JPS6248394A - Ｌ−グルタミン酸の製造方法 - Google Patents
Ｌ−グルタミン酸の製造方法Info
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- JPS6248394A JPS6248394A JP18645385A JP18645385A JPS6248394A JP S6248394 A JPS6248394 A JP S6248394A JP 18645385 A JP18645385 A JP 18645385A JP 18645385 A JP18645385 A JP 18645385A JP S6248394 A JPS6248394 A JP S6248394A
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- solution
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
Ｌ−グルタミン酸は調味料などの食品素材としてまた各
種化成品の原料として広く利用されている。本発明はＬ
−グルタミン酸を効率よく製造する方法に関するもので
ある。
種化成品の原料として広く利用されている。本発明はＬ
−グルタミン酸を効率よく製造する方法に関するもので
ある。
Ｌ−グルタミン酸は一般的罠発酵法で生産されている。
このＬ−グルタミン酸の生産性を改良する研究は種々行
なわれ、例えば発酵液へのし−グルタミン酸の蓄積量を
増すために原料である糖質等を追加添加したり、あるい
はＬ−グルタミン酸生産菌（以下、発酵醒ということが
ある。）が要求する酸素を充分に与える方法等の技術が
開発されている。また、発酵菌の種培養に要する原料や
時間を節約するために一度発酵生産を終えた菌体を発酵
液から回収してこれを次の培地に懸濁して再利用する方
法も開発されている。
なわれ、例えば発酵液へのし−グルタミン酸の蓄積量を
増すために原料である糖質等を追加添加したり、あるい
はＬ−グルタミン酸生産菌（以下、発酵醒ということが
ある。）が要求する酸素を充分に与える方法等の技術が
開発されている。また、発酵菌の種培養に要する原料や
時間を節約するために一度発酵生産を終えた菌体を発酵
液から回収してこれを次の培地に懸濁して再利用する方
法も開発されている。
いずれにしても従来の方法は発酵液に蓄積させるＬ−グ
ルタミン酸の濃度を高めることによって生産性を向上さ
せようとしていた。しかしながら、このような方法では
発酵後半における発酵菌のＬ−グルタミン酸生産能力が
低下してしまうため大巾な生産性の向上を望めないとい
う問題があった。
ルタミン酸の濃度を高めることによって生産性を向上さ
せようとしていた。しかしながら、このような方法では
発酵後半における発酵菌のＬ−グルタミン酸生産能力が
低下してしまうため大巾な生産性の向上を望めないとい
う問題があった。
また、−匣発酵の終了した菌体を再利用する場合にはこ
の菌のＬ−グルタミン酸生産能が低下していて効率のよ
いＬ−グルタミン酸の生産を行なえないという問題点も
あった。この方法は菌体の回収から次の培地への懸濁に
至る間に雑菌に汚染されやすいことも問題であった。
の菌のＬ−グルタミン酸生産能が低下していて効率のよ
いＬ−グルタミン酸の生産を行なえないという問題点も
あった。この方法は菌体の回収から次の培地への懸濁に
至る間に雑菌に汚染されやすいことも問題であった。
本発明者らはこのような問題点を解決してＬ−グルタミ
ン酸を動歪よく製造する方法を開発するべく種々検討の
結果、従来の菌体を回収して再利用する方法においては
発酵の後半に菌体が高い濃度のＬ−グルタミン酸や高い
浸透圧にさらされているためにＬ−グルタミン酸の生産
能が低下していることを見出した。そして、発酵中に発
酵液の一部を引き抜いて新しい培地を補充することによ
り菌体を高い濃度のグルタミン酸や高い浸透圧にさらす
ことを避ければ菌体がＬ−グルタミン酸の高い生産能を
長期間にわたって維持し、Ｌ−グルタミン酸を効率よく
製造しうろことを見出して、この知見に基いて本発明を
完成するに至った。
ン酸を動歪よく製造する方法を開発するべく種々検討の
結果、従来の菌体を回収して再利用する方法においては
発酵の後半に菌体が高い濃度のＬ−グルタミン酸や高い
浸透圧にさらされているためにＬ−グルタミン酸の生産
能が低下していることを見出した。そして、発酵中に発
酵液の一部を引き抜いて新しい培地を補充することによ
り菌体を高い濃度のグルタミン酸や高い浸透圧にさらす
ことを避ければ菌体がＬ−グルタミン酸の高い生産能を
長期間にわたって維持し、Ｌ−グルタミン酸を効率よく
製造しうろことを見出して、この知見に基いて本発明を
完成するに至った。
すなわち、本発明は、少なくとも反応槽、該反応槽に接
続されそこから排出される反応液を菌体分離する菌体分
離装置、該菌体分離装置に接続されそこから排出される
上清液からＬ−グルタミン酸を分離するグルタミン酸分
離装置及び前記菌体分離装置から排出される菌体液を前
記反応槽に戻す配管とを有する装置を用い、前記反応槽
にＬ−グルタミン酸生産菌及びその基質溶液を入れてＬ
−グルタミン酸生成反応を行なわせ、該反応槽内の反応
液の一部を抜き出して前記菌体分離装置で菌体分離し、
分離された菌体液は前記反応槽内に返送し、一方、菌体
を分離した上清液は前記グルタミン酸分離装置に送って
そこでＬ−グルタミン酸を分離し、前記反応槽には基質
溶液を供給補充して反応を継続させ、上記の各操作を連
続的又は間欠的に繰り返すことよりなる発酵法によるＬ
−グルタミン酸の型造方法に関するものである。
続されそこから排出される反応液を菌体分離する菌体分
離装置、該菌体分離装置に接続されそこから排出される
上清液からＬ−グルタミン酸を分離するグルタミン酸分
離装置及び前記菌体分離装置から排出される菌体液を前
記反応槽に戻す配管とを有する装置を用い、前記反応槽
にＬ−グルタミン酸生産菌及びその基質溶液を入れてＬ
−グルタミン酸生成反応を行なわせ、該反応槽内の反応
液の一部を抜き出して前記菌体分離装置で菌体分離し、
分離された菌体液は前記反応槽内に返送し、一方、菌体
を分離した上清液は前記グルタミン酸分離装置に送って
そこでＬ−グルタミン酸を分離し、前記反応槽には基質
溶液を供給補充して反応を継続させ、上記の各操作を連
続的又は間欠的に繰り返すことよりなる発酵法によるＬ
−グルタミン酸の型造方法に関するものである。
本発明の方法に使用するＬ−グルタミン酸生産菌は特に
制限されるものではなく、Ｌ−グルタミン酸発酵に使用
されている通常の発酵菌を使用すればよい。例としては
、ブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタムＡＴＣＣ
１３８６９、ブレビバクテリウム・フラ・ぐムＡＴＣＣ
１４０６７、コリネバクテリウム・グルタミクムＡＴＣ
Ｃ１３０３２等を挙げることができる。
制限されるものではなく、Ｌ−グルタミン酸発酵に使用
されている通常の発酵菌を使用すればよい。例としては
、ブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタムＡＴＣＣ
１３８６９、ブレビバクテリウム・フラ・ぐムＡＴＣＣ
１４０６７、コリネバクテリウム・グルタミクムＡＴＣ
Ｃ１３０３２等を挙げることができる。
基質溶液はグルコース、シュクロース、糖蜜。
デングン加水分解物、エタノール、有機酸、炭化水素環
Ｌ−グルタミン酸発酵用の公知の基質の溶液である。
Ｌ−グルタミン酸発酵用の公知の基質の溶液である。
この基質溶液にはＬ−グルタミン酸発酵用の通常の培地
成分、例えば硫安、硝安、塩安、アンモニア、尿素、ア
ミノ酸等の窒素源、リン酸１カリ。
成分、例えば硫安、硝安、塩安、アンモニア、尿素、ア
ミノ酸等の窒素源、リン酸１カリ。
リン酸２カリ、リン酸１ナトリウム、硫酸マグネシウム
、鉄塩、マンガン塩等の無機塩類、大豆蛋白加水分解物
等の有機栄養物、ビオチン又はその誘導体、脂肪酸又は
そのエステル及び梨ニジリン又はその誘導体等を適宜添
加することができる。
、鉄塩、マンガン塩等の無機塩類、大豆蛋白加水分解物
等の有機栄養物、ビオチン又はその誘導体、脂肪酸又は
そのエステル及び梨ニジリン又はその誘導体等を適宜添
加することができる。
脂肪酸は炭素数が１２〜１８の飽和高級脂肪酸であり、
そのエステルはグリセロールエステル、ソルビタンエス
テル、シュクロースエステル、ホリエチレンクリコール
エステル、ホリオキシエチレンノルビタンエステルなど
である。窒素源、無機塩類、有機栄養物などの濃度は通
常の培地における濃度と同程度でよい。
そのエステルはグリセロールエステル、ソルビタンエス
テル、シュクロースエステル、ホリエチレンクリコール
エステル、ホリオキシエチレンノルビタンエステルなど
である。窒素源、無機塩類、有機栄養物などの濃度は通
常の培地における濃度と同程度でよい。
ビオチン又はその誘導体は発酵菌のＬ−グルメミン酸生
産能を長期間にわたって保持させるために有効である。
産能を長期間にわたって保持させるために有効である。
添加量は反応液中の濃度が５ Ｑ ｒ／ｌ〜５ｏＯｒ／
Ｖ程度になるようにするのがよい。
Ｖ程度になるようにするのがよい。
Ｌ−グルタミン酸を効率よく産生させるためにビオチン
に加えて脂肪酸もしくはそのエステル又はペニシリンも
しくはその誘導体を加えることが有効である。脂肪酸も
しくはそのエステルの場合には反応液中の濃度として０
．０５チ〜０．５チ程度が適当であり、被ニジリンもし
くはその誘導体の場合には反応液中の濃度としてＩＵ／
１ｎｔ〜ＩＯＵ／ｍ程度が適当である。
に加えて脂肪酸もしくはそのエステル又はペニシリンも
しくはその誘導体を加えることが有効である。脂肪酸も
しくはそのエステルの場合には反応液中の濃度として０
．０５チ〜０．５チ程度が適当であり、被ニジリンもし
くはその誘導体の場合には反応液中の濃度としてＩＵ／
１ｎｔ〜ＩＯＵ／ｍ程度が適当である。
上記の各成分は基質溶液とは別にして直接反応槽に投入
してもよい。特に、ビオチン又はその誘導体、脂肪酸又
はその誘導体及びペニシリン又はその誘導体は別に添加
しうるようにして反応液における濃度を適正範囲に調整
できるようにしておくことが好ましい。
してもよい。特に、ビオチン又はその誘導体、脂肪酸又
はその誘導体及びペニシリン又はその誘導体は別に添加
しうるようにして反応液における濃度を適正範囲に調整
できるようにしておくことが好ましい。
本発明の方法に利用される装置の一例概要を第１図に示
す。
す。
反応槽はＬ−グルタミン酸生成反応を行なわせるところ
であり、温度調節機構、反応液への通気機構及び−ｌ調
整機構を備えるとともに菌体及び基質溶液の投入口と反
応液の排出口が設−けられている必要がある。その他、
攪拌装置と、溶存酸素濃変針、基質濃度計、各抽培地成
分の濃度計、Ｌ−グルタミン＆ａ度計、液面計などの各
ね計器類等を適宜設けてもよい。反応槽の形状は如何な
るものであってもよく、例えば円筒形、箱形などでよい
。このような反応槽には従来の発酵槽を利用することが
できる、 反応槽から抜き出される反応液中には通常基質が残存し
ているので、一旦これを中間槽に入れてそこでこの基質
を資化させてＬ−グルタミン酸に変えることが好ましい
。中間槽は温度及び−の調節機構及び通気機構を備えて
いるものがよく、そのほか必要によシ前記反応槽に設け
た機器類等を適宜付加する。この中間槽には完全混合槽
あるいは滞留管型反応槽を利用できる。中間槽は連続的
に基質溶液を加えて連続的に反応液を抜き出す方式にお
いては必要度が高く、逆に間欠的にこれらを行なう方式
においては中間槽を省略できる場合もある。
であり、温度調節機構、反応液への通気機構及び−ｌ調
整機構を備えるとともに菌体及び基質溶液の投入口と反
応液の排出口が設−けられている必要がある。その他、
攪拌装置と、溶存酸素濃変針、基質濃度計、各抽培地成
分の濃度計、Ｌ−グルタミン＆ａ度計、液面計などの各
ね計器類等を適宜設けてもよい。反応槽の形状は如何な
るものであってもよく、例えば円筒形、箱形などでよい
。このような反応槽には従来の発酵槽を利用することが
できる、 反応槽から抜き出される反応液中には通常基質が残存し
ているので、一旦これを中間槽に入れてそこでこの基質
を資化させてＬ−グルタミン酸に変えることが好ましい
。中間槽は温度及び−の調節機構及び通気機構を備えて
いるものがよく、そのほか必要によシ前記反応槽に設け
た機器類等を適宜付加する。この中間槽には完全混合槽
あるいは滞留管型反応槽を利用できる。中間槽は連続的
に基質溶液を加えて連続的に反応液を抜き出す方式にお
いては必要度が高く、逆に間欠的にこれらを行なう方式
においては中間槽を省略できる場合もある。
菌体分離装置は濾過方式、遠心分離方式のいずれでもよ
い。但し、菌体分離中に菌体が高温にならないように配
慮する必要がある。本発明の方法には連続型の遠心分離
機も好ましく使用できるが、この遠心分離機は分離中に
菌体が加熱されてしまうタイプのものもある。そのよう
な場合には反応液を予め冷却してから菌体分離する必要
がある。
い。但し、菌体分離中に菌体が高温にならないように配
慮する必要がある。本発明の方法には連続型の遠心分離
機も好ましく使用できるが、この遠心分離機は分離中に
菌体が加熱されてしまうタイプのものもある。そのよう
な場合には反応液を予め冷却してから菌体分離する必要
がある。
菌体分離装置から排出される菌体液側は反応槽に戻すよ
うに配管され、一方、上清液側はグルタミン酸分離装置
に配管接続される。
うに配管され、一方、上清液側はグルタミン酸分離装置
に配管接続される。
グルタミン酸分離装置は通常の装置でよく、例えば晶析
缶と結晶分離機の組合せ、イオン交換樹脂塔、電気透析
装置などを利用すればよい。
缶と結晶分離機の組合せ、イオン交換樹脂塔、電気透析
装置などを利用すればよい。
これらのほかには基質溶液調製槽、その貯槽、種培養槽
とこれに必要な付属装置などが適宜設けられる。
とこれに必要な付属装置などが適宜設けられる。
このような装置を用いてＬ−グルタミン酸を製造するに
あたっては、まず反応槽に菌体と基質溶液を入れて５〜
３０時間程時間比させると菌体がＬ−グルタミン酸を効
率的に生産しうるに必要な程度まで増殖する。この時間
が短かすぎると菌体量が不足してその後の効率的なＬ−
グルタミン酸の生産が困難になり、一方長すぎると基質
が消費しつくされて菌体のＬ−グルタミン酸生産能が低
下してしまう。
あたっては、まず反応槽に菌体と基質溶液を入れて５〜
３０時間程時間比させると菌体がＬ−グルタミン酸を効
率的に生産しうるに必要な程度まで増殖する。この時間
が短かすぎると菌体量が不足してその後の効率的なＬ−
グルタミン酸の生産が困難になり、一方長すぎると基質
が消費しつくされて菌体のＬ−グルタミン酸生産能が低
下してしまう。
そこで反応液の一部を反応槽から中間槽に送シ、一方基
質貯槽から反応槽に基質溶液を送って液量の減少分を補
充して反応を続行させる。この交換する液量は１時間あ
たシ通常総液量の５チ以上好１しくは１０％以上になる
ようにする。この交換液量が少なすぎると反応槽内での
Ｌ−グルタミン酸濃変が高くなシすざたりあるいは浸透
圧が高くなシすぎたシして菌体のＬ−グルタミン酸生産
能が低下してしまう。液の交換は連続的であってもよく
間欠的であってもよい。
質貯槽から反応槽に基質溶液を送って液量の減少分を補
充して反応を続行させる。この交換する液量は１時間あ
たシ通常総液量の５チ以上好１しくは１０％以上になる
ようにする。この交換液量が少なすぎると反応槽内での
Ｌ−グルタミン酸濃変が高くなシすざたりあるいは浸透
圧が高くなシすぎたシして菌体のＬ−グルタミン酸生産
能が低下してしまう。液の交換は連続的であってもよく
間欠的であってもよい。
反応槽内における反応液の基質濃度は０．１〜５係程藺
になるようにコントロールする。０．１係以下に下がる
と：ｉ＆、質の資化速度が低下し、Ｌ−グルタミン酸の
生産速度が低下してしまう。一方、５チを越えると基質
の濃度阻害とか浸透圧の上昇による阻害が現われＬ−グ
ルタミン酸生産速度かやは９低下してしまう。
になるようにコントロールする。０．１係以下に下がる
と：ｉ＆、質の資化速度が低下し、Ｌ−グルタミン酸の
生産速度が低下してしまう。一方、５チを越えると基質
の濃度阻害とか浸透圧の上昇による阻害が現われＬ−グ
ルタミン酸生産速度かやは９低下してしまう。
この反応液のＬ−グルタミン酸ａ度は８〜１５チ程度に
なるようにコントロールする。８チ以下では上清液から
のＬ−グルタミン酸の分離効率が悪くなり、一方１５嗟
を越えると発酵菌のＬ−グルタミン酸生産能が阻害され
てＬ−グルタミン酸の生産速度が低下する。
なるようにコントロールする。８チ以下では上清液から
のＬ−グルタミン酸の分離効率が悪くなり、一方１５嗟
を越えると発酵菌のＬ−グルタミン酸生産能が阻害され
てＬ−グルタミン酸の生産速度が低下する。
反応液の浸透圧は無機塩の濃度、アンモニアの濃度、Ｌ
−グルタミン酸の濃度、基質濃度、窒素源の濃度などの
上昇に従って高まる。この浸透圧が２０００オスモモル
を越えるとＬ−グルタミン酸の生産速度が低下するので
これ以下になるように管理する。
−グルタミン酸の濃度、基質濃度、窒素源の濃度などの
上昇に従って高まる。この浸透圧が２０００オスモモル
を越えるとＬ−グルタミン酸の生産速度が低下するので
これ以下になるように管理する。
反応液の−４は発酵菌がＬ−グルタミン酸を生産する速
度の最も大きいところに調整するのがよく、このｐＨけ
通常は７〜８の範囲内になるようにコントロールすれば
よい。また、温度も発酵菌が長期間にわたりＬ−グルタ
ミン酸生産能を晶〈維持できる範囲に調整するのがよく
、通′）ルは３０〜４０℃に維持される。生反応柘から
送′敲を一開始１゛るまでの増殖期においでは３０〜３
５℃で菌を速かに増殖させ、送液開始後は３５〜４０℃
に維持することが一般に好ましい。
度の最も大きいところに調整するのがよく、このｐＨけ
通常は７〜８の範囲内になるようにコントロールすれば
よい。また、温度も発酵菌が長期間にわたりＬ−グルタ
ミン酸生産能を晶〈維持できる範囲に調整するのがよく
、通′）ルは３０〜４０℃に維持される。生反応柘から
送′敲を一開始１゛るまでの増殖期においでは３０〜３
５℃で菌を速かに増殖させ、送液開始後は３５〜４０℃
に維持することが一般に好ましい。
灰地・中、反応液は通気するとともに必要によシ攪拌し
て反応液を好憬的条件に保つ。反応液の溶存酸素分圧は
０．１〜１０係程度に維持するのがよい。Ｏ，１％以下
になると乳酸キ）の有機酸やＬ−アラニン等のＬ−グル
タミン酸以外のアｉノｍヲ生成してＬ−グルタミン酸の
生産速度が低下する。
て反応液を好憬的条件に保つ。反応液の溶存酸素分圧は
０．１〜１０係程度に維持するのがよい。Ｏ，１％以下
になると乳酸キ）の有機酸やＬ−アラニン等のＬ−グル
タミン酸以外のアｉノｍヲ生成してＬ−グルタミン酸の
生産速度が低下する。
一方１０チを越えると菌体の構成成分でるる脂質等の酸
化が促進され、Ｌ−グルタミン酸の生産能が低下する。
化が促進され、Ｌ−グルタミン酸の生産能が低下する。
溶存ｒＭＩ累分圧はガルバニ−型、月だ一うロ型等の一
般的な溶存酸素電極で測定することができ、空スを飽和
させたときを２１係とした値である。
般的な溶存酸素電極で測定することができ、空スを飽和
させたときを２１係とした値である。
また１反応中ビオチン等の濃度も適轟な範囲に維持され
るようんパ４節を行なうことが好ましい。
るようんパ４節を行なうことが好ましい。
中間槽においては反応液中に残存している基質を資化さ
せ、そのためにこの檜を３０〜４０℃程度に保つととも
に必要によシ通気攪拌を行なう。
せ、そのためにこの檜を３０〜４０℃程度に保つととも
に必要によシ通気攪拌を行なう。
菌体分離装置が連続遠心型の場合には基質を資化させた
後５〜１０℃程度に冷却してから菌体分離装置に送るこ
とが好ましい。
後５〜１０℃程度に冷却してから菌体分離装置に送るこ
とが好ましい。
菌体分離装置で分離された菌体液は反応槽に戻すが、一
部は引き抜いてその分を別途棟培養して得た菌体を補充
していくことによシさらに長期間の連続運転が可能にな
る。
部は引き抜いてその分を別途棟培養して得た菌体を補充
していくことによシさらに長期間の連続運転が可能にな
る。
一方、上清液はグルタミン酸分離装置に送ってそこでＬ
−グルタミン酸を分離する。
−グルタミン酸を分離する。
本発明の方法においては、微生物を基質となる原料を混
合し、Ｌ−グルタミン酸の生成反応を行わせしめる際に
、Ｌ−グルタミン酸の蓄積やその他のＬ−グルタミン酸
生成反応を阻害する物質の８積や環境の悪化が起こる前
にその反応液の一部を入れかえ、常に微生物にとって０
Ｍ生成によシ適した環境条件を維持し、反応液の入れか
えのために反応槽から排出された微生物を雑菌に汚染さ
れないように生産物を含む培養液と分離し、再度反応槽
へ返送するという方法で、長時間の間微生物のＬ−グル
タミン酸生成活性を維持した１ま効率良〈Ｌ−グルタミ
ン酸を製造することを可能にしている。
合し、Ｌ−グルタミン酸の生成反応を行わせしめる際に
、Ｌ−グルタミン酸の蓄積やその他のＬ−グルタミン酸
生成反応を阻害する物質の８積や環境の悪化が起こる前
にその反応液の一部を入れかえ、常に微生物にとって０
Ｍ生成によシ適した環境条件を維持し、反応液の入れか
えのために反応槽から排出された微生物を雑菌に汚染さ
れないように生産物を含む培養液と分離し、再度反応槽
へ返送するという方法で、長時間の間微生物のＬ−グル
タミン酸生成活性を維持した１ま効率良〈Ｌ−グルタミ
ン酸を製造することを可能にしている。
以下実施例によシさらに詳細に説明する。
実施例１゜
グｓ−コース３０ ｊｉ ／ ｌ−Ｋｌ（２ＰＯ４１１
１／ｌ −Ｍｇ５Ｏ４Ｈ７ａｑ Ｏ，４ｇ／ｌ 、尿素
４ ｇ／ｌ、 ＦｅＳＯ４・７ａｑ ２０’ｎＱ／ｌ、
ＭｎＳＯ４・４ａｑ ２０ η′ｌ 、大豆蛋白酸加水
分解物５ ｍｉ／ｌ、ビオチア ３００ ｔｔｉ／ｌを
含む培地３０ｍ１：を５００ ｍｌ容振盪フラスコに入
れ１１５℃、１ｏ分加熱滅菌した。これを室温まで冷や
し、プレビパクテリクム・ラクトフェルメンタムＡＴＣ
Ｃ１３８６９ｋ接種して２４時間３０℃にて枳培養した
。
１／ｌ −Ｍｇ５Ｏ４Ｈ７ａｑ Ｏ，４ｇ／ｌ 、尿素
４ ｇ／ｌ、 ＦｅＳＯ４・７ａｑ ２０’ｎＱ／ｌ、
ＭｎＳＯ４・４ａｑ ２０ η′ｌ 、大豆蛋白酸加水
分解物５ ｍｉ／ｌ、ビオチア ３００ ｔｔｉ／ｌを
含む培地３０ｍ１：を５００ ｍｌ容振盪フラスコに入
れ１１５℃、１ｏ分加熱滅菌した。これを室温まで冷や
し、プレビパクテリクム・ラクトフェルメンタムＡＴＣ
Ｃ１３８６９ｋ接種して２４時間３０℃にて枳培養した
。
この種培養液と甘蔗糖蜜を糖として８０ Ｅ／ｌ、ＫＨ
２ＰＯ４を１１／ｌ 、大豆蛋白酸加水分解物をＩＣ）
ｎｔ；ｙ’１を含む基質溶′／ｐｊ、２７０Ｍを予め滅
菌した１１容小型ガラス選り反応槽に入れ、３０℃に保
温した。除菌空気を毎分３００ｍ１通似し、−■をＮＨ
３ガスにて７．５に保ちつつ攪拌した。開始後５時間目
にポリオキシエチレンソルビクンモノパルミテートを０
２係の製度になるように拾加した。さらに５時１；ｊ」
反応をθけた後反応液を毎時５０１ｒＬｌずつ、予め加
熱殺菌した平膜ミクロフィルターに通し、菌体液２０
ｍｌとＦ液３０ｍ１に戸別した。菌体含有液を反応槽に
戻した。菌体を含捷ない重液についてはその捷−ま′４
気透析装置に導き、Ｌ−グルタミン酸を得た。
２ＰＯ４を１１／ｌ 、大豆蛋白酸加水分解物をＩＣ）
ｎｔ；ｙ’１を含む基質溶′／ｐｊ、２７０Ｍを予め滅
菌した１１容小型ガラス選り反応槽に入れ、３０℃に保
温した。除菌空気を毎分３００ｍ１通似し、−■をＮＨ
３ガスにて７．５に保ちつつ攪拌した。開始後５時間目
にポリオキシエチレンソルビクンモノパルミテートを０
２係の製度になるように拾加した。さらに５時１；ｊ」
反応をθけた後反応液を毎時５０１ｒＬｌずつ、予め加
熱殺菌した平膜ミクロフィルターに通し、菌体液２０
ｍｌとＦ液３０ｍ１に戸別した。菌体含有液を反応槽に
戻した。菌体を含捷ない重液についてはその捷−ま′４
気透析装置に導き、Ｌ−グルタミン酸を得た。
反応槽へは毎時３０ゴずつ、甘蔗糖蜜を糖として１８０
９／ｌ 、大豆蛋白酸加水分解物５ ＲＶｌ！、ポリオ
モシエチレンソルビタンモノパルミテートヲ０．２チ含
む基質溶液を連続的に供給し、反応槽内の液量を一定に
保った。
９／ｌ 、大豆蛋白酸加水分解物５ ＲＶｌ！、ポリオ
モシエチレンソルビタンモノパルミテートヲ０．２チ含
む基質溶液を連続的に供給し、反応槽内の液量を一定に
保った。
本培養を４０時間続けることによシ、Ｌ−グルタミン酸
を１５０ｇ得た。
を１５０ｇ得た。
一方、１５１様に種培養液３０ｍＡ’を甘蔗糖蜜を糖と
して８０ ｇ／ｌ 、 ＫＨ２ＰＯ４を１１／ｌ 、大
豆蛋白酸加水分子ｙｌ’Ｊｆｌ／Ｊ ’、ｒ １０ ｒ
ｎ￥βを含む基貝浴液２７０ｍ１をともに１１容小型ガ
゛ラス製反応槓に入れ、同様の榮件にて攪拌した。開始
後５時間目にポリオキンエナレンソルビタンモノパルミ
テートを０．２％の濃度になるように添加し、さらに５
時間後今度は反応液を槽外にと９出すことなく、甘蔗糖
蜜を媚として５００ Ｅ／／ｌ 、大豆蛋白酸加水分解
物５ψｌ、ポリオキシエチレンフルビタンモノパルミｆ
−１ｔｏ、２％含む基質浴液を毎時５Ｔｎｌずつ連続的
て供給した。このようにして４０時間まで反応を続けた
。
して８０ ｇ／ｌ 、 ＫＨ２ＰＯ４を１１／ｌ 、大
豆蛋白酸加水分子ｙｌ’Ｊｆｌ／Ｊ ’、ｒ １０ ｒ
ｎ￥βを含む基貝浴液２７０ｍ１をともに１１容小型ガ
゛ラス製反応槓に入れ、同様の榮件にて攪拌した。開始
後５時間目にポリオキンエナレンソルビタンモノパルミ
テートを０．２％の濃度になるように添加し、さらに５
時間後今度は反応液を槽外にと９出すことなく、甘蔗糖
蜜を媚として５００ Ｅ／／ｌ 、大豆蛋白酸加水分解
物５ψｌ、ポリオキシエチレンフルビタンモノパルミｆ
−１ｔｏ、２％含む基質浴液を毎時５Ｔｎｌずつ連続的
て供給した。このようにして４０時間まで反応を続けた
。
この反応液４５０ｄよりＬ−グルタミン１５８Ｎを得た
。
。
実施例２゜
グルコース３０ ！ｌ／１３、ＫＨ２ＰＯ４１１／ｌ
ＭｇＳＯ４−７ａｑＯ，４１／／ｌ 、尿素４１１／ｌ
、Ｆ１１ＳＯ４・７ａｑ ２０ ”９／１３、ＭｎＳ
Ｏ４・４ａｑ ２０１ｎ９／ｌ 、大豆蛋白酸加水分解
物５ｎ＋￥ｌ、ビオチン３００μＶｌｊを含む培ｊｌｉ
ｌ、 ５０１をＳｏｌ容小型発酵槽に入れ、１２０℃、
１０分加熱滅菌した。冷却後、コリネバクテリウム・グ
ルタミクムＡＴＣＣｌ ３０３２を撤種し、２４時間３
１．５℃にて池培養した。この種培養液５０１をグルコ
ース１００ｊＪ／ｌ） 、 ＫＨ２ＰＯ４１１／ｌ、大
豆蛋白酸加水分解物２０ψｔ、ビオチン３００ Ａ’ｊ
ｉ／ｌ 、Ｍｇ５Ｏ４Ｈ７ａｑ ＩＪｉ’／Ａ’を含む
基質溶液９５０１を予め滅菌した１、 ５ ｋｌ容反応
槽に入れ、３１．５℃に保温した。除菌空気を毎分１ｋ
１通気し、−をＮＨ３がスにて７．５に保つようにして
２５０ｒｐｍで攪拌した。開始後５時間目に１０１の滅
菌水に溶解したペニシリンＧをＩＯＵ、＃の濃度となる
ように添加した。さらに５時間の反応を続けた後、反応
液を毎時１００１の速度で３１．５℃に保温した滞溜管
に通した。その後、１０℃の液温になるまで熱交換器を
通過させることにより冷却し、ウエストファリャー社製
連続型遠心分離機に導いた。９：１のｉｎ比となるよう
に菌体を含まない軽液と菌体を含んだＭＷ、とに別け、
重液は反応槽に戻し、軽液は中和晶析槽へ入れた。グル
コース１５０９Ａ 、 ＫＨ２ＰＯ４１１／ｌ、大豆蛋
白酸加水分解物５ｍ４／ｌ 、ビオチン３００ μ９／
ｌ −ＭｇＳＯ４４ａｑ ＩＶＡ！、ペニシリンＧ １
０ ＵＡｌを含む基質溶液を毎時９０１の速度で連続的
に供給し、反応槽内の液量を一定に保った。この培養を
４８時間続けた後、反応槽内の培養液も含め中和晶析槽
へ送り、全部で５３００１のＬ−グルタミン酸含有液を
得た。この液よりＬ−グルタミン酸５１５ ｋｆを得た
。
ＭｇＳＯ４−７ａｑＯ，４１／／ｌ 、尿素４１１／ｌ
、Ｆ１１ＳＯ４・７ａｑ ２０ ”９／１３、ＭｎＳ
Ｏ４・４ａｑ ２０１ｎ９／ｌ 、大豆蛋白酸加水分解
物５ｎ＋￥ｌ、ビオチン３００μＶｌｊを含む培ｊｌｉ
ｌ、 ５０１をＳｏｌ容小型発酵槽に入れ、１２０℃、
１０分加熱滅菌した。冷却後、コリネバクテリウム・グ
ルタミクムＡＴＣＣｌ ３０３２を撤種し、２４時間３
１．５℃にて池培養した。この種培養液５０１をグルコ
ース１００ｊＪ／ｌ） 、 ＫＨ２ＰＯ４１１／ｌ、大
豆蛋白酸加水分解物２０ψｔ、ビオチン３００ Ａ’ｊ
ｉ／ｌ 、Ｍｇ５Ｏ４Ｈ７ａｑ ＩＪｉ’／Ａ’を含む
基質溶液９５０１を予め滅菌した１、 ５ ｋｌ容反応
槽に入れ、３１．５℃に保温した。除菌空気を毎分１ｋ
１通気し、−をＮＨ３がスにて７．５に保つようにして
２５０ｒｐｍで攪拌した。開始後５時間目に１０１の滅
菌水に溶解したペニシリンＧをＩＯＵ、＃の濃度となる
ように添加した。さらに５時間の反応を続けた後、反応
液を毎時１００１の速度で３１．５℃に保温した滞溜管
に通した。その後、１０℃の液温になるまで熱交換器を
通過させることにより冷却し、ウエストファリャー社製
連続型遠心分離機に導いた。９：１のｉｎ比となるよう
に菌体を含まない軽液と菌体を含んだＭＷ、とに別け、
重液は反応槽に戻し、軽液は中和晶析槽へ入れた。グル
コース１５０９Ａ 、 ＫＨ２ＰＯ４１１／ｌ、大豆蛋
白酸加水分解物５ｍ４／ｌ 、ビオチン３００ μ９／
ｌ −ＭｇＳＯ４４ａｑ ＩＶＡ！、ペニシリンＧ １
０ ＵＡｌを含む基質溶液を毎時９０１の速度で連続的
に供給し、反応槽内の液量を一定に保った。この培養を
４８時間続けた後、反応槽内の培養液も含め中和晶析槽
へ送り、全部で５３００１のＬ−グルタミン酸含有液を
得た。この液よりＬ−グルタミン酸５１５ ｋｆを得た
。
一方、同様に調製した種培養液５０１にグルコース１０
０ ｇ／ｌ 、 ＫＨ２ＰＯ４１１／／ｌ 、大豆蛋白
酸加水分解物２０ ｍＶｌ 、ビオチン３００ μｊｉ
／ｌ、ｂ’１ｇ５Ｏａ ・７ａ ｑｌ ９／ｌを含む基
質溶液９５０１を予め滅菌した１、５Ｊ’容反応槽に入
れ、３１．５℃に保温した。除菌空気を毎分１ ｋ１通
気し、ｐＨｆ ＮＨ，ガスにて７．５に保つようにして
２５ Ｑ ｒｐｍで攪拌した。Ｖ；；ｉ始後５時間目に
１０１の滅菌水（で溶解した被ニジリンＧをｌ Ｑ Ｕ
Ａｌの濃度になるように徐Ｕｌｊ した。さらに５時間
反応させた後今度は反尾液を反尾モ１外にとり出すこと
なく、グルコース５ （１０＆／ｌ、ＫＨ２１’ｏ４１
９／ｌ、大豆蛋白酸カロ水分解物５ｍｌ／ｌ、ビオチン
３００ μｌｌ／ｌ 、 ＭｇＳＯ４・７ａｑ １ｊＪ
／ｌ！、被ニジリンＧ １０ Ｕ７ｆｎｔを含む基負浴
Ａｋを毎時１５ ｋｌずつ連続的に供給し、４８時１…
寸で反応を続けた。その結果１５５０１ｑＯＬ−グルタ
ミン；１管を言む反応イ運をイミｔ、この反応液よりＬ
−グルタミン酸を１９２ｋＩＩ得た。
０ ｇ／ｌ 、 ＫＨ２ＰＯ４１１／／ｌ 、大豆蛋白
酸加水分解物２０ ｍＶｌ 、ビオチン３００ μｊｉ
／ｌ、ｂ’１ｇ５Ｏａ ・７ａ ｑｌ ９／ｌを含む基
質溶液９５０１を予め滅菌した１、５Ｊ’容反応槽に入
れ、３１．５℃に保温した。除菌空気を毎分１ ｋ１通
気し、ｐＨｆ ＮＨ，ガスにて７．５に保つようにして
２５ Ｑ ｒｐｍで攪拌した。Ｖ；；ｉ始後５時間目に
１０１の滅菌水（で溶解した被ニジリンＧをｌ Ｑ Ｕ
Ａｌの濃度になるように徐Ｕｌｊ した。さらに５時間
反応させた後今度は反尾液を反尾モ１外にとり出すこと
なく、グルコース５ （１０＆／ｌ、ＫＨ２１’ｏ４１
９／ｌ、大豆蛋白酸カロ水分解物５ｍｌ／ｌ、ビオチン
３００ μｌｌ／ｌ 、 ＭｇＳＯ４・７ａｑ １ｊＪ
／ｌ！、被ニジリンＧ １０ Ｕ７ｆｎｔを含む基負浴
Ａｋを毎時１５ ｋｌずつ連続的に供給し、４８時１…
寸で反応を続けた。その結果１５５０１ｑＯＬ−グルタ
ミン；１管を言む反応イ運をイミｔ、この反応液よりＬ
−グルタミン酸を１９２ｋＩＩ得た。
本発明の方法により、Ｌ−グルタミン酸を高い生産速度
で連続生産することができる。また、廃菌体の排出量が
少ないことからその処理の手間及びコストを節減できる
。連続生産方式の採用によシ労力負担を低下させるとと
もに装置の効率的利用を可能にしコストを全体として大
巾に低下させることができる。
で連続生産することができる。また、廃菌体の排出量が
少ないことからその処理の手間及びコストを節減できる
。連続生産方式の採用によシ労力負担を低下させるとと
もに装置の効率的利用を可能にしコストを全体として大
巾に低下させることができる。
第１図は本発明の方法に使用される装置の一例の概要を
示すフローシートである。
示すフローシートである。
Claims (2)
- （１）少なくとも反応槽、該反応槽に接続されそこから
排出される反応液を菌体分離する菌体分離装置、該菌体
分離装置に接続されそこから排出される上清液からＬ−
グルタミン酸を分離するグルタミン酸分離装置及び前記
菌体分離装置から排出される菌体液を前記反応槽に戻す
配管とを有する装置を用い、 前記反応槽にＬ−グルタミン酸生産菌及びその基質溶液
を入れてＬ−グルタミン酸生成反応を行なわせ、 該反応槽内の反応液の一部を抜き出して前記菌体分離装
置で菌体分離し、 分離された菌体液は前記反応槽内に返送し、一方、菌体
を分離した上清液は前記グルタミン酸分離装置に送って
そこでＬ−グルタミン酸を分離し、 前記反応槽には基質溶液を供給補充して反応を継続させ
、 上記の各操作を連続的又は間欠的に繰り返すことよりな
る発酵法によるＬ−グルタミン酸の製造方法 - （２）反応槽と菌体分離装置の間に中間槽を設け、反応
槽から抜き出された反応液をそこでさらに反応させて残
存している基質を資化させた後菌体分離装置で菌体分離
する特許請求の範囲第１項記載の製造方法
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60186453A JPH0636746B2 (ja) | 1985-08-24 | 1985-08-24 | Ｌ―グルタミン酸の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60186453A JPH0636746B2 (ja) | 1985-08-24 | 1985-08-24 | Ｌ―グルタミン酸の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6248394A true JPS6248394A (ja) | 1987-03-03 |
| JPH0636746B2 JPH0636746B2 (ja) | 1994-05-18 |
Family
ID=16188721
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60186453A Expired - Lifetime JPH0636746B2 (ja) | 1985-08-24 | 1985-08-24 | Ｌ―グルタミン酸の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0636746B2 (ja) |
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01503119A (ja) * | 1987-04-29 | 1989-10-26 | インスティテュト ベルカ ロシイスコイ アカデミイ ナウク | 無細胞翻訳系においてポリペプチドを製造する方法 |
| FR2667076A1 (fr) * | 1990-09-21 | 1992-03-27 | Ajinomoto Kk | Procede et appareil pour la fabrication d'un aminoacide par fermentation. |
| WO2005005649A1 (ja) * | 2003-07-09 | 2005-01-20 | Mitsubishi Chemical Corporation | 有機酸の製造方法 |
| WO2005014840A1 (en) * | 2003-08-01 | 2005-02-17 | Degussa Ag | Process for the preparation of l-threonine |
| JP2009136246A (ja) * | 2007-12-10 | 2009-06-25 | Hitachi Plant Technologies Ltd | 細胞分離装置、培養装置及び細胞分離方法 |
| US7563606B2 (en) | 2003-09-17 | 2009-07-21 | Mitsubishi Chemical Corporation | Method for producing non-amino organic acid |
| US7763447B2 (en) | 2003-08-28 | 2010-07-27 | Ajinomoto Co., Inc. | Method of producing succinic acid with bacterium comprising a modified fumarate reductase gene or a modified succinate dehydrogenase gene |
| US7829316B2 (en) | 2005-10-18 | 2010-11-09 | Ajinomoto Co., Inc. | Process for production of succinic acid |
| US7972823B2 (en) | 2004-05-20 | 2011-07-05 | Ajinomoto Co., Inc. | Succinic acid-producing bacterium and process for producing succinic acid |
| US7993888B2 (en) | 2006-02-24 | 2011-08-09 | Mitsubishi Chemical Corporation | Bacterium having enhanced 2-oxoglutarate dehydrogenase activity |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5524876A (en) * | 1978-08-11 | 1980-02-22 | Nippon Koki Kk | Reinforcing device for thin wall metal pipe |
| EP0139592A2 (fr) * | 1983-10-27 | 1985-05-02 | Les Produits Organiques Du Santerre Orsan | Procédé et installation de production d'amino-acides par fermentation |
-
1985
- 1985-08-24 JP JP60186453A patent/JPH0636746B2/ja not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5524876A (en) * | 1978-08-11 | 1980-02-22 | Nippon Koki Kk | Reinforcing device for thin wall metal pipe |
| EP0139592A2 (fr) * | 1983-10-27 | 1985-05-02 | Les Produits Organiques Du Santerre Orsan | Procédé et installation de production d'amino-acides par fermentation |
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| US5260216A (en) * | 1990-09-21 | 1993-11-09 | Ajinomoto Co., Inc. | Apparatus for amino acid fermentation |
| BE1006589A3 (fr) * | 1990-09-21 | 1994-10-25 | Ajinomoto Kk | Procede et appareil pour produire un acide amine par fermentation. |
| US7833763B2 (en) | 2003-07-09 | 2010-11-16 | Mitsubishi Chemical Corporation | Method for producing organic acid |
| WO2005005649A1 (ja) * | 2003-07-09 | 2005-01-20 | Mitsubishi Chemical Corporation | 有機酸の製造方法 |
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| JP2009136246A (ja) * | 2007-12-10 | 2009-06-25 | Hitachi Plant Technologies Ltd | 細胞分離装置、培養装置及び細胞分離方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0636746B2 (ja) | 1994-05-18 |
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