐ−５゜可尋性色ｔＡ　　　　３
　ｇａ　　メロンイエロー２、　　グルコース・アス／
’１ラギｙｕ　天培地生　育　　　　　不良 気中菌糸の着生　　な　し 気中菌糸の色　　　不　明 基底菌糸の色　　　ｊ　Ｃａ　　シェルピンク可溶性色
素　　　　６Ｃａ　　シェルピンクグリセリン・アク／
４ライン寒天培地 生　　　育　　　　　　　　普　　通 気中菌糸の着生　　不　良 気中菌糸の色　　　７　ｃｂ　　クラウドピンク基底菌
糸の色　　　ｊ　Ｐｅ　　テラ・コツプ可溶性色素　　
　　　　ｉｓ　／；’　ｇｃ　　ダステイコ・−・ラル
スターチ・無機塩寒天培地 生　　　育　　　　　　　普　通 気中菌糸の着生　　普　通 気中菌糸の色　　　ａ　ホワイト 基底菌糸の色　　　３Ｃａｐ＃−ルピンク可溶性色素　
　　　な　し チロシン寒天培地 生　　　育　　　　　　　普　通 気中菌糸の着生　　普　通 気中菌糸の色　　　ｂ　ライトグレー 基底菌糸の色　　　弘Ｐ１　　オークブラウン可溶性色
素ｊ　ｉｅ　　カツノダータン６、栄養寒天培地 生　　　育　　　　　　　　普　　通 気中菌糸の着生　　な　し 気中菌糸の色　　　不　明 ｕ１氏菌糸の色　　　ｌｅａライトノイズ可溶性！ｇ素
　　　　−ｅａライトメイズ７０．イースト・麦芽寒天
培地 生　　　育　　　　　　　　良　　好 気中菌糸の着生　　良　好 気中菌糸の色　　　ａ　ホワイト 基底菌糸の色　　　２ｅａライトメイズ可溶性色素　　
　　な　し ８、　オートミール寒天培地 生　　　育　　　　　　　　良　　好 気中菌糸の着生　　豊　富 気中菌糸の色　　　　Ｃライトテレ− 基底菌糸の色　　　３　ｂａ　　−セール可溶性色素　
　　　な　し ９、−！グトン・イースト・訣しメ天培地生　　　育　
　　　　　　　普　　通 気中菌糸の着生　　な　し 気中菌糸の色　　　不　明 基底菌糸の色　　　−ｅａミライトメイズ溶性色素　　
　　な　し １０、ヌターチ・イーヌト寒天培地＊ 生　　　育　　　　　　　　良　　好 気中菌糸の着生　　豊　富 気中菌糸の色　　　ａ　　ホワイト ＆底菌糸の色　　　３　Ｐｃ　　アンバー可溶性色素　
　　　３ＣａＡ−ルビンク＊ヌターチ・イースト寒天培
地組成 可溶性＃扮　　　　１０ｆ！ イー、ストエキス　　　　７ｇ ＮＺアミンＡ　　　　　　／ｉ 寒　　天　　　　　　　　　　１６ｇ 水　　　　　　　　　　　　　　／ｌ　　　　ｐＨ７，
！ｌ　炭素源の資化（グリド・・ム・ゴツトリープ寒天
培地）炭　素　源　　　　発育状況＊ Ｌ−アラビノース　　　＋＋ Ｄ−キシロース　　　　　士 Ｄ−グルコース　　　　　＋ Ｄ−フラクトース　　　＋＋ ンユクローヌ　　　　　　＋ イノ７トール　　　　　　＋ Ｌ−ラムノ−ヌ　　　　　± ラフィノース　　　　　＋＋ Ｏ＋マンニトール　　　　＋ ラクトース　　　　　　＋＋＋ メルビオース　　　　　＋＋ ＊発ａ状況 十十十　非常によく発育する ＋＋　　良く発育する 十　　　発育する ±　　　稍発育する −　　　発育しない ■、その１目の生理的性質 至適温波　　　　　　　　　　　・認ｊ〜・３０℃ゼラ
チンの液化 （ヶヤヨー３．４グヶ７．イラヶ、培地、ｉ化セｆ脱脂
乳の液化　　　　　　　　　　　　完全に液化する上記
の諸性’ｄ　（ｃ”有するストレプトミセス属の菌種の
検索には野々村氏の報告によった。即ち１す々村氏によ
るツヤ−ナル・オブ・７アメンテイ７ヨン０チク１０ノ
ー（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ
Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　）　　ｊ　２巻λ号記載の放線
菌ＩＳＰ≠ｊ♂菌種の分類法の記載〔キイ・７オア・ク
ラクイフイケイショ／・アンド・ア・１デンテイフイケ
イシヨン・オプ・≠ｊｆｆスペインイ・オプ・デ・スト
レプトミセス・インクループゝイド・イン・ＩＳ、Ｐ（
にｅｙ　ｆｏｒ　ｃｌａｓｓｌｆｌｃａｔｌｏｎ　ａｎ
ｄ　Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆ４４ｊ了５ｐｅ
ｃｉｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　５ｔｒｅｐｔｏｒｎｙｃｅｓ
Ｉｎｃｌｕｄｅｄ　Ｉｎ　ＩＳＰ　）］である。

本口は白ないし灰色のグルーグに属し、気中菌糸はス・
セイラル状になり、胞子表面は平滑でメラ二／色素を形
成しない。また裏面と可溶性色素は共に顕著な色調を呈
しない。糖はラムノースとＤ−キシ、ａ−ヌの利用は悪
いがその池のものは大体利用する。以上の条件を満たす
ものはストレグトミセスアルヂファシエン虫（Ｓｔｒｅ
ｐｔｏｍｙｃｅｓａｌｂｏｆａｃｉｅｎｃｅ　）　　が
あり１本菌はＳ、アｋ　＠　７アシエンヌがこれに近い
種と思われる。

（培養法及び精製法） 本発明の抗生物質ＨＫ−／λＯＡ及び１ｉｏＢを得るに
当っては、ストレプトミセス属に属する上記抗生物質生
産−を、抗生ｖｌＪ質を生産する通常の方法で培養する
ことができる。培養の形態は、敵体培餐でも固体培養で
もよく、工業的に有利に培養するためには、前記生産菌
の胞子懸濁液又は培養液を培地に接種し、通気攪拌培養
を行えばよい。

培地の栄養源としては特に限定されることはなく１似生
物の培養に通常用いられる炭素源、゛窒素源その他を培
地中に含有させることかできる。炭素源としては、澱粉
、デキストリン、グリセリン、グルコース、シェークロ
ーヌ、ガ５：！トー）、’（ノシトール、マンニトール
などが、また窒素源としては、Ｋグトン、大豆粉、肉エ
キス、米ぬか、Ｍ、尿ｔｓ、コーンヌテイーグリカー、
アンモニウム塩、硝酸塩、その池の有機または無機の窒
素化合物が用いられる。その他、無機１：Ｍ類、たとえ
ば食塩、燐酸塩類、１ＪＩＪウム、カルシ９ム、亜鉛、
マンガン、鉄等の金属塩類等を適宜に１１倶加してもよ
く、必要に応じて消泡剤として、動、偵、鉱物油等を添
加してもよい。培養温匿、培養時間等の培養条件は使用
菌の発育に−シ、シかもＲＫ−１、２０Ａ及びＲＫ−１
、２０Ｂの生産が最高となるような条件が選ばれる。た
とえば、培地の声は≠〜り、特に中性付近がよく、培養
の適温は、２ｊ０−３６０Ｃ程度がよい。しかし、これ
らの培ｉ組成物、培地の水素イオン１ム培養温度、攪拌
条件などの培養条件は使用する菌株の種類や、外部の条
件などに応じて好ましい結果が得られるように適宜調節
されるべきであることはいうまでもない。

このようにして得られる培養物から、ＲＫ−７２０Ａ及
びＲに一１、２０Ｂを得るには、代謝産物を採取するの
に通常用いられる手段を適宜に利用して採取しりる。た
とえば、Ｒに一／ノＯＡ及びＲＫ−／２ｑＢと不純物と
の溶解度差を利用する手段１、ｆオン結合力の差を利用
する手段、吸ｇＪ視和力の差を利用する手段、分子量の
差を利用する手段のいずれも、それぞれ弔独、又は、１
１１宜組合わせて、あるいは反復して使用される。具体
的には、Ｒに−／　、２０　Ａ　、＆びＲＫ−１２０１
３社、培養Ｐ液にその大部分が存在するが、この培養ｐ
液からエタノールでくり返し抽出するか、合成吸着剤、
例えば、グイヤイオンＨＰ１０等を用いて１及着させた
後、ｊＯチアセトンで溶出し、Ｓ種物を得る。得られた
ａａ物は、シリカダルを用いたカラムクロマトグラフィ
ーをくり返し行う。Ｐｉ３媒は、エタノール−メタノー
ル−水系が好適であり、これらの比率を変化させること
によってクロマトグラフィーは、目的を達成することが
できる。活性区分けＲＫ−／ＩＯＡの多い区分とＲ１４
−ハ２ｄＢの多い区分に分け、それぞれを、ｒル濾過剤
、例えば、セ乙アデツクヌし５−２０等を用いて、カラ
ムクロマトグラフィーを行う。溶媒は、上記と同じ溶媒
系を用いるのがよい。ｒル濾過により、ＲＫ−１、２Ｏ
Ａ及びＲＫ−／２０Ｅ３は、それぞれ更に精製され、白
色粉末として得られる。この後、高速液体クロマトグラ
フィーを行うことにより、ＲＫ−／２０ＡとＲＫ−ハ２
０Ｂを完全に分離することができる。充填剤としては、
Ｎｕｃｌｅｏｓｌｌ　ｊ　Ｃ工８、ｓ媒は、イングロ・
ぐノール−メタノール−水に若干の酢酸を加えたものが
好適である。

かくして得られたＲに一／２０Ａ及びＲに一１ｉｏＢは
、それぞれ以下に述べるとおりの理化学的性質を有する
新規抗生物賓である。

〔Ｒに一／ＩＯＡ及びＲに一／２０Ｅ３の理化学的性質
〕（１）融　　点： Ａ：２３ｊ〜、！　５６℃で褐色になり分解する。

Ｂ：２３ｊ〜、２１５’ｌで褐色になり分解する。

（２）元素分析： Ａ：炭素ｊ　Ｏ，り♂チ、水素７／／チ、窒素／６．１
１−２％、硫黄３．６６　Ｔ。

Ｂ：炭素ｊＯ１り７％、水素乙、りＳＳ。

窒素ｌ乙、ｌ−チ、硫黄３．３タチ （３）比旋光度： Ａ：〔α〕６５−タ００ ＣＣ＝０．Ｏｊ１ゾメチルスルホキシド）Ｂ：〔α）２
５　　ｓり０ （Ｃ＝０．０３、ツメチルスルホキシド）（４）紫外線
吸収スペク、トル： Ａ：２０．ＩＮ−ＨＣｔ−ＭｅＯＨ ｍａ× −ｔ　−２０ｎｒｒ＋ｃ　Ｅ　に／　Ｉ　６）肩（第１
図参照）Ｂ：２ｏ、ＩＮ−ＨＣｔ−ＭｅＯＨ ａｘ ２２０　ｎｍ（Ｅｊ、：　；２９３　）肩（第２図参照
）（５）赤外線吸収スペクトル＝にＢｒ法によるＡ　：
　３３００．．２り０３、．２ｇ！；０　、　／　６ｊ
ｊ　、　／ｊ認Ｏ１ｌ弘６０．／３り！；、／３ｆＪ、
／３．２０．／−♂Ｏ１／２ｊＯ，／Ｊ／ｊ、／／６３
．／１００，１０．２０゜ｉｏｏ、２．り００．ｆ弘０
ｅ７１ｓＯａｎ−１（第３図参照） Ｂ　：　３３００．２り００，２♂ｊＯ，／６ｊＯ，／
！２０゜７≠３．！；、／３９ノ、／３７０　、／３１
ＡＪ　、／３ノコ。

ｌｌざｊ、／ノ１、２．／／ざｓ、／ｉｂｔ、１ｉｏｏ
。

１０ノ≠、１００弘、９６１．り０３．ざ≠６．♂２ｊ
。

７６５ｃｍ　　　　（第弘図参照） （６）！解性：　ＲＫ−／２ＯＡ及びＲＫ−１、２０Ｂ
共に、メタノール、エタノール、アセトン、酢酸エチル
、クロロホルム、ぺ／ゼ１、ヘキサン、エーテルなどの
有機溶媒に不溶、水に劃もシタノールとメタノールと水
の混液に可溶。

（７）分子量：　　ＦＡＢ　　マススペクトル１ｍｍｍ
ａｉｉｘによるＡ：りｌｌ Ｂ：２２３ （８）呈色反応：ＲＫ−１、２ＯＡ及びＲに一１、２０
Ｆ３共に、過マンガン酸カリウム、アニスアルデヒド−
硫酸、ヨク素に陽性。

（９）物質の色：Ｒに−ｌｌｌＡ及びＲに一／２０Ｆ３
共に白色粉末である。

（７）１４７Ｍクロマトグラフィー（米国メルク（Ｍｅ
ｒｃｋ）社製薄層板０．２５　ｍ／ｒｎ）　： セルロース （溶媒、ブタノール：メタノール：水−！：／：、りに
よるＲ　ず値 Ａ”、０．６０ ｅ：０．＋＋ シリカゲル （Ｓ媒、ブタノール：メタノール：水＝≠：／：、２）
によるＲ　ず値 Ａ：０．．３−／ Ｂ　：ｏ、５ｉ Ｃ１ｌｌ酸加水分解：　６Ｎ−ＨＣｌ中で１０ｊ℃、２
０時間加熱し加水分解するとＲに一／２０＾は、グリシ
ン、ロイシンの各アミノ酸が検出され、Ｒに一／２０Ｂ
は、グリシンとベリンが検出され念。

Ｃｌ７Ｊ抗菌スペクトル二通常の寒天平板希釈法による
検定を行い、最低阻止濃度（ＭＩＣ）で示した。

バクテリアはブイヨン寒天培地、カビ庁、？テトーシェ
ークロース寒天培地を用いて行った。

Ｍ　Ｉ　Ｃ（ｍｃｇ　／−） 一Δ−一旦−゛ スタフイａコツカス・アウレウス （Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒ＠ｕｓ）　　
　　　　／１３　　　／Ｉｊ（Ｃｏｃｈｌｌｏｂｏｌｕ
ｓ　ｍ１ｙａｂｅａｎｕｓ）　　　　　２！　　　　２
！本発明の抗生物質Ｒに一／２０Ａ及びＲＫ−／λＯＢ
を既知の抗生物質と比較すると、分子中に、３〜グーの
硫黄を含むベグテド系抗生物質としては、メトロマイシ
ｙ　（８ｏｔｔｒｏｍｙｃｌｎ　）　、エンシューマイ
シン（Ｅｎｓｈｕｍｙｃｌｎ　）、アクチ／ａイ午ｙ　
（Ａｃｔｌｎｏｌｅｕｋｉｎ　）、　コベノマイシ／（
Ｋｏｂｅｎｏｍｙｃｌｎ　）　、ゾルざマイシン（Ｚｏ
ｒｂｏｍｙｃｉｎ）及び７レオマイクン（Ｐｈｌｅｏｍ
ｙｃｌｎ　）等が知られているが、ＲＫ−／２ＯＡ及び
ＲＫ−／ＪＯＦ３物質は、上記抗生物質と、紫外線吸収
スペクトル及び抗菌活性において明らかに異なる。よっ
て、本発明の抗生物質Ｒに一／２０Ａ及びＲＫ−／２０
Ｂは、文献未載の」親杭生物質であると結論された。

（ＲＫ−／２ＯＡ、ＲＫ−／ＪＯＢ又はその複合体を有
効成分とする農園芸用殺菌剤） ここで、ＲＫ−／ノＯＡ及びＲに一／ＪＯＢの複合体と
は、前記培養Ｐ液を合成吸着剤に吸着させた後、含水ア
セトンで溶出し、少くともＲに一７２ＯＡ及びＲに一７
２０Ｂ物質を含有する濃縮物を意味し、両物質は同一培
養物より同時に得られるので、この瞑合体をそのまま有
効成分として用いることができ、これは経済性において
極めて有利な点であることが注目される。

本発明の有効成分を農園芸用殺菌剤として使用する場合
には、通常、当該技術分野において知られている農薬製
剤と同様に適当な固体担体、液体担体、乳化分散剤等を
用いて粒剤、粉剤、乳剤、水和剤、錠剤、油剤、噴霧剤
、煙霧剤等の任意の剤型に製剤化して適用することがで
きる。これらの担体トしては、クレー、カオリン、ベン
トナイト、酸性白土、珪藻土、炭酸カルシウム、固体担
体てシテ、ニトロセルロース、ｒンノン、アラビアゴム
、等々が、また液体担体として水、メタノール、エタノ
ール、アセトン、ツメチルホルムアミド、エチレングリ
コール等が挙げられる。また、製剤上、一般ＫｔｔＪ！
用される補助剤、例えば、高級アルコールの硫酸エステ
ル、ポリオキシエチレン、アルキル・アリルエーテル、
アルキル・アリル・ポリエチレン・グリコールエーテル
、アルキル・アリル・ンルビタン・モノラ９レート、ア
ルキル・アリル・ヌルホネート、アルキル・アリル・ヌ
ルホ／！！塩、第≠級ア／モニウム塩、ポリアルキレン
オキサイド等を適宜配合することができる。

有効成分の配合割合は、乳剤、水和剤としては、１０〜
７０チ固度がｒα当であり、粉剤、油剤等としては、０
．／〜１０チ程度が適当であるが、使用目的によってこ
れらの１３度を適宜増減してもよい。

また、本発明の桑剤は、池の殺菌剤や除草剤、殺虫剤、
肥料物質、土壌改良剤と適宜混合して使用することがで
きる。

以Ｆに、本発明を製造例、実施例及び試験例によって具
体的に説明するが、本発明はこれに何ら限定されるもの
ではない。

なお、実施例中「部」はＴＬｉｔ部を表わす。

製造例 グルコースーチ、可溶性殿粉ｌ優、肉エキス０．７％、
乾燥酵母Ｏ０≠チ、大豆粉２ｊ％、食塩０．２チ、リン
酸第−カリウムｏ、ｏｏｓチの組成からなる培地に前記
ＲＫ−／２０株（微生物受託番号・微工研菌寄ｙｇ７７
／３号）を接種して、り６時間１、．２１℃で振とう培
養する。この培養液２Ｊｔ’ｚダイヤイオンＨＰ−１０
（三菱化成（株）製）≠ｔ。

のカラムに通すと活性区分は吸着される。ｊＯ％アセト
ン≠０１を用いて溶出し、減圧下に濃縮する。λｔまで
製麹し、沈殿は戸別して水洗する。

この後、径ｊ　Ｑ　ｍｍ　ｓ長さ弘Ｏｃｍのシリカグル
カラムラ、溶媒、ブタノール−メタノール−水（ｆ：／
：／）の糸で調製し、０．　／　Ｎ　−ＨＯ２−ＭｅＯ
Ｈ（／　：、？）に容かした試料をかけ展開する。ブタ
ノール−メタノール−水は、混合比ｔ−（ｆ：／：／）
から（ｊ：／：／）Ｋ変化させ、最後に（≠：／：／）
に変化させる。分画量はｊｊ−で最初の分画−ｊ７〜１
００にＲＫ−／二ＯＢの多い部分が、分画Ｎｎ１０／〜
／２３に　ＲＫ−７２ＯＡの多い部分が得られる。

それぞれの活性区分は、減・圧下に濃縮し、最後に凍結
乾燥すると、それぞれタタｏｍｏ、７７０〜が得られた
。

Ｒに一／２ＯＡの多い粉末は、ブタノール−メタノール
−水（≠：／：２）で調製した径ｊＯｍｍｓ長さ９０Ｃ
ｙＬのセファデックヌＬＨ−ｉ０ｃスウェーデン・ファ
ルマシア社製）のカラムに、上記ト同−溶剤に溶かして
かけ、各１０−毎に分画すると、ＲＫ−／２０Ａが主成
分のものが分画Ｎ１１λｇ〜３ｊに得られた。これは、
減圧濃縮し、凍結乾燥すると白色粉末７６９が得られる
。この後、高速液体クロマトグラフィーを行うことによ
りＲに−／　２　ＯＡとＲＫ−１、１ＯＦ３は分離きれ
る。カラムハ、ヌクレオシルｊ　Ｃ：　４２０ｍｍ　１
長す３０儂を用い、溶剤は、イングロ・ぐノール−メタ
ノール−水（，２：、２：ｇ）に対して酢酸を０．７ｊ
チ加えた系で、流速６．０−ｔ　／分、圧力／♂Ｏｋ！
？／・ｍ２で行うと展開時間３０分にＲＫ−／２０Ｆ３
が、≠２分にＲＫ−／２ＯＡが現われる。このＲＫ−／
ＪＯＡ部分を集め、インノロ／９ノールとメタノールが
なくなるまで減圧下で濃縮し、凍結乾燥すると白色粉末
が−７■得られた１） 又、Ｒに一／；１ＯＦ３が主成分の粉末も同様にセファ
デックスＬｌ−１−，ｉ０によるカラムクロマトグラフ
ィー、ヌクレオシルｊＣよ。ｆ、用いた高ｆｆｉ　ｆ［
体クロマトグラフィーと行うとＲに一７２０Ｂが単一に
得られた。

このものを集め、減圧下で溶媒留去濃縮、凍結乾燥する
とＲに一／ＪＯＢが／　４１、ｆ　ＩＯ得られた。

この後、次の方法によう脱塩を行った。

Ｒに一／２ＯＡは、ブタノール−メタノール−水（Ｊ：
　／　：、２）に酢酸を０．７Ｊ’％加えた溶媒、２ｊ
Ｏ−に溶かし、不溶物は除去する。酢酸濃度が０．　／
　ｊ　４以上にならないように水を加えながらゲタノー
ルと水を減圧留去する。この後、溶液は凍結乾燥し、再
びブタノール−メタノール−水（Ｊ：／：Ｊ）のＪＯＯ
ｍｔに溶かし、減圧下でＩＯ−位になるまでａｍすると
ＲＫ−／１０Ａが沈澱してくるので戸別し、水洗を充分
に行い、更にアセトンとエーテルで洗浄してデフケータ
−中で乾燥すると純粋なＲＫ−／１０Ａが粉末として１
、２．ｔ〜得られた。

Ｒに一／２ＯＢの方も同様に脱塩処理して、純粋な粉末
としてｔＡ−〜得られた。

実施例　／ （水和剤） ＲＫ−／２ＯＡ（又はＲＫ−７２０Ｆ３．又は複合体）
１０部、う９リル硫酸ナトリ９ムｊ部、ゾナフチルメタ
ンジヌルホン酸ソーダホルマリン縮合物認部及びクレー
♂３部に混合粉砕して水利剤１０ＯＮ５を得る。

実施例　λ （乳剤） ＲＫ−１、２０ｐ、（又はＲＫ−１、２０Ｂ、又は複合
体）ト部、エチレングリコール１０部、ジメチルホルム
アミ１２θ部、アルキル・ノメテルペ／ジル・アンモニ
ウムクロライド１０部及びメタノールｊＪ部を混合溶解
して乳剤７００部を得る。

実施例　３ （粉剤） ＲＫ−／ＪＯＡ（又はＲＫ−／Ｊ、ＯＦ３．又は複合体
）０．コ部、ヌテアリ／酸カルシウムＯ，Ｓ　部、タル
２５０部及びクレー≠５ｉ！３部を混合粉砕して粉剤１
００部を得る。

実施例　≠ （粒剤〕 Ｒに一／２０ＡＣ又はＲＫ−／コＯＢ１又は複合体）７
０部、１７７７７５部、ベントナイト７２部及びラウリ
ルアルコール硫酸エステルのナトリウム塩３部を混合粉
砕して粒剤１００部を得る。

試験例　／ （キュウリ灰色かび病に対する防除試験）キュウリ（品
種：相撲半白）のｍ種後、ｌｊ日間生育した幼苗に、実
施例／に準じて調製した水利剤を所定濃度に希釈して散
布した後、風乾した。

キエ９り灰色かび病菌（８ｏｔｒｙｔｉｓ　ｃｌｎｅｒ
ｅａ　）をジャガイモ・グルコース寒天平板培地で培養
し、ＢＬＢ光線を照射して誘発した胞子を、グルコーヌ
ｉｏｓ酵母抽出液ｌチ溶液に懸濁した。

薬液が乾いた後、キュウリを接種箱に移して、前記懸濁
液をヌグレーガンによつ、キュウリ幼苗１０本につき／
　Ｏｃｃ　　９部接種した。

接種後のキュウリ幼苗は恒温多湿の条件下に放置し、≠
日後に発病の程度を調べた。

なお、防除価は次の方法により算出した。

（発病指数ン　　　　　（発病程Ｋ） ０　　　発病なし ｌ　　　　病斑がわずかに認められる、Ｊ　　　　　１
０４以下の発病面積が認められる。

３　　　　　／８以上λＯｅｓ以下の発病面積が認めら
れる。

≠　　　　ノＯチ以上３０チ以下の発病面積が認められ
る。

６　　　　３０％以上ｔｉ−ｏ％以下の発病面積が認め
られる。

６　　　　弘Ｏチ以上の発病面積が認められる。

この紡果を第１表に示す。

第　　　ｌ　　　表 ＊　有効成分約３０チ含有 １）／−（ブチルカルバモイル）−Ｊ−ベンズイミダゾ
ールカルバミド酸メチル ２）／−４ノグロビル力ルパモイル−３−（，３，！；
−ノクロロフェニル）ヒダントイン（ＳＯＳ）試馳例　
ｌ （キュウリ炭痘病に対する防除試験） キュウリ（品種：相撲半白）の播種後、ｌｊ日間生育し
た幼苗に、実施例コに準じて調製した乳剤を所定濃度に
希釈して散布した後、風乾した。

キュ９す炭桓病菌（Ｃｏ１ｍｔｏｔｒｉｃｔ＋ｕｍ　ｌ
ａｇｅｎａｒｉｕｍ　）をジャガイモ寒天平板培地で培
養し、生育した胞子を懸濁液〔胞子濃度は／視野（顕微
鏡倍率Ｘ／！；０）で約２００個〕とした。

薬液が乾いた後、キュウリ幼苗を接種箱内に移して、前
記＃！濁で夜をスグレーＩンにより、キュクリ幼醒７０
本につき、１０ｃｃ噴霧接種した。接種後のキュウリ幼
苗は、湿度１００慢の接種箱で、２≠時間放置した後、
自然光の温室に移し、≠８後に屑斑致を調べた。各薬剤
処理区は７０本の午ユウリ幼苗を用いた。

なお、防除価は次の方法により算出した。

この結果を１２表に示す。

第　　　−表 ＊　有効成分約３０％含有 ３）テトラクロロインフタロニトリル 試験例　３ （イネ紋枯病に対する防除試験） あらかじめ、ポットに植えて（１、ｊ”ット７本、各区
１０．ｆ！ポット温室内で育成した第ｊ葉期のイネ（品
種：十石）に、実施例／の方法に準じて調製した水和剤
を所定＃度にメタノール及び水で希釈して１．″ｌ−グ
レーがンを用いてポット当り’ＡＯｖｄ散布し、ついで
一時間後に、イネ紋枯病閉（Ｐｅ１ｌｉｃｕｌａｒｉａ
　５ａｓａｋｉｉ　）　　の菌３！ｌ（直径ｆｍｍＫ打
ち抜いたもの）ｔ−イネの新稍間にそう人して上記菌を
接種した。基葉部をビニールシートで覆い、温室内に７
日間保持したのち、イネの発病総病斑長を測定し、次式
より防除価（チ）を算出した。

この結果を第３表に示す。

第　　　３　　　表 ＊　有効成分約３ｏｑｂ含有 ４）メタンアルノン酸鉄アンモニウム（６６％）（本発
明の効果） 上記の試験結果より、本発明の農園芸用殺菌剤は、各種
植物病害に対して、極めて高い防除価を示し、且つ薬害
が全く認められず、安全性の高い農薬を提供しうろこと
が明らかにされた。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明の抗生物質ＲＫ−／ＩＯＡの紫外線吸
収ス硬りトルを示す図であり、第２図は、抗生物質ＲＫ
−／λＯＢの紫外線吸収スペクトルを示す図であり、第
３図は、抗生物質Ｒに一／λＯＡの赤外線吸収スペクト
ルを示す図であり、第弘図は、抗生物質ＲＫ−１、２０
Ｂの赤外線吸収スペクトルを示す図である。 ′！Ｊ１図 沫表　（ｎｍ）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、下記の理化学的性質及び生物学的性質を有する新規
   抗生物質ＲＫ−１２０Ａ。 （１）融点：２３５〜２５５℃で褐色になり分解する。 （２）元素分析：炭素５０．９８％、水素７．１１％、
   窒素１６．４２％、硫黄３．５５％ （３）比旋光度：〔α〕＾２＾５＿Ｄ＝−９０°（Ｃ＝
   ０．０５、ジメチルスルホキシド） （４）紫外線吸収スペクトル： λ＾０＾．１＾Ｎ＾−＾Ｈ＾Ｃ＾ｌ＾−＾Ｍ＾ｅ＾Ｏ＾
   Ｈ＿ｍ＿ａ＿ｘ２２０ｎｍ（Ｅ＾１＾％＿１＿ｃ＿ｍ１
   ８６）肩（５）赤外線吸収スペクトル：（ＫＢｒ法）３
   ３００、２９０３、２８５０、１６５５、１５２０、１
   ４６０、１３９５、１３８２、１３２０、１２８０、１
   ２５０、１２１５、１１６３、１１００、１０２０、１
   ００２、９００、８４０、７６０ｃｍ＾−＾１ （６）溶解性：メタノール、エタノール、アセトン、酢
   酸エチル、クロロホルム、ベンゼン、ヘキサン、エーテ
   ルに不溶、水に難溶、ブタノールとメタノールと水の混
   液に可溶 （７）分子量（ＦＡＢマススペクトルによる）：９１１ （８）呈色反応：過マンガン酸カリウム、アニスアルデ
   ヒド−硫酸、ヨウ素に陽性 （９）物質の色：白色粉末 （１０）酸加水分解：酸加水分解により、ロイシン、グ
   リシンを与える。 （１１）抗菌スペクトル：グラム陽性菌、抗酸性菌、陰
   性菌及び植物病原菌に対し抗菌活性を示す。 ２、下記の理化学的性質及び生物学的性質を有する新規
   抗生物質ＲＫ−１２０Ｂ。 （１）融点：２３５〜２６５℃で褐色になり分解する。 （２）元素分析：炭素５０．９１％、水素６．９５％、
   窒素１６．１２％、硫黄３．３９％ （３）比旋光度： 〔α〕＾２＾５＿Ｄ−５９°（Ｃ＝０．０３、ジメチル
   スルホキシド）（４）紫外線吸収スペクトル： λ＾０＾．＾１＾Ｎ＿ｍ＿ａ＿ｘ−ＨＣｌ−ＭｅＯＨ２
   ２０ｎｍ（Ｅ＾１＾％＿１＿ｃ＿ｍ２９３）肩（５）赤
   外線吸収スペクトル：（ＫＢｒ法）３３００、２９００
   、２８５０、１６５０、１５２０、１４３５、１３９２
   、１３７０、１３４２、１３２２、１２８５、１２１２
   、１１８５、１１６８、１１００、１０２４、１００４
   、９５８、９０３、８４６、８２５、７６５ｃｍ＾−＾
   １ （６）溶解性：メタノール、エタノール、アセトン、酢
   酸エチル、クロロホルム、ベンゼン、ヘキサン、エーテ
   ルに不溶、水に難溶、ブタノールとメタノールと水の混
   液に可溶 （７）分子量： （ＦＡＢマススペクトルによる）：９２３ （８）呈色反応：過マンガン酸カリウム、アニスアルデ
   ヒド−硫酸、ヨウ素に陽性 （９）物質の色：白色粉末 （１０）酸加水分解：酸加水分解により、バリン及びグ
   リシンを与える。 （１１）抗菌スペクトル：グラム陽性菌、抗酸性菌、陰
   性菌及び植物病原菌に対して抗菌活性を示す。 ３、ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属
   に属する抗生物質ＲＫ−１２０Ａ及びＲＫ−１２０Ｂ生
   産菌を培養し、その培養物から新規抗生物質ＲＫ−１２
   ０Ａ及びＲＫ−１２０Ｂをそれぞれ分離採取することを
   特徴とする新規抗生物質ＲＫ−１２０Ａ及びＲＫ−１２
   ０Ｂの製造法。 ４、抗生物質ＲＫ−１２０Ａ及びＲＫ−１２０Ｂ生産菌
   がストレプトミセス・エスピー・ＲＫ−１２０（Ｓｔｒ
   ｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｓｐ．ＲＫ−１２０）である特許
   請求の範囲第３項記載の製造法。 ５、抗生物質ＲＫ−１２０Ａ、ＲＫ−１２０Ｂ又はその
   複合体を有効成分として含有することを特徴とする農園
   芸用殺菌剤。