JPS6240298A - 微生物処理による光学活性なジブロモプロパノ−ルの製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明はうセミ体より微生物による光学活性なＳ−（−
）　−２，３−ジブロモ−１−プロパノールの分取法に
関する。

（従来技術） ２．３−ジブ０モー　１−プロパノール（以下、本化合
物をβ−ＤＢＰと略称する）は下記構造式（Ｉ）にて表
わされる物質であり、その構造（下記構造式（■））の
原料として知られている。またエビブロモヒドリンと共
に各種の医薬。

農薬等の中間原料として重要なものである。

Ｓｒ　　　　　　　　０Ｈ （Ｉ）　　　　　　　（Ｉｔ）　　　　　　　（ＩＩ）
しかしながら、このβ−ＤＢＰは合成法によつてつくら
れるために光学的に不活性なラセミ体である。

ラセミ体β−ＤＢＰより光学活性なβ−ＤＢＰを製造す
葛方法は知られていない。　　　　　　　　　　（（発
明の目的） 本発明はラセミ体β−ＤＢＰを他の誘導体を経ずに直接
微生物に資化させて、光学活性なβ−ＤＢＰを分取する
ことを目的とする。　　　　　　　　　・：′（発明０
構成）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　３
本発明はすなわちＲ−（＋）−２，３−ジプロ　　　　
　　！ミモー　１−プロパ・ノール資化能を有するシュ
ードモナス属に属する細菌、又はその培養菌体を、と作
用せしめてＳ−（−）　−２，３−ジブロモ−１−プロ
パノールを分取することを特徴とする微生物処理による
光学活性なジブロモプロパノールの製法である。

本発明者らが土壌中より分離採取して本発明において用
いた微生物の菌学的性質は表１に示すとおりである。

表　　　１ ａ、形態 ■細胞の形及び大きさ　　　　　桿菌、０゜４〜０，６
Ｘ　１．２〜１．８μ■■抗酸性　　　　　　　　　　
　無 す、各培地における生育状態 ■肉汁寒天平板培養（３０’Ｃ，３日間培養）イ）コロ
ニー形状の遅速　　　　普通　直径約３〜４ｍｍ口）コ
ロニーの形状　　　　　　円形 ハ）コロニー表面の形状　　　　平滑 二）コロニーの隆起状態　　　　凸円状ホ）コロニーの
周縁　　　　　金縁 へ）コロニーの内容　　　　　　均質 ト）コロニーの色調　　　　　　乳白色チ）コロニーの
透明度　　　　　半透明り）コロニーの光沢　　　　　
　鈍光 ヌ）可溶性色素の生成　　　　　無 ■肉汁寒天斜面培１（３０℃、３日間培養）イ）生育の
良否　　　　　　　　生育良好、糸状口）コロニーの形
　　　　　　平滑 ハ）コロニーの断面の隆起状態　扁平状二）コロニーの
光沢　　　　　　鈍光 ホ）コロニー表面の形状　　　　平滑 へ）コロニーの透明度　　　　　半透明ト）コロニーの
色　　　　　　　乳白色■肉汁液体培養（３０’Ｃ，３
日間培養）イ）生育性状　　　　　　　　　膜状 ０）濁度　　　　　　　　　　　わずかに濁る。

ハ）ガス発生　　　　　　　　　なし ホ）培地の着色　　　　　　　　なし ■リドマス・ミルク 凝固せず、リドマスを淡青色あるいは無色にする。

Ｃ０生理学的試験 １　硝酸塩の還元　　　　　　　十 ２　　ＭＲテスト　　　　　　　　− ３　　ＶＰテスト　　　　　　　　− ４　インドール生産　　　　　　− ５硫化水素の生成　　　　　　− ６デンプンの加水分解　　　　− ７ｆｉ！２窒反応　　　　　　　　− ８クエン酸の利用　　　　　　十 １１　　ウレアーゼ　　　　　　　　＋１２　　オキシ
ダーゼ　　　　　　　＋１３　　カタラーゼ　　　　　
　　　＋１４　　生育の範囲　　　　　　　　ｐＨ５，
５〜９．Ｏ１温度２０〜３７′Ｃ１５Ｍ素に対する態度
　　　　　好気性１６　０−Ｆテスト（Ｈｕｏｈ　Ｌｅ
ｉｆｓｏｎ法による）　０１７　　糖類からの酸及びガ
スの生成の有無糖類　　酸　ガス （１）Ｄ−グルコース　　　＋　　　−（２）Ｄ−ガラ
クトース　　十　　　−（３）ショ糖　　　　　　＋　
　　− （４）トレハロース　　　　＋　　　−（５）デンプン
　　　　　　−− 以上の結果をもとにパージエイズ・マニュアル・オブ・
デターミネイティブ・バクテリオロジイ（Ｂｅｒａｅｙ
　’　ｓ　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔ
ｉｖｅＢ　ａｃｔｅｒｔｏ＋ｏｏｙ　）第８版の記載に
基ツキ帰属同定を行うと本国はシュードモナス属の特徴
を有する。

以下、本発明者らは本国をシュードモナスｐ　ｓｅｕｄ
ｏｍｏｎａｓ　　ＯＳ　−Ｋ　−２９（微工研菌寄第７
８４６号：ＦＥＲＭ　　Ｐ−７８４６）と命名した。

本発明ではラセミ体β−ＤＢＰに、この微生物を接触さ
せてＳ−（−）−β−ＤＢＰを分取するが、具体的には
ラセミ体β−ＤＢＰを炭素ζ 源とし、無機態窒素（各種のアンモニア塩、硝酸塩）を
窒素源としその他無機塩類を含む合成培地中で上記細菌
を培養するか、又は上記細菌をブイヨン培地、あるいは
加糖ブイヨン培地等、炭素源、窒素源、有機栄養源、無
機栄養源を含む通常よく用いられる栄養培地中で培養せ
しめ、ラセミ体β−ＤＢＰを含有する培地中で作用さ　
　　　　　坪よく生育させておき、これから得られる国
体をせた後、Ｓ−（−）−β−ＤＢＰを分取すればよい
。

炭素源としてはグルコース、シュクロース。

グリセリン等の炭水化物、あるいはクエン酸。

マレイン酸、リンゴ酸等の有機酸及びその塩類を、窒素
源としては硫酸アンモニウム、ｍ化アンモニウム、硝酸
アンモニウム、リン酸アンモニウム等の無機態窒素、及
び尿素、ペプトン。

カゼイン、酵母エキス、肉エキス等の有１１態窒素を用
いることができる。その他の無機塩類としてはリンＩＩ
！塩、マグネシウム塩、カリ塩、マンガン塩、鉄塩、亜
鉛塩、銅塩等が用いられる。

本菌の培養は、慣用の方法で行うことができる。通常、
温度約２０〜４０℃、好ましくは２５〜３７℃、ｐＨ約
６〜９、好ましくはｐ）１６．５〜７．５で振盪あるい
は通気Ｗ！拌等の手段により好気的に行われる。

本発明で用いる微生物とラセミ体β−ＤＢＰを接触させ
るときのラセミ体β−ＤＢＰの濃度は培地巾約０．２容
吊％以下であればよく、その接触時間は通常２日〜１０
日である。

培養終了後、培養液をとり出し遠心分離して微生物菌体
と上清液とに分ＩＩＩＩＵ１上清液中のβ−ＤＢＰを活
性炭カラム処理、エーテル抽」。

減圧蒸留等の操作によって分取する。

以下実施例により説明する。実施例中％は特に記さない
限り重量％を表わす。

実施例１ ラセミ体β−ＤＢＰを唯一の炭素源とした培地、すなわ
ち ラセミ体β−ＤＢＰ　　　　　　　Ｏ，２客間％硫安　
　　　　　　　　　　　０．０５％硝安　　　　　　　
　　　　　０．０５％りん酸水素第２カリウム　　　０
．１％りん酸第２ナトリウム　　　　　０．１％りん酸
第１ナトリウム　　　　　０．２％硫酸マグネシウム　
　　　　　　０．０５％硫酸鉄、硫酸銅、硫酸マンガン
　微量 ｐＨ６，５ を含む培地１００ｍ１を有する坂ロフラスコ（５００Ｊ
容ンに本国Ｏ８−に一２９株の傾斜寒天培地から　１白
金耳ずつ植菌を行い、３０℃で振盪培養を３〜５日間実
施する。次に上記組成の培地４ｇを入れた５１１容培養
器（ジャーフッメンタ−）に上記前培養分を加え、以下
の条件下で３〜５日間通気攪拌培養した。

温度３０℃ Ｅ）Ｈ初発６．５ 通気惜　４ｆ／ｌ１ｉｎ 回転数　５００ｒｐｎ＋ 培？！終了後、培養液を取り出し、遠心分離機を用いて
微生物菌体とその上清液とに分離し、この中に残存する
β−ＤＢＰを活性炭カラム処理。

エーテル抽出、減圧蒸留によって油状物質として１，５
２９採取した。本物質の同定は次の方法で行った。

１）ガスクロマトグラフィーによる同定。

カラム担体Ｐ　Ｅ　Ｇ　−２０Ｍ　Ｐ　、　　５％、６
０〜８０メツシユを用いて市販β−ＤＢＰと比較した結
果、その保持時間は全く同じであった。純度９２％以上
。

２＞ＩＲ（赤外吸収スペクトル）による同定。

第１図に示したチャートのように、その吸収パターンは
市販β−ＤＢＰと全く同一であった。

以上から本物質は明らかにβ−ＤＢＰである事が判明し
た。又本物質がＳ−（−）−ＤＢＰである事の確認は以
下の方法によった。

１）旋光度の測定。

市販β−ＤＢＰ及び本物質の旋光度は次の如くである。

市販β−ＤＢＰ　　（α）２ｆ−０，０Ｇ＝　１゜メタ
ノール ′　　本　　物　　質　　　　　〔α）”　　＝−１２
，７Ｃ−１゜メタノール ２）Ｒ−（＋）−α−メトキシ−α−トリフルオロメチ
ルフェニルアセテートエステルの調整分析。　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　、・ならびに高速液
体クロマトグラフィーによる　　　　・Ｒ−（＋）−α
−メトキシ−α−トリフルオロメチルフェニルアセテー
トクロライドを市販β−ＤＢＰならびに本物質に反応せ
しめ、そのエステル誘導体を調整した後、液体クロマト
グラフィーでの分析結果は次のようであった。

分析条件 カラム担体　ＺＯＲＢＡＸ　　０ＤＳ ４．６ｍｍＸ２５　Ｃ１１ｌ　（Ｄｕ　ｐｏｎｔ社製）
溶出液　　　メタ／−ル：水−６０：４０（Ｖ／Ｖ）溶
出量　　　　１ｍ＆／１ａｉｎ 検出法　　　２６０ｎｍにおける吸光度分析結果 市販β−ＤＢＰ　　保持時Ｂ１０９．２分及び１１１．
７分に同一面積をもつ２つのピ ークを与えた。

本　物　質　　　保持時間１１１．７分にのみピークを
与え１０９．２分にはピーク を与えなかった。

以上の結果から本物質は、Ｓ−（−）−β−ＤＢＰであ
り、その光学純度は９９％以上であることが判った。

実施例２ 肉エキス１．０％、ポリペプトン１．０％、グルコース
２．５％、ｐＨ７なる培地１００−を有する５個の坂ロ
フラスコ（５０〇−容）を常法どおり、加熱蒸気滅菌後
、本国Ｏ８−に一２９株の傾斜寒天培地から菌株を１白
金耳ずつ接種する。各々のフラスコは３０℃下で４８時
間往復振罎培養（２００ｒｐｍ　）を行う。

次に上記組成の培地２．５１を５１容ジヤーフ７メンタ
ーに入れ、常法どおり加熱蒸気滅菌後、各々のフラスコ
で生育せしめた微生物菌体を無菌的に接種せしめ、次の
条件下で４８時間培養する。

温度３０℃ ｐＨ初発ｐＨ７，０ 通気ｆｆｌ　　２Ｎ　／ｍｉｎ 回転数　５００ｒｌ）１ 培養の終了した培養液は遠心分離機にて微生物菌体と上
清液とに分離し、上溝液は廃棄する。

残った微生物菌体は５０ｆｆ１Ｍりん酸緩衝液ＤＨ６，
５にて３回〜４回洗浄し洗浄菌体を得る。次にこの洗浄
菌体を実施例１で示したうセミ体ＤＢＰを含有する培地
４ｇに懸濁させ、次の条件下に保持する。

温度３０℃ 通気ｌ１４１／ｗｉｎ 回転数　５００ｒｐｍ ｐＨ５，Ｓ（炭酸カルシウムを２０９加えて保持する） 洗浄菌体を培地に加えてから４８時間、上記の様に通気
攪拌培養し、再び遠心分離機にて微生物菌体と上清液と
に分離した。上清液からのＤＢＰの分離は実施例１と同
様にし、１．５１を得た。

このＤＢＰは、実施例１に示したように各種の分析を行
った結果、光学純度９９％以上の５−（−）−β−ＤＢ
Ｐであった。

（発明の効果） 本発明によれば土壌中より分離したシュードモナス属に
属するＯ８−に−２９株を利用して２．３−ジブロモ−
１−プロパノールの光学活性化を行うことができる。

【図面の簡単な説明】

第１図は実施例１により得られたＳ−（−）−２，３−
ジブロモ−１−プロパノールおよび市販品の同物質の赤
外線吸収スペクトルである。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. Ｒ−（＋）−２，３−ジブロモ−１−プロパノール資化
   能を有するシュードモナス属に属する細菌、又はその培
   養菌体を、培地中でラセミ体２，３−ジブロモ−１−プ
   ロパノールと作用せしめてＳ−（−）−２，３−ジブロ
   モ−１−プロパノールを分取することを特徴とする微生
   物処理による光学活性なジブロモプロパノールの製法。