JPS61502055A - 低減された毒性の薬剤調製物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 低減された毒性の薬剤調製物 １、発明の分野 本発明は、一般に脂質である、内生的細胞毒性受容体に結合することを介して副 作用が仲介される薬剤の毒性を低減ないしは「Ｍ衝」することに関するものであ る。特に、薬剤は、薬剤の毒性効果をかなり低減させるためにあるリガンドと結 合されて投与されるものであるが、薬剤は薬学的活性は維持している。

２−且里五遣１ いくつかの理論が、ヒトを含む動物において望ましい治療学的なおよび有害な毒 性効果を種々の毒性物質が及ぼすところの機構を説明するために進展してきてい る。発展した証拠は、これらの物質が細胞膜を乱すことによりこれらの効果を及 ぼすということを提唱している（スキャットら、１９８３年、「アミノグリコシ ド−細胞受容体相互作用：毒性と生体外試験の密接な関係」、サーティーンス　 インターナショナル　コンブレス　オブ　ケモセラビ−［５ｃｈａｃｈｔｅｔ　 ａｌ、、１９８３．　”Ａｍｉｎｏｇｌｙｃｏｓｉｄｅ−ｃｅｌｌ　Ｒｅｃｅｐ ｔｅｒ　Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ：Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ　ｆｏｒ　Ｔｏ ｘｉｃｉｔｙ　ａｎｄ　Ｉｎ　Ｖｉｔｒｏ　Ｍｏｄｅｌｓ、”Ｔｈ１ｒｔｅｅｎ ｔｈ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　ｃｏｎｇｒｅｓｓ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｏｔｈ ｅｒａｐｙｌ）。

より詳細には、薬剤は、動物において治療学的および毒性の効果に応答し得る分 子活性を仲介するある特定の受容体に結合するものと考えられている。

薬学的作用の理論がアミノグリコシド系抗生物質に関しておよび抗真菌性物質の 網でおる、ポリエンおよびポリエンマクロリド系抗生物質を含むいくつかの他の 薬剤に関して、ならびに抗腫瘍性物質として公知でめるアドリアマイシンおよび シスプラチンに関して進展されている。特に、これらの薬剤は、特異的な細菌性 、真菌性おるいは腫瘍細胞性受容体に結合することによってこれらの望ましい治 療学的効果を及ぼす。一方、これらの望ましくない毒性効果は、処置された動物 の非薬剤標的細胞の特異的な毒性受容体に結合することに帰因するものと考えら れている。脂質は、これらおよびその他の薬剤に関する毒性受容体であるとして 提唱されている。

理論が上記した薬剤に関してより発展したために、以下のより細かな詳）本にお いてこれらは論議される。しかしながら、これら以外の薬剤もまた同様の脂質の 仲介した機構を介してこれらの毒性効果を及ぼすこと、および本発明がこのよう な薬剤のすべてを包含するもので必ろことが理解されるべきである。

２．１．７ミノグリコシド系抗生物質 アミノグリコシド系抗生物質（例えばストレプトマイシン、ゲンタマイシン、カ ナマイシン、トブラマイシン等）は、細菌によって引起こされた感染の処置する ためにほとんど独占的に使用されている。これらの殺菌性作用のモードは、感受 性の微生物におけるタンパク合成の阻止を含むものでおる。いくつかの感受性の 微生物としては、少ないが列挙すると、エシェリキア種［Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉ ａ　ｓｐｐ、　］　。

ヘモフィルス種［Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ　ｓｐｐ、］、リステリア種［Ｌｉ５ ｔｅｒｉａ　ｓｐｐ、　］　、シュードモナス種［ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ二］ 、ノカルジ７種［Ｎ０Ｃａｒｄｉａ　Ｓｐｐ、　］　、エルシニア種［Ｙｅｒｓ ｉｎｉａ　ｓｐｐ、　］　、クレブシェラ種［Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ　ｓｐｐ、 ］、］エンテロバクタ一種Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ　ｓｐｐ、　］　、サルモ ネラ種［Ｓａｌｍｏｎｅｌ　１ａｓｐｐ、　］　、スタフィロコッカス種［５ｔ ａｐｈｙｌｏｃｃｏｃｕｓ　ｓｐｐ、］、ミコバクテリア種［Ｍｙｃｏｂａｃｔ ｅｒｉａ。

肚ムコ、シゲラ種［Ｓｈｉｇｅｌｌａ　ｓｐｐ、］、およびセレイシ７種［５ｅ ｒｒａｔｉａ　二］などが含まれる。

アミノグリコシド族の抗生物質はすべてアミノグリコシド結合中にアミノ糖を含 んでいる。これらはポリカチオンであり、そしてこれらの極性は、この族の構成 員によって共有される薬理学的活動的特性に主として感応し得るものでおる。例 えば、これらの薬剤は、経口投与の後十分に吸収されず、これらは脳を髄液に容 易に浸透せず、そしてこれらは腎臓によって迅速に排泄される。

深刻な毒性が７ミノグリコシドの有用性に対する主な限定要件である。アミノグ リコシドの使用において毒性の３つのタイプがしばしば出くわす、すなわち（１ ）第８脳神経の聴覚および前庭機能の双方を含み得るところの再考性、（２）急 性管系組織損傷として現われるところの腎臓毒性、および（Ｃ）肋膜内および腹 腔内投与に伴なうものでおり、そして呼吸困難へと最終的に達する神経筋遮断と して現われるところの急性毒性である。

再考性は、内耳逆機能を含むものである。６０〜１２０日間毎日２ｇのストレプ トマイシンを与えられた患者のほぼ７５％は、ある程度の前庭の障害が現われ、 服用量の毎日１ｇへの低減は、出現率を２５％へ減少する。（１）急性期（１〜 ２週間）は、嘔気、嘔吐、および眩量を含む平衡障害によって特徴づけられ、（ ２）急性期状態は突然終了し、そして次に運動失調症によって特徴づけられる慢 性迷路炎となり、そして（３）慢性期は２力月間持続され、そして次に症状が潜 伏し、そして目を閉じた場合にのみ発現する代償性期となる。協調の全快は１２ 〜１８力月が必要であり、そしていくらかの患者は永久的残留障害を有する。こ の前庭欠乏に関する特異的処置はない。

前庭機能におりる毒性効果の出現率および苦しさを阻止するあるいは低減するた めに、アミノグリコシド服用量、治療の期間および患者における効果の注意深い 観察が、考慮されなければならない。

ストレプトマイシンおよびゲンタマイシンなどのようなアミノグリコシドの毒性 効果は、第８脳神経の聴覚構成分上よりも前庭上により大きなものである。しか しながら、聴力における減少は、評価しうるほどの数の患者において発生しく１ 週間以上の薬剤投与を受けた個体の４〜１５％）、そしてまれに、完全な聾が発 現し得る。前庭および聴覚逆機能に応答し得る障害の位置は論争されるものであ るが、アミノグリコシドがアミノグリコシドに対する受容体（以下推定上の７ミ ノグリコシド毒性受容体と呼称する。）を破壊し、そしてこれらの薬剤に感受性 のものへと組織をならしめるものであると考えられている（ロジら、　１９８０ 年。

バイオケム、）？ラマＤル、２９：５９７〜６０１［Ｌｏｄｈｉ　ｅｔ　ａｌ、 。

１９８０、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　ＰｈａｒｍａｃＯｌ、２９：５６７−６０１１ ）。

アミノグリコシドの論評に関しては、「治療学の薬理学的基礎」第６版、グツド マンとギルマン編、　１９８０年、第５１章、第１１６２〜１１９９頁［Ｔｈｅ 　Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｂａ５ｉｓ　ｏｆ　Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉ ｃｓ”、６ｔｈ　ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｇｏｏｄｍａｎ　ａｎｄ　Ｇｉｌｍａｎ、ｅ ｄｓ、、１９８０゜ｃｈ、　５１．　ｐｐ、　１１Ｂ２−１１９９コを参照のこ と。

２．２．ポリエンおよびポリエンマクロリド系　生物ポリエンおよびマクロリド 系抗生物質は、放線菌類の種より得られる一群の物質である。種々のポリエンお よびポリエンマクロリド抗生物質の薬理学の論評に関しては、「治療学の薬理学 的基礎」第６版、グツドマンとギルマン編、　１９８０年、第１２３３〜１２３ ６頁およびメドフら、　１９８３年。

アン、レブ、ファラマコル、トキシコル。２３：３０３〜３３０［Ｈｅｄｏｆｆ 　ｅｔ　ａｌ、、１９８３．Ａｎｎ、Ｒｅｖ、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、丁ｏｘｉｃ ｏ１．２３：３０３−３３０コを参照のこと。

多種多数の困った毒性効果がこれらの薬剤の使用に連合する。特に、アンフォテ リシンＢの毒性効果は、アナフィラキシ−１血小板減少症、潮紅、全身病、痙傘 、悪寒、発熱、静脈炎、頭痛、貧血、食欲不乏および腎ＰＭ機能低下を含むもの である。ポリエンおよびポリエンマクロリド抗生物質の毒性効果は、毒性受容体 、すなわち動物細胞中に存在するが、真菌細胞中には存在しないステロールであ るコレステロールに結合することによるものと思われる。

ポリエンおよびポリエンマクロリド抗生物質は、真菌細胞中に存在するがヒト細 胞中には存在しないステロールであるエルゴステロールに結合することによって 、真菌に対するこれらの治療学的効果を及ぼすものと思われる。例えばアンフオ テリシンＢは、生体外（ｉｎ　ＶｉｔｒＯ）で、コレステロールに対する親和性 よりも約１０倍大きな親和性でエルゴステロールに結合し、推定の遮断がまたこ れらの薬剤の静脈内、筋向および経口投与を伴なうヒトにおいて観察された。神 経筋遮断は、神経節前末端からのアセチルコリン解放の阻止（カルシウムイオン との競合を介して）によりおよびたぶんより小さな程度の後接合膜の安定化によ り発生する。この遮断は、カルシウム塩によって拮抗されるが、抗コリンエステ ラーゼ剤によって矛盾するのみである。

これらの神経筋反応は、いくつかの他のアミノグリコシド系抗生物質、特にネオ マイシンおよびカナマイシン、ならびにより小さな程度ではあるがゲンタマイシ ン、バイオマイシン、パロモマイシンおよびトブラマイシンにより、度合を変え て共有される。興味ある゛ことには、急性毒性反応を及ぼすための７ミノグリコ シドの増加する能力の順序は、腎臓毒性を及ぼすためのこれらの能力と相関して いるようである。これらの毒性反応の基礎となる機構が関連されていることが、 ホスフオイノシチド代射ての神経膜における生物電気事象の刺激あるいは抑圧に 関連する研究（ホラキン、　１９６９年、神経組織の構造と機能、プル二編。

アカデミツク　プレス、ニューヨーク、第３巻、第１６１〜１８４頁［Ｈｏｋｉ ｎ、１９６９，５ｔｒｕｃｔｕｒｅ　ａｎｄ　Ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｎｅｒ ｖｏｕｓＴｉｓｓｕｅ、Ｂｏｕｒｎｉ、ｅｄ、、Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ 、Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、Ｖｏｌ、３．ｐｐ。

１６１−１８４］　；シャフトとアグラノック、　１９７２年、ジエイ。

ニューロケム、　１９　：　１４１７〜１４２１［５ｃｈａｃｔ　ａｎｄ　Ａｇ ｒａｎｏｆｆ。

１９７２、　Ｊ、Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ、　１９：１４１７−１４２１１　；マル ゴリスとヘラ−２１９６６年、ジエイ、）７ラマコル、エクスブト、スエラ、７ ４：３０７−３１２［Ｈａｒｇｏｌ　ｉｓ　ａｎｄ　Ｈｅｌ　ｌｅｒ、　１９６ ６、　Ｊ、　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、　Ｅｘｐｔ。

ｒｈｅｒ、　７４：３０７−３１２］）およびアミノグリコシド誘導耳毒性およ び腎ＰＲ毒性でのホスフォイノシチド代謝に関連する同様の研究（オルスラコバ ら、　１９７６年、ジエイ、ニューロケム。

２６：２８５〜２９０［０ｒｓｕｌａｋｏｖａ　ｅｔ　ａｌ、、１９７６、Ｊ、 Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ、２６：２８５−２９０１　：サイベシとシャフト、　１９ ７７年、バイオケム。

）１ラマコル、２６　：　１７６９〜１７７４［５ｃｈｉｂｅｃｉ　ａｎｄ　５ ｃｈａｃｈｔ。

１９７７、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、２６：１７６９−１７７ ４］　；アレキサンダーら、　１９７９年、ジエイ、アンチバイオティックス　 ３２：５０４〜５１０［Ａｌｅｘａｎｄｅｒ　ｅｔ　ａｌ、、１９７９．Ｊ、Ａ ｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ　３２：５０４−５１０１）によって提唱される。アミノ グリコシド系抗生物質は、生体内で［ｉｎ　ｖｉｖｏ］内耳組織および腎臓中の ポリホスフォイノシチドに結合することが示されてきた。ホスファチジルイノシ トール　ビスホスフェート（ホスファチジルイノシトール　ジホスフェート）は 生体内で、輪生の神経繊維の末端への病理学的変化の伸張を有する脳幹における 腹側蝙牛神経核として働くものであることが仮定されていた。

アミノグリコシドによって引起される腎臓毒性は、本質的に急性尿細管壊死の一 形態であり、そして尿を濃縮することの無能性によって最初に明らかなものとさ れる。腎皮質および尿中に溜まるアミノグリコシド系抗生物質の非常に高い濃度 は、腎臓毒性を引起こすこれらの薬剤の可能性と相関する。この理由のために、 最も腎臓毒性の７ミノグリコシドであるネオマイシンは、ヒトにおいて通常は全 身的には投与されない。ゲンタマイシンは、一般に使用される薬剤のうち最も腎 臓毒性であるようだ。

典型的に、アミノグリコシド療法の５〜７日後に、急性尿細管壊死および尿を濃 縮することの不能性によって明らかにされる腎臓損傷が発生し、そして薬剤の投 与が続くとともに進行する。この段階で尿はタンパクおよび尿細管細胞円柱を含 んでいる。糸球濾過速度における減少が伴ない、そして血漿中のアミノグリコシ ド、クレアチニンおよび尿素の濃度における上昇が゛関連する。組織病理学は、 二次的介在性損傷での急性尿細管損傷を含む。これらの変化は通常可逆性で薬剤 が中止されると腎臓細胞の再生が起こる。

種々の７ミノグリコシドの他の重大な効果は、ストレプトマイシンなどのような 薬剤が術後的に（ある外斜的臨床の実践）腹腔内へ滴下された場合に発展するで あろう潜在的に避けられない神経筋反応である。急性筋麻痺および呼吸困難がア ミノグリコシドによる神経筋接合部の遮断に帰因して発生する。神経筋毒性受容 体は、ピットマンら。

１９８２年、バイオチム、バイオフイズ６アクタ　６８５：２１９［Ｂｉｔｔｍ ａｎ　ｅｔ　ａｌ、、１９８２．Ｂｉｏｅｈｉｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ａｃｔａ　 ６８５：２１９］を参照のこと。

１ノポソーム中へのアンフオテリシンＢの被包化は、薬剤の困った効果を減じる ために提唱されている。ティラーら［Ｔａｙｌａｒ　ｅｔ　ａｌ、］（１９８２ 年、アン。シブ。レスピア。ディス。

１２５　：８１０〜６ｉ１　［１９８２，Ａｎｎ、　Ｒｅｖ、　Ｒｅ５ｔ）ｉ　 ｒ、　Ｄｉｓ、　１２５　：６１０−６１１）はリポソーム被包は、薬剤の毒性 効果を顕著に変えるものである口とを報告している。彼らのデータは、被包がお そらく薬剤の組織分配を変えることを示している。彼らは、低減された急性毒性 と、遊離アンフォテリシンＢに関する最大許容服用量よりも９倍多い最大許容服 用量を観察ｉノだ。

アンフォテリシンＢのリポソーム被包は、またヒストプラズＶ−カブスラーツム ［Ｈｉｓｔｏｌａｓｍａ　ｃａｐｓｕｌａｔｕｍｌで感染したマウスの生存を延 長するものであった。ニューら［Ｎｅｗ　ｅｔ　ａｌ、］（１１９８１年２ジエ イアンチミクロブ、ケモセラ。

８：３７１〜３８１［１９８１，Ｊ、Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ、Ｃｈｅｍｏｔｈｅ ｒ、８：３７１−３８１１）はリーシュマニア症の処魚の目的でコレステロール と共にアンフォテリシンＢを用いた。薬剤の増加した効果が観察された。

デオキコール酸ナトリウムは市販の調製物であるフ７ンギゾン［Ｆｕｎｇ　ｉ　 ｚｏｎｅ　］において、アンフオテリシンＢのコロイド状分散体をもたらすため に、緩衡剤および希釈剤として用いられている。ファギゾンは、殺菌され凍結乾 燥された粉末としてガラス瓶中に有効に充填されており、これに対し水が添加さ れる。この混合物は振盪され、そして５％ブドウ糖溶液へ添加される。得られた 溶液は、次に注射として投与されることができる。

２．３．アドリアマイシン 抗腫瘍性剤であるアドリアマイシンは、真菌、ストレプトマイセス・ペウセチウ ス変異カエシウス［ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｐｅｕｃｅｔｉｕｓ　ｖａｒ、ｃ ａｅｓｉｕｓ　１の発Ｍ産物である配糖体性アントラシフリン抗生物質である。

アドリアマイシンは、グリコシド結合によって付着されたまれな糖であるダウノ サミンを有するテトラシフリン環構造を有する。

アドリアマイシンは、急性白血球減少症および悪性リンパ腫の治療に、また充実 性腫瘍のいくつかに効果的である。

この薬剤は、骨肉腫、ユーイング肉腫、軟組織肉腫などを含む広範な意味の肉腫 において特に適している。乳房の転移性腺癌、膀胱の癌、気管支癌および神経芽 細胞腫の治療に最も効果的な特異的薬剤の１つである。骨髄抑圧は、アドリアマ イシンにおける主な投与量限定性合併症である。

口内炎、胃腸障害および脱毛症は普通であるが可逆性である。心筋症はアントラ シフリン抗生物質の独特の特徴でみる。頻拍、不整脈および心電図（ＥＣＧ）に おける５Ｔ−Ｔ波変化は、心臓毒性の早期発現である。深刻なそして迅速な進行 性うつ血性心不全がこれに続く。心筋症性原線維の数における減少、ミトコンド リア変化、および細胞変性を含む非特異的変化が電子顕微鏡によって視認できる 。この心臓毒性の観点において、アドリアマイシンの治療学的利用性は限定され る。

アドリアマイシンは肝臓によって主に代謝され排出されるので、肝臓機能の損な われた患者における投与量の低減は重要なことである。

アドリアマイシンの抗腫瘍性効果は、ＤＮＡの隣接塩基対間への分子のインター カレーション（挿入、［１ｎｔｅｒｃａｌａｔｉｏｎｌ）によるものと思われ、 これゆえ迅速に分配される腫瘍細胞の増殖を妨害する。毒性効果は、推定の毒性 受容体であるカルシオリピンへの薬剤の結合によって仲介される。

グールメイチら［Ｇｏｏｒｍａｇｈｔｉｇｈ　ｅｔ　ａｌ、］は、カカルシオリ ピンへアドリアマイシンが生体外において吸収されることを、そしてより低い程 度で、ホスファチジルセリンおよびホスファチジン酸に吸収されることを示して いる（　１９８０年、バイオケム、ファラマコル、２９　：　３００３〜３０１ ０［１９８０，Ｂｉｏｃｈｅｍ。

Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、２９：３００３−３０１０］）。これらは、アドリアマイ シンの糖残余のプロトン付加化アミン基°とカルシオリピンのイオン化リン酸残 余との間の比較的強い静電気的相互作用と、付随した隣接アントラキノン発色団 間の相互作用であると思われる。カルシオリピン／アドリアマイシンの会合定数 は、約１．６ｘｌＯ６ｍｏ！　”であり、一方、ＤＮＡ／アドリアマイシンの会 合定数は約２．４ｘ１０　［１１ｏｌ　−ｉである。

これゆえ、アドリアマイシンは、カルシオリピンに対するよりも対い親和性をＤ ＮＡに対して有している。

螢光学的研究は、アドリアマイシンがカルシオリピンのヘッド［ｈｅａｄｌ基に 結合していることを示している。グールメイチら、　１９８０年、バイオチム、 バイオフィズ、アクタ５９７：１〜１４［Ｇｏｏｒｍａｇｈｔｉｇｈ　ｅｔ　ａ ｔ、、　１９８０年、　Ｂｉｏｃｈｉｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ａｃｔａ　５９７： １−１４］。

グールメイチらはまた、カルシオリピンンへのアドリアマイシン誘導体の結合と ミトコンドリア毒性との間の良好な相関関係を観察した（　１９８０年、バイオ ケム、）７ラマコル。

２９　：　３００３〜３０１０　［１９８０，Ｂ　ｉ　ｏｃｈｅｍ、　ｐｈａｒ ｍａｃｏ　！、　２９　：　３００３−３０１０１　）。

これゆえ、カルシオリピンは動物においてアドリアマイシンの毒性受容体である ことが唱えられている（グールメイチら、１９８２年、バイオケム、バイオフィ ズ、レス、コム、　１０４：３１４〜３２Ｑ［Ｇｏｏｒｍａｇｈｔｉｇｈ　ｅｔ 　ａｌ、、１９＆２．Ｂｉｏｃｈｅｍ。

Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ、　Ｃｏｍｍ、　１０４　：３１４−３２０］）。

アトレアマイシンをリポソーム中に被包することが提唱されている（）ｔ−セン とトークス、　１９８３年、キャンサーレス、　４３：５４６〜５５０［Ｆｏｒ ｓｓｅｎ　ａｎｄ　Ｔｏｋｅｓ、１９８３．Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ。

４３　：　５４６−５５０１　）。リポソーム被包は、アドリアマイシンの組織 分配を変化する。遊離薬剤は肝臓および牌臓中に卓越して出現する。慢性心臓毒 性における明白な低減と杭内血球減少活性における増加がある。

２．４．シスプラチン シスプラチンは、シス配置にアンモニウムおよび塩化物残余を含有する、無機の 、水溶性の、プラチナ含有配位化合物（平面）である。腎臓毒性および耳毒性を 表わす沈澱物、シスプラチンは、転移性の、皇丸および卵巣癌の併用化学療法に 非常に有用である。膀胱のならびに頭および首の腫瘍の処置の間の促進効果がま た報告されている。

シスプラチンの薬理学の論議に関しては、「治療学の薬理学的基礎」第６巻、グ ツドマンとギルマン編、　１９８０年。

第１２９８〜１２９９頁［”Ｔｈｅ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｂａ５ ｉｓ　ｏｆ　Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ”６ｔｈ　ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｇｏｏｄｍ ａｎ　ａｎｄ　Ｇｉｌｍａｎ、ｅｄｓ、、１９８０゜ｐｐ　１２９８−１２９９ ］）を参照のこと。

シスプラチンの結晶構造分析における研究は、これらの化合物のグアノシンおよ び類縁するイノシン誘導体（例えば、イノシン−５°−−リン酸）への強い結合 を示すものであった。（ルイとバー、　１９７７年、ジエイ。アメル、ケム。

’）シ、　９９　：　３８７４〜３８７６［Ｌｏｕｉｅ　ａｎｄ　Ｂａｕ、１９ ７７、Ｊ、Ａｍｅｒ、Ｃｈｅｍ。

Ｓｏｃ、９９：３８７４−３８７６１　；グツドゲームら、　１９７５．バイオ チム。

バイオフクズ。アクタ　３７８：１５３［Ｇｏｏｄｇａｍｅ　ｅｔ　ａｌ、、１ ９７５゜Ｂｉｏｃｈｉｍ、Ｂｉｏｐｈｉｓ、Ａｃｔａ　３７８；１５３］；バー ら、　１９７７年、ジエイ。

タリン、ヘマトル、オノコル、、ウッドレイ　メディカルブレチン７：５１［Ｂ ａｕ　ｅｔ　ａｌ、、１９７７、Ｊ、Ｃｌ１ｎ、Ｈｅｍａｔｏｌ、０ｎｃｏ１． 。

Ｗａｄｌｅｙ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｂｕｌｌｅｔｉｎ　７：５１］）。これゆえ、 シスプラチンの投与において観察される腎臓毒性および耳毒性に導かれる反応の 機構は、アミノグリコシド系抗生物質（第２゜１節を参照のこと。）に関するも のと同様のものであり、モしてアミノグリコシドを緩衝するのに有用なりガント は、シスプラチンを緩衝するのに用いられ得るであろう。

２．５．併合療法 抗微生物性剤の組合せが、感染の治療に関して広く論述されている。実際、いく つかの異なる薬剤を用いた併合療法は、多種の癌の治療に推奨されている。

しかしながら、ある治療学的薬剤での併合療法は、生体外で相乗効果をもたらす 薬剤が、使用する単一混合物中に生体外で形成できないために、複雑なものとな る。ゲンタマイシンとペニシリンの一種であるナフタジンとの治療学的に有効な 濃度での混合物は、溶液の外に沈澱した複合体の形成に終わり、そしてそれゆえ 、生体内にいっしょに投与することが不可能である。実際、ある薬剤の組合せは 、薬剤不適合性（すなわち、薬剤の不活性化または沈澱物の形成）ゆえに生体内 に使用することが推奨されていない。

例えば、以゛下の抗生物質は他の薬剤と混合することなく使用することが推奨さ れている；ゲンタマイシン、カナマイシン、リンコマイシン、セファ０−チン、 およびアンピシリン（ディビスと７ビツト、　１９７７年、ジャブマ　１７０（ ２）：２０４〜２０７［Ｄａｖｉｓ　ａｎｄ　Ａｂｂｉｔｔ、１９７７、ＪＡＶ ＨＡ　１７０（２）：２０７＞　、ざらに、あ、る薬剤は、化学的抑制（例えば 脂溶性化合物と水溶性化合物）ゆえに同−媒体中に可溶化できない。

ｙ−Ｒ皿■且ヌ 本発明は、生体内での薬剤の毒性を低減させる、種々のリガンドとの混合物とし てのある薬剤の調製物に関するものである。これらの薬剤が本明細書中において 述べるようにリガンドと組合せて投与された場合、薬剤の毒性は非常に低減され 、一方薬剤は治療学的活性を維持しているものである。本発明の方法によって毒 性効果が低減されるないしは「緩衝される」薬剤は、一般に脂質である内生的細 胞基質へ結合することを介して毒性副作用が仲介されるものを含むものである。

本明細書中で用いられる「リガンド」なる用語は、調製物において薬剤の毒性を 低減する化合物を含むものである。この用語は、このような化合物と薬剤との間 の相互作用または反応の種類を示すことを意味するものではない。

本明細書中において述べられる薬剤−リガント調製物の特に有用な利点は、薬剤 の高い投与量が、従来の薬剤調製物で観察されるよりもより低下された有害な毒 性効果で動物またはヒトへ投与され得ることである。これゆえ、維持量は、許容 血清値を達成するためにしばしば低く与えられる。通常の毒性効果なしに、高い 投与量の薬剤が投与され得るので、本発明の調製物は、薬剤の初回量の選択にお ける誤りのより広い余地が許されるものとなる。

本発明の調製物は、主なる医学的に関連した不利益の低減を伴ない、従来の薬剤 調製物の利点のすべてを有する全く新しい分類の治療学的組成物として見なされ 得るもので本発明は低減された毒性の薬剤調製物を含むものである。

薬剤−リガント調製物は、動物またはヒトに投与された際、調製物中の薬剤の毒 性が低減ないしは消去され、一方薬剤は治療学的活性は維持しているように、調 製される。

本発明の調製物において用いられるリガンドは、用いられた特定の薬剤および関 連する毒性受容体に依存する。一般に、本発明の実施において用いられる薬剤は 、哺乳類細胞に対する生体内毒性が、脂質毒性受容体へ結合することを介して仲 介される薬剤である。このような薬剤としては、いくつかを挙げると、モノアミ ノ化もしくはポリアミノ化薬剤、抗微生物性剤、抗ウイルス性剤、抗真菌性剤、 抗細菌性剤、アミノグリコシド、ポリエンおよびポリエンマクリド系抗生物質、 リンコサミドおよびポリミキシンなどが含まれる。

本発明によると、薬剤が結合する適当なリガンド（脂質または脂質ヘッド基）が 、投与の前に薬剤と混合される。

リガンドは、薬剤と毒性受容体の間゛の相互作用を阻止するために毒性受容体へ 結合すると考えられる。薬剤の１ノガンドとの組合せは、薬剤のその内生的毒性 受容体への結合を阻止ないしは低減し、これゆえ薬剤の毒性を低減ないしは消去 する。薬剤は、その治療学的効果を維持している。

４．１．７ミノグリコシドーリガンド調製物第２．１節において論議されたよう に、ホスファチジルイノシトール　ビスホスフェートは、生体内で７ミノグリコ シド系抗生物質に関する毒性受容体として働くと考えられている。本発明による と、アミノグリコシドは、アミノグリコシドの内生的毒性受容体への結合を阻止 ないしは低減するリガンドと混合される。本発明のアミノグリコシド調製物に有 用なリガンドは、ある種のリン酸エステル、リン酸無水物、スルファチド（セレ ブドシド硫酸エステル［ｓｕ　ｌ　ｆａｔ　１ｄｅｌ　）などが含まれるが、も ちろんこれらに限定されるわけではない。

本発明において使用され得るリガンドは、アミノグリコシド毒性を低減させるこ とにおいて等しい効果を有するものではない（上記第５．１節参照）。これらの リガンドのアミノグリコシド系抗生物質の毒性を低減させる能力は、２つの現象 が相関すると思われる。第１の現象は、双極子−双極子相互作用および続いて起 こる水素結合の強さの価によって、種々のりガントがアミノグリコシドと会合す ると思われる度合でおる。伸展的共鳴構造を示し、そしてこれゆえ電子非局在化 が容易に目視化されるリガンドが、アミノグリコシド毒性に対する最も大きな阻 止を与えると思われる。水素結合に関し、より低いポテンシャルを示すリガンド は中間の阻止を与えるのみである。ホスファチジルイノシトール　ビスホスフェ ート（推定の７ミノグリコシド毒性受容体）にあける負の電荷の配置は、正に帯 電されたアミノグリコシドに特異的三点結合を許すものである。

アミノグリコシドの電荷と関連する毒性との間に強い相関関係が存在する（シャ フト、　１９８３年、プロシーディングオブ　ザ　サーティーンス　インターナ ショナル　コンブレス　オブ　ケモセラピ−［５ｃｈａｃｔ、１９８３．Ｐｒｏ ｃｅｅｄｉｎｇｓ　ｏｆｔｈｅ　Ｔｌｒｔｅｅｎｔｈ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎ ａｌ　Ｃｏｎｇｒｅｓｓ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙｌ）が、いくつかの ７ミノグリコシドは、この電荷対毒性のパターンには一致せず、そしてこれゆえ 、水素結合によりホスファチジルイノシトール　ごスホスフェートへ結合するこ とで安定化される。これゆえ、最も効果的に毒性を低減するリガンドはホスファ チジルイノシトール　ビスホスフェートと同じ結合特性を有するものであると思 われる。

アミノグリコシド毒性を低減させる種々のリガンドの効能に関する第２の現象は 、これらのりガントのＣ−反応性タンパクを結合する能力の相関関係に関するも のでおる。

Ｃ−反応性タンパクは、種々の病理学的状態の間にヒトの血清中に現われる急性 期反応性タンパクの１種でおる。これは、カルシウムイオンの存在下において、 肺炎球菌性Ｃ−多糖体によってこのような血清中から沈澱される。ホスフォリル コリンおよびリソホスファチジルコリンはＣ−反応性タンパクに強く結合し、一 方、ホスフオリルエタノールアミンおよびグリセロールホスフォリルコリンは、 より低い強さで結合する（ボラナキスとカブラン、　１９７０年。

ブロク、ツク、エクスプ、パイオル、メト、１３６：６１２〜６１４［Ｖｏｌａ ｎａｋｉｓ　ａｎｄ　Ｋａｐｌａｎ、１９７０．Ｐｒｏｃ、Ｓｏｃ、ＥＸｐ、Ｂ ｉｏｌ、Ｈｅｄ、１３６：６１２−６１４］）、これと一致して、ホスフォリル コリンおよびリソホスファチジルコリンはアミノグリコシド毒性を低減すること において非常に効果的であり、一方ホスフォリルエタノールアミンおよびグリセ ロールホスフォリルコリンはより低く効果的である。これらのリガンドのＣ−反 応性タンパクを結合する能力と抗細菌性活性を維持したまま、アミノグリコシド 毒性を低減する能力との相関関係は説明不可能なものである。この相関関係は、 本発明の調製物において有用なりガントに関する候補を選択するための予報的手 段として有用でおるが、これは、本発明の調製物が観察された効果を及ぼす作用 の機構を必ずしも示すものではないということは理解されるべきである。

アミノグリコシド毒性を減じるために本発明において用いられるリガンドは、リ ソホスファチジルコリン、ホスフォリルコリン、トリポリホスフェート、ホスフ ォリルコリン、ホスフォグリセリン酸、イノシトールモノホスフェート、イノシ トール　ビスホスフェート、イノシトール　トリホスフェート、イノシトール　 テトラホスフェート、イノシトール　ペンタホスフェート、イノシトールヘキサ ホスフェート、およびホスフォリルイノシトール、すなわち、リン酸エステル類 およびリン酸無水物類が含まれるがもちろんこれらに限定されるわけではない。

この他、リポティコ酸類、ティコ酸類（肺炎球菌性および連鎖球菌性Ｃ−多糖体 を含む。）、スルファチド類、ヌクレオチド類、ステアリルアミン類、ジアシル グリセロール、アミノカプロン酸、ピリドキサールリン酸、コンドロイチン硫酸 、システィンＬｐ−７ミノフエニル　リン酸、ｐ−７ミノフエニル硫酸、ポリ− １−リジン、ポリ−１−フルギニン、ポリ−１−グルタミン酸、ポリ−１−アス パラギン酸およびその他の重合体性および単量体性アミノ酸類が毒性を効能的に 低減する。

ざらに、カルシオリビン、ホスファチジルイノシトールホスフェートおよびホス ファチジルイノシトールジホスフェートを含むホスファチジルイノシトールホス フェート類、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグ リセロール、ガラクトセレブドシドスルフェート、ホスファチジルイノシトール およびホスファチジン酸などのような、水中における過剰な濃度（これらの臨界 ミセル濃度以上）で自発的にリポソームを形成するリン脂質が、アミノグリコシ ド毒性を低減することもまた期待される。このようなアミノグリコシドを含有す るりボソームは、アミノグリコシドに遊離薬剤のしＤｌｏ（１０パーセント致死 量）ないしはＬＤ５Ｑ（致死量中間値）における安全性を与えるものである。例 えばマウスにおけるストレプトマイシンのＬＤ５ｏは７４１　ｍｙ／Ｋｙである （下記第４表参照）が、リポソーム中へのストレプトマイシンの被包は、急性毒 性が全く観察されることなく、この濃度のストレプトマイシンの投与をなさずも のでおる。

特定の実１Ｍ態様において、リン脂質であるホスファチジルイノシトール　ホス フェートおよびホスファチジルイノシトール　ビスホスフェートは、これらの臨 界ミセル濃度以上の濃度で使用された場合に、すなわちこれらのリン脂質のリポ ソーム中に被包されたアミノグリコシド系抗生物質で、特に有用である。上記し たように、これらのリン脂質は、アミノグリコシドの推定の毒性受容体であり、 そしてこれゆえに、本発明の調製物におけるリガンドとして、これらの臨界ミセ ル濃度以上あるいは以下（すなわち、リポソーム中おるいは溶液中）のいずれに おいても、特に望ましく使用される。

本発明の調製物は、高い初回濃度および／または維持抗生物質療法の高いレベル が要求される状態において使用され得るものである。これらはまた、患者に対す る初期毒性が考慮される腎臓の損なわれた患者においてもまた有用である。本発 明はまた、持続最小阻止血清濃度に関し、現在許容されている値よりもより高い 値で抗生物質の投与を可能とする。抗生物質のより高負荷の°投与量を投与する 能力の利点は、抗生物質のより高い維持値が可能となることである。本発明の技 術はまた、グラム陰性菌腸炎、乳腺炎、「家畜パスツレラ症［ｓｈｉｐｐｉｎｇ 　ｆｅｖｅｒｌＪ　、感染性角結膜炎、ビブリオ症、マイコバクテリア感染およ びプルセラ種感染などを含む（もちろんこれらに限定されるわけではない。）状 態に対する家畜病治療の療法においてもまた適用され得る。

本発明において利用され得るアミノグリコシド系抗生物質には、ストレプトマイ シン、ゲンタマイシン、トブラマイシン、アミカシン、カナマイシンおよびネオ マイシンなどが含まれるが、もちろんこれらに限定されるわけではない。

本発明によると、アミノグリコシド系抗生物質は、生体内的に生命体へ投与され る前にリガンドと混合される。殺菌水が望ましい希釈剤である。アミノグリコシ ド系抗生物質の性質に基づいて、調製物の非経口的投与が望ましい経路である。

アミノグリコシドとリガンドは、生体内に投与される直前に混合され得る。ある いはまた、７ミノグリコシドとりガントは、アミノグリコシドの安定性に依存し て、投与の１時間、２時間、あるいはそれ以上前に混合され得る。いずれの方法 を用いても、毒性は低減され、そして抗生物質は抗菌活性を維持している。結果 として、抗生物質の増加された投与量が、より大きな安全性を有して動物または ヒトに投与されることができる。毒性の衰滅の理由は、不明確なままであり、そ していくつかの機構がもつともらしく思える。おそらく、リガンドはアミノグリ コシドと複合体を形成し、これにより抗生物質のこれの推定の７ミノグリコシド 毒性受容体への生体内での結合を阻止するものであろう。アミノグリコシドとリ ガンドとの間の会合が双極子相互作用の力によって起こり、これらの間の水素結 合の配列となることもまた考えられる。生理学的ＤＨで、アミノグリコシドのグ アニジノ基は完全にプロトン付加され、そして共鳴によって安定化される。これ らの基は、リン酸基との水素結合相互作用に特に良好な配置である（例えば、乳 酸デヒドロゲナーゼのアルギニン１０１へのＮＡＤ”　（酸化型ニコチンアミド アデニンジヌクレオチド）の結合あるいは、ブドウ球菌性ヌクレアーゼのアルギ ニン３５および８７のグアニジンイオンへのチミジン−３°、５゛−ジホスフェ ートの結合などがある。）。グアニジノ基は、それぞれ最高５つまでの水素結合 を形成することができ、そしてリン酸基および例えばカルボニルなどのようなり Ａ接基と、同時的に相互作用することができる。あるいはまた、リガンドは推定 のアミノグリコシド毒性受容体それ自体に結合し、これによって抗生物質の結合 を阻止するのかもしれない。

４゜１．千、複合体形成の証拠 以下の観察とデータは、アミノグリコシドのみの場合よりもより低い毒性である アミングリコシド−リガンド複合体が形成されたことを示唆するものである。

（１）ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法等容量のマウス血清が、１サ ンプル当りＩｌＸ１０５ｃｐの　Ｉ−硫酸ゲンタマイシン（１２５Ｉ−ＧＳ）あ るいは１２５■−ゲンタマイシン−ホスフォリルコリン（１２５Ｉ−ＧＰＣ）（ １：３モル比）と０．５時間および２時間インキューベート（培養、［ｉ　ｎｃ ｕｂａｔｅｌ　）された。インキュベートされた血清サンプルのアリコツト（部 分標本、［ａｌ　１ｑｕｏｔｌ）および１２５■−ＧＳのアリコツトならびに１ ２５Ｉ−ＧＰＣのアリコツトは次に、ラエマリ［Ｌａｅｍｍａｌ　ｉｌ　（１９ ７０年、ネイチャー２２７：６８０［１９７０，Ｎａｔｕｒｅ　２２７：６８０ １）によって述べられるように、サンプルをβ−メＪレカプトブタノール（β− ＭＥ）、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）および尿素中において１〜２分間煮 沸することによって、ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳 動法（ＳＯ３−ＰＡＧＥ　）のために調製された。電気泳動の後、ゲルはクーマ ツシューブルー［Ｃｏｏｍａｓｓｉｅ−Ｂｌｕｅｌ　（Ｃ−Ｂｌｕｅ）で着色さ れ、そして−７０℃でＸ線フィルム（オートラジオグラム化［ａｕｔｏｒａｄ　 ｉｏｇｒａｐｈｅｄｌ　）に曝れた。１２Ｊ　ａｓとインキュベートされた血清 サンプルを表わすレーンおよび１２５１−ＧＰＳとインキュベートされた血清サ ンプルを表わすレーンにおいて、すべての清ポリペプチドバンドのいずれも放射 線活性標識化されていなかった。しかｌノながら１２５■−ＧＰＣとインキュベ ートされた血清サンプルを表わすレーンにおいて、低分子量バンド（すなわち血 清ポリペプチドの分子量よりも低い。）はＣ−Ｂｌｕｅで強烈に着色されており 、またこのバンドはオートラジオグラフィーによって測定されるように放射線活 性化されていた。この低分子量バンドは、　ｌ−Ｇ５とインキュベートされた血 清サンプルを表わすレーンにおいては、存在しないものであった。　Ｉ−ＧＳ（ 血清なし）を表わすレーンにおいては、オートラジオグラフィーによって何のバ ンドも検知できなかったが１２５１−ＧＰＳ（血清なし）を表わすレーンにおい ては、Ｃ−［３１ｕｅで着色された同様の低分子量の放射線活性標識化バンドが 検知された。

ホスフォリルコリンがＣ−［３１ｕｅで強烈に着色されるゆえに、このＣ−［３ １ｕｅで着色され、そしてまた放射線活性標識化された低分子量バンドは、推定 の１２５Ｉ−ゲンタマイシン−ホスフォリルコリン複合体を表わす。興味あるこ とには、この推定の複合体は、５ＤＳ−ＰＡＧＥのサンプル調製物において用い られた変性条件下においては解離しない。

（２）推定の複合体の解離 アミングリコシド−リガンド混合物が適当な「高温」溶液（高塩濃度は複合体の 形成を阻止するあるいはいくつかの複合体の解離を引起すものであることが示さ れてきている。）中で調製される、あるいは投与される場合、アミノグリコシド の毒性は低減されない。この観察に関する１つの説明としては０．６Ｍ酢酸アン モニウム中に、アミングリコシド−リガンド混合物を分散させると、アミノグリ コシドとりガントの間で形成された複合体が解離することが挙げられる。これを 支持するにおいて、スキャット、　１９７８年、ジエイ。リビド　レス、　１９ 　：　１６０３〜１６０７［５ｃｈａｃｈｔ。

１９７８、　Ｊ、Ｌｉｐｉｄ　Ｒｅｓ、１９：１６０３−１６０７］を参照する と、０．６Ｍ酢酸アンモニウムはカラム上に固定化されたネオマイシンに結合し たホスファチジルイノシトール　ホスフェートを溶出することが報告されている 。０．６Ｍ酢酸アンモニウム中に分散されたアミングリコシド−リガンド調製物 がマウスに皮下的に投与された場合、毒性は顕著に低減されるものではないらし い（第１表参照）。

（３）リガンドと７ミノグリコシドの分別投与リガンドが動物に対し、アミノグ リコシドが投与される前に投与された場合、アミノグリコシドの毒性は、ストレ プトマイシンとホスフォリルコリンの混合物が毒性を低減するのと同じ程度には 低減されない（第１表参照）。

第１表 り〃ノド接種後に投与された アミノグリコシド４ （接種後時間（分〉） アミノグリコシドの毒性にあける低減は、以下の理由により、アミノグリコシド とリガンドとの間の複合体の形成に関連するものと思われる。すなわち（１）ア ミノグリコシドとリガンドが酢酸アンモニウム（複合体を解離あるいは複合体の 形成を阻止するとして公知の濃度で）中で投与された場合、薬剤毒性が顕著に低 減されるものではないこと、および（２）リガンドの後に薬剤を投与する分別投 与はストレプトマイシンの毒性の低減に効果がなかったことである。

しかしながら本発明は、アミノグリコシドとリガンドの間の相互作用のこの理論 に何ら限定されるものではない。観察された毒性における低減に関する他の潜在 的説明は、上記に論議されている。

４．２．ポリエンおよびポリエンマクロリド系抗生物質−リガント調製物 第２，２節において述べたように、ポリエンおよびポリエンマクロリド系抗生物 質は、推定の毒性受容体でおるコレステロールに結合することによってヒトおよ び動物においてその毒性効果を及ぼすものと考えられている。これゆえ、例えば アンフォテリシンＢのようなポリエンおよびポリエンマクロリド系抗生物質の哺 乳動物における毒性を低減するに適したりガントは、内生的コレステロールへの 結合を阻止するものである。このようなリガンドは、ステロール類およびその水 溶性誘導体類を含むものでめり、そして特に、コレステロールおよび例えば、ポ リエチレングリコール−コレステロール（ＰＥＧ−コレステロール）、コレステ ロール　ヘミナクシネート（ＣＨ３）などのようなその水溶性誘導体類が望まし い。水溶性コレステロール誘導体は、透明な溶液が注射に極めて望ましいもので あるゆえに、特に有用なものである。

形成に用いられる濃度以下の濃度で調製され得そしてこれゆえリポソームのない ものである。リポソームが存在しないゆえ、調製物の安定性に関しては何の困難 性もない。さらに、コレステロール含有リポソームの投与は、主に肝臓と牌臓中 へのリポソームの堆積という、望ましくない結果に終わる。さらに、循環を妨害 ないしは低減する特別の調製物を投与することについて何ら考慮する必要がない 。これゆえ水溶性コレステロールまたはコレステロール誘導体と混合されたポリ エンまたはポリエンマクロリド系抗生物質の効果的な調製物は、リポソームが存 在しないと一層に、薬剤の毒性を低減することにおいて極めて効果的でおる。

ポリエン系抗生物質であるアンフオテリシンＢは、水に不溶であり、そして注射 に関しては、これもまた毒性を有するものであるデオキコール酸ナトリウムに可 溶化され市販されている（ファンギゾン、イー、アール。スクイブアンド　サン ズ、プリンストン、ニューシャーシー州［Ｆｕｎａ　ｉ　ｚｏｎｅ　、　Ｅ、　 Ｒ，Ｓｑｕ　ｉ　ｂｂ＆５ｏｎｓ、　Ｐｒ　ｉ　ｎ５ｔｏｎ、　Ｎｅｗ　Ｊｅｒ ｓｅｙｌ　）。

従って、市販の薬理学的薬剤の２つの毒性成分ゆえ、ファンギゾンないしはアン フオテリシンＢ−デオキコール酸塩（アンフオテリシンＢ−ＤＯＣ）の治療学的 投与量は低く保たれるべきである。以下の実施例において見られるように、アン フオテリシンＢの毒性および可溶化における低減の双方が、アンフオテリシンＢ を水溶性コレステロール調製物中で可溶化することによって達せられる。アンフ ォテリシンＢ投与の毒性の低減は、（１）可溶化剤として非毒性の水溶性コレス テロールが使用されるため、毒性のデオキコール酸塩の体内への導入が消去され る、および（２）アンフォテリシンＢへ添加された際、水溶性コレステロールは 、薬剤における脂質結合部位その位置に対する親和性を封鎖し、これゆえ毒性経 路が封鎖されるという２つの方法によって得られる。

４．２．１．複合体形成の証拠 第４．１節において示したように、ポリエンまたはポリエンマクロリド系抗生物 質が本発明のリガンドの組合されて投与された際に見られる毒性の衰滅に関する 理由は、今だ明らかなものとされていない。１つの可能性は、リガンドがポリエ ン系抗生物質と複合体を形成し、これによって薬剤のその推定の毒性受容体への 結合を阻止するということである。

以下の観察とデータは、このような複合体が、アンフォテリシンＢとリガンドで あるＰＥＧ−コレステロールとの間で形成されるものであることを示唆するもの である。

段洸」ｌ光学的分析 水中のアンフオテリシンＢの吸光度スペクトルは、以下の波長、すなわち３８６ ｎｍ、　４０７ｎｍ、　４１８ｎｍでの３つのピークを示す。フ７ンギゾンが水 性溶液中でＰＥＧ−コレステロールと混合された場合、４０７ｎｍのピークが消 失する。約４０７　ｎｍでの吸収ピークの不存在は、アンフォテリシンＢ−コレ ステロール複合体形成の証拠である。しかしながらメタノール中のファンギゾン およびメタノール中のＰＥＧ−コレステロールと混合されたファンギゾンの吸光 度スペクトルは、全く同一であった。このことは、メタノール中では複合体が形 成されないことを示している（詳細については第７節参照のこと。）。

４．３．ア゛リアマイシンーリガンド調製物アドリアマイシンの心臓毒性は、薬 剤のカルシオリピンあるいはカルシオリピンヘッド基への結合によって仲介され るものであると思われる（第２．３節参照）。従って、本発明のこれらの調製物 は、アドリアマイシンの内生的カルシオリピンへの結合を遮断するりガントと混 合して、アドリアマイシンを利用する。このようなリガンドとしては、カルシオ リピンまたはカルシオリピンヘッド基が含まれる。

第４．２節のポリエンおよびポリエンマクロリド−リガンド調製物の場合と同様 に、本発明のこの調製物はリポソームを含まない。それゆえリポソーム投与の欠 点はいずれも、本発明のこの調製物と出くわすことはない。

４．４．シスプラチンーリ・ガント調製物シスプラチンの腎ｗｉ毒性および再考 性は、７ミノグリコシド系抗生物質のものと同様な様式において仲介されると思 われる（第２．４節参照）。従って、ホスファチジルイノシトール　ビスホスフ ェートへのシスプラチンの結合を阻止する任意のりガントが、シスプラチンの毒 性を緩衝するのに適したものである。

５、　施例：ストレプトマイシン調製物以下の実施例において表わされるデータ は、アミングリコシド−リガンド調製物として投与された際の、抗菌活性を維持 したアミノグリコシド系抗生物質の毒性の低減を示すものである。

５．１．ストレプトマイシン−リガンド調製物の低減された毒性 以下のデータ（第２表に示される）は、マウスに皮下投与されたストレプトマイ シンの急性毒性を、種々のリガンドと組合せて投与されたストレプトマイシンの ものと比較するものである。

それぞれの試みにおいて、硫酸ストレプトマイシン２００ｍ’ｊと以下のリガン ドの１つが、蒸留水中に溶解され（最終容量５−）、ストレプトマイシンのりガ ントに対するモル比が１＝３または１：１とされた二卵すソホスフ？チジルコリ ン　２６０ｍｇ（１：３）、卵リソホスファチジルコリン　８７ｍｇ（１：１＞ 　、ホスフォリルコリン　１２９ｍｇ（１：３）イノシトール　へキサホスフェ ート　１１０ｍｙ（１：１）、トリポリホスフェート　８０／／１ｇ（１：１） 　、ホスフオリルエタノールアミン　７１　ｍ＃（１：３）　、コリンクロリド 　７０ｍｇ（１：３）　、ホスフォリルコリン　９３ｍ！？（１：３）　、イノ シン−５゛−−リン酸　１９６Ｊｎ！？（１：３＞　、ホスフォグリセリン酸１ １５ｍ１（１：３）またはイノシトール　モノホスフェート７６．５／１ｆｆ（ １：１）。これらの溶液は少なくとも１時間混合された。溶解した際、溶液の０ ．６ｄアリコツトが、体重Ｉ　Ｋｇ当り１０１００Ｏのストレプトマイシンの投 与量を配給するためにマウス（平均体重２４９〉中へ皮下投与された。

第２表の結果は、卵すソホスフ？チジルコリン、ホスフォリルコリンおよびイノ シトール　ヘキサホスフェートが、ストレプトマイシンの毒性を低減するのに非 常に効果的であったことを明らかに示すものである。第２表における残りのりガ ントは、アミノグリコシド毒性を低減することにあけるそれらの効果において相 違するものであった。

週１２Ｊく 種々のリガンドを有してまたは有しないで投与されたストレプトマイシンの急性 毒性の比較１坦口■乙追種監パーセント ５゜２．ストレプトマイシン−ホスフォリルコリン調製物の抗菌活性 以下の実験は、ストレプトマイシンを皮下接種されたマウスからの血清の抗菌活 性を、ストレプトマイシン−ホスフォリルコリン調製物を接種されたマウスから の血清のそれと比較するものである。結果は、ストレプトマイシンの毒性が、抗 菌活性を維持しつつ（第３表参照）、低減され得る（第２表参照）のものである ことを示している。

成体スイスウェブスターマウスが、１８．３ｍｇ／ｄの濃度のストレプトマイシ ン０．６ｍ　（４００ｍｙ／Ｋｌ　（体重））あるいはホスフォリルコリン−ス トレプトマイシン調製物０．６ｄ（上記量の抗生物質およびホスフォリルコリン １１　、５ｍｇ／ｍｌ、すなわ゛ち２５５ｍｇ／に’Ｊ　（体重））のいずれか を皮下接種された。接種後２，４．６．８．５および１９時間で、それぞれのグ ループの３匹のマウスがエーテルで麻酔をかけられそして、ヘパリン加キャピラ リーピペットを用いて眼窩後面液がそれぞれ集められた。最後の出血の後に、血 液は細胞から血清を分離するために遠心分離にかけられた。血清の抗菌活性は以 下のようにして９６−ウェル（くぼみ、［ｗｅｌｌ］）、Ｕ型ミクロプレートに おいて測定された。

それぞれの血清サンプル（５０μ、Ｉりが、トリプトースホスフェート　ブロス （肉汁、［ｂｒｏｔｈｌ　）　５０μｇと混合された。これらは、ミクロプレー ト　ウェルにおいて連続的に希釈された（５０μρアリコツトがブロス５０μｐ 中へ連続的に希釈された。）。次にスタフィロコッカス・アウレウス［５ｔａｐ ｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓｌ（ＡＴＴＣＮｏ、１４１５４）の１０３ 集落形成単位を含むブロス５０μρがそれぞれのウェルに添加され、そしてミク ロプレートは３７℃で１晩インキユベートされた。滴定の端点は、ミクロ−ウェ ル培地におけるスタフィロコッカス・アウレウスの成長が、抗生物質を受けなか った比較対照培地と比較して約５０％阻止されたことによって示された。

結果（第３表）は、抗生物質接種後の異なる時間間隔で得られたマウス血清の抗 菌活性は、ストレプトマイシンが単独で投与されたかあるいはホスフォリルコリ ンと組合せて投与されたかに関係なく同様であった。それゆえ、抗生物質は抗菌 活性を維持しているものでおる。

第３表 ストレプトマイシン−ホスフォリルコリン調製物を皮下接種されたマ　スからの 血清の抗菌活性 ２　２、２．２ ２、２．２ ４　４．４，４　４，４，４ ６　８．８．８　８，８．８〜１６ １、本文中に述べられる本微量検定法における終点希釈の逆数。

６、実施例二種々の７ミノグリコシド系抗生物質−ホスフォリルコリン調製物の 低減された毒性以下のデータは、リガンドと共におよびリガンドなしに投与され た種々のアミノグリコシド系抗生物質のＬＤ５ｏを比較するものである。

アミノグリコシド調製物のしＤ５ｏを測定するために、ある量の抗生物質が、抗 生物質のリガンドに対する最終モル比１：３を達するように、ホスフォリルコリ ンと共にまたはホスフォコリンなしで蒸留水２Ｏｄ中に溶解された。次に、アミ ノグリコシド調製物の一連の希釈物の０．６ｄアリコツトがスイスウェブスター マウス中へ皮下注射された（１グループ当り１０匹、平均体重２３ｇ）。２４時 間後、それぞれのグループの生存体の数が測定され、そして量的データに関する スピーマンーカーバー法［ｔｈｅ　ｓｐｅａｒｍａｎ−Ｋａｒｂｅｒ　Ｍｅｔｈ ｏｄ　ｆｏｒ　Ｑｕａｎｔａｌ　ｎａｔａｌ（フィネー、　１９５２年、ステー ティスカル　メソッド　イン　バイオロジカル　アッセイ、ハフナー　バブリッ シュ　カンパニー、ニューヨーク州から［ｆｒｏｍ　Ｆｉｎｎｅｙ、１９５２， ５ｔａｔｉｓｔｉｃａｌ　Ｍｅｔｈｏｄ　ｉｎＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ａｓ５ａ ｙ、Ｈａｆｎｅｒ　Ｐｕｂ、Ｃｏ、Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋｌ）によってそれぞれのし Ｄ５ｏおよび９５％信頼限界が算出された。結果は第４表に示される。

第４表の結果は、リガンドと共に投与されたそれぞれの抗生物質のしＤ５ｏが単 一で投与された同じ抗生物質のＬＤ５ｏよりも大きいことを明確に示すものであ る。

週１４Ｊ！ ホスフォリルコリンを有しておよび有しないで投与されたアミノグリコシド系抗 生物質のＬＤ ストレプトマイシン　７４１　６１６〜８９１　−−ストレプトマイシン＋ホス 　２１２３　１７５３〜２５７０　１：２．９フオリルコリン（１：３） ゲンタマイシン　６９２　６０２〜７９４　−−ゲンタマイシン＋ホス　１２０ ２　９５９〜１５０６　１：１．７フオリルコリン（１：３） ネオマイシン　３７１　３０１〜４５７　−一ネオマイシン＋ホス　９１２　７ ５８〜１０９６　１：２．５フオリルコリン（１：３） １、スイスウェブスターマウスにおけるアミノグリコシド調製物の皮下投与の説 明に関しては本文参照のこと。

３、それぞれのグループにおいて、１０匹が接種を受けた。

７、実圧例：アンフオテリシンＢ調製物以下の分節は、ポリエンマクロ１ノド系 抗生物質の１つであるアンフォテリシン１３（ＡｍＢ）とＰＥＧ−コレステロー ルの間の複合体（分光測光学的データにより証明された。）の調製および形成を 述べるものである。この複合体は生体内で安定を維持すると思われる。ざらにま た、この複合体は、細胞にあける低減された毒性効果を生体外でおよび生体内に 用いられた場合にも有する。

７．１８種々の溶媒中におけるアンフォテリシンＢのＰＥＧ−コレステロールと の相互作用アンノオテリシンＢは水性溶液中に不溶であるので、アンフォテリシ ンＢを可溶化するためにジメチルスルフォオキシド（ＯＨＳＯ）が用いられる。

可溶化アンフオテリシンＢへのＰＥＧ−コレステロールの添加は、アンフオテリ シンＢとＰＥＧ−コレスチールとの間の複合体の形成をもたらす。

しノかしながらヒトにおいて体内使用が認められていないＤＭＳＯは、回転蒸発 によって除去することは不可能である。それゆえ、除去の代換手段が使用される 必要がめる。

該調製物にメタノールが添加された場合、メタノールはＤＭＳＯと容易に除去可 能な共沸混合物を形成する。

ＰＥＧ−コレステロールがメタノールと同時的に添加された場合、最高の複合体 形成が達成される。

調製物１：アンフォテリシンＢ　（ＡｍＢ）２５ｍｙがＤＭＳＯ２゜０ｍｌ中に 溶解された。次にＰＥＧ−コレステロール３０ｍｇおよびメタノール　２３ｍ１ がこの溶解されたアンフオテリシンＢへ添加された。やがて沈澱物が形成され、 そしてこれは１０．０００ｘｇで１０分間遠心分離することにより除去された。

得られた上澄み液は、５５°〜６０°Ｃで乾燥するまで回転蒸発された。残留す るフィルムは蒸留水１０ｄ中に懸濁され、そして透明となるまで８波処理された 。この調製物は、ＡｍＢ（２５）／ＰＥＧ−Ｃｈｏｌ　と呼称された。

調製物２：ＰＥＧ−コレステロール　１５０ｍｙを使用した以外は調製物１と全 く同様にして、調製物２は調製された。この調製物は、ＡｍＢ　（１５０）／Ｐ 　Ｅ　Ｇ＝　Ｃｈｏｌ−２ト呼称された。

３５０〜５５０ｎｍの波長での吸光度スペクトルが、以下の溶液、すなわち（１ ）メタノール中あるいは水中のフ７ンギゾン（アンフォテリシンＢの親液性化粉 末およびデオキコール酸からなる市販に得られる調製物）、および（２）水中あ るいはメタノール中のＡｍＢ　（２５）／　Ｐ　Ｅ　Ｇ　−ＣｈｏｌおよびＡｍ Ｂ（ｔ５０）／ＰＥＧ−Ｃｈｏｌに関して得られた。水中のファンギゾンに関し 得られたスペクトルは約３８６　ｎｍ。

約４０７　ｎｍおよび約４１７ｎｍでのピークからなっていた。

水中の双方のＡｍＢ／ＰＥＧ−Ｃｂｏｌ調製物に関して得られたスペクトルは、 約３８７ｎｍおよび約４１７ｎｍでのピークからなっており、このスペクトルに おける約４０７　ｎｍでの吸収ピークの不存在は、アンフォテリシンＢとＰＥＧ −コレステロールとの間の相互作用めるいは複合体の形成の証拠となるものであ る。このことは、メタノール中のフ７ンギゾンおよびメタノール中のＡｍＢ／　 Ｐ　Ｅ　Ｇ　−Ｃｈｏｌに関して得られたスペクトルが全く同一であるという事 実によってさらに支持されるものである。全く同一のスペクトルは、メタノール 中においては、アンフォテリシンＢがＰＥＧ−コレステロールと複合体を形成し ないことを示すものである。

７．２．アンフオテリシンＢ／ＰＥＧ−コレステロールの安定性　 ＡｍＢ　５ｄのサンプルがＤＭＳＯＯ，！Ｍ中に溶解された。これに、ＰＥＧ− コレステロール　１０ｍｇおよびメタノール　３．０ｄが添加された。この溶液 は、１２．１１００Ｘで１０分間遠心分離され、少量の綿状沈澱が除去され、乾 燥するまで回転蒸発され、約ｐＨ７，０に調整された蒸留水１０ｄに再懸濁され 、そして透明となるまで音波処理された。得られたＡｍｐ／ＰＥＧ−コレステロ ールを含む透明な溶液は、２つの等量アリコツト（八とＢ）に別けられた。

以下の実験は、ＰＥＧ−コレステロールの除去は、複合体の安定性を欠くことに つながることを示すものである。

アリコツトＡにＣＨＣｌ３が滴下的に添加された。ＣＨＣｌ３はＰＥＧ−コレス テロールを溶解ないしは抽出するように働き、結果として水性相中にアンフォテ リシンＢの沈澱物が生成した。ＤＭＳＯは沈澱物に対して滴下的に添加される際 、水性相中のアンフォテリシンＢを溶解するものであった。

ＡｍＥ３／ｐＥＱ−コレステロール複合体を生体内に使用するためには、複合体 を水性環境において可溶なものとして維持することが重要である。水性環境にお いてアンフォテリシンＢの沈澱物が発生しないことを保証するために、アリコツ トＢは重量オスモル濃度において血漿と同じである５％ブドウ糖溶液中へ滴下的 に添加された。沈澱物は得られなかった。

比較のために、ＤＭＳＯ中に溶解されたアンフォテリシンＢが５％ブドウ糖溶液 へ添加された。急速な沈澱物形成がなされた。それゆえ、ＤＭＳＯは、アンフォ テリシンＢを可溶化するが、ＤＭＳＯ−可溶化アンフオテリシンＢは血漿の外に 沈澱するで必ろうゆえ、このような溶液は生体内で使用することはできない。

７．３．アンフオテリシンＢ−リガンド調製物の低減された毒性 アンフオテリシンＢ調製物の毒性がマウスにおいて評価された。

７．３．１．ＰＥＧ−コレステロールの毒性それぞれ２７ｇの重さの６匹の雄の スイスフェブスターマウスがＰＥＧ−コレステロール　４００ｍｇ／に９の単回 静脈内注射を受けた。目視的観察の１力月の期間にわたって、マウスによる毒性 の明白な徴候はみられらなかった。

７．．３．２．アンフｔテリシンＢとアンフォテリシンＢ／ＰＥＧ−コレステロ ールとの毒性の比較フ１ンギゾンの溶液およびＡｍｐ／ＰＥＧ−コレステロール の溶液が、０．６２５ｒｒ１ｇ／ｍ　〜１．２５ｍｙ／ｍｆ！の範これらの調製 物は、雄のスイスウェブスターマウス（平均体重的３５３）に静脈内接種〈約０ ．２ｍｌの注射）された。動物は生存性に関して観察された。ファンギゾンに関 するおよびＡｍＢ／ＰＥＧ−コレステロール調製物に関するＬＤ５ｏを測定する ために死亡率パーセントが投与量の対数に対してプロットされた。フ７ンギゾン のしＤ５０は３．８Ｊｆｆ９／Ｋｌであり、一方ＡｍＢ／ＰＥＧ−コレステロー ルのＬＤ５゜は１０．０１１１ｇ／に９であった。それゆえ、ＡｍＢ／ＰＥＧ− コレステロール調製物はファンギゾンより低い毒性を示すものである。実際、フ ７ンギゾンと比較した場合、アンフオテリシンＢの有効服用量は、アンフォテリ シンＢがＰＥＧ−コレステロールと共に投与された場合に約２．５倍増加させ得 るものであった。

７゜３，３゜マウスにあける種々のアンフォテリシンＢ調製　の毒性 マウスにおける種々のアンフォテリシンＢの毒性を測定するため、以下の溶液が 蒸留水中で調製され、そしてマウスに静脈内投与された。

（１）Ａｍ８　７ｍ！Ｊ／ｒｄにＰＥＧ−：ｌレステロ−／Ｌ／　（ＰＥＧ−Ｃ ｈｏｌ）　５０ｍ９／ｍｌｌをカロえたもの、（２）ＡｍＢ　７＃ｊ／ｍｌにデ オキコール酸塩（ＤＯＣ）　７ｍ！ｊ／ｄを加えたもの、 （３）Ａｍ８　７ｚｇ／ｍｃＤＯｃ　７ｍｙ／ｍｌおよびＰＥＧ−Ｃｈｏｌ　９ ｍｇ／ｒｄ！を加えたもの、ならびに（４）　ＤＯｏ　７ｍｇ／ｍｌ。

それぞれの溶液は、雌の成体スイスウェブスターマウス（１グル一プ４匹、体重 ２３ｇ）の尾静脈中へ接種された。

動物は、アンフオテリシンＢの沈澱とこれに続く血管の閉塞を引起す複合体の崩 壊を示すものである青色の尾の発現に関して観察された。

処置の結果は第５表に示される。

第５表 各グループ４匹のマウス １　ＡｍＢ＋ＰＥＧ−Ｃｈｏｌ　−−−−２ＡｍＢ＋ＤＯＣ＋　十　＋　十 ３　ＡｍＢ＋ＤＯＣ＋ＰＥＧ−Ｃｈｏｌ　−−−＋４ＤＯＣ−−−＊ １　「＋」は尾の全長にわたる変色を有する１匹のマウスを表わす。

「−」は尾の変色がなかった１匹のマウスを表わす。

「＊」は尾の先端に限られた変色を有する１匹のマウスを表わす。

マウスにおける青色の尾の発現は、尾の動脈を閉塞する沈澱した物質の証拠であ る。これゆえ、グル、−７１において、尾における青色の全くなかったことは、 アンフォテリシンＢとＰＥＧ−コレステロールの溶液は安定な複合体、すなわち 血清の外に沈澱することのない複合体を形成することを示すものである。グルー プ２に関してのすべてのマウスにあける青色の尾は、アンフォテリシンＢとデオ キコール酸塩の溶液が血清の外に沈澱し、尾動脈を閉塞することを示すものであ る。グループ３における青色の尾のより低い範囲は、ＰＥＧ−コレステロールが ＡｍＢ−ＤＯＣ溶液の沈澱の量を低下させることを示すものであるａ最後に、デ オキコール酸塩それ自身だけで〈グループ４に関し示されるように）、限定的青 色尾効果に感応し得るものである。

これゆえ、第５表における結果は、毒性の機構が、尾における低親和性毒性受容 体に本来的に結合することを介して仲介されうろこと、およびこの毒性は、薬剤 のその毒性受容体との生体外的な前培養［ｐｒｅｉｎｃｕｂａ；ｉｏｎ］によっ て衰滅されうろことを示すことに役立つものである。

７．３．４．細胞培地におけるアンプォテリシンＢ調製物の低減された毒性 アンフォテリシンＢの５つの調製物が、Ｉｔｕａ成長にそれぞれの調製物がもた らす効果を測定するために研究された。

調製物は、以下の通りであった。

１）ＡｍＢ／ＰＥＧ−Ｃｈｏｌ　（１：３．９）、（１：３．９比のアンフォテ リシンＢ　；　ＰＥＧ−コレステロール）、２）ＡｍＢ／ＰＥＧ−Ｃｈｏｌ　（ １：１４）、（１：１４比（７）７ンフオテリシンＢ：ＰＥＧ−コレステロール ）、３）ＡｍＢにＤＯＣを加えたもの（）１ンギゾン）、４）ＰＥＧ−コレステ ロール、 ５）ＤＯＣ。

カンジダ・アルビカンス［Ｃ，ａｌｂｉｃａｎｓ］に関するアンフオテリシンＢ 調製物の最小阻止濃度（）１．１．ｃ）は、以下のようにして測定された。５つ の調製物のそれぞれが、９６−丸底ウェル　プレートにおいて、１つのウェル当 りミコプロス（Ｍｉｃｏ−ｂｒｏｔｈ）　５０　ＩＩ　ｆＪにおける薬剤の１／ ２級希釈およびそれぞれの希釈板に関し、３つのウェルという処方を用いて、連 続的に希釈された。希釈が完了した後、それぞれのウェルはカンジダ・アルビカ ンスの１０３細胞を含むブロス５０μｍを受けた。該プレートは、３５°Ｃで湿 潤化雰囲気中において１晩インキユベートされた。Ｍ、Ｉ。

Ｃ６の端点は、薬剤を含まず、そしてそれゆえ１００％成長を示す比較対照ウェ ルとの比較において、５０％成長阻止を示す薬剤の最大希釈として測定された。

Ｌ細胞に関する細胞毒性がまた９６−フラット　ウェルプレートにおいて測定さ れた。薬剤は、１０％胎児ウシ血清を含有するイーグルス　ミニマム　エッセン シャルメデイウム［Ｅａｇｌｅ’ｓ　Ｍｉｎｉｍｕｍ　Ｅｓ５ｅｎｔｉａｌ　Ｈ ｅｄｉｕｍｌ（ＭＥＮ）５０μＭ中に連続的に希釈された（１７２級希釈）。次 にそれぞれのウェルは、３Ｘ１０５Ｌ細胞／ｍ！媒体の懸濁液からの５０μＭア リコツトを受けた。３７°Ｃで空気中に５％ＣＯ２を含む湿潤化雰囲気において ７２時間インキュベートされた後に、Ｌ細胞単一層は５％ホルムアルデヒドで固 定され、５％ホルムアルデヒド中の０．０２％クリスタルバイオレットで染色さ れた。端点は、比較対照ウェル培地（薬剤なし、１００％成長）と比較して５０ ％成長阻止を示す薬剤の最大希釈として測定された。これらの実験の結果を第６ 表に示す。

第６表 アンフォテリシンＢの異なる調製物による細胞成長の阻止（１）　ＡｍＢ：ＰＥ Ｇ−Ｃｈｏｌ　（１：３．９）　０．２　１６６、６（２）　ＡｍＢ：ＰＥＧ− Ｃｈｏｌ（１：１４）　０．２　１６６．０（３）　ＡｍＢ＋ＤＯＣ（）７ンギ ゾン”）　０．４　６２．５（４）　ＰＥＧ−：ｌレステ０−ル２５．ＯＯＯ＋ 　５００．０＋（５）　ＤＯＣ５，ＯＯＯ＋　２５０．０第６表の結果は、Ａｍ Ｂ／ＰＥＧ・−コレステロール調製物に関するＭＩＣは、フ７ンギゾンに関する ＭＩＣよりも約２．７倍大きいものである、すなわち、フ１ンギゾンは、ＡｍＢ ／ＰＥＧ−コレステロールよりもより低い濃度で細胞成長を阻止することを示し ている。それゆえにＡｍＢ／ＰＥＧ−コレステロール調製物はフ１ンギゾンより 低い細胞毒性を示すものでおる。

プラスチックのべ１〜り皿（直径３５＃）は、アンフォテリシンＢ調製物群のい ずれか１つを含む、１０％胎児ウシ血清を加えたＭＥＭ２ｄにおいてベトリ皿１ 個当り５０のＬ−細胞で接種された（７ンフオテリシンＢ調製物１つ当り２つの ペトリ皿）。ペトリ皿は１０日間インキュベートされ、そしてクローン化培地は 、上記に述べるようにしてクリスタル　バイオレットで染色された。結果は第７ 表に示される。

第７表 り細胞のクローン化能におけるＡｍＢ調製物の効果ＡｍＢ／ＰＥＧ−Ｃｈｏｌ（ １：３．９）　７５　７８．５　１．８　７２ＡｍＢ／ＰＥＧ−ＣｈＯｌ（１： １４）　ｅｅ　６Ｂ、８　１．８　７２Ａ都＋ＯＯＣ（）１ンギゾン＞　５３　 ５５．２　１．５　６０ＤＯＣ６８７０，８２，３９２ ＰＥＧ−Ｃｈｏｌ　８３　ＢＢ、５　２．５　１００第７表の結果は、またＡｍ Ｂ／ＰＥＧ−コレステロール調製物が７１ンギゾンよりも低い細胞毒性であるこ とを確かとするものであった。

７．３．５．アンフォテリシンＢ調製物の溶血特性の比較市販のフ７ンギゾン調 製物は、赤血球細胞の顕著な溶解を引起こし、一方、本発明のアンフォテリシン Ｂ／ＰＥＧ−コレステロール調製物は、引起さない。この特性は、アンフオテリ シンＢ／ＰＥＧ−コレステロール調製物を、生体内での使用により適したものと するものである。この実験の詳細は以下に述べられる。

２％新鮮赤血球の最終懸濁液の等量アリコツトが、フ７ンギゾン（すなわち、ア ンフォテリシンＢとデオキコール酸塩）、アンフオテリシンＢ／ＰＥＧ−コレス テロール（前述するようにして調製された）、ＰＥＧ−コレステロールまたはデ オキコール酸塩のＣａ　＋＋およびＭｇ”を有しないリン酸Ｍ衝食塩水中の連続 希釈物と混合され、該混合物は、３７℃で２０時間インキュベートされ、その後 、細胞が遠心分離によってペレット化され、そして上澄液中の放出ヘモグロビン が光学濃度５５０ｎｍ　（００５５０１ｍ　）で分光測光学的に測定された。結 果は第８表に表わされる。

第８表の結果は、ＡｍＢ／ＰＥＧ−コレステロール調製物がフ７ンギゾン調製物 としての等濃度のアンフォテリシンＢよりも低い溶血性であることを明確に示す ものである。

第８表 アンフオテリシンＢの異なる調製物の溶血効果ｏ　ｏ、ｏｏ　ｏ、ｏｏ　ｏ、ｏ ｏ　ｏ、ｏ。

１　０．２５　０．０３　０．０３　０．０３２　０．８８　０．０５　０．０ ３　０．０３２．５　０．２８　０．０６　０．０３　０．０３１５　１．５＋ 　０．２４　０．０３　０．０３３０　１．５＋　０．４４　０．０３　０．０ ３６０　ｉ、ｓ＋　０．９０　０．０６　０．０３１２５　１．５＋　１．１６ 　０．２３　０．０３２５０　１．５＋　１．３８　０．４７　０．０３１、濃 度は、調製物中にＡｍＢが存在する場合は、ＡｍＢの濃度に関するものである（ すなわち、ＡｍＢ／ＤＯＣおよびＡｍＢ／ＰＥＧ−Ｃｈｏ　ｌ調製物）。アンフ ォテリシンＢを含まない調製物の濃度（すなわち、ＤＯＣおよびＰＥＧ−Ｃｈｏ ｌ　）は等価のＰＥＧ−コレステロールまたはデオキコール酸塩の濃度に関する ものである。

手続ネ甫正書（方式） ％式％ １、事件の表示 ＰＣＴ／ＵＳ８４１００８５５ ２、発明の名称 低減された毒性の薬剤調製物 ３、補正をする者 事件との関係　特許出願人 住　所　アメリカ合衆国　ニューシャーシー州　０８５４０プリンストン　プリ ンストン　フォレスタルセンター、４、代理人 ６、補正の対象 ７、補正の内容 （１）別紙添付の特許法第１８４条の５第１項の規定による書面の国際調査報告 ＰＣＴ／ＵＳ８４１００８５５ 一一一−４−−−１１ａ、　ＰＣＴ／υ５８＋１１００８５５

Claims (95)

【特許請求の範囲】
1. １．（ａ）毒性受容体と結合することによりヒトまたは動物において毒性効果を 示す薬理学的に活性な治療薬剤と、（ｂ）上記薬剤にその薬理学的活性を維持さ せつつ、薬剤の生体内での［ｉｎ　ｖｉｖｏ］毒性受容体への結合を阻止し得る リガンドとの混合物からなる低減された毒性の薬剤調製物。
2. ２．混合物が溶液である請求の範囲第１項に記載の薬剤調製物。
3. ３．リガンドが脂質または脂質ヘッド［ｈｅａｄ］基である請求の範囲第１項に 記載の薬剤調製物。
4. ４．毒性受容体がホスファチジルイノシトールビスホスフェートである請求の範 囲第３項に記載の薬剤調製物。
5. ５．薬理学的に活性な治療薬剤が親脂質性である請求の範囲第１項に記載の薬剤 調製物。
6. ６．リガンドが水溶性ステロール成分［ｍｏｉｅｔｙ］である請求の範囲第５項 に記載の薬剤調製物。
7. ７．水溶性ステロール成分がポリエチレングリコールーコレステロールである請 求の範囲第６項に記載の薬剤調製物。
8. ８．リガンドは、薬剤に結合することによって薬剤の毒性受容体への結合を阻止 するものである請求の範囲第１項に記載の薬剤調製物。
9. ９．リガンドが脂質または脂質ヘッド基である請求の範囲第８項に記載の薬剤調 製物。
10. １０．毒性受容体がホスファチジルコリンイノシトールビスホスフェートである 請求の範囲第９項に記載の薬剤調製物。
11. １１．薬剤がモノアミン化またはポリアミン化薬剤である請求の範囲第９項に記 載の薬剤調製物。
12. １２．薬剤が抗微生物性薬剤である請求の範囲第１項に記載の薬剤調製物。
13. １３．薬剤がアドレアマイシンである請求の範囲第１項に記載の薬剤調製物。
14. １４．薬剤が抗ウィルス性薬剤である請求の範囲第１項に記載の薬剤調製物。
15. １５．薬剤が抗真菌性薬剤である請求の範囲第１項に記載の薬剤調製物。
16. １６．薬剤が抗細菌性薬剤である請求の範囲第１項に記載の薬剤調製物。
17. １７．薬剤がアミノグリコシド系抗生物質である請求の範囲第１６項に記載の薬 剤調製物。
18. １８．リガンドが、該アミノグリコシドのその毒性受容体への結合を阻止し得る リン酸エステル、リン酸無水物またはスルファチドである請求の範囲第１７項に 記載の薬剤調製物。
19. １９．毒性受容体がホスファチジルイノシトールビスホスフェートである請求の 範囲第１８項に記載の薬剤調製物。
20. ２０．リガンドがＣ−反応性タンパクに結合し得るリン酸工ステル、リン酸無水 物またはスルファチドである請求の範囲第１７項に記載の薬剤調製物。
21. ２１．リガンドが該アミノグリコシド系抗生物質と水素結合された安定化された 複合体を形成し得るリン酸エステル、リン酸無水物またはスルファチドである請 求の範囲第１７項に記載の薬剤調製物。
22. ２２．リガンドが該アミノグリコシド系抗生物質と静電気的複合体を形成し得る リン酸エステル、リン酸無水物またはスルファチドである請求の範囲第１７項に 記載の薬剤調製物。
23. ２３．リガンドがリソホスファチジルコリンである請求の範囲第１７項に記載の 薬剤調製物。
24. ２４．リガンドがホスフォリルコリンである請求の範囲第１７項に記載の薬剤調 製物。
25. ２５．リガンドがホスフォリルセリンである請求の範囲第１７項に記載の薬剤調 製物。
26. ２６．リガンドがホスフォリルグリセリン酸である請求の範囲第１７項に記載の 薬剤調製物。
27. ２７．リガンドがイノシトールモノホスフェートである請求の範囲第１７項に記 載の薬剤調製物。
28. ２８．リガンドがイノシトールビスホスフェートである請求の範囲第１７項に記 載の薬剤調製物。
29. ２９．リガンドがイノシトールトリホスフェートである請求の範囲第１７項に記 載の薬剤調製物。
30. ３０．リガンドがイノシトールテトラホスフェートである請求の範囲第１７項に 記載の薬剤調製物。
31. ３１．リガンドがイノシトールペンタホスフェートである請求の範囲第１７項に 記載の薬剤調製物。
32. ３２．リガンドがイノシトールヘキサホスフェートである請求の範囲第１７項に 記載の薬剤調製物。
33. ３３．リガンドがヌクレオチドである請求の範囲第１７項に記載の薬剤調製物。
34. ３４．リガンドがホスファチジルイノシトールホスフェートである請求の範囲第 １７項に記載の薬剤調製物。
35. ３５．リガンドがホスファチジルイノシトールビスホスフェートである請求の範 囲第１７項に記載の薬剤調製物。
36. ３６．リガンドがトリポリホスフェートである請求の範囲第１７項に記載の薬剤 調製物。
37. ３７．薬剤がポリエンまたはポリエンマクロリド系抗生物質である請求の範囲第 １６項に記載の薬剤調製物。
38. ３８．リガンドが、該ポリエンまたはポリエンマクロリド系抗生物質のその毒性 受容体への結合を阻止し得るステロールまたは水溶性ステロール誘導体である請 求の範囲第３７項に記載の薬剤調製物。
39. ３９．水溶性ステロール誘導体が、抗生物質と安定化された複合体を形成し得る ものである請求の範囲第３８項に記載の薬剤調製物。
40. ４０．水溶性ステロールが水溶性コレステロールである請求の範囲第３８項に記 載の薬剤調製物。
41. ４１．水溶性コレステロールがポリエチレングリコールーコレステロールである 請求の範囲第４０項に記載の薬剤調製物。
42. ４２．水溶性コレステロールが、コレステロールヘミサクシネートである請求の 範囲第４０項に記載の薬剤調製物。
43. ４３．薬剤がリンコサミドである請求の範囲第１６項に記載の薬剤調製物。
44. ４４．薬剤がポリミキシンである請求の範囲第１６項に記載の薬剤調製物。
45. ４５．薬剤がシスプラチンである請求の範囲第１項に記載の薬剤調製物。
46. ４６．リガンドが、シスプラチンのその毒性受容体への結合を阻止し得るリン酸 エステル、リン酸無水物またはスルファチドである請求の範囲第４５項に記載の 薬剤調製物。
47. ４７．毒性受容体がホスファチジルイノシトールビスホスフェートである請求の 範囲第４６項に記載の薬剤調製物。
48. ４８．リガンドが、Ｃ−反応性タンパクに結合し得るリン酸エステル、リン酸無 水物またはスルファチドである請求の範囲第４５項に記載の薬剤調製物。
49. ４９．リガンドが、シスプラチンと水素結合された安定化された複合体を形成し 得るリン酸エステル、リン酸無水物またはスルファチドである請求の範囲第４５ 項に記載の薬剤調製物。
50. ５０．リガンドが、シスプラチンと静電気的な複合体を形成し得るリン酸エステ ル、リン酸無水物またはスルファチドである請求の範囲第４５項に記載の薬剤調 製物。
51. ５１．リガンドがリソホスファチジルコリンである請求の範囲第４５項に記載の 薬剤調製物。
52. ５２．リガンドがホスフォリルコリンである請求の範囲第４５項に記載の薬剤調 製物。
53. ５３．リガンドがホスフォリルセリンである請求の範囲第４５項に記載の薬剤調 製物。
54. ５４．リガンドがホスフォリルグリセリン酸である請求の範囲第４５項に記載の 薬剤調製物。
55. ５５．リガンドがイノシトールモノホスフェートである請求の範囲第４５項に記 載の薬剤調製物。
56. ５６．リガンドがイノシトールビスホスフェートである請求の範囲第４５項に記 載の薬剤調製物。
57. ５７．リガンドがイノシトールトリホスフェートである請求の範囲第４５項に記 載の薬剤調製物。
58. ５８．リガンドがイノシトールテトラホスフェートである請求の範囲第４５項に 記載の薬剤調製物。
59. ５９．リガンドがイノシトールペンタホスフェートである請求の範囲第４５項に 記載の薬剤調製物。
60. ６０．リガンドがイノシトールヘキサホスフエートである請求の範囲第４５項に 記載の薬剤調製物。
61. ６１．リガンドがヌクレオチドである請求の範囲第４５項に記載の薬剤調製物。
62. ６２．リガンドがホスファチジルイノシトールホスフェートである請求の範囲第 ４５項に記載の薬剤調製物。
63. ６３．リガンドがホスファチジルイノシトールビスホスフェートである請求の範 囲第４５項に記載の薬剤調製物。
64. ６４．リガンドがホスフォリルイノシトールである請求の範囲第４５項に記載の 薬剤調製物。
65. ６５．薬剤がトリホスフォリルイノシトールである請求の範囲第４５項に記載の 薬剤調製物。
66. ６６．アミノグリコシド系抗生物質が、ストレプトマイシンまたはその薬理学的 活性塩である請求の範囲第１８項、第１９項、第２０項、第２１項または第２２ 項に記載の薬剤調製物。
67. ６７．アミノグリコシド系抗生物質が、ゲンタマイシンまたはその薬理学的活性 塩である請求の範囲第１８項、第１９項、第２０項、第２１項または第２２項に 記載の薬剤調製物。
68. ６８．アミノグリコシド系抗生物質が、ネオマイシンまたはその薬理学的活性塩 である請求の範囲第１８項、第１９項、第２０項、第２１項または第２２項に記 載の薬剤調製物。
69. ６９．アミノグリコシド系抗生物質が、カナマイシンまたはその薬理学的活性塩 である請求の範囲第１８項、第１９項、第２０項、第２１項または第２２項に記 載の薬剤調製物。
70. ７０．アミノグリコシド系抗生物質が、アミカシンまたはその薬理学的活性塩で ある請求の範囲第１８項、第１９項、第２０項、第２１項または第２２項に記載 の薬剤調製物。
71. ７１．アミノグリコシド系抗生物質が、トブラマイシンまたはその薬理学的活性 塩である請求の範囲第１８項、第１９項、第２０項、第２１項または第２２項に 記載の薬剤調製物。
72. ７２．ポリエンマクロリド系抗生物質が、アンフォテリシンＢまたはその薬理学 的活性塩である請求の範囲第３７項に記載の薬剤組成物。
73. ７３．（ａ）毒性受容体と結合することによりヒトまたは動物において毒性効果 を示す薬理学的に活性な治療薬剤と、（ｂ）上記薬剤にその薬理学的活性を維持 させつつ、薬剤の生体内での毒性受容体への結合を阻止し得るリン脂質との、該 リン脂質が、リポソーム形成に必要な濃度以下の濃度で存在する溶液からなる低 減された毒性の薬剤調製物。
74. ７４．リガンドは薬剤のホスファチジルイノシトールビスホスフェートヘの結合 を阻止するものである請求の範囲第７３項に記載の薬剤調製物。
75. ７５．薬剤がアミノグリコシド系抗生物質である請求の範囲第７３項に記載の薬 剤調製物。
76. ７６．リン脂質がカルジオリピンである請求の範囲第７５項に記載の薬剤調製物 。
77. ７７．リン脂質がホスファチジルイノシトールホスフェートである請求の範囲第 ７５項に記載の薬剤調製物。
78. ７８．リン脂質がホスファチジルイノシトールビスホスフェートである請求の範 囲第７５項に記載の薬剤調製物。
79. ７９．リン脂質がホスファチジルコリンである請求の範囲第７５項に記載の薬剤 調製物。
80. ８０．リン脂質がホスファチジルセリンである請求の範囲第７５項に記載の薬剤 調製物。
81. ８１．リン脂質がホスファチジルグリセロールである請求の範囲第７５項に記載 の薬剤調製物。
82. ８２．リン脂質がガラクトセレブドシドスルフェートである請求の範囲第７５項 に記載の薬剤調製物。
83. ８３．リン脂質がホスファチジン酸である請求の範囲第７５項に記載の薬剤調製 物。
84. ８４．薬剤がアドリアマイシンである請求の範囲第７３項に記載の薬剤調製物。
85. ８５．リガンドがカルジオリピンである請求の範囲第８４項に記載の薬剤調製物 。
86. ８６．リガンドがカルジオリピンヘッド基である請求の範囲第１３項に記載の薬 剤調製物。
87. ８７．リガンドがホスファチジルセリンである請求の範囲第８４項に記載の薬剤 調製物。
88. ８８．リガンドがホスフォリルセリンである請求の範囲第１３項に記載の薬剤調 製物。
89. ８９．リガンドがホスファチジン酸である請求の範囲第８４項に記載の薬剤調製 物。
90. ９０．リガンドがトリポリホスフェートである請求の範囲第１３項に記載の薬剤 調製物。
91. ９１．請求の範囲第２項に記載の溶液の治療学的有効量をヒトまたは動物に投与 することでなる低減された毒性の薬剤調製物の投与方法。
92. ９２．（ａ）毒性受容体と結合することによりヒトまたは動物において毒性効果 を示す薬理学的に活性な治療薬剤と、（ｂ）上記薬剤の生体内での毒性受容体へ の結合を阻止し得るリン脂質との混合物からなる低減された毒性の薬剤調製物の 動物またはヒト投与量を投与することでなり、かつ該リン脂質は、その臨界ミセ ル濃度以上の濃度で投与され、また該投与量は該薬剤の１０パーセント致死量（ ＬＤ１０）より大きいことを特徴とする薬剤の１０パーセント致死量よりも大き い濃度での薬剤の安全な投与方法。
93. ９３．投与量が、該薬剤の中間致死量（ＬＤ５０）よりも大きいものである請求 の範囲第９２項に記載の方法。
94. ９４．（ａ）ポリエンまたはポリエンマクロリド系抗生物質と（ｂ）コレステロ ールもしくはステロールまたはこれらの水溶性誘導体との混合物からなる薬剤調 製物の治療学的有効量を、真菌感染している動物またはヒトに投与することでな る真菌感染の治療に関するポリエンまたはポリエンマクロリド系抗生物質の安全 な投与方法。
95. ９５．ポリエンマクロリド系抗生物質がアンフォテリシンＢである請求の範囲第 ９４項に記載の方法。