JPS6233200A - モノクロ−ナル抗体 - Google Patents
モノクロ−ナル抗体Info
- Publication number
- JPS6233200A JPS6233200A JP17487785A JP17487785A JPS6233200A JP S6233200 A JPS6233200 A JP S6233200A JP 17487785 A JP17487785 A JP 17487785A JP 17487785 A JP17487785 A JP 17487785A JP S6233200 A JPS6233200 A JP S6233200A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- tsh
- monoclonal antibody
- subunit
- beta subunit
- mouse
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はＴＳＨ−βサブユニット特異性モノクローナル
抗体、特に、ＴＳＨそのものは実質的に認識せずＴＳＨ
−βサブユニ、７ ）のみに特異性を有するモノクロー
ナル抗体に関する。
抗体、特に、ＴＳＨそのものは実質的に認識せずＴＳＨ
−βサブユニ、７ ）のみに特異性を有するモノクロー
ナル抗体に関する。
一般に、ＴＳＨ（甲状腺刺激ホルモン）はαおよびβの
各サブユニットから構成されており、その血中または体
液中の濃度の測定は原発性甲状腺機能低下症、パセドウ
病、フレチン症等の診断に広く利用されている。しかし
ながら、血中または体液中には、通常、αおよびβの各
サブユニットで構成されるＴＳＨ自体のほかに遊離の形
のＴＳＨ−αサブユニットとＴＳＨ−βサブユニットも
存在すると云われておシ、正常人または上記の各症状を
有する患者におけるそれら各ＴＳＨ成分の動態について
檀々の検討がなされているが、現在のところまだ、その
十分な解明はなされて一方、ＴＳＨを測定するアッセイ
係においてＴＳＨ特異性モノクローナμ抗体を用いるこ
とは公知である。例えば、 クリニカ〜 グミストリ−
（ＣＬ工Ｎ工ＣＡＬ ＣＨＥＭ工５ＴＲＹ）、■０１゜
２８、Ａ９，１８６２−１９８２“には、Ｈ，ｅａｒｒ
ｅｔｔ。
各サブユニットから構成されており、その血中または体
液中の濃度の測定は原発性甲状腺機能低下症、パセドウ
病、フレチン症等の診断に広く利用されている。しかし
ながら、血中または体液中には、通常、αおよびβの各
サブユニットで構成されるＴＳＨ自体のほかに遊離の形
のＴＳＨ−αサブユニットとＴＳＨ−βサブユニットも
存在すると云われておシ、正常人または上記の各症状を
有する患者におけるそれら各ＴＳＨ成分の動態について
檀々の検討がなされているが、現在のところまだ、その
十分な解明はなされて一方、ＴＳＨを測定するアッセイ
係においてＴＳＨ特異性モノクローナμ抗体を用いるこ
とは公知である。例えば、 クリニカ〜 グミストリ−
（ＣＬ工Ｎ工ＣＡＬ ＣＨＥＭ工５ＴＲＹ）、■０１゜
２８、Ａ９，１８６２−１９８２“には、Ｈ，ｅａｒｒ
ｅｔｔ。
ｗａａａ等により、ＴＳＨを含む各楓ホルモンのα−サ
ブユニット特異性七ノクローナ／ｌ／抗体およびβ−サ
ブユニット特異性モノクローナル抗体を用いたＥ工Ａ法
が報告されている。
ブユニット特異性七ノクローナ／ｌ／抗体およびβ−サ
ブユニット特異性モノクローナル抗体を用いたＥ工Ａ法
が報告されている。
この報告によれば、固相としてα−サブユニット特特異
性モノクロナナ／１／机 識コンジュゲートとしてβ−サブユニット特異性モノク
ローナル抗体を用いる方法を開示しているとおシ、用い
る各サブユニット特異性モノクローナル抗体は当然のこ
ととしてＴＳＲ自体も認識するものである。
性モノクロナナ／１／机 識コンジュゲートとしてβ−サブユニット特異性モノク
ローナル抗体を用いる方法を開示しているとおシ、用い
る各サブユニット特異性モノクローナル抗体は当然のこ
ととしてＴＳＲ自体も認識するものである。
本発明者等は、このようなＴＳＥ（のサブユニット特異
性モノクローナル抗体についてタト究を進めていくうち
に、種々確立したモノクローナル抗体、特にβ−サブユ
ニット特異性モノクローナル抗体においてＴＳＨ自体は
実質的に認識せずβ−サブユニットのみに特異性を有す
るモノクローナル抗体を見い出した。
性モノクローナル抗体についてタト究を進めていくうち
に、種々確立したモノクローナル抗体、特にβ−サブユ
ニット特異性モノクローナル抗体においてＴＳＨ自体は
実質的に認識せずβ−サブユニットのみに特異性を有す
るモノクローナル抗体を見い出した。
一般には、上述の文献における如く、β−サブユニット
特異性モノクローナル抗体は、ＴＳｆ（自体金も認識す
るものが通常である。
特異性モノクローナル抗体は、ＴＳｆ（自体金も認識す
るものが通常である。
本発明のＴＳＨのβ−サブユニットのみを認識するモノ
クローナル抗体は、一般には、’ｆ’ｓＨ１た１ｄＴＳ
Ｈ−βサブユニットで免疫したマウスのＩＰｖ、ｗ、細
胞とマウスミエローマ細胞を融合し、さらにクローニン
グして得られたモノクローナル抗体産生性ハイプリドー
マのなかから、その特異性を調べてβ−サブユニットの
みに特異性を有するモノクローナル抗体を産生ずるハイ
プリドーマを選択し、このハイプリドーマを人工培地中
あるいは、マウス腹腔内で増殖させることによって得る
ことができる。
クローナル抗体は、一般には、’ｆ’ｓＨ１た１ｄＴＳ
Ｈ−βサブユニットで免疫したマウスのＩＰｖ、ｗ、細
胞とマウスミエローマ細胞を融合し、さらにクローニン
グして得られたモノクローナル抗体産生性ハイプリドー
マのなかから、その特異性を調べてβ−サブユニットの
みに特異性を有するモノクローナル抗体を産生ずるハイ
プリドーマを選択し、このハイプリドーマを人工培地中
あるいは、マウス腹腔内で増殖させることによって得る
ことができる。
以下、実施例によシ本発明を具体的に説明する。
実施例
モノクローナル抗体の調製
先ず、ＴＳＨ−ＪたはＴＳＨ−βサブユニットの５０μ
ｔをｌ、 ３−ｃｌの０．９％生理食塩水に浴解し、ア
ジュバントとしてＤ工ＦＣＯ社のＦＣＡｌ、３ＷＬｉを
加えて油中水滴型としたものを基礎免疫用抗原とした。
ｔをｌ、 ３−ｃｌの０．９％生理食塩水に浴解し、ア
ジュバントとしてＤ工ＦＣＯ社のＦＣＡｌ、３ＷＬｉを
加えて油中水滴型としたものを基礎免疫用抗原とした。
また、ブースター用抗涼としてＴＳＨまたはＴＳＨ−β
サブユニットの５０μｆを１．３−の０．９％生理食塩
水に浴かして調製したものを用いた。
サブユニットの５０μｆを１．３−の０．９％生理食塩
水に浴かして調製したものを用いた。
Ｂ Ａ Ｌ Ｂ／Ｃマウス４〜５週令♀を用い、下記第
１表に示す方法およびスケージュルで免疫して得たマウ
ス稗ｗｔ細胞を、以下、通常の方法、例えば渡辺武監修
「ハイプリドーマ法とモノクローナル抗体Ｊ、Ｐ、２０
〜Ｆ、２９（株）Ｒ＆Ｄプランニング社、１９８２ に
２！載の方法によりマウスミエローマａｌｌ （Ｐ３−
Ｘ６３−Ａｌ１３− Ｕｌ ）と融合させ、クローニン
グしてＴＳＨ−βサブユニツト特異性モノクローナル抗
体を産生ずるハイプリドーマ１０槌ヲ得九。各々をマウ
ス腹腔内で増殖させることによって各モノクローナル抗
体を得た。
１表に示す方法およびスケージュルで免疫して得たマウ
ス稗ｗｔ細胞を、以下、通常の方法、例えば渡辺武監修
「ハイプリドーマ法とモノクローナル抗体Ｊ、Ｐ、２０
〜Ｆ、２９（株）Ｒ＆Ｄプランニング社、１９８２ に
２！載の方法によりマウスミエローマａｌｌ （Ｐ３−
Ｘ６３−Ａｌ１３− Ｕｌ ）と融合させ、クローニン
グしてＴＳＨ−βサブユニツト特異性モノクローナル抗
体を産生ずるハイプリドーマ１０槌ヲ得九。各々をマウ
ス腹腔内で増殖させることによって各モノクローナル抗
体を得た。
抗原特異性測定およびイムノグロブリン・上記で得た１
０確のハイブリドーマが産生ずる七ノクローナ／ｖ４Ａ
体の抗原特異性を次のようにして測定した。
０確のハイブリドーマが産生ずる七ノクローナ／ｖ４Ａ
体の抗原特異性を次のようにして測定した。
先ず、トレーサーとしての１２５ｒ ｍ蛾ＴＳＨ。
１２５■標蛾ＴＳＨ−αサブユニットおよび１２５１［
ＪＴＳＥ（−βサブユニットをクロフミン−Ｔ法によυ
調製した。
ＪＴＳＥ（−βサブユニットをクロフミン−Ｔ法によυ
調製した。
サンプルとしての各ハイブリドーマの培養上清の免投プ
ロブリン社を２０μＬ侃１に１４望管内で混合して３７
°Ｃで１時間インキュベートした。次に市販の抗マウス
イムノグロブリンヤギ血清（カッペル社製）を２０倍希
釈したもの５０μｍ ｔ ／ＪＪえ、さらに３７°Ｃで
３０分間インキニーベートした。続いて、市販の黄色ブ
ドウ球＠ Ｃｏｗａｎ工株菌俸でめるアブソープＧ（化
血輯装）２００μＪを加え３７°Ｃで３０分間インキュ
ベートした。その後、ｏ、１ｓＭｃん酸緩衝食塩液（１
）Ｈ７，２）で洗浄したのち、沈査中のａｐｍｑガンマ
−カウンターでカウントして各ハイプリドーマの抗原性
を測定した。
ロブリン社を２０μＬ侃１に１４望管内で混合して３７
°Ｃで１時間インキュベートした。次に市販の抗マウス
イムノグロブリンヤギ血清（カッペル社製）を２０倍希
釈したもの５０μｍ ｔ ／ＪＪえ、さらに３７°Ｃで
３０分間インキニーベートした。続いて、市販の黄色ブ
ドウ球＠ Ｃｏｗａｎ工株菌俸でめるアブソープＧ（化
血輯装）２００μＪを加え３７°Ｃで３０分間インキュ
ベートした。その後、ｏ、１ｓＭｃん酸緩衝食塩液（１
）Ｈ７，２）で洗浄したのち、沈査中のａｐｍｑガンマ
−カウンターでカウントして各ハイプリドーマの抗原性
を測定した。
また、イムノグロブリン・サブクラスの同定をマウスの
α、ｒｌ、ｒ ２ ”％ ｒ ２６、ｒ３、μ、露、λ
鎖に対する各抗血清を用いてオフタロニー法によシ谷ハ
イブリドーマ＠簀上膚について測定した。
α、ｒｌ、ｒ ２ ”％ ｒ ２６、ｒ３、μ、露、λ
鎖に対する各抗血清を用いてオフタロニー法によシ谷ハ
イブリドーマ＠簀上膚について測定した。
結果は第２表のとおシでおり、いずれのハイグリドーマ
疼もβｉプユニットとは反応性を示しているが、ハイプ
リドーマ＆８〜１０においてはＴＳＨと実質的に反応性
を示さないものが得らｎていることが判る。
疼もβｉプユニットとは反応性を示しているが、ハイプ
リドーマ＆８〜１０においてはＴＳＨと実質的に反応性
を示さないものが得らｎていることが判る。
以上により、本発明によれば、ＴＳＨｔ−実質的に認識
せずＭ噛のＴＳＨ−βサブユニットのみにしか特異性を
示さないモノクローナル抗体を得ることができる。この
ようなモノクローナル抗体は血中での各ＴＳＨ成分の動
騙解析に有用である。
せずＭ噛のＴＳＨ−βサブユニットのみにしか特異性を
示さないモノクローナル抗体を得ることができる。この
ようなモノクローナル抗体は血中での各ＴＳＨ成分の動
騙解析に有用である。
Claims (1)
- （１）ＴＳＨを実質的に認識せずＴＳＨ−βサブユニッ
トのみに特異性を有するモノクローナル抗体。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17487785A JPS6233200A (ja) | 1985-08-07 | 1985-08-07 | モノクロ−ナル抗体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17487785A JPS6233200A (ja) | 1985-08-07 | 1985-08-07 | モノクロ−ナル抗体 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6233200A true JPS6233200A (ja) | 1987-02-13 |
Family
ID=15986221
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP17487785A Pending JPS6233200A (ja) | 1985-08-07 | 1985-08-07 | モノクロ−ナル抗体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6233200A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH049898U (ja) * | 1990-05-11 | 1992-01-28 | ||
| JPH04501802A (ja) * | 1989-01-11 | 1992-04-02 | アメリカ合衆国 | 生物学的に活性な合成チロトロピンおよびそれを製造するためのクローン化遺伝子 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS59500986A (ja) * | 1982-05-21 | 1984-05-31 | ザ・トラステイ−ズ・オブ・コロンビア・ユニヴア−シテイ・イン・ザ・シテイ・オブ・ニユ−・ヨ−ク | モノクロ−ナル抗体混合物及び高感度イムノアツセイのための前記モノクロ−ナル抗体混合物の使用 |
-
1985
- 1985-08-07 JP JP17487785A patent/JPS6233200A/ja active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS59500986A (ja) * | 1982-05-21 | 1984-05-31 | ザ・トラステイ−ズ・オブ・コロンビア・ユニヴア−シテイ・イン・ザ・シテイ・オブ・ニユ−・ヨ−ク | モノクロ−ナル抗体混合物及び高感度イムノアツセイのための前記モノクロ−ナル抗体混合物の使用 |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH04501802A (ja) * | 1989-01-11 | 1992-04-02 | アメリカ合衆国 | 生物学的に活性な合成チロトロピンおよびそれを製造するためのクローン化遺伝子 |
| JPH049898U (ja) * | 1990-05-11 | 1992-01-28 |
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