JPS62500032A - ヘルペスウイルス特異的免疫学的物質および方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ヘルペスウィルス特質的免疫学的物質および方法本願は１９８４年８月２４１１ に提出したわれわれの同時係属の米国特許出願第６４４，２０５号の一部継続出 願である。

亘 本発明は、抗体物質に関し、さらに詳しくは、ｆｆｔ純性庖疹ウィルスのＩＪＩ よび２？ＪＭＦ白質Ｄ　（Ｈ５Ｖ　ｇＤ　−１オ、Ｊ：びｇＤ−２）ｔ−ｊｔ： び構造的に関連する化合物の関して独特の多特異的免疫反応性を表わす抗体物質 に関する。

最近において、ヴイリオンのエンベロープの構造的成分を構成しそしてウィルス の感染の開始において意味のある役割を演するように思われる単純性庖疹ウィル スの１１ｓ蛋白質類の単離および特性の対して実質的な研究の努力が向けられて きた。この研究に基づくいっそう意味のある発展はＨ３ＶＬ’蛋白質りの新規な 調製の本出願人による発見であり、この糖蛋白質りは、ワクチン組成物の活性免 疫源として使用するとき、ＨＳＶの感染に対する意味のある保護を誘発させ、そ して本出願人の他の発見は免疫学的に意味のあるポリペプチド類であり、これら はＨ３Ｖ　ｇＤ中に現存するアミノ酸のＭ続配列を重複しあるいは実質的に重複 する。この分野に関する背景を提供することを目的として、「単純性庖疹ウィル スの接種の方法および方法（Ｍｅｔｈｏｄｓ　ａｎｄ　Ｍａｔｅｒｉａｌｓ　ｆ ｏｒ　Ｈｅｒｐｅｓ　Ｓｉｍｐｌｅｘ　Ｖｉｒｕｓ　Ｖａｃｃｉｎａｔ　１ｏｎ ）Ｊと題する、１９８３年２月４日に提…した本出願人の同時係属の米国特許出 願第４６３，１４１号の開示をここに引用によって加える。（また、１９８３年 ９月１日に発行された国際特許出願ＷＯ８３１０２Ｂ　９７号参照、）Ｈ３Ｖ　 ｇＤ−１およびｇＤ−２（７）特性の研究は、ｇＤ−１８よ（ｆｇＤ−２のポリ ペプチド配列の一部または全部の遺伝情報を指定するＤＮＡ配列の微生物置Ｆ（ 例えば、培養におけるバクテリ乙酵母菌およびｎｌｉ乳動物の細胞）中のクロー ニングおよび発現についての組み換えＤＮＡ技術の適用により得られた結果によ って、実質的に促進された。これらの蛋白質類の遺伝情報を指定する遺伝子のＤ ＮＡシークエンシング（ｓｅｑｕｅｎｃｉ　ｎｇ）は、それらの主要な構造的立 体配座（アミノ酸配列）の推定をグーえた０例えば、次の文献を参照：ワトソン （Ｗａｔｓ　ｏ　ｎ）ら、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）２１旦、３８１−３８ ４ページ（１９８２）、「先導」区域および「成熟」蛋白質のそれとして表示さ れる区域の両名を含むｇＤ−１について推定された配列を提供する。同様なＭＩ み換え法はｇＤ−２配列の推定およびｇＤ−１とのその比較を可能とした。した がって、ワトソン（Ｗ　ａ　ｔ　ｓ　ｏ　ｎ）　、　屯広’Ｆ　（Ｇ見互り、Ａ 互、３０７−３１２ページ（１９８３）の開示をまたここに特に引用によって加 え、これはＤＮＡシークエンシングに基づく「成熟ＪＨ３Ｖ　ｇＤ−１およびｇ Ｄ−２について推定される意味のある構造的立体配座（アミノ酸配列配列）に関 する下表■に記載するような情報を比較して提供する。

この表および全体を通じて、次のアミノ酸残基のための１つおよび３つの文字の 「コード」を使用する：　Ａ＝Ａ　ｌ　ａ＝アラニン；Ｃ＝Ｃｙｓ＝システィン ；Ｄ＝ＡＳｐ＝アスパラギン酸；　Ｅ＝Ｇ　Ｉ　ｕ＝グルタミン酸；　Ｆ＝Ｐｈ ｅ＝フｘ＝−ルアラ＝ン；Ｇ＝Ｇｌｙ＝グリシン；Ｈ＝ＨｉＳ＝ヒスチジ７；　 Ｉ＝Ｉ　Ｉ　ｅ＝インロイシン；に＝Ｌｙｓ＝リシン；Ｌ＝ｌｅｕ＝ｏイシ７； Ｍ＝Ｍｅｔ＝メチオ＝ン；Ｎ＝Ａｓｎ＝アスパラギン；Ｐ＝Ｐｒｏ＝プロリン； Ｑ＝Ｇ１ｎ＝グルタミン；Ｒ＝Ａｒｇ＝フルギニン；　５＝Ｓｅ　ｒ＝セリフ； Ｔ＝Ｔｈｒ＝スレオ＝７；Ｖ＝Ｖａｌ＝バリン；Ｗ＝Ｔｒｐ＝）リプトファン； およびＹ＝Ｔｙｒ＝チロシン。

と−−↓ ｇ（１−Ｉ　ＫＹＡｌ、ＡｌＩＡＳＬＫＭＡＤＰＮＲＦＲＧＫＤｌ、Ｐｓ’ＬＤ ＱＬＴｆｌＰＰＧＶＲＲＶＹＨＩ　４０ｇＤ−２−−−−−−ｐ−−−−−−− −−−−−−Ｎ−−−−−−−−−−−−−に−−−−−ｇＤ−Ｉ　ＱＡＧｌ、 ＰＤＰＦＱＰＰＳＬＰＩＴＶＹＹＡＶＬＥＲＡＣＲＳＶＬＬＮＡＰＳＥＡＰＱＩ 　８０ｇＤ−２−ＰＳ−Ｅ−−−−−−−１−−−−−−−−−−−−−−−− −−１Ｆ−−−−−−ｇＤ−Ｉ　ＶＲＧＡＳＥＩＩＶＲＫＱＰＹＮＬＴＩＡＷＦ Ｒ）ＩＧＧＮＣＡＪＰＩＴＶＭＥＹＴＥＣＳＹ　１２０ｇＤ−２−−−−ＩＩＥ Ａ−１（Ｔ−−−−−−−Ｙ−−−Ｄ−−−−−−−−−、−−−一〜Ｐ−ｇ（ ］−１ＮＫＳＬＧＡＣＰＩＲＴＱＰＲＷＮＹＹＤＳＦＳＡＶＳＥＤＮＬＧＦＬＩ ＩＩ（ＡＰＡＦＥＴ　ＩＧＯｇＤ−２−−−−−Ｖ−−−−−−一〜Ｓ−−−− −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−ｇＤ−Ｉ　ＡＧＴＹＬＲＬＶＫＩＮ ＤＷＴＥＩＴＱＦＩＬＥＨＲＡＫＧＳＣＫＹＡＬＰＬＲＩＰＰＳ　２００ｇＤ− ２−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−ＲＡ−−−−−−−− 一〜−−へｇｎ−Ｉ　ＡＣＬＳＰＱＡＹＱＱＧＶＴＶＤＳＩＧＭＬＰＲＦＩＰＥ ＮＱＲＴＶＡＶＹＳＬＫＩＡＧ　２４０ｇｏ−２−−−ＴＳＫ−−−−−−−− −−−−−−−−−−−−−−−−−−Ｌ−−一〜−−−ｇＤ−Ｉ　ＷＨＧＰＫ ＡＰＹＴＳＴＬＬＰＰＥＬＳＥＴＰＮＡＴＱＰＥＬＡＰＥ口ＰＥＩ］５ＡＩｊ、 Ｅ　２８０ｇ０−２　−　−−Ｐ−−−−−−−−−−−Ｄ−Ｔ−−−−−−− −Ｖ−−−−−一−−−−ｇＤ−Ｉ　ＤＰＶＧＴＶＡＰＱＩＰＰＮＷＨＩＰＳＩ ＱＤＡＡＴＰＹＨＰＰＡ丁ＰＮＮＭＧＬＩＡＧ　３２０ｇＤ−２−−Ａ−−−Ｓ Ｓ−−−−−−−−−−−−−Ｖ−−Ｈ−Ａ−−Ａ−Ｓ−Ｐ−−−１−３１９ｇ Ｄ−Ｉ　ＡＶＧＧＳＬｉ、ＡＡＬＶＩＣＧＩＶＹＷＭＨＲＲＴＲＫＡＰＫＲＩＲ ＬＰＨＩＲＥＤＤＱ　ＩＧＯｇＤ−２−ＬＡ−Ｔ−−−−−−Ｇ−ＡＦ−ＶＲ− ＡＱＭ−−−−Ｌ−−−−−−Ｄ−Ａ　３５９ｇＤ−Ｉ　ＰＳＳＨＱＰＬＦＹ　 ３Ｇ９Ｆ、Ｄ−２−Ｐ−−−−−−−３６８ 筒中に・〃約すると、ｇＤ−１およびｇＤ−２の成熟形態はそれぞれ３６９およ び３６８のアミノ酸残基から成り、ｇ　Ｄ　−、７はＦｒＩ）−１の残基３０４ に相当する残基をｒ欠き」そしてこれらの２つの残ノｘの間にほぼ８５％の相同 性が存在する。また、テスｔイ（Ｌａｓｋ、ｙ）ら、ＤＮＡ、　３．２３−２９ ベージ（１９８４）およびラウルス（Ｒａｗｌｓ）う、　ｉ！ｔｌｙ７’７：請 （Ｊ　、Ｖｉ　ｒｏ　Ｉ　、）　、　ｆｉｌ、２６３−２６５　（１９８４）参 照。

ＨＳＶ　ｇＤ−１およびｇＤ−２の特性づけにおける仲間の研究は、型特異的お よび型共通のモノクローナル抗体物質の使用により、これらの物質の抗体決定基 の局在化に向けられた［エイセンバー・グ（Ｅｉｓｅｎｇｅｒｇ）ら、７４）Ｌ ｔＸ％諸Ｑ　、Ｖｉ　ｒｏ　］　、）、４↓、１０９９−１１０４ページ（１９ ８２）およびコレヘン（Ｃｏ　ｈ　ｅ　ｎ）ら、クイ）Ｉｙ７７Ｑ　（Ｊ　、　 Ｖ　ｉ　ｒ　Ｏｌ　、）　、−１旦、１０２−１　ｏｓ　（１９８４）、エイセ ンバーブ（Ｅ　ｉ　ｓ　ｅ　ｎｇｅ　ｒｇ）ら、ウィルス字詰（Ｌ工ｙ↓工且± ユ）、土足、２６５−２６８ページ（１９８４）およびそれらの中に引用された 参考文献参照］、この研究の本質的に二重の目標は、Ｈ３Ｖ宿主における中和性 抗体の産生を刺激する１！ｌｊまたは２種以上の決定基の確認およびこのような 免疫学的に意味のある物質の検出、定ｔ、および親和精製において相応して有用 な抗体物質を同定することである。

この分野における前述の発展にかかわらず、ｇＤ−１およびｇＤ−２および構造 的に関連する化合物、例えば、ｇＤ−１およびｇＤ−２の断Ｊ冒および／または 類似体の天然源および組み換え源からの検出、足端および親和精製による中層が なお必要とされている。

呵竺久ズ豹 ２（発明は、巾純性庖疹ウィルスの１型および２型（ＨＳＶ　ｇＤ−１Ｂよひｇ Ｄ−２）の糖蛋白質りおよび構造的に関係する化合物に関して独特の多特異的免 疫反応性を示す新規な抗体、ならびにｇＤ−１およびｇＤ−２および構造的に関 係する化合物の検出、定５社および親和精製による中層のために新規な−Ｌ順お よび物質を提供する。

未発明の抗体は、なかでも、自然の状態および変性された状態の両者のｇＤ−１ およびｇＤ−２の両者に対する型共通結合により特徴ずけられ、このことにより 抗体は２種類の糖蛋白質類内の同一のエピトープまたは本質的に同一・のエピト ープに結合すること、および結合したエピトープは立体配座のエピトープよりは むしろ直線状であることが示される。本発明の抗体物質は、ｇＤ−１およびｇＤ −２について推定される配列の残基２６６〜２８７にわたるアミノ酸残基の連続 配列、すなわち、ＰＥＬＡ　Ｕ：たはＶ）ＰＥＤＰＥＤＳＡＬＬＥＤＰＶ　（ま たはＡ）ＧＴＶＡ　（またはＳ）のすべてまたは免疫学的に意味のある部分を含 む蛋白質物質にＩｒｆ逆的に免疫結合することによって、さらに特徴づけられる 。々ｆましい形ｙ、町において、本発明の抗体物質はハイブリドーマ細胞系統に より産生されるモノクローナル抗体からなる。

本発明により提供される例は、マウス−マウスハイブリドーマ細胞系統により産 生されるモノクローナル抗体Ａ、Ｔ、Ｃ，Ｃ，Ｎｏ、ＨＢ８６０６であり、これ は米国特許庁の要求に従い、アメリカン拳タイプ・カルチャー・コレクシ、ン（ Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ、１２３ ０１　Ｐａｒｋｌａｗｎ　Ｄｒｉｖｅ、Ｒｏｃｋｖｆ　ｌｉｅ、Ｍａｒｙｌａｎ ｄ、Ｕ、Ｓ、Ａ、２０８５２）に１９８４年ｌＯ月２６日に受託された。

本発明の現在好ましいχ施態様のうちには、ハイブリドーマ細胞系統Ａ、Ｔ、Ｃ ，Ｃ，Ｎｏ、ＨＢ８６０６により産生されるｒＤＬ−６Ｊと表示されるＩｇＧモ ノクローナル抗体がある。この抗体は１次の特徴を有する：　（ａ）蛋白質Ａに 結合するｆ＠力、（ｂ）ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２の生体外感染性を中和する 能力；　（Ｃ）天然に産出するおよび組み換えのｇＤ−１およびｇＤ−２に、グ リコジル化されているか否かにかかわらず、固有のおよび変性された立体配座で 、特異的免疫学的反応、およびそれらに可逆的に免疫結合する能力；および（ｄ ）ｇＤ−１およびｇＤ−２の残基２６６〜２８７に延長することが推定されるも のの重複であるアミノ酸配列、すなわち、ＰＥＬＡ　（またはＶ）ＰＥＤＰＥＤ ＳＡＬＬＥＤＰＶ　ＣまたはＡ）ＧＴＶＡ　（ｔたは５）（７）すべであるいは 実質的な免疫学的に意味のある部分を含む蛋白質物質に、特異的免疫学的反応、 およびそれらに可逆的に免疫結合する能力、抗体ＤＬ−６との免疫反応性である と特にここで記載蛋白質物質は、次のものである±１細胞中で産生されたグリコ ジル化されていない断へｒ８−３００［１］　Ｊ　、Ｈｅ　ｐ−２細胞中で産生 されたグリコジル化された「ｌ−２８７「１コ」断片、Ｅ、ｃｏｌｉ細胞中ティ 生されたｒ−５−３６９「１１」産生物、およびアミノ酸の重合により産生され た合成ペプチドｒ２６６−２７９　［１１Ｊ、＋２６６−２７９　［２］　Ｊお よび「２６８−２８７　［ＩＪ　Ｊ。絹み換え産生ｇＤ−１断）１１例えば、ｃ ｘ（ｏ細胞中で産生されたグリコリル化断片１３−２７５　［１３Ｊ　、ｇＤ− １および［：Ｄ−２の７ミノ末端の岐初の２３残基の種々の部分を重複する合成 ペプチドおよびそれらの「雑種ｊ、およびｇＤ−１につい工の残基３４０〜３５ ６の推定されるｒ：ｌ要な構造的立体配座を重複する合成ペプチドｒ３４０−３ ５６　［１１Ｊは、抗体ＤＬ−６を非免疫反応性である。

天然の源からのｇＤ−４の親和精製における抗体ＤＬ−６の使用は、高度に高率 的であることが証明され、先行のモノクローナル抗体抗ｇＤ抗体調製を使用しで 得られるものより２−３倍過剰でることが予備的に決方でされる免疫学的に活性 １．１ｇＤ−１を生ずる。そのように単離された感染された。ＩＩ＋胞培養物、 透導ｇＤ−１は、従来単離された物質と少なくとも同定度に活性な保護抗原であ ることが予備的に示された。

、＋、発明の他の而および利点は、現在好ましい実施態様の以下の詳細な説明を ８店すると明らかであろう。

詳細な説明 次の実施例は、ハイブリドーマ細胞系統Ａ、Ｔ、Ｃ，Ｃ，Ｎｏ、ＨＢ８６０６の 産生における本発明の実施を例示する。また、これらの細胞系統により産生され るモノクローナル抗体の特性うけ、増幅および＋１１質の決定を説ＩＪＩ　Ｌ、 ハイ／リド−１，１ｇ＋１胞系統Ａ、Ｔ、Ｃ，Ｃ，Ｎｏ、ＨＢ８６０６により産 生される現在好ましい抗体ｒｎＬ−６４の免疫学的性質および使用について特別 に強調する。

さらにＪＴシ＜は、実施例１はづ１統〈実施例において種々に用いられる一般的 方υ、および物質に関する。実施例２はｇＤ−１に対するポリクローナル抗体の 調製に向かうマウスの刺激；マウス牌細１抱と７ウス骨髄腫細胞との融合；およ び細胞系統Ａ、Ｔ、Ｃ，Ｃ，Ｎｏ、ＨＢｇ６０６からなるハイブリドーマ細胞の スクリーニング、クロ〜、−ニングおよび生長に関する。実施例３は４一つのＦ に記載した細胞系統により産生されるモノクローナル抗体の免疫反応性のｆイｉ ｒｒ！Ｉスクリ・−・ニングに関する。実施例４は、その免疫学的特性およびそ れと結合するエピトープの＋／ｌ宜をいっそう完全に確立するはたらきをする七 ツクローナル抗体ＤＩ、−ｔｉのいっそう広範なスクリーニングに関する。実施 例５は、天然源からのｇＤ−１の親和精製における抗体ＤＬ−・６の使用のため のｒ−順の′ｆ−備的ｌ−施に関する。

一般的条件はＢＨＫおよびＫＢ細胞の生におよび維持において使用し、そしてウ ィルスの増殖についてはコーヘン（Ｃｏ　ｈ　ｅ　ｎ）ら、ユ少ｌ二Ｌ↓（、； ！ユ■ｊ−□厚：□９．−ｊ−１）、旦、２０−２５　（１９７４）およびコー ヘン（ＣＯｈｅｎ）ら、ウィルス字詰（Ｊ　、Ｖｉ　ｒｏ　１．）　、１旦、１ ０２１−２０３０　（１９７２）に記載されているとおりであった。感’ｆ（７ ）ため、ＨＳＶ−１（株ＨＦ）について２０ｐｆｕおよびＨＳＶ−２ヱ株サベイ ジ（Ｓａｖａｇｅ）］について１０ｐｆｕを使用した。［３５Ｓ］　−メチオニ ン（特異的活性６００Ｃ４／ミリモル）およびｌ：２　、３−３　ＨＪ　−フル ギニン（特異的活性１５Ｃｉ／ミリモル）は１次の文献に記載されるとおりであ った：コーヘン（Ｃｏ　ｈ　ｅ　ｎ）ら、ウィルス字詰（Ｊ、Ｖｉｒｏｌ、）、 ２ヱ、１７２−１８１　（１９７８）：エイセンパーグ（Ｅｉｓｅｎｇｅｒｇ） ら、ウィルス字詰（Ｊ、Ｖｉｒｏｌ、）、３↓、６０８−６２０ページ（１９７ ９）；エイセンパーグ（Ｅｉｓｅｎｇｅｒｇ）ら、ウィルス’？−４（”　”’ ｒｏ１．）、４↓、４７８−４８８ページ（１９８２）；およびエイセｙパーグ （Ｅｉｓｅｎｇｅｒｇ）ら、ウィルス字詰（Ｊ、Ｖｉｒ。

以上″の実施例において比較の目的で使用したモノクローナル抗体（ｒＭＣＡｂ 類」）は次の通りであった：ＭＣＡｂ　ＨＤ−１（群工）およびＭＣＡｂ　１７ ０（ＩＴ■）はべりエラ（Ｐｅｒｉｅｒａ）ら、感染および免ＩＱｐｌ（Ｉｎｆ ｅｃｔ、　Ｉｍｍｕｎ、）、３５．３６３−３６７　（１９８２）およびエイセ フ）＜−グ（Ｅｉｓｅｎｇｅｒｇ）ら、ウィルス学ｑ　（Ｊ　、Ｖｉ　ｒｏ　１ 　、）、４１．４７８−４８８ページ（１９８２）に従った。ＭＣＡｂ　５５Ｓ 、５７Ｓ（群Ｖ）、ＭＣＡｂ　１１３（群ｍ）、ＭＣＡｂ　４１５（群■）およ びＭＣＡｂ　４５Ｓ（群ＶＴ）　ハシ−１７Ｊｌ／ター（Ｓｈｏｗａｌｔｅｒ） ら、感染お、ＥＵ’ｌＪ性ＣＩｎｆｅｃｔ、　Ｉｍｍｕｎ、）、３４．６８４− ６９２ページ（１９８１）に記載されるとおりであだ。

Ｃ１合成ペプチド ｇＤ−１およびｇＤ−２の位″ｊ！１１〜２３の範囲内の残基に基づくベプに対 する抗体の反応性をスクリーニングするとき使用した合成ペプチドは、　コーヘ ン（Ｃｏ　ｈ　ｅ　ｎ）ら、ウィルス字詰（Ｊ　、Ｖｉ　ｒｏ　ｌ　、）、４９ ．１０２−１０８　（１９８４）におけるようにして調製した。システィンをア ミノ末端に付加した合成ペプチド３４０−３５６　［１］　、およびシスティン をカルボキシ末端に４＝１加した２６８−２８７　［１１はペニンスラ争うボラ トリーズ―インコーポレーテッド（Ｐｅｎｉｎｓｕｌａ　Ｌａｂｓ、、Ｉｎｃ− ）により調製された０合成ペプチド２６６−２７９　［１］および２６６−２７ ９　［２］は、メリフィー・ルド（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ）、ジャーナル・オプ 拳４乙□已シー石ンν一タ−ユミカル・ソサＡ７７（（Ｊ　、Ａｍ、Ｃｈｅｍ、 Ｓｏｃ、）、８５．２１４９−２１５４ページ（１９６３）に記載されるような 固相ｆ順に従い調製できる。ペプチド類をキーホールリンベットヘモシアニン（ ＫＴ、Ｈ）に結合するためのｆ順は、−股にリウ（Ｌｉｕ）ら、竺エオク圭ス上 Ｗユ（影匡坦引四匡！」ゴ１−）、↓旦、６９０−６９７ページ（１９７９）に 記載５ねているとおりであった。免疫プロット（ｉｍｎｎｕ　ｂ　ｌ　ｏ　ｔ） アミノ酸配列における使用のため、ペプチド類を０．１モルのトリス（ＴｒｉＳ ）、ｐＨ７，８，０、１５−Ｔ−Ｊｌｚ（７）ＨＣＩ中に溶解した。

Ｄ、ｒ！然夷洟μ末！［−１店の声夕 特に示さないかぎり、ｇＤ−１およびｇＤ−２は、１．イヤンパーグ（Ｅｉｓｅ ｎｇｅｒｇ）ら、旦、４７８−４８８ページ（１９８２）ｔこ記１１１されてい るようにＭＣＡｂ　ＨＤ−１を使用する親和クロマトグラフィーにより感染した ｌｌＫ１＋胞の細Ｉにす賀抽ｔｔｔ物から精製した。免反吸収剤カラムからＫＳ ＣＮで溶謬し、そしてｏ、ｏｉモルのトリス、ｐＨ７。

５、ｏ、ｔ５モルのＮａＣ１，０，１％のノニデット（Ｎｏｎｉｄｅｔ）−Ｐ２ Ｏ（ＮＰ−４０）（ＴＳＮ緩衝液）Ｌ′対し２て透析した蛋白質類は、固有の立 体配座（ｎａｔｉｖｅ　ｃｏｎｆｏｒｍａｔｆｏｎ）にあると１．で表示した。

変性した物質の調製のため、精ｙ＋、たｇＤ−ＩおよびｇＤ−２を崩壊性緩衝液 （ｄｉｓｒｕｐｔｉｎｇ　ｂｕｆｆｅｒ）中に懸苅して、３％のＳＤ３．１００ ミリモルのトリス、ＰＨ７，０，１０％の２−メルカグトエタノールおよび０． ５％のグリセロールの最終Ｃ度を生成した。試料を５分間清騰させた。ヨードア セトアミド（０、１モ／ｌ／のトリス中の０．１モル）を添加して３３ミリモル のヨードアセトアミドの最終Ｃ度にし、そしてこの混合物を室温で１時間インキ ュベーションした。試料をＴＳＮ［衝液に対して広範に透析した。

Ｅ、　狙み茎えｇＤ糎１ ■、成熟ｇＤ−１について推定された残基１〜２７５からなる第１の′ｋＬ端を 切った糖蛋白ｒｔｃｔ　ｒｕｎｃａｔｅｄ　ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ）（ｒｌ −２７５［１１Ｊ　）をラスキイ（Ｌａｓｋｙ）ら、パイオテｙｙ−ａ９工（旦 −！」−上二二沖すリーＯｇｙ）、２．５２７−５３２ページ（，１９８４）に 記載される手順に従って形質転換チャイニーズ−ハムスター（Ｃｈｉｎｅｓｅ　 Ｈａｍｓｔｅ−ｒ）卵巣細胞の分泌産生物として調製し、モしてエイセンバーブ （Ｅｉｓｅｎｇｅｒｇ）ら、ｆｙ４＞Ｉｙδ７≧（Ｌユ竺上りり−７）５旦、１ ０９９−１１０４ページ（１９８２）に従い親和クロマトグラフィーによりＩＸ ′ｊ製した。

２、ｇＤ−１について推定される残基１−２８７およびＨＳ　Ｖチミジンキナー ゼ（ＴＫ）の４８カルボキシ末端残基からなる第２の末端を切った糖蛋白質（１ −１−２８７Ｉｔｌ　Ｊ　）を、ギプソン（Ｇｉｂｓ。

ｎ）ら、Ｊ、Ｃｅ１１．Ｂユｏｃｈｅｍ、、５ｕｐｐ、８Ｂ（Ｊ、９８４−）ア ブストラクツ（Ａｂｓｔ　ｒａｃｔ　ｓ）、第１３回年次（１，３ｔｈＡｎｎｕ ａｌ）Ｕ、Ｃ，Ｌ、Ａ、シンボジア（Ｓｙｍｐｏｓｉａ）＃１３３７．１９１ベ ージ［およびまたギブンン（Ｇｉｂｓｏｎ）ら、之イルス学、４（Ｊ、ｖｆｒｏ ｌ、）、４８．３９６−４０４ページ（１９８３）＃照］の手順に従いウィルス で感染したＨｅｐ−２１Ｂ胞の分泌産生物として調製した。簡単に述べると、こ のウィルスのベクターはｇＤ−１遺伝ｆの先端を切った形態を含んでいた（この 遺伝子の上流のＳａ二二部部位らＴＫ遺遺伝−の旦呈ＩＡＩ部位の中に挿入され た残基２８７における凡旦」」に伸びる）。この蛋白質をノブル（Ｎｏｂｌｅ） ら、之イルス学、”、；、、（Ｊ　、Ｖｉ　ｒｏ　Ｉ　、）、１２９．２１８− ２２４　（１９８３）に記・成されるようにＭＣＡｂ　ｌ−４３６−１を使用し て親和精製した。

３．８〜（約）３００の残基からなる第２の末端を切ったポリペプチド（ｒ８− ３００　［１］　Ｊ　）を、ワトソン（Ｗａ　ｔ　ｓ　ｏ　ｎ）ら、＋＋＋ｚ７ Ｚ　（Ｓｃｉｅｎｃｅ）、幻」、３８１−３８ページ（１９８２）に記載される 一般・ｒ−順に従いＥ、ｃｏｌｉ中で産生じた。

４、β−ガラクトシダーゼの１１アミノ末端残基をもつｇＤ−１の位置−５ない し３６９にわたる残基からなる融合ポリペプチド（ｒ−５−３６９［１コ」）を 、ワトソン（Ｗａ　ｔ　ｓ　ｏ　ｎ）ら、サイエンス（旦旦ｆｅｎｃｅ）、５ｕ ｐｒａ　に従うＮｃｏＩ　〜ＮｒｕＨｇＤ−１遺伝ｆ・断片をベクター中に存在 するβ−ガラクトシダーゼ遺伝子内のある部位に挿入されたＭ１３　ｍｐ８のウ ィルスのベクターでＥ、ｃｏ　ｌ　ｉ宿′Ｅ細胞を形質転換して得た。

Ｆ、　免疫沈澱および５Ｄ５−ＰＡＧＥＨ３Ｖ−１またはＨ３Ｖ−２で感染した 細！抱抽出物（細胞は６時間感染させる）から、抗血清またはＭＣＡｂおよびス タフィロコッカス−７エレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｅｒｅｕｓ ）の蛋白［Ａ［Ｉ　ｇＧ　Ｓ　ｏ　ｒ　ｂ、ニュー・イングランド・エンザイム ・センター（Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ　Ｅｎｚｙｍｅ　Ｃｅｎｔｅｒ）を使用し て、糖蛋白質りを沈毅させた。５Ｏ５−ＰＡＧＥは、エイセンバーブ（Ｅｉｓｅ ｎｇｅｒｇ）ら、ウィルス字詰（Ｊ、Ｖｉｒｏｌ、）、３１．６０Ｂ−６２０ペ ージ（１９７９）およびワトソン（Ｗａｔｓ。

ｎ）ら、　ｍＣｊ：’ｆ−（Ｇ　ｅ　ｎ　ｅ）　、　２旦、３０７−３１２ペー ジ（１９８３）に記載されるようにして、０．４％のＮ、Ｎ’−ジアリルタータ ルジアミド（ＤＡＴＤ）でｌ！ｉ橋した１０％のアクリルアミドのスラブ中で実 施した。オートラジオグラフィーのため、ゲルを葭紙上で乾煙し、コダック（Ｋ ｏｄａｋ）ＸＡＲ−５フイルムと接触させて配ユさせた。フルオログラフィーの ため、ゲルをアンプリファイ（ＡｍｐｌｆｆＦ）しアメルシャム（Ａｍｅ　ｒ　 ｓ　ｈ　ａｍ）　］で処理し、濾紙」二で乾煙し、そしテコダック（Ｋｏｄａｋ ）ＸＡＲ−５：ｙイルムに一７０℃で露出した。

Ｇ、　免疫プロットおよび中和アッセイ免疫プロットアッセイはコーヘン（Ｃｏ 　ｈ　ｅ　ｎ）ら、ウィルス′７−誌（Ｊ、Ｖｉｒｏｌ、）、４旦、１０２−１ ０８　（１９８４）およびヘブリンＫ（Ｈｅｂｒｉｎｋ）ら、ジャーナル・オブ ・イムノロジカルΦメ７、Ｘ　（Ｊ　、Ｉｍｍｕｎｏ　ｌ　、Ｍｅｔ　ｈｏｄｓ ）、４８．６７２−６８２ページ（１９８３）に記載されているようにして実施 した。Ｈ５Ｖ−１（）ＩＦ）またはＨ３Ｖ−２［サベイジ（Ｓａｖａｇｅ）］を 使用するウィルス中和アッセイ（５０％のプラーク減少法）は、コーヘン（Ｃ。

ｈｅｎ）ら、ウィルス学ｕ　（Ｊ　、Ｖｉ　ｒｏ　ｌ　、）　、４ヱ、１７２− １１うにして実施した。

実施例２ マウス−マウスのハイブリドーマ細胞系統を次の一ト順に従って得た。

ＢＡＬＢ／ｃマウスを実施例１の親和精製したｇＤ−１で超免疫化し、ここで最 初に６μｇのｇＤ−１を腹腔内に投シ、した［ロング（Ｌｏｎｇ）ら、ｉ２　Ｂ 　、Ｆ−ｔｆ　’＆’ｌｆ＆性（Ｉｎｆｅｃｔ　、−Ｉｍ見旦Ａ、）７６１−７ ６４べ一−’／（１９８４）谷間］、１ｇｇの免疫源からなる静脈内促進薬投′ Ｌ後３［１に、牌を切除し、そして細胞をＢＡＬＢ／ｅ　５Ｐ２１０Ｉ！Ｂ胞に 融合し、この融合はマクカー　ン（ＭｃＫ　ｅ　ａ　ｒ　ｎ）　（７）方法、３ ６８−３６９ページ、ケンネット（Ｋｅｎｎｅｔ）ら、　「モノクローナル抗体 ハイブリトーマ類：生物学的分析における新１．い次元（Ｍｏｎｏｅｌｏｎａｌ 　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ：ＮｅｗＤｉｍｅｎｓｉｏｎ　 Ｉｎ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ＡｎａｌｙｓｉＳ）」、ブレナム・プレス（Ｐｌ ｅｎｕｍ　Ｐｒｅｓｓ）、ニューヨーク州ニューヨーク（１９８０）に従い、Ｐ ＥＧ−−ｙンゲン（ｆｕ５０ｇｅｎ）を使用して実施１．た、ＨＡＴ処理後生存 しうる細胞コロニーを含イー１するウェルからの１−澄み液を、免疫プロット手 順に従いｇＤ−特異的抗体の存在についてスクリーニングした。ｇＤ−１および ｇＤ−２について陽性の細胞をサブクローニングし、そしてモノクローナル抗体 「ＤＬ−６」を産生ずる代表的な細胞系統はＡ、Ｔ、Ｃ，Ｃ，、Ｎｏ、ＨＢ８６ ０６で受託された。モノクローナル抗体は、これらの４つの細胞系統の生長の培 養流体から、アミコン（ＡＭＩＣＯＮ）　濾過のＣＭおよび引続く硫酸アンモニ ウムにより沈殿によってＩｉ敲することができる。あるいは、ｃ縮した培養流体 を蛋白質Ａセフアローズ（Ｓ　ｅ　ｐ　ｈ　ａ　ｒ　ｏ　ｓｅ）カラム［７７− −ｙシアーコーポレーシ、（Ｐｈａｒｍａｃｉａ　Ｃｏｒｐ、）に吸収させるこ とができる。他の方法として、モノクローナル抗体は、一般にケンネット（Ｋｅ ｎｎｅｔ）ら、」二のテキスの４０３ページに記載されている腹水法により、増 幅された形態で調製することができる。筒中に述べると、約３Ｘ１０６〜３Ｘ１ ０’のハイブリドーマ細胞を、０．２５ｍ１のブリスタン（Ｐｒｉｓｔａｏｅ） でブライムングしたＢＡＬＢ、／ｅマウスの腹腔内に注射する。抗体は腹水から 、工して、硫酸アンモニウム沈殿およびＤＥＡＥセファロース（Ｓｅｐｈａｒ　 ｏ　ｓ　ｅ）により巾離することができる。免疫吸収剤を：Ａ製するために、東 離されたＩｇＧＺ型抗体全抗体シアン活性化セファロース（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ）４Ｂカラムへ、典型的にはセフｙロース（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ）Ｉｇにつき５ 〜１２ｍｇのＩｇＧの−で結合させることができる。精製された抗体は＋２５ｉ でグリーンウッド（Ｇｒｅｅｎｗｏ。

ｄ）ら、竺工±欠主カッじ之ま二、失火（βｉｏｃすｍ、　Ｊ　、）　、旦いは 、＆ｒましくは、リウ（Ｌ　ｉ　ｕ）ら、５ｕｐｒａ　のラクトベルオキシター セにより、ヨウ素化することができる。

実施例３ モノクローナル抗体ＤＬ−６は免疫アッセイにおいて精製したｇＤに対してｆ＠ 的にスクリーニングし、そして引続いて自然および変性ｇＤ−１およびｇＤ−２ と免疫反応性であるが、組み換え開所白質ｌ−２７５［１］と免疫反応性でない ことがわかり、これにより認識された型共’ｍｈ　エピトープはｇＤ−１および ｇＤ−２の残基３４０〜３５６の間に存在することを、化図した連続のペプチド （ｓｅｑｕｅｎｔ　ｉａｌ　ｅｐｉｔｏｐｅ）（群Ｖ）ではないことを示す。

ｇＤ−１およびｇＩｌ−２の１〜２３を重複する合成ペプチドへの結合の不存在 に基いて、その区域における（群■）連続エピトープの抗体認識は除外された。

Ａ、Ｔ、Ｃ，Ｃ，Ｎｏ、ＨＢ８６０６培養流体中で産生されかつ腹水υ、により 増幅されたＤＬ−６モノクローナル抗体を、次の実施例に記載するようないっそ う広範なスクリーニング−Ｌ順において抗体Ｄ　Ｌ−６を９１？光抗体アッセイ において感染した細胞」−で試験し、そして型ノ（油膜免疫イｉ？光を示し、こ のことにより認識された［Ｄ−１およびｇＤ−２のエピトープは、細胞１模中に 挿入されたとき、則蛋白質経の結合のために有効であることが示された。

中和アッセイ（生体外）は、エイセンバーブ（Ｅｉｓｅｎｇｅｒｇ）ら、ウィル ス字詰（Ｊ　、Ｖｉ　ｒｏ　Ｉ　、）　、旦、１０９９−１１０４ページ（１９ ８２）におけるように５０％の終点を用いたとき、ＤＬ−６抗体がＨ３Ｖ−１を ｌ：５０の希釈で中和しモしてＨ３Ｖ−２を１：２０の希釈で中和することを示 した。

免疫プロットアッセイを用いて、Ｆ表Ｈに記載する種々の合成ペプチドへの結合 についてスクリーニングした。この表において、試験したペプチド中のアミノ酸 の配列は最初にい２つの数で示し、そしてカッコした数はその配列の型特異性を 示す。カッコしたＨは、その配列が意図したｌ型および２型の配列の雑種である ことを示す。

表Ｈのペプチドを用いる免疫プロットアッセイの結果から明らかなように、ＤＬ −６はペプチド（ａ）〜（１）または（ｐ）と免疫反応１−ないが、ｇＤ−１お よびｇＤ−２の残基１６６〜２７９およびｇＤ−１の残ノ：ｔ：２６８〜２８７ を表わ１−ペプチド（ｍ）、　（ｎ）および（ｏ）と４１意に反応した。

ＤＬ−６の免疫プロットアッセイはツニカマイシンの存在トーに生長させたＨ３ Ｖ−１およびＨＳ　Ｖ’　−２から得た全体の沈殿中にイ１在するｇＤ−１おＪ びｇＤ−２どイ１意の反応性を示したので、ＤＬ−６により認識されるエピトー プ中の炭水化物の包含は除外した。

ＤＬ−６と組み換え法により産生される種々の糖蛋白質り様断片および類似物質 との免疫Ｐ１を免疫プロットにより決定し、たい前述のように。

Ｄ　Ｌ　−６はラスキーイ（Ｌａｓｋｙ）ｐ・の手順（トｉで記載）により産生 された組み換え助蛋白′ｆ１１〜２７５　［１］　と本質的に非反応性であった 。

しかしながら、ＤＬ−６はｇＤ−１の、釦Ａした残基２６６へ・２８７にわたる アミノ酸残基の配列を含むすべての組み換え産生物、ｔなわら、実施例工に記載 する組み撲λ−１−２１３７［１１、組み換ｉ　８−３００［１１および組み換 え−５〜３８６　［１］と免疫反応性であった。

上の試験により発生した免疫反応性の「プロフィル」に基づき、抗体ＤＬ−６に より代表される本発明の抗体により認識されるエピトープに関して次の結論を提 案することができる。この抗体はｇＤ−１およびｇＤ−２の両者を目然、変性お よび非グリコジル化の形態において認識し、このことによりエピトープはアミノ 酸残基の型共通または本質的型共通の連続配列からなることが示される。この抗 体はｇＤ−１の意図した（ｐｒｏｊｅｃｔｅｄ）残基２６Ｂ−２８７の連続配列 を含むすべてのＭｌみ換えｇＤ−ルプリカおよび類似体を認識した。ｉｔみ換え 財蛋白？Ｊｌ−２７５１，１１の認識の欠乏は、推定した残基２７５を越える少 なくともいくつかの残ノ、（がエピトープの認識に対して意味があること（およ び、ペブチｌ”２６６−２７９　［１］との反応性に関係づけることにより、多 分４以Ｈの追加の残ノ、（を含めることができること）を示す、他方において、 抗体のｇＤ−１およびｇＤ−２の型共通認１能力は、２６６−２７９　Ｌｌ］、 ２６６−２７９　［２］および２６８〜２８７　［１］のヤ１特す４的性貞に関 係づげると、認識されるエピトープが、合成ペプチドに共通のηす（通配夕１、 例えば、　Ｊｆ［定される残基２７０〜２７９、ＦＥＤＰＥＤＳＡＬＬからなる 配列を含むか、あるいはその巾に含められることを示す。

以Ｉ−に実施例は、本発明の高度に特異的なモノクローナル抗体が、ｇＤ−１、 ｇＤ−２および、ペプチド類およびｇＤ−１およびｇＤ−２の残）、（２６６〜 ２８７として現存さゼることを意図するものの全部または一部を重複するアミノ 酸残基の連続配列を含む蛋白質物質を包含する構造的に関連する化合物の検出お よび定；Ｉｉ−において顕著な価値をもっことを明らかにする役１１をする０次 の例示的実施例は、ｇＤ−Ｌ　ｇＤ−２および構造的に関連する化合物に対する 親和性の程度を従来開発された抗体類に対して全体的に確認することにおける本 発明の抗体の研究に関する。

実施例５ 腹水誘導抗体ＤＬ−６を、前述の臭化シアン活性化セファロース（Ｓｅｐｈａｒ ｏｓｅ）４Ｂカラムにに吸収させ、そして感染した細胞からｇＤ−１を親和精製 することによるｍＪにおいて使用した。量子の条件を使用すると、ＤＬ−６抗体 カラムは（群１）ＭＣＡｂ　ＨＤ−１を使用するカラムの２〜３倍の標的糖蛋白 質を結合することができた。その上、活性免疫源としてＤＬ−６親和精製した物 質を用いたマウスについての予備的研究は、この物質が致死ウィルスの対抗に対 して免疫応答の保護を誘発するとき、ＨＤ−１親和精製物質と少なくとも同程度 に活性であることを示した。

「拮抗（ｃｏｍｐｅｔ　ｉ　ｔ　ｉ　ｏｎ）Ｊアッセイを実施し、ここでモノク ローナル抗体ＤＬ−６、Ｉ（Ｄ−１，１１５，４５Ｓおよび１７０　（１００〜 ２００ル■、１５０〜６００ｐＬｇのＩｇＧを表わす）セファロース（Ｓｅｐｈ ａｒｏｓｅ）４Ｂカラムに結合させ、そしてこの方ラムを使用してＨ３Ｖ−１感 染細胞の細胞質抽出物を吸収した（１００ｐＬｌの抽出を３７℃で２時間インキ ュベーションした）、この免疫吸収剤を緩衝液で１０回洗浄し、そしてヨウ素化 第２抗体（約２５０　、ＯＯＯｃｐｍ）を添加した。よく洗浄した後、カラムを ガンマエ１政管で計数した。

理論的には、過剰の抗体なカラム１−に使用したので、同一・型の標識抗体ほカ シ１８に結合し、た−ζ喚あろう。それらの標識しｔ−相ｒに対し−（試験した ず−での抗体のうちで、ＤＬ〜６はｌ：　Ｄ　−１に・に４して最高の容Ｉｌ□ １を示してその標識した相■を１讃除した。

以ｌ−の例示的′、Ｃ施例は、−７ｒ’ｙ　又の牌Ｍｉ＋胞および腫瘍細胞の標 準の化学的に促１■１７だ融合によりｊ内視１７だトノクローナル抗体産生性・ ＼イブリド−１Ａｌｌｌ胞系統に関する。１ｑ−ｓされるように、種々のバイブ リド−゛１細胞ｌイ生技術を代わりに異なる咄乳動物種源の細胞に適用１．て、 ｇ　Ｄ　−１、ｇｌｌ）−７および、アミノ酸配列、ＲＮＨＰＥＤＰＥＤＳＡＬ ＬＣＯＲ’（式中Ｉ（およびＲｏは回−であるかあるいは異なるアミノ酸残基で 、ｆ）るか、あるいは■（は水素であり、あるいはＲｏはヒドロキシルである） を含む構造的に関連する化合物と特異的に免疫学的に反応性の抗体をに生できる 本発明のハイブリドーマ細胞系統を得ることができる。しｔ−かって１融合が化 学的にあるいは’；ｂ：気的な仲介により実施されるかおよび全細胞またはその 遺伝的に意味のある断片を含むかどうかにかかわらず、ヒト、ラットまたは他の 哺乳動物種の細胞物質（またはそれらの中間種の混合物）の逍伝的融合により形 成したハイブリドーマ細胞系統は本発明により特別に包含される。同様に、前の 例示的実施例のハイブリドーマの発生において用いて免疫源は天然源から親和精 製されたｇＤ−１であったが、種々の免疫源はその適当な代替物の役目をするこ とができる。適当な代替物はｇＤ−２ならびに培養においてバクテリア、酵１１ 菌および吐乳動物の細胞中の組み換え誌により産生されかつ、グリコじ・ル／化 または非グＩＪコジル化形係で提供きれ、追加のアミ・・°またｌまカルー封１ −ジに嬬アミ／醇）Ｌ（４）。（荀イ）１・かあるいはもたない、自然のまたは 変性された府１．らのｇ　Ｄ−１、Ｆ３よびｇ　Ｄ−２のポリ（ブチ！・［／プ リヵを包含才るで、ｂろつ。他のｔｌｆま［、い代替物は、ごＤ　−、−１およ びｇ　Ｄ−２の位置２６６・−・２８７に存在オるアミ７′醇残基の配列、例え ば、１１ＮＨ１’ＥＤＰＥＤＳＡＴ、ＬＣＯＲ’　（式中ＲおよびＲｏは同一で あるかあるいは異なるア）７ノ酸残仄であるか、あるいはＲは水素であり、ある いはＲｏはヒドロヤ・ンルである）の連続配列の全部または実質的な免疫学的に 低味のある部分を毛複する合成ペプチドを包含するであろう。

Ｌの例示的実施例において多数の修正および変更は当業者にとっｒ明らかあるこ とが期待され、そ１−２で結局添＋Ｊする請求の範囲に現われるような限定のみ が採ＩＴ１．：れるべきである。

国８調査報告 １ワｌ１ｒｎＩｌｌＩリ−＾”””Ｉ１６””　ｎｒ〒／ｎｃｌＦ　／ｎｌ　Ａ Ｇ１１

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．単純性疱疹ウイルスの１型および２型の糖蛋白質Ｄとおよび次の配列： ＰＥＬＡ（またはＶ）ＰＥＤＰＥＤＳＡＬＬＥＤＰＶ（またはＡ）ＧＴＶＡ（ま たはＳ） の一部またはすべてを重復するアミノ酸配列からなる蛋白質物質と特異的に結合 するができるモノクローナル抗体。 ２．次のアミノ酸配列： ＰＥＬＡ（またはＶ）ＰＥＤＰＥＤＳＡＬＬからなる蛋白質物質と特異的に結合 するができる請求の範囲１に記載のモノクローナル抗体。 ３．次のアミノ酸配列： ＬＡ（またはＶ）ＰＥＤＰＥＤＳＡＬＬＥＤＰＶ（またはＡ）ＧＴＶＡ（または Ｓ） からなる蛋白質物質と特異的に結合するができる請求の範囲１に記載のモノクロ ーナル抗体。 ４、次のアミノ酸配列： ＰＥＤＰＥＤＳＡＬＬ からなる蛋白質物質と特異的に結合するができる請求の範囲１に記載のモノクロ ーナル抗体。 ５、単純性疱疹ウイルスの１型および２型の糖蛋白質Ｄとおよび次の配列： ＰＥＬＡ（またはＶ）ＰＥＤＰＥＤＳＡＬＬＥＤＰＶ（またはＡ）ＧＴＶＡ（ま たはＳ） の一部またはすべてを重複するアミノ酸配列からなる蛋白質物質と特異的に結合 するができるモノクローナル抗体を産生することができるハイブリドーマ細胞系 統。 ６．ネズミまたはヒトの源からの遺伝学的物質を包含する請求の範囲５に記載の ハイブリドーマ細胞系統。 ７．Ａ．Ｔ．Ｃ．Ｃ．Ｎｏ．ＨＢ８６０６である請求の範囲５に記載のハイブリ ドーマ細胞系統。 ８、請求の範囲７に記載のハイブリドーマ細胞系統Ａ．Ｔ．Ｃ．Ｃ．Ｎｏ．ＨＢ ８８０６により産生されたモノクローナル抗体。 ９．単純性疱疹ウイルスの１型および２型の糖蛋白質Ｄあるいはその免疫学的に 活性な断片または類似体をそれらに対して特異的な抗体との選択的免疫学的反応 に基づいて単離する免疫学的手順において、請求の範囲１または８に記載のモノ クローナル抗体を使用することからなる改良。 １０、単純性疱疹ウイルスの１型および２型の糖蛋白質Ｄあるいはその免疫学的 に活性な断片または類似体をそれらに対する抗体との選択的免疫学的反応に基づ いて定量的に検出する免疫学的手順において、請求の範囲１または８に記載のモ ノクローナル抗体を使用することからなる改良。 １１．単純性疱疹ウイルスの１型および２型の糖蛋白質Ｄあるいは次のアミノ酸 配列： ＰＥＬＡ（またはＶ）ＰＥＤＰＥＤＳＡＬＬＥＤＰＶ（またはＡ）ＧＴＶＡ（ま たはＳ） の一部またはすべてを重複するアミノ酸配列からなる他の蛋白質物質を親和精製 するとき使用する免疫吸収剤において、請求の範囲１または８に記載のモノクロ ーナル抗体を使用することからなる免疫吸収剤。