JPS62265229A - シアロシルコレステロ−ルの神経障害疾患治療剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明：′！、末梢神経系又は中枢神経系の障害に起因
する各種疾患の治療に有用な薬剤としてのシアロシルコ
レステロールに関する。

〔従来の技術〕

神経系障害に起因する疾患は難治のものが多くその治療
用薬剤も種類が少なく現在、メコバラミン（医薬　−船
名）が代表的なものであるが、その効果も未だ十分でな
く、さらに良好なる治療薬の開発が望まれている。

動物の神経刺激伝達系に重要な役割をもつものとして、
ガングリオシドなどの酸性糖脂質やホスファチジルイノ
シトール、ホスファチジルセリンなどの酸性リン脂質が
知られている。

またシアル酸は動物或いは細菌の細胞表面にシアロ複合
体（糖蛋白、糖脂質、オリゴ糖、多糖類等）と共に特異
的な活性分子として存在し、近年免疫癌、炎症、ウィル
ス感染、細胞分化、ホルモン受容体等に関与する物質と
して、医学的且つ薬理学的に注目されつつあるが、シア
ロシルコレステロールの神経障害疾患治療効果について
は発明されていない。また本発明では神経突起生長促進
作用の測定として一般的に購入でき、培養も比較的容易
な神経芽腫瘍細胞Ｎｅｕｒｏ　２ａを用いた・〔発明の
目的〕 従って、本発明は、シアル酸Ｎａ塩にすることにより、
水溶性を増大させ、医薬品としての用途を拡大し、末梢
神経系又は中枢神経系の障害に起因する各種疾患の治療
に有用なシアロシルコレステロールを提供するものであ
る。

〔発明の構成〕

本発明は、シアロシルコレステロールについてマウス由
来の神経芽腫瘍細胞（Ｎｅｕｒｏ　２ａ）の培養にこれ
を用いて、その活性を試験したところ、神経突起の生長
を促す作用を有するとの知見に基づくものである。

すなわち本化合物は式（Ｉ）： 」 及び、式（■）： ｌｌｌ で表わされる化合物を含有することを特徴とする神経障
害疾患治療剤を提供するものである。

−本発明化合物（Ｉ）（ＩＩ）の製造方法は一般に、式
（ＩＩＩ） で表わされる化合物を、Ｋｏｅｎｉｇ；５−Ｋｎｏｒｒ
反応用触媒の存在下にコレステロールと常圧で約２０〜
２５℃の温度で、約２〜７日反応させる。その際、コレ
ステロールは、化合物（■）１モルに対して約２〜５倍
モル用いる。得られた反応生成物はカラムクロマトグラ
フィーのごとき常法により、単離精製される（特願昭６
０−６９７４１号参照）。

尚、上記化合物（Ｉ）は容易に人手可能な公知化合物で
ある。

更に、上記生成物を加水分解し、メトキシカルボニル基
をカルボキシルナ）　ＩＪウム基に、アセチル基を水素
に変換し、化合物（■）（α体）、化合物（■）（β体
）を得る。この工程について、以下に実施例で示す。

製造例１ ３β−０−（４’−アセタミドー２’、４’−ジデオキ
シ−３’、６’、７’、８’−テトラ−○−アセチルー
１′−メトキシカルボニル−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガ
ラクトー１′−オクトピラノシル）コレスト−５−エン
（化合物（■））の５０ｍｇを、メタノールの１００−
に溶かして攪拌しながら２Ｎ水酸化す）　ＩＪウム水溶
液の２０Ｉｎ１弱を滴下して約０．２Ｎ水酸化ナトリウ
ム／メタノール溶液とし、室温で一晩攪拌することによ
りけん化を行った。

引き続き、攪拌しながらダウエックス（Ｄｏｗｅｘ）５
０　Ｗ　（Ｈ−）ｒｅｓｉｎを加えていき、溶液のｐＨ
を酸性（約ｐＨ４）に調整した後、その樹脂を除き、減
圧下乾燥し３β−〇−（４′−アセタミド−２′。

４′−ジデオキシ−１′−力ルボキシーＤ−グリセロ−
α−Ｄ−ガラクト−１′−オクトピラノシル）コレスト
−５−エンとして、白色粉末とじて得、次にこれらをそ
れぞれ０．０２　Ｎ水酸化す）　ＩＪウム水溶液に溶か
し、ダイヤイオン（Ｄｉａｉｏｎ）　ＨＰ２０樹脂カラ
ムに通して吸着させ、水洗後、７５％メタノール水にて
溶出し、メタノールを留去後、凍結乾燥して、ナトリウ
ム３β−○−（４′−アセタミド−２’、４’−ジデオ
キシ−１′−力ルボキシー〇−グリセロ−α−Ｄ−ガラ
クト−１′−オクトピラノシル）コレスト−５−エナー
ト（化合物（■））を白色粉末として得た（３７ｍｇ。

９１％）。

製造例２ 化合物（ＴＶ）の５０ｍｇを、メタノール１０〇−に溶
かして、２Ｎ−ナトリウム水溶液の２０−を加えて、室
温で一晩攪拌することにより、けん化を行ない、引き続
き、ダウエックス（口ｏｗｅｘ）　５０ＷＸ８（Ｈ”）
樹脂を加えて攪拌し、溶液のｐＨを７〜８とした後、吸
引ろ過、メタノールで洗浄することにより、その樹脂を
除き、ろ液および洗浄液をまとめて減圧下、メタノール
を留去、析出してきた白色不溶物はろ過後、ろ液を凍結
乾燥することにより、化合物（Ｉ）を白色粉末として得
た（３９ｍｇ、９６％）。

〔化合物（１）の物理化学的性状〕 ＦＤ−ＭＳ　（ｍ／　ｚ　）　；７２２（Ｍ＋Ｎａ）、
　７００（Ｍ＋１）。

３８６、３３６．３１４゜ 元素分析（％）　　ＣｓａＨｇｚＯｓＮＮａ　・２Ｈ２
０計算値：　Ｃ，６１，９６、Ｈ，８，４２；　Ｎ、　
１．９０゜実測値：　Ｃ，６１，９２；　　Ｈ，８，７
１；　Ｎ、　２．０４゜〔α）２４：＋２．２°　（Ｃ
，１，０メタノール）Ｉ　Ｒ１７Ｋ”　Ｃｍ−’：　３
２５０．　２９４０．　１６０５゜’　Ｈ−Ｎ　ＭＲ（
４００ＭＨｚ、　　ｉｎ　ＣＤ３０Ｄ）　　δＨ：０．
７０４（３Ｈ，ｓ、１８−！、ｌｅ）　　０．９９２（
３Ｈ，ｓ、１９−Ｍｅ）０、９３６　（３）１．　ｄ、
　Ｊ＝６．５Ｈｚ、　２ｌ−１４ｅ）０、８７０．０．
８８５　（３Ｈｘ　２．　ｄ、　Ｊ＝１．７Ｈｚ、　２
６．２７−Ｍｅ）２、０１０　（３Ｈ，ｓ、　ＮＡｃ） ２、８３９　（ＩＨ，ｄｄ、　Ｊ＝４．２．１２．０Ｈ
ｚ、　２　’　−）１ｅｑ）５、３３２　（ＩＨ，ｄ、
　Ｊ＝５．５Ｈｚ、　６−Ｈ）１３ＣＮ　Ｍ　Ｒ（１０
０ＭＨｚ、　　＋ｎ　ＣＤ３０Ｄ）　　δＣ：１７５．
９１（ＮＡｃ）　　１７５．２６（１’−ＣＯＯＮａ）
１４２．８７（Ｃ−５）　　１２２．５９（Ｃ−６）　
　１０２．５７（Ｃ−１′）７０．５０（Ｃ−３）　　
　４１．００（Ｃ−２）製造例３ ３β−０−（４’−アセタミドー２’、４’−ジデオキ
シ−３’６’７’８’−テトラ−○−アセチルー１′−
メトキシカルボニル−Ｄ−グリセロ−β−Ｄ−ガラクト
ー１′−オクトピラノシル）コレスト−５−エン（化合
物（■））を化合１　（ＴＶ）の代わりに用いる他は製
造例１と同様に操作し、ナトリウム３β−０−（４’−
アセタミドー２′。

４′−ジデオキシ−１′−カルボキシ−Ｄ−グリセロ−
β−Ｄ−ガラクトー°１′−オクトピラノシル）コレス
ト−５−エナート（化合物（ＩＩ））ヲ得た（３６ｍｇ
、８８％）。

製造例４ 化合物（Ｉ’Ｖ）の代わりに化合物（Ｖ）を用いる池は
実施例２と同様に操作し、化合物（ＩＩ）を得た（４０
ｍｇ、　９８％）。

〔化合物（ＩＩ）の物理化学的性状〕

ＦＤ−ＭＳ　（ｍ／　ｚ　）　　；７２２（！、（＋Ｎ
ａ）、　７００Ｅ＝１）。

３８６゜ 元素分析（％）　　Ｃ３８Ｈ１１２０，ＮＮａ　Ｈ８２
０計算値：　Ｃ，６３，５２；　　Ｈ，８，９１；　Ｎ
、　１．９５実測値：　Ｃ，６３，８１；　　Ｈ，９，
２５；　Ｎ、　２．１３〔α：］”　　：　　−１０，
６°　（Ｃ１，０メタノール）ｒ　Ｒｖ”’　ｃｍ−’
　　：　３２７０．　２９５０．　１６０８’　ＨＮ　
ＭＲ（４００ＭＨｚ、　　ｉｎ　ＣＤ３０Ｄ）　　δＨ
；０．７００（３Ｈ，ｓ、１８−Ｍｅ）　　０．９９１
（３Ｈ，ｓ、１９−Ｍｅ）　　　　’０、９２８　（３
Ｈ，ｄ、　Ｊ＝６．５Ｈｚ、　２１−！Ｊｅ）０、８６
１．０．８８０　（３ＨＸ２．　ｄ、　Ｊ＝１．５Ｈｚ
、　２６．２７−Ｍｅ）１、９７２　（３Ｈ，ｓ、　Ｎ
Ａｃ） ２、４８２　（ＩＨ，ｄｄ、　Ｊ＝４．５．１３．０Ｈ
ｚ、　２　’　−）１ｅｑ）５、２８２　（ＬＨ，ｄ、
　Ｊ＝５．３Ｈｚ、　６−Ｈ）”　ＣＮ　Ｍ　Ｒ（１０
０Ｍｔｌｚ、　　＋ｎ　ＣＤ３０Ｄ）　　δＣ：１７６
、９５（ＮＡｃ）　　１７４．５１　（１’　−ＣＯＯ
Ｎａ）１４３．０８（Ｃ−５＞　　１２２．４６（Ｃ−
６）　　１０１．３７（Ｃ−１’）７２、３７　（Ｃ−
３）　　　４３．８２　（Ｃ−２’　）別紙に本化合物
の合成の工程を図示する。

スキ ＯＨ（１） Ａｃ旧ブ　ヘ＼−７１ 一ム Ａｃ （Ｖ） 本発明化合物の投与方法は経口、非経口とも可能である
が、点眼、吸入、筋肉注射、皮下注射、静脈注射が好ま
しい。投与量は疾患の程度と患者の体重に依存するが、
０．００１〜０．２ｍｇが好ましい。　本発明の薬剤に
つき実施例に示す。本発明はこれらに限定されるもので
はない。

実施例１　注射剤 ｌアンプル中に本発明化合物２．５ｍｇ、’Ｊン酸二水
素ナトリウム２水塩０．２５ｍｇ、リン酸水素二ナトリ
ウム１２水塩３ｍｇ及び、注射用蒸留水を含有させ、全
量が１−である注射剤を調製した。

実施例２　用時溶解注射剤 １バイアル中に本発明化合物０．５ｍｇ及び生理食塩水
１ｒｎｌを含有させ、凍結乾燥せしめた注射剤、注射用
蒸留水１ｍｌを用い、溶解して使用した。

実施例３　点眼剤 ｌバイアル中に本発明化合物１ｍｇ、ホウ酸５２．５ｍ
ｇ、ホウ砂１４．５ｍｇ、塩化ベンザルコニウム適量及
び、点眼用溶解液を含有させ、全量が５−である点眼剤
を調製した。

実施例４　吸入剤 本発明化合物をメノー乳鉢に入れよくすりつぶし、粒径
が１〜２０μの微粉末とした。これに乳糖を入れ、粉砕
混合し、さらにこの微粉末に少量ずつ乳糖を加えてよく
すり混ぜ、２０〜４０倍敗とした。この２０〜４０ｍｇ
を常法によりカプセル又は分包し、製剤とした。

カプセルは粉末エアゾル用、分包剤は、液体エアゾル用
とした。

次に本発明化合物（Ｉ）及び（ＩＩ）の神経突起生長促
進作用を確認した試験について述べる。

試験例１　神経芽腫癌細胞Ｎｅｕｒｏ　２ａ株増殖に対
する効果 神経芽腫癌細胞Ｎｅｕｒｏ　２ａを牛胎児血清（以下Ｆ
Ｃ３と略す）を含む培養液［Ｄｕ　１ｂｅｃｃｏのＭｏ
ｄｉｆｉｅｄ　Ｅｏｇｌｉｓ　Ｍｅｄｉｕｍ　９　Ｑ％
　Ｆｅ２１０％より成りペニシリンＧを１００単位／ｍ
ｌ及びストレプトマイシン硫酸塩１００μｇ７ｍｌを含
有する〕に浮遊させ、３７℃で空気中に５％の炭酸ガス
を含む炭酸ガス培養器中で培養した。容器として６０＋
ｎｍのポリスチレン皿を用い、各容器あたり１〜２Ｘ１
０’個を播種し、４８時間培養したものを試験に用いた
。細胞培養液よりＦＣ３含有培養液を除去した後、Ｆｅ
３を含有しない培養液（ＲＰＭＩ５０％　ＭＥＭ５０％
　抗生物質は前記培養液と同濃度含有）に、被験物質と
して化合物（Ｉ）（表１）、（■）（表２）、Ｇａｊｉ
Ｍβ１−３　）　Ｇａ　ｊ！Ｎａｃ（β１−４）［ＮＡ
ｃＮｅｕ−（β２−３）］Ｇａｆ（β１−４　）　Ｇ　
ｊ２ｃ（βｌ　−１＞−Ｃｅｒａｍｉｄｅ　（以下ＧＭ
１と略す）（表３）、［ＮＡｃＮｅｕ（β２−８）　Ｎ
ＡｃＮｅｕ　（（２２−３）］　−Ｇａｊ！　（β１−
３）ＧａｌＮＡｃ（β１−４　）　−ＣＮＡｃＮｅｕ　
（β２−８）ＮＡｃＮｅｕ（β２−３）］　−Ｇａｊ２
　（β１−４）Ｇｌｃ（βｌ　−１）　−Ｃｅｒａｍｉ
ｄｅ　（以下Ｇ　Ｑ　１ｂと略す）（表４〉の所定量を
各々加え、同様にして培養を継続した。薬剤を加えて２
４時間後と４８時間後に、各培養容器中の生細胞数の増
加、神経突起の数の増加、及び神経突起の長さの伸長を
測定した。

実験は各濃度３皿で行った。測定値は平均値±標準誤差
（Ｓ、Ｅ、）で表わした。

（結果） 試験例１の結果において４８時間後の測定で、化合物（
１）の最小有効濃度をＧＭ、　、ＧＱ、ｂと比較すると
、化合物（Ｉ）の最小有効濃度はｌＯｎｇ／−１ＣＭ、
は１０μｇ／−１ＧＱ、、は１０ｎｇ／ｒｎ１で、各々
の分子量を考え合わせると、化合物（１）はＧ　Ｍ　ｌ
の４２０倍、ＧＱ＋ｂの２７０倍の活性を示す。また４
８時間後の測定で、化合物（ＩＩ）の最小有効濃度をＧ
ＭＩ　、ＧＱ、ｂと比較すると、化合物（ＩＩ）の最小
有効濃度は１１００ｎ／−で化合ｍ（ＩＩ）はＧＭ、の
４２倍、ＧＱＩｂの２７倍の活性を示す。また、ＧＭ、
　、ＧＱ＋ｂは２４時間後で活性が出ていないのに対し
、化合物（Ｉ）、（ＩＦ）は、２４時間後１０ｒ１ｇ／
ｒｎｌから活性が出ており、強力な神経突起生長活性を
もつことが示される。

（急性毒性試験） 急性毒性試験はｄｄｙ系雄性マウス４５週令に静脈内注
射を行ない結果はＬ　Ｄｉｏ”　９３ｍｇ／ｋｇ　（化
合物（１）　）　、ＬＤｇｏ＝　２９１ｍｇ／ｋｇ　（
化合物（■））であった。

手続補正書 １．事件の表示　　　昭和６１年特許願第１０８２２８
号３、補正をする者 事件との関係　　　出願人 名　　弥　　　　　メ　　り　　ト　株　式　会　社４
、代理人 ５、補正命令の日付　　自　　　発 １、　明細書第３頁第１９行の“免疫層”を「免疫、癌
」と訂正する。

２、同第１２頁の化合物（ＩＩ）を、以下のように訂正
する。

「 」 ３、同第１３頁第４行の”　０．２　ｍｇ　”をｒｌｏ
ｍｇＪと訂正する。

４、同第１６頁第６行の’１０ｎｇ″′を「１０μｇＪ
と訂正する。

５、同第１９頁表２、下表（４８時間後）の右から第２
欄、第２行の“４．９３””をｒ４．９３ｊと訂正する
。

６、同表２、下表（４８時間後）の右から第２１閲第３
行の“６．２３””をｒ６．２３”Ｊと訂正する。

７、同第２１頁表４、下表（４８時間後）の右から第１
欄末行“Ｕ、Ｃ，５”をｒｕ、ｃ、　」と訂正する。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）化合物（ I ）： ▲数式、化学式、表等があります▼ 及び化合物（II）： ▲数式、化学式、表等があります▼ で表わされるシアロシルコレステロールを含有すること
   を特徴とする神経障害疾患治療剤。
2. （２）神経障害疾患治療剤が点眼剤、吸入剤、静脈注射
   剤、筋肉注射剤、皮下注射剤の形態にある、特許請求の
   範囲第（１）項記載の神経障害疾患治療剤。