JPS6247535A - 偏倚乾式分析要素を用いた液体試料中の被検物質の定量分析方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［発明の分！’ｆＪ 未発明は、反射光学濃度値と物質濃度値との対応関係の
補正方法に関する。さらに詳しくは本発明は、液体試料
を点着した乾式分析要素の反射光学濃度から液体試料中
の被検物質濃度を求める際に使用する１反射光字源度値
と物質濃度値との対応関係の補正方法に関する。

［発明の背景］ 液体試料中の物質濃度を測定する方法としては、従来よ
り希釈水溶液中での均一反応と透Ｗ、光学系を基本とす
る通常の溶液反応方式が用いられてきた。

一方、臨床検査の領域において診断に関与する医師等の
医療関係名から簡便な操作による迅速な測定方法を求め
る強い要請がある。

これに答える方向として　従来の溶液反応方式に代えて
、反射光学系を基本とする乾式分析方法が開発され、近
年その実用化が進められている。

上記乾式分析方法は、検出反応に必要な試薬類が転帰状
態でシート状の要素内に保存されている乾式分析要素を
使用するものである。特に上記乾式分析要素のうち、取
り扱いが容易で分析精度がさらに向上した、構成成分の
多層塗布を特徴とする一体型多層分析要素は、様々な種
類のものが既に市販されている。

乾式分析要素を用いた液体試料中の被検物質（アナライ
ト）の測定においては、一般に被検物質と乾式分析要素
中の試薬類との反応により生成した染料を反射光学濃度
として検出、測定する。

測定した反射光学濃度値から上記液体試料中の被検物質
濃度値を求める際には１反射光字源度値と物質濃度値と
の対応関係を検ぜ線または関係式等を用いて明らかにし
ておく必要がある。Ｊ：記対応関係には透過光学系にお
けるベールの法則の適用が困難であるため、各種の乾式
分析要素についてそれぞれの対応関係を求める必要があ
る。

上記対応関係は、測定において必須であるばかりでなく
、測定精度に重大な影響を及ぼす原因の一つとなる。よ
って、乾式分析要素が光、熱、湿気、その他の環境条件
により変質した場合、あるいは製造時におけるロットの
違いによって乾式分析要素の感度が若干異なる場合等、
同一の構成を有する乾式分析要素の間においても、それ
ぞれの対応関係を求める必要があった。

上記のような場合においては、それぞれの対応関係を別
個に求める方法よりも、対応関係が既に求められている
乾式分析要素（以下、標準乾式分析要素と記す）の対応
関係を補正することによって、標準乾式分析要素と同一
の構成を有し感度が相違する他の乾式分析要素（以下、
特定乾式分析要素と記す）における対応関係を得る方法
がより簡易であることは明らかである。

対応関係の補正方法の例としては、特開昭５８−１０９
８３７号公報に記載の検量線補正方法がある。この補正
方法は、ｉ′少く共１つの濃度既知の試料の吸光度を測
定し、この測定した吸光度と予じめ求めた検量線から当
該濃度に対して得られる吸光度に基いて検量線を補正す
るｊものであも実施が可能であるという、補正方法とし
ても最も簡易なものである。

しかし、上記補正方法は、実質的には溶液中の吸光度を
対象とする透過光学系への適用を意図するものである。

従って必然的に溶液等の透過濃度（＝吸光度）の測定を
前提する。ゆえに、　４１１１１定偵である反射光学濃
度値が上記吸光度と一致しない反射光学系に適用するこ
とはできない０反射光学系においては、反射光学濃度値
から吸光度を求めることは極めて難しく、上記方法を適
用することは実質的に不可能に近い、実際に反射光学濃
度値と物質濃度値との対応関係に上記公報記載の二種の
実施例を適用してみても、いずれの補正方法により得ら
れた対応関係も実用的な定量性を示すことがなく、分析
精度の点で満足できるものとはいえない。

すなわち、反射光学濃度値と物質濃度値との対応関係は
、前述したようにベールの法則が成立しないため、検量
線として表す場合には、一般に４社の填１■に１粍と１
．て示すような曲ｑンなる。

第１］４は、グルコース分析用一体型多層分析要素にお
いて、血清中のグルコース埴および反射光学濃度値の関
係を示す図である。第１Ｕ２において、実線は、標準乾
式分析要素を示し、点線は、特定乾式分析要素を示す、
標準乾式分析要素の検量線と特定乾式分析要素の検量線
との関係を、第１図のようなグラフから読み取ることが
、一般に困難であることは明らかである。

また、土兄対応関係を相関式として表わした場合には、
その相関式は複雑なパラメーターが関与する式となる。

標準乾式分析要素の相関式を特定乾式分析要素の相関式
に補正する場合には、従来は上記複数のパラメーターの
うち、いずれが変動したのかを明確にする必要があった
為、補正の実施は困難であった。

［発明の要旨］ 本発明者が各種の乾式分析要素について様々な実験を行
なったところ、乾式分析要素が環境条件により変質した
場合あるいは製造時におけるロットが異なる場合等にお
いて、同一の構成を有し感度が相違する乾式分析要素が
示す反射光学濃度和ｍの間には、−次の強い相関関係が
成立することが明らかとなった。

本発明の目的は１分析績度の点で充分な信頼性が得られ
ると同時に簡易な、反射光学濃度値と物質濃度値との対
応関係の補正方法を提供す゛ることにある。

本発明は、液体試料を点着した乾式分析要素の反射光学
濃度から上記液体試料中の被検物質濃度を求める際に使
用する反射光学濃度値と物質濃度値との対応関係に関し
、標準乾式分析要素における対応関係（１）を上記標準
乾式分析要素と同一、の構成を有し感度が相違する特定
乾式分析要素における対応関係（２）に補正する方法に
おいて、（Ｉ）特定乾式分析要素の被検物質を異なる既
知濃度で含む工具上の標準溶液を用いて、これらの溶液
を点着した上記特定乾式分析要素の反射光学濃度値を測
定する工程； （ＩＩ）上記工具上の標準溶液を点着した場合における
標準乾式分析要素の反射光学濃度値を、上記対応関係（
１）を用いて求めるか、または測定により得る工程：お
よび、 （ｍ）上記（１）および（ＩＩ　）における結果を基に
、上記標準乾式分析要素の反射光学濃度値と上記特定乾
式分析要素の反射光学濃度値との対応関係（３）を−次
関故として求め、上記対応関係（３）を用いて上記対応
関係（１）を補正することで上記対応関係（２）を得る
工程： よりなることを特徴とする反射光学濃度値と物質濃度値
との対応関係の補正方法を提供するものである。

［発明の効果］ 本発明の補正方法は、同一の構成を有し感度が相違する
乾式分析要素が示す反射光学濃度相互の間には一次の強
い相関関係が成立するという事実に基くものである。よ
って本発明の補正方法により得られる新たな対応関係の
信頼性は非常に高いものとなる。このため実際の測定に
おいても実用的な定量性を示し、分析精度の点で満足で
きる結また本発明の補正方法は、標準乾式分析要素にお
ける反射光学濃度値と物質濃度値との対応関係が、検量
線として難解な曲線、あるいは相関式として複雑な式で
表されていても、標準乾式分析要素の反射光学濃度値と
特定乾式分析要素の反射光学濃度値との対応関係が単純
な一次関数として示されるため、その補正は容易に実施
することができる。

さらに、本発明の補正方法では、測定の実施が必須であ
る場合は上記（Ｉ）の工程における工具上の標準溶液を
点着した特定乾式分析要素の反射光学濃度値の測定のみ
であり、他の工程はマイクロコンピュータ−等を用いて
自動的に処理することが可能である。よって本発明の補
正方法は、簡易かつ迅速に実施することができる。また
本９３男の実施において使用する標準溶液も被検物質濃
度が異なるものを二種類？Ｐ−備するだけで充分である
ため、これらの準備に要する手間および経済性の点でも
有利である。

［発明の詳細な説明コ 本発明に使用する乾式分析要素は、反射光学系を利用す
るものであれば特に他の制限はなく、公知のものを用い
ることができる。乾式分析要素の具体例としては、一体
型多層分析要素として、米国イーストマン拳コダック社
よりエクタヶム、富士写真フィルム株式会社よりドライ
ヶムの商品名でそれぞれ市販されているものを挙げるこ
とができる。

乾式分析要素の検査項目としては、液体試料中のグルコ
ース、総蛋白量、尿素窒素（ＢＵＮ）。

ヒＩＪルピン等の物質濃度およびアミラーゼ、アルカリ
性フォスファターゼ等の酵素活性値に関する様々な種類
の項目が既に発表、市販されており、本発明の補正方法
はこれら全ての項目の測定について適用することができ
る。

本発明において液体試料またはＰ：Ａ？ｉ！溶液を点着
した乾式分析要素の反射光学濃度の測定は、上記各種の
乾式分析要素の使用方法に準じて実施する０例えば、一
体型多層分析要素においては、液体試料を一体型多層分
析要素の展開層上に点若シ、一定時間インキユベーショ
ンしたのち透明支持体の下側から反射法で測定する。

測定された反射光学濃度値を物質濃度値に変換する際に
使用する両者の対応関係は、一般に検量線および／また
は関係式を用いて表される。検量線は両者の関係を視覚
的に把握できるためその関係を理解、検討するうえで有
利であるが、マクロコンピューター等を用いて自動的に
処理する場合には一般に関係式として上記対応関係を表
すほうが好ましい、関係式の形式には特に制限はない。

例えば、液体試料中の被検物質濃度（［Ｃ］　）を乾式
分析要素の反射光学濃度（［ＯＤ］　）の関数として下
記のように表すことができる。

［Ｃ］　＝　ｆ　（（００］　） これらの対応関係は一般に各乾式分析要素の作成時にお
いて、様々な被検物質濃度を有する標準溶液を用いた厳
密な測定および検査に基づき正確な対応関係として求め
られている０本発明において「標準乾式分析要素」とは
、上記のように対応関係が既に求められている乾式分析
要素を意味する。

本発明におけるｒ標準乾式分析要素と同一の構成を有し
感度が相違する特定乾式分析要素Ｊとは、標準乾式分析
要素が保存中に変質したもの（例、カブリを生じた場合
）あるいは製造時のロットが若干界なるもの等、基本的
な構成（例えば一体型多層分析要素における層構成およ
びその配列順序）や重要な構成成分（例、検出反応にＩ
ｉ接関亭する試薬類）は標準乾式分析要素と同一である
が、他の要件が乾式分析要素の感度に関して一部異なる
ものを意味する。またｅ′Ａ市乾式分析要素と特定乾式
分析要素とは同一の被検物質を検査項目とするものであ
ることが好ましい。

以下本発明の（１）〜（ＩＩＩ）の工程について順次説
明する。

（Ｉ）の工程において、特定乾式分析要素の被検物質を
含む標準溶液は、粘度等の条件が液体試料に類似するよ
うに調製することが好ましい、特に液体試料が全血、血
清等の生体液である場合には、市販の標準液（血清にお
いてはモニトロール、パーサトール等）を利用すること
が好ましい、標準溶液中の被検物質濃度は、調製時にお
いて計算するかまたは溶液法等の他の方法を用いて測定
することで正確に決定されていなければならない。

本発明は被検物質を異なる濃度で含む二つの標準溶液を
使用すれば実施が可能であるが、補正後の相関関係の信
頼性をさらに向上させるため玉量上の標準溶液を使用し
てもよい。

また得られる反射光学濃度値の信頼性を向上させるため
、各ｊ２？Ｐ−溶液を特定乾式分析要素に点着する場合
に同一の標準溶液を工具上の特定乾式分析要素に点着し
てもよい、この場合においては、得られる工具上の反射
光学濃度値の平均値をその標準溶液に対応する反射光学
濃度値とすることができる。

（ＩＩ　）の工程において求められる。工具上の標準溶
液を点着した場合におけるＰＡ９−乾式分析要素の反射
光学濃度値は、実測値であっても理論値であってもよい
、ただし前述したように標べち乾式分析要素の対ｒｊＳ
関係は既に求められており、かつ一般にその信頼性は高
いため、その対応関係を用いて理論的に算出するほうが
より簡易であり好ましい。

（ＩＩ［）の工程においては第一に、（１）および（Ｉ
Ｉ　）における結果、すなわち工具上の標準溶液に対応
する特定乾式分析要素および標準乾式分析要素の反射光
学濃度値を用いて、標準乾式分析要素の反射光学濃度値
（００ｓ）と特定乾式分析要素の反射光学０度値（ＯＤ
ｍ）との対応関係を一次関数として求める。上記−次関
数としては、（ＯＤ　ｍ）を（ＯＤｓ）の関数としても
その逆であってもよく、数値処理上の観点を除くと実質
的な差異はない、ただし以下の説明においては。

（ＯＤＤ）を（ＯＤｍ）の−次関数として下記のように
表す。

［ＯＤｓ］　＝ａ　［ＯＤｍｌ　＋ｂ 具体的には、上記（Ｉ）および（ＩＩ　）の工程が被検
物質を異なる濃度で含む二つの標準溶液（Ａ）および（
Ｂ）について実施された場合。

（Ａ）に対応するＰ：Ａ陽転式分析要素の反射光学ｆ度
値（ＯＤ　ｓＡ）と特定乾式分析要素の反射光学濃度値
（ＯＤ　ｍＡ）および同様に（Ｂ）に対応する（　ＯＤ
　ｓＢ）と（ＯＤ　＋ｓＢ）を用いて下記の連立方程式
を作成する。

［０ＤｓＡ］　−ａ　［０ＤｓＡ］　＋　ｂ［０ＤｓＢ
］　＝　ａ　［０ＤｓＢ］　＋　ｂ上記連立方程式の解
として、上記−次［ＡＩ数におけるａおよびｂの値を得
ることができる。

また（ｆ）および（ＩＩ）の工程が、玉量上の標準溶液
について実施された場合には、最小二乗法等の数値処理
方法を用いてａおよびｂの値を得ることもできる。

さらに（ＯＤｓ）と（ＯＤ　ｍ）の関係を表わすグラフ
を作成し、上記のように得られた値をグラフ上の工具上
の点として表し、そして各点を結ぶ線を一木の直線とし
て近似することにより、上記ａおよびｂの値を求めるこ
ともできる。

最後に５以上のようにして得られた一次関数を用いて標
準乾式分析要素における対応関係を補正して特定乾式分
析要素における対応関係を得る。具体的には、上記標準
乾式分析要素における対応関係として、液体試料中の被
検物Ｉｆ！Ｉ濃度（［Ｃ］）が標準乾式分析要素の反射
光学濃度（［００５］）の関数を用いて下記のように表
されている場合には、 ［Ｃ］　＝ｆ　（［０Ｄｓｌ） 特定乾式分析要素における対応関係を表す下記の関数は
。

［Ｃ］　＝　ｇ　（［ＯＤｍｌ　） 上記標準乾式分析要素における関数に得られた下記の一
次関数を代入することで、 ［ＯＤｓ］　＝ａ　［ＯＤｍｌ　＋ｂ ｆ記の式として容易に得ることができる。

［Ｃ］　＝　ｇ　（［ＯＤｍｌ　） ＝ｆ　（ａ　［ＯＤｍｌ　＋ｂ）） 以下１本発明の補正方法を、実施例を用いてさらに詳細
に説明するが１本発明はこれに限定されるものではない
。

［実施例１］ グルコース定量用一体型多層分析要素（特開昭５９−２
０８５３号公報記載の実施例１と同様にして調製した）
を収めたグルコース分析スライドを温度３０°Ｃ１相対
湿度７０％の環境条件下で２４時間放置してこのスライ
ドを変質させた。変質の程度は液体試料の未着状態にお
ける反射光学濃度を測定することで確認した。液体試料
未着状態において、未変質のスライドの反射光学濃度は
０．２２１を示したのに対して、変質したスライドの反
射光学濃度は０．２５０であった。

ついでグルコースＢ　Ｊｆ　カ、５０〜６００ｍｇ／ｄ
交の範囲で異なる試料４点を用意し、変質させたスライ
ドおよび未変質のスライドのそれぞれに点着し、反射光
学濃度を測定した。測定結果を添付の第２図に示す、第
２図は、横軸を未変質のスライドの反射光学濃度値、縦
軸を変質したスライドの反射光学濃度値としてプロット
したものである。第２図より未変質のスライドの反射光
学濃度値（Ｘ）と変質したスライドの反射光学濃度値（
Ｙ）との対応関係を表す下記の一次関数が得られた。

Ｙ＝Ｏ−７２４Ｘ＋０．１８７ ｒ＝０．９９６ Ｎ＝４ 上記結果より明らかなように対応関係として良好な直線
関係が得られた。

さらに変質したスライドにグルコース濃度が未知の試料
４点を点着し、それぞれの反射光学濃度値を測定した。

上記反射光学濃度値を上記−次間数として示した対応関
係を用いて、未変質のスライドにおける反射光学濃度値
に較正し、その（ａから未変質のスライドにおける反射
光学濃度値とグルコース濃度値の対応関係を利用してグ
ルコース濃度を求めた（１）、また上記変換を行なわず
に変質したスライドにおける反射光学濃度値から上記未
変質のスライドにおける対応関係を用いて直接グルコー
ス濃度値を求めた（２）０以上の結果を溶液法であるヘ
キシキナーゼ法を用いて得られた値（３）と共に第１表
に示す。

第１表 試料　　　得られたグルコース濃度 Ｎｏ、　　　（１）　　　　　（２）　　　　　（３）
第１表より明らかなように、本発明の補正方法を用いて
得られたグルコース濃度（１）は、　、Ｗｅ法であるヘ
キソキナーゼ法の値（３）とよく一致した。

［実施例２］ 製造時のロットが異なる２種のグルコーススライド（ロ
ッ）Ｎｏ、１および２）を用いて実施例１と同様にグル
コース濃度の異なる試料５点を点着し１反射光字源度を
測定した。測定結果を第３図に示す、第３図は、横軸を
ロッ）Ｎｏ、１のスラ・イドの反射光学濃度値、縦軸を
ロッ）Ｎｏ、２のスライドの反射光学濃度値としてプロ
ットしたものである。第３図よりロフトＮｏ、１のスラ
イドの反射光学濃度値（Ｘ）とロフトＮｏ　、２のスラ
イドの反射光学濃度値（Ｙ）との対応関係を表す下記の
一次関数が得られた。

Ｙ＝　ｌ　、１７５Ｘ−０，０７４ ｒ＝０．９８９ Ｎ＝５ 上記結果より明らかなように対応関係として良好な直線
関係が得られた。

ざらにロア　トＮｏ　、　２のスライドにグルコース濃
度が未知の試料４点を点着し、それぞれの反射光学濃度
値を測定した。上記反射光学濃度値を上記−次間数とし
て示した対応関係を用いて、ロフトＮｏ、ｆのスライド
における反射光学濃度値に較正し、その値からロットＮ
ｏ、１のスライドにおける反射光学濃度値とグルコース
濃度値の対応関係を利用してグルコース濃度を求めた（
４）。

−ｊ−＋＋Ｌｆｌ＋亦＋ｐ＠ｆ−’＞５Ｔｈｋ−Ｊ”ｌ
”　Ｍ　−Ｌ　ｋＴ　−１’）＋ｗライドにおける反射
光学濃度値から上記ロフトＮｏ、ｌのスライドにおける
対応関係を用いて直接グルコース濃度値を求めた（５）
０以上の結果を溶液法であるヘキシキナーゼ法を用いて
得られた値（６）と共にｍ２表に示す。

第２表 試料　　　得られたグルコース濃度 Ｎｏ、　　　（４）　　　　　（５）　　　　　（６）
第２表より明らかなように１本発明の補正方法を用いて
得られたグルコース濃度（４）は、基牛法であるヘキシ
キナーゼ法の値（６）とよく一致した。

〔実施例３］ ニトロセルロース下塗りが施されている厚さ１８０　ｇ
ｍの無色透明ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）フ
ィルム上に下記の組成の塗布液を乾燥膜厚が４０ｐｍに
なるように塗布、乾燥して試薬層とした。

試薬層□・冷液の組成： 水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　６００
　ｇポリオキシエチレン ラウリルエーテル 硫酸ナトリウム ５０％水溶液　　　　　　　４０ｇ 酒石酎　　　　　　　　　　　１００ｇ硫酸銅・５水塩
　　　　　　　１５０ｇ酒石酸ナトリウム　　　　　　
　１５ｇＬｉｏＨ・Ｈ２Ｏ２００ｇ アクリルアミド・ ビニルピロリドン （１：　１）共重合物 ２０％水溶液　　　　　２０００ｇ 次に試薬層に水を供給して、湿潤させたのち、ポリエス
テル（ＰＥＴ）紡績糸（糸の大さ１００Ｓ相当）製トリ
コー２ト編み生地（厚さ、２００ｇｍ）を圧着ラミネー
トして展開層とした０以上のようにして、総蛋白定量用
一体型多層分析要素を作成した。

上記一体型多層分析要素を１５ｍｍＸ　ｌ　５ｍｍの正
方形のチップとしたのち、プラスチック製マウント（特
開昭５７−６３４５２号公報に開示のもの）に収めて総
蛋白定量用化学分析スライドを完成した。

上、記スライドを二枚用意し、そのうちの一枚（Ｂ）を
温度２５℃、相対湿度５０％の環境条件下で７日間放置
し、別の一枚（Ｃ）を温度２５°Ｃ１相対湿度７０％の
環境条件下で１４日間放置して、それぞれ変質させた。

上記のように変質した二枚のスライドおよび製造直後の
未変質のスライド（Ａ）の展開層上に、総蛋白量が異な
る各種ヒト血清を１０牌交点着し、３７℃で６分間イン
キュベーションしたのち１、中心波長５４０ｎｍの測定
光で反射光学濃度を測定した。測定結果を第３表に示す
。

第３表 スライドＡ　　スライドＢ　　スライドＣ零　　〇、５
４５　　　　０．５２５　　　　０．５０３０．８５７
　　０．８２３　　０．７４５１．０４１　　０．９８
０　　０．８７７１．１６９　　１．０９３　　０．９
６１上記第３表において、木印を付した行は、液体未点
若状態での反射光学濃度値（カブリ濃度値）を示すもの
である。

上記第３表の結果をグラフとして添付の第４図に示す、
第４図は、横軸を未変質のスライド（Ａ）の反射光学濃
度値、縦軸を変質したスライドＣＢ）および（Ｃ）の反
射光学濃度値としてプロットしたものである。

第４図より明らかなように、総蛋白定量用一体型多層分
析要素においても、対応関係として良好な直線関係が得
られた。

［実施例４］ 厚さ１８０　ｇｍの無色透明ポリエチレンテレフタレー
）　（ＰＥＴ）フィルム上に下記の組成の塗布液を乾燥
膜厚が１０ｐｍになるように塗布、乾燥して指示薬層と
した。

指示薬層・冷液の組成ニ ブロムクレゾール グリーン　　　　　　　２４０ｍｇ 酢酸ビニル・ アクリル酸エステル 共重合体水性ラテックス （固形分含有量的５０％、 ｐＨ４、４。

ダイセル株製）　　　　　　２０ｇ ３．３−ジメチルグルタル酸　　　８０ｍｇ水　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　８ｍ交乾爆後
、粘着性を有する上記指示薬層に下記の撥水処理したメ
ンブランフィルタを圧着ラミネ−トして液体遮断層を設
けた。

撥水　　　メンブランフィルタの調製：セルロースジア
セテートからなる最小孔径３　、０　ｇｍ、空孔率７５
％、厚さ１４０ｇｍのメンブランフィルタをシリコーン
樹脂のへキサン溶液に浸漬し、乾燥させた。

上記液体遮断層上に、下記のように調製された塗布液を
順次、塗布、乾燥して、ウレアーゼ含有試薬層、光反射
層、および接着層を形成した。

ウレアーゼ含有試薬層、′ｌｒ１液の調製：ゼラチン　
　　　　　　　　　　１０ｇ水　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　１００ｍ文ｐ−ノニルフェノキシ ポリグリシドール　　　０　、３０ｇ ウレアーゼ　　　　　　　　０．８ｇ エチレンジアミンテトラ酢酸・ 四ナトリウム塩　　　　０．４ｇ 上記溶液をオルト燐酸二ナトリウムおよび水酸化ナトリ
ウムでｐＨ８に調整した。

光　射層　希液の組成： ＴｉＯ２微粉末　　　　　　　　　４ｇゼラチン　　　
　　　　　　　　　４ｇｐ−ノニルフェノキシ ポリグリシドール　　　０．１５ｇ 水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　４０ｍ
交接着層、・希液の組成： ゼラチン　　　　　　　　　　２．５ｇ水　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　５０ｍ交ｐ−ノニルフ
ェノキシ ポリグリシドール　　　０．１５ｇ 次に接着層表面を水で膨潤させたのち、展開層ノ１ｒＪ
（ツー２トンブロー１１００番、厚さ約１５０ｇｍ）を
圧着ラミネートして展開層とした０以上のようにして、
尿素窒素（Ｂ　Ｕ　Ｎ）定量用一体型多層分析要素を作
成した。

上記一体型多層分析要素を正方形のチップとしたのち、
プラスチック製マウントに収めてＢＵＮ定量用化学分析
スライドを完成した。

上記スライドを三枚用意し、各スライドを温度２５℃、
相対湿度７０％の環境条件下で、３日間（Ｅ）、５日間
（Ｆ）および１０日間（Ｇ）それぞれ放置して、変質さ
せた。上記のように変質した三枚のスライドおよび製造
直後の未変質のスライド（Ｄ）の展開層上に、尿素含有
量が異なる各種ヒト血清を点着し、インキュベーション
後、それぞれの反射光学濃度を測定した。測定結果を第
４表に示す。

第４表 Ｄ　　　　　Ｅ　　　　　Ｆ　　　　　Ｇ本　　〇、５
３　　　０．４９　　０．４６　　０．４２０．６５　
０．６０　０．５６　０．５１０．７６　０．７０　０
．６４　０．５８０．８６　０．７８　０．７１　０．
６４０．９７　０．８４　０．８０　０．７１１．０５
　０．９４　０．８５　０．７９上記第４表において、
木印を付した行は、液体未点着状態での反射光学濃度値
（カブリ濃度値）を示すものである。

上記の測定結果を、グラフとして添付の第５図に示す、
第５図は、横軸を未変質のスライド（Ｄ）の反射光学濃
度値、縦軸を変質したスライド（Ｅ）、（Ｆ）およびＣ
Ｇ）の反射光学濃度値としてプロットしたものである。

第５図より明らかなように、ＢＵＮ定量定量体型多層分
析要素においても、変質スライドと未変質スライドの反
射光学濃度値の対応関係として良好な直線関係が得られ
た。

［実施例５］ 実施例４と同様に作成したが、製造時のロフトが異なる
２種のＢＵＮ定量用化学分析スライド（ローｙトＮｏ、
１および２）を用いて実施例４と同様に尿素濃度の異な
る試料を点着し１反射光字源度を測定した。測定結果を
第６図に示す、第６図は、横軸をロッ）Ｎｏ、１のスラ
イドの反射光学濃度値、９軸をロットＮｏ　、２のスラ
イドのｉ射光学濃度値としてプロットしたものである。

第６図より明らかなように、ＢＵＮ定陽用一体型多層分
析要素においても、′！Ａ造時のロットが異なるスライ
ドの反射光学濃度値の対応関係として良好な直線関係が
得られた。

【図面の簡単な説明】

第１図は、グルコース分析用一体型多層分析要素におい
て、面前中のグルコース量および反射光学濃度値の関係
を示す図である。第１図において、実線は、標準乾式分
析要素を示し、点線は。 特定乾式分析要素を示す。 第２図は、実施例１において使用した未変質のグルコー
ス定量用スライドの反射光学濃度値および変質したスラ
イドの反射光学濃度値の関係を示す図である。 第３図は、実施例２において使用したロフトＮｏ、１の
グルコース定量用スライドの反射光学濃度値およびロッ
）Ｎｏ、２のスライドの反射光学濃度値の関係を示す図
である。 第４図は、実施例３において使用した未変質の総蛋白定
醍用スライドの反射光学濃度値および変質したスライド
の反射光学濃度値の関係を示す図である。 第５図は、実施例４において使用した未変質のＢＵＮ定
量用スライドの反射光学濃度値および変質したスライド
の反射光学濃度値の関係を示す図である。 第６図は、実施例５において使用したロフトＮｏ、１の
ＢＵＮ定量用スライドの反射光学濃度およびロツ）Ｎｏ
、２のスライドの反射光学濃度の関係を示す図である。 特許出願人　　富士写真フィルム株式会社代　理　人　
　弁理士　　柳　川　泰　男血清中のグルコース量（ｍ
ｇ／ｄｆｆｉ　）第２図 未変質スライドの反射光学濃度価（ＯＤｑ）第３図 ロントＮｏ、１のスライドの反射光学濃度値（ＯＯＲ）
未変質スライドの反射光学浸度イ直（ＯＣＲ）第５図 未変質スライドの反射光学′ａ度値（ＯＤＲ）第６図 ロットＮ０１１のスライドの反射光学濃度値（ＯＤＦＩ
）「−わ°Ｃネ山ＩＩ三、ｌ−） 昭和６１年１１Ｊ１２６１１ 特、’、’ＬＩ’＋′Ｌせ官　黒ＩＬＩＩＪＩＩ雄　殿
　　　　　　　　　　ｊｉニアｊ１５．＋ １、・１會１の表／ト 昭和６０年　特、；１願　第１８８２２６号２、発ＩＩ
の名称 反射光゛７ｃ度値と物質ｅｌＷ値との対応関係の補１１
力法３、補＋Ｅをする者 ・１１件との関係　　　　　１１作出願人名　称　　（
５２０）富１：写ｆ↓フィルム株式会社４、代理人 住　所　　東京都新宿区四谷２−１４ミツヤ四谷ビル８
階６、貞１ｉ　ｔＨにより増力１ける発１ヌ１の数　　
　　な　し７、　ＪＩｉｌＨノ対象　（１）　ＩＩＩ；
’？（７）　ｒ９．ｌＪノ名称１の欄。 （２）ＩＩＩ細、りの１、明の名称Ｊの欄。 （３）ＩＩ細、１；のｒ４￥許請求の範囲」の欄。 （４）＋３１１細占のｒ発’Ｊｌ（７）ｉｍＡ”Ｑｉｌ
Ｊ　（ｒ）ｕ。 （５）ｌｊＩ細占の１’Ａ面の簡屯な説【Ｊｌ」の欄。 １、願、与の発明の名称の欄を、 「分析要素を用いた液体試ネ１中の被検物質の定量分析
方法」 に補正する。 ２．１１ｊｌｆｌどの発ＩＪＩの名称の欄を。 「分析要素を用いた液体試料中の被検物質の定量分析方
法」 に補正する。 ３、ＩＪＩ細占の特許請求の範囲の欄の記載を別紙のよ
うに補正する。 ４．１ｊＩＢ書の「発［ＪＪの詳細な説ＩＪＩ　Ｊの欄
の記載を下記のように補正する。 （１）す１細８１頁１〜８行（発１５１の分野の記載）
を削除し、下記の記載を加入させる。 ｒ本発明は１分析要素を用いた液体試料中の被検物質の
定量分析方法に関する。さらに詳しくは本発明は、乾式
分析要素内に液体試料を導入し。 その液体試料中の被検物質の存在に起因して分析黄、に
内で発生した発色あるいは色変化を、その反射光学濃度
を測定することにより、液体試料中の被検物質を定！５
分析する方法において、経時的劣化、ロフト差などに起
因して分析特性が標準分析要素から若干変動した分析Ａ
ｉ素を用いたノ↓１合に発生する反射光学濃度値のずれ
を補正して、液体試料中の被検物質の正しい濃度を求め
る方法に関する。Ｊ （２）ＩＩＩ細、！；５頁１１行、および７頁５行、１
１行のｒ４￥定」を「要補正」に変える。 （３）ＩＪＩ細占８頁４行から９頁１１行の記載ｒ本発
ＩＩの［１的は、〜〜〜〜補正方法を提供するものであ
る。Ｊを下記の記載に置き換える。 ｒ本発明の目的は、分析精度の点で充分な信頼性が得ら
れると同時に簡易な、反射光学濃度値と被検物質濃度値
（あるいは被検物質含有量）との対応関係の補正方法を
導入した液体試料中の被検物質の定量分析方法を提供す
ることにある。 本−５′ｉ！！明の定量分析方法は、被検物質に対する
感１キＶ　ｆれ力（をノド　Ｉ−τい　ス　ロ汎１士−
青ξ４）ルリリ上　ン　１司じ構成からなり、そのずれ
が互いに実質的に同じである一組の分析要素から選ばれ
た分析要素に液体試料を付与したのち、該分析要素内で
発生した発色°もしくは色変化を反射測光により測定し
、ｆめ被検物質の含有量と標準分析要素における発色も
しくは色変化との関係を求めて作成しておいた検量線と
対比させることからなる液体試料中の被検物質の定量分
析方法において。 （Ｉ）上記の一組の分析要素から選ばれた二個の分析要
素のそれぞれに、被検物質を圧いに異なる含有量Ｃ１お
よびＣ２にて含有する二種の６僧溶液を付かし、それぞ
れの分析￥素因で発生した発色もしくは色変化を反射測
光により測定して。 それぞれの反射光学濃度ＯＤｘ＋および０Ｄｘ２を求め
る工程； （ＩＩ）被検物質を一定の含有量Ｃｘで含む液体試料を
上記の一組の分析要素に屈する分析要素に付与して、そ
こに発生する発色もしくは色変化を測定して得られる反
射光学濃度ＯＤｘと、被検物質をと記含有賃Ｃｘで含む
液体試料を標準分析要７もに付′ｊ−シて、そこに発生
する発色もしくは色変化を測定してｆ’Ｊられる反射光
学ｄｌｆ！ＬＯＤｓとの関係を規定する直線式を、に記
載［程（Ｉ）にて得られた反射光学ＣＩＩＹＯＤｘ、と
ＯＤ　Ｘ　ｔおよび検量線を利用して作成する工程： （ｍ）　　ヒ記−組の分析要素に属する分析要素にＬ記
被検物質を未知■含有する液体試料を付与したのち、そ
こに発生する発色もしくは色変化を反射測光により測定
して反射光学濃度値を得る［程：および （ＩＶ）上記工程（ｍ）にて付！トシた液体試料中の被
検物質含有量を、と記工程（［）で得られた反射光学Ｃ
度値、上記で作成した直線式、およびｌ−記検呈線を利
用して決定する工程 を含むことを特徴とする定植分析方法である。 （４）１１細占１１頁２行から１７亘末行の記載ｒ本発
明に使用する乾式分析要素は、〜〜〜〜〜木発りｊはこ
れに限定されるものではない、Ｊを下記の記載に置き換
える。 ｒ未発１月の定植分析方法は、上記の四工程からなるも
のである。各工程について以ドに詳細に記載する。 第一工程と第ニー［程とは、標準分析要素の感度と検定
対象の分析２２素（要補正分析要素）の感度との間の関
係を決定するための工程である。 第一工程は、検定対象の一組の分析要素（要補正分析要
素）から選ばれた二個の分析要素のそれぞれに、被検物
質を互いに異なる含有量Ｃ１およびＣ２にて含有する二
種の標準溶液を付学し、それぞれの分析要素内で発生し
た発色もしくは色変化を反射測光により測定して、それ
ぞれの反射光学Ｃ度ＯＤｘ＋および０Ｄｘ２を求める工
程である。 未発１ｇ１にて使用する分析要−には、反射光学系を利
用する乾式分析要素であれば特に他の制限はなく、公知
のものを用いることができる。乾式分析要素の具体例と
しては、一体型多層分析要素として、米国イーストマン
・コダック社よりエクタケム、富士写真フィルム株式会
社よりドライケムの商品名でそれぞれ市販されているも
のを挙げることができる。 乾式分析要素の検査項１］としては、液体試料中のグル
コース、総蛋白量、尿素窒素（Ｂ　Ｕ　Ｎ）、ビリルビ
ン等の物質Ｃ度およびアミラーゼ、アルカリ性フォスフ
ァターゼ等の酵素活性値に関する様々な種類の項目が既
に発表、市販されており。 未発１１の補正方法はこれら全ての項目の測定について
適用することができる。 未発ＩＪＩにおいて液体試料または標準溶液を点着した
乾式分析要素の反射光学Ｃ度の測定は、上記各種の乾式
分析要素の使用方法に準じて実施する０例えば、一体型
多層分析要素においては、液体試料を一体型多層分析要
素の展開層上に点着し、一定時間インキュベーションし
たのち透ＩＩ支持体の下側から反射法で測定する。 第一工程において、まず検定対象の一組の分析要素から
二個の分析要素を取り出す、この−組の分析要素とは、
実質的に同一組成からなり、被検物質に対して同一の感
度を示すものと想定される複数の分析要素である。この
理由から、上記−組の分析要素中の任意の二個の分析要
素を用いて、この工程を実施できる。なお、二個を越え
る分析要素、たとえば三個の分析要素を用いてもよい。 この場合には、第三の分析要素は、第一の分析要素ある
いは第二の分析要素と組合せて平均値を求めるような方
法で利用される。 築一工程で使用される標準溶液は、想定されている分析
系の被検物質と同一の被検物質を互いに異なった量（各
々の含有量はＣ１およびＣ２と名付けられている）含有
するものである＋１Ｐｉ準溶液中の被検物質の含有量が
既知である限り、標準溶液の被検物質以外の組成は１分
析対象の液体試料の該ヨ組成と同一あっても、あるいは
異なっていてもよい、たとえば、分析対象の液体試料が
全血あるいは血清である場合には、標準溶液は、被検物
質を既知量含有する血清あるいは、モニトールまたはパ
ーサトール等の商品名にて市販されている通常の標準液
であってもよい、使用する標準溶液は、分析対象の液体
試料と同じか、あるいは近似の物性（例、粘度）を右す
ることが好ましい。 それぞれの分析要素内で発生した発色もしくは色変化は
、反射測光により測定して、それぞれの反射光学濃度Ｏ
Ｄｘ＋および０Ｄｘ２が求められる。 第二工程は、被検物質を一定の含有量Ｃｘで含む液体試
料を上記の一組の分析要素に属する分析要素に付′Ｌし
て、そこに発生する発色もしくは色変化を測定して１１
）もれる反射光学濃度ＯＤｘと。 被検物質を上記含有ｔよＣｘで含む液体試料を標準分析
要素に付失して、そこに発生する発色もしくは色変化を
測定して得られる反射光学ｃｉ度ＯＤＳとの関係を規定
する直線式を、上記の第一工程にて１１）られた反射光
学濃度ＯＤｘ、と０Ｄｘ２および検ｊ遠線を利用して作
成する工程である。 この直線式は。 ＯＤＸ　＝　Ａ・ＯＤｓ　十　Ｂ ［ただし、ＡとＢとはド記の式： ％式％ （但し、ＯＤｘ、は上記の通りであり、ＯＤｓ。 は、被検物質を含有：ｉ　ＣＸ　１にて含む液体試ネ４
ｋ　　“付−トシた際に標準分析′５素において測定さ
れる反射光学濃度＜（ｉである。モしてＯＤｘ、は上記
の通りであり、ＯＤｓ、は、被検物質を含有；ｌ　Ｃｘ
　２にて含む液体試料を付与した際に標準分析要素にお
いて測定される反射光学濃度値である）から得られる定
数である。］ にて表わすことができる。 第二一工程において直線式は、関数式で表わしてもよく
、あるいはグラフにより表わしてもよい。 実際の分析操作において、この直線式は、関数式あるい
はグラフとしてコンピュータのメモリに保存して、短時
間のうちに［Ｉ的の結果が得られるようにすることが好
ましい。 第三工程と第四工程とは、被検物質を未知量含有する液
体試料を、感度のずれが発生している要補正分析要素（
上記−組の分析要素に属する分析要素）を用いて実際に
分析する工程である。 第三工程は、上記の一組の分析要素に属する分析要素に
、上記被検物質を未知量含有する液体試料を付’７−　
したのち、そこに発生する発色もしくは色変化を反射測
光により測定して反射光学濃度値を１１）る工程である
。このような工程ロ体は公知であり、公知の方法を利用
して実施できる。 分析要素内に発生した発色もしくは色変化を反射測光に
よりΔに定して反射光学濃度値を（）る操作は公知の方
法にノＳづいて行なうことができる。 第四工程は、上記第三工程にて付与した液体試料中の被
検物質含有量を、第三工程（ＩＩＩ）で得られた反射光
学Ｃ度値、上記で作成した直線式、および上記検量線を
利用して決定する工程である。 液体試料中の被検物質の含有量の決定は、上記第二工程
で作成した直線式、および６酔溶液を用いて予め作成し
た検量線を利用して行なわれる。 この決定操作は、先ず、要補正分析要素を用いた分析操
作で３Ｉｌ１足された反射光、学儂度値を標準分析要素
における反射光学濃度イ４に変換する。この変換により
得られるイ４は、前者の濃度イ４から正方向あるいは負
方向にずれた値となる。変換により得ちれたｅ　Ｉ！’
ｒ　（６１＋　ル・じ−人へ４）拓弾よを１０し１で予
め作成しである検量線に基づいて、付！ｊ−シた液体試
料中の被検物質の含有量に変換される。 次に、上記の変換操作を、添付した第７図を参照しなが
ら詳しく説明する。 第７図において、左側の横軸は要補正分析安素で測定さ
れる反射光学濃度を示し、右側の横軸は液体試料中の被
検物質の含有量を示す、縦軸は。 標準分析要素で測定される反射光学濃度を示す。 右側の曲線は、標準分析要素を用いて作成された検量線
であり、また左側の直線は、前記第二工程で作成された
直線式を示す直線である。 ：５７図から、要補正分析要未で測定された反射光学濃
度ＯＤｘ、および０Ｄｘ２．上記の変換によりそれぞれ
得られる反射光学濃度ＯＤｓ、および００ｓ２．そして
液体試料中の被検物質含有量Ｃｘ、およびＣｘ２濃度と
の間の関係は１１１らかである。 このように、本Ａ　ＩＪｌの定量分析方法が採用した補
正方法を利用することにより、検定を必要とする分析要
素（要補正分析要素）でＡ縛足された反射光学Ｃ度イめ
ＯＤｘから、液体試料中の被検物質含有量Ｃｘへの変換
が、想定反射光学ＣｊλｏＤＳを利用することにより容
易に実現する。 次に、本Ｎ　１１の実施例を示す、Ｊ ５、ｌＪ細１りの図面の簡単な説ＩＩの欄を次のように
補正します。 す１細−３３２頁の第６図の説【１１の後に下記の記載
を加入させる。 ｒ：ｔＳ７図は、本発明で採用されている補正のための
変換操作を説ＩＪ１する図である。Ｊ６、第７図を、別
紙として提出致します。 −［以上］− 特許請求の範囲（補正後） 「１．被検物質に対する感度にずれが発生している以外
は標準分析２２素と同じ構成からなり、そのずれが互い
に実質的に同じである一組の分析要素から選ばれた分析
要素に液体試料を付与したのち、該分析要素内で発生し
た発色もしくは色変化を反射測光により測定し、予め被
検物質の含有かと標準分析要素における発色もしくは色
変化との関係を求めて作成しておいた検量線と対比させ
ることからなる液体試料中の被検物質の定に分析方法に
おいて。 （Ｉ）上記の一組の分析要素から選ばれた二個の分析要
素のそれぞれに、被検物質を互いに異なる含有量ＣＩお
よびＣ２にて含有する二種の標準溶液を付与し、それぞ
れの分析要素内で発生した発色もしくは色変化を反射測
光により測定して。 それぞれの反射光学濃度ＯＤｘ、および０Ｄｘ２を求め
る工程： （■）被検物質を一定の含有量Ｃｘで含む液体試料を上
記の一組の分析要素に属する分析要素に＋ｆ　’？　し
て、そこに発生する発色もしくは色変化を測定して（１
）られる反射光学濃度ＯＤｘと、被検物質を上記含有ｉ
、ｔ　Ｃｘで含む液体試料を標準分析要素に付グ・して
、そこに発生する発色もしくは色変化を測定して（）ら
れる反射光学濃度ＯＤｓとの関係を規定する直線式を、
上記工程（Ｉ）にて得られた反射光学濃度ＯＤｘ＋と０
Ｄｘ２および検量線を利用して作成する工程； （Ｉ［Ｉ）上記−組の分析２２素に属する分析要素に上
記被検物質を未知液含有する液体試料を付与したのち、
そこに発生する発色もしくは色変化を反射測光により測
定して反射光学濃度値を得る工程：および （ｔＶ）上記工程（ｍ）にて付与した液体試料中の被検
物質含有量を、上記工程（ｍ）で得られた反射光学濃度
値、上記で作成した直線式、および上記検量線を利用し
て決定する工程 を含むことを特徴とする定量分析方法。 ２、上記直線式が下記の式で表わされるものであること
を４１Ｆ徴とする特許請求の範囲第１項記載の定量分析
方法： ＯＤｘ　　＝　　Ａ＊ＯＤｓ　　＋　　Ｂただし、Ａと
Ｂとは下記の式： ％式％ ［但し、ＯＤｘ＋は上記の通りであり、００ｓ。 は、被検物質を含有ＱＣｘ、にて含む液体試料を付与し
た際に標準分析要素において測定される反射光学濃度値
である、モして０Ｄｘ２は上記の通りであり、ＯＤｓ、
は、被検物質を含有量Ｃｘ２にて含む液体試料を付与し
た際に標準分析要素において測定される反射光学濃度値
である］から得られる定数である。 ３、上記直線式がグラフにて表示されることを特徴とす
る特許請求の範囲第１項記載の定量分析方法。 ４、上記直線式がコンピュータのメモリに保存されるこ
とを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の定量分析方
法。 ５、上記工程（ｎ）がコンピュータにて行なわれるごと
を特徴とする特許請求の範囲第１ゲ１記依の定１．Ｘ分
析力法。 ６、」；記玉程（ＩＶ）がコンピュータにて行なわれる
ことを特徴とする特許請求の範囲：ｊＳ１項記佐０定量
分析方法。 ７、上記工程（■）と−［程（ＩＶ）とがコンピュータ
にて行なわれることを特徴とする特許請求の範囲第１項
記載の定量分析方法。 −〔以丑］− 第７図

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、液体試料を点着した乾式分析要素の反射光学濃度か
   ら上記液体試料中の被検物質濃度を求める際に使用する
   反射光学濃度値と物質濃度値との対応関係に関し、標準
   乾式分析要素における対応関係（１）を上記標準乾式分
   析要素と同一の構成を有し感度が相違する特定乾式分析
   要素における対応関係（２）に補正する方法において、 （ I ）特定乾式分析要素の被検物質を異なる既知濃度
   で含む二以上の標準溶液を用いて、これらの溶液を点着
   した上記特定乾式分析要素の反射光学濃度値を測定する
   工程； （II）上記二以上の標準溶液を点着した場合における標
   準乾式分析要素の反射光学濃度値を、上記対応関係（１
   ）を用いて求めるか、または測定により得る工程；およ
   び、 （III）上記（ I ）および（II）における結果を基に、
   上記標準乾式分析要素の反射光学濃度値と上記特定乾式
   分析要素の反射光学濃度値との対応関係（３）を一次関
   数として求め、上記対応関係（３）を用いて上記対応関
   係（１）を補正することで上記対応関係（２）を得る工
   程； よりなることを特徴とする反射光学濃度値と物質濃度値
   との対応関係の補正方法。 ２、上記標準乾式分析要素と特定乾式分析要素が同一の
   被検物質を検査項目とすることを特徴とする特許請求の
   範囲第１項記載の補正方法。 ３、上記対応関係（１）および（２）において、液体試
   料中の被検物質濃度が乾式分析要素の反射光学濃度の関
   数として表されることを特徴とする特許請求の範囲第１
   項または第２項記載の補正方法。 ４、上記乾式分析要素が一体型多層分析要素であること
   を特徴とする特許請求の範囲第１項または第２項記載の
   補正方法。