JPS62192481A - 螢光偏光イムノアツセ−用４′−アミノメチルフルオレセイン誘導体の製造法 - Google Patents
螢光偏光イムノアツセ−用４′−アミノメチルフルオレセイン誘導体の製造法Info
- Publication number
- JPS62192481A JPS62192481A JP917787A JP917787A JPS62192481A JP S62192481 A JPS62192481 A JP S62192481A JP 917787 A JP917787 A JP 917787A JP 917787 A JP917787 A JP 917787A JP S62192481 A JPS62192481 A JP S62192481A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- aminomethylfluorescein
- ligand
- tracer
- derivative
- immunoassey
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 6
- 230000010287 polarization Effects 0.000 title description 8
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 13
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 11
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- SBZXBUIDTXKZTM-UHFFFAOYSA-N diglyme Chemical group COCCOCCOC SBZXBUIDTXKZTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 21
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 239000000700 radioactive tracer Substances 0.000 description 11
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 8
- 238000002875 fluorescence polarization Methods 0.000 description 7
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000039 congener Substances 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 3
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N sulfuric acid Substances OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XTHFKEDIFFGKHM-UHFFFAOYSA-N Dimethoxyethane Chemical compound COCCOC XTHFKEDIFFGKHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 230000009137 competitive binding Effects 0.000 description 2
- 125000001475 halogen functional group Chemical group 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 2
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- TXNSZCSYBXHETP-UHFFFAOYSA-N 2-chloro-n-(hydroxymethyl)acetamide Chemical compound OCNC(=O)CCl TXNSZCSYBXHETP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- -1 ammonium acetate dimethanol (acetic acid) Chemical compound 0.000 description 1
- 210000004381 amniotic fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000012300 argon atmosphere Substances 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- HWJHZLJIIWOTGZ-UHFFFAOYSA-N n-(hydroxymethyl)acetamide Chemical compound CC(=O)NCO HWJHZLJIIWOTGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D493/00—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system
- C07D493/02—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system in which the condensed system contains two hetero rings
- C07D493/10—Spiro-condensed systems
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
- G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
- G01N33/533—Production of labelled immunochemicals with fluorescent label
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Catalysts (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
発明の背景 １肌外！
本発明は螢光偏光イムノアッセーの試薬として使用でき
ろ４′−アミノメチルフルオレセイン誘導体の改良製法
に関する。
ろ４′−アミノメチルフルオレセイン誘導体の改良製法
に関する。
従来技術
競合結合性イムノアッセーは血清、血漿、を髄液、羊水
および尿の様な生理学的液体中の配位子濃度測定手段を
提供する。
および尿の様な生理学的液体中の配位子濃度測定手段を
提供する。
測定される配位子はラベル付き試薬又は“配位子同族体
”又は゛′トレーサー”と配位子又は配位子同族体に特
有な抗体の現定数の受容体結合位置？！競合う。この明
細書において″′配位子同族体″とはフルオレセイン誘
導体と結合してトレーサーを生成するか又はその非結合
形であるかどうが、受容体の結合位置について配位子と
あらそいうる１又は２以上の決定子又はエビトビツクな
位置をもっている化合物をいう。試料中の配位子濃度は
抗体に結合する配位子同族体の量を定める。配位子とト
レーサーはそれぞれの濃度割合で抗体に各々結合するの
で、結合する配位子同族体の量は試材中の配位子濃度に
逆比例する。
”又は゛′トレーサー”と配位子又は配位子同族体に特
有な抗体の現定数の受容体結合位置？！競合う。この明
細書において″′配位子同族体″とはフルオレセイン誘
導体と結合してトレーサーを生成するか又はその非結合
形であるかどうが、受容体の結合位置について配位子と
あらそいうる１又は２以上の決定子又はエビトビツクな
位置をもっている化合物をいう。試料中の配位子濃度は
抗体に結合する配位子同族体の量を定める。配位子とト
レーサーはそれぞれの濃度割合で抗体に各々結合するの
で、結合する配位子同族体の量は試材中の配位子濃度に
逆比例する。
螢光偏光は競合結合性イムノアッセーにおいて生成した
トレーサー−抗体結合体量測定の定量手段となる。螢光
偏光技術は螢光ラベル付き化合物が面偏光によって励起
されたときその回転速度に逆比の偏光度をもつ螢光を放
出するという原理に基づいている。したがって螢光ラベ
ルをもつトレーサー−抗体結合体が平面偏光によって励
起されたとき、螢光団は光が吸収された時と放出された
時の間の回転から拘束されるので放出光は非常に偏光さ
れてのこる。反対に非結合トレーサーが平面偏光によっ
て励起されるとその回転は対応するトレーサー−抗体結
合体の回転よりずっと速い。結果として非結合トレーサ
ー分子から放出された光は消振される。
トレーサー−抗体結合体量測定の定量手段となる。螢光
偏光技術は螢光ラベル付き化合物が面偏光によって励起
されたときその回転速度に逆比の偏光度をもつ螢光を放
出するという原理に基づいている。したがって螢光ラベ
ルをもつトレーサー−抗体結合体が平面偏光によって励
起されたとき、螢光団は光が吸収された時と放出された
時の間の回転から拘束されるので放出光は非常に偏光さ
れてのこる。反対に非結合トレーサーが平面偏光によっ
て励起されるとその回転は対応するトレーサー−抗体結
合体の回転よりずっと速い。結果として非結合トレーサ
ー分子から放出された光は消振される。
螢光偏光イムノアッセーにトレーサーとして４′−アミ
ノメチルフルオレセインを使うことはこの分野でよく知
られており、キルケモとシップチャンドラ−の米国特許
第４．５１０．２５１号に発表されている。
ノメチルフルオレセインを使うことはこの分野でよく知
られており、キルケモとシップチャンドラ−の米国特許
第４．５１０．２５１号に発表されている。
その４′−アミノメチルフルオレセイン製造法はしかし
アルキル化反応が不可避の副反応をおこして４′−アミ
ノメチルフルオレセインの収量減少となることがわかっ
た様に欠点がないわけではない。
アルキル化反応が不可避の副反応をおこして４′−アミ
ノメチルフルオレセインの収量減少となることがわかっ
た様に欠点がないわけではない。
本発明は付随するアルキル化反応が起こらぬので非常に
収率が改良された４′−アミノメチルフルオレセイン製
造法を提供するものである。
収率が改良された４′−アミノメチルフルオレセイン製
造法を提供するものである。
延肌立厘１
本発明は次の構造式：
で示される４′−アミノメチルフルオレセイン化合物お
よびその酸付加塩の新規改良製造法を提供する。上式中
Ｒ１は水素又は共通抗体によって特に認められる樺に配
位子と共通の少なくも１のエピトープをもっ配位子同族
体をあられし、かっＲ，ＲおよびＲ４は各々水素、アル
キル、ハロ、アミノ又はカルボキシルでもよい。
よびその酸付加塩の新規改良製造法を提供する。上式中
Ｒ１は水素又は共通抗体によって特に認められる樺に配
位子と共通の少なくも１のエピトープをもっ配位子同族
体をあられし、かっＲ，ＲおよびＲ４は各々水素、アル
キル、ハロ、アミノ又はカルボキシルでもよい。
これら化合物の新規製造法は次の構造式＝（上式中Ｒ，
Ｒ，およびＲ′は各水素又はハロをあられし、Ｒ２，Ｒ
，およびＲ４は上に定義したとおりとする）をもつアセ
トアミドメチルフルオレセイン又は４′−ハロアセトア
ミドメチルフルオレセイン誘導体を水酸基を持たない（
即ちノンハイドロキシリック）エーテルおよび強酸の存
在において反応させ生成４′−アミノメチルフルオレセ
インを回収することより成る。
Ｒ，およびＲ′は各水素又はハロをあられし、Ｒ２，Ｒ
，およびＲ４は上に定義したとおりとする）をもつアセ
トアミドメチルフルオレセイン又は４′−ハロアセトア
ミドメチルフルオレセイン誘導体を水酸基を持たない（
即ちノンハイドロキシリック）エーテルおよび強酸の存
在において反応させ生成４′−アミノメチルフルオレセ
インを回収することより成る。
１１曵二■呈１
本発明はフルオレセインおよびその誘導体の使用、特に
その螢光放出能力の利用法を包含する。
その螢光放出能力の利用法を包含する。
フルオレセインはその液の酸濃度（ｐＨ）によって２タ
ウトマー型のいずれかである。開放（酸）型では多数の
共役２１結合があり、それはこの型のフルオレセイン（
およびフルオレセイン部分をもつ化合物）が約４ナノセ
コンドの励起時間後前色光を吸収し線量光を放出させる
。本明細書で使う個々の化合物又は大化合物の成分とし
てのいずれかの“フルオレセイン”とはそれが螢光関係
を除いて特定分子としであるならば開放又は閉止形の両
方を含むことを意味する。開放形は螢光発生に必要であ
る。
ウトマー型のいずれかである。開放（酸）型では多数の
共役２１結合があり、それはこの型のフルオレセイン（
およびフルオレセイン部分をもつ化合物）が約４ナノセ
コンドの励起時間後前色光を吸収し線量光を放出させる
。本明細書で使う個々の化合物又は大化合物の成分とし
てのいずれかの“フルオレセイン”とはそれが螢光関係
を除いて特定分子としであるならば開放又は閉止形の両
方を含むことを意味する。開放形は螢光発生に必要であ
る。
抗体に複合しない溶液中のトレーサーは螢光の吸収と再
放出に要する時間より短時間に自由に回転する。結果と
して再放出光は比較的無秩序に配列されるので抗体１こ
複合していないトレーサーの螢光偏光は小さく、殆どゼ
ロである。配位子がトレーサーと抗体位置を争う場合は
フリートレーサーとトレーサー−抗体複合物の混合物の
観測される螢光偏光はトレーサーとトレーサー−抗体複
合物との間の中間値と思われろ。試料の配位子濃度が高
いならばえられる偏光値は自由配位子のそれに近い、即
ち低い。試験試料の配位子濃度が低いならば偏光値は結
合配位子のそれに近い、即ち高い。
放出に要する時間より短時間に自由に回転する。結果と
して再放出光は比較的無秩序に配列されるので抗体１こ
複合していないトレーサーの螢光偏光は小さく、殆どゼ
ロである。配位子がトレーサーと抗体位置を争う場合は
フリートレーサーとトレーサー−抗体複合物の混合物の
観測される螢光偏光はトレーサーとトレーサー−抗体複
合物との間の中間値と思われろ。試料の配位子濃度が高
いならばえられる偏光値は自由配位子のそれに近い、即
ち低い。試験試料の配位子濃度が低いならば偏光値は結
合配位子のそれに近い、即ち高い。
ィムノアッセーの反応混合物を垂直偏光と次いで水平偏
光によって連続励起し放出光の垂直偏光成分のみを分析
することによって反応混合物中の螢光偏光が正確に測定
できろ。測定する配位子の偏光と濃度の詳細な関係は既
知濃度の補正液の偏光値ｔｉ！測定してきめることがで
きる。配位子濃度はこの方法でつくった標準曲線から内
挿できる。
光によって連続励起し放出光の垂直偏光成分のみを分析
することによって反応混合物中の螢光偏光が正確に測定
できろ。測定する配位子の偏光と濃度の詳細な関係は既
知濃度の補正液の偏光値ｔｉ！測定してきめることがで
きる。配位子濃度はこの方法でつくった標準曲線から内
挿できる。
本発明の方法によって製造された４′−アミノメチルフ
ルオレセイン化合物は一般にそのプロトン化状態とイオ
ン化状態の間で平衡しておりイオン化状態において螢光
偏光イムノアッセーに有効である。便宜上化合物は構造
的にそのプロトン化型であられされている。そのイオン
化状態において化合物は生理学的に許容される酸付加塩
形である。
ルオレセイン化合物は一般にそのプロトン化状態とイオ
ン化状態の間で平衡しておりイオン化状態において螢光
偏光イムノアッセーに有効である。便宜上化合物は構造
的にそのプロトン化型であられされている。そのイオン
化状態において化合物は生理学的に許容される酸付加塩
形である。
本明細書で使う“生理学的に許容される塩”とは化合物
を螢光偏光イムノアッセーに使ったとき化合物をそのイ
オン化状態におくことができろナトリウム、カリウムお
よびアンモニウムの様な塩をいう。一般に本発明の化合
物は溶液中塩、緩衝液からえられる特定塩としである。
を螢光偏光イムノアッセーに使ったとき化合物をそのイ
オン化状態におくことができろナトリウム、カリウムお
よびアンモニウムの様な塩をいう。一般に本発明の化合
物は溶液中塩、緩衝液からえられる特定塩としである。
例えばりん酸す１、リウムの存在で化合物は一般にナト
リウム塩としてそのイオン化状態で存在する。
リウム塩としてそのイオン化状態で存在する。
トレーサーとして有用な種々の４′−アミノメチルフル
オレセイン誘導体は本発明の改良法によって製造できる
。本質的にフルオレセインは酸の存在でアセトアミドメ
タノール又は４′−ハロアセトアミドメタノールと処理
されてアセトアミドメチメ又は４′−ハロアセトアミド
メチル誘導体となり次いでこれを酸と非加水解性エーテ
ルの存在において加水分解して４′−アミノメチルフル
オレセインの酸塩をえろ。この方法によってアルキル化
された副成物は生成しない。かく生成した４′−アミノ
メチルフルオレセインを適当な溶媒中酸塩を中和するに
十分な適当塩基の存在で選択した配位子同族体の活性化
エステルと処理すれば４′−７ミノメチルフルオレセイ
ントレーサーがえられろ。
オレセイン誘導体は本発明の改良法によって製造できる
。本質的にフルオレセインは酸の存在でアセトアミドメ
タノール又は４′−ハロアセトアミドメタノールと処理
されてアセトアミドメチメ又は４′−ハロアセトアミド
メチル誘導体となり次いでこれを酸と非加水解性エーテ
ルの存在において加水分解して４′−アミノメチルフル
オレセインの酸塩をえろ。この方法によってアルキル化
された副成物は生成しない。かく生成した４′−アミノ
メチルフルオレセインを適当な溶媒中酸塩を中和するに
十分な適当塩基の存在で選択した配位子同族体の活性化
エステルと処理すれば４′−７ミノメチルフルオレセイ
ントレーサーがえられろ。
使用する水酸基を持たないエーテルは９０乃至２００℃
、好ましくは１３０乃至２００℃の沸点をもつとよい。
、好ましくは１３０乃至２００℃の沸点をもつとよい。
好ましいエーテル例にはジエチレングリコールジメチル
エーテルおよびエチレングリコールジメチルエーテルが
ある。
エーテルおよびエチレングリコールジメチルエーテルが
ある。
次の実施例はこの技術分野の知識をもつ者に本発明によ
る４′−アミノメチルフルオレセイン化合物製造法を例
証するものであるが、これは本発明を限定するものでは
ない。
る４′−アミノメチルフルオレセイン化合物製造法を例
証するものであるが、これは本発明を限定するものでは
ない。
実施例 １
本実施例は４′−アミノメチルフルオレセイン製造に中
間体として役立つ４′−クロロアセトアミドメチルフル
オレセインの製法を例証するものである。
間体として役立つ４′−クロロアセトアミドメチルフル
オレセインの製法を例証するものである。
濃硫酸１００ｉ＋４中にとかしたフルオレセイン１０．
０ｇ （３０，１２！Ｊ モル） ｗ！！ニ追加硫酸１
００ｍｊ ト共に固体としてのＮ−ヒドロキシメチルク
ロロアセトアミド３．７ ｇ （３０，１Ｅリモル）を
加えた。反応混合物を暗所でアルゴン雰囲気のもと２０
時間攪拌した後１１の氷上に注入した。黄色沈澱を氷水
液で数回洗った後減圧乾燥した。生成物をカラムクロマ
トグラフ法（管７Ｘ５０ｃｍ、シリカゲル７００ｇ）を
用い精製した。メチレンクロライド中５％メタノール１
夜と次にメチレンクロライド中１０％メタノール液で溶
離した。分別部分は薄層クロマトグラフ法（シリカゲル
、メチレンクロライド中１０％メタノール使用）で検査
し適当部分を併せ溶媒を減圧除去した。オレンジ色固体
クロロアセトアミドメチルフルオレセイン４．９ｇ（３
７％）をえた。
０ｇ （３０，１２！Ｊ モル） ｗ！！ニ追加硫酸１
００ｍｊ ト共に固体としてのＮ−ヒドロキシメチルク
ロロアセトアミド３．７ ｇ （３０，１Ｅリモル）を
加えた。反応混合物を暗所でアルゴン雰囲気のもと２０
時間攪拌した後１１の氷上に注入した。黄色沈澱を氷水
液で数回洗った後減圧乾燥した。生成物をカラムクロマ
トグラフ法（管７Ｘ５０ｃｍ、シリカゲル７００ｇ）を
用い精製した。メチレンクロライド中５％メタノール１
夜と次にメチレンクロライド中１０％メタノール液で溶
離した。分別部分は薄層クロマトグラフ法（シリカゲル
、メチレンクロライド中１０％メタノール使用）で検査
し適当部分を併せ溶媒を減圧除去した。オレンジ色固体
クロロアセトアミドメチルフルオレセイン４．９ｇ（３
７％）をえた。
衷ａｎ ｎ
本実施例は４′−アミノメチルフルオレセイン製造を例
証するものである。
証するものである。
実施例Ｉによってつくったクロロアセトアミドメチルフ
ルオレセイン２５．Ｏｇをジエチレングリコールジメチ
ルエーテル１１０ｍｔ’と濃塩酸３０ｍ＆’中で窒素雰
囲気のもと２０時間還流させた。溶媒を減圧除去し２Ｐ
ｒｅｐＰ入Ｋ Ｃ１８カラムをもつウォーターズＰｒｅ
ｐ ＬＣ／Ｓｙｓｔｅｍ ５ＯＯＡ液体り０７トグラフ
法を用いて残渣を精製した。水：メタノール：酢酸（５
０： ５０： ０．４）を用い毎分１００ｍ１で溶離
した。残渣をメタノール４０ＩＩ１１にとかし準備シス
テム中に４注射液をつくった。分別部分を薄層クロマト
グラフ（ホワットマン Ｃ１８板、４０：６０：０．４
．５００ｍＭアンモニウムアセテート二メタノ−ル：酢
酸）で検へた後適当部分を併せた。溶媒を減圧除去し残
留酢酸をメタノール： トルエン（１： １．３Ｘ １
００ｍＮ ）と共蒸留して除去した。暗オレンジ色固体
４′−アミノメチルフルオレセイン塩酸塩６．８ｇ （
３１％）をえた。
ルオレセイン２５．Ｏｇをジエチレングリコールジメチ
ルエーテル１１０ｍｔ’と濃塩酸３０ｍ＆’中で窒素雰
囲気のもと２０時間還流させた。溶媒を減圧除去し２Ｐ
ｒｅｐＰ入Ｋ Ｃ１８カラムをもつウォーターズＰｒｅ
ｐ ＬＣ／Ｓｙｓｔｅｍ ５ＯＯＡ液体り０７トグラフ
法を用いて残渣を精製した。水：メタノール：酢酸（５
０： ５０： ０．４）を用い毎分１００ｍ１で溶離
した。残渣をメタノール４０ＩＩ１１にとかし準備シス
テム中に４注射液をつくった。分別部分を薄層クロマト
グラフ（ホワットマン Ｃ１８板、４０：６０：０．４
．５００ｍＭアンモニウムアセテート二メタノ−ル：酢
酸）で検へた後適当部分を併せた。溶媒を減圧除去し残
留酢酸をメタノール： トルエン（１： １．３Ｘ １
００ｍＮ ）と共蒸留して除去した。暗オレンジ色固体
４′−アミノメチルフルオレセイン塩酸塩６．８ｇ （
３１％）をえた。
本発明の真意と範囲から逸脱しない限り方法、調合物お
よび用途の詳細において揮々の変更法、修正法および類
似法も可能なのである。
よび用途の詳細において揮々の変更法、修正法および類
似法も可能なのである。
Claims (4)
- １．アセトアミドメチルフルオレセイン又は４’−ハロ
アセトアミドメチルフルオレセインを水酸基のないエー
テルと強酸の存在のもとで反応させて生成した４’−ア
ミノメチルフルオレセイン化合物を回収することを特徴
とする４’−アミノメチルフルオレセイン化合物の製造
法。 - ２．水酸基のないエーテルがジエチレングリコールジメ
チルエーテルである特許請求の範囲第１項に記載の方法
。 - ３．強酸が濃塩酸である特許請求の範囲第１項に記載の
方法。 - ４．４’−ハロアセトアミドメチルフルオレセインが４
’−クロロアセトアミドメチルフルオレセインである特
許請求の範囲第１項に記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US82784186A | 1986-02-06 | 1986-02-06 | |
| US827841 | 1986-02-06 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62192481A true JPS62192481A (ja) | 1987-08-24 |
Family
ID=25250306
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP917787A Pending JPS62192481A (ja) | 1986-02-06 | 1987-01-20 | 螢光偏光イムノアツセ−用４′−アミノメチルフルオレセイン誘導体の製造法 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0232736A1 (ja) |
| JP (1) | JPS62192481A (ja) |
| AU (1) | AU6804587A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009078483A (ja) * | 2007-09-27 | 2009-04-16 | Toshiba Corp | 呈色性化合物、色素化合物、および画像形成材料 |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4912208A (en) * | 1987-06-29 | 1990-03-27 | Abbott Laboratories | Fluorophores for encapsulation into liposomes |
| IT1298693B1 (it) * | 1996-04-24 | 2000-01-12 | Hoffmann La Roche | Derivati della fluoresceina 4'-metil sostituiti |
| US6448407B1 (en) | 2000-11-01 | 2002-09-10 | Pe Corporation (Ny) | Atropisomers of asymmetric xanthene fluorescent dyes and methods of DNA sequencing and fragment analysis |
| WO2004029579A2 (en) * | 2002-09-25 | 2004-04-08 | Amersham Biosciences Corp | Fluorescent labeling reagents with multiple donors and acceptors |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4510251A (en) * | 1982-11-08 | 1985-04-09 | Abbott Laboratories | Fluorescent polarization assay for ligands using aminomethylfluorescein derivatives as tracers |
| EP0200960A1 (en) * | 1985-05-08 | 1986-11-12 | Abbott Laboratories | Total estriol fluorescence polarization immunoassay |
-
1987
- 1987-01-15 EP EP87100423A patent/EP0232736A1/en not_active Withdrawn
- 1987-01-20 JP JP917787A patent/JPS62192481A/ja active Pending
- 1987-01-28 AU AU68045/87A patent/AU6804587A/en not_active Abandoned
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009078483A (ja) * | 2007-09-27 | 2009-04-16 | Toshiba Corp | 呈色性化合物、色素化合物、および画像形成材料 |
| JP4521435B2 (ja) * | 2007-09-27 | 2010-08-11 | 株式会社東芝 | 呈色性化合物、色素化合物、および画像形成材料 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0232736A1 (en) | 1987-08-19 |
| AU6804587A (en) | 1987-08-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0201751A2 (en) | 4'-aminomethyfluorescein derivatives for use in fluorescence polarization immunoassys | |
| Bannwarth et al. | Formation of carboxamides with N, N, N′, N′-tetramethyl (succinimido) uronium tetrafluoroborate in aqueous/organic solvent systems | |
| EP0273115B1 (en) | Chemiluminescent acridinium and phenanthridinium salts | |
| JPH0377463B2 (ja) | ||
| JPH0637513B2 (ja) | ジゴキシゲニン誘導体、その製法、標識結合体の製法、核酸検出法及びジゴキシゲニン結合体 | |
| JP2008500446A (ja) | 長波長のチオール反応性フルオロフォア | |
| JPH03500297A (ja) | テルピリジン誘導体 | |
| EP2442110A1 (en) | Drug detection | |
| JPH06509797A (ja) | 生体液における全ドキセピンを定量するための試薬および方法 | |
| JP4068137B2 (ja) | ビオチニル化した化学発光性標識、結合体、測定法及び測定法キット | |
| JP2994036B2 (ja) | 螢光分析における干渉低減方法 | |
| JP2010210630A (ja) | リン酸化ペプチドのラベル方法 | |
| WO2003076938A1 (fr) | Nouveaux composes de marquage fluorescents | |
| JPS62192481A (ja) | 螢光偏光イムノアツセ−用４′−アミノメチルフルオレセイン誘導体の製造法 | |
| JPH04502766A (ja) | ヒドロキシメトキシマンデル酸（ｈｍｍａ）とホモバニリン酸（ｈｖａ）の誘導体、及びこれらの誘導体から得られる抗体と標識物質並びにこれらを用いるイムノアッセイ | |
| JPH0651670B2 (ja) | 二官能性ハプテンおよび免疫化学的ハプテン測定法 | |
| JP3538277B2 (ja) | 免疫測定用標識試薬及びそれに用いる蛍光性化合物及び錯体、及びそれらを用いる生物物質の免疫測定法 | |
| JPH06239898A (ja) | 免疫抱合体の調製法 | |
| WO1997033884A1 (fr) | Reactifs pour marquer les groupes sh, procede pour les preparer et procede pour les marquer | |
| JP2000111480A (ja) | 新規標識試薬 | |
| JPS61260084A (ja) | 螢光偏光免疫試験用４′−アミノメチルフルオレスセイン誘導体 | |
| JPS61502681A (ja) | 化学発光性ラベル付有機試薬及び有機化合物の分析におけるそれらの利用法 | |
| JPH06316599A (ja) | ジフェンヒドラミンおよびその代謝産物の免疫学的測定のための組成物および方法 | |
| JP2653615B2 (ja) | 標識色素とその前駆体化合物及び標識色素の製造方法並びに標識色素の使用方法 | |
| JP2698730B2 (ja) | 標識色素とその前駆体、その合成方法および標識色素を用いたメタンフェタミンの検出方法 |