JPS6174591A - アデノシン三リン酸の製造方法 - Google Patents
アデノシン三リン酸の製造方法Info
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- JPS6174591A JPS6174591A JP19680584A JP19680584A JPS6174591A JP S6174591 A JPS6174591 A JP S6174591A JP 19680584 A JP19680584 A JP 19680584A JP 19680584 A JP19680584 A JP 19680584A JP S6174591 A JPS6174591 A JP S6174591A
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Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
［産業上の利用分野］
本発明はアデノシンもしくはアデニンとリン源とからア
デノシンニリン酸（ＡＴＰ）を製造する方法に関するも
のである。
デノシンニリン酸（ＡＴＰ）を製造する方法に関するも
のである。
〔従来の技術］
従来、酵母を使用してアデノシンもしくはアデニンとリ
ン源とからＡＴＰを製造する方法として糖などをエネル
ギー源として基質レベルのリン酸化によるＡＴＰの製造
法が知られている。
ン源とからＡＴＰを製造する方法として糖などをエネル
ギー源として基質レベルのリン酸化によるＡＴＰの製造
法が知られている。
また、メタノールをエネルギー源として特定の酵阻を使
用して酸化的リン酸化により、アデノシン−リン酸（Ａ
ＭＰ）またはアデノシンニリン酸（ＡＤＰ）を原料とし
てＡＴＰを生産いる方法も既に報告されティる（Ａｇｒ
ｉｃ、 ３ｉｏｌ 、 Ｃｈｅｍ 。
用して酸化的リン酸化により、アデノシン−リン酸（Ａ
ＭＰ）またはアデノシンニリン酸（ＡＤＰ）を原料とし
てＡＴＰを生産いる方法も既に報告されティる（Ａｇｒ
ｉｃ、 ３ｉｏｌ 、 Ｃｈｅｍ 。
第４６巻第４号第１０９７ページ（１９８２年） ）
。
。
［従来の技術の問題点］
しかしながらＡＭＰやＡＤＰはＡＴＰの原料としては？
＆価であり、かつ化学的に不安定な化合物であるため工
業的には前記従来技術は必ずしも有利な方法ではない。
＆価であり、かつ化学的に不安定な化合物であるため工
業的には前記従来技術は必ずしも有利な方法ではない。
そこで本発明者らは工業的に有利なＡ Ｔ Ｐの生産方
法の確立を目的に鋭意研究した結果、極めて特定のメタ
ノール酵母を使用すればよいと古・う事実を児い出した
。
法の確立を目的に鋭意研究した結果、極めて特定のメタ
ノール酵母を使用すればよいと古・う事実を児い出した
。
［問題点を解決するための手段］
すなわら、本発明の上記の目的はキャンデダカリオシリ
グニコーラ（Ｑ ａｎｄｉｄａｃａｒｉｏｓｉｌｉｇｎ
ｉｃｏｌａ、 Ｉ Ｆ Ｏ１９１０）およびキャンデ
ィダ サクシフィラ（Ｃａｎｄｉｄａｓｕｃｃｉｐｈｉ
ｌａ Ｉ ＦＯ１９１１）の中から選ばれる少なくと
も一種のメタノール酵母をメタノールを主炭素源とする
培地に培養して得た菌体もしくは培養物またはそれらの
処理物を用いてメタノールの存在下アデノシンまたはア
デニンとリン源とから７デノシン三リン酸を生成蓄積せ
しめることによって達成される。特に本発明前記の目的
は前記の菌体処理物がプラスモリシス化処理されたもの
である時より効果的に達成される。以下本発明の構成、
実施例ならびに効果を説明する。
グニコーラ（Ｑ ａｎｄｉｄａｃａｒｉｏｓｉｌｉｇｎ
ｉｃｏｌａ、 Ｉ Ｆ Ｏ１９１０）およびキャンデ
ィダ サクシフィラ（Ｃａｎｄｉｄａｓｕｃｃｉｐｈｉ
ｌａ Ｉ ＦＯ１９１１）の中から選ばれる少なくと
も一種のメタノール酵母をメタノールを主炭素源とする
培地に培養して得た菌体もしくは培養物またはそれらの
処理物を用いてメタノールの存在下アデノシンまたはア
デニンとリン源とから７デノシン三リン酸を生成蓄積せ
しめることによって達成される。特に本発明前記の目的
は前記の菌体処理物がプラスモリシス化処理されたもの
である時より効果的に達成される。以下本発明の構成、
実施例ならびに効果を説明する。
本発明に使用される酵母はキャンディダ カリオシリグ
ニコーラ（Ｃａｎｄｉｄａ ｃａｒｉｏｓｉｌｉｇｎ
ｉｃｏｌａ。
ニコーラ（Ｃａｎｄｉｄａ ｃａｒｉｏｓｉｌｉｇｎ
ｉｃｏｌａ。
＋ＦＯ１９１０）およびキャンデイダ サクシフイラ（
Ｃａｎｄｉｄａ ５ｕｃｃｉｐｈｉｌａ Ｉ Ｆ
Ｏ１９１１）の中から選ばれる。
Ｃａｎｄｉｄａ ５ｕｃｃｉｐｈｉｌａ Ｉ Ｆ
Ｏ１９１１）の中から選ばれる。
これらの酵母はメタノール資化能力を持つものであり、
メタノールを主炭素源とする培地で培養される。
メタノールを主炭素源とする培地で培養される。
培地組成としては１〜１０容量％のメタノール以外に窒
素呼、リン源、マグネシウム源、および微量要素として
のサイアミン（場合によっては、更にビオチン）の添加
が必要である。培養は好気的条件下で行ない、対数増殖
前期に集菌する。菌体の分離は公知の分離方法によって
行なわれる。
素呼、リン源、マグネシウム源、および微量要素として
のサイアミン（場合によっては、更にビオチン）の添加
が必要である。培養は好気的条件下で行ない、対数増殖
前期に集菌する。菌体の分離は公知の分離方法によって
行なわれる。
かくして１ｑられた菌体もしくは培養物はメタノールを
エネルギー源とし、高エネルギーリン酸化合物を酸化的
リン酸化により生成する能力を有するものであるが、生
成物たるＡＴＰなどのリン酸化合物は菌体外に分泌され
にくい。従って、細胞膜に透過性を持たせるために菌体
もしくは培養物を処理する。その処理法としては従来公
知の方法が使用可能であるが本発明においては、好まし
くは簡単で、かつ最も活性の高いソルビトールによる原
形背分１１ｔ（プラスモリシス）化処理法を採用する。
エネルギー源とし、高エネルギーリン酸化合物を酸化的
リン酸化により生成する能力を有するものであるが、生
成物たるＡＴＰなどのリン酸化合物は菌体外に分泌され
にくい。従って、細胞膜に透過性を持たせるために菌体
もしくは培養物を処理する。その処理法としては従来公
知の方法が使用可能であるが本発明においては、好まし
くは簡単で、かつ最も活性の高いソルビトールによる原
形背分１１ｔ（プラスモリシス）化処理法を採用する。
処理後の菌体もしくは培養物はＡＴＰ生産反応に供され
る。
る。
反応原料としてのアデノシンまたはアデニンは、いかな
る方法で製造されたものも使用される。リン源としては
正リン酸塩、ピロリン酸塩が好ましい。
る方法で製造されたものも使用される。リン源としては
正リン酸塩、ピロリン酸塩が好ましい。
反応はアデノシンまたはアデニン、メタノール、辷ノリ
ン酸塩および／またはビロリン酸塩、ニコチンアミドア
デニンジヌクレオチド（ＮＡＤ”）、Ｄ−ソルビトール
、マグネシウム塩、更に場合によっては還元型グルタチ
オン（ＧＳＨ）および少」のＡＴＰの存在下で行なわれ
る。
ン酸塩および／またはビロリン酸塩、ニコチンアミドア
デニンジヌクレオチド（ＮＡＤ”）、Ｄ−ソルビトール
、マグネシウム塩、更に場合によっては還元型グルタチ
オン（ＧＳＨ）および少」のＡＴＰの存在下で行なわれ
る。
反応に使用する各種基質および反応補助因子のけ適温度
は次のとおりである。
は次のとおりである。
（１）アデノシンを基質とした場合
アデノシン ３０〜５０ｍ ｍｏｌ ／１
メタノール ８００〜１２００ｍ ｍｏｌ ／１
Ｋ２ＨＰＯ４または Ｎａ ２ ＨＰＯ４：２５〜１ ５０ ｍ
ｍｏｌ ／ｌＮａ ４Ｐ２０７ ・７０ＨｚＯまたは
に４ Ｐ２ ０７ ５０〜
１ １ ０ｍｍｏｌ／１ＮＡＤヤ
１〜１５ｍｍｏｌ／１ＧＳＨＯ〜１ ５ｍｍｏｌ／
Ｌ Ｄ−ソルビトール ２００〜８００ｍｍｏｌ／１Ｍ
（＋ ８０４ ・ ７Ｈ２０３０〜９０ｍｍｏｌ／
ＩＡＴＰ ０〜１０ｍ、ｍｏｌ
／１（２）アデニンを基質とした場合 アデニン ５〜１０ｍ ｍｏｌ ／１
メタノール ８０Ｃ）−２５００ｍ ｍｏｌ ／
ｌＫ２ＨＰＯ４または Ｎａ ２１−ＩＰ０４ ２５〜１５０ ｍ ｍｏ
ｌ ｙ’ｌＮａ４Ｐ２０Ｔ・１０Ｈ２０または に４ Ｐ２０ｒ ５０〜１１ Ｑｍｍｏｌ
／１ＮＡＤ’ １〜５ｍ
ｍｏｌ／ＩＧＳＨＯ〜、５ｍｍｏｌ／１ Ｄ−ソルビトール ２００〜８００ｍｍｏｌ／１Ｍ
！ＩＩ ＳＯ４・７Ｈ２０１０〜８０ｍｍｏｌ／１Ａ
ＴＰ Ｏ〜１０ｍｍ
ｏｌ／１本発明においては、上記のように多量のマグネ
シウムの存在下で反応を行なうことによって反応が促進
される。また、正リン酸のみをリン源として使用する際
にはＡＴＰの共存が必要である。ピロリン酸をリン源と
して使用する際はＮＡＤ＋を５ ｍｍｏｌ／ １以上添
加することが必要である。
メタノール ８００〜１２００ｍ ｍｏｌ ／１
Ｋ２ＨＰＯ４または Ｎａ ２ ＨＰＯ４：２５〜１ ５０ ｍ
ｍｏｌ ／ｌＮａ ４Ｐ２０７ ・７０ＨｚＯまたは
に４ Ｐ２ ０７ ５０〜
１ １ ０ｍｍｏｌ／１ＮＡＤヤ
１〜１５ｍｍｏｌ／１ＧＳＨＯ〜１ ５ｍｍｏｌ／
Ｌ Ｄ−ソルビトール ２００〜８００ｍｍｏｌ／１Ｍ
（＋ ８０４ ・ ７Ｈ２０３０〜９０ｍｍｏｌ／
ＩＡＴＰ ０〜１０ｍ、ｍｏｌ
／１（２）アデニンを基質とした場合 アデニン ５〜１０ｍ ｍｏｌ ／１
メタノール ８０Ｃ）−２５００ｍ ｍｏｌ ／
ｌＫ２ＨＰＯ４または Ｎａ ２１−ＩＰ０４ ２５〜１５０ ｍ ｍｏ
ｌ ｙ’ｌＮａ４Ｐ２０Ｔ・１０Ｈ２０または に４ Ｐ２０ｒ ５０〜１１ Ｑｍｍｏｌ
／１ＮＡＤ’ １〜５ｍ
ｍｏｌ／ＩＧＳＨＯ〜、５ｍｍｏｌ／１ Ｄ−ソルビトール ２００〜８００ｍｍｏｌ／１Ｍ
！ＩＩ ＳＯ４・７Ｈ２０１０〜８０ｍｍｏｌ／１Ａ
ＴＰ Ｏ〜１０ｍｍ
ｏｌ／１本発明においては、上記のように多量のマグネ
シウムの存在下で反応を行なうことによって反応が促進
される。また、正リン酸のみをリン源として使用する際
にはＡＴＰの共存が必要である。ピロリン酸をリン源と
して使用する際はＮＡＤ＋を５ ｍｍｏｌ／ １以上添
加することが必要である。
反応のＲ適温度は２０〜３０°Ｃ１最適ｐＨは７〜９で
ある。
ある。
また、反応は不断の酸素供給が必要であり、例えば開放
下、振盪条件下で行なう。
下、振盪条件下で行なう。
かくして、メタノールの酸化系、ヌクレオチドのサルベ
ージ経路、酸化的リン酸化系の共同作用によるアデノシ
ンもしくはアデニンとリン源からの△ＴＰ生産が進行す
る。
ージ経路、酸化的リン酸化系の共同作用によるアデノシ
ンもしくはアデニンとリン源からの△ＴＰ生産が進行す
る。
反応終了後の反応液中にはＡＴＰが蓄積し、他に少けの
ＡＭＰ、ＡＤＰおよび反応時間が短い場合には未反応基
質のアデノシンもしくはアデニン〜が共存する。
ＡＭＰ、ＡＤＰおよび反応時間が短い場合には未反応基
質のアデノシンもしくはアデニン〜が共存する。
反応液中に蓄積したＡＴＰは、イオン交換樹脂、吸着樹
脂、活性炭等を使用する方法、高速液体クロマトグラフ
を使用する方法客種々の方法によってＡＭＰ、△ＤＰ、
ＡＴＰ、７デノシン、アデニン、ＮＡＤｔを分離し、Ａ
ＴＰを単独で採取することができる。以下本発明法を実
施例をもって説明づ−る。
脂、活性炭等を使用する方法、高速液体クロマトグラフ
を使用する方法客種々の方法によってＡＭＰ、△ＤＰ、
ＡＴＰ、７デノシン、アデニン、ＮＡＤｔを分離し、Ａ
ＴＰを単独で採取することができる。以下本発明法を実
施例をもって説明づ−る。
［実施例１
実施例１
（培養）
ＮＨ２Ｃｌ ０．４ｗｔ％、ＫＨ２ＰＯ４０゜１ｗｔ
％、Ｋ２ＨＰＯ４０，１ｗｔ％ Ｍ（１８０４・７Ｈ２
００，０５％ｗｔ％および酵母エキス０゜２ｗｔ％とか
らなるｐＨ６，０の培地を試験管に５ミリリットル取り
、これを殺菌し、メタノールを２容量％になるように添
加した。これにメタノールＨ母を一白金耳移植した。そ
して温度２８℃にて４８時間往復振盪培！！（種母培養
）を行なった。
％、Ｋ２ＨＰＯ４０，１ｗｔ％ Ｍ（１８０４・７Ｈ２
００，０５％ｗｔ％および酵母エキス０゜２ｗｔ％とか
らなるｐＨ６，０の培地を試験管に５ミリリットル取り
、これを殺菌し、メタノールを２容量％になるように添
加した。これにメタノールＨ母を一白金耳移植した。そ
して温度２８℃にて４８時間往復振盪培！！（種母培養
）を行なった。
次に前記の培養で１９た種母培養液と同じ組成の培養液
を容量２リットルの振盪フラスコに５００ミリリットル
取り、殺菌してメタノールを２容量％になるように添加
し、更に種母培養液５ミリリツトルを添加し、温度２８
℃で２４〜４８時間往ｌ！ｊ振盪培養を行なった。培養
後、培養液を遠心分離し、酵母を分離した。
を容量２リットルの振盪フラスコに５００ミリリットル
取り、殺菌してメタノールを２容量％になるように添加
し、更に種母培養液５ミリリツトルを添加し、温度２８
℃で２４〜４８時間往ｌ！ｊ振盪培養を行なった。培養
後、培養液を遠心分離し、酵母を分離した。
（プラスモリシス化処理）
分ｌｌ１ｌ酵母８０ｏ／Ｉ （乾燥重吊換ｎ）を蒸留
水に分散せしめ、４５分間３７℃でかつ静止状態で放置
した。しかる後に、４モル／リットルのＤ−ソルビトー
ル水溶液を加え、最終濃度１．５モル／リットルのＤ−
ソルビトール濃度とし、１０分間３７℃で静止状態で放
置した。
水に分散せしめ、４５分間３７℃でかつ静止状態で放置
した。しかる後に、４モル／リットルのＤ−ソルビトー
ル水溶液を加え、最終濃度１．５モル／リットルのＤ−
ソルビトール濃度とし、１０分間３７℃で静止状態で放
置した。
（反応）
プラスモリシス化処理酔母（キャンディダ カリＡシリ
グニコーラ ＩＦＯ１９１０）液２００μｍ （乾燥
菌体換痺重量１０ｍｇ、Ｄ−ソルビトール３００μｍ０
１含有）とアデノシン２０μｍｏｌ （またはアデニ
ン５μｍｏｌ ） 、Ｋ２ ＨＰＯ４１００μｍｏｌ
、ＮＡＤ＋０．５．ｃｚｍｏｌ 、メタノール５００μ
ｍｏｌ 、Ｍ（］ ＳＯ４・７Ｈ２０４０μｍｏｌ 、
ＡＴＰｌ、５μｍｏｌを総ＩＱ、５ｍ ｌ とし、１Ｑ
ｍｌ三角フラスコ中で２５℃で２０時間反応を往復装置
にて行なった。その結果、反応液中ｔ、：ｔ、ｔ５ｍｍ
ｏｌ／ｌ （１、３１１１ｍｏｌ／ｌ ）のＡＴＰが
アデノシン（アデニン）から生成した。これらの値はＡ
ＴＰ蓄積淵度から初期添加濃度を差し引いたものである
。分析は酵素法および高速液体クロマトグラフにより行
なった。
グニコーラ ＩＦＯ１９１０）液２００μｍ （乾燥
菌体換痺重量１０ｍｇ、Ｄ−ソルビトール３００μｍ０
１含有）とアデノシン２０μｍｏｌ （またはアデニ
ン５μｍｏｌ ） 、Ｋ２ ＨＰＯ４１００μｍｏｌ
、ＮＡＤ＋０．５．ｃｚｍｏｌ 、メタノール５００μ
ｍｏｌ 、Ｍ（］ ＳＯ４・７Ｈ２０４０μｍｏｌ 、
ＡＴＰｌ、５μｍｏｌを総ＩＱ、５ｍ ｌ とし、１Ｑ
ｍｌ三角フラスコ中で２５℃で２０時間反応を往復装置
にて行なった。その結果、反応液中ｔ、：ｔ、ｔ５ｍｍ
ｏｌ／ｌ （１、３１１１ｍｏｌ／ｌ ）のＡＴＰが
アデノシン（アデニン）から生成した。これらの値はＡ
ＴＰ蓄積淵度から初期添加濃度を差し引いたものである
。分析は酵素法および高速液体クロマトグラフにより行
なった。
実施例２
実施例１の実験において使用されたキャンディダ カリ
オシリグニーコーラ（Ｃａｎｄｉｄａ ｃａｒｉｏｓ
ｉｌｉｇｎｉｃｏｌａ ＩＦＯ１９１０）の代りにキ
ャンディダ サクシフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ ５ｕｃ
ｃｉｐｈｉｌａＩＦＯ１９１１）を使用して、実施例１
と同様の実験を行なった。
オシリグニーコーラ（Ｃａｎｄｉｄａ ｃａｒｉｏｓ
ｉｌｉｇｎｉｃｏｌａ ＩＦＯ１９１０）の代りにキ
ャンディダ サクシフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ ５ｕｃ
ｃｉｐｈｉｌａＩＦＯ１９１１）を使用して、実施例１
と同様の実験を行なった。
その結果ＡＴＰの蓄積量はアデノシンを原料にした場合
、５．８ｍｍｏｌ／ｌでり、アデニンを使用した場合、
１．６ｍ１ｉ０＋／ｌであった。
、５．８ｍｍｏｌ／ｌでり、アデニンを使用した場合、
１．６ｍ１ｉ０＋／ｌであった。
［発明の効果］
本発明は極めて特定のメタノール資化性酵母を使用して
おり、従来このｌ？ｆ母による上記方法でのＡＴＰ生産
は報告されていない。従って本発明はＡＴＰの工業的な
製法として全く新規なものである。
おり、従来このｌ？ｆ母による上記方法でのＡＴＰ生産
は報告されていない。従って本発明はＡＴＰの工業的な
製法として全く新規なものである。
Claims (2)
- （１）キャンディダ カリオシリグニコーラ（Ｃａｎｄ
ｉｄａ ｃａｒｉｏｓｉｌｉｇｎｉｃｏｌａ、ＩＦＯ
１９１０）およびキャンディダ サクシフィラ（Ｃａｎ
ｄｉｄａ ｓｕｃｃｉｐｈｉｌａ ＩＦＯ １９１１）
の中から選ばれる少なくとも一種のメタノール酵母をメ
タノールを主炭素源とする培地に培養して得た菌体もし
くは培養物またはそれらの処理物を用いてメタノールの
存在下アデノシンまたはアデニンとリン源とからアデノ
シン三リン酸を生成蓄積せしめることを特徴とするアデ
ノシン三リン酸の製造方法。 - （２）菌体処理物がプラスモリシス化処理されたもので
ある特許請求の範囲第１項のアデノシン三リン酸の製造
方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19680584A JPS6174591A (ja) | 1984-09-21 | 1984-09-21 | アデノシン三リン酸の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19680584A JPS6174591A (ja) | 1984-09-21 | 1984-09-21 | アデノシン三リン酸の製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6174591A true JPS6174591A (ja) | 1986-04-16 |
Family
ID=16363938
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP19680584A Pending JPS6174591A (ja) | 1984-09-21 | 1984-09-21 | アデノシン三リン酸の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6174591A (ja) |
-
1984
- 1984-09-21 JP JP19680584A patent/JPS6174591A/ja active Pending
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