JPS62201822A - 自己免疫性疾病の予防・治療剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は自己免疫性疾病の治療に有効なヒト血清中の袖
体制御因子ファクターＩ　（Ｆａｃｔｏｒ　Ｉ　）およ
びファクターＨ（Ｆａｃｔｏｒ　Ｈ）に関する＠一般に
、体内で抗体が異極抗原あるいは同攬抗原と特異的に反
応すると、抗原・抗体複合体が形成され、その多（はさ
らに血清の袖体成分（Ｃ１，Ｃｄ、　Ｃ２，Ｃ３）と反
応してＣ３ｂ　か結合した抗原・抗体・補体複合体いわ
ゆる免４１４１１合体（Ｉｍｍｕｎｅ　Ｃｏｍｐｌｅｘ
　）が生成される。この免疫複合体は補体成分Ｃ５〜Ｃ
９と反応し、膜破訣複合体ｃｓｂ〜Ｃ９および炎症のメ
ディエータ−であるアナフイラトキシンＣ５ａを産生せ
しめ、また血管内外の組織に沈着し、炎症・組織破壊を
引き起こす。一方、体内ではこの危険な免疫複合体を不
活性化し処理する機構も存在する。即ち、活性型の免疫
複合体（Ｃ３ｂが結合している）は補体制御因子である
ファクターＩ、ファクターＨ、Ｃ４ｂ　ｂｉｎｄｉｎｇ
　ｐｒｏｔｅｉｎ　、および赤血球・食細胞上に存在す
る補体リセブター（Ｃ’Ｒ１，ＣＲ２゜ＣＲ３）などに
より、そのＣ’３ｂが不活性化された免疫複合体（不活
性型）になり、最終的には肝臓で処理・代謝される。し
たがって、血中の免疫複合体の童はその生成量と分解・
処理される童との量的バランスに依存すると考えられる
。

一方、現在有効な治遼法か確立していない全身性エリス
マトーデス（ｓｙｓｔｅｍｉｃ　Ｉｕｐｕｓ　ｅｒｙｔ
ｈｅｍａ−ｔｏｓｉｓ　：　ＳＬＥ　）やリューマチ様
関節炎（ｒｈｅｍａｔｏｉｄａｒｔｈｒｉｔｉｓ　：　
ＦＡ　）および　糸琢体腎炎などの自己免疫性疾病は免
疫複合体が血管内外に蓄積するために起こる血管病変を
主体とする疾病であると考えられているが、なぜ免ｆ′
ｆｌＬ合体が蓄積するのかは、まだ元号には明らかにさ
れていない。

最近、ヒト赤血球上に存在するＣ３ｂ　ｒｅｃｅｐｔｏ
ｒ（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　１、以
下ＣＲＩという）の赤血球あたりの部数（５ｉｔｅｓ／
ｃｅｌｌ　）が低値であること（遺伝支配）とＳＬＥ性
疾患とに相関関係があることが分かり、そのことから免
疫複合体の処理能力の低下がＳＬＫ性疾病の発症および
症状増悪の原因の一つであることが示唆された（　Ａｒ
ｔｈｒｉｔｉｓ　Ｒｈｅｕｍ、　２Ｔ、　１３２９　（
１９８４）　）。しかしなから、ＳＬＥ性疾病患者の約
４０％ではＣＲ１部数が正常であること、正常人の約１
２９６はＣＢ１部数が低値であること、また８Ｉ、に性
疾病の増悪期と緩解期でＣＢ１部数が一定であることか
ら、ＣＲ１部数の低下のみでＳＩＪ性の疾病の発症およ
び症状増悪を脱明できない。

本発明者はＣＲＩ以外の本疾病の発症および症状増悪に
関与する因子を探求しつづけた。その結果、前述のごと
く免疫複合体を不活性化するのに関与する鞠体制御因子
のファクターＩ　（Ｉ）およびフアクターＩ（（ＩＩ）
の血清中の濃度がＳＬ、ＩＣ性疾病の増悪期前期および
その直前に低下することを見い出し、両因子の低下が免
疫複合体蓄積の原因であり、ひいては本疾病の発症およ
び症状増悪の原因の一つであることを明らかにした。

以上のことから、ＳＬＥ性疾病などの自己免疫性疾病の
予防・治療においては、ファクターＩおよびファクター
Ｈの免疫複合体の不活性化を促進させるものが有効であ
ると考えられる。しかるに１以上の目的で、フアクター
ＩおよびファクターＨの自己免疫性疾病に対する予防−
治療効果を検討した報告はない。

本発明者は、以上の知見に基づき、フアクターＩおよび
／またはファクターＨな自己免疫性疾病のモデル動物に
投与し、鋭意研究した結果、ファクターエおよびファク
ターＨが自己免疫性疾病に対して搬れた予防・治療効果
を有することを見い出し、本発８Ａヲ完放させた。

即ち、本発明はヒト補体制御因子ファクターＩおよび／
またはファクターＨな有効成分とする自己免疫性疾病の
予防・治療剤を提供するものである。

本発明の基本的原理は本発明の有効成分であるファクタ
ーエおよび／またはファクターＨを投与することにより
、本疾患の原因物質である活性型の免疫複合体を強制的
に不活性化することに基づく。

本発明の有効成分であるファクター■およびファクター
Ｈは公知のものであり、既知の方法を組合せることによ
り純品なタンパクまで精製することかできる。即ち、フ
ァクターＩはヒト新井フラズマをリジンセファロース、
　ＱＡＥ−セファデックス、　Ｃ３ｂ−セファロース、
セファデックスＧ−１５００カラムクロマトグラフイー
に付すことにより精製できる。また、本発明者が作成し
たファクター■のマウス単一クローン性抗体を固定化し
たアガロースを用いてヒトプラズマから一段階でほとん
ど純品なタンパクまでに精製できる。

ファクターＨはヒト新鮮プラ、ズマなリジン−セファロ
ース、ＱＡＥ−セファデックス、ＤＩＡＩ　−トヨパー
ル、セファクリル８−３００　、ハイドロキシアパタイ
トのカラムクロマトグラフィーに付すことにより精製で
きる。

なお本発明のファクターＩおよびファクターＨはファク
ターＩおよびファクター■のｃ−ＤＮＡおよびｇｅｎｏ
ｍｉｃ　ＤＮＡを遺伝子工学的操作によって大腸菌・酵
母？放線菌および高等動物細胞で発現させることから、
遺伝子工学的操作により得ることも可能である。

本発明の有効成分であるファクターＩおよびファクター
Ｈにリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）に溶解して使用で
きる。また、ファクター！およびファクターＨの安定性
を保つためにヒトトランスフェリンあるいはヒト血清ア
ルブミンを添加したＰＢＳに＃解して使用することも可
能である。

本発明の自己免疫性疾病の予防・治療剤は経口投与およ
び非経口投与が可能であるか、静脈注射等の非経口投与
が望ましい。

投与量は患者の年令、病状および体重などにより異なる
。一般に大人１日あたり、有効成分であるファクターＨ
として５０〜１００８１１９．ファクターＨとして５０
〜６０００■であり、必要に応じて１日Ｋ（０１回かに
分けて投与することができる。

本発明の自己免疫性疾病の予防・治療剤として有効成分
のファクターＨおよび／またはファクターＨ自体を投与
することができるが、通常は種々の医薬組成物とし【投
与される。

そのような医薬組成物の剤をの例としてはカプセル剤、
注射剤、点滴用注射剤等があげられる。

なお、ファクターＨおよびファクターＨの毒性は例えば
マウスのＬＤ５Ｑが静脈注射でそれぞれ２１７ｋｇ以上
および３　ｆ／−以上である。

以下、実施例によって本発明を更に詳細に説明するが、
本発明はこれに限定されるものではない。

実施例１　ファクターＩおよび／またはファクターＨの
自己免疫性疾病モデルマウ スに対する効果 ヒ）　ＳＬＥ性医病のモデル動物とされる自己免疫異常
自然発症マウスＭＲＬ／ｌｐｒを実験に使用した。ＭＲ
Ｌ／ｌｐｒマウスは加齢とともに血中に免疫複合体が増
加し、それらが腎糸球体に沈着することにより腎不全に
なりタンパク族を呈するよ５になる。したがって、ｎｕ
Ｌ／ｌｐｒの尿中のタンパク量を定量することにより病
状を判定できる。

なお、本実施例で用いたファクターＨおよびファクター
ＨはＳＤ８　＝気泳動で単一のバンドを示した。

ＭＲＬ／１ｐｒ−ｒウス（生後ｔｚＭ）を１群５匹で４
群に均等（タンパク族な定量して）に分け、第１群を；
ントロール！Ｉｔ；　（ＰＢＳのみを投与）、第２群を
ファクターＩ投与群（６η／−１静脈投与）、第３群を
ファクターＨ投与群（ｔｏｏη／−１靜脈投与）、第４
ｔ＃をファクターＩ（６η／−１静脈投与）＋ファクタ
ーＨ（１００η／ｋｇ、静脈投与）投与群とした。ファ
クターＨ２よびファクターＨはＰＢＳに溶解して使用し
、上述の投与量で３〜５日に１回ずつ４竜間投与した。

なお、コントロール群はＰＢＳのみを投与した。最終投
与の１日後に、各群のマウスをそれぞれの採尿ケージ（
メタポリツクケージ）で２４時間飼育し尿を採集した。

尿中のタンパク量は牛血清アルブミンをスンンダードに
してバイオラド社のプロティンアッセイキットを用いて
定量した。結果を嵌１に示す。その結果、ファクターＩ
投与群、ファクターＨ投与群、ファクター！＋ファクタ
ーＨ投与群はコントロール群にくらべ著明なタンパク族
の減少が認められた。

表　１ １、コントロール　　　　　　　　　　１４．９２フア
クター■投与　　　　　　　　　　　９．７１フアクタ
ーＨ投与　　　　　　　　　　　７．４４、ファクター
！＋ファクターＨ投与　　　　６，５実施例２　ファク
ターＨの１回投与によるタンパク尿減少効果 生後１６週のすでに胃炎が発症しているＭＲＬ／ｌｐｒ
マウスを１群５匹で均等に２１＃（第１群と第２群）に
分けて飼育し、飼育開始１日後に各群のマウスをそれぞ
れの採尿ケージで１１時間１１１ｉｌｌｒシ尿を採集し
、尿中のタンパクを実施例１の場合と同様に定量した。

飼育開始２日後に第１群をコントロール群ＣＰＢＳのみ
投与）、第２群を７アクターＨ（８η／−１静脈投与）
投与群として、上述の投与蓋で１回投与した。飼育開始
３日後（投与開始１日後）、６日後、１０日後、１４日
後、２２日後、３１日後に同様に採尿ケージで１１時間
飼育し尿を採集し、尿中のタンパク量を定量した。結果
な第１図に示す。

第１図より、ファクターＨの１回投与によりタンパク族
は経時的にかつ著明に減少し、その減少効果は約２０日
間持続した。一方、ＰＢＳを投与したコントロール群で
は経時的にタンパク族が増加した。

実施例３　ファクター！投与にょる腎糸球体濾過機能改
善効果 生後２３週ですでに胃炎が発症している・ＭＲＬ／ｌｐ
ｒマウスを１群５匹で２群（第１群と第２群）に均等に
分けて飼育し、飼育開時１日後に各群のマクスを採尿ケ
ージで１７時間飼育し尿を採集した。飼育開始２日後お
よび６日後に第１群をコントロール群（ＰＢＳのみを投
与）ｓ　＃！２群をファクター！投与群（１”９７ｋｇ
ｔ靜脈投与）として、実施例１と同様にＰＨ１Ｋ溶解し
た７アクターエを上述の投与量で１回ずつ合計２回投与
した。なお、コントロール群にはＰＢＳのみを同様に投
与した。各投与の３日後に各群のマウスをそれぞれ採尿
ケージで１Ｔ時間訓育し尿を採集した。採集した尿の総
タンパク童は実施例１゜と同様にバイオラド社のプロテ
ィンアッセイキットを用いて定量した。また尿中のタン
パクをポリアクリルアミドゲル−８ＤＢ電気泳動で分画
し、ゲルをクマッープルーで染色、メタノール・酢酸浴
液で脱染０後、デンシト・メーター（Ｃ８−９００−３
０、島津裏作所製）で分画された各バンドのタンパク量
を定電した。

尿中の総タンパク麓および分画された各バンドのタンパ
ク蓋から、マクス１匹当り１時間に排出される高分子画
分（ＭＷ４０に以上）および低分子画分（ＭＷ４０に以
下）のタンパク量を計算した。結果を第２図に示す。

第２図より、ファクターＩの投与によって正常マウスお
よび発症前のＭＲＬ／ｌｐｒ　？ウスに存在する分子量
４万以下の低分子タンパク画分（主として分子量１万４
千と２万２千のもの）はほとんど変化を受けないが、発
症したマウスに多室に存在する分子１１４万以上の高分
子タンパク画分（主として分子量６万５千のもの）は経
時的にかつ著明に低下し、腎糸球体の濾過機能が改畳さ
れることが総められた。一方、ＰＢＳのみｔ投与したコ
ントロール群では経時的に高分子タンパク１分が増加し
、腎糸球体機能が低下することが分かった。なお正常な
腎糸球体は分子量４万以下のタンパクなＰ、ｉＩ！４す
るが、分子量４万以上のタンパクを濾過できない。

【図面の簡単な説明】

第１図はファクターＨの１圓投与にょるタン示す。Ｏは
コン、トロール群を示し、・はファクターＨ投与群を示
す。 第２因はファクター！投与による胃糸球体濾過機能改醤
効果を示す。 １中、縦軸は尿タンパク量（ダ／時間／マッス）を示し
、横軸は日数を示す。−〇−〇−はコントロール群の高
分子タンパク画分、−＝０−−−−−−リーーはコント
ロール群の低分子タンパク画分を示し、−〇−ゆ−はフ
ァクター！投与群の高分子タンパク画分、−・−一−−
−−−−・−はファクター！投与群の低分子タンパク画
分を示す。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. ヒト補体制御因子フアクターＩおよび／またはフアクタ
   ーＨを有効成分とする自己免疫性疾病の予防・治療剤。