JPS62266064A - コラ−ゲン膜の製造方法 - Google Patents
コラ−ゲン膜の製造方法Info
- Publication number
- JPS62266064A JPS62266064A JP61110057A JP11005786A JPS62266064A JP S62266064 A JPS62266064 A JP S62266064A JP 61110057 A JP61110057 A JP 61110057A JP 11005786 A JP11005786 A JP 11005786A JP S62266064 A JPS62266064 A JP S62266064A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- collagen
- membrane
- collagen membrane
- solution
- sheet
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 title claims description 51
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 title claims description 51
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 title claims description 51
- 239000012528 membrane Substances 0.000 title claims description 35
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 7
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 6
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 6
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 claims description 4
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 210000001339 epidermal cell Anatomy 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 6
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 108010045569 atelocollagen Proteins 0.000 description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 3
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 3
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- 108010039627 Aprotinin Proteins 0.000 description 1
- 108010038061 Chymotrypsinogen Proteins 0.000 description 1
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 1
- 102000016942 Elastin Human genes 0.000 description 1
- 108010014258 Elastin Proteins 0.000 description 1
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 239000003929 acidic solution Substances 0.000 description 1
- 238000007605 air drying Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 229960004405 aprotinin Drugs 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 230000035605 chemotaxis Effects 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 229920002549 elastin Polymers 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000009415 formwork Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N iniprol Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@H]2CSSC[C@H]3C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=4C=CC=CC=4)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N3)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
- C08J3/00—Processes of treating or compounding macromolecular substances
- C08J3/28—Treatment by wave energy or particle radiation
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61F—FILTERS IMPLANTABLE INTO BLOOD VESSELS; PROSTHESES; DEVICES PROVIDING PATENCY TO, OR PREVENTING COLLAPSING OF, TUBULAR STRUCTURES OF THE BODY, e.g. STENTS; ORTHOPAEDIC, NURSING OR CONTRACEPTIVE DEVICES; FOMENTATION; TREATMENT OR PROTECTION OF EYES OR EARS; BANDAGES, DRESSINGS OR ABSORBENT PADS; FIRST-AID KITS
- A61F2/00—Filters implantable into blood vessels; Prostheses, i.e. artificial substitutes or replacements for parts of the body; Appliances for connecting them with the body; Devices providing patency to, or preventing collapsing of, tubular structures of the body, e.g. stents
- A61F2/02—Prostheses implantable into the body
- A61F2/10—Hair or skin implants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/14—Macromolecular materials
- A61L27/22—Polypeptides or derivatives thereof, e.g. degradation products
- A61L27/24—Collagen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08H—DERIVATIVES OF NATURAL MACROMOLECULAR COMPOUNDS
- C08H1/00—Macromolecular products derived from proteins
- C08H1/06—Macromolecular products derived from proteins derived from horn, hoofs, hair, skin or leather
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
- C08J5/00—Manufacture of articles or shaped materials containing macromolecular substances
- C08J5/18—Manufacture of films or sheets
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/0068—General culture methods using substrates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61F—FILTERS IMPLANTABLE INTO BLOOD VESSELS; PROSTHESES; DEVICES PROVIDING PATENCY TO, OR PREVENTING COLLAPSING OF, TUBULAR STRUCTURES OF THE BODY, e.g. STENTS; ORTHOPAEDIC, NURSING OR CONTRACEPTIVE DEVICES; FOMENTATION; TREATMENT OR PROTECTION OF EYES OR EARS; BANDAGES, DRESSINGS OR ABSORBENT PADS; FIRST-AID KITS
- A61F2310/00—Prostheses classified in A61F2/28 or A61F2/30 - A61F2/44 being constructed from or coated with a particular material
- A61F2310/00005—The prosthesis being constructed from a particular material
- A61F2310/00365—Proteins; Polypeptides; Degradation products thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
- C08J2389/00—Characterised by the use of proteins; Derivatives thereof
- C08J2389/04—Products derived from waste materials, e.g. horn, hoof or hair
- C08J2389/06—Products derived from waste materials, e.g. horn, hoof or hair derived from leather or skin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2533/00—Supports or coatings for cell culture, characterised by material
- C12N2533/50—Proteins
- C12N2533/54—Collagen; Gelatin
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明はコラーゲン膜の製造方法に関し、特に、動物細
胞の培養の基材として使用できるコラーゲン膜の製造方
法に関する。
胞の培養の基材として使用できるコラーゲン膜の製造方
法に関する。
本発明はコラーゲン膜の製造方法において、特定の方法
によってコラーゲン膜を製造することにより、 物質透過性のすぐれた透明なコラーゲン膜を得ることが
できるようにしたものである。
によってコラーゲン膜を製造することにより、 物質透過性のすぐれた透明なコラーゲン膜を得ることが
できるようにしたものである。
〔従来の技術及び発明が解決すべき問題点〕従来、動物
細胞を基材上で培養する場合、基材としてセルロース系
メンブランフィルタ−が多く用いられていた。しかし、
このメンブランフィルタ−は不透明であるためｇＪ微鏡
観察が不可能であった。更に、例えば、基材上で表皮細
胞を培養し、人工皮膚として生体に移植しようとする場
合、生体適合性の点で上記のセルロース系メンブランフ
ィルタ−基材として使用することは不可能であった。
細胞を基材上で培養する場合、基材としてセルロース系
メンブランフィルタ−が多く用いられていた。しかし、
このメンブランフィルタ−は不透明であるためｇＪ微鏡
観察が不可能であった。更に、例えば、基材上で表皮細
胞を培養し、人工皮膚として生体に移植しようとする場
合、生体適合性の点で上記のセルロース系メンブランフ
ィルタ−基材として使用することは不可能であった。
また、細胞による生体内の諸現象は、多種の細胞間の相
互作用によるものが多く、このような現象の研究には膜
を介して細胞を分離して培養することが行われ、物質透
過性のよい透明な膜が求められている。
互作用によるものが多く、このような現象の研究には膜
を介して細胞を分離して培養することが行われ、物質透
過性のよい透明な膜が求められている。
本発明者らは上記の問題点に鑑みて鋭意研究の結果、物
質の透過性のよく、透明で、特に動物細胞の培養に適し
たコラーゲン膜の製造方法を完成するに至った。
質の透過性のよく、透明で、特に動物細胞の培養に適し
たコラーゲン膜の製造方法を完成するに至った。
本発明は、コラーゲンの酸水溶液からコラーゲンシート
を形成する段階、このコラーゲンを塩類溶液中に浸漬す
る段階、及び、このコラーゲンシートに紫外線照射を行
う段階からなることを特徴とするコラーゲン膜の製造方
法に係る。
を形成する段階、このコラーゲンを塩類溶液中に浸漬す
る段階、及び、このコラーゲンシートに紫外線照射を行
う段階からなることを特徴とするコラーゲン膜の製造方
法に係る。
本発明のコラーゲンは酸可溶性コラーゲン、又は、天然
コラーゲンを酸水溶液、例えば酢酸水溶液中でプロテア
ーゼ、例えばペプシンで処理して、コラーゲン分子末端
のテロペプチドを除去すると同時に、分子架橋を切断す
ることによって得られるアテロコラーゲンであってよい
。
コラーゲンを酸水溶液、例えば酢酸水溶液中でプロテア
ーゼ、例えばペプシンで処理して、コラーゲン分子末端
のテロペプチドを除去すると同時に、分子架橋を切断す
ることによって得られるアテロコラーゲンであってよい
。
また、本発明におけるコラーゲンの酸水溶液に用いられ
る酸は塩酸であってよい。
る酸は塩酸であってよい。
本発明の塩類溶液はｐ Ｈ５〜９の、例えば、リン酸緩
衝塩類溶液であってよい。
衝塩類溶液であってよい。
本発明においては、コラーゲンシートを塩類溶液中に浸
漬してコラーゲンを線維化させた後、紫外線照射してコ
ラーゲン線維間に架橋を導入する。
漬してコラーゲンを線維化させた後、紫外線照射してコ
ラーゲン線維間に架橋を導入する。
以下、本発明を実施例につき更に詳細に説明する。
無菌的に調製した、牛真皮由来のアテロコラーゲンの０
．３〜１％酸性溶液を疎水性の容器に入れた型枠に溶液
の厚みが１〜５ｍｌになるように流し込み、これをクリ
ーンベンチ内で風乾してアテロコラーゲンシートをつく
った。次にこのシートを型枠から取りはずし、直径３３
ｍの円形シートを切り取り、プラスチック製の円筒枠の
内部に、円筒枠の内部空間をｌ’Ｆに隔離するように固
定した。
．３〜１％酸性溶液を疎水性の容器に入れた型枠に溶液
の厚みが１〜５ｍｌになるように流し込み、これをクリ
ーンベンチ内で風乾してアテロコラーゲンシートをつく
った。次にこのシートを型枠から取りはずし、直径３３
ｍの円形シートを切り取り、プラスチック製の円筒枠の
内部に、円筒枠の内部空間をｌ’Ｆに隔離するように固
定した。
次に、この円筒枠をシートと共にリン酸緩衝塩類溶液（
ＮａＣ１１５０ｍＭ、ＮａｚｌｌＰＯ４０，０２Ｍ 、
ｐＨ７，４）中に浸漬し、３７℃で１時間放置してコラ
ーゲンを線維化させた後、２０ｃｍの照射距離で３０分
間紫外線照射（出力１０Ｗ）を行い、コラーゲン線維間
に架橋を導入し、透明なコラーゲン膜を得た。
ＮａＣ１１５０ｍＭ、ＮａｚｌｌＰＯ４０，０２Ｍ 、
ｐＨ７，４）中に浸漬し、３７℃で１時間放置してコラ
ーゲンを線維化させた後、２０ｃｍの照射距離で３０分
間紫外線照射（出力１０Ｗ）を行い、コラーゲン線維間
に架橋を導入し、透明なコラーゲン膜を得た。
一方、比較のため、上述の方法と同様にして風乾して得
られたアテロコラーゲンシートを、塩類溶液の浸漬を行
わず、上述の紫外線照射によって分子間架橋を導入して
比較例のコラーゲン膜とした。
られたアテロコラーゲンシートを、塩類溶液の浸漬を行
わず、上述の紫外線照射によって分子間架橋を導入して
比較例のコラーゲン膜とした。
次に、これら２種の異なった方法により作製したコラー
ゲン膜の物質透過性を調べる実験を次の通り行った。
ゲン膜の物質透過性を調べる実験を次の通り行った。
２つの開口を有する適当な大きさの容器を、上述のコラ
ーゲン膜で２つの小室に分離し、一方の小室に次表に示
す各種タンパクを含んだ溶液７ｍｌを入れ、他方の小室
にタンパクフリーの溶液を７１１１１を入れ、この容器
を３７℃で２日間放置した。
ーゲン膜で２つの小室に分離し、一方の小室に次表に示
す各種タンパクを含んだ溶液７ｍｌを入れ、他方の小室
にタンパクフリーの溶液を７１１１１を入れ、この容器
を３７℃で２日間放置した。
分子量
（１）牛血端−７’ ）Ｌｔブミ７ ６６、００
０（２）オバルブミン ４５，０００（３）
ミオグロビ７ １７，０００（４）α−キモ
トリプシノーゲン２５．０００（５） チトクｔｌ）−
ムＣ１２，４００（６）アプロチニン ６
，０００この結果、塩類溶液の浸漬を行わなかったコラ
ーゲン膜では上記タンパクは、まったく透過しなかった
。
０（２）オバルブミン ４５，０００（３）
ミオグロビ７ １７，０００（４）α−キモ
トリプシノーゲン２５．０００（５） チトクｔｌ）−
ムＣ１２，４００（６）アプロチニン ６
，０００この結果、塩類溶液の浸漬を行わなかったコラ
ーゲン膜では上記タンパクは、まったく透過しなかった
。
一方、本発明の方法によって得られたコラーゲン膜では
、上記タンパクは、すべて透過していた。
、上記タンパクは、すべて透過していた。
なお、透過したタンパクの測定は、ＳＤＳポリアクリル
アミド電気泳動によって行った。
アミド電気泳動によって行った。
以上の実験によって、本発明のコラーゲン膜が物質の透
過性に勝れていることが確認された。
過性に勝れていることが確認された。
次に、本実施例及び比較例の方法により得られたコラー
ゲン膜を用いて表皮細胞の培養を行った。
ゲン膜を用いて表皮細胞の培養を行った。
まず、本実施例の方法により得られたコラーゲン膜を、
プラスチック製の円筒枠の内部に、円筒枠の内部空間を
上下に分離するように固定し、培養液を入れたシャーレ
内に置いた。この培養液としては、１０％仔牛脂児血清
と抗生物質とを含有するイーグルの最少必須培地（ダル
ベコによる変形）とＨＡＭ ｌ−１２とを３：１の割
合で混合したものから主としてなるグリーンのｍｅｄｉ
ｕｍを用いた。なお、この際、コラーゲン膜は、膜の下
面に気泡が入らないように培養液に浸漬し、コラーゲン
膜から円筒枠の各末端までの距離を２ｍｌ〜３１とし、
円筒枠の下部に高さ１龍のスペーサーを入れてコラーゲ
ン膜の下部の培養液と円筒枠外の培養液とが自由に置換
できるようにした。
プラスチック製の円筒枠の内部に、円筒枠の内部空間を
上下に分離するように固定し、培養液を入れたシャーレ
内に置いた。この培養液としては、１０％仔牛脂児血清
と抗生物質とを含有するイーグルの最少必須培地（ダル
ベコによる変形）とＨＡＭ ｌ−１２とを３：１の割
合で混合したものから主としてなるグリーンのｍｅｄｉ
ｕｍを用いた。なお、この際、コラーゲン膜は、膜の下
面に気泡が入らないように培養液に浸漬し、コラーゲン
膜から円筒枠の各末端までの距離を２ｍｌ〜３１とし、
円筒枠の下部に高さ１龍のスペーサーを入れてコラーゲ
ン膜の下部の培養液と円筒枠外の培養液とが自由に置換
できるようにした。
次に、コラーゲン膜の上面のみにヒト皮膚由来の表皮細
胞を約ｌＸＩＯ３個播種して、このシャーレを３７℃、
５％ＣＯ□のインキュベータ内に置き、表皮細胞を培養
した。この表皮細胞は分裂増殖し、培養後２０日１でコ
ラーゲン膜の全面に広がった・ 一方、塩類溶液の浸漬を行わなかった比較例のコラーゲ
ン膜を用いて上記と同様の培養を行ったが、培養後２０
１１目では表皮細胞は膜の一部にのみ増殖が認められた
。
胞を約ｌＸＩＯ３個播種して、このシャーレを３７℃、
５％ＣＯ□のインキュベータ内に置き、表皮細胞を培養
した。この表皮細胞は分裂増殖し、培養後２０日１でコ
ラーゲン膜の全面に広がった・ 一方、塩類溶液の浸漬を行わなかった比較例のコラーゲ
ン膜を用いて上記と同様の培養を行ったが、培養後２０
１１目では表皮細胞は膜の一部にのみ増殖が認められた
。
本発明は、コラーゲンの酸水溶液からコラーゲンシート
を形成し、このコラーゲンシートを塩類溶液中に浸漬し
、このコラーゲンシートに紫外線照射を行ってコラーゲ
ン膜を製造するようにしている。
を形成し、このコラーゲンシートを塩類溶液中に浸漬し
、このコラーゲンシートに紫外線照射を行ってコラーゲ
ン膜を製造するようにしている。
このため、物質の透過性が良好で透明なコラーゲン膜を
製造することができる。
製造することができる。
また、本発明によれば、コラーゲン膜の上に表皮細胞を
効率良く培養でき、これを人工皮膚としてこのまま移植
することができる。
効率良く培養でき、これを人工皮膚としてこのまま移植
することができる。
本発明により製造されたコラーゲン膜を用いることによ
って、 ２種の細胞を両面に分けて培養し、２種の細胞間の相互
作用を研究することができ、 コラーゲン膜の一方の面に細胞を培養し、他方の面に、
エラスチンといった物質を被覆し、この物質への細胞の
走化性を調べることができる。
って、 ２種の細胞を両面に分けて培養し、２種の細胞間の相互
作用を研究することができ、 コラーゲン膜の一方の面に細胞を培養し、他方の面に、
エラスチンといった物質を被覆し、この物質への細胞の
走化性を調べることができる。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 コラーゲンの酸水溶液からコラーゲンシートを形成する
段階、 このコラーゲンシートを塩類溶液中に浸漬する段階、及
び このコラーゲンシートに紫外線照射を行う段階、からな
ることを特徴とするコラーゲン膜の製造方法。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61110057A JPS62266064A (ja) | 1986-05-14 | 1986-05-14 | コラ−ゲン膜の製造方法 |
| EP87303953A EP0246013A3 (en) | 1986-05-14 | 1987-05-01 | Method of making collagen film |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61110057A JPS62266064A (ja) | 1986-05-14 | 1986-05-14 | コラ−ゲン膜の製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62266064A true JPS62266064A (ja) | 1987-11-18 |
Family
ID=14525991
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61110057A Pending JPS62266064A (ja) | 1986-05-14 | 1986-05-14 | コラ−ゲン膜の製造方法 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0246013A3 (ja) |
| JP (1) | JPS62266064A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH02156954A (ja) * | 1988-12-09 | 1990-06-15 | Sangi:Kk | 生物学的機能を有するコラーゲン膜の製造法 |
| JPWO2005047496A1 (ja) * | 2003-11-14 | 2007-05-31 | 学校法人慶應義塾 | 細胞培養法、細胞の三次元培養法、三次元組織、人工臓器、及び組織移植方法 |
| JP2018522091A (ja) * | 2015-06-03 | 2018-08-09 | セウォン セロンテック カンパニー リミテッドＳｅｗｏｎ Ｃｅｌｌｏｎｔｅｃｈ Ｃｏ．，Ｌｔｄ． | 紫外線を用いたコラーゲンフィルムの製造方法、これを用いて製造されたコラーゲンフィルム、およびコラーゲンフィルムを用いて製造された生体材料 |
| JP2019516772A (ja) * | 2016-06-01 | 2019-06-20 | セウォン セロンテック カンパニー リミテッドＳｅｗｏｎ Ｃｅｌｌｏｎｔｅｃｈ Ｃｏ．，Ｌｔｄ． | 透明肌保護膜を形成する剤形の化粧料組成物 |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5024742A (en) * | 1988-02-24 | 1991-06-18 | Cedars-Sinai Medical Center | Method of crosslinking amino acid containing polymers using photoactivatable chemical crosslinkers |
| US5660692A (en) * | 1988-02-24 | 1997-08-26 | Cedars-Sinai Medical Center | Method of crosslinking amino acid-containing polymers using photoactivatable chemical crosslinkers |
| EP0529751A1 (en) * | 1991-08-09 | 1993-03-03 | W.R. Grace & Co.-Conn. | Cell culture substrate, test material for cell culture and preparations thereof |
| CA2075259A1 (en) * | 1991-08-26 | 1993-02-27 | Junsheng Sang | Expression cloning method |
| US20020086423A1 (en) | 1997-09-09 | 2002-07-04 | Toshiaki Takezawa | Hydrogel thin film containing extracellular matrix components |
| US9452240B2 (en) | 2013-03-15 | 2016-09-27 | Orthovita, Inc. | Pepsinized collagen implants and biomedical uses thereof |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS4939174A (ja) * | 1972-08-19 | 1974-04-12 | ||
| JPS5832876B2 (ja) * | 1981-03-27 | 1983-07-15 | 呉羽化学工業株式会社 | 組織培養基材 |
| JPS61207340A (ja) * | 1985-03-13 | 1986-09-13 | Koken:Kk | コラーゲン基質の細胞増殖性向上処理方法 |
| JPS62246371A (ja) * | 1986-04-19 | 1987-10-27 | 株式会社 高研 | 人工皮膚及びその製造方法 |
-
1986
- 1986-05-14 JP JP61110057A patent/JPS62266064A/ja active Pending
-
1987
- 1987-05-01 EP EP87303953A patent/EP0246013A3/en not_active Withdrawn
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH02156954A (ja) * | 1988-12-09 | 1990-06-15 | Sangi:Kk | 生物学的機能を有するコラーゲン膜の製造法 |
| JPH0669486B2 (ja) * | 1988-12-09 | 1994-09-07 | 株式会社サンギ | 生物学的機能を有するコラーゲン膜の製造法 |
| JPWO2005047496A1 (ja) * | 2003-11-14 | 2007-05-31 | 学校法人慶應義塾 | 細胞培養法、細胞の三次元培養法、三次元組織、人工臓器、及び組織移植方法 |
| JP2018522091A (ja) * | 2015-06-03 | 2018-08-09 | セウォン セロンテック カンパニー リミテッドＳｅｗｏｎ Ｃｅｌｌｏｎｔｅｃｈ Ｃｏ．，Ｌｔｄ． | 紫外線を用いたコラーゲンフィルムの製造方法、これを用いて製造されたコラーゲンフィルム、およびコラーゲンフィルムを用いて製造された生体材料 |
| JP2019516772A (ja) * | 2016-06-01 | 2019-06-20 | セウォン セロンテック カンパニー リミテッドＳｅｗｏｎ Ｃｅｌｌｏｎｔｅｃｈ Ｃｏ．，Ｌｔｄ． | 透明肌保護膜を形成する剤形の化粧料組成物 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0246013A2 (en) | 1987-11-19 |
| EP0246013A3 (en) | 1988-08-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0418035B1 (en) | Living tissue equivalents | |
| JPS62246371A (ja) | 人工皮膚及びその製造方法 | |
| JPWO2005079879A1 (ja) | コラーゲンゲルおよびその製造方法 | |
| JPH0271750A (ja) | フィブリン―コラーゲン組織相当物、その製造方法及び使用方法 | |
| JPS6133593B2 (ja) | ||
| JPS62266064A (ja) | コラ−ゲン膜の製造方法 | |
| JP6758616B2 (ja) | 細胞培養方法及び培養組織 | |
| DE50004951D1 (de) | Verfahren zur Herstellung von stabilem Alginatmaterial | |
| JP6240997B2 (ja) | ガラス化後のハイドロゲル膜の製造方法、ハイドロゲル材料の製造方法、ガラス化後のハイドロゲル膜、ガラス化後のハイドロゲル膜の乾燥体および細胞シート | |
| CN112870453B (zh) | 一种明胶-iii型胶原蛋白水凝胶以及制备方法和应用 | |
| EP3967748A1 (en) | Nanocellulose 3d matrix for cultivating human and animal cells in vitro | |
| WO2019064807A1 (ja) | コラーゲンビトリゲル及びその精製物の製造方法並びに当該方法により得られたコラーゲンビトリゲル及びその精製物 | |
| JP3437430B2 (ja) | コラーゲン成形体及びコラーゲン成形体の作製法 | |
| EP0420171A1 (en) | Carrier for culturing animal cells and a process for preparing it | |
| JP2628536B2 (ja) | 細胞培養用基材 | |
| JPWO2003094985A1 (ja) | 人工細胞外マトリックス及びその製造方法 | |
| JP2015223108A (ja) | 細胞培養チャンバーとその製造方法、細胞培養チャンバーを利用した細胞培養方法および細胞培養キット | |
| ATE132875T1 (de) | Verfahren zur herstellung von zellprotein mit anti-hiv-wirkung | |
| JPH0759812A (ja) | 創傷カバ−材及びその製造方法 | |
| CN112789064A (zh) | 水凝胶膜及其使用 | |
| JP7203376B2 (ja) | 口腔粘膜上皮細胞培養用の架橋線維化コラーゲンゲル | |
| RU2014359C1 (ru) | Трехмерный биоактивный носитель для культивирования животных клеток и тканей | |
| Bauer et al. | Alteration of subcultured keratinocytes to a keratinizing epithelium | |
| JPS6152280A (ja) | 細胞培養床 | |
| JPH0160126B2 (ja) |