NO170025B - Monoklonalt antistoff til anvendelse in vitro, hybridoma-cellelinje for fremstilling derav samt anvendelse av foerstnevnte - Google Patents
Monoklonalt antistoff til anvendelse in vitro, hybridoma-cellelinje for fremstilling derav samt anvendelse av foerstnevnte Download PDFInfo
- Publication number
- NO170025B NO170025B NO86861597A NO861597A NO170025B NO 170025 B NO170025 B NO 170025B NO 86861597 A NO86861597 A NO 86861597A NO 861597 A NO861597 A NO 861597A NO 170025 B NO170025 B NO 170025B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- monoclonal antibody
- cell line
- hybridoma cell
- antibody
- amino acid
- Prior art date
Links
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 title claims description 15
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 title claims description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 19
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 15
- 241000700588 Human alphaherpesvirus 1 Species 0.000 claims description 11
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 11
- 241000701074 Human alphaherpesvirus 2 Species 0.000 claims description 10
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 claims description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 8
- 102100022717 Atypical chemokine receptor 1 Human genes 0.000 claims description 7
- 101000678879 Homo sapiens Atypical chemokine receptor 1 Proteins 0.000 claims description 7
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 6
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 4
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 claims 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 29
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 24
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 22
- 238000000034 method Methods 0.000 description 20
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 10
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 10
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 9
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 8
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 7
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 7
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 7
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 7
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 6
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 6
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 5
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 4
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 4
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 4
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 4
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 3
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 3
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 3
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 3
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 3
- 239000004071 soot Substances 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- BHNQPLPANNDEGL-UHFFFAOYSA-N 2-(4-octylphenoxy)ethanol Chemical compound CCCCCCCCC1=CC=C(OCCO)C=C1 BHNQPLPANNDEGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- 238000011725 BALB/c mouse Methods 0.000 description 2
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 2
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical group BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 2
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N iodoacetamide Chemical compound NC(=O)CI PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N pristane Chemical compound CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000013014 purified material Substances 0.000 description 2
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 2
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 2
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 241000241623 Ericerus pela Species 0.000 description 1
- 240000000731 Fagus sylvatica Species 0.000 description 1
- 235000010099 Fagus sylvatica Nutrition 0.000 description 1
- 206010062506 Heparin-induced thrombocytopenia Diseases 0.000 description 1
- 208000009889 Herpes Simplex Diseases 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 108010023244 Lactoperoxidase Proteins 0.000 description 1
- 102000045576 Lactoperoxidases Human genes 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- ZRKLEAHGBNDKHM-UHFFFAOYSA-N N,n'-diallyl-2,3-dihydroxysuccinamide Chemical compound C=CCNC(=O)C(O)C(O)C(=O)NCC=C ZRKLEAHGBNDKHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000729 N-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 101150003725 TK gene Proteins 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YJQCOFNZVFGCAF-UHFFFAOYSA-N Tunicamycin II Natural products O1C(CC(O)C2C(C(O)C(O2)N2C(NC(=O)C=C2)=O)O)C(O)C(O)C(NC(=O)C=CCCCCCCCCC(C)C)C1OC1OC(CO)C(O)C(O)C1NC(C)=O YJQCOFNZVFGCAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000010530 Virus Neutralization Effects 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000012870 ammonium sulfate precipitation Methods 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000000376 autoradiography Methods 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-FPRJBGLDSA-N beta-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-FPRJBGLDSA-N 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- VDQQXEISLMTGAB-UHFFFAOYSA-N chloramine T Chemical compound [Na+].CC1=CC=C(S(=O)(=O)[N-]Cl)C=C1 VDQQXEISLMTGAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- -1 diallyl tartaric diamide Chemical compound 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108060003552 hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- 125000000741 isoleucyl group Chemical group [H]N([H])C(C(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])[H])C(=O)O* 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 229940057428 lactoperoxidase Drugs 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 125000001909 leucine group Chemical group [H]N(*)C(C(*)=O)C([H])([H])C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 210000003200 peritoneal cavity Anatomy 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N phenylalanine group Chemical group N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- ZNNZYHKDIALBAK-UHFFFAOYSA-M potassium thiocyanate Chemical compound [K+].[S-]C#N ZNNZYHKDIALBAK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000000163 radioactive labelling Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 125000000341 threoninyl group Chemical group [H]OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 125000000430 tryptophan group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C12 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- ZHSGGJXRNHWHRS-VIDYELAYSA-N tunicamycin Chemical compound O([C@H]1[C@@H]([C@H]([C@@H](O)[C@@H](CC(O)[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C(NC(=O)C=C2)=O)O)O1)O)NC(=O)/C=C/CC(C)C)[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1NC(C)=O ZHSGGJXRNHWHRS-VIDYELAYSA-N 0.000 description 1
- MEYZYGMYMLNUHJ-UHFFFAOYSA-N tunicamycin Natural products CC(C)CCCCCCCCCC=CC(=O)NC1C(O)C(O)C(CC(O)C2OC(C(O)C2O)N3C=CC(=O)NC3=O)OC1OC4OC(CO)C(O)C(O)C4NC(=O)C MEYZYGMYMLNUHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H3/00—Compounds containing only hydrogen atoms and saccharide radicals having only carbon, hydrogen, and oxygen atoms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/081—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from DNA viruses
- C07K16/085—Herpetoviridae, e.g. pseudorabies virus, Epstein-Barr virus
- C07K16/087—Herpes simplex virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/16011—Herpesviridae
- C12N2710/16611—Simplexvirus, e.g. human herpesvirus 1, 2
- C12N2710/16622—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/948—Microorganisms using viruses or cell lines
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/808—Materials and products related to genetic engineering or hybrid or fused cell technology, e.g. hybridoma, monoclonal products
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/808—Materials and products related to genetic engineering or hybrid or fused cell technology, e.g. hybridoma, monoclonal products
- Y10S530/809—Fused cells, e.g. hybridoma
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/81—Carrier - bound or immobilized peptides or proteins and the preparation thereof, e.g. biological cell or cell fragment as carrier
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/81—Carrier - bound or immobilized peptides or proteins and the preparation thereof, e.g. biological cell or cell fragment as carrier
- Y10S530/811—Peptides or proteins is immobilized on, or in, an inorganic carrier
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/22—Viral peptide or viral protein
- Y10S930/224—Herpes related
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Oncology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
BAKGRUNN
Foreliggende oppfinnelse vedrører et monoklonalt antistoff til anvendelse in vitro. en hybridomacellelinje som produserer det, samt anvendelse derav for isolering, kvantitativ bestemmelse, eller affinitetsrensing av glykoprotein D av Herpes Simplex Virus type 1 eller 2 og proteinaktige materialer inneholdende en del av eller hele den følgende sekvens av aminosyrer, PELA (eller V) PEDPEDSALLEDPV (eller A) GTVA (eller S).
I den senere tid er betydelige forskningsanstrengelser foretatt mot isolering og karakterisering av Herpes Simplex Virus glykoproteiner som utgjør strukturelle bestanddeler i virionhylsen og sannsynligvis spiller en viktig rolle i begynnelsen av virusinfeksjon. Blant de viktigere fremskritt som bygger på denne forskning, er oppdagelsen i forbindelse med foreliggende oppfinnelse av nye preparater av HSV glykoprotein D, som anvendt som aktive immunogen i vaksineblandinger, fremkaller signifikant beskyttelse mot HSV infeksjon, og den videre oppdagelse av immunologiske signifikante polypeptider som duplikerer eller i det vesentlige duplikerer kontinuerlig sekvenser av aminosyrer som eksisterer i HSV gD. Som bakgrunns-informasjon på dette området vises til US patentsøknad nr. 463,141 av 4.februar 1983 med tittelen "Methods and Materials for Herpes Simplex Virus Vaccination". (Se også PCT ansøkning WO83/02897 publisert 1.september 1983).
Forskning på karakterisering av HSV gD-1 og gD-2 har fått betydelig hjelp av resultatene som er oppnådd gjennom anvendelse av rekombinant DNA-teknikker med kloning og ekspresjon i mikro-bielle verter (f.eks. bakterier, gjær og pattedyrceller under dyrkning) av DNA-sekvenser som koder for en del av eller alle polypeptidsekvenser i gD-1 og gD-2. DNA-sekvensbestemmelse av gener som koder for proteinene har ført til forutsigelse av deres primære strukturelle konformasjon (aminosyresekvens). Se for eksempel Watson, et al., Science, 218, s.381-384 (1982) som gir den forutsagte sekvens for gD-1 som inneholder både et "leder"-område og et område som tilskrives det "ferdige" protein. Lignende rekombinantmetoder har muliggjort forutsigelse av gD-2 sekvensen og sammenligningen derav med gD-1. Det vises derfor også spesifikt til det som er beskrevet av Watson, Gene, 26, 307-312 (1983) som generelt gir informasjon som angitt nedenfor i tabell 1 vedrørende den sammenligningsvis primære strukturelle konformasjon (aminosyresekvenser) forutsagt for "ferdig" HSV gD-1 og gD-2 basert på DNA sekvensbestemmelse.
I tabellen og gjennom beskrivelsen vil de følgende enkle og triple bokstav"koder" for aminosyrerester bli anvendt: A = Ala = Alanin; C = Cys = Cystein; D = Asp - Aspartinsyre;
E = Glu = Glutaminsyre; F = Fe = Fenylalanin; G = Gly = Glycin; H = His = Histidin; I = Ile = Isoleucin; K = Lys = Lysin; L = Leu = Leucin; M = Met = Metionin; N = Asn = Asparagin; P = Pro = Prolin; Q = Gin = Glutamin; R = Arg = Arginin; S = Ser = Serin; T = Thr = Threonin; V = Val = Valin; W = Trp = Tryptofan; og Y = Tyr = Tyrosin.
Kort sammenfattet forutsis ferdige former av gD-1 og gD-2 å bestå av 369 og 368 aminosyrer henholdsvis, idet gD-2 "mangler" en rest svarende til resten 304 i gD-1, og med omtrent 85% homologi foreliggende mellom de to sekvenser. Se også Lasky et al., DNA, 3, s. 23-29 (1984) og Rawls et al., J. Virol., _51 ,s. 263-265 (1984) .
Sammenligningsforskning i karakteriseringen av HSV gD-1 og gD-2 har vært rettet mot lokalisering av antigendetermi-nanter i disse materialer (se Eisenberg et al., J. Virol., 41,
s. 1099-1104 (1982), Cohen et al., J. Virol., 49, s. 102-108
(1984), Eisenberg et al., J. Virol., 49, s. 265-268 (1984) og henvisninger som er sitert deri) ved bruk av typespesifikke og felles monoklonale antistoffsubstanser. Det viktige dobbelte mål for dette arbeidet har vært å fastslå en eller flere determinanter som stimulerer produksjon av nøytraliserende antistoffer i HSV verter og identifiseringen av antistoffsubstanser som er tilsvarende anvendelige ved påvisning, kvantifisering og affinitetsrensing av slike immunologisk signifikante substanser.
Til tross for de ovenfor angitte fordeler på området, foreligger det fortsatt et behov for antistoffsubstanser som kan anvendes i påvisningen, kvantifisering og isolering ved affinitetsrensing fra naturlige og rekombinante kilder av gD-1, gD-2 og strukturelt beslektede forbindelser så som gD-1 og gD-2 fragmenter og/eller analoge.
KORT SAMMENFATNING
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer nye antistoffsubstanser som viser enestående, multispesifikke immunoreaktiviteter med hensyn til glykoprotein D i Herpes Simplex Virus type 1 og 2 (HSV gD-1 og gD-2) og strukturelt beslektede forbindelser samt nye fremgangsmåter og materialer for påvisning, kvantifisering og isolering ved affinitetsrensing av gD-1,
gD-2 og strukturelt beslektede forbindelser.
Antistoffsubstanser i foreliggende oppfinnelse gir samme type binding til både gD-1 og gD-2 i både opprinnelige og denaturerte tilstander, som tyder på at antistoffene bindes til den samme eller hovedsakelig den samme, epitop i de to glykoproteiner, og at den bundne epitop er en lineær istedenfor konformasjonell epitop.
Antistoffsubstanser i denne oppfinnelse er karakterisert ved evne til spesifikk binding med glykoprotein D i Herpes Simplex Virus type 1 og 2 og med et proteinaktig materiale, omfattende en aminosyresekvens som tilsvarer en del av eller hele den følgende sekvens;
PELA (eller V) PEDPEDSALLEDPV (eller A)GTVA (eller S).
Foretrukne former av oppfinnelsen fremgår av underkravene 2-4.
En illustrasjon på det som fremstilles ifølge foreliggende oppfinnelse, er monoklonale antistoffer fremstilt med mus-mus hybdiromacellelinje A.T.C.C. nr. HB .8606, deponert 26. oktober 1984 hos American Type Culture Collection, 12301 Parklawn Drive, Rockville, Maryland 20852, ifølge det amerikanske patent- og varemerkestyrets krav til mikroorganismedeponering.
Blant de for tiden foretrukne utførelsesformer av oppfinnelsen er det IgG monoklonale antistoff kalt "DL-6" som fremstilles med hybdridomacellelinje A.T.C.C nr. HB 8606. Dette antistoff har (a) evne til å binde protein A; (b) evne til å nøytralisere in vitro infeksjon av HSV-1 og HSV-2; (c) spesifikk immunologisk reaktivitet med, og kapasitet til reversibel immunobinding til naturlig forekommende og rekombinant gD-1 og gD-2 i opprinnelig og denaturerte former som kan være glykosylerte eller ikke; og (d) spesifikk immunologisk reaktivitet med og evne til å bindes immunologisk til proteinholdig materiale som inneholder hele eller en vesentlig immunologisk signifikant del av en aminosyresekvens duplikativ til den som er forutsagt å være eksisterende ved restene 2 66 til og med 287 av gD-1 og gD-2, dvs. PELA (eller V) PEDPEDSALLEDPV (eller A)GIVA (eller S). Blant de proteinholdige materialer som her spesifikt er angitt å være immunoreaktive med antistoff DL-6, er gD-1 fragmenter fremstilt ved rekombinante metoder så som det ikke-glykosylerte fragment "8-300(1), fremstilt i transformerte E. coli celler, et glykosylert "1-287(1)" fragment fremstilt i Hep-2 celler, et "-5-369(1)" produkt fremstilt i E. coli celler, og syntetiske peptider "266-279(1)", "266-279(2)" og "268-287(1)" fremstilt ved polymerisasjon av aminosyrer. Ikke-immunoreaktive med antistoff DL-6 er rekombinant fremstilte gD-1 fragmenter så som det glykosylerte fragment "1-275(1)" fremstilt i CHO celler, syntetiske peptider duplikative for forskjellige deler av de første 23 rester av aminoenden av gD-1 og gD-2 og "hybrider" derav, og et syntetisk peptid "340-356(1)" som duplikerer den forutsagte primære strukturelle konformasjon ved restene 340 til 356 for gD-1.
Bruk av antistoff DL-6 i affinitetsrensing av gD-1 fra naturlige kilder har vist seg å være meget virkningsfull og gir utbytter av immunologisk aktivt gD-1 som foreløpig er bestemt å være i to- til tre-gangers overskudd av slike som oppnås ved bruk av tidligere kjent monoklonal anti-gD antistoff-fremstilling. Infisert cellekultur-avledet gD-1 som er isolert slik, har foreløpig vist å være minst så aktivt som beskyttende immunogen som tidligere isolerte materialer.
Andre aspekter og fordeler ved foreliggende oppfinnelse vil fremgå klart fra den følgende detaljerte beskrivelse av i øyeblikket foretrukne utførelsesformer.
DETALJERT BESKRIVELSE
De følgende eksempler illustrerer utøvelsen av foreliggende oppfinnelse ved fremstilling av hybridomacellelinje A.T.C.C. nr. HB8606. Videre illustreres karakteriseringen, forsterkningen og bestemmelsen av egenskapene til de monoklonale antistoffer som fremstilles med disse cellelinjer med spesifikk vekt på de immunlogiske egenskapene og anvendelsen av nåværende foretrukne antistoff "DL-6" fremstilt med hybri-domacellelin je A.T.C.C. nr. HB8606.
Nærmere bestemt vedrører eksempel 1 de generelle fremgangsmåter og materialer som anvendes variert i de etter-følgende eksempler. Eksempel 2 vedrører stimulering av en mus mot produksjon av polyklonale antistoffer til gD-1; fusjon av musemiltceller med musemyelomaceller; og utprøvningen, kloningen og dyrkning av hybridomaceller omfattende cellelinjen A.T.C.C. nr. HB8606. Eksempel 3 vedrører foreløpig utplukking av immunoreaktivitet hos antistoffer fremstilt ved de fire ovenfor angitte cellelinjer. Eksempel 4 vedrører mer utstrakt utprøving av monoklonalt antistoff DL-6, som tjener til å fastslå mer fullstendig dets immunologiske egenskaper og typen av epitop det binder seg til. Eksempel 5 vedrører foreløpig utførelse av fremgangsmåten for anvendelse av antistoff DL-6 i affinitetsrensing av gD-1 fra naturlige kilder.
EKSEMPEL 1
A. Celler, virus og radioaktive markeringsmetoder.
De generelle betingelser som anvendes i dyrkningen og opprettholdelsen av BHK og KB celler og for formering av virus ble beskrevet i Cohen, et al., J. Virol, 14, s. 20-25 (1974)
og Cohen, et al., J. Virol, 10, s. 1021-2030 (1972). For infeksjon ble en begynnelsesmultiplisitet på 20 pfu anvendt for HSV-1 (stamme HF) og 10 pfu for HSV-2 (stamme Savage). Frem-gangsmater for markering av HSV-infiserte celler med ( 35S)-metonin (spesifikk aktivitet 600 Ci/mmol) og (2,3- 3H)-
arginin (spesifikk aktivitet 15 Ci/mmol) var som beskrevet i Cohen, et al., J. Virol, 27, s. 172-181 (1978);
Eisenberg, et al., J. Virol, 31, s. 608-620 (1979);
Eisenberg, et al., J. Virol, 41, s.478-488 (1982); og Eisenberg, et al., J. Virol, 35, s.428-435 (1980).
B. Monoklonale antistoffer.
Monoklonale antistoffer ("MCAb'er") anvendt for sammen-ligningsformål i de følgende eksempler var som følqer: MCAb HD-1 (gruppe 1) og MCAb 170 (gruppe VII)som beskrevet ifølge Periera et al., Infect. Immun., 35, s. 363-367 (1982) og Eisenberg, et al., J. Virol., 4±, s. 478-488 (1982). MCAb<*>s 55S, 57S (gruppe V) 11 S (gruppe III), 41S (gruppe IV) og 45S (gruppe VI) var som beskrevet i Showalter, et al., Infect. Immun., 34, s. 684-692 (1981). ;C. Syntetiske peptider. ;Syntetiske peptider anvendt i utprøving av antistoff-reaktiviteter mot peptider basert på rester i stillingene 1-23 i gD-1 og gD-2 ble fremstilt som i Cohen, et al., J. Virol., 49, s. 102-108 (1984). Syntetiske peptider 340-356(1) med cystein satt til aminoenden, og 268-287(1), med cystein satt til karboksyenden, ble fremstilt av Peninsula Labs., Inc. Syntetiske peptider 266-279(1) og 266-279(2) kan fremstilles ifølge velkjente fastfasemetoder som er beskrevet av Merrifield, J. Am. Chem., 85, s. 2149-2154 (1963). Fremgangsmåter for kobling av peptider til nøkkelhullformet hemocyanin (KLH) var generelt som beskrevet i Liu, et al., Biochemistry, 18, s. 690-697 , (1979). For bruk i iramunoplotmålinger oppløses peptider i 0,1 M Tris, pH 7,8, 0,15 M HB1. ;D. Fremstilling av opprinnelig og denaturert qD. ;i Med mindre annet er angitt, ble gD-1 og gD-2 renset fra cytoplasmiske ekstrakter av infiserte celler ved affinitets-kromatografi ved bruk av MCAb HD-1 som beskrevet i Eisenberg, et al., 4JL, s. 478-488 (1982). Proteiner eluert fra immuno-absorbantkolonne med KSCN og dialysert mot 0,01 M Tris, pH 7,5, 0,15 M NaCl, 0,1% Nonidet-P40 (NP-40) (TSN buffer)ble ansett å være i "opprinnelig" konformasjon. For fremstilling av denaturerte materialer ble renset gD-1 eller gD-2 oppslemmet i brytende buffer og ga en sluttkonsentrasjon på 3% SDS, 100 mM Tris, pH 7,0, 10% 2-merkaptoetanol og 0,5% glycerol. Prøven ble kokt i 5 minutter. Jodacetamid (0,1 M i 0,1 M Tris, pH 8,0) ble tilsatt og ga en sluttkonsentrasjon på 33 mM jodacetamid, og blandingen ble inkubert i 1 time ved romtemperatur. Prøver ble uttømmende dialysert mot TSN buffer. ;E. Rekombinante gD materialer. ;1. Et første avkortet glykoprotein ("1-275(1)") omfattende rester 1-275 forutsagt for ferdig gD-1 ble fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i Lasky et al., Biotechnoloqy, 2_, s. 527-532 (1984) som et sekresjonsprodukt fra transformerte kinesiske hamster eggstokkceller og ble renset ved affinitets-kromatografi ifølge Eisenberg, et al., J. Virol., 41, 1099-1104 (1982). 2. Et andre avkortet glykoprotein ("1-287(1)") omfattende fusjonsproduktet av rester 1-287 forutsagt for gD-1 og 48 karboksyterminalrester av HSV tymidinkinase (TK) ble fremstilt ifølge fremgangsmåtene til Gibson, et al., J. Cell. Biochem., Supp. 88 (1984) Abstracts, 13th Annual U.C.L.A. Symposia, ;<*>1337, s. 191 (og se også Gibson, et al., J. Virol., 48, s. 396-404 (1983)) som et sekresjonsprodukt av viralt infiserte Hep-2 celler. Kort sagt, inneholdt virusvektoren en avkortet form av gD-1 genet (som strekker seg fra SacI oppstrøms for
genet til Narl punktet ved rest 287 som ble innsatt i Bqlll punktet til TK genet. Proteinet ble affinitetsrenset ved bruk av MCAb II-436-1 som beskrevet i Noble, et al., J. Virol., 129 , 218-224 ( 1983) . 3. Et tredje avkortet polypeptid ("8-300(1)") omfattende rester av 8 til (ca.) 300 ble fremstilt i E. coli ifølge de generelle metoder som er angitt i Watson, et at., Science, 218, s. 381-384 (1982). 4. Et fusjonspolypeptid ("-5-369(1)") omfattende rester som spenner over posisjonene -5 til og med 369 i gD-1 med 11 aminotermianle rester av -galaktosidase erholdtes etter trans-formering av E. Coli vertceller med en M13 mp8 virusvektor hvori det var innsatt et Ncol til og med NruII gD-1 genfragment ifølge Watson, et al., Science, ovenfor ved et punkt i et -galaktosi-dasegen tilstede i vektoren.
F. Immunoutfelling og SDS- PAGE
Glykoprotein D ble immunoutfelt fra HSV-1 eller HSV-2 infiserte celleekstrakter (celler infisert i 6 timer) ved bruk av antisera eller MCAb og Staphylococcus aerueus protein A (IgG Sorb, New England Enzyme Center). SDS-PAGE ble utført i plater av 10% akrylamid, kryssbundet med 0,4% N,N<1>diallyltartar-diamid (DATD), som beskrevet i Eisenberg, et al., J. Virol., 31, s. 608-620 (1979) og Watson, Gene, 26, s. 307-312 (1983).
For autoradiografi ble geler tørket på filterpapir og plassert
i kontakt med Kodak XAR-5 film. For fluorografi ble gelene tørket med Amplify (Amersham), tørket på filterpapir og ekspo-nert mot Kodak XAR-5 film ved -70°C.
G. Immunoblot og nøytraliseringsmålinger.
Immunoblotmålingene ble utført som beskrevet i Cohen, et al., J. Virol., 49, s. 102-108 (1984) og Hebrink, et al.,
J. Immunol. Methods, 48, s. 672-682 (1983) .Virusnøytraliserings-målinger (50% plaque reduksjonsmetode) ved bruk av HSV-1 (HF) eller HSV-2 (Savage) ble utført som beskrevet i Cohen, et al., J. Virol., 47, s. 172-11 (1978) og Cohen, et al., J. Virol., 10, s. 1021-2040 (1972) .
EKSEMPEL 2
Mus-mus hybridomacellelinjer ble fremstilt ifølge den følgende fremgangsmåte. BALB/c mus ble hyperimmunisert med affinitetsrenset gD-1 fra eksempel I med en begynnelsesdose på 6 ug gD-1 gitt intraperitonealt (se Long, et al., Infect. Immun., 37, s. 761-764 (1984). Tre dager etter en intravenøs innsprøytning på 1 pg av immunogenet ble miltene fjernet og cellene fusjonert til BALB/c SP2/0 celler ved bruk av et PEG-fusogen ved metoden til McKearn, s. 368—369 i Kennett, et al., "Monoclonal Antibodies Hybridomas; A New Dimension In Biolo-gical Analysis", Plenum Press, New York, N.Y. (1980). Super-natanter fra brønner inneholdende levedyktige cellekolonier etter HAT behandling ble utprøvet med hensyn til nærvær av gD-spesifikke antistoffer ved immunoplotmetoder. Celler som var positive for gD-1 og gD-2 ble subklonet og en representativ cellelinje som produserte monoklonalt antistoff "DL-6" ble deponert hos A.T.C.C. som nr. HB8606. Monoklonale antistoffer kan isoleres fra kulturvæsker av vekst av disse fire cellelinjer ved AMICON filtreringskonsentrasjon etterfulgt av ut-felling med ammoniumsulfat. Alternativt kan de konsentrerte dyrkningsvæsker absorberes til protein A Sepharose kolonner (Pharmacia Corp.). Som et annet alternativ kan monoklonale antistoffer fremstilles i forsterket form ved ascites-metoden som generelt er beskrevet på side 403 hos Kennett, et al., se
6 7 tekst ovenfor. Kort sagt injiseres ca. 3 x 10 til 3 x 10 hybridomaceller i peritoneale hulrom hos BALB/c mus som har fått 0,25 ml Pristane. Antistoffer kan isoleres fra bukvater-sotvæsker ved ammoniumsulfatutfelling og DEAE Sephadex som i Eisenberg, et al., J. Virol., 41, s. 1099-1104 (1982). For å fremstille immunoabsorbantkolonner, kan isolert IgG type 2 antistoffer bindes til cyanogen-bromidaktivert Sepharose 4B kolonner, gjerne i mengder fra 5 til 12 mg IgG pr. gram
125 Sepharose. Rensede antistoffer kan joderes med J ved kloramin T metoden til Greenwood, et al., Biochem. 89, s. 114-123 (1963) , eller fortrinnsvis ved laktoperoksidasemetoden
til Liu, et al., supra.
EKSEMPEL 3
Monoklonalt antistoff DL-6 ble foreløpig undersøkt i immunoplotmålinger mot renset gD og ble så funnet å være immunoreaktivt med opprinnelig og denaturert gD-1 og gD-2, men ikke med det rekombinante glykoprotein 1-275(1), hvilket viste at den gjenkjente fellestype epitop ikke var den sekvensielle epitop (gruppe V) som var forutsagt å foreligge mellom restene 340-356 i gD-1 og gD-2.
På grunnlag av den manglende binding til syntetiske peptider som duplikerer restene 1-23 i gD-1 og gD-2, ble antistoff gj enk j ennelsen av den (gruppe VII) sekvensielle epitop i dette området utelukket. DL-6 monoklonale antistoffer fremstilt i A.T.C.C. nr. HB8606 kulturvæsker og forsterket ved bukvater sotmetoden ble anvendt i mer dyptgående undersøkelses-metoder som er beskrevet i det følgende eksempel.
EKSEMPEL 4
Antistoff DL-6 ble prøvet i en fluorescens-antistoff-måling på infiserte celler og viste fellestype membran immuno-fluorescens som tydet på at den gjenkjente epitop av gD-1 og gD-2 var tilgjengelig for binding på glykoproteinene når de ble innsatt i cellemembranen.
Nøytraliseringsmålinger ( in vitro) viste at Dl-6 antistoffet nøytraliserte HSV-1 i en 1:50 fortynning og HSV-2 i en 1:20 fortynning ved anvendelse av et 50% sluttpunkt som i Eisenber, et al., J. Virol., 41, s. 1099-1104 (1982).
Immunoplotmålinger ble anvendt for.å undersøke binding til en rekke syntetiske peptider som er oppført i tabell II nedenunder. I tabellen er rekkefølgen av aminosyrene i peptidene representert ved de første to tall og tallene i klammer viser sekvensens typespesifitet. En H i klammer viser at sekvensen er et hybrid av de forutsatte type 1 og type 2 sekvenser .
Immunoblot -målingsresultater ved anvendelse av tabell II peptider viste ingen immunoreaktivitet for DL-6 med peptider (a) til og med (1) eller (p), men signifikant reaktivitet med peptidene (m), (n) og (o), som representerte restene 266-279 av gD-1 og gD-2 og 268-287 av gD-1.
Fordi DL-6 immunoplot-målinger viser signifikant reaktivitet med gD-1 og gD-2 tilstede i de fleste utfellinger erholdt fra HSV-1 og HSV-2 infiserte celler dyrket i nærvær av tunika-mycin, ble det utelukket at karbohydrater inngikk i epitopet som ble gjenkjent av DL-6.
Immunoreaktivitet av DL-6 med forskjellig glykoprotein D-lignende fragment og analoge materialer fremstilt ved rekombinante metoder ble bestemt ved immunoplot. Som forut nevnt, var DL-6 i det vesentlige ikke-reaktiv med det rekombinante glykoprotein 1-275(1) fremstilt av Lasky, et al., fremgangsmåte ovenfor. DL-6 var immunoreaktivt imidlertid med ethvert under-søkt rekombinant produkt som inneholdt en sekvens av aminosyrerester som spente over forutsette rester 266-287 av gD-1, d.v.s. rekombinant 1-287(1), rekombinant 8-300(1) og rekombinant -5-396(1) beskrevet i eksempel 1.
Basert på immunoreaktivitets "profilen" man fikk ved undersøkelsene ovenfor, kan man fremsette de følgende konklu-sjoner vedrørende epitopen som gjenkjennes av antistoffer i oppfinnelsen som er angitt som antistoff DL-6.. Antistoffet gjenkjente både gD-1 og gD-2 i opprinnelig, denaturerte og ikke-glykosylerte former, hvilket tyder på at epitopen omfatter en felles type eller i det vesentlige fellestype kontinuerlig sekvens av aminosyrerester. Antistoffet gjenkjente alle rekombinante gD-1 replikaer og analoge som inneholdt den forutsette kontinuerlige sekvens av restene 266-287 i gD-1. Manglende gjenkjennelse av rekombinante glykoprotein 1-275(1) viser at i det minste noen rester forbi forutsatt rest 275 er signifikante for gjenkjennelse av epitopen (og ved korrelering med reaktivitet med peptidet 266-279(1) er det mulig at fire eller flere rester kan være involverte). På den annen side viser gD-1 og gD-2 fellestype gjenkjennelseskapasitet hos antistoffet i korrelasjon med den type spesifikke natur av 266-279(1), 266-279(2) og 268-287(1) reaktive peptider, at
den gjenkjente epitop inneholder eller inngår i fellestype-sekvensen som er felles for de syntetiske peptider, d.v.s. sekvensen som omfatter de forutsagte rester 270-279, PEDPEDSALL.
Det foregående eksempel tjener til å illustrere den mani-festerte verdi av de meget spesifikke monoklonale antistoffer i oppfinnelsen ved påvisning og kvantifisering av gD-1, gD-2 og strukturelt beslektede forbindelser innbefattet peptider og proteinaktige materialer som inneholder en kontinuerlig sekvens av aminosyrerester som er duplikative i sin helhet eller del av sådanne som er forutsatt å være eksisterende som rester av 266-287 av gD-1 og gD-2. Det følgende illustrerende eksempel vedrører undersøkelser av antistoffer i oppfinnelsen i forbindelse med generell fastleggelse av deres affinitetsgrad for gD-1, gD-2 og strukturelt beslektede forbindelser vis-a-vis antistoffer som er utviklet tidligere.
EKSEMPEL 5
Antistoff DL-6 fra bukvatersot ble absorbert på en cyanogen bromid-aktivert Sepharose 4B kolonne som forut beskrevet og anvendt i isoleringen ved affinitetsrensing av gD-1 fra infiserte celler. Ved anvendelse av ekvivalente betingelser var DL-6 antistoffkolonnen istand til å binde fra to til tre ganger mer av mål-glykoproteinet enn kolonner hvor (gruppe I) MCAb HD-1 ble anvendt. Videre viste innledende vaksinasjons-undersøkelser på mus som anvendte DL-6 affinitetsrensede materialer som aktivt immunogen at materialet var i det minste like aktivt som HD-1 affinitetsrenset materiale ved fremtvingelse av en immunreaksjon som beskyttet mot et dødelig virusangrep.
En "konkurranse"måling ble utført hvor monoklonale antistoffer DL-6, HD-1, 11S, 45S og 170 (100-200 jil som representerte 150 til 600 /ig IgG) ble bundet til en Sepharose 4B kolonne, og kolonnen ble brukt til å absorbere cytoplasma-ekstrakter fra HSV-1 infiserte celler (100 pl ekstrakt inkubert ved 37°C i to timer). Immunoabsorbantene ble vasket ti ganger med buffer og jodert sekundært antistoff (ca. 250.000 cpm) ble tilsatt. Etter grundig vask ble kolonnene tellet med en gamma-teller. Fordi et overskudd antistoff ble anvendt på kolonnen burde ikke noe merket antistoff av den samme type teoretisk hefte til kolonnen. Av alle antistoffer som ble undersøkt mot sine merkede motparter, viste DL-6 den høyeste kapasitet til å binde gD-1 til utelukkelsen av sin merkede motpart.
De foregående illustrerende eksempler vedrører monoklonale antistoffproduserende hybridoma-cellelinjer dannet ved hjelp av standard, kjemisk utførte fusjoner av musemilt og tumorceller. Det vil være klart at en rekke hybridoma-celleproduserende rekker kan anvendes alternativt på celler av forskjellige pattedyrarts opprinnelser for å gi hybridomacellelinjer i foreliggende oppfinnelse som er istand til å produsere antistoffer som er spesifikt immunologisk reaktive med gD-1, gD-2 og strukturelt beslektede forbindelser som inneholder aminosyresekvensen RNHPEDPEDSALLCOR<1>, hvor R og R' er like eller forskjellige aminosyrerester eller R er hydrogen og R<1> er hydroksyl.
Tallrike modifikasjoner og variasjoner av oppfinnelsen som er beskrevet i de ovennevnte illustrerende eksempler vil forventes å være åpenbare for en fagmann på området, og følgelig bør bare slike begrensninger som fremgår av de vedlagte krav forelegges oppfinnelsen.
Claims (9)
1. Monoklonalt antistoff til anvendelse in vitro karakterisert ved evne til spesifikk binding med glykoprotein D i Herpes Simplex Virus type 1 og 2 og med et proteinaktig materiale, omfattende en aminosyresekvens som tilsvarer en del av eller hele den følgende sekvens;
PELA (eller V) PEDPEDSALLEDPV (eller A)GTVA (eller S).
2. Monoklonalt antistoff ifølge krav 1, karakterisert ved at det har evne til spesifikk binding med et proteinaktig materiale, omfattende den følgende aminosyresekvens;
PELA(eller V) PEDPEDSALL.
3. Monoklonalt antistoff ifølge krav 1, karakterisert ved at det har evne til spesifikk binding med et proteinaktig materiale, omfattende den følgende aminosyresekvens: LA(eller V) PEDPEDSALLEDPV (eller A)GTVA (eller S).
4. Monoklonalt antistoff ifølge krav 1, karakterisert ved at det har evne til spesifikk binding med et proteinaktig materiale, omfattende den følgende aminosyresekvens: PEDPEDSALL.
5. Hybridoma-cellelinje,
karakterisert ved at den er istand til å produsere et monoklonalt antistoff ifølge krav 1.
6. Hybridoma-cellelinje ifølge krav 5, karakterisert ved at den inneholder genetisk materiale fra musedyr.
7. Hybridoma-cellelinje ifølge krav 5, karakterisert ved at den er A.T.C.C.nr. HB8606.
8. Monoklonalt antistoff,
karakterisert ved at det er fremstilt av hybridoma-cellelinje A.T.C.C.nr. HB8606 ifølge krav 7.
9. Anvendelse av det monoklonale antistoff ifølge krav 1 eller 8 for isolering, kvantitativ bestemmelse eller affinitetsrensing av glykoprotein D av Herpes Simplex Virus type 1 eller 2 og proteinaktige materialer inneholdende en del av eller hele den følgende sekvens av aminosyrer, PELA (eller V) PEDPEDSALLEDPV (eller A)GTVA (eller S).
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US64420584A | 1984-08-24 | 1984-08-24 | |
| US06/696,582 US4745182A (en) | 1984-08-24 | 1985-01-31 | Herpes virus specific immunological materials and methods |
| PCT/US1985/001481 WO1986001517A1 (en) | 1984-08-24 | 1985-08-05 | Herpes virus specific immunological materials and methods |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO861597L NO861597L (no) | 1986-04-23 |
| NO170025B true NO170025B (no) | 1992-05-25 |
| NO170025C NO170025C (no) | 1992-09-02 |
Family
ID=27094428
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO86861597A NO170025C (no) | 1984-08-24 | 1986-04-23 | Monoklonalt antistoff til anvendelse in vitro, hybridoma-cellelinje for fremstilling derav samt anvendelse av foerstnevnte |
Country Status (20)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4745182A (no) |
| EP (1) | EP0172471B1 (no) |
| JP (2) | JP2559366B2 (no) |
| KR (1) | KR910002552B1 (no) |
| AT (1) | ATE72267T1 (no) |
| AU (1) | AU592064B2 (no) |
| CA (1) | CA1254161A (no) |
| DE (1) | DE3585306D1 (no) |
| DK (1) | DK166732B1 (no) |
| ES (1) | ES8607562A1 (no) |
| FI (1) | FI102838B (no) |
| GR (1) | GR852018B (no) |
| HU (1) | HU195247B (no) |
| IE (1) | IE59461B1 (no) |
| IL (1) | IL76013A (no) |
| NO (1) | NO170025C (no) |
| NZ (1) | NZ213016A (no) |
| PH (1) | PH21407A (no) |
| PL (1) | PL150778B1 (no) |
| WO (1) | WO1986001517A1 (no) |
Families Citing this family (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5149660A (en) * | 1982-02-18 | 1992-09-22 | University Patents, Inc. | Diagnostic reagents relating to herpes simplex virus |
| DE3510734A1 (de) * | 1985-03-25 | 1986-09-25 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Verfahren zur herstellung eines fuer herpes simplex virus typ 2 spezifischen antigens, dazu geeignetes mittel und verwendung dieses antigens |
| US5250410A (en) * | 1987-01-27 | 1993-10-05 | Allegheny-Singer Research Institute | Rapid detection of herpes virus with lectin |
| US5646041A (en) * | 1987-02-12 | 1997-07-08 | Harfeldt; Elisabeth | Monoclonal antibody to herpes simplex virus and cell line producing same |
| WO1990001324A1 (en) * | 1988-08-10 | 1990-02-22 | Stephen Leslie Sacks | PRODUCTION OF RADIOIODINATED 1-β-D-ARABINOFURANOSYL)-5(E)-(2-IODOVINYL)URACIL, AND USES THEREOF, AND RELATED ANALOGUES INCORPORATING ALTERNATIVE HALOGEN RADIONUCLIDES, THE GENERAL RADIOHALOGENATION PRECURSORS, 1-(2,3,5-TRI-O-ACETYL-β-D-ARABINOFURANOSYL)-5(Z and E)-(2-TRIMETHYLSILYLVINYL)URACIL, PROCESSES FOR RADIOHA |
| US5081010A (en) * | 1989-02-09 | 1992-01-14 | Eastman Kodak Company | Extraction composition, test kit and their use to extract or determine herpes simplex viral antigen |
| WO1990013652A1 (en) * | 1989-05-12 | 1990-11-15 | Triton Diagnostics, Inc. | Herpes simplex virus type 2-glycoprotein g proteins and polypeptides |
| ATE155583T1 (de) * | 1991-03-06 | 1997-08-15 | Ortho Diagnostic Systems Inc | Denaturierte transportproteine zur verbesserung von enzymgebundenen immunoassays (elisa) |
| US5654174A (en) * | 1995-07-07 | 1997-08-05 | Competitive Technologies, Inc. | Herpes simplex virus glycoprotein D variants |
| US7267940B2 (en) * | 2003-03-04 | 2007-09-11 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | HSV-2 type-specific immunoassays using glycoprotein G2 peptides |
| WO2010087813A1 (en) * | 2009-01-05 | 2010-08-05 | Dcb-Usa Llc | Anti-herpes simplex virus antibodies |
| US8252906B2 (en) | 2009-01-05 | 2012-08-28 | Dcb-Usa Llc | Anti-herpes simplex virus antibodies and methods of use thereof |
| EP2308895A1 (en) | 2009-10-01 | 2011-04-13 | Universität Duisburg-Essen | Anti-HSV antibody |
| WO2012139106A2 (en) * | 2011-04-08 | 2012-10-11 | Duke University | Herpes simplex virus |
| WO2024117057A1 (ja) * | 2022-11-28 | 2024-06-06 | マルホ株式会社 | 抗体またはその抗原結合性断片、およびこれを用いた免疫学的測定装置 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4572896A (en) * | 1980-08-27 | 1986-02-25 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Monoclonal antibodies to herpes simplex virus type I polypeptides |
| US4430437A (en) * | 1980-08-27 | 1984-02-07 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Test methods employing monoclonal antibodies against Herpes simplex virus types 1 and 2 nucleocapsids proteins |
| CA1240937A (en) * | 1982-07-26 | 1988-08-23 | Gordon R. Dreesman | Monoclonal igm antibodies and method of preparation |
| US4535057A (en) * | 1982-07-26 | 1985-08-13 | Amf Incorporated | Immunoassay employing monoclonal herpes simplex antibody and biotin-avidin detection system |
| US4618570A (en) * | 1984-03-27 | 1986-10-21 | Konishiroku Photo Industry Co., Ltd. | Silver halide photographic materials |
-
1985
- 1985-01-31 US US06/696,582 patent/US4745182A/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-08-01 EP EP85109685A patent/EP0172471B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-08-01 AT AT85109685T patent/ATE72267T1/de not_active IP Right Cessation
- 1985-08-01 DE DE8585109685T patent/DE3585306D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1985-08-05 AU AU47258/85A patent/AU592064B2/en not_active Ceased
- 1985-08-05 WO PCT/US1985/001481 patent/WO1986001517A1/en active IP Right Grant
- 1985-08-05 HU HU853663A patent/HU195247B/hu not_active IP Right Cessation
- 1985-08-05 JP JP60503747A patent/JP2559366B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1985-08-06 IL IL76013A patent/IL76013A/xx not_active IP Right Cessation
- 1985-08-06 NZ NZ213016A patent/NZ213016A/xx unknown
- 1985-08-20 GR GR852018A patent/GR852018B/el unknown
- 1985-08-22 ES ES546354A patent/ES8607562A1/es not_active Expired
- 1985-08-23 IE IE207285A patent/IE59461B1/en not_active IP Right Cessation
- 1985-08-23 KR KR1019850006087A patent/KR910002552B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1985-08-23 PH PH32683A patent/PH21407A/en unknown
- 1985-08-23 PL PL1985255119A patent/PL150778B1/pl unknown
- 1985-08-23 CA CA000489291A patent/CA1254161A/en not_active Expired
-
1986
- 1986-04-23 DK DK187286A patent/DK166732B1/da not_active IP Right Cessation
- 1986-04-23 FI FI861708A patent/FI102838B/fi not_active IP Right Cessation
- 1986-04-23 NO NO86861597A patent/NO170025C/no not_active IP Right Cessation
-
1993
- 1993-09-30 JP JP5265435A patent/JP2574992B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI114802B (fi) | Epstein-Barr-virukseen liittyviä peptidejä ja nukleiinihapposekvenssejä | |
| Eisenberg et al. | Localization of epitopes of herpes simplex virus type 1 glycoprotein D | |
| NO170025B (no) | Monoklonalt antistoff til anvendelse in vitro, hybridoma-cellelinje for fremstilling derav samt anvendelse av foerstnevnte | |
| EP0192902B1 (en) | Dna sequences from varicella-zoster virus, vectors and hosts containing them, the corresponding polypeptides and the compositions containing them | |
| EP0236145B2 (en) | Processes for the production of HCMV glycoproteins, antibodies thereto and HCMV vaccines, and recombinant vectors therefor | |
| DK172619B1 (da) | Fremgangsmåde til isolering af immunogene præparater af herpes simplex virus type 1 og type 2, fremgangsmåde til fremstill | |
| US4709011A (en) | Materials and methods for herpes simplex virus vaccination | |
| Oba et al. | Induction of antibodies to the Epstein-Barr virus glycoprotein gp85 with a synthetic peptide corresponding to a sequence in the BXLF2 open reading frame | |
| JP2530847B2 (ja) | 帯状疱疹ウイルスに対するワクチン | |
| Weijer et al. | Antibodies against synthetic peptides of herpes simplex virus type 1 glycoprotein D and their capability to neutralize viral infectivity in vitro | |
| CA2178057C (en) | Epstein-barr virus peptides and antibodies against these peptides | |
| US6162620A (en) | Processes for the production of HCMV glycoproteins, antibodies thereto and HCMV vaccines, and recombinant vectors therefor | |
| Baranowski et al. | Identification of 108 K, 93 K, and 42 K glycoproteins of bovine herpesvirus-1 by monoclonal antibodies | |
| US20020169286A1 (en) | Peptides and nucleic acid sequences related to the epstein barr virus |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM1K | Lapsed by not paying the annual fees |
Free format text: LAPSED IN FEBRUARY 2003 |