JPS62228947A - 染料前駆体が安定化された乾式分析要素 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［技術分野］ 本発明は、液体中に含まれる特定成分または酵素活性を
定量するための乾式分析要素に関する。

さらに詳しくは、本発明は、検出試薬系として酸化型ニ
コチンアミド補酵素と、電子伝達性化合物と、フォルマ
ザン染料を形成し得る電子受容性化合物とを含有する乾
式分析要素に関するものである。

［従来技術］ デヒドロゲナーゼ系酵素と補酵素とを共役反応系に組合
わせた反応は臨床化学分析において広く用いられている
。たとえば、グリセリンデヒドロゲナーゼ、コレステロ
ールデヒドロゲナーゼ、乳酸デヒドロゲナーゼ、アルコ
ールデヒドロゲナーゼ、グルタメートデヒドロゲナーゼ
、アルデヒドデヒドロゲナーゼ、α−クリセロフォスフ
ェートデヒドロゲナーゼ、クルコース−６−燐酸デヒド
ロゲナーゼ等が関ｑ〜する反応系か、トリグリセリド、
グリセリン、コレステロール、乳酸、クルタメート、グ
リセリンー３−燐酸、グルコース−６＝燐酸等の基質や
、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）
、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、乳酸
デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）、アミラーゼ、クレアチン
キナーゼ（Ｃに）竿の酵素の７罎に用いられており、還
元型補酵素の増加または減少の直接測定によって定量分
析ができる特徴がある。しかし通常用いられるＮＡＤＨ
にコチンアミドアデニンジヌクレオチド）またはＮＡＤ
ＰＨにコチンアミトアデニンンジヌクレオチドファスフ
ェート）は、吸収極大が３４０ｎｍ付近にあるため、そ
の光学的定量のためには、紫外域の測光装置が必要とな
り、機憲か高価なものになる。また紫外域では多種の化
合物か吸収を有するためにそれらの干渉を受は易い。

ＮＡＤＨ（またはＮＡＤＰＨ）を紫外部吸収により直接
に定量する代りに、ＮＡＤＨの存在下で、電子伝達性化
合物を介して電子受容性化合物を還元し、可視領域にお
いて検出可濠な化合物（染料）を形成する反応系が提案
されている。

この反応系を利用すれば可視部において分光測光するこ
とによりＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨの定ｈｉかてき、前
者に比べてはるかに有利である。

しかしこの方法は下記のごとき欠点を有するためあまり
多用されなかった。

ｌ）フォルマザン染料形成前駆体である電子受容性化合
物は、乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）、グリセリン脱水素ｆ
ｆＩＪ（ＧＤＨ）など多くの酵素の至適ＰＨであるｐＨ
８ないし８．５付近で不安定て、ＮＡＤＨまたはＮＡＤ
ＰＨの生成とは無関係な色素を形成する。

２）フォルマザン染料形成前駆体から誘導されるフォル
マザン染料か水溶液中で沈殿を起こし。

この沈殿に基〈精度の低下や分光光度計のセルの汚れを
もたらす。

ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨの存在下に、電子伝達性化合
物を介してフォルマザン染料形成電子受容性化合物を還
元する反応を利用してＮＡＤ）ＩまたはＮＡＤＰＨの生
成を検出する方法を、特公昭５３−２１８７７号公報や
特開昭５５−１６４３５６号公報に記載されたような乾
式一体型分析要素に適用した場合、前記のごとき染料形
成前駆体からの好ましくない色素の形成による測定精度
の低下か特に深刻な問題を生じた。なぜならば、染料形
成前駆体を含有する層を形成するための塗４１組成物を
調＊ｖｋ、　ａ布するまでの数分ないしト数分の間に、
そのような望ましくない色素が形成されるか、またはそ
の塗布組成物から塗布された層を有する多層乾式分析要
素の保存中の望ましくない色素の形成が助長されるため
に、分析操作の実行時におけるｆｖ景濃度（以下カブリ
という）が上昇し、Ｔ・め決定された検量線が適合しな
くなる結果、測定精度が低下するからである。特に前記
？＠　４ｉ組成物がゼラチンのごときポリペプチド構造
を有する化合物を結合剤として含む場合には、このよう
なり１ましくない色素の形成が著しかった。

［発明の１ｊ的］ 本発明の目的は、検出試薬系として酸化型ニコチンアミ
ド補酵素、電子伝達性化合物およびフォルマザン染料形
成性電子受容性化合物を有する乾式分析要素の製法およ
び保存の過程におけるフォルマザン染料形成性電子受容
性化合物の安定性を向上させることである。

［発明の要旨］ 本発明の上記目的は、少なくとも一つの親木性結合剤か
ら成る層中に、検出試薬系として酸化型ニコチンアミド
補酵素、電子伝達性化合物および７オルマザン染料を形
成し得る１を子受容性化合物を含有する乾式分析要素に
おいて、フォルマザン染料を形成し得る一Ｅ子受容性化
合物を含む層の親水性高分子として、ゼラチンのような
ポリペプチドを用いずに、一般式［［］または［■］で
表わされるｍ　Ｍ）体成分の重合体または共重合し得る
他の重量体成分との共重合体を用いることによって、達
成された。

口］　　　　Ｒ＋ −ＣＨ２−Ｃ− Ｃ０−ＮＲ”　　Ｒｆｆ 式中Ｒ’は水素原子または低級アルキル基を表わす　Ｒ
２およびＲ１は各々水ぶ原子、脂肪族炭化水素基または
芳香族炭化水素基を表わし、〃いに回してあっても、異
ってもよい。また、Ｒ２とＲ３が連結して環を形成して
いてもよい。

［■］ −ＣＨ，−Ｃ− 式中Ｒ４はＲ１と同義である。Ｑは。

　Ｏ （ここで９は２ないし４の整数を表わす）（２）　　−
ＮＲ′″−Ｃｏ−Ｒ’ （ここでＲ＃−はＩＲＷ　ａ　１ないし４のアルキル基
　）ｊ６は水素原子または炭素数ないし４のアルキル基
を表わす） または （２＋はピロリドン環、オキサゾリドン環またはピリド
ン環を形成するに要する原子群を示す） を表わす。

本発明は公知の多種の乾式分析要素に適用することがで
きる。特に検出試薬系と被検液体がいずれも透過し得る
固体担体を含む要素に適用することができる。要素は支
持体１反応試薬層、検出層のほかに反射層、多孔性液体
展開層、接着層、濾過層、吸水層、下塗層および公知の
その他の層を含む多重層から成ってもよい、かような分
析要素として、米国特許第３，９９２，１５８号、同４
．０４２，３３５号および特開昭５５−１６４３５６号
各明細書に開示されたものがある。

支持体を用いる場合、本発明の乾式分析要素の実用的に
採り得る構成は。

（１）支持体上に発色層と反応層を兼ねる液体展開層を
有するもの。

（２）支持体」−に発色層、その上に反応層を兼ねる液
体１１４開層を有するもの、この場合１発色層に前記親
水性高分子を含む。

（３）支持体１：に発色層、反応層、液体展開層をこの
順に有するもの。この場合、発色層と反応層の少なくと
も一つに前記親水性高分子を含む。

（４）支持体上に発色層、第二反応層、第一反応層、液
体展開層をこの順に右するもの、この場合、発色層、第
二反応層、第一反応層のいずれか少なくとも一つに前記
親水性高分子を含む。

上記（１）ないしく４）において検出層と試薬層または
液体展開層の間に試薬層と液体展開層の１１ｉｌ　、ま
たは第二反応層と第一反応層の間に光遮蔽層および／ま
たは濾過層を設けてもよい。

本発明においては二つ以上の層が前記親水性高分子から
成ってもよい（たとえば検出層と試薬層）、この場合に
検出試薬系を含む層は２以」−の層から成ってもよい、
酸化型ニコチンアミド補酵Ｊさ、電子伝達性化合物およ
びフォルマザン染料な形成し得る電子受容性化合物かす
べての層に均一に含まれてもよく、また各試薬を支持体
から遠い層か近い層のいずれかに、より多く分布させる
こともてきる。たとえば、酸化型ニコチンアミド補酵素
を支持体から遠い層に、電子受容性化合物を支持体に近
い層に多く分布させることができる。

本発明の乾式分析要素において少なくとも一層の試薬層
に含まれる検出試薬系には、酸化型ニコチンアミド補酵
素か含まれる。酸化型ニコチンアミド補酵素とは、Ａ体
重には、ＮＡＤ′″　にニコチンアミド・アデニンジヌ
クレオチド酸化型）またはＮＡＤＰ“　にニコチンアミ
ド・アデニンジヌクレオチド・ホスフェート酸化Ｊ！ｌ
）を、α味する。

ＮＡＤ’″およびＮＡＤＰ”のうちどちらを使用するか
は、分析対象として、あるいは検出試薬として検出反応
に関与する酸化還元酵素の種類に応じて決定される。

本発明の乾式分析要素において少なくとも一層の試薬層
に含まれる検出試薬系には、電子伝達性化合物を含む０
本発明において電子伝達性化合物とは、被検物質の反応
により生成した還元型ニコチンアミド補酵素（電子供４
体）から電子を受は取って、後述するＩ［子受容性染料
形成性化合物を還元する機能を有する化合物を意味する
。上記電子伝達性化合物の具体例としては、５−メチル
ツェナジニウム・メチルスルフェートあるいはｌ−メト
キシ−５−メチルツェナジニウム・メチルスルフェート
等のＮ−メチルフェナジン・メトサルフェート類および
ジアホラーゼ（ジヒドロリボアミドレダクターゼ、Ｅ　
Ｃ１，Ｉｌ、４１．）　ｋｇを挙げることかできる。

末完ＩＪＩの乾式分析要ぶに用いられる検出試薬系には
、フォルマザン染料を形成し得る化合物が含まれる。該
化合物は上記電子伝達性化合物により還元され、長波長
領域において検出可能な化合物（染料）を形成する物質
である０本発明の乾式分析要素においてテトラゾリウム
塩を用いることか好ましい、テトラゾリウム塩の具体例
としては。

３．３’　−（３，３’−ジメトキシ−４゜４°−ビフ
ェニレン）−ビス［２−（ｐ−二トロフェニル−２Ｈ−
テトラゾリウムクロライド］（＝ＮＢＴ）； ３−（ｐ−ヨードフェニル）−２−（ｐ−二トロフェニ
ル）−５−フェニル−２Ｈ−テトラゾリウムクロライド
（＝ＩＮＴ）； ３−　（４，５−ジメチル−２−チアゾリル）−２Ｈ−
テトラゾリウムブロマイド（＝ＭＴＴ）；３．３°−（
４，４’−ビフェニレン）−ビス（２，５−ジフェニル
−２Ｈ−テトラゾリウムクロライド： ３．３’　−（３，３°−ジメトキシ−４，４゜−ビフ
ェニレン）−ビス（２，５−ジフェニル−２Ｈ−テトラ
ゾリウムクロライド；および３．３“−（３，３’−ジ
メトキシ−４，４゛−ビフェニレン）−ビス［２，５−
ビス（ｐ−ニトロフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウムク
ロライドを挙げることかできる。

なお、上記酸化型ニコチンアミド補酵素、電子伝達性化
合物および染料形成電子受容性化合物を含む反応系の詳
細については、 Ａ、　Ｌ、　Ｉ（ａｂｓｏｎ笠によるクリニカ・キミカ
・アクタ　［Ｃ１，ＩＮＩＣＡ　　Ｃ１１ｌ麺ＩＣＡ　
　ＡＣＴ八］へ２　　巻　（＋９６５）　　２１０−２
！５頁； Ｒ，Ｊ、　Ｇａｙ　”９によるクリニカル・ケミストリ
ー［ＣＬＩＮＩＣ八Ｌ　　（へｌｌＥＭＩＳＴＲＹ］　
　Ｖｏｌ、Ｉ４．　　Ｎｏ、　　８．　１９６８゜７４
０−７５３頁：および、 Ｒ，Ｄ、　Ｃａｐｐｓ　Ｕ　３によるクリニカル・ケミ
ストリー、Ｖｏｌ、１２．　Ｎｏ、　７．１９６６、４
０６−４１３；等の文献に記載されている。

本発明の乾式分析２２素に用いられる検出試薬系は、液
体試料中における様々な種類の酸化還元酵素活性の測定
に使用することができる。すなわち１本発明の乾式分析
要素は、酸化型ニコチンアミド補酵素か電子受容体とな
る全ての酸化還元酵素（脱水未解−Ｓ＞の活性の測定か
可能である０本発明の乾式分析要素を酸化還元酵素の活
性の測定に使用する場合には、上記検出試薬系には、さ
らに酸化還元酵素が触媒する酸化反応（脱水素反応）の
基質が加えられる。たとえば１本発明の乾式分析要よを
乳酸デヒドロゲナーゼ活性測定用として用いる場合には
、上記検出試薬系にさらに乳酸か含まれる。グルコース
−６−燐酸デヒドロゲナーゼの場合には、ノ＾質として
グルコース−６−燐酸が添加される。

本発明は、乳酸デヒドロゲナーゼ活性測定要素に特に有
用である。

本発明において電子受容性染料形成化合物の含まれる層
の含有する親木性バインダーは実質的にゼラチンを含ま
ず、一般式［！］または［■］で表わされる高分子化合
物から成る。

一般式［１］中、Ｒ２およびＲ１で表わされる脂肪族炭
化水素基及び芳香族炭化水素基　Ｒ４、Ｒ５およびＲ６
て表わされるアルキル基は、無置換のもののほか、置換
されたものも包含する。

Ｒ２およびＲコで表わされる脂肪族炭化水素基または芳
香族炭化水素基は、たとえば、アリールノ＾（たとえば
フェニル基）、炭素数合計ｌ〜１２のアルキルアミノ、
！Ｊｉ（たとえばジメチルアミノ基）、ヒドロキシ基、
炭素数１〜６のアルコキシ基（たとえばメトキシ基）、
ハロゲン原子（たとえば塩素１！：（了−）、シアツノ
、（なとて置換されてよい。

Ｒ２とＲ１で表わされる置換基中の炭素数の合計はＯな
いし１２か好ましく、特にＯないし６か好ましい。

本発明に用いられる一般式［１］の繰返し中位を有する
ｔ合物は一般式［Ｉ］で示される一種のｍ　Ｈ体の弔独
重合体もしくは二種以上の’１Ｌ　Ｈ体の間の共重合体
または一般式［Ｉ］て示される単州体と付加重合しうる
不飽和化合物との共重合体のいずれでもよい。

一般式［Ｉ］で示される巾！５体の具体例をあげれば、
アクリルアミド、Ｎ−メチルアクリルアミド、Ｎ−エチ
ルアクリルアミド、Ｎ−（ｎ−プロピル）アクリルアミ
ド、Ｎ−イソプロピルアクリルアミド、Ｎ−（ｎ−ブチ
ル）アクリルアミド。

Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブチル）アクリルアミド、Ｎ−（ｎ−
オクチル）アクリルアミド、Ｎ−（イソアミル）アクリ
ルアミド、Ｎ−（ｔｅｒｔ−オクチル）アクリルアミド
、Ｎ−ラウリルアクリルアミド、Ｎ−シクロヘキシルア
クリルアミド、Ｎ−ベンジルアクリルアミド、Ｎ−（β
−ジメチルアミノエチル〕アクリルアミド、Ｎ−フェニ
ルアクリルアミド、Ｎ−（１，１−ジメチル−３−ヒド
ロキシブチルアクリルアミド）、Ｎ、Ｎ−ジメチルメタ
クリルアミド、Ｎ、Ｎ−ジエチルアクリルアミド、Ｎ、
Ｎ−ジオクチルアクリルアミド、Ｎ−（１，ｌ−ジメチ
ル−３−オキソブチル）アクリルアミド、Ｎ−アクリロ
イルモルホリン、Ｎ−メチル−Ｎｏ−アクリロイルピペ
ラジン、Ｎ−エチル−Ｎｏ−アクリロイルピペラジン、
Ｎ−アクリロイルピペリジン、Ｎ−（β−モルホリノエ
チル）アクリルアミド、Ｎ−（３，５−ジメチルモルホ
リノエチル）アクリルアミド、メタクリルアミド、Ｎ−
メチルメタクリルアミド、Ｎ−エチルメタクリルアミド
、Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブチル）メタクリルアミド、Ｎ−（
ｔｅｒｔ−オクチル）メタクリルアミド、Ｎ−ベンジル
メタクリルアミド、Ｎ−シクロヘキシルメタクリルアミ
ド、Ｎ−フェニルメタクリルアミド、Ｎ、Ｎ−ジメチル
メタクリルアミド、Ｎ、Ｎ−ジエチルメタクリルアミド
、Ｎ、Ｎ−ジプロピルメタクリルアミド、Ｎ−メチル−
Ｎ−フェニルメタクリルアミド、Ｎ−メタクリロイル−
Ｎｏ−メチルピペラジン、Ｎ−メタクリロイルピペリジ
ン、４−メタクリロイルー２．６−ジメチル イル−Ｎｏ−エチルピペラジンなどである。

一般式［Ｉ］の’ｔｋ量体とともに共重合体をつくる付
加重合性不飽和化合物にはたとえば、アクリル酸、メタ
クリル酸，マレイン酸、フマル酸，イタコン酸、クロト
ン酸，アクリル酸エステル類。

メタクリル酸エステル類、アクリル化合物，ビニルエー
テル類、ビニルエステル類，ビニル異部環化合物，スチ
レン類、マレイン酸エステル類、フマル酸エステル類，
イタコン酸エステル類、クロトン酸エステル類、オレフ
ィン類などがある。それらの具体例は，メチルアクリレ
ート、エチルアクリレート、ｎ−プロピルアクリレート
、イソプロピルアクリレート、ｎ−ブチルアクツレート
。

オクチルアクリレート、２−クロロエチルアクリレート
、２−シアノエチルアクリレート、Ｎ−（β−ジメチル
アミノエチル）アクリレート、ベンジルアクリレート、
シクロへキシルアクリレート、フェニルアクリレート：
メチルメタクリレート、エチルメタクリレート、ｎ−プ
ロピルメタクリレート、イソプロピルメタクリレート、
ｎ−ブチルメタクリレート、オクチルメタクリレート。

シクロへキシルメタクリレート、ベンジルメタクリレー
ト、３−スルホプロピルメタクリレート：アリルブチル
エーテル、アリルフェニルエーテル；メチルビニルエー
テル、ブチルビニルエーテル、オクチルビニルエーテル
、メトキシエチルビニルエーテル、２−クロロエチルビ
ニルエーテル、２−ヒドロキシエチルビニルエーテル、
（２−ジメチルアミノエチル）ビニルエーテル、ビニル
フェニルエーテル、ビニルトリルエーテル、ビニルクロ
ルフェニルエーテル；ビニルピリジン、Ｎ−ビニルイミ
ダゾール、Ｎ−ビニルカルバゾール、ビニルチオフェン
；スチレン、クロルメチルスチレン、ｐ−アセトキシス
チレン、ｐ−メチルスチレン：ｐ−ビニル安、Ｑ香酸、
ｐ−ビニル安息香酸メチル；クロトンアミド、クロトン
酸ブチル、グリセリンモノクロトネート：メチルビニル
ケトン、フェニルビニルケトン：エチレン、プロピレン
、ｌ−ブテン、ジシクロペンタジェン、４−メチル−１
−ヘキセン、４．４−ジメチル−ｌ−ペンテンなど：イ
タコン酸メチル、イタコン酸エチル、イタコン酸ジエチ
ルなど：ソルビン酸メチル、マレイン酸エチル、マレイ
ン酸ブチル、マレイン酸ジブチル、マレイン酸オクチル
など：フマル酸エチル、フマル酸ジブチル、フマル酸オ
クチルなど：ハロゲン化オレフィン類、たとえば。

塩化ビニル、塩化ビニリデン、イソプレンなど；不飽和
ニトリル類、たとえばアクリロニトリル。

メタクリレートリルなどがあり、必要に応じて２種以上
用いることもできる。一般式［１１］で表わされるよう
な繰返し単位を同時に有することもできる。これらの単
量体の中でも１重合体の溶解性、親油性、親木性、保護
コロイドとの親和性などの点から、アクリル酸エステル
類またはメタクリル酸エステル類か好適である。一般式
［１］で表わされる繰返し単位を含む共重合体の組成比
については、とくに制限はないが、−・般式［Ｉ］で示
される成分か２０〜１００モル％であることが好ましく
、特に好ましくは同成分が４０〜ｌｏ。

モルχである。

一般式［Ｉ］で表わされる繰り返し単位のうち好ましい
のは、Ｒ４が水素原子を、Ｑが。

基かエチル基、Ｒ５か水素原子基、メチル基またはエチ
ルツムを表す場合、 （３）　　−Ｎ−Ｃ−０においてｚ’が５員または６員
のラクタムまたはオキサゾリドンを形成する場合のいず
れかを表す場合である。

特に々ｆましいのは、Ｑか、ピロリドン残基またはオキ
サゾリドン残基をあられす場合である。

−・般式［■］によって表される祿返し単位な右する重
合体は、単独重合体のみならず共重合体でもよい。

すなわち一般式［■］ ［■］ ＣＨ，＝（ で表される単量体の単独重合もしくは二つ以トの巾！Ｊ
１体の間の共重合、またはこれと付加重合し得る不飽和
化合物“との共重合により得られる重合体である。

一般式［■］で示される単４１体の、ｒ１体例としては
、Ｎ−ビニルサクシンイミド、Ｎ−ビニルグルタルイミ
ド、Ｎ−ビニルアジビイミド、Ｎ−メチルーＮ−メチル
−Ｎ−ビニルホルムアミド、Ｎ−メチル−Ｎ−ビニルア
セトアミド、Ｎ−エチル−Ｎ−ビニルアセトアミド、Ｎ
−メチル−Ｎ−ビニルプロピオンアミド、Ｎ−ビニルピ
ロリドン、Ｎ−ビニルピペリドン、Ｎ−ビニル−γ−カ
プロラクタム、Ｎ−ビニルオキサゾリドン、Ｎ−ビニル
モルホリン、Ｎ−ビニル−２−ピリドンなどがある。こ
のうち好ましいものは、たとえば酢酸ビニル、Ｎ−ビニ
ルサクシンイミト、Ｎ−ビニルグルタルイミド、Ｎ−メ
チル−Ｎ−ビニルアセトアミド、Ｎ−エチル−Ｎ−ビニ
ルアセトアミド、Ｎ−ビニルピロリドン、Ｎ−ビニルピ
ペリドン、Ｎ−ビニルオキサゾリドンなどである。特に
好ましいものは、Ｎ−ビニルピロリドンである。

一般式［ｎｌで示される単量体とともに共重合体をつく
る付加重合性不飽和化合物は、一般式［Ｉ］で示される
単量体について示したもののほか、アクリル酸、メタク
リル酸、無水マレイン酸、アクリルアミド、Ｎ−メチル
アクリルアミド、Ｎ、Ｎ−ジメチルアクリルアミド、Ｎ
−エチルアクリルアミド、Ｎ−（β−ヒドロキシエチル
）アクリルアミド、メタアクリルアミド、Ｎ−メチルメ
タクリルアミドなどでもよい、それらのうち生成重合体
の親木性などの点から好ましいのは、アクリル酸、メタ
クリル酸、２−ヒドロキシエチルアクリレート、２−メ
トキシエチルアクリレート、スルホプロピルアクリレー
ト、アクリルアミド、ジメチルアクリルアミド、２−ア
クリロイルアミノ−２−メチルプロパンスルホン酸、ヒ
ドロキシエチルアクリルアミド、メタクリルアミド、メ
チルビニルエーテル、スチレンスルホン酸ナトリウム、
Ｎ−ビニル−３，５−ジメチルトリアゾール、無水マレ
イン酸などである。一般式［１１１で表わされる繰返し
単位を有する共重合体の組成比については、特に制限は
ないか、一般式［１１て表される成分が２０〜１００モ
ル％であることか好ましく、特に好ましくは同成分が５
０〜１００モル％である。

一般式［１１または［ＩＩ］で表される謹返し単位を有
する重合体又は共重合体の合成には、英国特許第１２１
１０３９号、特公昭４７−２９１９５号、特開昭４８−
７６５９３号、同４Ｂ−９２０２２号、同４９−２１１
３４号、同４９−１２０６３４号、英国特許９６１３９
５号、米国特許３２２７６７２号、同３２９０４１７号
、同３２６２９１９号、同３２４５９３２号、同２６８
１８９７号、同３２３０２７５号、ジョン、シー、ベト
ロブ−ロス他（Ｊｏｈｎ　Ｃ，Ｐｅｔｒｏｐｏｕｌｏｓ
ｕ　ａｔ　ａｌ）著；「オフィシャルダイジェストＪ　
（ＯｆｆｉｃｉａｌＤｉｇｅｓｔ）、Ｖｏｌ、コ３．７
１９−７：１６頁（＋９６１）、村橘俊介ら編「合成高
分子Ｊ　　Ｖｏｌ、　Ｉ、２４６−２９０頁、　Ｖｏｌ
。

３、！−１０８頁などに記載の方法を参考にして行なう
ことかてきる。目的に応じて重合開始剤、温度、重合温
度１反応時間などを時間などを広く、かつ容易に変更で
きることはいうまでもない。

重合は−・般に２０〜１８０℃、好ましくは４０〜１２
０℃にて、重合すべき単量体に対して通常０．０５〜５
重量％のラジカル重合開始剤を用いて行なわれる。開始
剤としてはアゾビス化合物、パーオキサイド、ハイドロ
パーオキサイド、レドックス触媒など、たとえば過硫酸
カリウム、　ＬｅｒＬ−ブチルパーオクトエート、ベン
ゾイルパーオキサイド、アゾビスイソブチロニトリル等
がある。

本発明に用いられる前記重合体の分子量は通常約２千以
しである。好ましくは５ｏｏｏ〜７０００００程度のも
のか用いられる。しかしこれらの値は本発明の効果を得
るための臨界的なものではない。

本発明に用いられる一般式［１１で表される繰返し単位
を右する代表的な重合体の具体例には。

次のようなものがある。

（１）ポリ（Ｎ−エチルアクリルアミド）（２）ポリア
クリルアミド （３）ポリ（Ｎ、Ｎ−ジメチルアクリルアミド）（４）
ポリメタクリルアミド （５）アクリルアミド−エチルアクリレート共重合体（
モル比４０　：　６０） （６）Ｎ、Ｎ−ジメチルアクリルアミド−メチルアクリ
レート共重合体 （モル比５０　：　５０） （７）アクリルアミド−ブチルアクリレートｊ（％合体
（モル比６０　：　４０） （８）Ｎ−アクリルアミド−エチルアクリレート共重合
体（モル比５０　：　５０） （９）Ｎ、Ｎ−ジメチルアクリルアミド−マレイン酸共
重合体（モル比７０　：　３０）（ｌＯ）アクリルアミ
ド−エチルアクリレート共重合体（モル比４０　：　６
０） （ｌ　ｌ）アクリルアミド−エチルアクリレート共重合
体（モル比５０　：　５０） （１２）Ｎ−メチルアクリルアミド−エチルアクリレー
ト共重合体（モル比５０　：　５０）（１３）Ｎ−エチ
ルアクリルアミド−アクリル酸Ｊ（重合体（モル比３０
　：　７０） （１４）Ｎ−メチルメタクリルアミド−エチルアークリ
レート共重合体（モル比５０　：　５０）（１５）Ｎ、
Ｎ−ジメチルメタクリルアミド−プロピルアクリレート
共重合体 （モル比３５　：　６５） （１６）Ｎ−アクリロイルモルホリン−エチルアクリレ
ート共重合体（モル比４０・６０）（１７）ポリ（Ｎ−
（３−ジメチルアミノプロピル）アクリルアミド） （１８）ポリ（Ｎ−メタクリロイルピペラジン）一般式
［０］で表される鰻返し中位を含む１に合体の代表的な
具体例には次のようなものかある。

（１９）ポリ（Ｎ−ビニルピロリドン）（２０）ポリ（
Ｎ−ビニルオキサゾリドン）（、，２１）ボッ（Ｎ−ビ
ニルサクシンイミト）（２２）ポリ（Ｎ−ビニルグルタ
ルイミド）（２３）ポリ（Ｎ−ビニルピペリドン）（２
４）ポリ（Ｎ−ビニル−γ−カプロラクタム）（２５）
ポリ（Ｎ−メチル−Ｎ−ビニルアセトアミド） （２６）ポリ（Ｎ−エチル−Ｎ−ビニルアセトアミド） （２７）ビニルアルコール−Ｎ−ビニルピロリドン共重
合体（モル比３０　：　７０） （２８）Ｎ−ビニルピロリドン−ビニルアセテート共重
合体（モル比７０・３０） （２９）　Ｎ−ビニルピロリドン−２−ヒドロキシエチ
ルアクリレート共重合体 （モル比８０・２０） （３０）Ｎ−ビニルピロリドン−アクリル酸共重合体（
モル比９０：１０） （３１）Ｎ−ビニルピペリドン−２−メトキシエチルア
クリレート共重合体 （モル比７０　：　３０） （３２）Ｎ−ビニルピペリトン−メチルビニルエーテル
共重合体（モル比９０：１０）（３３）Ｎ−ビニルオキ
サゾリドン−ビニルアルコール共重合体（モル比６５：
３５） （３４）Ｎ−ビニルオキサゾリドン−アクリル酸共重合
体（モル比８ｏ　：　２０） （３５）Ｎ−ビニルピロリドン−Ｎ−ビニルピペリドン
−ヒドロキシエチルアクリレート共重合体（モル比４０
　：　３０　：　３０）（３６）ビニルアルコール−ビ
ニルアセテート−Ｎ−ビニル−２−ピリドン共重合体 （モル比７０　：　２５　：　５） （３７）Ｎ−ビニルピロリドン−２−ヒドロキシエチル
アクリレート−ビニルアセテート共重合体（モル比７０
：２０：１０） （３８）Ｎ−ビニルピロッドン−ビニルアルコ−ソービ
ニルプロピオネート−スチレンスルホン酸ソーダ共重合
体 （モル比４０：４０：５：１５） 一般式［１１て表される繰返し単位を有する重合体は、
たとえば、下記のごとき重合体であってもよい。

（３９）Ｎ−ビニルピロリドン−アクリルアミド共重合
体（モル比６０・４０） （４０）Ｎ−ビニルピロリドン−２−アクリルアミド−
２−メチルプロパンスルホン酸 共玉合体（モル比７５　：　２５） （４１）Ｎ−ビニルピロリドン−２−メタクリルアミド
共重合体（モル比６０　：　４０）（４２）Ｎ−ビニル
オキサゾリドン−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）アクリ
ルアミド共重合体（モル比６０　：　４０） （４２）Ｎ−ビニルオキサゾリドン−Ｎ−（２−ヒドロ
キシエチル）アクリルアミド共重合体（モル比７０　：
　３０） （４３）Ｎ−ビニルピロリドン−Ｎ−ビニルモルホリン
−アクリルアミド共重合体（モル比５０　：　２０　：
　３０） （４４）Ｎ−ビニルザクシンイミド−Ｎ−ビニル−ε−
カプロラクタム−アクリルアミド共重合体（モル比４０
・２０　：　４０）（４５）Ｎ−ビニルオキサゾリドン
−アクリルアミド−アクリル酸共重合体 （モル比６０　：　２０　：　２０） （４６）Ｎ−ビニルピロリドン−アクリルアミド−ビニ
ルアセテート−アクリル酸共重合体（モル比６０：２０
：１０：１０） （４７）Ｎ−ビニルピロリドン−ジメチルアクリルアミ
ド共重合体（モル比７０　：　３０）本９．１ＪＩの−
・般式［１１によって表される繰返し中位を有する重合
体も、また一般式［１１］て表される繰返し中位を有す
る重合体も、いずれも親水性の比較的大きい重合体であ
って、その水溶液または水に混和し得る有機溶媒中溶液
を有機溶媒に溶解して、一般式［Ｉ］の繰返し中位を有
する重合体と共に、あるいは別に、親木性コロイド中に
分散させることもできる。この場合において、有機溶媒
としては、たとえば、メチルアセテート、エチルアセテ
ート、ブチルアセテート、メチルイソブチルケトン、β
−エトキシエチルアセテート、メチルカルピトール、ジ
オキサン、シクロヘキサン、シクロヘキサノン、ジプロ
ピレングリコール、Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミド、プ
ロパツール、イソプロパツール、メタノール、ブタノー
ル、５ｅｃ−ブタノール、エチレングリコールモノメチ
ルエーテル、エチレングリコールモノブチルエーテルな
どに溶解して、塗ＩＨｒ、乾燥することにより親木性コ
ロイド層を構成させることかできる。

前記酸化還元酸素か触媒する酸化反応の基質の液体試料
中における濃度を測定する１］的に本発明の乾式分析要
素を用いることもてきる。この場合には、この酸化還元
酸素か本発明の分析要未の検出試薬系に含まれなければ
ならない。

さらに１本発明の乾式分析要素は、他の化学反応をに記
検出反応とＪ（役させることにより、上記以外の酸素活
性あるいは物質濃度の測定に用いることも可能である。

この場合には、共役させる化学反応に必要な試薬類か、
上記検出試薬系に含まれる。たとえば、酵素共役反応に
て脱水士酸素に共役できるクレアチンキナーゼ活性測定
の場合には、クレアチン燐酸、グルコース、ヘキソキナ
ーゼ等が添加される。

本発ＩＩの乾式分析要素は、カルボン酸系補酵素安定剤
を、酸化型ニコチンアミド補酵素と同様の層内に含有す
ることか好ましい。＋ｉｉｆ　Ａしたように、末完ＩＪ
Ｉにおいて、カルボン酸系補酵素安定剤とは、酸化型ニ
コチンアミド補酵素および電子伝達性化合物か接触した
状態において、添加することにより、酸化型、ニコチン
アミド補酵素の保存性を向ヒさせる機能を有するカルボ
ン酸を意味する。上記カルボン酸は、１−記検出反応（
他の化学反応を検出反応と共役させる場合には、この共
役反応を含む）には、実質的に影響なゲえることのない
カルボン酸であることか好ましい。

本発明の乾式分析要素にカルボン酸系補酵素安定化剤と
して好ましく用いられるカルボン酸の例としては、アミ
ン性窒素原子を有するカルボン酸およびヒドロキシカル
ボン酸を挙げることかできる。ト記アミン性窒素原子を
有するカルボン酸の具体例としては、エチレンジアミン
四酢酸、Ｎ。

Ｎ−ジヒドロキシエチルグリシン、Ｎ−ヒドロキシエチ
ルエチレンジアミン−Ｎ、Ｎ’　、Ｎ−三酢酸および酸
性アミノ酸（グルタミン酸およびアスパラギン酸）を、
またヒドロキシカルボン酸の具体例としては、クエン酸
、リンゴ酸、トリス（ヒドロキシメチル）−メチルグリ
シン、Ｎ、Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−グリシ
ンおよびアルドン酸（例、クルコン酸）を挙げることか
できる。

本ｆｆｉ　１１の乾式分析要素の検出試薬系とカルボン
酩を含有する層には、親木性ポリマー、緩衝剤あるいは
光ｇ画性微粒子等を必要に応じて含有させることかてき
る。

本発明の乾式分析要素の検出試薬系を含有する層には、
油記一般式（Ｉ）または（ＩＩ）で表わされる単量体の
重合体または共重合体以外の親木性ポリマーを含むこと
もてきる。例えば、澱粉、セルロース、アガロース、ア
クリル酸重合体およびアクリル酸と各種ビニル性千ツマ
−との共重合体象を含むことができる。

に記親木性ポリマーを、乾式分析要素の検出試薬系を含
有する展開層に含有させる場合には、約２ｇ／ｒｒｒ′
から約１５ｇ／ｒｎ’の範囲で含有させることか好まし
い。特に好ましいのは、約２ｇ／ばから約１０　ｇ／ｒ
ｒＩ′の範囲である。

未発ＩＪＪの乾式分析要素の検出試薬系を含有する層に
含有させることができるＭ衝剤の例としては、ｊに酸塩
、ホウ酸塩、燐酸塩やグツド（ＧＯＯｄ）の緩衝剤など
の公知の緩衝剤を挙げることかてきる。緩衝剤はｒ蛋白
質・酵素の、！、！：ｌｉ！ｉｔ実験法Ｊ（堀尾武−１
他箸、南江堂、＋９８１）等の公知文献を参考にして選
択することかてきる。

本発明の乾式分析要素の検出試薬系を含有する層には、
さらに後述する光遮蔽層に用いられる光遮蔽性微粒子を
含有させることもてきる。

本発明の乾式分析要素に用いることができる光透過性・
水不透過性支持体の例としては、ポリエチレンテレフタ
レート、ビスフェノールＡのポリカルボネート、ポリス
チレン、セルロースエステル（例、セルロースジアセテ
ート、セルローストリアセテート、セルロースアセデー
トプロピオネート）のポリマーからなる厚さ約５０ｇｍ
から約１　ｍ　ｍ　、好ましくは約８０鉢ｍから約３０
０ｐｍの範囲のフィルム、もしくはシート状の透明支持
体を挙げることができる。

本発明の乾式分析要素に用いることができる光不透過性
または光反射性支持体としては、Ｊ−記ボリマー中に光
反射性色材を含有させることにより容易に作成すること
かできる。また、上記ポリマーＴからなる透ＩＪ支持体
表面に光反射性色材を塗ＩＨｊするか、または光反射性
色材からなる粘若テープを貼る笠によっても容易に作成
することができる。

これら支持体の表面には、必要により下塗層を設けて、
支持体のヒに設けられる吸水層あるいは検出試薬系とカ
ルボン酸系補酵素安定剤を含有する層と支持体との接着
を強固なものにすることがてきる。また、下塗層の代り
に、支持体の表面に物理的あるいは化学的な活性化処理
を施して接着力の向」二をＩＡっでもよい。

本９．明の乾式分析要ＪＳは、光透過性水不透過性支持
体と発色層との間に（下塗層Ｔを介してもよい）吸水層
を、１シけてもよい。

吸水層は親木性結合剤よりなる層、すなわち水を吸収し
て膨潤する親木性ポリマーを層形成成分として利用して
いる層であることが好ましい。

吸水層に用いることかできる親木性ポリマーは、一般に
は水吸収時の膨潤率が、３０°Ｃで約１５０％から約２
０００％、好ましくは約２５０％から約１５００％の範
囲の天然または合ＪＪｋ、ＸＭ、水性ポリマーである。

そのような親木性ポリマーの例としては、ゼラチン（例
、酸処理ゼラチン、脱イオンゼラチン茅）、ゼラチン誘
導体（例、フタル化ゼラチン、ヒドロキシアクリレート
グラフトゼラチン等）、アガロース、プルラン、プルラ
ン誘導体、ポリアクリルアミド、ポリビニルアルコール
、ポリビニルピロリドン等をあげることかできる。

吸水層の乾燥時の厚さは約１ｇｍから約１００ｇｍの範
囲であることが好ましく、より好ましくは約３ルｍから
約３０ｇｍの範囲である。また吸水層は実質的に透ＩＪ
１であることが好ましい。さらに吸水層には、必要に応
じて界面活性剤や緩衝剤を含有させることもてきる。

発色層または反応層の１：、（支持体から遠い側）には
、必要に応じて光遮蔽層を設けることかできる。光遮蔽
層は、光吸収性、または光散乱性と光反射性を備えた微
粒子・が皮膜形１＆　ｔＥを有する親水性ポリマーバイ
ンターに分１敦保Ｊ、νされている水透過性または水浸
透性の層である。光遮蔽層は吸水層にて発生した検出可
能な変化（色変化、発色等）を光透過性を有する支持体
側から反射測光する際に、検出試薬系とカルボン酸を含
有する展開層に点着供給された水性液体の色、特に試料
が全血である場合のヘモグロビンの赤色等を遮蔽すると
ともに、光反射層または背景層としても機能する。

光散乱性と光反射性を備えた微粒子の例としては、−酸
化チタン微粒子（ルチル型、アナターゼ型またはプルカ
イト型の粒子径が約０．１ｐｍから約１．２膳ｍの微結
晶粒子等）、硫酸バリウム微粒子、アルミニウム微粒子
または微小フレーク″ヤを挙げることがてき、光吸収性
微粒子の例としては、カーボンブラック笠を挙げること
かでき、これらのうちでは二酸化チタン微粒子、硫酸バ
リウム微粒子が好ましい。

皮膜形成能を右する親木性ポリマーバインダーの例とし
ては、ほかに、弱親水性の再生セルロース、セルロース
アセテートＴを挙げることかでき、これらのうちではゼ
ラチン、ゼラチン誘導体、ポリアクリルアミド等が好ま
しい。なお、ゼラチン、ゼラチン誘導体には公知の硬化
剤（架橋剤）を添加することかできる。

光遮蔽層は、光遮蔽性微粒子と親木性ポリマーとの水性
分散液を公知の方法により吸水層等の七に塗布し乾燥す
ることにより設けることができる。また、光遮蔽層を設
ける代りに、展開層中に光遮蔽性微粒子−を含有させて
もよい。

なお、発色層や反応層の４−に、場合によっては光遮蔽
層Ｔの層を介して、展開層を接着し積層するために接着
層な設けてもよい。接着層は木て湿潤しているとき、ま
たは木を含んて膨潤しているときに展開層を接着するこ
とがてき、これにより各層を一体化てきるような親木性
ポリマーからなることか好ましい。接着層の製造に用い
ることかできる親木性ポリマーの例としては、吸水層の
製造に用いられる親木性ポリマーと同様な親木性ポリマ
ーかあげられる。これらのうちではゼラチン、ゼラチン
誘導体、ポリアクリルアミド等が好゛ましい。接着層の
乾燥膜厚は一般に約０．５ルｍから約２０ｇｍ、好まし
くは約１＃Ｌｍから約ｌＯ用ｍの範囲である。なお、接
着層は吸水層上以外にも、他の層間の接青力を向上させ
るため所望の層ｌ二に設けてもよい。接着層は、親木性
ポリマーと、必要によって加えられる界面活性剤等を含
む水溶液を公知の方法て、支持体や吸水層等の上に塗布
する方法などにより設けることができる。

展開層は、液体計量作用を有する展開層であることか特
に好ましい。液体試料計量作用を有する展開層とは、そ
の表Ｗｉに点着供給された液体試料を、その中に含有し
ている成分を実質的に偏在させることなく、横（木ｆ）
方向に、単位面植ｆｆ＋りほぼ一定着の割合て広げる作
用を有するものである。

展開層のマトリックスを構成する材料としては、濾紙、
不織布、織物生Ｊ１！（例、ブロード、ボブリン象のモ
Ｒ等）編物生地（例、トリコット編み、ダブルトリコッ
ト編み、ミラニーズ編等）ガラス繊維濾紙、プラッシュ
ポリマーより形成させるメンブランフィルタ−１あるい
はポリマーミクロビーズ笠からなる＝次元格子状４Ｒ造
物Ｔを用いることか好ましい。これらのうちては、試薬
類の保持性の点て、織物生地および編物生地に代表され
る繊維質層を用いることか特に好ましい。

未発Ｉ１１の乾式分析要素に用いることができる織物生
地または編物生地は水洗等の脱詣処理により少なくとも
糸製造時、織物製造時あるいは＆ｉ物編成時に供給また
は付着した油脂類を実質的に除去した織物またはｌｋＡ
物生地が好ましい。

１；記ａ物または編物生地を一体型多層分析要素の展開
層として用いる場合には、さらにその織物または編物生
地に特開昭５７−６６３５９号公報に開示の物理的活性
化処理（好ましくはグロー放電処理またはコロナ放電処
理等）を生地の少なくとも片面に施すか、あるいは特開
昭５５−１６４３５６号−１特開昭５７−６６３５９″
−）公報等に開示の親木性ポリマー含侵処Ｆ？’７？の
親水化処理またはこれらの処理［程を逐次実施すること
によりａｅｌまたは編物を親水化し、下側（支持体に近
い側）の層との接ノー力を強化することができる。

織物または編物生地からなる一体型多層分析要素の展開
層を前述した吸水層、接着層等に接着、積層するには、
特開昭５５−１６４３５６号および特開昭５７−６６３
５９号各公報等に開示の方法に従って作成することかて
きる。すなわち吸水層、接着層等の塗布後未乾燥のうち
に、または乾燥後の層に木（または界面活性剤を少！Ａ
含む水）を実質的に均一に供給して層を膨潤させ、つい
て織物または編物生地を湿潤または膨潤している層の上
に実質的に均一に軽く圧力をかけながらｌｉ着、積層し
一体化する。

展開層かプラッシュポリマーまたはメンフランフィルタ
ーからなる場合には特公昭５３−２１６７７号−公報等
、ポリマーミクロビーズからなる三次元格子状構造物で
ある場合には特開昭５５−９０８５９号公報等、症紙ま
たは不ａ布からなる場合には特開昭５７−１４Ｂ２５０
り公報Ｔにそれぞれ記載の方法に従って設けることかて
きる。

前述した接着層等の親水性高分子結合剤かゼラチンまた
はゼラチン誘導体である場合には１層の塗布後、ゼラチ
ン（または、′Ａ誘導体か未乾燥のゲル状態の間に上記
展開層を構成する材料（織物または編物生地笠）を接着
、積層し一体化する方法を採用することかてきる。

検出試薬系を含有する層に前記の検出試薬系、緩衝剤あ
るいは光遮蔽性微粒子等を含有させるに際して、上記試
薬等を含有する塗布液を展開層の七から塗布または噴霧
し乾燥する方法も用いることかてきる。

また織物、編物、ｉ！！紙、不織布およびガラス繊！１
ｔｉｌ！紙１からなる展開層に検出試薬系の少なくとも
一部を含有する場合には、上記試薬笠な含有する溶液に
展開層を浸漬したのち乾燥する方法を用いることかてき
る。また、一体型多層分析要素とするため、上記のよう
な展開層をラミネートにより積層する場合には、」二記
のように浸漬した展開層を乾燥または半乾爆状態て他の
層に積層し一体化する方法を用いることもできる。

９１（ｉにより形成される層、例えばプラッシュポリマ
一層やミクロビーズ三次元格子状構造物造体笠からなる
層の場合には、この層の塗布液と試薬笠の塗布液を混合
して塗布してもよい。

展開層に試薬等を含有させる場合に、いくつかの試薬毎
に異る方法を用いることもできる。

また、いくつかの試薬毎に数回に分けて行うこともてき
る。

本発明の屹式分析要素は、−辺約１５ｍｍから約３０　
ｍ　ｍの正方形またはほぼ同サイズの円形等の小片に裁
断し１特開閉５７−６３４５２号、特開昭５４−１５６
０７９号、実開閉５６−１４２４５４号、実開昭５８−
３２３５０号、特開ＩＩ／（５８−５０１１４４号各公
報等に開示のスライド枠子に納めて分析スライドとして
用いるのか製造、包装、ｌ１ｔｌ送、保存および測定操
作子の点て好ましい。

本発明の乾式分析要Ｊ３は、約５ＪＬ文から約３０棒立
、好ましくは約８鉢交から約１５ＪＬｕの水性液体試料
を展開層に点着供給し、必要に応じて約２０°Ｃから約
４５℃の範囲の実質的に一定の温度でインクベーション
して使用する。その後、一方の側から（−・体型多層分
析要素においては光透過性支持体側から）乾式分析要素
内の色変化、発色等の検出１１ｆ能な変化を反射測光し
比色法の原理により液体試料中の測定対象成分を分析す
る。

［実施例］ ［実施例１］ 下塗りされている厚さ１８０ｐｍのポリエチレンテレフ
タレート無色透明モ滑フィルム−にに下記組Ｊｊｉ、（
ａ、）の水溶液を塗布（ｌ　ＯＯｃ　ｃ　／　ｒｎ’　
）し、乾燥した（発色層）。

（ａ、） ポリアクリルアミド　　　　　ｌ　００ｇ（２０％水溶
液） 界面活性剤　　　　　　　　　０．４ｇ（オリン社％５
ｕｒｒａｃＬａｎＬ　　ｌ　ＯＧ　）ｐＨを調箇　　　
　　　　　　６．５にＩＮＴ　　　　　　　　　　　　
　　Ｉｇ（メタノールｌｏｍ文十水１０ｍ文に溶解）次
に、に配充色層１−に、下記組成（ｂ）の水溶液を塗１
＋ｉシ（１２０ｃ　ｃ　／ｒｒｒ’）　、乾燥した（反
応層）。

（ｂ） ポリアクリルアミド　　　　　ｌｏｏｇ（２０％水溶液
） 乳酸リチウム　　　　　　　　　０．９ｇＮＡＤ　　　
　　　　　　　　　　０．３ｇジアホラーゼ　　　　　
　　４０００１ＵｐＨをＪＪ節　　　　　　　　　　７
・Ｏに次に上記反応層りに、約３０ｇ／ｒｒｒ’の一１
３合で水を全面に供給して湿潤させた後、ポリエステル
製トリコウト編み物（厚さ０．２５ｍｍ）を、軽く圧力
をかけながらラミネートし、乾燥して接着させた（展開
層）。

次にこの布（展開層）」二に、それぞれ下記の組成（Ｃ
）の水溶液を１２０ｃｃ／ｍ’の；１３合でほぼ均一に
塗布し、乾燥させ、ＬＤＨ活性測定用一体型多層分析要
素を作製した。

（ｃ） トリスヒドロキシメチルアミノメタン １．２ｇ ポリビニルピロリドン　　　　ｌｏｏｍＭ（５％エタノ
ール溶液） ［比較例１］ 比較のために、−［二記組成（ａｌ）の溶液の代わりに
一ド記組ＪＪｊ、（ａ、）の溶液を用い、それ以外は実
施例１と同様にしてＬＤＨ活性測定用分析要素を作製し
た。

（ａｌ） ゼラチン　　　　　　　　　　１００［（１０％水溶液
） 界面活性剤　　　　　　　　　０．４ｇ（すりン社製５
ｕｒｒａｃＬａｎＬ　　ｌ　ＯＧ　）ｐＨを調節　　　
　　　　　　６．５にＩＮＴ　　　　　　　　　　　　
　　Ｉｇ［Ｉ１Ｍ定例１］ １−記実施例１および比較例１の発色層の塗４１液（ａ
ｌ）および（ａ、）を温度４０°Ｃに保って、調製後１
時間、２時間、３時間、６時間、２４時間経過させたも
のについて、それぞれ波長５００ｎｍにおける分光透！
ＳＣ度を測定した（セル厚さ１０　ｍ　ｍ　）。その結
果を第１表に示す。

第１表 （ａ、）　　　　　　（ａ＝　） １　　　　０．０２３　　　０．３１５２　　　　０．
０２５　　　０．５３２３　　　　０．０４６　　　０
．６２０６　　　　０．０９８　　　０゜８８７２４　
　　　０．２８５　　　１．１５１第１表て明らかなよ
うに、結合剤としてポリアクリルアミドを用いた発色層
Ｑ　４ｊ液は、Ａ製後６時間経過しても発色濃度が充分
低く、塗／ｌｉ液の経時て生した染料の量がわずかであ
る。ゼラチンを用いた比較例は、液を３時間以し放置し
た場合筈しい発色を生じた。

［測定例２］ 上記組成（ａ、）の代わりに下記組成（ａ２）を用いた
こと以外は、測定例１と同様にして発色層塗布液を調製
した。

（ａ２） ポリアクリルアミド　　　　　１００ｇ２０％水溶液 界面活性剤　　　　　　　　　０．４ｇ（オリン社製５
ｕｒｒａｃＬａｎＬ　　Ｉ　ＯＧ　）ｐＨを調節　　　
　　　　　　６．５にＮＢＴ　　　　　　　　　　　　
　　１ｇ比較のために、−１−記組Ｊｊｉ、（ａ３）の
溶液の代わりにド記組成（ａ４）の溶液を用い、それ以
外は比較例１と同様にして発色層用捨１（ｉ液を作製し
た。

（ａ、） ゼラチン　　　　　　　　　　ｌｏｏｇ（１０％水溶液
） 界面活性剤　　　　　　　　　０．４ｇｐＨ？：調節　
　　　　　　　　６・５にＮＢＴ　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　Ｉｇ」−記塗４ｊ液（ａ
２）および（ａ４）を温度４０°Ｃに保って、調製後１
時間、２時間、３時間、６時間、２４時間経過させ、そ
れぞれ波長５４０ｎｍにおける分光透過濃度をｉｔ一定
した。その結果を第２表に示す。

第２表 （ａ２）　　　　　（ａ、） １　　　　０．０２２　　　０．３７０２　　　　０．
０２５　　　０．５２６３　　　　０．０５２　　　０
．６８２６　　　　０．０７９　　　１．０１２２４　
　　　０．１８７　　　１．７１０第２表で明らかなよ
うに、結合剤としてポリアクリルアミドを用いた塗布液
（ａ２）は、調製後６時間経過しても１発色濃度が充分
低く、塗ＩＯ液の経時で生した染料の；ｌ￥かわずかで
ある。ゼラチンを用いた比較例（ａ、）は、液を３時間
以上放置した場合著しい発色を生じた。

［測定例３］ 実施例１における塗布液（ａ、）の代わりにポリビニル
ピロリドンを含む下記組Ｉ＆、（ａ５）を用い実施例１
と同様にして、発色層塗布液を作製した。

（ａ５） ポリビニルピロリドン　　　　ｌｏｎｇ（２０％水溶液
） 界面活性剤　　　　　　　　　０．４ｇ（オリン社製Ｓ
　ｕｒｆａｃＬａｎｔ　ｌ　ＯＧ　）ｐＨを調節　　　
　　　　　　６・５にＩＮＴ　　　　　　　　　　　　
Ｏ，８ｇ上記塗４ｉ液を温度４０℃に保って、調製後１
時間、２時間、３時間、６時間経過させたものについて
、それぞれ波長５００ｎｍにおける分光透過濃度を測定
した（セル厚さ１０ｍｍ）。その結果を第３表に示す。

第３表 放置時間　　　　　　反射濃度 ｌ（時間）　　　　　０．１２３ ２　　　　　　　　　　　　　　　　０、　１３６３　
　　　　　　　０．１４１ ６　　　　　　　　０．１５０ ［測定例４］ 測定例３における塗布液（ａ、、）中のＩＮＴの代わり
にＮＢＴを０．５ｇ用いた以外は、測定例３と同様にし
て、発色層塗布液を調製した。

］二記塗布液を温度４０℃に保って、調製後１時間、２
時間、３時間、６時間経過させたものについて、波長５
５０ｎｍにおける分光透過濃度を測定した（セル厚さｌ
　Ｏｍ　ｍ　）。その結果を第４表に示す。

第４表 放置時間　　　　　　反射濃度 ■（時間）　　　　　０．０２４ ２　　　　　　　　０．０２７ ３　　　　　　　　０．０２８ ６　　　　　　　　０．０３８ 第３表および第４表で明らかなように、結合剤としてポ
リビニルピロリドンを用いた場合は、塗布液の調製後６
時間経過しても１発色濃度（背景濃度）が］−分低く、
液の経時で生じた染料のＮ１１かわずかてあった。

［実施例２］ 下塗りされている厚さ１８０７ｚｍのポリエチレンテレ
フタレート無色透ＩＪＪ＋滑フィルムｔにド記組成（ａ
ｕ　）の水溶液を塗ｈ　（ｌ　ＯＯｃ　ｃ　／　ｍ’　
）し、乾燥した（発色層）。

（ａｏ　　） ビニルピロリドン−１００ｇ アクリルアミド共屯合体 重重合比１：１） （１５％水溶液） 界面活性剤　　　　　　　　　０．４ｇ（オリン社製５
ｕｒｆａｃｔａｎｔ　　ｌ　ＯＧ　）ｐＨを調節　　　
　　　　　　６・５にＩＮＴ　　　　　　　　　　　　
ｌ・Ｏｇ（メタノールｌＯｍ　ｌ＋水１Ｏｍ　ｌ中に溶
解）次にＥ配充色層！；に、下記組成（ｂｏ）の水溶液
を塗布し、（１５０ｃｃ／ゴ）、乾燥した（反応層）。

（ｂｏ　） ビニルピロリドン−１００ｇ アクリルアミド共重合体 （重合比ｌ二１） （１５％水溶液） 界面活性剤　　　　　　　　　０．４ｇ（オリン社製５
ｕｒｆａｃＬａｎし　ｌ　ＯＧ）乳酸リチウム　　　　
　　　　　１．９ｇＮＡＤ　　　　　　　　　　　　　
０．４ｇジアホラーゼ　　　　　・　　２４００１　Ｕ
ｐＨを調ｆｔｉ　　　　　　　　　７．０に次にＬ記ゼ
ラチン層１−に約３０ｇ／ｒｎ’の割合て氷を全面に供
給して湿潤させた後、ポリエステル製トリッコト編み物
（厚さ０　、２５　ｍｍ）を、軽く圧力をかけながらラ
ミネートシ、乾燥して接着させた（展開層）。

次にこの布（展開層）Ｌに、下記組成（ｃｏ　）の水溶
液を１２０ｃｃ／ｒｒｒ’の一１合てほぼ均一に塗布し
、乾燥させ、ＬＤＨ活性測定用一体型多層分析要素を作
製した。

（ｃｏ　） トリスヒドロキシメチルアミノメタン １．２ｇ ポリビニルピロリドン　　　　１００ｍ１（１０％エタ
ノール溶液） 実施例２の分析要素に市販管理血清モニトロールｒｌＸ
　（ＬＤＨ４７０Ｕ／Ｌを含む）をｌＯ終り点着し１分
析要素を密閉合奏中て３７℃に保った際の、１分後から
５分後の間の反射濃度を波長５４０ｎｍて測定した。ま
た、ヒト血清アルブミン（７％）を用いて、同様に測定
した。その結果を第５表に示す。

第５表 測定時間　　　　　　反射濃度 管理直情　　　　　ＨＳＡ ｌ（分）　　０．６３２　　　０−４１１２　　　　０
．７３７　　　０．４２８３　　　　０．８１１　　　
０．４３９４　　　　０．８６２　　　０．４４Ｂ５　
　　　０．９０５　　　０．４６６［測定例５コ 実施例２に従って調製した発色層形成用塗布液（ａｎ　
）を調製後潟度３７°Ｃで１時間、３時間、または６時
間放置した後に１分光透過濃度（波長５００ｎｍ、セル
厚さ１００ｍｍ）を測定した。

結果を第６表に示す。

第６表 調液後　　　　　　　分光透過濃度 放を時間　　　　　　（実施例５） ｌ（時間）　　　　　０．００９ ３　　　　　　　　０．０４５ ６　　　　　　　　０．０７７ 第６表から明らかなごとく１本発明の乾式分析要素の発
色層塗布液は、液の放置による影響を受けにくい。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 検出試薬系として、酸化型ニコチンアミド補酵素と、電
   子伝達性化合物と、染料を形成し得る電子受容性化合物
   とを有する乾式分析要素であって、フォルマザン染料を
   形成し得る電子受容性化合物が親水性高分子結合剤から
   成る層中に存在し、該親水性高分子が、下記の一般式［
   I ］または［II］で表わされる単量体成分の重合体ま
   たは該単量体成分と共重合し得る他の単量体成分との共
   重合体であることを特徴とする乾式液体分析要素： ［ I ］▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｒ＾１は水素原子または低級アルキル基を表す
   。Ｒ＾２およびＲ＾３は各々水素原子、脂肪族炭化水素
   基または芳香族炭化水素基を表わし、互いに同じでも、
   異っていてもよい。またＲ＾２とＲ＾３が連結して環を
   形成してもよい。］ ［II］▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中Ｒ＾４はＲ＾１と同義である。Ｑは （１）▲数式、化学式、表等があります▼ （ここでｑは２ないし４の整数を表わす） （２）−ＮＲ＾５−ＣＯ−Ｒ＾６ （ここでＲ＾５は炭素数１ないし４のアルキル基、Ｒ＾
   ６は水素原子または炭素数ない し４のアルキル基を表わす） または、 （３）▲数式、化学式、表等があります▼ （Ｚ＾１はピロリドン環、オキサゾリドン環またはピリ
   ドン環を形成するに要する原 子群を示す） を表わす。］。