JPS62261062A - 蛋白質検出用インキ組成物および検査体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 【産業上の利用分野】 本発明は、溶液特に尿、通液、リンパ液等の体液中の尿
白舅を検出するための検査体を形成するのに適したイン
Ｙ組成物並びにそれを用いで形成された検査体に閏ケる
。 （従来の技術］ 尿、血液或いはリンパ液等の体液中の蛋白質の吊’Ｆｉ
：　３Ｂ速に■つ曲中に知ることは、腎疾患の早期Ｒ見
及び診断並びに治療に大さな役に１を巣している。 体液特にｌｌＲ中の生白？１へ・検出覆るには、従来上
として、蛋白誤差を承り指示薬及び緩衝剤を含む溶液に
、吸水性担体を浸油し、次いでこの担体を乾燥した後こ
れを支１４体上に貼付して検査体８製造し、この検査体
により蛋白質を検出していた。 この検査体１．を使用に際して操作が０９甲でしがも判
定が知時間（行なえるという利貞があるが、この検査体
は製造工程が繁雑であり、このため大量生産には適さな
いという問題点があった。 このため製造工程を簡素化しつる蛋白質検出用試験片も
提案されており、実公昭４４−２３７５６号公報には、
蛋白誤差を示す指示薬、　ＯＨ緩衝剤及びポリビニルア
ルコールからなる試薬混合物を支持体上に４肴しでなる
検出パターンを有する検尿用紙コツプが開示されている
。また実開昭５７−７９７＋３７号公報には、蛋白誤差
を示す指示薬、緩衝剤、結合剤及び吸水性粉末からなる
試薬組成物を支持体上にパターン印ｆｌｌ　Ｌでなる蛋
白質検出用試験片が提案されている。 【発明が解決しようとする問題点］ しかしながら、これらの試験片では、被検体液中に試験
片を浸漬した場合、試験片上の試薬組成物の一部が検体
中に分散し、検査試薬部の形態が変化し、該検査試薬部
並びに該検査試薬部に隣接する検査試薬部における呈色
に影響を及ぼし、極端な場合には誤った判定結果を与え
る欠点があった。 本発明者らは、上記問題点を解決するため研究を行った
結果、蛋白質検出用試薬組成物中に特定の形態保持剤を
添加することにより、検査体を検体中に浸漬した場合の
試薬組成物が検体を吸収ツることに伴う検査試薬部の形
態変化を防止することができることを見出した。 本発明は、優れた感度を有する蛋白検出用インヤ組成物
並びにそれを用いて形成された製造工程が筒中で、取扱
いに便利な１白検出用検査体を提供することを目的とす
る。更に、本発明は検査体を検体に浸漬した場合に検査
試薬部の形態変化のない、呈色が均一鮮明ぐあるような
蛋白検出用インｖ、ＩＩ酸物並びにそれを用いて形成さ
れた検査体をｑ供することを目的とする。 （問題Ｊｊスを解決するための手段］ 本発明に係る蛋白質検出用インキ組成物は、蛋白質誤差
を示す指示薬、ｐＨ！１ｌｌｉ剤、蛋白質吸着性のイオ
ン交換体、形態保持剤、結合剤、及び吸水性粉末からな
る試薬組成物が溶剤中に溶解或いは分散されたものであ
る。また本発明に係る蛋白質検出用検査体は、上記蛋白
質検出用インキ組成物を、支持体上に塗布した蛋白質検
出領域を有するものである。 形態保持剤としては官能基としてカルボキシル基を有す
る水膨潤性Ｉａ４脂を使用する。 被検体液の蛋白質の検出は、酸側のｐＨに保たれた蛋白
誤差を示す指示薬（例えばｉ゛トラブロモブルーに、被
検体液中の蛋白質が接すると、該指示薬と蛋白質とが複
合物を形成して、酸性色である黄色から、塩基性色であ
る青色に変色し、この変色の程度は被検体液中に存在す
る蛋白質の量に対応するので、この原理を利用して行わ
れる。 以下に、本発明に係る蛋白質検出用インキ組成物を構成
する各成分について詳細に説明づる。 イ）蛋白誤差を示１指示薬 この指示薬は上記のような原理に従って挙動する指示薬
であるが、具体的には、テトラブロモフェノールブルー
、５トラブロモチモールブルー。 デトラブロモフェノールフタレインエチルエステル、ブ
トラブ口モベンズアラリン、プロモチ１−ルグルー等を
用いることがｒきる。これらのうらテトラブロモフェノ
ールブルーが感度的に優れており好ましい。 口）ｐ１１緩衝剤 ｐＨ緩衝剤は、上記の蛋白誤差を示づ指示薬が色彩変化
を起ｉｐＨの近くにｐＨ値を保つために用いられる。ｐ
Ｈ緩衝剤としては、所定のｐＨ値（例えばｐＨ３〜４）
を試薬組成物に与えうるちのであれば何れのものでもよ
いが、具体的にはりＪ、ン酸とクエン酸ノトリウムとの
組合せが好ましく用いられる。 但しこの酸性側のｐｌ＋緩衝剤若しくは指示薬の吊が過
剰Ｃあると、蛋白誤差を示づ〒色反応が妨害されること
があるため、酸性側のＯＨ緩衝剤若しくは指示薬の使用
量は最小限にとどめるべきである。 前記指示薬として、５］−ラブロモフェノールブルーを
用いた場合には、イン↑組成物の固形分に対して０．０
２〜０．１小船％の吊で存在づることが好ましい。 ハ）ホ白？￥吸看性のイオン交換体 このイオン交換体としＣは、強酸Ａ陽イオン交操体（官
能基−３０３Ｍ）、弱酸性陽イオン交換体（−ＣＯＯ１
４）、強塩基性イオン交換体（−Ｎ”　Ｒ，Ｘ−。 −Ｎ”　（ＣＨ）　　（ＣＨ２ＣＨ３０Ｈ）　）　、弱
塩基性陰イオン交換体（−Ｎ（Ｒ）２、−ＮＨ（Ｒ）、
−ＮＨ２など）が用いられる。 これらのうらで、弱酸性陽イオン交換体であって官能基
として−ＣＯＯＨ基（Ｍはト１またはＮａ）をもつ親水
性イオン交換体が特に好ましく、このイオン交換体を用
いた場合には感度並びに？色濃度が向上される。 また上記イオン交換体の母体としては、スチレン系、ア
クリル系等の合成ｉｉ、セルロース、シリカ等が用いら
れる。 しかし、この場合、被検体液に浸漬づる試薬反応層にこ
のイオン交換体は含まれるため、親水性であり、且つ保
水性の優れたものが好ましい。この点から、スチレン系
母体を有するイオン交換体では、架橋度（Ｃｒｏｓｓｌ
ｉｎｋａｇｅ）の少ないもの（ＤＶＢ含有吊８％以下）
が好ましい。 特にセルロースを母体とするものは、保水性が最も大き
いため好ましい。 また、このヒルロース母体としてはｌｌｉ維性（Ｆｉｂ
ｒｏｕｓ）及び微顆粒性　（Ｍｉｃｒｏｇｒａｎｕｌａ
ｒ）等のものがあるが、微顆粒性のものを母体としで用
いたとき、感度並びに呈色′ｃＪＪ？が、Ｒも優れた結
果が１７られる。これはこの微顆粒性のものが最も蛋白
質吸着能が大きいためと考えられる。 イオン交換体は０．１〜５１ｅｑ／ｇ（乾燥樹脂）のイ
オン交換容量を有することが好ましい。またこのイオン
交換体はイオン交換容量に応じで変化するが、１．０１
ｅＱ　／　ｇのイオン交換容量を有するカルボキシメチ
ルセルロース交換体（好ましくは微顆粒）を用いる場合
には、インキ組成物の固形分に対しＵ５〜３０重量％の
吊ｒ存在することが好ましい。 イオン交換体を試薬組成物中に添加づることによって、
被検体液として尿を用いる場合には尿中の５・〜１０Ｉ
Ｒｇ／旧の蛋白質の検出が可能になる。 二）形態保持剤 形態保持剤としては、印刷された検査試薬部の親水性を
損わず、しかも水に対し非溶解性であるものが使用され
、官能基としてカルボキシル基を有する水膨潤性樹脂や
高吸水性ゲルが挙げられる。 具体的には、医薬品の崩壊剤として知られるカルボキシ
メチル廿ルロースカルシウム塩、カルボキシメチルセル
ロースナトリウム塩等がある。 高吸水性ゲルは、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ア
クリル酸塩、アクリルニトリル、デンプン等を主成分と
する架橋、クラフト共重合体ぐあり、市販されている高
吸水性ゲルとしでは、吸水能６００倍を有するスミカゲ
ル５Ｐ５２０　　（商品名；住友化学−［業■より市販
のＰＶＡ−アクリル酸塩ブロックコポリマー）、吸水能
１０００倍を有する昔ナンウエツ１−ＩＮ−１０００＜
ＫＭ品名：三洋化成■より市販のアクリル酸グラノトデ
ンブン）、同じく吸水能１０００倍を有するＫｌゲル（
ＰＶＡ−環状酸無水物との反応生成物）等を挙げること
ができる。 形態保持剤は、インキ組成物の固形分に対して１〜２０
重量％で存在ケることが好ましく、特にカルボキシメチ
ルピルロース塩を用いる場合はイン鼾組成物の固形分に
対して２〜１０重重％程度を加えることが望ましい。 ホ）結　合　剤 結合剤は、被検体液中の成分及びｐＨ’ｌに影響を及は
さず、且つ試薬類特に指示薬に影響を及ぼさず、しかも
指示薬のｙ′Ｆ、色反応を妨げないものであることが要
求される。このような要ｆ１を満た１ことが確かめられ
た結合剤としては、（Ｉ）ポリニスフル樹脂、アル↑ド
樹脂、ポリウレタンＭＡ脂。 ポリスブレン樹脂、アクリル樹脂、塩化ビニル樹脂、塩
化ビニル共重合体樹脂、ポリビニルブヂラール樹脂、ポ
リビニルアルニ１−ル樹脂、煕水マレイン酸系共小合体
樹脂苦の合成樹脂類、（Ｉ［）メチルヒル［１−ス、１
プルヒルロース、ヒト「−１キシ１プルセルロース、ｈ
ルボキシメチルセルロース香のセルロース誘導体及び（
１）デンプン、多糖類、Ｕラチン、カビイン、アルギン
酸ツートリウム秀の天然高分子などが用いられる。 これらの結合剤のうち、無水マレイン酸系共重合体恰１
脂であるメヂルビニルエーｉル／無水マレイン酸共重合
体、イソブチレン／無水マレイン酸共重合体、スチレン
／無水マレイン酸共重合体と、アルコールとを反応させ
たエステル化物が好ましい。 この結合剤は、インキ組成物の固形分に対して０．５〜
１０Φ吊％の吊で存在することが好ましい。 へ）吸水性粉末 吸水性粉末は、試薬組成物中に配合されることによって
、被検液とＤＨ指示薬との接触を促進し、該指示薬の〒
色反応を促進ヴる助さを有づる。 このような吸水性粉末としては、水と接触した場合に、
極端な酸性或いはアルカリ性を示１ものは好ましくなく
、しかも白色度の高いものが好ましい。具体的には、力
Ａリン、合成シリカ、ガラス、ｔルロースブロック、微
結晶セルロース、イオン交換セルロース、イオン交換樹
脂、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、ケイ酸アルミ
ニウム等が用いられ得る。 吸水性粉末は、インキ組成物の固形分に対して３０〜６
唖１％の吊で存在覆ることが好ましい。 １・）　　溶　　　媒 溶媒は、上記試薬類特に結合剤を均−且つ安定に溶解或
いは分散させうるちのが好ましい。この条ｆ１を渦たり
溶媒としては、芳香族ｒψ２化水素、脂肪族炭化水木、
Ｊステル類、アルコール類購の非水溶媒又は水或いはこ
れらの混合物が用いられる。 しかしながら、蛋白質検出用インキ組成物を支持体−［
に塗布した後の乾燥工程を低温で゛しかも短時間Ｃ゛行
なうという点で非水溶媒を用いることが好ましい。非水
溶媒を用いた場合には、残留水分に起因する試薬組成物
の変質劣化を防止できるという効果もある。 チ）だの他の成分 場合によっては、上記各成分のほかに、少量の湿潤剤例
えば非イオン界面活性剤、陰イオン界面島ｈ〜１．阻イ
Ａン界面活性剤１両性イＡン界面活性〜１．ボリエナレ
ングリコール類等を、ｐｌ＋測定用試薬組成物中に配合
万ることもできる。この湿潤剤は、各試薬の分散に役立
ち、均一な試薬層の形成をＯＮ進し、水ぬれ性を向上さ
せることができる。 湿潤剤は試薬組成物の固形分に対して、０．２〜１０Ｉ
ｊ％の吊で存在することが好ましい。 また指示薬の呈色色調を更に見易くするために、例えば
オイルイエロー等の背撰色累を添加し【もよい。 上記の各成分からなる蛋白質検出用インキ組成物を調製
するには、先ず、緩衝剤、イオン交換体。 形態保持剤、及び吸水性粉末を５０μｍ以下の粒子に粉
砕づる。次いで得られた粉末を、結合剤及び指示薬が溶
剤に予め溶解或いは分散された液中に加え、高速撹拌機
、サンドミル、ボールミル、ホモゲサイザー、３木ロー
ル、超音波分散機等によって分散並び（混練づればよい
。 上記のような蛋白質検出用インキ組成物は、支持体上に
塗布されて蛋白質検出領域が形成され、本発明に係る検
査体が得られる。塗布技術としては、印刷法、コーディ
ング法（例えば「」−ルコーフインク、スプレーコーフ
インク、７′イップ＝１−ティング、ベタコーフインク
）智が用いられつる。 木）′Ｆ、明においては、インキ組成物の塗布型が比較
的多く且つ塗布型が一定ぐあることが好ましいため、シ
ルクスクリーン印刷法、凹版印刷法、グラビア印刷法男
によって、インキ組成物を支持体上に設けることが好ま
しい。塗布型は、インキ組成物の種類に応じで変化する
が、一般に２〜１５０ｇ／’ｒｒｔ＜乾燥時）であるこ
とが好ましい。 支持体は、試薬組成物と反応Ｕず、しかも試薬の９色を
開゛ＳしないものＣあることが好ましく、具体的には、
例えば紙９合成厭、不械布または合成樹脂ノイルム或い
は紙と合成樹脂フィルムとの積層体等が用いられる。 このような支持体上に１白質検査領域が設けられた本発
明に係る検査体は、スティック状、ロール状、テープ状
等の形態に形成されでいてもよい。 或いは支持体自体が肢検査液を採取しつるような形態例
えばコンブ状、試験管状、ｎｕ状、トレイ状。 スボイ１−状に形成され、−での支持体上に衝白買検す
領域を設けで、本発明に係る検査体としでもよい。 ［実　、帷　例１ 以下、実施例を挙げて本発明を説明するが、本発明はこ
れらの実施例に限定されるものではない・実施例１ 下記組成の蛋白質検出用インキ組成物をホモミキサーで
微細分散さけた後、スクリーン印刷法により、厚さ３０
０μの白色ポリスチレンシート上に一辺が５　ｒａｍの
四角形となるように印刷した。用いたスクリーン版は８
０メツシユ、レジスト及びスクリーン紗の厚さの合計は
１９０μであった。 蛋白質検出用インキ組成物 テトラブロムフェノールブルー　０．４０Φ吊部クエン
酸　　　　　　　　　　　２５．７　　小量部クエン酸
ノトリウム　　　　　　１１゜０　重量部ソルビタンＬ
ノラウレート （花１石鹸製ニスパン２０）　　　　　４．０　　重量
部カルボキシメチルセル ナトリウム塩 （ワットマン製：　ＣＭ−３２　）　　　　　５０．０
　’重量部カルボギシメチルセルｎ−ス カルシウム塩（ダイセル化学製）　１０．０　　重量部
メチルビニルエーテル／ 無水マレイン酸共重合体（Ｇ．Ａ．Ｆ社製：ガントレッ
ツＡＮ−１ｆ３９）の７ミルアルコール、［ステル化物
　　　４．９７重全部セルロース微粉末 （脂化成製：アピセルＳＦ）　　　　１０８　　　重量
部「）−アミルアルコール　　　　　２８．１　　重量
部ゾヂルピロソルブ　　　　　　１０７．　７　　１準
部ブ１ールセロソルプアＵチー１−　　　５０．２　　
重量部得られた印刷物を６０°ＣＵー３０分間乾燥後、
スティック状に断裁して１白質検出用検査体を得た。 １ｒ常尿及び正常尿に牛「１１清フルゾミンを２０ｒｍ
ｇ／旧，　３０１Ｒ９ｙ’旧，　　１００ａ９／ｄｌ，
　　３００ａｙ／ｄｌ，及び１０００ｍｇｙ′旧の濃度
になるように溶解したものを検体どして用い、スティッ
クを浸漬後直ちに取出して１分間静置し、検査試薬部の
形態並びに色調を観察した。検査試薬部の形態は、検体
の吸収に伴う８丁の膨潤は認められるが、はぼ完全に検
体に浸）＾する前の形態と一致した。 検ｎ試薬部の呈色は均−且つ鮮明で・あり、上記濃度の
範囲で各濃度毎に判別可能ぐあった。 実施例２ 下記組成の蛋白質検出用インキ組成物を用いる以外は実
施例１と同様にして重白賀検出用検査体を得た。 蛋白質検出用インキ組成物 １１〜ラブロムフエノールブルー　０．４０　１ｆｆｉ
部クエン酸　　　　　　　　　　　２５．７　　重量部
りＪン酸Ｊトリウム　　　　　　１１．０　　千吊部ソ
ルビタン七ノラウレート （花１石鹸製ニスパン２０）４。Ｏ　重量部カルポキシ
メプールｔ？／レロース ナトリウム塩 （ワットマン製：　ＣＭ−３２　）　　　　５０．０　
　重量部ヒニルアルコール／アクリル酸 共重合体（住友化学製；スミカ ゲルＳＰ−５２０）　　　　　　　　　　５．０　　重
量部メチルビニルニーフル／無水 マレイン酸共重合体（Ｇ．Ａ．Ｆ社ｉ′！：ガントレツ
ツへＮ−１６９）のアミル アルコールエステル化物　　　４．９７　ｌ吊部セルロ
ース微粉末 （脂化成製；アビぜルＳＦ）　　　　　１０８　　重重
部ｎーアミルアルコール　　　　　２８．１　　重量部
ブチルセロソルブ　　　　　　１０７．　７　　重量部
プ天ルセロソルブアＵテート　　５０．２　　重重部正
常尿及び正常尿に生血清アルブミンを２０１１１４Ｆ／
旧，　３０１ｍｇ／　ｄ　ｌ　、　　１００１１１Ｆ　
／旧，　　３００ＩＲｇ／旧，及び１０００ｒｍｇ／旧
の濃度になるように溶解したものを検体として用い、ス
ティックを浸漬後直ちに取出しＣ１分間静置し、検査試
薬部の形態並びに色調を観察した。検査試薬部の形態は
、検体の吸収に伴うと千の膨□はみ８められるが、はぼ
完全に検体に浸；６ツるｎりの形態と一致した。検査試
薬部の９色は均一１１つ鮮明Ｃあり、上記ｉＨｆの範囲
（゛名園度毎に判別可能であった。 比較例１ 上記組成の蛋白質検出用イン（組成物を用いる以外は実
施例１と同様にしで蛋白質検出用検査体イヒ　ｊｌｌ　
ノー。 蛋白質検出用インキ組成物 テ１−ラブロムフェノールブルー　０８４０十吊部クエ
ンＭ　　　　　　　　　　　　２５．７　　重量部クエ
ン酸す１−リウム　　　　　　１１．０　　重量部ソル
ビタンＬノラウレ−１゛ （花王石鹸製；スパン２０）　　　　　４．０　　重量
部カルボキシメチルセルＯ−ス ナトリウム塩 （ワットマン類：　ＣＭ−３２＞　　　５０．０　　重
量部メチルビニルエーテル／照水 マレイン酸共重合体（Ｇ、＾、Ｆ社製；ガントレツツ八
Ｎへ１６９＞のアミル アルコールニス７°ル化物　　　４．９７重石部セルロ
ースｇｔ粉宋 （脂化成製；アビセルＳＦ）　　　　１０８　　　重量
部ｎ−アミルアルコール　　　　　２８．１　　重量部
ブチルセロソルブ　　　　　　１０７．７　１１部ブチ
ルセロソルブアセ５−ト５０．２　　ｌｆｆ１部正常尿
及び正常尿に牛血清アルブミンを２０１１１ｇ／ｄｌ、
　３０ｍｇ／旧、　　１００ａｙ／旧、　　３００ｍｙ
／ｄｌ、及び１０００１１ｇ／旧の濃度になるように溶
解したものを検体として用い、スティックを浸漬接直ち
に取出して１分間静置し、検査試薬部の形態並びに色調
を観察した。検査試薬部は検体の吸収に伴い顕著に膨潤
すると共に、検査試薬部の一部が検体に分散して流動性
組成物となり、検体に浸漬する前に検査試薬部が印刷さ
れていた範囲の外側に流出した。 検査試薬部の呈色は不拘−且つ不鮮明にあり、上記ｃＪ
ｌｆの範囲で各′ａ度毎に判別することは困ｔｉｒ：あ
った。 【発明の効果１ 木光明においては、蛋白質検出用インキ組成物に形態保
持剤を添加することにより、蛋白質検出用インキ組成物
を支持体上に多缶してなる蛋白質検出用検査体を検体に
浸漬づることにより検査体の＠百試薬部が検体を吸収す
ることに伴って生じる＠査試薬部の形態変化を防止する
ことができる。 実盾例及び比較例の記載から明らかなように、形態保持
剤を添加しない場合には、検査試薬部の少なくとも一部
が検体中に分散して検査試薬部の形態が変化し、該検査
試薬部並びに該検査試薬部に隣接する検査試薬部におけ
る呈色が不均一、不鮮明となって、濃度の判別が困難と
なり、誤った判定結果を招く恐れがある。形態保持剤を
添加する場合は検査試薬部の形態の変化は生じず、各濃
度ごとの判別が可能Ｃあった。 また、本発明によって得られる蛋白質検出用検査体は、
上記のような特徴を有すると共に支持体上に直接／Ｊ！
布、特に印刷法により蛋白質検出領域が形成できるため
、天吊生産に有利′Ｃ製造工程を簡略化することがで′
きる。

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. （１）蛋白質誤差を示す指示薬、ｐＨ緩衝剤、蛋白質吸
   着性のイオン交換体、形態保持剤、結合剤、及び吸水性
   粉末からなる試薬組成物が溶剤中に溶解或いは分散され
   てなることを特徴とする蛋白質検出用インキ組成物。
2. （２）形態保持剤が、官能基としてカルボキシル基を有
   する水膨潤性樹脂である特許請求の範囲第１項に記載の
   蛋白質検出用インキ組成物。
3. （３）蛋白質誤差を示す指示薬、ｐＨ緩衝剤、蛋白質吸
   着性のイオン交換体、形態保持剤、結合剤、及び吸水性
   粉末からなる試薬組成物が溶剤中に溶解或いは分散され
   てなる蛋白質検出用インキ組成物を、支持体上に塗布し
   てなる蛋白質検出領域を有することを特徴とする蛋白質
   検出用検査体。
4. （４）形態保持剤が、官能基としてカルボキシル基を有
   する水膨潤性樹脂である特許請求の範囲第３項に記載の
   蛋白質検出用検査体。