JPS6144871A - Ｎτ−置換ヒスチジン誘導体、その製法及びこれを使用するヒスチジン類縁プロテイン誘導体及び酵素誘導体の製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は　ＮＴ−置換ヒスチジン誘導体／の製法、Ｎ−
置換ヒスチジン誘導体、及びそｎ’ｊペプチド誘導体殊
に高活性ホルモン誘導体及び酵素誘導体の製造に使用す
ることに関する。

従来の技術水準 ２つのアミノ酸異性体である次の（６）式の１−メチル
ヒスチジン及び（７）式の３−メチルヒスチジン（ＩＵ
ＰＡＯ−命名法ではＮ”−（ｐｒｏｓｌ−及びＨｒ−（
ｔｅｌｅｌ−メチルヒスチジン］の証明は、比較的早期
に確立している： ＨＨ Ｎ“−メチルヒスチジンは、既に１９３８年アンセリン
の成分即ち、魚エキス中に検出さｎる構造β−アラニル
−Ｌ−Ｎ“−メチルヒスチジンのジペプチドとして知ら
Ｉている。

遊離アミノ酸Ｎ“−メチルヒスチジンは、Ｎ７−メチル
−化合物と同様に尿から単離された。鯨肉から、アンセ
リンに対して異性の化合物即ちβ−Ａｌａ−Ｌ　−Ｎ’
−メチル−Ｈｌｓが単離できた。

アミノ酸Ｎ７−メチルヒスチジンは、実際に体内で形成
さ九るぷ３−メチルヒスチジンを内容としている筋原繊
維蛋白質アクチン及びミオシンの成分である。そのメチ
ル化はそｎぞｎのペプチド鎖内へのヒスチジンの導入の
後にはじめて行なわｎる。

Ｎ７−及びＮ“−アルキル化されたヒスチジン誘導体を
製造するための実験に関して、種々の文献中に報告さ几
ていた。その分子の全合成の経過で相応して置換さｎた
窒素を導入する試みが々されている。このことは　ＮＴ
−ヒスチジンを得るために繰り返し試みられた（　Ｈ，
Ｈ，Ｔａ１ｌａｎ。

Ｗ、　Ｈ，５ｔｅｉｎ及び８．　Ｍｏｏｒｅ、　Ｊ、　
Ｂｉｏｌ、　Ｏｈｅｍ、　２０６゜８２５頁（１９５４
年）　：　Ｈ，Ｒｉｎｄｅｒｋｎｅｃｈｔ、　Ｔ。

Ｒｅｂａｎｅ　　及びＶ、　Ｍａ、　Ｊ、　Ｏｒｇ、　
Ｏｈｅｍ、　２９３１９６８頁（１９６４年）、Ｐ、　
Ｋ、　Ｍａｒｔｉｎ、　Ｈ。

Ｒ，Ｍａｔｔｈｅｗｓ、　Ｈ，Ｒａｐｏｐｏｒｔ及びＧ
、　ＴｈｙａｇａｒａｊａｎのＪ、　Ｏｒｇ、　Ｏｈｅ
ｍ、３３３７５８頁（１９６８頁）参照）。

しかしながら、こ几らの試みでは、非立体特異性の反応
の経過は失敗しているかもしくは使用可能の生成ラセミ
混合物に関する分離法は欠如している。

更に、ヒスチジン及び適当な誘導体の直接アルキル化に
より、双方の異性アルキル化会物分得る試みもなされて
いる。慣用のアルキル化法に工ｖ１低収率で分離不可能
な双方の異性体の混合物が得ら１．た。

発明の解決しようとする問題点 従って、本発明はＮｒ−置換ヒスチジン誘導体殊に、光
学的に純粋なＮＴ−置換ヒスチジン誘導体を製造する実
際に使用できる脅威法を供給することを目的とする。更
に％新規Ｎζ置換ヒスチジン誘導体全供給すること及び
、蛋白質−及び酵素誘導体例えば？リベゾチドー及びペ
プチド類縁体の製造殊に高活性ホルモン誘導体の製造の
ためにそｆ″ＬＬヲ使用ことを目的とする。

この際、典型的なペプチド合成の方法により操作し１合
成経過での経費のかかる精製工程金できるだけさけるべ
きである。合成は、収率、合成時間及び保砕基使用に関
して最適にすべきである。

本発明の目的である次式（１）： 〔式中几１は０１〜Ｃ６−アルキル基、０３〜ｏ６−シ
クロアルキル基、　　０１〜０６−ω−ハロゲンアルキ
ル基、０１〜Ｃ６−ω−アミノアルキル基（こｎｒ：）
はすべてシアノ−、ニトロ−１−〇〇〇ＣｎＨ２ｎ＋１
　基（ここでｎは１〜３である）で置換さｎてぃてよい
）、Ｃ４〜Ｃ６−アルケニル、０３〜ｏ６−シクＥ’フ
ルケニル又ＵＯ１〜Ｃ６−アルキレンアリール基全表わ
し　Ｒ２は水素原子％ｏ１〜ｃ６−アルキル基又は＝Ｃ
００几　−基（ここで几は水素原子、アミノ基又はＣ４
〜Ｃ６−アルキル基である）を表わす〕のＮ７−置換ヒ
スチジン誘導体の製造は１次のようにして達成さｎ−る
ニ 一般式（２）ｃ式中Ｒ２は式（１）に記載の定義ケ有す
る）のヒスチジン誘導体とホスゲンとを５次の反応式： に従って、有機溶剤の存在で、−１０℃〜〜５０℃の範
囲の温″度で、酸結合剤の存在下に反応させて、一般式
（３）の中間体全形成させ、得らｎる生成物金、過剰の
式（４）： ％式％ 〔式中几は前記のもの金表わし、　Ｈａｔｕハロゲン原
子を表わす〕のアルキルハロゲニドでアル〔式中几１及
びＲ２は前記のもの全表わし、　Ｈａｔけハロゲン原子
を表わす〕の（７８）−５、６、７。

８−テトラヒドロ−７−アルコキシカルボニル−２−Ｂ
、’　−＠換−５−オキソイミダゾービリミジニウムハ
ロゲニドを形成させ、酸での処理により加水分解して一
般式（１）のＮｒ−置換ヒスチジン音生じさせ、反応混
合物から単離する。

更に、本発明の目的物は、一般式（１）：〔式中Ｒ１は
０１〜Ｃ６−アルキル基、０３〜Ｃ６−シクロアルキル
基、０１〜Ｃ６−ω−ハロゲンアルキル芒、（３，〜Ｃ
６−ω−アミノアルキル基（こｎらはすべて、シアノ−
、ニトロ−１０１〜０３〜アルコキシ−１−〇〇〇〇ｎ
Ｈ２ｎ＋１（ここでｎは１〜３である）−基で置換さｎ
ていてよい〕、０１〜Ｃ６−アルケニル−１０３〜０６
−シクロアルケニル−又ハ０１〜Ｃ６−アルキレンアリ
ール基を表わし、Ｒ１水素原子、Ｃ１−０６−アルキル
基又ｕ　−０（１０１１，’　−基（ここでＲ６は水素
原子、アミノ基又はＣ４〜ｃ６−アルキル基である）を
表わす〕のＮ”−ＭＩＡヒスチジン誘導体である（但し
　Ｂ１がメチル基又はエチル基であり、几２がカルダキ
シル基である化合物は除く］。

最後に、本発明は、本発明によるＮＴ−置換ヒスチジン
誘導体を、ヒスチジン類縁蛋白質銹導体及び酵素誘導体
の製造殊にベゾチドー又はポリペプチド誘導体の製造に
、特にヒスチジン類縁ゴナドリペリン銹導体の製造に使
用することに関する。

前記（１）　、　（４）及び（５）式中でＲ１は０１〜
０６−アルキル基であってよい。アルキル基は、直鎖状
であっても、分枝していても工〈、アルキル基の例と°
してはメチル−、エチル−５ｎ−プロピル−。

イソプロピル−１ｎ−ブチル−、インブチル−及びｔ−
メチル基である。こｎらの基のうち、メチル基及び３！
；＆及び２Ｒのブチル基が特に有利である。几１は更に
％　０３〜０６−シクロアルキル基例えはシクロプロピ
ル−又はシクロペンチル基、０−０−ω−ハロゲンアル
キル基又は０１〜Ｃ６−ω−アミノアルキル基であって
↓い。有利なω−１〆パ換アルキル基は前記の、ω−位
でハロゲン、例えば塩素、弗素、臭素又は沃素で置換さ
Ｔ′Ｌだか又はω−位でアミノアルキル基で置換さｔ′
１．た前記のアルキル基である。こ几らの記載の基は非
置換であってよいか又は前記の籠換分によって置換さガ
ていてよい。Ｒ１に関して記載の定義のうち　Ｒ１は、
直鎖又は分枝鎖の０１〜０６−アルキル基又は直鎖又は
分枝鎖の０１〜Ｇ６−アル゛キレンアリール基が有利で
ある。特に几１はメチル−、エチル−又はベンジル基で
あるのが有利である。０．〜Ｃ６−アルキレンアリール
基中でアリール基はフェニル基又はナフチル基であって
よい。芳香族基は更に、２個又は３個の置換分例えばＣ
４〜Ｃ３−アルキル基、ハロゲン原子（弗素、臭素、塩
素又は沃素］、トリフルオルメチル基、ニトロ基、シア
ン基又は−０００−０１〜０３−アルキル基に↓Ｖ置換
さ几ていてよい。

前記式中Ｒ２ｔｌ水素原子、直鎖又は分枝鎖のＣ４〜０
６−アルキル基、例えばメチル−、エチル−１ｎ−プロ
ピル−、イソプロピル−１ｎ−ブチル−、イソブチル−
１又はｔ−ブチル基を表わす。

更に、Ｒは一０００Ｒ３−基であってよく、ここでＲ３
は水素原子、アミン基又は０１〜Ｃ６−アルキル基であ
る。几が０１〜Ｃ６−アルキル基を表わす場会に、こｎ
らは直鎖又は分枝鎖であってよい。

有利にＢ２は水素原子、０１〜０３−アルキル基特に水
素原子が有利である。

意外にも、ヒスチジンの所のイミダゾール基のＮＴ−官
能基の非常に安定で完全転換しうる保護が可能であるこ
とが判明し、ここではヒスチジンメチルエステル全塩基
の存在で、低い温度でホスゲンと反応させることができ
る。次の反応式で１反応経過はヒスチジンのメチルエス
テルを用いて示さｎている： （７Ｂ）　−５、６、７、８−テトラヒトｏ−７−メド
キシーカルゼニルー５−オキソイミダゾ（１，５−０）
−ピリミジンの製造 この方法の第１工程で、出発物質として前記の式（２）
の化合物全使用する。式（２）の化合物とホスゲンとの
反応は、ホスゲンに対して不活性であり１反応源度でな
お液状であるかもしくは他の反応成分と共に液状混合物
を形成する有機溶剤中で実施する。溶剤としては例えば
、炭化水素、ハロゲン化炭化水素例えば塩化メチレン、
クロロホルム、テトラクロルエタン、トリクロルエタン
、エーテル、例えばジオキサン、ジエチルエーテル、テ
トラヒドロ７ラン又は双極性の中性溶剤例えばジメチル
ホルムアミド、ジメチルスルホキシド又はへキサメチル
燐酸トリアミド全使用することができる。炭化水素及び
エーテルを使用するのが有利である。反応は、−１０℃
〜−５０℃の範囲の温度有利に一２０℃〜−４０℃特に
約−３５℃で実施する。

反応時に塩酸に結合する試薬を使用する。塩酸に結合す
る試薬として轢慣用の塩基を使用することができる。ピ
リジン、トリエチルアミン。

又ハトリメチルアミンを使用するのが有利である。

一般に、ホスゲンを所望温度で１例えばメタノール／乾
燥水浴中で冷却することにより、溶液中に導入し、次い
で、なお１０〜６０分冷却下に攪拌する。得らｒＬる反
応混合物を次いで冷却さｔ″した反応生成物に対する非
溶剤例えばエーテル、ヘキサン等中に注ぐ。

次いで、一般に、微細な白色で易潮解性の式（３）の反
応生成物の沈殿物が生じる。沈殿を吸引し、沈殿に用い
た溶剤で洗浄する。例えば化合物（３）（ここでＲ２は
メチル基である］をメタノールから、きｎいな結晶で、
かつ高い純度で晶出させることができる。こｎ　ｈ　、
室温及び光の作用下に安定であり、２年の経過で分解は
みとめらｔｌない。

式（３）の５．６．７．８−テトラヒドロ−７−アルコ
キシカルボニル−５−オキシイミダゾール−１，５，１
０−ピリミジンのイミダゾール基のＮ′ｒ−原子の所で
のアルキル化は、この物質を式（４）のハロゲン化アル
キルの過剰と反応させる際に容易かつ高い収率で達成さ
ｎる。

１０倍過剰の新しく蒸溜さｎたハロゲン化アルキル例え
ば沃化物、塩化物又は臭化物を使用するのが有利である
。アルキル化剤として、例えば沃化物又は臭化物を使用
することができる。

沃化物を使用するのが有利である。

アルキル化剤の例扛沃化メチル、沃化エチル塾沃化ｎ−
プロピル、沃化イソプロピル及び沃化ｎ−ブチルである
。

一般に、式（３）の物Ｘ’を過剰のハロゲン化アルキル
中で加熱還流させる。生じるアルキルビリミジニウムハ
ロゲニドは、一般にＭ機の非極性溶剤例えば塩化メチレ
ン、クロロホルム、ハロゲン化炭１ｔＳ水素の添加の後
に晶出する。

Ｎ−位でアルキル化されたヒスチジン＠導体の遊離は、
鉱酸との煮沸によって容易に、かつ殆んど定量的収率で
連凧される。鉱酸としては、一般に強酸例えは塩酸、硫
酸又は過塩素酸を′開用する。酸の濃度は一般に４Ｎ〜
８Ｎｉ利に６Ｎである。しかしながら、所定の範囲より
低い濃匿ヲ便用することもできる。

このＮζアルキルヒスチジン誘導体は、エタノールから
、エーテルの添〃口の後に、２塩酸塩として晶出する。

これは室温で安定であシ、非感光性の化合物である。こ
れに反して、遊離塩基は遊離し、室温で溶液中に保持さ
れ、遊離ヒスチジンメチルエステルでも観察されると同
様に、溶液の褐色化の本とに分解する。

すると、最終生成物としてもラセミ混合物が得られる。

このラセミ混合物は公知方法で分離することができる。

本発明方法で、純粋なＬ−又は純粋なり一化合物を使用
すると、純粋なＬ−もしくはＤ−化合物が得られる。従
って、本発明の方法は、簡単な方法手段で光学的に純粋
な化合物の合成を可能とする。

作用 更に、一般式（１）の新しく合成されたＮＴ−置換ヒス
チジン誘導体を生物学的に重要な物質、いわゆる生分子
の製造に使用することができることが判明した。

本発明の化合物は、ヒスチジン類縁の蛋白質誘導体及び
酵素訪導体の合成のために使用することができる。ペプ
チド−又はポリペプチド誘導体の製造のためにこれを使
用するのが有利であり、特に、ヒスチジン類縁ゴナドリ
ベリン誘導体の製造のために有利である。例えは、ヒス
チジンの代りにＮζメチルヒスチジン誘導体を含有する
トリペプチドのＴ　Ｒ１−１−遊離活性は、次表から明
らかなように、ヒスチジン含有トリペプチドより何倍も
高い。

一氏一 従って、本発明の化合物は、自体公知の方法で、すべて
の生分子の合成のために、例えば、視床下部ホルモンの
合成に使用することができる（　Ｄｅｒｅｋ　Ｇｕｐｔ
ａ及びＷｏｌｆｇａｎｇ　Ｖｏｅｌｔｅｒ　　によるＰ
ｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｅｕｒｏｐｅａ
ｎ　Ｃ！ｏｔｌｏｑｕｉｕｍｏｎ　Ｈｙｐｏｔｈａｌａ
ｒｎｉｃ　Ｈｏｒｍｏｒｉｅｓ、　　１９７４年２月Ｖ
ｅｒｌａｇ　Ｏｈｅ＋ｎｉｅ参照）。前記文献に記載の
すべての方法は、本発明の化合物を用いても実施するこ
とかできる。

次に、ヒスチジン類縁ゴナドリベリン誘導体の製造のた
めのＮζアルキル化ヒスチジン誘導体の使用に関して記
載する。

本発明により製造されたアルキルヒスチジンの使用下に
おけるペプチド合成用のモデル物質として、ゴナドトロ
ピン−放出性ホルモン（Ｏｎ−ＲＨ％ＬＨ／Ｆ８Ｈ−１
’ＬＨ）を選択した。その単離及び構造解明以来、この
デカペプチド（視床下部で形成され、下垂体内で向性練
性のホルモンの分泌に作用する）は集中的な化学及び医
学上の研究の対称である。

実施例 本明細書中及び次の実施例９次の略字を用いる： Ａｄｐｏｃ　＝　１−　（１−アダマンチル）−１−メ
チルエトキシカルボニル、 Ｂｏｃ＝ｔ−プチロキシカルゼニル Ｂｚｌ　　＝ベンジルエーテル ＤＤＯ＝Ｎ、Ｎ’−ジシクロへキシルカルボジイミド ＤＭＦ　　＝ジメチルホルムアミド ＥＥ　　　−酢酸エチルエステル ＥｔＯＨ−エタノール Ｅｌ　　　−エチル ＦＤ−ＭＳ−フィールド□デソープションー質量分析（
Ｆｅ　Ｉｄｄｅｓｏｒｐｔ　ｉｏｎｓ−Ｍａｓｓｅｎｓ
ｐｅｋｔｒｏｍ−ｅｔｒｉｅ） ＨＯＢｔ＝１−ヒドロキシベンゾトリアゾールＨＡｃ　
　−酢酸 Ｍｂｓ　　＝ｐ−メ）キシペンゾールスルホニルＭｅ　
　　−メチル ＭｅＯＨ−メタノール ＯＭｅ　　−メチルエステル ０ＢｚＬ　−ベンジルニスデル ＰＦ’Ｔ　　＝７ｇルスーフーリエートランスフォーメ
ーション（ｐｕｌｓ−Ｆｏｕｒｉｅｒ−Ｔｒａｎｓｆｏ
ｒｍａ−１ｏｎ） Ｏ８ｕ　　＝Ｎ−ヒドロキシスクンンイミドエステル ＴＨＦ　　−テトラヒドロフラン Ｚ　　−ベンジルオキシカルボニル 次の実施例につき本発明を説明する。

例１ １　Ｌ−ヒスチジン−メチルエステル・２塩酸この化合
物の製造は、Ｎ、　Ｃ，デービス（Ｄａｖｉｓ）による
Ｊ、　Ｂｉｏｌ、Ｏｈｅｍ、　２２３巻９３５頁（］９
９５６年の記載に従う。

パッチ：６０．（Ｌ−ヒスチジン地酢塩０．３１モル）
。

この処方とは、澄明な溶液が生じる壕で還流下に加熱す
る点で異なる。

次いで、 ２　Ｌ−ヒスチジン−メチルエステル（Ｈ−Ｌ−結晶Ｌ
−ヒスチジンメチルエステル・２坩酸塩１２−１１　（
（１−０５モル）を乳鉢中で微細に児・砕し、無水クロ
ロホルム１５０ｍｆ中に懸濁させる。次いで、水冷下に
乾燥アンモニアガスを１０分間導入し、生じた塩化アン
モニウムを濾去する。澄明クロロホルム相を真空中で乾
燥濃縮させる。無色の油状物として生じる遊離のメチル
エステルを冷暗所で貯蔵する。

収量：　８．４５　、　（定量的） この化合物は更に特性化することなく反応される。

３、　　（＋）−（８）−５、６、７、ｓ−テトラヒド
ロ−７−（メトキシカルボニル）−５−オキンイＬ−ヒ
スチジンメチルエステル３．３８゜（２０ｍモル）及び
ピリジン３．１６　、　（４０ｍモル）（ニンヒドリン
上で蒸溜）をクロロホルム１０（）−中に溶かし、メタ
ノール／ドライアイスを用いて−３０〜−４０℃に冷却
する。この温度で、１５分間ＨＣ１不含のホスゲン弱流
を導入し、冷時になお１５分間攪拌する。次いで、パッ
チを冷エーテル／ヘキサン（２：１）４００ｍ（！中に
注ぐ。微細な白色、易潮解性の沈殿が得られるから、こ
れを吸引濾取し、エーテルで洗浄する。沈殿をＩＮｖ炭
酸ナトリウム溶液２００１ｎｔ中に入れ、クロロホルム
各５０−で６回抽出スル。０ＨＣ４６−相を硫酸ナトリ
ウム上で乾燥させ、真空中で濃縮させる。残留する少量
のピリジンを高度真空下に除去する。この物質はメタノ
ールから、きれいな無色結晶として晶出する。

収量：３．３９．（理論量の８７％） 融点＝１６０〜１６２℃ ４、　　（＋）−（Ｓ）−２−メチル−５，６，７，８
−テトラヒドロ−７−（メトキシカルボニル）−５−オ
キソイミダゾ（１，５−０）ピリミジ５．６，７．８−
テトラヒドロ−７−（メトキシカルボニル）−５−オキ
ソイミダゾピリミジン３．（１５，３ｍモル）を無水ジ
メチルホルムアミド３０ゴ中に溶かし、新製蒸溜沃化メ
チル９．３４ｍ／（１５０ｍモル）を加える。還流下に
２．５時間煮沸し、室温まで冷却し、エーテル１５０−
中に注ぐ。結晶化合物を吸引濾取し、少量の冷メタノー
ル及びエタノールで洗浄し、メタノールから再結晶させ
る。物質を遮光下にかつ冷所で保存すべきである。

収量：　４．７　、　（理論量の９１％）融点：１７１
〜１７２℃ ５、Ｌ−ＮＴ−メチルヒスチジン・２塩酸塩（Ｈ−（＋
）　−（７８）　−ｓ　、　６　、７　、　ｓ−テトラ
ヒドロ−７−（メトキシカルボニル）−２−メチル−５
−オキシイミダゾ（：１，５−０）ピリミジン・沃化水
素酸塩３．３７ｙ（１０ｍモル）を６ＮＨ（３４４０−
中、還流下に、薄層クロマトグラフィで出発化合物がも
はや検出されなくなるまで（６〜８時間）、加熱する。

次いで塩酸を真空中で溜去し、油状残分をエタノール中
に入れ、エーテルの飽加によシ晶出させる。

収量：２０．（理論量の８３％） 融点：２５８℃ 例２ １、　　（＋）　−（７８）　−２−エチル−５，６，
７゜８−テトラヒドロ−７−（メト・キシカルボニル）
−５−オキシイミダゾ〔１，５−０〕ピ例１により得た
（７８）−５，６，７，８−テトラヒドロ−７−（メト
キシカルボニル）−５−オキソイミダゾピリミジン３．
９　、　（２０ｍモル）を、例１で得た新製蒸溜沃化エ
チル３１、ｌｐ（２００ｍモル）及び無水ジメチルホル
ムアミド４０−と共に還流下に３時間加熱する。次いで
、室温まで冷却し、濁りが生じるまでエーテルを添加す
る。生成物は４℃で黄色結晶の形で生じ、メタノールか
ら再結晶させる。化合物は、光で暗色化し、分解しはじ
めるので、冷暗所に貯蔵すべきである。

収量：６．２４．（理論量の８９％） 融点：１４０℃（分解） ２、Ｌ−ＮＴ−エチル−ヒスチジン・２垣酸塩（前記処
方で鮫遺された（＋）　−（７Ｓ　）　−２−エチル−
５，６，７，８−テトラヒドロ−７−（メトキシカルボ
ニル）−５−オキソイミダゾピリミジン・沃化水素酸塩
１７．５　、　（５ｍモル）を６Ｎ塩酸２ｏ−中で６時
間還流下に加熱する。次いで、塩酸を真空中で完全に除
去し、赤色の油状残分をエタノール中に入れ、乾燥させ
、エーテルの添加にょシ晶出させる。

収量：０．９７．（理論量の７６％） 融点＝２３５℃ 例３ １　（−バ用−５．６，７．８−テトラヒドロ−７−メ
トキシカルボニル−５−オキソ−イミダローヒスチジン
メチルエステル１．７　、　（１０ｍモル）及び蒸溜ピ
リジン１．５８ｆ（２０ｍモル、１．６１ｍ）を無水ク
ロロポルム５０ｍｔ中に溶かし、メタノール／ドライア
イスで−４０〜−５０℃に冷却し、この温度で１５分間
Ｈ（３を不含のホスゲン弱流を導入する。なお１５分間
冷所で攪拌し、冷エーテル／ヘキサン（２：　１　）２
００−中に注ぐ。白色の潮解性沈殿が生じるから、これ
を直ちに吸引し、エーテルで洗浄する。沈殿をＩＮ　Ｎ
ａ２００５溶液１００ｄ中に入れ、クロロホルムで６回
抽出する。硫酸ナトリウム上で有機相の乾燥の後に、溶
剤を吸引し、場合にょシ存在する少量のピリジンを高度
真空下に除去する。物質をメタノールから晶出させる。

収量：　１．４５ｆ（理論量の８５％）融点：１６４℃ 例４ チド合成 ｘ、ｐｘ−ヘンシルオキシカルボニル−Ｌ−ピログルタ
ミル−Ｎ′ｒ−メチル−Ｌ−ヒスチジン（Ｚ−Ｌ−Ｐｙ
ｒ−Ｏ８ｕ　１．４８ｆ（４，１１ｍモル）をジオキサ
ン５−中に溶かし、水５　ｍｌ中のＨ−Ｌ　−Ｈｉｓ−
（ＮＴ−Ｍｅ）−０ＨＯ，６９ｙ　（４，１１ｍモル）
と無水炭酸ナトリウム帆４３　ｇ　（４，１ｍモル）の
溶液を加える。室温で４時間攪拌し、次いで帆ＩＮ塩酸
で中和する。溶剤を高度真空中で吸引濾過し、残分を少
量のメタノール中に入れ、不溶の食塩を濾去する。３０
％メタノールからの晶出ｔ−ｉ（アルキル化されていな
い化合物と同様に）成功しないから、生成物は２回再沈
殿によりメタノール／エーテルから回収する。

収量：１．０５．（６２％） 融点＝１４４℃ ２　Ｎ−ペンジルオキシカルゼニルーＬ−ピログルタミ
ル−ＮＴ−エチル−Ｌ−ヒスチジン（Ｚ　−Ｌ　−Ｐｙ
ｒ−Ｌ−Ｈｉｓ（ＮＴ−Ｅｌ）−０Ｈ）Ｚ　−Ｌ　−Ｐ
ｙｒ−Ｏ８ｕ　　Ｏ，７２ｇ　（２ｍモル）をジオキサ
ン４＃Ｉ／中に浴かす。水３−中のＨ−Ｌ　−Ｈｉｓ（
ＮＴ−Ｅｔ　）−ＯＨ０，３６１（２ｍモル）及び無水
の炭酸ナトリウム０．２１．（２ｍモル）の溶液を加え
、室温で６時間攪拌する。反応の終了後に、０．ＩＮＮ
酢酸中和し、パッチを高度真空中で乾燥させる。残留油
状物を少量のメタノール中に入れ、不溶の食塩を濾去し
、生成物をメタノール／エーテルからの再沈殿により回
収する。

収量＝４９０■（５８％） 融点：１５６〜１５８℃ ３　Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｌ−ピログルタミ
ル−ＮＴ−メチル−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−プロリンアミ
ド（Ｚ　−Ｌ　−Ｐｙｒ−Ｌ−ＨｉｓＺ　−Ｌ　−Ｐｙ
ｒ−Ｌ−Ｈｉｓ（ＮＹ−Ｍｅ）−０Ｈ４１４ＩＩＶ（１
ｍモル）、シシク日へキシルカルボジイミド２２０■（
１，１ｍモル）及び１−ヒドロキシベンゾトリアゾール
１３５　ｇ’ｌｉ　（ｌ　ｍモル）をＤＭＦ　Ｉ　Ｑ１
＋ｔｌ！中に溶かし、０℃で少量のＤＭＦ中のＬ−Ｐｒ
ｏ−ＮＨ２”ＨＯｔｌ−５０”ｆ　（１ｍモル）とＮ−
メチルモルホリン１１００ｑ（１モル）の溶液を加える
。０℃で１時間攪拌し、室温で１夜攪拌する。その後、
冷時に沈殿したジシクロヘキシル尿素をヂ去し、溶剤を
高度真空中で溜去し、残分を酢酸エステル中に入れる。

その後、冷時に、沈殿するジシクロヘキシル尿素を濾去
し、溶剤を高度真空下に溜去し、残分を酢酸エステル中
に入れる。重炭酸塩及び水で洗浄し、硫酸ナトリウム上
で乾燥させ、生成物を酢酸エステル／メタノール（９：
１）からエーテルの添加により沈殿させる。

収量：３２６ｍ９（６４％） ４、Ｌ−ヒログルタミルーＮｆ−メチル−Ｌ−ヒスチジ
ル−Ｌ−プロリンアミド（Ｈ−Ｌ　−Ｐｙｒ保静された
トリペプチド２５５〜（０，５ｍモル）を、メタノール
１５−及び水５−中に溶かし、　Ｐｄ／活性炭（Ｐｄ　
１０％）５０■を加、する。ｐｌ−１４，５〜５　（酢
Ｐ）で２時間、流過法で水素添加する。活性炭をセライ
トで濾過し、溶剤を溜去し、残分を水中に入れる。溶液
にイオン交換体（ＯＨ−形）１．５．を加え、室温で２
０分間放置し、濾過する。

水溶液を凍結乾燥させる。

収量：ｘ５４１１１ｉ（８２％） 精製はセファデックス（８ｅｐｈａｄｅｘ）Ｏ−５０で
のイオン交換体クロマトグラフィによシ行なう。

５、Ｎ−ヘンジルオキシカルゼニルーＬ−ピログルタミ
ル−ＮＴ−エチル−Ｌ−ヒスチジル−プロリンアミド（
Ｚ　−Ｌ　−Ｐｙｒ−Ｌ−Ｈｉｓ−（ＮＴＺ　−Ｌ　−
Ｐｙｒ−Ｌ−Ｈｉｓ（ＮＴ−ｇｔ）−０Ｈ２１５ｒｎ９
（０，５ｍモル）、ジシクロへキシルカルボジイミド１
１０ｑ（０，５５ｍモル）及びｌ−ヒドロキシベンゾト
リアゾール７０Ｗ（０，５ｍモル）をジメチルホルムア
ミド８−中に溶かし、０℃に冷却する。次いで、少量の
ＤＭＦ中のＬ−Ｐ　ｒｏ−ＮＨ２’ＨＯｔ７５　”ＩＦ
　（０，５ｍモル）及びＮ−メチルモルホリン５０■（
０，５ｍモル）の溶液を加え、冷時に１時間かつ室温で
１２時間撹拌する。ジシクロヘキシル尿素の濾去の後に
、溶剤を高度真空下に除去し、残分を酢酸エステル中に
（少量のメタノールの添加により）溶かす。■（炭酸す
）　ＩＪウム及び水で洗浄し、乾燥させ、生成物を酢酸
エステル／メタノール（９：１）から、エーテルの添加
によシ沈殿させる。

収量：１３９Ｗ（５３％） ６　Ｌ−ピログルタミル−ＮＹ−エチル−Ｌ−ヒスチジ
ル−Ｌ−プロリンアミド（Ｌ　−Ｐｙｒ−ベンジルオキ
シカルボニル保睦されたトリペプチド１０４■（０，２
ｍモル）をメタノール１０−及び水５−中に溶かし、Ｐ
ｄ／活性炭（１０％）５０ｑを加える。流過法（ｐＨ４
５〜５、酢酸）で２〜３時間水素添加し、触媒なセライ
１で濾去し、浴剤を真空中で除去する。残分を水中に入
れ、イオン交換体ｆＯＨ型）で２０分間処理し、次いで
凍結乾燥させる。

収量：６０■（７６％）。

手続補正書（峠） 昭和５９年９　月ｌ（日

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、一般式： ▲数式、化学式、表等があります▼（１） 〔式中Ｒ＾１はＣ＿１〜Ｃ＿６−アルキル基、Ｃ＿３〜
   Ｃ＿６−シクロアルキル基、Ｃ＿１〜Ｃ＿６−ω−ハロ
   ゲンアルキル基、Ｃ＿１〜Ｃ＿６−ω−アミノアルキル
   基（これらはすべて、１個のシアノ−、ニトロ−、Ｃ＿
   １〜Ｃ＿３−アルコキシ−、−ＣＯＯＣｎＨ＿２＿ｎ＿
   ＋＿１（ここでｎは１〜３である）−基で置換されてい
   てよい）、Ｃ＿１＿〜＿６−アルケニル−、Ｃ＿３〜Ｃ
   ＿６−シクロアルケニル−又はＣ＿１〜Ｃ＿６−アルキ
   レンアリール基を表わし、Ｒ＾２は水素原子、Ｃ＿１〜
   Ｃ＿６−アルキル基又は−ＣＯＯＲ＾３基（ここでＲ＾
   ３は水素原子、アミノ基又はＣ＿１〜Ｃ＿６−アルキル
   基である）を表わすが、Ｒ＾１がメチル又はエチル基で
   Ｒ＾２がカルボキシル基であるものは除く〕のＮ＾τ−
   置換されたヒスチジン誘導体。 ２、一般式（１）： ▲数式、化学式、表等があります▼（１） 〔式中Ｒ＾１は、Ｃ＿１〜Ｃ＿６−アルキル基、Ｃ＿３
   〜Ｃ＿６−シクロアルキル基、Ｃ＿１〜Ｃ＿６−ω−ハ
   ロゲンアルキル基又はＣ＿１〜Ｃ＿６−ω−アミノアル
   キル基（これらはすべて、１個のシアノ−、ニトロ−、
   Ｃ＿１〜Ｃ＿３−アルコキシ−、−ＣＯＯＣｎＨ＿２＿
   ｎ＿＋＿１（ここでｎは１〜３である）で置換されてい
   てよい）、Ｃ＿１〜Ｃ＿６−アルケニル−、Ｃ＿３〜Ｃ
   ＿６−シクロアルケニル−又はＣ＿１〜Ｃ＿６−アルキ
   レンアリール基を表わし、Ｒ＾２は水素原子、Ｃ＿１〜
   Ｃ＿６−アルキル基又は−ＣＯＯＲ＾３基（ここでＲ＾
   ３は水素原子、アミノ基又はＣ＿１〜Ｃ＿６−アルキル
   基である）を表わす〕のＮ＾τ−置換ヒスチジン誘導体
   を製造するために、次の反応式に依り、一般式（２）の
   ヒスチジン誘導体（式中Ｒ＾２は前記のものを表わす）
   とホスゲンとを、有機溶剤の存在下に、−１０℃〜−５
   ０℃の範囲の温度で、かつ酸結合剤の存在で反応させて
   、一般式（３）の中間体を形成させ： ▲数式、化学式、表等があります▼（２）▲数式、化学
   式、表等があります▼（３） 得られた生成物を過剰の式（４）； Ｒ′−Ｈａｌ（４） 〔式中Ｒ′は前記のものを表わし、Ｈａｌはハロゲン原
   子を表わす〕のアルキルハロゲニドを用いてアルキル化
   して、次の式（５）の（７Ｓ）−５，６，７，８−テト
   ラヒドロ−７−アルコキシカルボニル−２−Ｒ′−置換
   −５−オキソイミダゾ−ピリミジニウムハロゲニド： ▲数式、化学式、表等があります▼（５） 〔式中Ｒ＾１及びＲ＾２は前記のものを表わし、Ｈａｌ
   はハロゲン原子を表わす〕を形成させ、一般式（１）の
   Ｎ＾τ−置換ヒスチジンを、酸での処理により加水分解
   し、反応混合物から単離することを特徴とする、Ｎ＾τ
   −置換ヒスチジン誘導体の製法。 ３、酸結合剤として、反応媒体中に可溶な無機又は有機
   塩基を使用する、特許請求の範囲第２項記載の方法。 ４、一般式（１）のＬ−ヒスチジン誘導体を製造するた
   めに、一般式（２）のＬ−ヒスチジン誘導体を、かつ一
   般式（１）のＤ−ヒスチジン誘導体を製造するために、
   一般式（２）のＤ−ヒスチジン誘導体を出発物質として
   使用する、特許請求の範囲第２項又は第３項に記載の方
   法。 ５、一般式（１）： ▲数式、化学式、表等があります▼（１） 〔式中Ｒ＾１は、１個のシアノ−、ニトロ−、Ｃ＿１〜
   Ｃ＿３−アルコキシ、−ＣＯＯＣ＿ｎＨ＿２＿ｎ＿＋＿
   １−（ここでｎは１〜３である）基で置換されていてよ
   いＣ＿１〜Ｃ＿６−アルキル、Ｃ＿３〜Ｃ＿６−シクロ
   アルキル−、Ｃ＿１〜Ｃ＿６−ω−ハロゲンアルキル−
   又はＣ＿１〜Ｃ＿６−ω−アミノアルキル−基、Ｃ＿１
   〜Ｃ＿６−アルケニル−、Ｃ＿３〜Ｃ＿６−シクロアル
   ケニル−又はＣ＿１〜Ｃ＿６−アルキレンアリール基を
   表わし、Ｒ＾２は水素原子、Ｃ＿１〜Ｃ＿６−アルキル
   基又は−ＣＯＯＲ＾３基（Ｒ＾３は水素原子、アミノ基
   又はＣ＿１〜Ｃ＿６−アルキル基である）を表わす〕の
   Ｎ＾τ−置換ヒスチジン誘導体を使用することを特徴と
   する、ヒスチジン類縁プロテイン誘導体及び酵素誘導体
   の製法。 ６、ペプチド−又はポリペプチド誘導体を製造する、特
   許請求の範囲第５項記載の方法。 ７、ヒスチジン類縁性ゴナドリベリン誘導体を製造する
   、特許請求の範囲第５項記載の方法。