FR2967071A1 - Facteur h pour le traitement de maladies auto-immunes du systeme nerveux - Google Patents

Abstract

L'invention concerne l'utilisation du Facteur H pour le traitement d'une maladie auto-immune du système nerveux comme les désordres neuromusculaires et les neuropathies périphériques, en particulier les myasthénies et le syndrome de Guillain-Barré.

Description

L'invention concerne l'utilisation de Facteur H pour la fabrication d'un médicament destiné au traitement des maladies auto-immunes du système nerveux. Etat de la technique : 5 Les maladies auto-immunes du système nerveux sont des désordres provoqués par des réponses immunitaires cellulaires ou humorales dirigées initialement contre des auto-antigènes du système nerveux. Parmi les maladies auto-immunes du système nerveux, on peut distinguer entre les atteintes 10 limitées au système nerveux central, les maladies neuromusculaires, dont en particulier la myasthénie, caractérisées par un désordre de la jonction neuromusculaire, et les neuropathies périphériques (comme le syndrome de Guillain-Barré), caractérisées par l'inflammation du système nerveux périphérique. La jonction neuromusculaire est particulièrement sensible aux attaques médiées par des 15 anticorps (Lang B, Vincent A . Autoimmune disorders of neuromuscular junction. Curr Opin Pharmacol. 2009 Jun ; 9 (3) : 336-40). Dans le cas de la myasthénie, l'anomalie de fonctionnement de la synapse neuromusculaire résulte d'une réaction immune à médiation humorale dépendante des cellules T. Elle se traduit par une fatigabilité musculaire, aggravée par l'effort. Chez les patients atteints, le déficit musculaire peut-être extrêmement 20 variable en intensité et dépend essentiellement des territoires atteints. La maladie évolue progressivement par poussées. Elle peut menacer le pronostic vital lorsqu'elle atteint par exemple les muscles de la déglutition ou les muscles respiratoires. (Gajdos P. Syndrome myasthénique. Rev Prat 2000, 50: 419-23). La myasthénie s'observe à tout âge, quel que soit le sexe, mais l'apparition de la maladie est influencée par l'âge et le sexe ; il existe 25 deux pics de fréquence : l'un entre 20 et 40 ans avec une prédominance féminine et l'autre vers 50 ans avec une prédominance masculine (Meriggioli MN et Sanders DB. Autoimmune myasthenia gravis : emerging clinical and biological heterogeneity. Lancet Neurol. 2009 May ; 8(5) :475-90.) La plupart des patients atteints de myasthénie présentent des anticorps anti-récepteurs acetylcholine (Anti-RACh) polyclonaux responsables d'une perte de 30 récepteurs Acetylcholine selon trois mécanismes : le blocage du site de fixation de l'Acetylcholine, la dégradation accélérée du récepteur Acetylcholine membranaire (modulation antigénique) et la destruction par le complexe lytique du complément (C5b-B9) de la membrane post-synaptique. (Eymard B. Anticorps dans la myasthénie. Rev Neurol . 2009 ; 165 (137-143). 35 Dans 20% des myasthénies généralisées, on ne détecte pas d'anticorps anti-RACh. Pour certaines, il s'agit d'anticorps anti tyrosine-kinase dirigée contre le muscle (MuSK). Les récepteurs MuSK induisent une agrégation des RACh sous l'action de l'agrine libérée par la terminaison nerveuse (Eymard B. Anticorps dans la myasthénie. Rev Neurol . 2009 ; 165 :137-143). Certains patients ne présentent ni anticorps anti-RACh, ni anti-MuSK. La présence d'autoanticorps tels que les anticorps anti-muscles striés, anti-nucléaires, anti-thyroïdiens ou encore le facteur rhumatoïde, traduit cependant un désordre autoimmun complexe à l'origine de la maladie.

Le principal traitement de cette maladie, en première intention, consiste en une administration d'anticholinestérasiques. L'utilisation de corticoïdes et/ou d'immunosuppresseurs est réservée au traitement chronique des formes résistantes aux anticholinestérasiques. Les échanges plasmatiques ou l'administration d'immunoglobulines intraveineuses (IgIV) sont indiqués dans le traitement de crise des poussées de la maladie.

Les neuropathies périphériques, quant à elles, sont de causes multiples. Elles peuvent être issues d'un processus local, diffus, métabolique ou toxique, comme d'un processus inflammatoire touchant les racines et les nerfs périphériques, provoquant ainsi une polyradiculonévrite.

Le principal symptôme du syndrome de Guillain-Barré (SGB) est une paralysie aiguë, ascendante. Le SGB atteint aussi bien les femmes que les hommes, quels que soient l'âge et l'ethnie. L'âge moyen observé est de 40 ans.

La lésion prédominante observée dans cette pathologie est une démyélinisation segmentée, disséminée le long des nerfs périphériques, provoquant un bloc de conduction au niveau de la fibre nerveuse. On observe sur le plan électrophysiologique, une diminution de la vitesse de conduction et une augmentation des latences distales. Ceci explique la rapidité de l'apparition de paralysies et leur résolution spontanée. Ce sont probablement un autre type de lésions, les lésions axonales, secondaires à une démyélinisation prolongée qui expliquent les séquelles motrices observées. Les processus qui déclenchent la démyélinisation ne sont pas connus, l'hypothèse d'une pathogénie auto-immune impliquant à la fois des mécanismes cellulaires et humoraux est généralement acceptée. Approximativement, les 2/3 des cas de syndrome de Guillain-Barré apparaissent après une infection à germes tels que : C. jejuni, cytomégalovirus (CMV), Mycoplasma pneumoniae ou virus grippal injluenzae (Burns TM. Guillain-Barré Syndrome. Semin Neuro12008 ; 28(2) :152-167). Ces agents infectieux présentent à leur surface des épitopes similaires à ceux présents sur la surface des nerfs périphériques (ex ; gangliosides, glycolipides...) ; ainsi, il semblerait que lors d'une infection banale, des anticorps fixant le complément (de type IgG1 ou IgG3 au lieu de IgM) se fixeraient également aux gangliosides des nerfs périphériques, induisant ainsi une réaction autoimmune de degré variable selon l'individu. Une atteinte de la myéline, macrophage-dépendante, est aussi observée ; elle serait médiée par des dépôts d'anticorps et de complément sur les cellules de Schwann et les membranes de myéline (Burns TM. Guillain-Barré Syndrome. Semin Neuro12008 ; 28(2) :152-167).

Le début de la maladie est d'apparition brutale avec des paresthésies distales relativement symétriques. Des perturbations sensorielles sont rapidement accompagnées ou suivies par une fatigue progressive des membres. La progression des symptômes est rapide, 50% des patients atteignent le nadir clinique en 2 semaines et 90% en 4 semaines (Burns TM. Guillain-Barré Syndrome. Semin Neurol 2008 ; 28(2) :152-167). Environ 80 à 90% des sujets atteints deviennent non ambulatoires au cours de la maladie. L'évolue clinique de la maladie est très hétérogène, la gravité maximale du déficit moteur est très variable. Des atteintes musculaires respiratoires, nécessitant une ventilation mécanique pendant 2 à 6 semaines en moyenne, apparaissent dans 20 à 30% des cas de SGB. Certaines atteintes peuvent provoquer des séquelles motrices invalidantes nécessitant une aide pour marcher ou l'utilisation d'un fauteuil ; des atteintes persistantes sont rapportées dans 20 à 30% des cas chez l'adulte. Le SGB peut entraîner la mort en phase aiguë de la maladie. La prise en charge thérapeutique repose sur deux types de mesures complémentaires : les mesures symptomatiques pluridisciplinaires à type de réanimation respiratoire, rééducation et prise en charge de la douleur ; et les mesures spécifiques ayant pour but de limiter l'extension des paralysies, favoriser la récupération motrice et réduire les séquelles. En particulier des échanges plasmatiques et les immunoglobulines intraveineuses (IgIV) sont préconisés.

Il existe toujours un besoin très important de nouvelles stratégies thérapeutiques pour traiter ces pathologies.

Résumé de l'invention : La Demanderesse de la présente invention propose d'utiliser le Facteur H pour le traitement d'une maladie auto-immune du système nerveux comme les désordres neuromusculaires et les neuropathies périphériques, en particulier la myasthénie et le syndrome de Guillain-Barré. Un objet de l'invention est donc un Facteur H pour une utilisation dans le traitement d'une maladie auto-immune du système nerveux.

L'invention vise encore l'utilisation de Facteur H dans la fabrication d'un médicament destiné au traitement d'une maladie auto-immune du système nerveux, qui peut être notamment (i) une maladie neuromusculaire, en particulier une maladie de la jonction neuromusculaire, comme la myasthénie, ou (ii) une neuropathie périphérique, comme le syndrome de Guillain-Barré.

L'invention décrit également une méthode de traitement chez un patient souffrant d'une maladie auto-immune du système nerveux, comprenant l'administration audit patient d'une quantité efficace de Facteur H. De manière préférée, le Facteur H est utilisée sous une forme purifiée à partir de plasma frais ou d'une fraction plasmatique. Selon un autre mode de réalisation, le Facteur H est utilisé sous une forme de Facteur H recombinant, de préférence produit par un animal transgénique. Description détaillée de l'invention : Définitions générales Le Facteur H est le principal régulateur de la voie alterne du complément. Il agit en phase liquide comme à la surface des cellules. Initialement désignée « bêta 1 H globuline », cette glycoprotéine sérique soluble de 155 kDa est également appelée Facteur H 1, FH, CFH, ou HF1. Le Facteur H est synthétisé dans le foie, les macrophages, les fibroblastes, les cellules endothéliales et les plaquettes. La forme sécrétée de la protéine est composée de 20 unités répétitives (ou « short consensus repeats », SCR) de 60 acides aminés. Par « Facteur H » on entend ici toute protéine ayant la séquence en acides aminés du Facteur H natif humain ou provenant d'une autre espèce (par exemple bovin, porcin, canin, murin). Le terme comprend également tout recombinant, dérivé ou mutant ayant une séquence substantiellement homologue au facteur H natif. L'expression « séquence substantiellement homologue » comprend toute séquence soumise à une ou plusieurs 4 substitutions, additions et/ou délétions, de préférence conservatives. Les expressions « substitutions, additions et/ou délétions conservatives » expriment tout remplacement, ajout ou suppression de résidu acide aminé par un autre, sans altération majeure de la conformation générale et/ou de l'activité biologique du Facteur H. La substitution conservative inclut, sans s'y limiter, le remplacement par un acide aminé ayant des propriétés similaires (comme par exemple la forme, la polarité, le potentiel de liaison hydrogène, l'acidité, la basicité, l'hydrophobicité et autres). Les acides aminés ayant des propriétés similaires sont bien connus dans l'art. Le terme « Facteur H » comprend en outre les variations alléliques naturelles et/ou les isoformes du Facteur H trouvées naturellement chez les individus d'une même espèce, et toute forme ou degré de glycosylation ou autre modification post-traductionnelle. Sont aussi compris les homologues ou dérivés du Facteur H qui présentent la même ou une activité biologique supérieure par rapport à l'activité de la forme sauvage et/ou qui présentent une identité de séquence d'au moins 80%, de préférence au moins 85%, de préférence encore d'au moins 90%.

L'activité anti-complémentaire du Facteur H se traduit par la régulation du taux de complexes immuns dans le sang, il participe par conséquent à l'équilibre entre les processus résultant en leur génération ou en leur dégradation. Le facteur H réduit la demi-vie de la C3 convertase (C3bBb) alterne en liant le C3b et en dissociant le Bb et sert de cofacteur au Facteur I dans la protéolyse du C3b, libre ou lié à la surface des cellules, en C3bi. Ainsi, les complexes immuns composés d'un complexe antigène-anticorps associé au composant du complément C3b ne peuvent plus activer la cascade subséquente du complément (composants C5-C9).

Le terme « activité biologique » du Facteur H inclut donc ici la capacité à inhiber la C3 convertase et/ou à servir de co-facteur du Facteur I, résultant à l'inhibition de l'activation de la cascade du complément. L'activité du Facteur H peut être mesurée de différentes manières, bien connues de l'homme du métier. Le terme "traitement" ou "thérapie" comprend aussi bien un traitement curatif qu'un traitement prophylactique de la maladie. Un traitement curatif est défini par un traitement aboutissant à une guérison ou un traitement allégeant, améliorant et/ou éliminant, réduisant et/ou stabilisant les symptômes d'une maladie ou la souffrance qu'elle provoque. Un traitement prophylactique comprend aussi bien un traitement aboutissant à la prévention d'une maladie qu'un traitement réduisant et/ou retardant l'incidence d'une maladie ou le risque qu'elle survienne. Indications thérapeutiques L'invention a donc pour objet l'utilisation du Facteur H pour le traitement de maladies auto-immunes du système nerveux, encore appelées atteintes nerveuses immuno-induites. La maladie auto-immune du système nerveux peut être une maladie neuromusculaire, telle qu'une myasthénie (myasthenia gravis) ou un syndrome de Lambert-Eaton, ou une neuropathie périphérique, comme un syndrome de Guillain-Barré. De manière générale, toutes les maladies auto-immunes du système nerveux central ou périphérique sont incluses. En particulier le Facteur H est utile pour le traitement des désordres de la jonction neuromusculaire et des neuropathies périphériques, notamment dans le traitement des poussées myasthéniques rebelles et le syndrome de Guillain-Barré.

Le Facteur H via son action inhibitrice sur la voie alterne du complément, intervient dans la modulation de la réponse immunitaire impliquée dans la pathogénése de ces atteintes nerveuses et favorise la prévention et la résorption des phénomènes inflammatoires observés dans ces pathologies. Le facteur H agit indirectement sur les composants du système complément impliqués dans le processus d'attaque médiée par les anticorps.

Obtention de préparations de Facteur H Le Facteur H, de préférence humain, peut être préparé par toutes les techniques classiques de purification, par synthèse peptidique, à savoir notamment par synthèse chimique, ou génie génétique.

Dans un mode de réalisation préféré, le Facteur H est obtenu à partir du sérum, de fractions plasmatiques, ou de fraction non cryoprécipitable du plasma, de préférence humain, par des procédés de purification classiques bien connus de l'homme du métier. La purification peut se dérouler par chromatographie en utilisant une colonne de lysinesépharose, QAESéphadex, DEAE-Toyopearl, Sephacryl S-300 et hydroxyapatite. Elle est détaillée dans les documents suivants: Fearon, J Immunol, 119, 1248-1252 (1977) ; Crossley et al, Biochem J, 191, 173-182, (1980) ; Nagasawa et al, J Immunol, 125, 578-582, (1980) ; Weiler et al, P.N.A.S., 73, 3268-3272, (1976) et Whaley et al, J Exp Med, 144, 1147-1163 (1976). Le Facteur H résultant d'une purification à partir de plasma frais congelé se trouve par exemple sous la forme d'un concentré de facteur H. Une forme purifiée de Facteur H est pure à plus de 95%, de préférence à plus de 99%. De préférence le Facteur H est stocké sous forme lyophilisée. Selon un mode de réalisation préféré, le Facteur H est donc obtenu à partir d'une préparation lyophilisée.

La préparation de Facteur H utile dans l'invention a généralement subi au moins une étape d'élimination ou d'inactivation d'au moins un agent infectieux. Parmi les agents infectieux, on peut citer les virus et les, ATNC (agents transmissibles non conventionnels) comme le prion. Une inactivation virale comprend souvent un traitement avec des produits chimiques, par exemple par solvant, détergent et/ou par la chaleur, par exemple par chauffage à sec ou pasteurisation, et/ou par une nanofiltration. La préparation de facteur H peut être obtenue par purification selon la méthode décrite dans la demande de brevet WO2007/066017, comprenant les étapes consistant à : (i) préparer le surnageant d'un cryoprécipité du plasma, (ii) soumettre ce surnageant à une chromatographie sur gel/résine de type échangeur d'anions (iii) soumettre la fraction non retenue à une chromatographie sur un(e) gel/résine comportant un ligand greffé de type Héparine (iv) ajuster le pH de la fraction non retenue après la chromatographie de l'étape précédente pour permettre la liaison du Facteur H à un(e) gel/résine de support 20 chromatographique comportant un ligand greffé de type Héparine, (v)éluer le facteur H par un tampon de force ionique supérieure à celle du tampon d'équilibrage du gel/de la résine, (vi) diluer la fraction éluée, puis la soumettre à une chromatographie sur gel/résine de type échangeur de cations de type acide fort, 25 (vii) éluer le facteur H par un tampon de force ionique supérieure à celle du tampon d'équilibrage du gel/de la résine, (viii) diluer la fraction éluée, puis la soumettre à une chromatographie sur gel/résine de type échangeur d'anions de type acide fort, (ix) laver le gel/la résine et éluer le facteur H, 30 (x)préparer un concentré de facteur H. Avantageusement, le pH de la fraction non retenue de l'étape iv) est ajusté pour être compris dans la gamme allant de pH 5,5 à pH 6,5 et de préférence pour être égal à pH 6,0. Avantageusement, le pH de la fraction diluée à l'étape viii) est ajusté pour être compris dans la gamme allant de pH 6,5 à pH 7,5.

Selon un autre mode de réalisation, la Facteur H peut être purifié à partir de plasma selon le procédé décrit dans la demande de brevet WO2008/113589. Le Facteur H peut aussi être obtenu par génie génétique, par l'expression de son gène dans une cellule choisie dans le groupe composé des bactéries, levures, champignons ou des cellules de mammifères, ou encore à partir d'animaux transgéniques. Selon un mode de réalisation préféré, le Facteur H humain est produit dans le lait de mammifères transgéniques non humain, modifiés génétiquement pour produire cette protéine. De préférence, il s'agit du lait d'une lapine ou d'une chèvre transgénique. La sécrétion de Facteur H par les glandes mammaires, permettant sa sécrétion dans le lait du mammifère transgénique, implique le contrôle de l'expression du Facteur H de manière tissu-dépendante. De telles méthodes de contrôle sont bien connues de l'homme du métier. Le contrôle de l'expression est effectué grâce à des séquences permettant l'expression de la protéine vers un tissu particulier de l'animal. Il s'agit notamment des séquences promotrices WAP, bêta-caséine, bêta-lactoglobuline et des séquences peptides signal. Le procédé d'extraction des protéines d'intérêt à partir du lait d'animaux transgénique est décrit dans le brevet EP 0 264 166.

Formulation De manière à obtenir des préparations de Facteur H à usage thérapeutique, qui soient stables, la préparation de Facteur H obtenue est formulée avec des excipients et agents stabilisants appropriés. Il peut s'agir de diluants, d'agents, cryoprotecteurs, lyoprotecteurs, etc. Parmi les lyoprotecteurs classiques, on peut citer les sucres (saccharose, tréhalose, glucose, lactose etc.), les polyols (mannitol, sorbitol) et les acides aminés (glycine, arginine, histidine, alanine) qui peuvent être utilisés à une concentration entre 0 et 10%. Des tensio-actifs de type polysorbate (Tween 20 ou Tween 80 par exemple), polyoxamer (par exemple poloxamer 188), polyéthylène glycol peuvent être ajoutés également. On peut encore ajouter des antioxydants (par exemple méthionine, monothioglycérol, glutathione, acide citrique, acide ascorbique, sodium metabisulfite, et sodium sulfite).

Des substances tampon peuvent être encore utilisées, par exemple sous forme de carbonate, phosphate, citrate, acétate, borate, trimethamine [(2-amino-2-hydroxymethyl-1,-3- propanediol),TRIS], glycine et lysine.

Modes d'administration Le Facteur H est de préférence formulé au sein d'une composition pharmaceutique, ladite composition pharmaceutique comprenant du Facteur H et un support ou un ou plusieurs excipients pharmaceutiquement acceptables.

La composition pharmaceutique peut comprendre le Facteur H en combinaison avec un autre agent thérapeutique. Selon un mode de réalisation préféré, le Facteur H est utilisé sous forme de composition liquide comprenant une concentration en Facteur H comprise entre 0,5 et 50g/L, de préférence entre 1 et 30g/L, de préférence encore entre 5 et 20g/L, ou encore entre 10 et 20g/L. Le Facteur H peut être administré par toute voie d'administration connue, incluant les voies : systémique (parentérale, intraveineuse...), topique, orale, rectale, sous-cutané, intrarachidienne et intranasale, en une quantité appréciée par le praticien. Selon un mode de réalisation préféré, le Facteur H est administré par voie intraveineuse.

Les doses de Facteur H utilisé in vivo sont ajustées de manière classique en fonction de l'effet souhaité, en particulier pour module l'inflammation, et de la pathologie visée. Un exemple de dose adaptée est une dose à une concentration allant de 5 à 2000 mg par jour, de préférence 5 à 1000 mg par jour, de préférence de 20 à 500 mg par jour, de préférence encore de 50 à 100 mg/jour.20

Claims (11)

1. REVENDICATIONS1 Facteur H pour une utilisation dans le traitement d'une maladie auto-immune du système nerveux.
2. 2. Facteur H selon la revendication 1, la maladie auto-immune du système nerveux étant une maladie neuromusculaire, en particulier une maladie de la jonction neuromusculaire. 10
3. 3. Facteur H selon la revendication 2, la maladie neuromusculaire étant une myasthénie.
4. 4. Facteur H selon la revendication 1, la maladie auto-immune du système nerveux étant une neuropathie périphérique.
5. 5. Facteur H selon la revendication 4, la neuropathie périphérique étant un syndrome de Guillain-Barré.
6. 6. Facteur H selon l'une des revendications 1 à 5, sous une forme purifiée à partir de 20 plasma frais ou d'une fraction plasmatique.
7. 7. Facteur H selon l'une des revendications 1 à 6, qui est un Facteur H humain.
8. 8. Facteur H selon l'une des revendications 1 à 5, sous une forme de Facteur H 25 recombinant produit par un animal transgénique.
9. 9. Facteur H selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, sous une forme adaptée pour une administration intraveineuse. 30
10. 10. Utilisation d'un Facteur H pour la préparation d'un médicament destiné au traitement d'une maladie auto-immune du système nerveux.
11. 11. Utilisation d'un Facteur H selon la revendication 10, dans laquelle la maladie auto-immune du système nerveux est une maladie neuromusculaire, en particulier la 35 myasthénie ou une neuropathie périphérique, comme le syndrome de Guillain-Barré. 15