JPS6163289A - 新規物質ｋ―２５９―２ - Google Patents
新規物質ｋ―２５９―２Info
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- JPS6163289A JPS6163289A JP59184320A JP18432084A JPS6163289A JP S6163289 A JPS6163289 A JP S6163289A JP 59184320 A JP59184320 A JP 59184320A JP 18432084 A JP18432084 A JP 18432084A JP S6163289 A JPS6163289 A JP S6163289A
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-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
- C12P1/06—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using actinomycetales
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/08—Vasodilators for multiple indications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/29—Micromonospora
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明はミクロモノスポラ属に属する微生物が、 産
生ずる新規な生理活性物質およびその製造法に関する。
生ずる新規な生理活性物質およびその製造法に関する。
従来の技術
作用な新規生理活性物質を提供するという目的のもとに
、天然界より入手した数多くの微生物の生産物について
研究を行った結果、新たに分離した微生物の培養物中に
血管拡張作用を有する生理活性物質が生産される事実を
見い出した。ついで、該培養物から該物質を単離、精製
し、その理化学的性質を調べたところ新規生理活性物質
であることが判明した。以下、該物質をに−２５９−２
と称する。
、天然界より入手した数多くの微生物の生産物について
研究を行った結果、新たに分離した微生物の培養物中に
血管拡張作用を有する生理活性物質が生産される事実を
見い出した。ついで、該培養物から該物質を単離、精製
し、その理化学的性質を調べたところ新規生理活性物質
であることが判明した。以下、該物質をに−２５９−２
と称する。
発明が解決しようとする問題点
有用な医薬品となる新規生理活性物質を提供することに
ある。
ある。
問題点を解決するための手段
に−２５９−２の理化学的性質は以下に示す通りである
。
。
性 状；赤色針状結晶
融 点；１４０〜１４５℃（分解）。１４０℃付近か
ら掲変し始め、明瞭な融点を示 さない。
ら掲変し始め、明瞭な融点を示 さない。
比旋光度； ［α） ：°＝ ０ （ｃｍＯＪ３．
ＣＨ，ＯＨ）溶解性 ；酢酸に易溶、メタノール、水に
可溶、クロロホルム、酢酸エチル、アセトン、エタノー
ルに難溶。
ＣＨ，ＯＨ）溶解性 ；酢酸に易溶、メタノール、水に
可溶、クロロホルム、酢酸エチル、アセトン、エタノー
ルに難溶。
呈色反応；ヨウ素およびアニスアノげヒトの各反応に陽
性 可視部吸収スペクトル（８２％メタノール水、 Ｖ／Ｖ
）；第１図 紫外部吸収スペクトル（８２％メタノール水、 Ｖ／Ｖ
）：第２図 光外部吸収スペクトル（ＫＢｒ）； ３４２５、２９６０．２９２４．２８５２．１６２６．
１５６２． ＋４４２゜１３８６、１３２６． ＋２５
９．１２２７．１１７６、１１５７．１１０８゜１０５
２、 １０２３ ｃｍ−’ マススペクトル；本物質のマススペクトルは次ののよう
な分子イオンおよびフラグメントイオンをを与える。
性 可視部吸収スペクトル（８２％メタノール水、 Ｖ／Ｖ
）；第１図 紫外部吸収スペクトル（８２％メタノール水、 Ｖ／Ｖ
）：第２図 光外部吸収スペクトル（ＫＢｒ）； ３４２５、２９６０．２９２４．２８５２．１６２６．
１５６２． ＋４４２゜１３８６、１３２６． ＋２５
９．１２２７．１１７６、１１５７．１１０８゜１０５
２、 １０２３ ｃｍ−’ マススペクトル；本物質のマススペクトルは次ののよう
な分子イオンおよびフラグメントイオンをを与える。
３８２ （Ｍ”）、、 ３５３． ３３４． ３１１．
３０８． ２６８１Ｈ−ＮＭＲスヘ９ ） ル（１０
０１ＪＨｚ、 ＤＭＳ［Ｉ−ｄｇ＋（：ＤＪＯ９δ）
０．７８（３）１． Ｌ、 Ｊ＝７．３）、 １．６７
（３１１，ｂｒ、ｄ、 Ｊ＝５．９）ｃａ、 １．７（
２Ｈ，ｎ＋）、 ４．３８（２１１，ｂｒ、ｓ ）、
ｃａ、 ５．１−−、（ＩＩＩ、ｍｌ、 ６．３６（Ｉ
Ｈ，ｄ、 Ｊ＝２．４）、 ６．９３（ＩＨ，ｄ、 Ｊ
＝２．４）、 ７．３８（ｌ）１．５ ）Ｋ−２５９−２をジアゾメタンによりトリメチル誘導
体にすると以下の１Ｈ−ＮＭＲ，”Ｃ−ＮＭＲスペクト
ルデータを与える。
３０８． ２６８１Ｈ−ＮＭＲスヘ９ ） ル（１０
０１ＪＨｚ、 ＤＭＳ［Ｉ−ｄｇ＋（：ＤＪＯ９δ）
０．７８（３）１． Ｌ、 Ｊ＝７．３）、 １．６７
（３１１，ｂｒ、ｄ、 Ｊ＝５．９）ｃａ、 １．７（
２Ｈ，ｎ＋）、 ４．３８（２１１，ｂｒ、ｓ ）、
ｃａ、 ５．１−−、（ＩＩＩ、ｍｌ、 ６．３６（Ｉ
Ｈ，ｄ、 Ｊ＝２．４）、 ６．９３（ＩＨ，ｄ、 Ｊ
＝２．４）、 ７．３８（ｌ）１．５ ）Ｋ−２５９−２をジアゾメタンによりトリメチル誘導
体にすると以下の１Ｈ−ＮＭＲ，”Ｃ−ＮＭＲスペクト
ルデータを与える。
’ ＩＩ−ＮＭＲスペクトル（１００ＭＨｚ、 ＣＤＣ
ｊ！、、δ）０．８５（３Ｈ，ｔ、 Ｊ＝６．６）、
１．６９（３）１． ｂｒ、ｄ、 Ｊ＝６．７）。
ｊ！、、δ）０．８５（３Ｈ，ｔ、 Ｊ＝６．６）、
１．６９（３）１． ｂｒ、ｄ、 Ｊ＝６．７）。
１．５−１．９（２Ｈ，ｍｌ、 ３．８６（３Ｈ，ｓ）
、 ３．９２（３８，ｓ）。
、 ３．９２（３８，ｓ）。
４．０１（３Ｈ，ｓ）、 ４．２Ｈ２ｆｔ、 ｂｒ、ｓ
）、 ｃａ、 ５．３（ＩＨ，ｍ）。
）、 ｃａ、 ５．３（ＩＨ，ｍ）。
６．７Ｈ１）ｌ、 ｄ、 Ｊ＝２．７）、 ７Ｊｌ（１
１（、ｄ、 Ｊ＝２．７１゜７．７８（ＩＨ，ｓ）、
１３．０６（ＩＨ，’ｉ）” Ｃ−ＮＭＲスペクトル
（２５ＭＨｚ、 ＣＤＩＪ、、δＣ）１２Ｊ、 Ｈ，
６，２７，４、３２，８，５２，５，５６，０゜５６．
５． １０６．７． １０７．５． １０８．１． １
１１．７゜１１７．８． １２５．６． １３２．０．
１３４．０． １３７．５゜１３８．２． １４４．
１． １５９．６． １６５Ｊ、 １６５．５１６７
．１． １８２．５． １８８．１に−２５９−２のジ
アゾメタンによるトリメチル化物のマススペクトルは次
の分子イオンを与え、精密質量測定により次の分子式が
得られた。
１（、ｄ、 Ｊ＝２．７１゜７．７８（ＩＨ，ｓ）、
１３．０６（ＩＨ，’ｉ）” Ｃ−ＮＭＲスペクトル
（２５ＭＨｚ、 ＣＤＩＪ、、δＣ）１２Ｊ、 Ｈ，
６，２７，４、３２，８，５２，５，５６，０゜５６．
５． １０６．７． １０７．５． １０８．１． １
１１．７゜１１７．８． １２５．６． １３２．０．
１３４．０． １３７．５゜１３８．２． １４４．
１． １５９．６． １６５Ｊ、 １６５．５１６７
．１． １８２．５． １８８．１に−２５９−２のジ
アゾメタンによるトリメチル化物のマススペクトルは次
の分子イオンを与え、精密質量測定により次の分子式が
得られた。
マススペクトル ｍ／Ｚ ４２４（Ｍ”）。
分子式 Ｃ，、Ｈ２，Ｏ。
光外部吸収スペクトル（ＣＣＬ ）
３４４０、３０９６．３０１６．２９６８．２９３６．
２８７６、２８６０゜１？３９．１６７２．１６２７．
＋５７５．１４８５．１４８３． １４４２゜＋３
８６．１３６８゜ｌ：］１６．ｔ２５０．１２２８．
１２ｔＯ１＋１９２゜１１６５、 １１４２． ＋ｔ
ｏａ、 １０７７、 １０３９． １０２２． ９９
３゜９５４． ９３ｆｉ、 ９３０．８９２． ８６
７、 ８５０． ７４０． ７０４゜６４６、 ６１７
ａｍ−’ 以上のデータよりに−２５９−２はｖｒＩＵ化合物であ
ることが判明した。
２８７６、２８６０゜１？３９．１６７２．１６２７．
＋５７５．１４８５．１４８３． １４４２゜＋３
８６．１３６８゜ｌ：］１６．ｔ２５０．１２２８．
１２ｔＯ１＋１９２゜１１６５、 １１４２． ＋ｔ
ｏａ、 １０７７、 １０３９． １０２２． ９９
３゜９５４． ９３ｆｉ、 ９３０．８９２． ８６
７、 ８５０． ７４０． ７０４゜６４６、 ６１７
ａｍ−’ 以上のデータよりに−２５９−２はｖｒＩＵ化合物であ
ることが判明した。
次に各種展開剤によるに−２，５９−２の薄層クロマト
グラフィーのＲ［値を第１表に示す。検出は３６５０人
の紫外ａｐ＠射により行った。
グラフィーのＲ［値を第１表に示す。検出は３６５０人
の紫外ａｐ＠射により行った。
第１表
に−２５９−２のシリカゲル薄層クロマトグラフィー薄
層、キーゼルゲル６０（メルク社、 Ａｒｔ ５６３１
）展３Ｆｌ ：室温、上昇法、１時間 に−２５９−２は血管拡張作用を有する。
層、キーゼルゲル６０（メルク社、 Ａｒｔ ５６３１
）展３Ｆｌ ：室温、上昇法、１時間 に−２５９−２は血管拡張作用を有する。
次にに−２５９−２の製造法について説明する。
Ｋ−２５９−２はミクロモノスポラ属に属し、Ｋ−２５
９−２生産能を存する微生物を培地に培養し、培養物中
にに−２５９−２を生成蓄積させ、該培養物からに−２
５９−２を採取することによって製造される。
９−２生産能を存する微生物を培地に培養し、培養物中
にに−２５９−２を生成蓄積させ、該培養物からに−２
５９−２を採取することによって製造される。
Ｋ−２５９−２生産性微生物としてはミクロモノスポラ
属に明し、Ｋ−２５９−２生産能を有するものであれば
いずれの微生物でもよい。具体的に好適な一例として木
発明者らが静岡県三島市長泉町の土壌より単離したミク
ロモノスポラ・エスピー（Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒ
ａ Ｓρ、 ） Ｋ −２５９株があげられる。該菌株
は工業技術院微生物工業技術研究所に微工研条寄第５６
９号（寄託日：１９８４年７月１８日）止して寄託され
ている。
属に明し、Ｋ−２５９−２生産能を有するものであれば
いずれの微生物でもよい。具体的に好適な一例として木
発明者らが静岡県三島市長泉町の土壌より単離したミク
ロモノスポラ・エスピー（Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒ
ａ Ｓρ、 ） Ｋ −２５９株があげられる。該菌株
は工業技術院微生物工業技術研究所に微工研条寄第５６
９号（寄託日：１９８４年７月１８日）止して寄託され
ている。
Ｋ−２５９菌株の形態的特徴および生理的性質を観察・
試験した結果は次の通りである。
試験した結果は次の通りである。
該菌は、種々の天然培地で普通の生育を示すが、合成培
地においては、普通もしくは貧弱な生育を示す。いずれ
の寒天平板培地でも、気中菌糸は着生しない。脳生菌糸
は、イースト・麦芽およびヒッケー・トレスナー氏寒天
培地では隆生状の生育を示す。その色調は、オレンジか
ら濃い緑もしくは黒色となる。胞子は、単純分枝した脳
生菌糸の先端に、−個着生する。胞子の形購は、球状で
、大きさは直径０．７〜０．９μｍ程度であり、電子顕
微鏡観察による抱子表面はシワ状（ｗａｒｔｙ）であり
、鞭毛は認められない。また胞子のうも見い出されない
。可溶性色素はイースト・麦芽寒天培地でのみ見られ、
色調は茶褐色である。
地においては、普通もしくは貧弱な生育を示す。いずれ
の寒天平板培地でも、気中菌糸は着生しない。脳生菌糸
は、イースト・麦芽およびヒッケー・トレスナー氏寒天
培地では隆生状の生育を示す。その色調は、オレンジか
ら濃い緑もしくは黒色となる。胞子は、単純分枝した脳
生菌糸の先端に、−個着生する。胞子の形購は、球状で
、大きさは直径０．７〜０．９μｍ程度であり、電子顕
微鏡観察による抱子表面はシワ状（ｗａｒｔｙ）であり
、鞭毛は認められない。また胞子のうも見い出されない
。可溶性色素はイースト・麦芽寒天培地でのみ見られ、
色調は茶褐色である。
各種培地上での生育状態
各１培地上において、２８℃、２ｊｌＪ１間培養したと
きの生育および色の特徴を下記に示す。色の表示はＣｏ
１ｏｒ Ｈａｒｍｏｎｙ Ｍａｎｕａｌ （Ｃｏｎｔ
ａｉｎｅｒ Ｃｏｒｐｏｒａ−ｔ＋ｏｎ ｏｒＡｍｅｒ
１ｃａ）による色の分類に従ったものである。
きの生育および色の特徴を下記に示す。色の表示はＣｏ
１ｏｒ Ｈａｒｍｏｎｙ Ｍａｎｕａｌ （Ｃｏｎｔ
ａｉｎｅｒ Ｃｏｒｐｏｒａ−ｔ＋ｏｎ ｏｒＡｍｅｒ
１ｃａ）による色の分類に従ったものである。
尚、以下の培地においては、気中菌糸は形成されず、ま
た可溶性色票はイースト・麦芽寒天培地でのみ観察され
た。
た可溶性色票はイースト・麦芽寒天培地でのみ観察され
た。
（１） シコクロース・硝酸塩寒天培地生育 ； 普
通 脳生菌糸の表面・裏面の色；ブラック（１７ｐｈ ）（
２）グルコース・アスパラギン寒天培地生育 ； 貧弱 脳生菌糸の表面・裏面の色ニブラック（＋９ｐｈ ）（
３）グリセロール・アスパラギン寒天培地（ＩＳＰＮｏ
、５）生育 ； 貧弱 脳生菌糸の表面・裏面の色；ブラック・オリーブ（ｌｐ
ｏ） （４）スターチ寒天培地（ＩＳＰ ＩＪα４）生育 ；
貧弱〜普通 脳生菌糸の表面・裏面の色；ブライト・オレンジ（４ｇ
ａ） （５）チロンン寒天培地（ＩｓＰ Ｎα７）生育 ；
貧弱 脳生菌糸の表面・裏面の色；ブラック（＋５ｐｏ）（６
）栄養寒天培地 生育 ； 貧弱 脳生菌糸の表面・裏面の色；カッパー（５４’ｃ）〜マ
スタード・ボトル・グリーン（２２ρｈ）（７）イース
ト・麦芽寒天培地 生育 、 良好（隆起状） 脳生菌糸の表面・裏面の色；ブラック（１５ｐｏ）可溶
性色素、マスタード・ブラウン（２ρ１）（８） オ
ートミール寒天培地 生育 ； 普通 脳生菌糸の表面・裏面の色：バント・オレンジ（５ｎｃ
） （９） ヒッケー・トレスナー氏寒天培地生育 、
良好（隆起状） 脳生菌糸の表面・裏面の色；ゴールデン・ブラウン（ｄ
ｐｉ）〜ブラック（１８ｐｈ）αｑ ペプトン・イース
ト鉄寒天培地 生育 ； 普通 基土菌糸の表面・裏面の色；アン／Ｘ−（４ｐｅ）生理
的性質 に−２５９菌株の生理的諸性質を以下に示す。
通 脳生菌糸の表面・裏面の色；ブラック（１７ｐｈ ）（
２）グルコース・アスパラギン寒天培地生育 ； 貧弱 脳生菌糸の表面・裏面の色ニブラック（＋９ｐｈ ）（
３）グリセロール・アスパラギン寒天培地（ＩＳＰＮｏ
、５）生育 ； 貧弱 脳生菌糸の表面・裏面の色；ブラック・オリーブ（ｌｐ
ｏ） （４）スターチ寒天培地（ＩＳＰ ＩＪα４）生育 ；
貧弱〜普通 脳生菌糸の表面・裏面の色；ブライト・オレンジ（４ｇ
ａ） （５）チロンン寒天培地（ＩｓＰ Ｎα７）生育 ；
貧弱 脳生菌糸の表面・裏面の色；ブラック（＋５ｐｏ）（６
）栄養寒天培地 生育 ； 貧弱 脳生菌糸の表面・裏面の色；カッパー（５４’ｃ）〜マ
スタード・ボトル・グリーン（２２ρｈ）（７）イース
ト・麦芽寒天培地 生育 、 良好（隆起状） 脳生菌糸の表面・裏面の色；ブラック（１５ｐｏ）可溶
性色素、マスタード・ブラウン（２ρ１）（８） オ
ートミール寒天培地 生育 ； 普通 脳生菌糸の表面・裏面の色：バント・オレンジ（５ｎｃ
） （９） ヒッケー・トレスナー氏寒天培地生育 、
良好（隆起状） 脳生菌糸の表面・裏面の色；ゴールデン・ブラウン（ｄ
ｐｉ）〜ブラック（１８ｐｈ）αｑ ペプトン・イース
ト鉄寒天培地 生育 ； 普通 基土菌糸の表面・裏面の色；アン／Ｘ−（４ｐｅ）生理
的性質 に−２５９菌株の生理的諸性質を以下に示す。
温度ならびにミルク、繊維素に対する作用以外のものに
ついては２８℃で３週ｎＪＩ後の観察結果を示し、温度
は２日後、ミルクおよび繊維素に対する作用については
２８℃で１力月後の結果を示す。
ついては２８℃で３週ｎＪＩ後の観察結果を示し、温度
は２日後、ミルクおよび繊維素に対する作用については
２８℃で１力月後の結果を示す。
（１）炭素源の資化性；Ｄ−グルコース、Ｌ−アラビノ
ース、Ｄ−キシロース、Ｄ−フラクトース。
ース、Ｄ−キシロース、Ｄ−フラクトース。
Ｌ−ラムノース、シュクロースおよびメリビオースを資
化するが１−イノシトール、Ｄ−マンニトールおよびラ
フィノースは資化しない。
化するが１−イノシトール、Ｄ−マンニトールおよびラ
フィノースは資化しない。
（２）ゲラチンの液化作用；なし
く３）脱脂牛乳の凝固、ペプトン化：凝固した後ペプト
ン化する。
ン化する。
（４）繊維素の分解作用、ある。
（５）スターチの加水分解作用；ある。
（６）生育温度範囲：１８〜３３℃。至適範囲は、２６
〜３０℃。
〜３０℃。
（７）メラニン様色素の生成；なし。
Ｋ−２５９菌株は、中温菌であり、気中菌糸を形成する
ことなく、胞子は単純分肢した基土菌糸の先端に１個着
生し、菌糸の分断は認められない。細胞壁の分析により
、２．６−ジアミツー３−ハイドロキンピメリン酸を含
有し、また菌体の糖の分析により、キシロースおよびア
ラビノースを含むことから、該菌は放線菌目のミクロモ
ノスポラ属に分類される。
ことなく、胞子は単純分肢した基土菌糸の先端に１個着
生し、菌糸の分断は認められない。細胞壁の分析により
、２．６−ジアミツー３−ハイドロキンピメリン酸を含
有し、また菌体の糖の分析により、キシロースおよびア
ラビノースを含むことから、該菌は放線菌目のミクロモ
ノスポラ属に分類される。
よって該に一２５９菌株をミクロモノスポラｓｐ、に−
２５９と命名した。
２５９と命名した。
ｉ散生物の培養に際しては放線菌の培養に用いられる通
常の培養方法が適用される。用いられる培地は菌の資化
しうる炭素源、窒素源、無機物等を程よく含有する培地
であれば天然培地、合成培地いずれでも用いろる。
常の培養方法が適用される。用いられる培地は菌の資化
しうる炭素源、窒素源、無機物等を程よく含有する培地
であれば天然培地、合成培地いずれでも用いろる。
炭素源としてはグルコース、フラクトース、シュクロー
ス、スタビロース、澱粉、デキストリン、マンノース、
マルトース、ｕ蜜等の炭水化物、りエン酸、りンゴ酸、
酢酸、フマール酸などの有機酸、メタノール、エタノー
ル等のアルコール、メタノ、エタン、フロパン、ｎ−パ
ラフィン等の炭化水素、グルタミン酸等のアミノ酸ある
いはグリセロール等が用いられる。
ス、スタビロース、澱粉、デキストリン、マンノース、
マルトース、ｕ蜜等の炭水化物、りエン酸、りンゴ酸、
酢酸、フマール酸などの有機酸、メタノール、エタノー
ル等のアルコール、メタノ、エタン、フロパン、ｎ−パ
ラフィン等の炭化水素、グルタミン酸等のアミノ酸ある
いはグリセロール等が用いられる。
窒素源としては塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、
６肖酸アンモニウム、リン酸アンモニウム等ノアンモニ
ウム塩、アスパラギン酸、クルクミン、シスチン、アラ
ニン等のアミノ酸、尿素、ペプト／、肉エキス、酵母エ
キス、乾煙酵母、コーン・スチープ・リカー、大豆粉、
綿実粕、大豆カゼイン、カザミノ酸、ファーマメディア
等が用いられる。
６肖酸アンモニウム、リン酸アンモニウム等ノアンモニ
ウム塩、アスパラギン酸、クルクミン、シスチン、アラ
ニン等のアミノ酸、尿素、ペプト／、肉エキス、酵母エ
キス、乾煙酵母、コーン・スチープ・リカー、大豆粉、
綿実粕、大豆カゼイン、カザミノ酸、ファーマメディア
等が用いられる。
無機物としてはリン酸二水素カリウム、リン酸水素二す
） ＩＪウム、硫酸マグネシウム、硫＃第一鉄、硫酸マ
ンガン、硫酸コバルト、硫酸亜鉛、パントテン酸カルシ
ウム、モリブデン酸アンモニウム、ＦＡ酸アルミニウム
カリウム、炭酸バリウム、炭酸力ルンウム、塩化コバル
ト、食塩等が用いられる。
） ＩＪウム、硫酸マグネシウム、硫＃第一鉄、硫酸マ
ンガン、硫酸コバルト、硫酸亜鉛、パントテン酸カルシ
ウム、モリブデン酸アンモニウム、ＦＡ酸アルミニウム
カリウム、炭酸バリウム、炭酸力ルンウム、塩化コバル
ト、食塩等が用いられる。
その他必要に応じて培地にビタミン、サイアミン等閑体
の増殖あるいはに−２５９−２の生産を促進する物質を
加えることができる。
の増殖あるいはに−２５９−２の生産を促進する物質を
加えることができる。
用いられる微生物が特定の物質を要求する場合は勿論生
育に必要な物を加えることが必要である。
育に必要な物を加えることが必要である。
培養は振盪培養法、通気既拌培養法等により、２０〜４
０℃の温度で中性付近のｐＨで行われる。
０℃の温度で中性付近のｐＨで行われる。
３〜１５日の培養によってに−２５９−２の蓄積が最大
に達し、培養は完了する。
に達し、培養は完了する。
培養物中に、蓄もフしたに−２５９−２を培養液から単
離採取するに際しては、通常の生理活性物質の培養液か
ら採取する方法が適用される。
離採取するに際しては、通常の生理活性物質の培養液か
ら採取する方法が適用される。
即ち、濾過、遠心分離等による菌体除去、吸着樹脂、／
リカゲル、ンラナイズドシリカゲル、アルミニウム、セ
ルロース、珪藻土、珪酸マグネシウム、ゲル濾過剤等を
用いるカラムクロマトグラフィーもしくは薄層クロマト
グラフィーによる活性物質の吸脱着旭理等によってに−
２５９−２は単離される。
リカゲル、ンラナイズドシリカゲル、アルミニウム、セ
ルロース、珪藻土、珪酸マグネシウム、ゲル濾過剤等を
用いるカラムクロマトグラフィーもしくは薄層クロマト
グラフィーによる活性物質の吸脱着旭理等によってに−
２５９−２は単離される。
培養液からに−２５９−２を単離する１例は次の通りで
ある。
ある。
培養液を濾過もしくは遠心分離することによって菌体を
除去する。得られた濾液もしくは上澄液を吸着樹脂、ダ
イヤイオンＨＰ−１０（三菱化成工業＠１ｌｌ）で処理
して活性物質を樹脂に緊着する。
除去する。得られた濾液もしくは上澄液を吸着樹脂、ダ
イヤイオンＨＰ−１０（三菱化成工業＠１ｌｌ）で処理
して活性物質を樹脂に緊着する。
ついで、メタノール等の適当な溶剤にて溶出し、溶出液
を減圧濃縮することにより溶剤をとばし水溶液とする。
を減圧濃縮することにより溶剤をとばし水溶液とする。
ついで、この水溶液に水と混和しない溶媒ｔことえは酢
酸エチル、酢酸ブチル等を添加して抽出する。
酸エチル、酢酸ブチル等を添加して抽出する。
抽出液を減圧下濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラ
フィーをくり返し行うことによって精製する。展開溶媒
としては最初はブタノール：エタノール：クロロホルム
：濃アンモニア水＝４：５： ２ ： ４ （Ｖ／ｖ
）を用いて溶出し、次回のクロマトりうフィーの溶媒と
しては、クロロホルム メタ／−ルエ９ ／ −ル
水＝ ｌ Ｏ： ４ ： ４ ： ２ （Ｖ／Ｖ）を
用いて溶出する。、に−２５９−２を含有する区分を減
圧下濃縮し、ＬＨ−２０（ファルマンア社製）のクロマ
トグラフィー（展開溶媒 メタノール）を行う。ついで
１辱られる溶出液を減圧下ａ縮し、再度シリカゲルカラ
ムクロマトグラフィーをクロロホルム メタノール、エ
タノール水＝ｉ。
フィーをくり返し行うことによって精製する。展開溶媒
としては最初はブタノール：エタノール：クロロホルム
：濃アンモニア水＝４：５： ２ ： ４ （Ｖ／ｖ
）を用いて溶出し、次回のクロマトりうフィーの溶媒と
しては、クロロホルム メタ／−ルエ９ ／ −ル
水＝ ｌ Ｏ： ４ ： ４ ： ２ （Ｖ／Ｖ）を
用いて溶出する。、に−２５９−２を含有する区分を減
圧下濃縮し、ＬＨ−２０（ファルマンア社製）のクロマ
トグラフィー（展開溶媒 メタノール）を行う。ついで
１辱られる溶出液を減圧下ａ縮し、再度シリカゲルカラ
ムクロマトグラフィーをクロロホルム メタノール、エ
タノール水＝ｉ。
： ４ ： ４ ： ２ （Ｖ／Ｖ）を展開溶媒として
用いることにより行う。Ｋ−２５９−２を含む両分を集
め減圧下で、Ｉ！縮後後展間溶媒してメタノール 水＝
７： ３ （ｖ／Ｖ）を用いる逆を目シリカゲル（メ
ルク社製ローパーカラムＲＰ−８，Ａｒ ｔｋｌ １８
０４）クロマトグラフィーを行う。ついで得られる溶出
液を減圧下Ｊｌ縮し、Ｋ−２５９−２の粗粉末を得る。
用いることにより行う。Ｋ−２５９−２を含む両分を集
め減圧下で、Ｉ！縮後後展間溶媒してメタノール 水＝
７： ３ （ｖ／Ｖ）を用いる逆を目シリカゲル（メ
ルク社製ローパーカラムＲＰ−８，Ａｒ ｔｋｌ １８
０４）クロマトグラフィーを行う。ついで得られる溶出
液を減圧下Ｊｌ縮し、Ｋ−２５９−２の粗粉末を得る。
この粗粉末をメタノール、水等の適当な溶媒にて再結晶
することによりに−２５９−２の結晶を邊る。
することによりに−２５９−２の結晶を邊る。
上記精製工程中のに−２５９−２の検出はシリカゲル薄
層クロマトグラフィー、ついでヨウ素反応又は３６５０
人の紫外線照射法により行った。
層クロマトグラフィー、ついでヨウ素反応又は３６５０
人の紫外線照射法により行った。
以下に実施例を示す。
実施例
種菌としてミクロモノスポラ・エスピーに−２５つ（倣
王研条寄第５６９号）を用いる。接菌を第１ Ｈｊ培地
として、グルコース１．Ｏｇ／ａ、溶性デンプン１．Ｏ
ｇ、＃ｌ！、肉エキス０．３ｇ／Ｊ、酵母エキス０．５
ｇ／ａ、バタトトリプトン（ディフコ社製）０．５ｇ／
ａ、炭酸力ルンウム０，２ｇ／ａ、、ｐＨ７，２＝７．
４の組成を有する３ ００ｍｌ三角フラスコ中の４０ｍ
１の挿培地に植菌する。ついで３０℃で菌が十分生育す
るまで振盪培養する。この種培養液４０ｍ１を２β三角
フラスコ中の同一組成の腫培地４００ｍｌに植菌する。
王研条寄第５６９号）を用いる。接菌を第１ Ｈｊ培地
として、グルコース１．Ｏｇ／ａ、溶性デンプン１．Ｏ
ｇ、＃ｌ！、肉エキス０．３ｇ／Ｊ、酵母エキス０．５
ｇ／ａ、バタトトリプトン（ディフコ社製）０．５ｇ／
ａ、炭酸力ルンウム０，２ｇ／ａ、、ｐＨ７，２＝７．
４の組成を有する３ ００ｍｌ三角フラスコ中の４０ｍ
１の挿培地に植菌する。ついで３０℃で菌が十分生育す
るまで振盪培養する。この種培養液４０ｍ１を２β三角
フラスコ中の同一組成の腫培地４００ｍｌに植菌する。
ついで２８℃で３日間振盪培養する。この種培養液１．
２１を３０ｆジャーファーメンタ−中の下記発酵培地１
８βに植菌する。
２１を３０ｆジャーファーメンタ−中の下記発酵培地１
８βに植菌する。
発酵培地ニゲルコース０．５ｇ／ａ、可溶性デンプン３
、Ｏｇ／ａ、大豆粉３．０ｇ１ａ、 コー７スｆ！−ブ
リカー０．５ｇ／ｄＲ，酵母エキス０．５ｇ／ｆ。
、Ｏｇ／ａ、大豆粉３．０ｇ１ａ、 コー７スｆ！−ブ
リカー０．５ｇ／ｄＲ，酵母エキス０．５ｇ／ｆ。
炭酸カルシウム０．３ｇ／ｄ１、ｐＨ７，２＝７．４゜
培養は３０℃で４日間通気攪拌下に行う。培養後の培養
液中に５ 、ｌＪ ｇ ／ｎ＋ｌのに−２５９−２が蓄
積する。培養終了後、培養液を連続遠心分離（１５，０
０ｏ ｒｐｍ）する。上澄液７０βをダイヤイオン）（
Ｐ−１０を充填した２１のカラムに通塔し、Ｋ−２５９
−２を吸着させた後、３０％（Ｖ／Ｖ）メタノール６１
で洗浄し、メタノール６１で溶出する。
培養は３０℃で４日間通気攪拌下に行う。培養後の培養
液中に５ 、ｌＪ ｇ ／ｎ＋ｌのに−２５９−２が蓄
積する。培養終了後、培養液を連続遠心分離（１５，０
０ｏ ｒｐｍ）する。上澄液７０βをダイヤイオン）（
Ｐ−１０を充填した２１のカラムに通塔し、Ｋ−２５９
−２を吸着させた後、３０％（Ｖ／Ｖ）メタノール６１
で洗浄し、メタノール６１で溶出する。
溶出成金てを集めて濃縮して５００ｍｌとし、２Ｎ
ＨＣｌを用いてｐ Ｈ２，０とし、酢酸エチル１．５１
で抽出する。酢酸エチル層を無水硫酸ナトリウムで脱水
後、層線乾固すると１．８ｇの油状物が辱られる。これ
をブタノール：エタノール：クロロホルム １アンモニ
ア水＝４：５：２＋４（Ｖ／Ｖ）を用いて充填した２１
のシリカゲルカラム（ワコーゲル・和光純薬社袈）の上
端に供給する。
ＨＣｌを用いてｐ Ｈ２，０とし、酢酸エチル１．５１
で抽出する。酢酸エチル層を無水硫酸ナトリウムで脱水
後、層線乾固すると１．８ｇの油状物が辱られる。これ
をブタノール：エタノール：クロロホルム １アンモニ
ア水＝４：５：２＋４（Ｖ／Ｖ）を用いて充填した２１
のシリカゲルカラム（ワコーゲル・和光純薬社袈）の上
端に供給する。
溶出は充填溶媒と同一組成の溶媒を用いて行う。
溶出画分を１８ｇずつ分取するとフラクション番号４０
〜７５にに−２５９−２が溶出される。この両分を集め
減圧下で濃縮乾固すると約４．０ｇの油状物質が得られ
る。この油状物をクロロホルム、メタノール：エタノー
ル：水＝１０・４．４；２ （Ｖ／Ｖ）を用いて充填し
た１βのシリカゲルカラム（ワフーゲル）の上端に供給
し、展開溶媒として充填溶媒と同一組成の溶媒を用いて
溶出する。
〜７５にに−２５９−２が溶出される。この両分を集め
減圧下で濃縮乾固すると約４．０ｇの油状物質が得られ
る。この油状物をクロロホルム、メタノール：エタノー
ル：水＝１０・４．４；２ （Ｖ／Ｖ）を用いて充填し
た１βのシリカゲルカラム（ワフーゲル）の上端に供給
し、展開溶媒として充填溶媒と同一組成の溶媒を用いて
溶出する。
溶出画分を１８ｇずつ分取するとフラクション番号１２
〜４０にに−２５９−２が溶出される。この両分を集め
減圧下で濃縮乾固すると約２００１１１ｇの油状物質が
得られる。この油状物を５ｍｌのメタノールに溶解し、
メタノールを用いて２００ｍｌのセファデックスＬＨ−
２０（ファルマシア社製）を充填したカラムの上端に供
給する。メタノールを用いて展開を行いｌＯｇずつ分取
するとフラクション番号１８〜４４にに−２５９−２が
溶出される。この両分を集め派圧下濃縮乾固すると約６
０ｍｇの油状物が得られる。
〜４０にに−２５９−２が溶出される。この両分を集め
減圧下で濃縮乾固すると約２００１１１ｇの油状物質が
得られる。この油状物を５ｍｌのメタノールに溶解し、
メタノールを用いて２００ｍｌのセファデックスＬＨ−
２０（ファルマシア社製）を充填したカラムの上端に供
給する。メタノールを用いて展開を行いｌＯｇずつ分取
するとフラクション番号１８〜４４にに−２５９−２が
溶出される。この両分を集め派圧下濃縮乾固すると約６
０ｍｇの油状物が得られる。
この油状物をクロロホルム：メタノール：エタノール：
水＝ ｌＯ： ４ ： ４ ： ２（Ｖ／Ｖ） ヲ用イ
テ充填した１ ００ｍｌのシリカゲルカラム（ワコーゲ
ル）の上端に供給し、シリカゲルに吸着させる。展開溶
媒として充填溶媒と同一組成の溶媒を用いて溶出する。
水＝ ｌＯ： ４ ： ４ ： ２（Ｖ／Ｖ） ヲ用イ
テ充填した１ ００ｍｌのシリカゲルカラム（ワコーゲ
ル）の上端に供給し、シリカゲルに吸着させる。展開溶
媒として充填溶媒と同一組成の溶媒を用いて溶出する。
溶出画分を５ｇずつ分取するとフラクション番号５〜２
６にに−２５９Ｌ２が溶出される。
６にに−２５９Ｌ２が溶出される。
この両分を集め減圧下濃縮乾固すると約３０ｍｇの赤褐
色粉末が得られる。これを約３ｍｌのメタノールに溶解
し、メタノール・水＝ ７ ＋ ３ （Ｖ／Ｖ）を用い
て平衡化したンラ°ナイズドシリカゲルＲＰ−８（サイ
ズＢ、メルク社製、Ａｒｔｌ１８０４）に吸着させ、展
開溶媒として平衡化に用いた溶媒と同一組成の溶媒を用
いて溶出する。溶出画分をｌＯｇずつ分取すると７ラク
ンヨン番号３０〜６４にに−２５９−２が溶出される。
色粉末が得られる。これを約３ｍｌのメタノールに溶解
し、メタノール・水＝ ７ ＋ ３ （Ｖ／Ｖ）を用い
て平衡化したンラ°ナイズドシリカゲルＲＰ−８（サイ
ズＢ、メルク社製、Ａｒｔｌ１８０４）に吸着させ、展
開溶媒として平衡化に用いた溶媒と同一組成の溶媒を用
いて溶出する。溶出画分をｌＯｇずつ分取すると７ラク
ンヨン番号３０〜６４にに−２５９−２が溶出される。
この両分を集め減圧下で濃縮乾固すると約２５ｍｇの赤
色粉末が得られる。この粉末を５ｍｌのメタノールに溶
解し、３ｍｌの水を加えて５℃で放置すると約７日間で
２１ｍｇの赤色針状結晶が４られる。なお」−記精製工
程中のに−２５９−２の検出は／す力ゲルｊ：ｉ ．Ｋ
※ｊクロマトグラフィー、ついでヨウ累反応又は３６５
０人の紫外線照射法により行った。
色粉末が得られる。この粉末を５ｍｌのメタノールに溶
解し、３ｍｌの水を加えて５℃で放置すると約７日間で
２１ｍｇの赤色針状結晶が４られる。なお」−記精製工
程中のに−２５９−２の検出は／す力ゲルｊ：ｉ ．Ｋ
※ｊクロマトグラフィー、ついでヨウ累反応又は３６５
０人の紫外線照射法により行った。
次にに−２５９−２の血管拡張作用を摘出血管標本を用
いる収縮抑制実験例で説明する。
いる収縮抑制実験例で説明する。
実験例
１）表面潅流摘出腸＋１７！膜動脈標本白色雑於つ→Ｊ
キ゛（雄、２〜：］ ｋｇ ）の１１１！部ｉ［中線を
切開し、土偶間膜動脈を１度部大動脈分岐邪から約２〜
２．５ ａｍの長さで切り出し、巾３〜４ｍｍのラセン
状条片を作成した。両端を絹糸で結紮し、下端は固定棒
、上端は強カドランスデューサー（日本光電製、５Ｂ−
ＩＴＪにつなぎ、初期張力１．５ ｇで懸垂した。標本
はべりスタポンプ（Ｐｅｒｉｓｔａｌｔｉｃ ｐｕｍｐ
） （Ｈａｒｂａｒｄ １２１０）を用いて、３７±１
℃に保ち、９５％０２．５％ＣＯ。
キ゛（雄、２〜：］ ｋｇ ）の１１１！部ｉ［中線を
切開し、土偶間膜動脈を１度部大動脈分岐邪から約２〜
２．５ ａｍの長さで切り出し、巾３〜４ｍｍのラセン
状条片を作成した。両端を絹糸で結紮し、下端は固定棒
、上端は強カドランスデューサー（日本光電製、５Ｂ−
ＩＴＪにつなぎ、初期張力１．５ ｇで懸垂した。標本
はべりスタポンプ（Ｐｅｒｉｓｔａｌｔｉｃ ｐｕｍｐ
） （Ｈａｒｂａｒｄ １２１０）を用いて、３７±１
℃に保ち、９５％０２．５％ＣＯ。
ガスを通じた。タレブス・ハンゼライト（Ｋｒｅｂｓ−
Ｈｅｎｓｅｌｅｉｊ）液Ｕ成（ｇ／ｌ）、ＮａＣ１６，
９２゜ＫＣｊ！０．３５．Ｍｇ５Ｏ，・７１−（，００
，２９゜ＣａＣＬ Ｏ，２Ｈ，ＫＨ２Ｐｏｔ Ｏ
，＋６．。
Ｈｅｎｓｅｌｅｉｊ）液Ｕ成（ｇ／ｌ）、ＮａＣ１６，
９２゜ＫＣｊ！０．３５．Ｍｇ５Ｏ，・７１−（，００
，２９゜ＣａＣＬ Ｏ，２Ｈ，ＫＨ２Ｐｏｔ Ｏ
，＋６．。
Ｎ ａ ＨＣＯａ ２． ｌ 、グルコ−’ｘ ２．
Ｑ ］を用い１０ｍｌ／ｍｉｎの速度で表面潅流を行っ
た。標本は１〜２時間安定化させた後、実験に供した。
Ｑ ］を用い１０ｍｌ／ｍｉｎの速度で表面潅流を行っ
た。標本は１〜２時間安定化させた後、実験に供した。
血管収縮物質として塩化カリウムを終１度２０ｍＭにｔ
−るように標本の直前に留置したノＪニューレから、潅
流路内に注入した。惹起された収縮反応は、張カドラン
スデューサーを介して等天性にポリグラフ（日本光電；
ＲＭ−４５）に記録した。Ｋ−２５９−２をエタノール
に２゜ｆｆ１ｇ ／ ｍ ｌになるように溶解し、栄養
液で適宜希釈したものを、収縮薬適用の１０分前から収
縮反応の終了時まで持続潅流した。
−るように標本の直前に留置したノＪニューレから、潅
流路内に注入した。惹起された収縮反応は、張カドラン
スデューサーを介して等天性にポリグラフ（日本光電；
ＲＭ−４５）に記録した。Ｋ−２５９−２をエタノール
に２゜ｆｆ１ｇ ／ ｍ ｌになるように溶解し、栄養
液で適宜希釈したものを、収縮薬適用の１０分前から収
縮反応の終了時まで持続潅流した。
２ン実験成績
第 ２ 表
ａ）収縮抑制率は次式により算出した。
第２表に示すようにに−２５９−２は濃度依存的にウサ
ギ腸間膜動脈の収縮を抑制した。
ギ腸間膜動脈の収縮を抑制した。
発明の効果
に−２５９−２は血管拡張作用を有する。
第１図は Ｋ−２５９−２の可視部吸収スペクトルテす
る。実Ｍ（Ｌ）はＯ，ｌＮＨＣｌ−８２％（Ｖ／Ｖ）メ
タノール水中、点線（２）は８２％（Ｖ／Ｖ） メタノ
ール水中（中性）、一点鎖線（３）はＯ，ｌＮ Ｎａ
ＯＨ−８２％（Ｖ／Ｖ） メタノール水中で測定した結
果を表わす。 軍２図はに−２５９−２の紫外部吸収スペクトルである
。各線の意義は上記２同様である。 枠註出頼人（Ｉｔ）２）協和醗酵工業株式会社代表者
加 曝 幹 夫 ■第 、２ 口 ＊Ｊｔ＜−九） 手 続 補 正 書 昭和５９年９月２９８ １、事件の表示 昭和５９年特許願第１８４３２０号 ２、発明の名称 新規物質に−２５９−２およびその製造法３、補正をす
る者 事件との関係 特許出願人 郵便番号 １００ 住 所 東京都千代田区大手町−丁目６番１号名 称
（１０２）協和醗酵工業株式会社（Ｔ［ｉＬ ： ０
３−２０１−７２１１ 内線２７５＋）明細書の特許
請求の範囲の欄及び発明の詳細な説明の欄 ５、補正の内容 （１）特許請求の範囲を別紙のとおり訂正すｐ≧元素分
析値（％） 実測値 Ｈ４，５０，Ｃ６５，５３，Ｎ Ｏ計算値
Ｈ４，７１，Ｃ６５，９７，Ｎ ００ ２９．３
２ （Ｃ２，Ｈ，，０１として）」１１８）ル 特許請求の範囲 （１）下記理化学的性質を有する新規物質に一２５９性
状：赤色針状結晶 融 点１１４０〜１４５℃（分解）。１４０℃付近か
ら褐変し始め、明瞭な融点を 示さないっ 比旋光度； Ｃα〕ｎ −０（ｃ＝０．３３． ＣＨ
３０Ｈ）溶解性； 酢酸に易溶、メタノール、水に可溶
、クロロホルム、酢酸エチル、アセト ン、エタノールに難溶 呈色反応；ヨウ素およびアニスアルデヒドの各反応に陽
性 可視部吸収スペクトル（８２％メタノール水、 Ｖ／Ｖ
）；竿１図 紫外部吸収スペクトル（８２％メタノール水、 Ｖ／Ｖ
）；第２図 赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ）； ３４２５、２９６０．２９２４．２８５２． ＋６２６
．１５６２．１４４２゜＋３８６．１３２６．１２５９
．１２２７．１１？６． ＋１５７．１１０８゜１０５
２、１０２３ ｃ「’ マススペクトル、本物質のマススペクトルハ次のような
分子イオンおよびフラグメントイオンを与える。 ３８２ （Ｍ“）、 ３５３． ３３４． ３１１．
３０８． ’２６８’ ）ｌ−ＮＭＲスペクト＃（
１００ＭＨｚ、 ロＭＳＯ−ｄ、＋ＣＤ、ＯＤ、δ）
０．７８（３Ｈ，ｔ、 Ｊ＝７．３）、 １．６７（３
）１． ｂｒ、ｄ、 Ｊ＝５．９）ｃａ、 １．７（２
Ｈ，ｍ）、 ４．３８（２Ｈ，ｂｒ、ｓ ＞、 ｃａ．
５．１（１１（、＋ｎ）、 ６４６（ＩＨ，ｄ、
Ｊ＝２．４）、 ６．９３（１Ｈ，ｄ。 Ｊ＝２．４）、 ７．３６（１Ｈ，ｓ）Ｋ−２５９−２
をジアゾメタンによりトリメチル誘導体にすると、以下
の１Ｈ−ＮＭＲ。 ”Ｃ−ＮＭＲスペクトルを与える。 ’ Ｈ−ＮＭＲｘベクトル（１００ＭＨｚ、 ＣＤＣＲ
、、δ）０．８５（３Ｈ，ｔ、 Ｊ＝６．６）、 １．
６９（３Ｈ， ｂｒ、ｄ、 Ｊ＝６．７）。 １．５〜１．９（２Ｈ，ｍ）、 ３．８６（３）１．
ｓ）、 ３．’９２（３１（、ｓ）。 ４．０１（３ｆ１．ｓ）、 ４．２１（２Ｈ，ｂｒ、ｓ
）、 ｃａ、 ５．３（１Ｈ，ｍ）。 ６．７１（ＩＨ，ｄ、 Ｊ＝２．７＞、 ７．３１（１
Ｂ、 ｄ、 Ｊ＝２．７）。 ７．７８（１Ｎ、 ｓ）、 １３．０６（ＩＨ，ｓ）
”Ｃ−ＮＭＲスペクトル（２５ＭＨｚ、 ＣＤＣＩ ３
．δＣ）１２．３． １３．６． ２Ｔ、４． ３２．
Ｂ、 ５２．５． ５６．（１゜５６．５． １０６
．７． １０７．５． １０８．１． １１１．７゜１
１７．８． １２５．６． １３２．０． １３４，０
． １３７，５゜＋３８．２． １４４．１． １５９
．６． １８５．３． １６５．５＋６７．１． １
８２．５． １８８．ＩＫ−２５９−２のジアゾメタン
によるトリメチル化物のマススペクトルは次の分子イオ
ンを与え、精密質量測定により次の分子式が得られた。 マススペクトルｍ／Ｚ ４２４（Ｍ”）。 分子式 Ｃ２−Ｈ＊、Ｏｌ 赤外部吸収スペクトル（ＣＣ１，） ３４４０、３０９６．３０１６．２９６８．２９３６．
２８７６、２８６０゜１？３９．１６７２．１６２７．
１５７５．１４８５．１４６３．１４４２゜１３８６、
１３６ｇ、 １３１６．１２５０．１２２８．１２１０
．．１１９２゜＋１６５．１１４２．１１０８．１０７
７、１０３９．１０２２．９９３゜９５４、９３６．９
３０．８９２．８６７、８５０．７４０．７０４゜６４
６、６１７ ０ｍ−’ （２） ミクロモノスポラ属に属し、Ｋ−２５９−２
生産能を有する微生物を培地に培養し、培養物中にに−
２５９−２を生成蓄積させ、該培養物からに−２５９−
２を採取することを特徴とする新規物質に−２５９−２
の製造法。 （３）該微生物がミクロモノスポラ・ｓｐ、に−２５９
微工研条寄第５６９号である０とを特徴とする特許請求
の範囲第２項記・或の製造法。
る。実Ｍ（Ｌ）はＯ，ｌＮＨＣｌ−８２％（Ｖ／Ｖ）メ
タノール水中、点線（２）は８２％（Ｖ／Ｖ） メタノ
ール水中（中性）、一点鎖線（３）はＯ，ｌＮ Ｎａ
ＯＨ−８２％（Ｖ／Ｖ） メタノール水中で測定した結
果を表わす。 軍２図はに−２５９−２の紫外部吸収スペクトルである
。各線の意義は上記２同様である。 枠註出頼人（Ｉｔ）２）協和醗酵工業株式会社代表者
加 曝 幹 夫 ■第 、２ 口 ＊Ｊｔ＜−九） 手 続 補 正 書 昭和５９年９月２９８ １、事件の表示 昭和５９年特許願第１８４３２０号 ２、発明の名称 新規物質に−２５９−２およびその製造法３、補正をす
る者 事件との関係 特許出願人 郵便番号 １００ 住 所 東京都千代田区大手町−丁目６番１号名 称
（１０２）協和醗酵工業株式会社（Ｔ［ｉＬ ： ０
３−２０１−７２１１ 内線２７５＋）明細書の特許
請求の範囲の欄及び発明の詳細な説明の欄 ５、補正の内容 （１）特許請求の範囲を別紙のとおり訂正すｐ≧元素分
析値（％） 実測値 Ｈ４，５０，Ｃ６５，５３，Ｎ Ｏ計算値
Ｈ４，７１，Ｃ６５，９７，Ｎ ００ ２９．３
２ （Ｃ２，Ｈ，，０１として）」１１８）ル 特許請求の範囲 （１）下記理化学的性質を有する新規物質に一２５９性
状：赤色針状結晶 融 点１１４０〜１４５℃（分解）。１４０℃付近か
ら褐変し始め、明瞭な融点を 示さないっ 比旋光度； Ｃα〕ｎ −０（ｃ＝０．３３． ＣＨ
３０Ｈ）溶解性； 酢酸に易溶、メタノール、水に可溶
、クロロホルム、酢酸エチル、アセト ン、エタノールに難溶 呈色反応；ヨウ素およびアニスアルデヒドの各反応に陽
性 可視部吸収スペクトル（８２％メタノール水、 Ｖ／Ｖ
）；竿１図 紫外部吸収スペクトル（８２％メタノール水、 Ｖ／Ｖ
）；第２図 赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ）； ３４２５、２９６０．２９２４．２８５２． ＋６２６
．１５６２．１４４２゜＋３８６．１３２６．１２５９
．１２２７．１１？６． ＋１５７．１１０８゜１０５
２、１０２３ ｃ「’ マススペクトル、本物質のマススペクトルハ次のような
分子イオンおよびフラグメントイオンを与える。 ３８２ （Ｍ“）、 ３５３． ３３４． ３１１．
３０８． ’２６８’ ）ｌ−ＮＭＲスペクト＃（
１００ＭＨｚ、 ロＭＳＯ−ｄ、＋ＣＤ、ＯＤ、δ）
０．７８（３Ｈ，ｔ、 Ｊ＝７．３）、 １．６７（３
）１． ｂｒ、ｄ、 Ｊ＝５．９）ｃａ、 １．７（２
Ｈ，ｍ）、 ４．３８（２Ｈ，ｂｒ、ｓ ＞、 ｃａ．
５．１（１１（、＋ｎ）、 ６４６（ＩＨ，ｄ、
Ｊ＝２．４）、 ６．９３（１Ｈ，ｄ。 Ｊ＝２．４）、 ７．３６（１Ｈ，ｓ）Ｋ−２５９−２
をジアゾメタンによりトリメチル誘導体にすると、以下
の１Ｈ−ＮＭＲ。 ”Ｃ−ＮＭＲスペクトルを与える。 ’ Ｈ−ＮＭＲｘベクトル（１００ＭＨｚ、 ＣＤＣＲ
、、δ）０．８５（３Ｈ，ｔ、 Ｊ＝６．６）、 １．
６９（３Ｈ， ｂｒ、ｄ、 Ｊ＝６．７）。 １．５〜１．９（２Ｈ，ｍ）、 ３．８６（３）１．
ｓ）、 ３．’９２（３１（、ｓ）。 ４．０１（３ｆ１．ｓ）、 ４．２１（２Ｈ，ｂｒ、ｓ
）、 ｃａ、 ５．３（１Ｈ，ｍ）。 ６．７１（ＩＨ，ｄ、 Ｊ＝２．７＞、 ７．３１（１
Ｂ、 ｄ、 Ｊ＝２．７）。 ７．７８（１Ｎ、 ｓ）、 １３．０６（ＩＨ，ｓ）
”Ｃ−ＮＭＲスペクトル（２５ＭＨｚ、 ＣＤＣＩ ３
．δＣ）１２．３． １３．６． ２Ｔ、４． ３２．
Ｂ、 ５２．５． ５６．（１゜５６．５． １０６
．７． １０７．５． １０８．１． １１１．７゜１
１７．８． １２５．６． １３２．０． １３４，０
． １３７，５゜＋３８．２． １４４．１． １５９
．６． １８５．３． １６５．５＋６７．１． １
８２．５． １８８．ＩＫ−２５９−２のジアゾメタン
によるトリメチル化物のマススペクトルは次の分子イオ
ンを与え、精密質量測定により次の分子式が得られた。 マススペクトルｍ／Ｚ ４２４（Ｍ”）。 分子式 Ｃ２−Ｈ＊、Ｏｌ 赤外部吸収スペクトル（ＣＣ１，） ３４４０、３０９６．３０１６．２９６８．２９３６．
２８７６、２８６０゜１？３９．１６７２．１６２７．
１５７５．１４８５．１４６３．１４４２゜１３８６、
１３６ｇ、 １３１６．１２５０．１２２８．１２１０
．．１１９２゜＋１６５．１１４２．１１０８．１０７
７、１０３９．１０２２．９９３゜９５４、９３６．９
３０．８９２．８６７、８５０．７４０．７０４゜６４
６、６１７ ０ｍ−’ （２） ミクロモノスポラ属に属し、Ｋ−２５９−２
生産能を有する微生物を培地に培養し、培養物中にに−
２５９−２を生成蓄積させ、該培養物からに−２５９−
２を採取することを特徴とする新規物質に−２５９−２
の製造法。 （３）該微生物がミクロモノスポラ・ｓｐ、に−２５９
微工研条寄第５６９号である０とを特徴とする特許請求
の範囲第２項記・或の製造法。
Claims (3)
- （１）下記理化学的性質を有する新規物質Ｋ−２５９−
２ 性状；赤色針状結晶 融点；１４０〜１４５℃（分解）。 １４０℃付近から褐変し始め、明瞭な融点を 示さない。 比旋光度；〔α〕＾２＾０＿０＝０（ｃ＝０．３３、Ｃ
Ｈ＿３ＯＨ）溶解性；酢酸に易溶、メタノール、水に可
溶、クロロホルム、酢酸エチル、アセト ン、エタノールに難溶 呈色反応；ヨウ素およびアニスアルデヒドの各反応に陽
性 可視部吸収スペクトル（８２％メタノール水、Ｖ／Ｖ）
；第１図 紫外部吸収スペクトル（８２％メタノール水、Ｖ／Ｖ）
；第２図 赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ）； ３４２５、２９６０、２９２４、２８５２、１６２６、
１５６２、１４４２、１３８６、１３２６、１２５９、
１２２７、１１７６、１１５７、１１０８、１０５２、
１０２３ｃｍ＾−＾１ マススペクトル；本物質のマススペクトルは次のような
分子イオンおよびフラグメントイオンを与える。 ３８２（Ｍ＾＋）、３５３、３３４、３１１、３０８、
２６８＾１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（１００ＭＨｚ，ＤＭ
ＳＯ−ｄ＿δ＋ＣＤ＿３ＯＤ，δ）０．７８（３Ｈ，ｔ
，Ｊ＝７．３）、１．６７（３Ｈ，ｂｒ．ｄ，Ｊ＝５．
９）ｃａ．１．７（２Ｈ，ｍ）、４．３８（２Ｈ，ｂｒ
．ｓ）、ｃａ．５．１（１Ｈ，ｍ）、６．３６（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝２．４）、６．９３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４）
、７．３６（１Ｈ，ｓ） Ｋ−２５９−２をジアゾメタンによりトリメチル誘導体
にすると、以下の＾１Ｈ−ＮＭＲ、＾１＾３Ｃ−ＮＭＲ
スペクトルを与える。 ＾１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ＿
３，δ）０．８５（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．６）、１．６９
（３Ｈ，ｂｒ．ｄ，Ｊ＝６．７）、１．５〜１．９（２
Ｈ，ｍ）、３．８６（３Ｈ，ｓ）、３．９２（３Ｈ，ｓ
）、４．０１（３Ｈ，ｓ）、４．２１（２Ｈ，ｂｒ．ｓ
）、ｃａ．５．３（１Ｈ，ｍ）、６．７１（１Ｈ，ｄ，
Ｊ＝２．７）、７．３１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７）、７
．７８（１Ｈ，ｓ）、１３．０６（１Ｈ，ｓ）＾１＾３
Ｃ−ＮＭＲスペクトル（２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ＿３，δ
ｃ）１２．３、１３．６、２７．４、３２．８、５２．
５、５６．０、５６．５、１０６．７、１０７．５、１
０８．１、１１１．７、１１７．８、１２５．６、１３
２．０、１３４．０、１３７．５、１３８．２、１４４
．１、１５９．６、１６５．３、１６５．５１６７．１
、１８２．５、１８８．１ Ｋ−２５９−２のジアゾメタンによるトリメチル化物の
マススペクトルは次の分子イオンを与え、精密質量測定
により次の分子式が得られた。 マススペクトルｍ／Ｚ４２４（Ｍ＾＋）、 分子式Ｃ＿２＿４Ｈ＿２＿４Ｏ＿７ 赤外部吸収スペクトル（ＣＣｌ＿４） ３４４０、３０９６、３０１６、２９６８、２９３６、
２８７６、２８６０、１７３９、１６７２、１６２７、
１５７５．１４８５、１４６３、１４４２、１３８６、
１３６８、１３１６、１２５０、１２２８、１２１０、
１１９２、１１６５、１１４２、１１０８、１０７７、
１０３９、１０２２、９９３、９５４、９３６、９３０
、８９２、８６７、８５０、７４０、７０４、６４６、
６１７ｃｍ＾−＾１ - （２）ミクロモノスポラ属に属し、Ｋ−２５９−２生産
能を有する微生物を培地に培養し、培養物中にＫ−２５
９−２を生成蓄積させ、該培養物からＫ−２５９−２を
採取することを特徴とする新規物質Ｋ−２５９−２の製
造法。 - （３）該微生物がミクロモノスポラ・ｓｐ．Ｋ−２５９
微工研条寄第５６９号であることを特徴とする特許請求
の範囲第２項記載の製造法。
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59184320A JPS6163289A (ja) | 1984-09-03 | 1984-09-03 | 新規物質ｋ―２５９―２ |
| DE198585306244T DE174181T1 (de) | 1984-09-03 | 1985-09-03 | Vasodilator und dessen verfahren zur herstellung. |
| DE8585306244T DE3582379D1 (de) | 1984-09-03 | 1985-09-03 | Vasodilator und dessen verfahren zur herstellung. |
| EP85306244A EP0174181B1 (en) | 1984-09-03 | 1985-09-03 | Novel vasodilator and process for the preparation thereof |
| US06/852,590 US4692310A (en) | 1984-09-03 | 1986-04-16 | Substance K-259-2 and a process for producing the same |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59184320A JPS6163289A (ja) | 1984-09-03 | 1984-09-03 | 新規物質ｋ―２５９―２ |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6163289A true JPS6163289A (ja) | 1986-04-01 |
| JPH0439451B2 JPH0439451B2 (ja) | 1992-06-29 |
Family
ID=16151266
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59184320A Granted JPS6163289A (ja) | 1984-09-03 | 1984-09-03 | 新規物質ｋ―２５９―２ |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4692310A (ja) |
| EP (1) | EP0174181B1 (ja) |
| JP (1) | JPS6163289A (ja) |
| DE (2) | DE174181T1 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0287008B1 (en) * | 1987-04-15 | 1991-05-02 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Novel substances ks-504a, ks-504b, ks-504d and ks-504e and process for their preparation |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA1125203A (en) * | 1978-05-10 | 1982-06-08 | Toyo Jozo Company, Ltd. | Macrolide antibiotics from micromonospora |
-
1984
- 1984-09-03 JP JP59184320A patent/JPS6163289A/ja active Granted
-
1985
- 1985-09-03 EP EP85306244A patent/EP0174181B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-09-03 DE DE198585306244T patent/DE174181T1/de active Pending
- 1985-09-03 DE DE8585306244T patent/DE3582379D1/de not_active Expired - Lifetime
-
1986
- 1986-04-16 US US06/852,590 patent/US4692310A/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0174181B1 (en) | 1991-04-03 |
| EP0174181A2 (en) | 1986-03-12 |
| DE174181T1 (de) | 1987-08-13 |
| JPH0439451B2 (ja) | 1992-06-29 |
| EP0174181A3 (en) | 1988-02-10 |
| US4692310A (en) | 1987-09-08 |
| DE3582379D1 (de) | 1991-05-08 |
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