JPS6232170B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は肝炎の予防及び治療剤に関する。

本発明の肝炎予防及び治療剤は下式 及び式 で表わされるセスキテルペン類縁体並びに之等化
合物の塩から選ばれる少なくとも１種を有効成分
として含有する点において特徴付けられる。

上記有効成分として用いられる式(1)及び(2)で表
わされる化合物は、公知の化合物であり、例えば
西独公開第2821403号（特開昭54―36255号及び特
開昭54―37832号）公報に記載されるように、自
己免疫疾患、腎炎、リユウマチ、膠原病及び癌の
治療薬として有用であることが知られている。

本発明者らは研究の結果、上記式(1)及び(2)で表
わされる化合物が、上記公報に記載される用途
（薬効）からは全く予期できない肝炎の治療及び
予防効果を有し、肝炎予防及び治療剤として有用
であることを見い出し、本発明を完成した。

本発明において有効成分とする上記式(1)で表わ
される化合物（結晶）は、溶媒特に塩基性溶媒に
溶解させると、該化合物の互変異性体である上記
式(2)で表わされるモノカルボン酸との平衛混合物
となる。即ち化合物(1)をジメチルスルホキシド溶
媒に溶解後経時的に測定したNMRスペクトル分
析によれば、溶解20分後には、ラクトールの特徴
的シグナルを示す6.36ppmの他にアレデヒドプロ
トン（−ＣＨＯ）の特徴的シグナルである
9.89ppmに若干のピークが認められ、両者の積分
比は前者約73：後者約27であり、２時間後には上
記9.89ppmのピークが更に若干増大し、積分比で
70：30に達し、この積分比は63時間経過後の
NMR分析図においても変化せず化合物２は上記
溶液中では化合物１と３：７の比で存在する。本
発明の肝炎予防及び治療剤は、かかる平衡混合物
の形態にある化合物１及び化合物２を有効成分と
することができる。尚上記化合物１の互変異性体
である化合物２は、溶媒としてメタノールやピリ
ジンを用いる場合は生成しない。

本発明の肝炎予防及び治療剤はまた上記各化合
物及び之等の混合物と同様に、之等各化合物の塩
基性化合物塩を有効成分とすることができる。上
記塩は、化合物１及び化合物２の有する酸性基即
ちフエノール性水酸基及び化合物２の有するラク
トール環を構成するカルボキシル基のうち少なく
とも１つの官能基が塩基性化合物と反応すること
により得られる。上記塩の製造に利用される塩基
性化合物としては、具体的には、水酸化ナトリウ
ム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、炭酸ナ
トリウム、炭酸カリウム、炭酸水素ナトリウム等
のアルカリ金属又はアルカリ土類金属の水酸化
物、炭酸化物等を例示できる。また例えばメチル
アミン、エチルアミン、イソプロピアミン、モル
ホリン、ピペラジン、ピペリジン、３，４―ジメ
トキシフエネチルアミン等の有機アミン類も上記
塩基性化合物として利用できる。

本発明肝炎予防及び治療剤の有効成分とする各
化合物は、また立体異性体を有し、本発明は該立
体異性体をも当然に包含する。

本発明の肝炎予防及び治療剤は、通常有効成分
を製剤担体と共に製剤組成物の形態とされる。担
体としては使用形態に応じた薬剤を調製するのに
通常使用される充填剤、増量剤、結合剤、付湿
剤、崩壊剤、表面活性剤、滑沢剤等の稀釈剤ある
いは賦形剤を例示でき、これらは投与単位形態に
応じて適宜選択できる。

本発明肝炎予防及び治療剤の投与単位形態とし
ては、各種の形態を予防及び治療目的に応じて選
択できる。その代表的なものとしては錠剤、丸
剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、カプセ
ル剤、坐剤、注射剤（液剤、懸濁剤等）等を例示
できる。錠剤の形態に成形するに際しては、担体
としてこの分野で従来公知のものを広く使用で
き、例えば乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ
糖、尿素、デンプン、炭酸カルシウム、カオリ
ン、結晶セルロース、ケイ酸等の賦形剤、水、エ
タノール、プロパノール、単シロツプ、ブドウ糖
液、デンプン液、ゼラチン溶液、カルボキシメチ
ルセルロース、セラツク、メチルセルロース、リ
ン酸カリウム、ポリビニルピロリドン等の結合
剤、乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カン
テン末、ラミナリア末、炭酸水素ナトリウム、炭
酸カルシウム、ツウイン、ラウリル硫酸ナトリウ
ム、ステアリン酸モノグリセリド、デンプン、乳
糖等の崩壊剤、白糖、ステアリン、カカオバタ
ー、水素添加油等の崩壊抑制剤、第四級アンモニ
ウム塩基、ラウリル硫酸ナトリウム等の吸収促進
剤、グリセリン、デンプン等の保湿剤、デンプ
ン、乳糖、カオリン、ベントナイト、コロイド状
ケイ酸等の吸着剤、精製タルク、ステアリン酸
塩、ホウ酸末、マクロゴール、固体ポリエチレン
グリコール等の滑沢剤等を例示できる。丸剤の形
態に成形するに際しては、担体としてこの分野で
従来公知のものを広く使用でき、例えばブドウ
糖、乳糖、デンプン、カカオ脂、硬化植物油、カ
オリン、タンク等の賦形剤、アラビアゴム末、ト
ラガント末、ゼラチン、エタノール等の結合剤、
ラミナリア、カンテン等の崩壊剤等を例示でき
る。更に錠剤は必要に応じ通常の剤皮を施した錠
剤例えば糖衣錠、ゼラチン被包錠、腸溶被錠、フ
イルムコーテイング錠あるいは二重錠、多層錠と
することができる。坐剤の形態に成形するに際し
ては、担体として従来公知のものを広く使用で
き、例えばポリエチレングリコール、カカオ脂、
高級アルコール、高級アルコールのエステル類、
ゼラチン、半合成グリセライド等を挙げることが
できる。注射剤として調製される場合には液剤及
び懸濁剤は殺菌され且つ血液と等張であるのが好
ましく、これら液剤、乳剤及び懸濁剤の形態に成
形するのに際しては、稀釈剤としてこの分野に於
いて慣用されているものをすべて使用でき、例え
ば水、エチルアルコール、プロピレングリコー
ル、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリ
オキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシ
エチレンソルビツト、ソルビタンエステル等を挙
げることができる。なおこの場合等張性の溶液を
調製するに充分な量の食塩、ブドウ糖あるいはグ
リセリンを本発明の肝炎予防及び治療剤中に含有
せしめてもよく、また通常の溶解補助剤、緩衝
剤、無痛化剤、保存剤等を更に必要に応じて着色
剤、保存剤、香料、風味剤、甘味剤等や他の医薬
品を該予防及び治療剤中に含有せしめてもよい。

本発明の肝炎予防及び治療剤中に含有されるべ
き有効成分の量は特に限定されず広範囲に適宜選
択されるが、通常全組成物中１〜70重量％、好ま
しくは５〜50重量％とするのが適当である。

本発明の肝炎予防及び治療剤の使用に際しては
特に限定がなく、各種形態に応じた方法で投与さ
れる。例えば錠剤、丸剤、液剤、懸濁剤、乳剤、
顆粒剤及びカプセル剤の場合には経口投与され
る。また注射剤の場合には単独であるいはブドウ
糖、アミノ酸等の通常の補液と混合して静脈内投
与され、さらには必要に応じて単独で筋肉内、皮
内、皮下若しくは腹腔内投与される。坐剤の場合
には直腸内投与される。

本発明の肝炎予防及び治療剤の投与量は使用目
的、症状等により適宜選択されるが、通常有効成
分量を１人１日当り50mg〜１ｇ程度の範囲で用い
ることができ、また１日１〜４回投与することが
できる。

以下本発明肝炎予防及び治療剤の有効成分とす
る化合物の製造例及び之を用いた製剤例を挙げ
る。尚製造例は特開昭54−36255号公報の記載に
従つた。

製造例 １ スタキボトリス エスピー・Ｋ―76を500ml容
坂口フラスコに100mlの下記組成の培地を入れて
28℃、PH＝６で４日間往復振とう培養を行なう。

グリセリン 0.5％ デンプン 1.0％ 乳 糖 0.2％ 大 豆 粉 0.5％ 酵母エキス 0.1％ 麦芽エキス 0.2％ CaCO₃ 0.3％ MgSO₄ 0.05％ 前述で得られた種培養１本を30l容、ジヤーフ
アメンターに20の上記組成の培地を入れ培養温
度28℃、通気量１／ｇ培地・分、撹拌数300回
転／分で５日間培養を行なう。得られた培養液を
8000回転／分で遠心分離し菌体を除去し、この上
澄液に５のメタノールを加え撹拌して３時間放
置したのち、遠心分離して沈澱物を除去し、等量
の酢酸エチルで抽出する。酢酸エチル層の溶媒を
減圧下留去したのち、残渣をメタノールに溶かし
活性炭カラムを通過させ、溶出液を減圧下濃縮乾
固後、クロロホルム：酢酸エチル＝１：１（Ｖ／
Ｖ）に溶解させて、セフアデツクスLH―20のカ
ラムでゲル過し、薄層クロマトグラフイー〔酢
酸エチル―クロロホルム―酢酸（容積比50：50：
２）の混液を展開溶媒とする〕にてRf＝0.34に相
当する抗補体活性画分又は同様の薄層クロマトグ
ラフイー〔ベンゼン―ブタノール―酢酸（容積比
60：15：５）の混液を展開溶媒とする〕にてRf
＝0.58に相当する抗補体活性画分を集め、これか
ら溶媒を留去することにより、抗補体活性を有す
る淡黄色の弱酸性物質である６，７―ジヒドロキ
シ―２，５，５，8a―テトラメチル―１，２，
３，４，4a，５，６，７，８，8a―デカヒドロナ
フタレン―１―スピロ―2′―（6′，7′―ジホルミ
ル―4′―ヒドロキシ―2′，3′―ジヒドロベンゾフ
ラン）2.0ｇを得る。この化合物の生成は以下の
理化学的特性より確認される。

Γ〔α〕^２０ _Ｄ＝−48゜（Ｃ＝2.5、メタノール） Γ元素分析値 C₂₃H₃₀O₆として 計算値（％） C68.64、H7.51 実測値（％） C68.58、H7.55 Γ紫外線吸収スペクトル（U.V）分析 λエタノール_ｎａｘ＝246nm（ε＝16474） ＝307nm（ε＝6659） 製造例 ２ １mlの水に硝酸銀2.1ｇを溶かし、これに5.8モ
ル水酸化ナトリウム水溶液3.5mlを加え室温下20
分間撹拌後、製造例１で得た６，７―ジヒドロキ
シ―２，５，５，8a―テトラメチル―１，２，
３，４，4a，５，６，７，８，8a―デカヒドロナ
フタレン―１―スピロ―2′―（6′，7′―ジホルミ
ル―4′―ヒドロキシ―2′，3′―ジヒドロベンゾフ
ラン）の1.0ｇをエタノール３mlに溶かした液を
加える。反応媒体を室温下1.5時間撹拌したの
ち、2N塩酸でPH約２とする。反応液を同量の酢
酸エチルで抽出し、抽出液溶媒を減圧留去し、得
られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフイ
ー〔シリカゲル「ワコウＣ―200」和光純薬株式
会社製品、溶出液：クロロホルム―酢酸エチル―
酢酸（容積比100：50：２）〕で精製する。薄層ク
ロマトグラフイー〔酢酸エチル―クロロホルム―
酢酸（容積比50：50：２）の混液を展開溶媒とす
る〕にてRf＝0.37に相当する画分又は同様の薄層
クロマトグラフイー〔ベンゼン―ブタノール―酢
酸（容積比60：15：５）の混液を展開溶媒とす
る〕にてRf＝0.71に相当する画分を集め、これよ
り溶媒を留去することにより、淡黄色無定形晶の
４，８―ジヒドロキシ―６―オキソ―２，３，
６，８―テトラヒドロ―フロ〔３，４―ｇ〕ベン
ゾフラン―２―スピロ―1′―（6′，7′―ジヒドロ
キシ―2′，5′，5′，8′a―テトラメチル―1′，2′
，
3′，4′，4′a，5′，6′，7′，8′，8′a―デカヒド
ロナ
フタレン）の700mgを得る。上記化合物は次の理
化学的性質を示し、このことからその生成が確認
される。

Γ〔α〕^２０ _Ｄ＝−44.8゜（Ｃ＝0.9、メタノール） Γ元素分析値 C₂₃H₃₀O₇として 計算値（％） C66.03、H7.18 実測値（％） C65.93、H7.21 製造例 ３ 0.4N―水酸化ナトリウム水溶液５ml及びエタ
ノール５mlに、４，８―ジヒドロキシ―６―オキ
ソ―２，３，６，８―テトラヒドロ―フロ〔３，
４―ｇ〕ベンゾフラン―２―スピロ―1′―（6′，
7′―ジヒドロキシ―2′，5′，5′，8′a―テトラメチ
ル―1′，2′，3′，4′，4′a，5′，6′，7′，8′，
8′a―
デカヒドロナフタレン）418mgを加え、窒素気流
下に30〜40℃で０分間撹拌する。反応終了後減圧
下に溶媒を留去し、乾固し、残渣に、アセトン10
mlを加えて溶解する部分を去する。得られた粗
結晶を水―アセトンから再結晶して淡黄色無定形
晶の、ジソデイウム ６，７―ジヒドロキシ―
２，５，５，8a―テトラメチル―１，２，３，
４，4a，５，６，７，８，8a―デカヒドロナフタ
レン―１―スピロ―2′―（6′―カルボキシレート
―7′―ホルミル―4′―オキシド―2′，3′―ジヒド
ロベンゾフラン）の342mgを得る。得られた化合
物は次の理化学的性質を有し、このことからその
生成が確認される。

Γ〔α〕^２０ _Ｄ＝−44.2゜（Ｃ＝1.25、H₂O） Γ元素分析値 C₂₃H₂₈O₇Na₂として 計算値（％） C59.74、H6.10 実測値（％） C59.48、H5.91 Γ紫外線吸収スペクトル（U.V）分析 λ^Ｈ _２ ^Ｏ _ｎａｘ＝252nm（ε＝20500） ＝330nm（ε＝45900） 製剤例 １ 製造例３で得られた化合物 500mg ブドウ糖 250mg注射用蒸留水 適 量 全 量 ５ml 注射用蒸留水に製造例３で得られた化合物及び
ブドウ糖を溶解させた後５mlのアンプルに注入す
る。窒素で置換後121℃で15分間加圧滅菌を行
い、注射剤の形態の本発明肝炎予防及び治療剤を
得る。

製剤例 ２ 製造例２で得られた化合物 500mg半合成グリセライド基剤 適 量 全 量 1000mg 半合成グリセライド基剤に製造例２で得られた
化合物を加え、50℃で混合、懸濁させた後成形鋳
型に流し込み、自然冷却したのち取り出し坐剤の
形態の本発明の肝炎予防及び治療剤を得る。

製剤例 ３ 製造例３で得られた化合物 150ｇ アビセル（商標名、旭化成(株)製） 40ｇ コンスターチ 30ｇ ステアリン酸マグネシウム ２ｇ TC―５（商標名、ヒドロキシプロピルメチル
セルロース） 10ｇ ポリエチレングリコール―6000 ３ｇ ヒマシ油 40ｇ メタノール 40ｇ 製造例３で得られた化合物、アビセル、コンス
ターチ及びステアリン酸マグネシウムを取り混合
研摩後糖衣R10mmのキネで打錠する。得られた錠
剤をTC―５、ポリエチレングリコール―6000、
ヒマシ油及びメタノールからなるフイルムコーテ
イング剤で被覆を行ない、フイルムコーテイング
錠の形態の本発明の肝炎予防及び治療剤を製造す
る。

製剤例 ４ 製造例２で得られた化合物 100ｇ アゼセル 40ｇ コンスターチ 30ｇ ステアリン酸マグネシウム ２ｇ アクリル酸メチル―メタクリル酸共重合体
5.7ｇ トリアセチン 0.6ｇ エタノール 50.4ｇ 製造例２で得られた化合物、アビセル、コンス
ターチ及びステアリン酸マグネシウムを取り混合
研摩後糖衣R10mmのキネで打錠する。得られた錠
剤をアクリル酸メチル―メタクリル酸共重合体、
トリアセチン及びエタノールからなるフイルムコ
ーテイング剤で被覆を行ない腸溶錠の形態の本発
明肝炎予防及び治療剤を製造する。

以下本発明肝炎防及び治療剤の薬理試験結果を
示す。

＜肝炎予防及び治療効果測定試験＞ 人の劇症肝炎では、明確な誘因はないが、突然
広範囲な肝細胞壊死が発現し、意識障害等の重症
肝不全を伴い死亡する。現像としては上記広範囲
の肝細胞壊死と血清中のGOT（Glutamic
Oxalacetic Transaminase）及びLDH（Lactic
Dehydrogenase）値の上昇が認められる。この試
験はS.D系ラツト（体重約300ｇ）を供試動物と
して用い、森等〔肝臓、17，580〜589（1976）〕
の方法に従い、上記供試動物に劇症肝炎
（SCHW ARZMAN肝炎）を発症させることによ
り行なわれた。具体的には、上記S.D系ラツト各
５匹から成る実験群各４匹群に初回にエンドトキ
シン（LPS：E.Coli0.26：B6、Difco社製）の0.1
mg／bodyを腹腔内投与（注射）し、その48時間
後更に各群毎に同一エンドトキシンの0.05、
0.2、0.5又は1.2mg／bodyを夫々ブースター注射
し、また本発明の有効成分化合物を、上記エンド
トキシンの初回投与の２日前より１日１回５mg／
body宛６日間（第２回エンドトキシンのブース
ター投与後翌日迄）腹腔内投与（注射）し、第２
回エンドトキシンのブースター投与48時間後に、
各供試動物を屠殺し、各実験群屠殺ラツトの血清
中のGOT値及びLDH値を、UV法〔American
Journal of Clinical Pathology，47，419〜428
（1967）及びCancer Research，14，513〜515
（1954）〕に従い測定すると共に、肝障害発現程度
及び肝臓内エンドトキシン分布を、肝切片の顕微
鏡観察により調べた、各試験において本発明の有
効成分化合物としては、製造例２で得た化合物を
用いた。また各試験は、本発明有効成分化合物の
投与を行なわないコントロール群各四群について
も同様に行なわれた。

第２回のエンドトキシンブースター投与量を
0.5mg／bodyとした実験群及びコントロール群に
つき測定された血清GOT値及びLDH値を第１図
及び第２図に夫々示す。各図中Γ印は各供試動物
夫々における値であり、評価は上記各値を統計処
理した平均値±誤差により求められる。

第１図及び第２図より、本発明の有効成分化合
物を投与した群の血清GOT値及びLDH値は、コ
ントロール群に比し明らかに有意な低値を示して
いることが判る。これは本発明の有効成分化合物
が劇症肝炎（SCHWARZMAN肝炎）の発現を顕
著に抑制していることを示す。

また同実験群及びコントロール群の各供試動物
の肝切片の顕微鏡写真（倍率100倍）所見によれ
ば、コントロール群では肝細胞の巣状壊死と瀰慢
性の細胞変性が強く認められるのに対し、本発明
の有効成分化合物投与群では、上記細胞変性の程
度が極めて少なく、肝細胞障害の発現が顕著に抑
制されるか又は治療されていることが明らかであ
つた。

更に上記と同一の実験群及びコントロール群よ
り採取した肝切片を螢光抗体法〔Journal of
Experimental Medicine，91，１〜13（1950）〕
に従い螢光顕微鏡写真（倍率400倍）により観察
した所、コントロール群からの肝切片では、エン
ドトキシンがクツプエル細胞（Kupffer cells）
及び該クツプエル細胞外のいずれにも極めて多く
局在したが、本発明の有効成分化合物投与群から
の肝切片では、エンドトキシンの組織局在は、ク
ツプエル細胞において強い分布が認められる一方
該細胞外には極めて少なかつた。このことからも
本発明化合物はエンドトキシンの直接的な肝細胞
障害発現作用を顕著に抑制するか又は該障害を治
療していることが判る。

以上の通り本発明化合物は、試験された動物実
験系の劇症肝炎及び人のそれの予防及び治療に有
効であると共に、該肝炎に関連する例えばウイル
ス性肝炎、急性肝炎、亜急性肝炎、慢性肝炎等の
重症型肝炎等に有効である。

＜急性毒性＞ 製造例２で得られた化合物の急性毒性試験をI.
Vラツトにつき行なつた。その結果、該化合物の
LD₅₀値は、500mg／Kgであつた。

【図面の簡単な説明】

第１図及び第２図は、エンドトキシン誘発劇症
肝炎ラツトにおける本発明有効成分化合物投与に
よる血清中GOT値及びLDH値の低減効果を、コ
ントロールと共に示すグラフである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 式 及び式 で表わされるセスキテルペン類縁体並びに之等化
   合物の塩から選ばれた少なくとも１種を有効成分
   として含有することを特徴とする肝炎予防及び治
   療剤。