JPS62171700A - γ−グルタミルトランスペプチダ−ゼ定量用基質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野〕 本発明は、γ−グルタミルアニリドに置換基を導入した
新規化合物を基質として使用するγ−グルタミルトラン
スペプチダーゼ（以下アーＧＴＰと略記）定量眉基質に
間するものである。

［従来の技術］ γ−ＧＴＰは生体内でグルタチオンや他のγ−グルタミ
ルペプチドからγ−グルタミル基をアミノ酸、ペプチド
などの受容体に転移する酵素で肝、腎、膵などの各臓器
に多く存在する。

臨床的には閉塞性黄痘、慢性活動性肝炎、肝癌、アルコ
ール性肝炎などの肝臓疾患にγ−ＧＴＰ活性の上昇がみ
られ、その上昇にはγ−ＧＴＰの胆道系への排泄障害に
よる血中への移打と慢性活動性ｍ変による障害肝ｆｆｉ
織における生！ｌＦ、冗進などの関係があると言われて
いる。従って、γ−ＧＴＰ活性測定は肝臓疾患の診断用
として今日臨床検査室でますます実施されるようになっ
ている。

従来、γ−ＧＴＰ定量測定するための基質としてはＬ−
γ−グルタミルーｐ−ニトロアニリドが一般的に使用さ
れてきたが、この場合基質溶解性に重大な欠点があるこ
とは周知である。

そこで通常は基質の溶解に希塩酸や界面活性剤及び有機
溶媒を添加することによってこの欠点を解決している。

〔特開昭５２−２９７９９）［発明が解決しようとする
問題点］ しかし、この場合でも基質溶解後の自己分解や界面活性
剤の添加警こより生ずる気泡のために安定性が極めて悪
い、それ故、Ｌ−γ−グルタミルーｐ−ニトロアニリド
と比べて水によく溶ける良好な基質を新規に製造するこ
とが上記の欠点を解決するうえで望まれでいる。特開昭
４９−８６３３８の記載にみられるγ−ＧＴＰ測定用の
基質はカルボキシル基をｐ−ニトロアニリンの３位に導
入して得たＬ−γ−グルタミルー３−カルボキシー４−
ニトロアニリドやスルホン基をｐ−ニトロアニリンの３
位に導入してＬ−７−グルタミル−３−スルホン酸−４
−二トロアニリドを得ることにより溶解性を高めること
ができたとのべている。ところが、この基質は初速度分
析法を利用した自動分析には適しているが、一般的に実
施されている比色測定では測定波長４００　ｎａ＋前後
を用いる必要があるため生体に存在するビリルビン等の
影響をうけるため適さない、そこで、γ−ＧＴＰ活性定
量測定のための一般的な使用に適した溶解性の良好な基
質の開発が依然として望まれるところである。

［問題点を解決するための手段］ 本発明者らは、かかる問題点を解決するために研究した
結果り一γ−グルタミルアニリドに置換基を導入した種
々の化合物中から溶解性の優れたγ−ＧＴＰ定量測定用
の新規化合物の合成に成功した。即ち本発明は、下記〔
Ｉ〕又は（ＩＩ） ［ＩＩ］ ○ （ＣＨ２）２−Ｃ−を表わす。） で表わされるγ−ＧＴＰ定量用基質である。

本発明による基質はＬ−γ−グルタミルアニリドに置換
基を導入することを特徴とする。詳しくは、Ｌ−γ−グ
ルタミルアニリドにカルボキシル基及び水酸基を導入し
たものとＬ−γ−グルタミルー４−カルボキシアニリド
にグリシンをアミド結合したものである。このようにし
て得られる新規化合物はＬ−γ−グルタミルー３−ヒド
ロキシー４−カルボキシアニリド又はＬ−γ−グルタミ
ルー４−カルボキシグリシンアミドアニリドである。

本発明”による基質は、従来の７−グルタミル−ｐ−ニ
トロアニリドの欠点を兄事に解消できる。即ち、γ−Ｇ
ＴＰ定量において必要とされる基質最適濃度が約６〜７
ｍＭに対して従来は約３〜４ｍＭの溶解度であったが本
発明では溶解剤なしで水に１５＋Ｍの濃度以上でも溶解
可能である。

以下、本発明による基質の溶解性とγ−〇ＴＰによる基
質の分解速度を第１表に示す８分解ｉ度１ｔＬ−γ−グ
ルタミル−ｐ−ニトロアニリドを用いた場合を１００と
した時の相対値で示した。（測定条件は３７℃１５分で
ある。）以下、余白。′　□ 度１表−ムニ９ニジｌＸＭ３υ櫻ｊρソＩりし我希臼Ｉ
Ｌ［作用］ 本発明は、従来の基質と十分に置き換えられることが可
能である。得られる利点は■１００ミリモル以上の基質
溶液が調製できる。■水に対して極めて溶は易く従って
溶解剤の添加を必要としない。■酵素による基質分解率
が高い。

■一般に使用されている比色測定に適しているなどを提
供することができる。

以下、実施例により本発明による基質を用いた時のγ−
〇ＴＰ活性を定量するための試薬の調製を説明する。

ρ−７ミノサリチル酸８．Ｉｇ（５７，９ミリモルフと
７タロイルーし一グルタミン酸無水物１５．Ｏｇ（５８
，０ミリモル）に無水ジオキサン１５０．ｗＺを加えて
６５℃で１時開攪拌する。次いで減圧留去して、メタノ
ール（２５０１１１）に溶解させて８０％ヒドラノン水
和物でｐＨ９，０にする。室温にて２４時間放置する。

結晶を濾取してｌＮ−ＨＣｌ　（１００ｍｌ　）に懸濁
させて不溶物を除き、濾液を２　Ｎ　−ＮＨ，ＯＨｃｐ
Ｈ７，ＯＩ：し減圧留去する。残渣にア七トンを加えて
結晶化させてエタ／−ルで洗い減圧乾燥すると目的物が
１０．２ｇ（Ｃ＝　０．５　、　ＩＮ−ＨＣｊ！　）ｐ
−アミ７馬尿酸１０．０ｇ（５１，５ミリモル）と７タ
ロイルーし一グルタミン酸無水％１４．６ｇ（５６，７
ミリモル）に無水ジオキサン１５０ｉ＋ｆを加えて６０
°Ｃで１時間攪拌する。次いで減圧留去して７タロイル
ーし一γ−グルタミルー４−カルボキシグリシンアミド
アニリドの油状物を得た。この油状物をメタノール（２
５０ｚｆ）に溶解させて８０％ヒドラジン水和物でｐＨ
９，０にする。室温にて２日放置する。結晶を濾取して
冷水、エタノールで洗い乾燥する。０．５Ｎ−ＨＣｊ！
　（２００ｚ（１）を加えて室温で３０分激しく攪拌し
不溶物を除いて濾液をＩ　Ｎ　　ＮａｚＣＯ＊でｐＨ７
，０にする。これを減圧濃縮して残渣にア七トンを加え
ると目的とする化合物が９．Ｏｇ（埋（Ｃ＝　１．０　
、　ＩＮ−Ｈ〔Ｉ〕 実施例３　ムニ立工旦亙１月１１ （１）試薬調製 ■　Ｌ−γ−グルタミルー３−ヒドロキシー４−カルボ
キシアニリド２．２７ｇ、　　）リス（ヒドロキシメチ
ル）アミ／メタン６、０５ｇ及びグリシルグリシン１１
．８８ｇを精製水で溶解しｐＨ８゜３〜８．４に調製し
た後、全量１．００（ｈｌとしたものを基質液とする。

■　ｐ−ツメチルアミノシンナムアルデヒド９０Ｃｋｇ
をエタノール６００ｘ１に溶解させたのち、精製水を加
えて全量１，０００ｚ１としたものを発色液とする６ ■　０．３Ｎ塩酸を反応停止液とする。

■　発色液と反応停止液とを２：１の割で混合して混合
液を作る。

■　５−７ミノサリチル酸０．９１８ｇを１５ｍＭ水酸
化ナトリウム液に溶かし全１１．ＯＯＯｍＮとしたもの
を標準液（４００ｍＵ／ｍｌ　）とする。

（２）定量方法 血清を１１５〜５１５まで生食で希釈し、その２０μｌ
と基質９１　ｘｉを混合し、３７℃で１５分インキュベ
ーションした後、発色液と反応停止液の混合液３ｄを添
加する。５分放置後、試薬ブランクを対照にして波長５
４０ｎｍで吸光度を測定する。その結果を第２表に示す
。

実施例４　γ−ＧＴＰ　ｊＬ用試薬 （１）試薬調製 ■　Ｌ−γ−グルタミルー４−カルボキシグリシンアミ
ドアニリド１．９７ｇ、　　）リス（ヒドロキシメチル
）アミ／メタン６、　Ｏｓｇ及びグリシ′ルグリシン１
１．８８ｇを精製水で溶解しｐＨ８，３〜８．４に調製
した後、全量ｉ、ｏｏｏ度ｌとしたものを基質液とする
。

■　ｐ−ジメチルアミ／シンナムアルデヒド９Ｏｈｇを
エタノール６００１１に溶解させたのち、精製水を加え
て全量１，０ＯＯｚ１としたものを発色液とする。

■　０．３Ｎ塩酸を反応停止液とする。

■　発色液と反応停止液とを２：１の割で混合して混合
液を作る。

■　ｐ−７ミ７馬尿酸１．１６４ｇを１５ｎＭ水酸化ナ
トリウム液に溶かし全量１，０００．ｖｆとしたものを
標準液（４００ｍＵ／ｚｌ　）とする。

（２）定量方法 実施例３−（２）と同様に繰作する。その結果を第３表
に示す。

以下、余白。ニ　−１ （、。

＼、　　２

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）下記、構造式〔 I 〕又は〔II〕で表わされるＬ
   −γ−グルタミルアニリドに置換基を導入した新規なγ
   −グルタミルトランスペプチダーゼ定量用基質。 構造式 ▲数式、化学式、表等があります▼〔 I 〕 ▲数式、化学式、表等があります▼〔II〕 （式中、ＲはＬ−γ−グルタミル基： ▲数式、化学式、表等があります▼を表わす。）