JPS6255074A - 新規微生物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は新規微生物に関する。

従来の技術 本発明の微生物は、文献未載の新規微生物である。

発明が解決しようとする問題点 本発明の目的は、新規抗生物質を生産する新しい有用な
微生物を提供することにある。

問題点を解決するための手段 本発明者は、各種ダラム陽性菌、抗酸性菌等に対して抗
菌作用を有する新規な抗生物質である後記１３５物質を
生産する新規菌株（以下、１３５物質生産菌という）を
、中華人民共和国広東省温江市で採取した土壌から新た
に分離することに成功し、これに基づき本発明を完成す
るに至った。

即ち本発明は、ストレプトミセス属に属し、グルコース
・ペプトンゼラチン培地上でのゼラチンの液化が陰性、
ペプトン・イースト鉄寒天培地上でのメラニン様色素の
生成が陰性で、且つ１３５物質の産生能を有することを
特徴とする新規微生物に係る。

本発明に係る新規微生物の菌学的性質を以下に示す。

Ａ　形態学的性質 （ａ）胞子形成菌糸の分技法二単純分技。

（ｂ）　Ｉ１１子形成の形態：直鎖状、あるいは鉤状、
輪生枝は認められない。

（Ｃ）胞子の数：約３〜１８個。

（ｄ）胞子の表面構造：平滑。

（ｅ）胞子の大きさ二０．５〜０．８ＸＯ１８〜１．０
ミクロン。

（ｆ）鞭毛胞子の有無二認められない。

（０）胞子のうの有無：認められない。

（ｈ）胞子柄の着生位置：気菌糸上。

（ｉ）菌核形成性の有無：認められない。

Ｂ　各種培地上の性状および生態学的性質（ａ）シュク
ロース・ｇ４酸塩寒天培地発育：良好。

気中菌糸の色：わずかに淡紅色を帯びた淡黄白色。

基生菌糸の色：明るい赤味茶。

可溶性色素：わずかに赤味茶を帯びる程度。

（ｂ）グルコース・アスパラギン寒天培地発育：普通。

気中菌糸の０二着生せず。

基生菌糸の色：簿黄茶。

可溶性色素：産生せず。

（Ｃ）グリセリン・アスパラギン寒天培地（ＩＳＰＮｏ
、５＞ 発育：普通。

気中菌糸の色：着生せず。

基生菌糸の色：薄黄茶。

可溶性色素：産生せず。

（ｄ）スターチ・無機塩寒天培地（ＩＳＰ　　Ｎｏ、４
）発育：貧弱。

気中菌糸の色：わずかに白色。

基生菌糸の色：無色。

可溶性色素二産生ぜず。

（ｅ）チロシン寒天培地（ＩＳＰ　　Ｎｏ、７）発育：
良好。

気中菌糸の色：わずかに淡紅色を帯びた淡黄白色。

基生菌糸の色：明るい赤味茶。

可溶性色素：わずかに赤味茶を帯びる程度。

（ｆ）栄養寒天培地 発育：良好。

気中菌糸の０二着生せず。

基生菌糸の色：簿黄茶。

可溶性色素：産生せず。

（ａ）イースト・麦芽寒天培地（ＩＳＰ　　Ｎｏ、２）
発育：良好。

気中菌糸の色：わずかに淡紅色を帯びた淡黄白色。

基生菌糸の色：明るい赤味茶。

可溶性色素：わずかに赤味茶を帯びる程度。

（ｈ）オートミール寒天培地（ＩＳＰ　　Ｎｏ、３）発
育：中等度。

気中菌糸の色：白色。

基生菌糸の色：無色。

可溶性色素：産生せず。

（ｉ）クラシニコフＮｏ、１寒天培地 発育：良好。

気中菌糸の色：淡黄白色。

基生菌糸の色：明るい黄橙。

可溶性色素：産生せず。

（ｊ）ベネット寒天培地 発育：良好。

気中菌糸の色：淡黄白色。

基生菌糸の色：明るい赤味茶。

可溶性色素：産生せず。

Ｃ生理学的諸性質 （ａ）生育温度範囲：１５〜３７℃（至適温度：２７〜
３０℃）。

（ｂ）ゼラチンの液化（グルコース・ペプトンゼラチン
培地上）：陰性。

（Ｃ）スターチの加水分解（スターチ・無機塩寒天培地
上）：陽性。

（ｄ）セルロースの分解：陽性。

（ｅ）脱脂乳の凝固：陽性（弱い）。

（ｆ）脱脂乳のペプトン化＝ＷＡ性（強い）。

（ｇ）硝酸塩の還元：陽性。

（ｈ）メラニン様色素の生成（チロシン寒天培地及びペ
プトン・イースト鉄寒天培地上）：いずれも陰性。

（ｉ）硫化水素の産生（ペプトン・イースト鉄寒天培地
上）：陰性。

Ｄ　各炭素源の利用性（プリドハム・ゴドリーブ寒天培
地上） （ａ）　Ｌ−アラビノース：＋。

（ｂ）　Ｄ−キシロース：＋。

（ｃ）　Ｄ−グルコース：＋。

（ｄ）　Ｄ−フラクトース：＋。

（ｅ）シュクロース：＋。

ｍイノシトール：＋。

（ｏ）　Ｌ−ラムノース：＋。

（ｈ）ラフィノース：＋。

（ｉ）　Ｄ−マンニット：＋。

上記において、＋は利用することを示す。

Ｅ　全国体加水分解物中にり、Ｌ−ジアミノピメリン酸
が存在する。

以上のような菌学的性質を有する１３５物質生産菌につ
いて、シエーリングらのインターナショナル　ジャーナ
ル　システマテイク　バクテリオロジー（Ｉｎｔｅｒｎ
ａｔｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　　Ｓｙｓｔｅｍａｔ
ｉｃａａｃｔｅｒｉｏｌｏａｙ＞　１６．３１３−３４
０．１９６６、同じ＜１刀１．３４２．１９６８、同じ
く旦、４４７．１９６９、同じく且、２９６．１９７２
、ワックスマンのアクチノマイセテス（Ｔｈｅ　Ａｃｔ
ｉｎ。

ｍｙｃｅｔｅｓ　）　２．１９６１、バッハマンのバー
シーズ　マニュアル　オブ　デイタミネイティブ　バク
テリオロジー第８版（Ｂｅｒｇｅｙ’　Ｓ　　Ｍａｎｕ
ａｌ　　ｏｆＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ　Ｂａｃｔｅ
ｒｉｏｌｏｇｙ、　８ｔｈ　　ｅｄｉｔｉｏｎ　）によ
り検索した。その結果、１３５物質生産菌は、ストレプ
トミセス属に属することが明らかになった。また、１３
５物質生産菌に特に近縁するものとしでは、ストレプト
ミセス　ロンジスボロフラバス（ＳｔｒｅｐｔｏＩｌｌ
ｙｃｅｓ　　Ｉｏｎｇｉｓｐｏｒｏｒｌａｖｕｓ）　、
ストレプトミセス　ロンジシミス（ｓｔｒｅｐｔｏｌｙ
ｃｅｓｌｏｎｇｉｓｓｉＩｌｕｓ　）及びストレプトミ
セス　フルビシミス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　　ｆ
ｕｌｖｉｓｓｉｍｕｓ　）が挙げられるが、これらと１
３５物質生産菌とは以下の諸点において異なることも明
らかになった。

これらの各国の比較を下記第１表に示す。

第１表中の炭素源の利用性において、十は利用すること
を、士はおそらく利用することを、−は開用しないこと
を、それぞれ示す。

第１表から明らかな通り、１３５物質生産菌は、ストレ
プトミセス　ロンジスボロフラバスとの比較では胞子形
成の形態、ゼラチンの液化、炭素源υ利用性（シュクロ
ース、ラフィノース）において、ストレプトミセス　ロ
ンジシミスとの比較ではメラニン様色素の生成（ペプト
ン・イースト鉄寒天培地）、可溶性色素の産生において
、またストレプトミセス　フルビシミスとの比較ではメ
ラニン様色素の生成（ペプトン・イースト鉄寒天培聴）
、硫化水素の産生、炭素源の利用性（Ｄ−キシ０−ス、
ラフィノース）において、それぞれ明暗に相違している
。

これらの結果から、本発明者は、１３５物質生産菌をス
トレプトミセス属に属する新種であると盈め、ストレプ
トミセス　ポリ力ルポフィルスノーベル　スピーシーズ
（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｐｏｌｙｃａｒｂｏｐｈｉ
ｌｕｓ　　ｎｏｖｅｌ　５ｐｅｃｉｅｓ　）と命名した
。

この１３５物質生産菌は、工業技術院微生物工業技術研
究所に受託番号微工研条奇第７８８号（ＦＥＲＭ　　Ｂ
Ｐ−７８８）として寄託されている。

本発明徴生物は、上記１３５物質生産菌に限られるもの
ではなく、該菌の通常の変異株、例えばＸ線、紫外線等
の照射処理やナイトロジエンマスタード、アザセリン、
亜硝酸、Ｎ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグア
ニジン（ＮＴＧ）、２−アミノプリン等の変異誘起剤処
理、形質導入、形質転換、接合等の通常用いられる変異
処理により得られる各種変異株をも当然に包含するもの
である。

本発明徴生物は、新規抗生物質である１３５物質を生産
する点において有用である。

１３５物質は、Ａ＋　、Ａ２　、Ｃ＋及びＣ２の４種の
物質を総称するものであり、これら４種の物質は、それ
ぞれスタフィロコッカス　アウレウス２０９Ｐ　（Ｓｔ
ａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　　ａｕｒｅｕｓ　　２０９
Ｐ）、サルシナ　ルティア（Ｓａｒｃｉｎａ　Ｉｕｔｅ
ａ　）、バチイルス　ズブティリス　６６３３’　（Ｂ
ａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ　　６６３３）及びマ
イコ　バクテリウム６０７　（Ｈｙｃｏｂａｃｔｅｒｉ
ｕｍ　　６０７）に対して抗菌作用を示した。

１３５物質は、その理化学的研究の結果、塩基性のペプ
チド抗生物質に属し、グリシン、アラニン、スレオニン
、アスパラギン酸を含む他に、１種の未知アミノ酸と式 ％式％ で表わされる化合物を含有する新規抗生物質群であるこ
とが確認された。

１３５物質の理化学的性質を下記に示す。

（り１３５−Ａ＋物質（酢酸塩） （イ）外ｉ１２：白色粉末。

（ロ）融点：明瞭な融点を示さない。

（ハ）分子ｆｆｉ：１２２７（ファースト　アトムボン
バードメント　マス　スペクトル法）。

（ニ）溶解性：含水メタノール、ジメチルスルホキシド
、ジメチルホルムアミドに可溶。水に難溶。アセトン、
酢酸エチル、クロロホルム、エーテルに不溶。

（ホ）呈色反応：ビウレット反応、トレンス反応、キサ
ントプロティン反応、坂口反応に陽性。ニンヒドリン反
応、セリンシュ反応、ベネデイクト反応、アンスロン反
応、パウリ反応、エールリッヒ反応、ニトロプルシド反
応に陰性。

（へ）元素分析値：Ｈ；６．６２％、 Ｃ：４５．６５％、Ｎ；１５．１６％。

（ト）塩基性、酸性、中性の区別：中性、但し遊離体は
塩基性。

（チ）構成成分ニゲリシン、アラニン、スレオニン、ア
スパラギン酸及び１種の未知アミノ酸を含み、更に式 ％式％ で示される化合物を含む（′ｆａ加水分解による）。

（す）紫外吸収スペクトル：λ２２０ｎｍに末端吸収を
示す。メタノール中、０．９００ｍｏ／１０−の濃度で
測定したチャートを、第１図に示す。

（ヌ）赤外吸収スペクトルニジ３４００゜１６５５．１
５２０ｃｍ−’　Ｉニーペア　チト特Ｗ　（７）吸収を
示す。チャートを第５図に示す。

（ル）高速液体クロマトグラフィ：下記分析条件におい
て保持時間５．０〜６．０分にピークを与える。

分析条件 カラム；「マイクロボンダバック（μｍＢｏｎｄａｐａ
ｋ）　Ｃ＋　ａ　Ｊ　　（３，９Ｘ３００ｍｍ）（ウォ
ーターズ社製、商標）。

移動相；３５％アセトニトリル１０．１ｆｖｌ塩化アン
モニウム溶液。

流速；２．ＯｍＱ／分。

検出；ｕｖ−２２０ｎｌ。

（ｔｉ）１３５　　Ａ２物質（酢酸塩）（イ）外観：白
色粉末。

（ロ）融点：明瞭な融点を示さない。

（ハ）分子ｆｉ：１１７０（ファースト　アトムボンバ
ードメント　マス　スペクトル法）。

（ニ）溶解性：含水メタノール、ジメチルスルホキシド
、ジメチルホルムアミドに可溶。水に難溶。アセトン、
酢酸エチル、クロロホルム、エーテルに不溶。

（ホ）呈色反応：ビウレット反応、トレンス反応、キサ
ントプロティン反応、坂口反応に陽性。ニンヒドリン反
応、モリツシュ反応、ベネデイクト反応、アンスロン反
応、パウリ反応、エールリッヒ反応、ニトロプルシド反
応に陰性。

（へ）元素分析値：Ｈ：６．７８％、 Ｃ：４６．１１％、Ｎ：１４．９９％。

（ト）塩基性、酸性、中性の区別：中性、但し遊離体は
塩基性。

（チ）構成成分ニゲリシン、アラニン、スレオニン及び
１種の未知アミノ酸を含み、更に式％式％ で表わされる化合物を含む〈酸加水分解による）。

（す）紫外吸収スペクトル：λ２２０ｎｌｌに末端吸収
を示す。メタノール中、０．９３０１１（Ｊ／１０１１
１２の濃度で測定したチャートを、第２図に示す。

（ヌ）赤外吸収スペクトルニジ３４００゜１６５５．１
５２０ｃｎ＋−’にペプチド特有の吸収を示す。チャー
トを第６図に示す。

（ル）高速液体クロマトグラフイ二上記（ｉ）に示した
条件において保持時間６．５〜７．５分にピークを示す
。

（ｉｉｉ）１３５−Ｃ＋物質（酢酸塩）（イ）外観：白
色粉末。

（ロ）融点：明瞭な融点を示さない。

（ハ）分子ｆｆｉ：１４４０（ファースト　アトムボン
バードメント　マス　スペクトル法）。

（ニ）溶解性：含水メタノール、ジメチルスルホキシド
、ジメチルホルムアミドに可溶。水に難溶。アセトン、
酢酸エチル、クロロホルム、エーテルに不溶。

（ホ）呈色反応：ビウレット反応、トレンス反応、キサ
ントプロティン反応、坂口反応に陽性。ニンヒドリン反
応、モリツシュ反応、ベネデイクト反応、アンスロン反
応、パウリ反応、エールリッヒ反応、ニトロプルシド反
応に陰性。

（へ）元素分析値：Ｈニア、０７％、 Ｃ：４６．０２％、Ｎ：１５．４１％。

（ト）塩基性、酸性、中性の区別：中性、但し遊離体は
塩基性。

（チ）構成成分ニゲリシン、アラニン、スレオニン、ア
スパラギン酸及び１種の未知アミノ酸を含み、更に式 ％式％ で表わされる化合物を含む（酸加水分解による）。

（す）紫外吸収スペクトル：λ２２Ｏｎ１１に末端吸収
を示す。メタノール中１．１２２１！Ｉ＋／１０−の濃
度で測定したチャートを、第３図に示す。

（ヌ）赤外吸収スペクトルニジ３４００．１６５５．１
５２０ｃｒ’にペプチド特有の吸収を示す。チャートを
第７図に示す。

（ル）高速液体クロマトグラフィ二上記（１）に示した
条件にて保持時間１０．０〜 １１．０分にピークを示す。

（ｉｖ）１３５−０２物質（酢酸塩） （イ）外観：白色粉末。

（ロ）融点：明瞭な融点を示さない。

（ハ）分子ｆｆｉ：１３８３（ファースト　アトムボン
バードメント　マス　スペクトル法）。

（ニ）溶解性：含水メタノール、ジメチルスルホキシド
、ジメチルホルムアミドに可溶。水に難溶。アセトン、
酢酸エチル、クロロホルム、エーテルに不溶。

（ホ）呈色反応：ビウレット反応、トレンス反応、キサ
ントプロティン反応、坂口反応に陽性。ニンヒドリン反
応、モリッシュ反応、ベネディクト反応、アンスロン反
応、パウリ反応、エールリッヒ反応、ニトロプルシド反
応に陰性。

（へ）元素分析値：）（ニア、１２％、Ｃ；４６．４０
％、Ｎ；１５．１１％。

（ト）塩基性、酸性、中性の区別：中性、但し遊離体は
塩基性。

（チ）構成成分ニゲリシン、アラニン、スレオニン及び
１種の未知アミノ酸を含み、更に式％式％ で表わされる化合物を含む（酸加水分解による）。

（す）紫外吸収スペクトル：λ２２０ｎｍに末端吸収を
示す。メタノール中、１．０４０１０（Ｊ／１０−の濃
度で測定したチャートを、第４図に示す。

（ヌ）赤外吸収スペクトルニジ３４００．１６５５、’
　１５２０ｃｍ−’にペプチド特有の吸収を示す。チャ
ートを第８図に示す。

（ル）高速液体クロマトグラフイ二上記（ｉ）に示した
条件にて保持時間１１．５〜 １３．０分にピークを示す。

次に、本発明微生物の培養方法について述べる。

培養方法は、原則的には一般微生物の培養方法に準する
が、通常は液体培地による撹拌通気培養法が有利である
。培養に用いられる培地としては本発明微生物が利用し
得る栄養源を含有する培地であれば°よい。すなわち、
合成培地、半合成培地或いは天然培地が使用できる。培
地の組成は、炭素源としては例えばグルコース、マンノ
ース、グリセリン、シュクロース、糖蜜、澱粉、液化澱
粉等が用いられ、窒素源としては肉エキス、カザミノ酸
、ペプトン、グルテンミール、コーンミール、綿実油、
大豆粉、コースチーブリカー、乾燥醇母、リン酸アンモ
ニウム、硫酸アンモニウム、尿素等が用いられる。また
、例えばリン酸水素二ナトリウム、リン酸二水素カリウ
ム、炭酸カルシウム、塩化マグネシウム等の金属のリン
酸塩、炭酸塩、塩化物等の無ｍ塩も必要に応じて添加さ
れる。また、培養中発泡の著しい時には、例えば大豆油
、−亜麻仁油等の植物油、オクタデカノール、テトラデ
カノール、ヘプタデカノール等の高級アルコール類、シ
リコン化合物等の消泡剤を適宜添加してもよい。本発明
微生物は、２０〜３７℃で生育する。１３５物質の産生
のためには、２５〜３７℃の範囲で培養するのが好まし
い。本培養の培養時間は、５０〜１００時間程度が適当
であり、培地の濃厚化に従って培養時間を更に延長して
もよい。

撹拌通気培養で通常行なわれるように培地へ滅菌空気を
吹き込むのがよい。微生物の効率的生育のためには、タ
ンク培養に用いる空気ｍを１分間あたり栄養培地１容量
部に対して０．３〜０．６容量部程度用い、毎分２００
〜４００回転程度で撹拌すればよい。

以上述べた培養条件は使用菌株の特性に応じてそれぞれ
最適の条件を選択して適用される。

次に、このようにして得られた本発明微生物の培養物か
ら１３５物質を分離、精製する方法について述べる。１
３５物質の分離、精製は、微生物の培養物から抗生物質
を分離、精製する公知の手段を適宜選択し組合せること
により行なうことができる。すなわち減圧濃縮、凍結乾
燥、溶媒抽出、液性交換例えば陽イオン交換樹脂、陰イ
オン交換樹脂、非イオン交換性吸着樹脂等の樹脂による
処理、活性炭、けい酸、シリカゲル、アルミナ等の吸着
剤による処理、あるいは結晶化、再結晶等の各種手段を
単独あるいは任意の順序に組合せまた反復して用いるこ
とにより、１３５物質の分離、精製を行なうことができ
る。

１３５物質はＴ１離体または各種塩の形態とすることが
できる。１３５物質に用いられる塩としては、医薬上で
通常用いる塩を意味し、例えばナトリウム、カリウム、
リチウム等のアルカリ金属塩、カルシウム、マグネシウ
ム等のアルカリ土類金属塩、及びトリメチルアミン、ト
リエチルアミン等の有機アミン塩等を、また用いられる
酸としては塩酸、硝酸、硫酸等の無機酸塩あるいはギ酸
、酢酸、シュウ酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、パ
ラトルエンスルホン酸、トリフルオロ酢酸等の有機酸塩
等を挙げることができる。

本発明微生物として、前記各種変異株を用いることによ
って１３５物質の生産能力を高め得るのは勿論である。

！−」Ｌ−± 次に、実施例及び参考例を挙げて本発明をより９具体的
に説明する。

実施例１ 中華人民共和国広東省湛江市にて地表より５〜１５Ｃ１
１の深さの土壌的１〜２ｑを採取した。この土壌０．５
０を試験管に入れ、５鵬の滅菌生理食塩水を加えてよく
振り混ぜ、静置した後、上清液１滴を滅菌生理食塩水１
ｍＱの入ったシャーレに加えた。更にあらかじめ加温溶
解して約４５℃に調整したマルトース−Ｗ！ｆ母エ生エ
キス寒天培地１０加えてよく混和し、最冷凝固させた。

この平板を２７℃で４日間培養し、顕微鏡下で放線菌を
選択して採取し、寒天培地で２７℃で純培養を行ない、
１３５物質生産菌（ストレプトミセス　ポリカルボフィ
ルス　ノーベル　スピーシーズ、微工研条奇第７白８号
）を得た。

参考例１ グルコース１．０％、大豆粉１．０％、塩化ナトリウム
０．５％、炭酸カルシウム０．１％の組成を有する液体
培地１００１１１２に上記ストレプトミセス　ポリカル
ボフィルス　ノーベル　スピーシーズを接種し、２８℃
で７２時間撮撮培養し、前培養液を作製した。

魚粉１．５％、グルコース１．０％、スターチ１．０％
、硫酸アンモニウム０．５％、塩化ナトリウム０．５％
、炭酸カルシウム０．５％の組成を有する液体培地１０
０Ｑを２００Ｑ容の醗酵槽に入れ、これに前記の前培養
液１Ｑを接種し、２８℃で９６時間培養を行なった。通
気逗は６０１２７分、回転数は２５　Ｏｒ、ｐ、ｍ、で
ある。

以下、スタフィロコッカス　アウレウス２０９Ｐに対す
る抗菌活性を指標として、活性物質を分離した。

培養終了後、培養物をシュウ酸でｐＨ２，０に調整し、
激しく撹拌した。濾過した後、５Ｎ水酸化ナトリウム溶
液にてｐＨ６，５に調整し、沈殿物゛を除去した。炉液
を陽イオン交換樹脂「ダウエックス５０ＷＸ８Ｊ　　（
ダウケミカル社製、商標）のカラムに通じ活性物質を吸
着させた。

少缶の水にて洗浄した後、０．４％の酢酸を含むアセト
ンにて活性物質を溶出させた。アセトンを減圧留去した
後再度５Ｎ水酸化ナトリウム溶液にてｐＨ３，２に調整
し、遠心分離にて沈殿物を除去した。更に、この上清液
を５Ｎ水酸化ナトリウムにてｐＨ７，５に調整ししばら
く放置すると、活性物質が析出した。沈澱物を？Ｐ別し
、０．０５Ｎ塩酸に再溶解して不溶物を除いた。この酸
性溶液に陰イオン交換樹脂「アンバーライトＩＲＡ−４
１１Ｊ（ＯＨ型）（ローム　アンド　ハース社製、商標
）を加えてｐＨ４，０に調整し、溶液を凍結乾燥して白
色粗粉末３．２５Ｑを得た。

参考例２ 参考例１で得られた粗粉末１ｑを陽イオン交換樹脂ｒＣ
Ｍ−トヨパールＪ　　（ＮＨ４＋型）　（東洋曹達工業
＠ＪＩＪ、商標）のカラムに通じ、塩化アンモニウムの
０．１Ｎから１．ＯＮまでの勾配溶出を行なうと、活性
のみられるＡ画分とＣ画分がそれぞれ分離して溶出した
。Ａ画分及びＣ画分をそれぞれ独立にクロマトグラフィ
用樹脂ｒＭｃＩｇｅｌ　ＣＨＰ−２０ｐＪ　　（三菱化
成工業■製、商標）に通じて吸着させた。水洗した後０
．２５％のトリフルオロ酢酸を含む７０％アセトニトリ
ル水溶液にて溶出するとＡ画分からは１３５−Ａ＋物質
と１３５−Ａ２物質とが分離して溶出し、またＣ画分か
らは１３５−Ｃ＋動物質１３５−０２物質とが分離して
溶出した。これら４つの活性物質をそれぞれ集めて、凍
結乾燥し１３５−Ａ＋物質３０ｍ（＋、１３５Ａ２物質
２０ｍ！７．１３５−ＣＩ物質５０ＩＩｇ及び１３５−
Ｃ２物質２０１ｇをそれぞれトリフルオロ酢酸塩として
得た。

参考例３ 参考例１で得られた粗粉末１ｇを前記ｒＣＭ−トヨバー
ル」のカラムに通じ、塩化アンモニウムの０．１Ｎから
１．ＯＮまでの勾配溶出により活性のみられるＡ画分と
Ｃ画分の粗精製品を得た。

これらをそれぞれ３０％アセトニトリル水溶液にて１０
１ｇ／−の濃度に溶解し、高速液体クロマトグラフに付
しｔ活性のみられるピークを分取精製した。用いた分取
条件は次の通りである。

カラム：「ラジアルパック（Ｒａｄｉａｌ　−ＰＡに）
Ｃ＋ａＪ（ウォーターズ社製、商標）　（８×１００１
ＩＩＩ）。

移動相：２５％アセトニトリル１０．１Ｍ塩化アンモニ
ウム（Ａ画分の場合）。３２％アセトニトリル１０．１
Ｍ塩化アンモニウム（Ｃ画分の場合）。

流速：　１　、５ｍＱ／ｗｉｎ　。

検出：ｕｖ−２２０ｎｍ。

Ａ画分については１２〜１４分及び１４〜１６分の溶出
液を分取し、それぞれＡ１画分及びＡ２画分とした。ま
たＣ画分については１１〜１３分及び１３〜１５分の溶
出液を分取し、それぞれＣ１画分および及びＣ２画分と
した。これら４種の溶出液は、ロータリーエバポレータ
にてアセトニトリルを留去した後、それぞれ独立に前記
「ＭＣＩｇｅｌ　　ＣＨＰ−２０ｐＪのカラムに通じて
吸着させた。水洗を十分に行なった後、アセトニトリル
／酢酸／水（４０：０．５：６０）にて活性成分をそれ
ぞれ溶出させた。各溶出液をロータリーエバポレータに
てアセトニトリルを留去した後、凍結乾燥することによ
り、１３５　　Ａ＋物質１０ｒａｇ、１３５−Ａ２物質
６１１ＣＩ、　１３５−Ｃ＋物質１６ｍ！１１及び１３
５　　Ｃ２物質８１ｍｇをそれぞれ酢酸塩として得た。

【図面の簡単な説明】

第１〜４図は、それぞれ１３５−Ａ＋物質、１３５−Ａ
２物質、１３５−Ｃ＋動物質び１３５Ｃ２物質の各酢酸
塩のメタノール中での紫外吸収スペクトルを示す。第５
〜８図は、それぞれ１３５　　Ａｔ物質、１３５−Ａ２
物質、１３５−Ｃ１物質及び１３５−Ｃ２物質の各酢酸
塩の臭化カリウム錠で測定した赤外吸収スペクトルを示
す。 （以　上） （１０，〆′ 第１図 う皮号（ｎｍ） 第２図 ミ皮　畏（ｎｍ） 第３図 ＪＬ長（ｎｍ） 第４図

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）ストレプトミセス属に属し、グルコース・ペプト
   ンゼラチン培地上でのゼラチンの液化が陰性、ペプトン
   ・イースト鉄寒天培地上でのメラニン様色素の生成が陰
   性で、且つ１３５物質の産生能を有することを特徴とす
   る新規微生物。