JPS61289889A - 酵素を用いた有用物質の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は酵素を用いた有用物質の製造法に関し、更に詳
しくは酵素反応液を限外濾過膜を介して外液より有用物
質を採取し、濾過残液を酵素反応液に戻すことを特徴と
する酵素を用いた有用物質の製造法に関する。

（従来の技術） 酵素を利用して有用物質を生産する場合には、酵素と基
質をパッチ毎に反応させるバッチ法が広く行なわれてい
たが、バッチ法では酵素をパッチ毎に使い捨てるために
非経済的であった。又、微生物の一ロスを酵累源に用い
た場合には酵素反応液を除菌する必要があり、その際に
生成物のロスを生じるという問題があった。更に、！ロ
スは一般に有色であるから、生成物を脱色する工程が必
要になり、また、７０ス由来のｉＪ？イロジェン物質の
除去も必要であった。

これらの課題を解決するために酵素を固定化しく２） て用いる方法が開発されたが、この固定化酵素法では酵
素を担体に固定化する操作が必要であり、その操作が煩
雑であった。又、担体に固定化することによって、酵素
の活性が一部失なわれたり、酵素の基質に対する親和性
が悪くなったりして、反応速度が著しく低下するという
欠点もあった。

更に、ガスが発生するような反応の場合にはこのガスに
よって酵素固定化物が破損したり、耐圧性の反応槽が要
求される場合もあった。

これらの欠点を補なう方法として膜を利用する方法が最
近開発された。例えば、Ｊａｎｄｅ　ｌらは限外濾過膜
を用いてＬ−アスｉＲラギン酸やＬ−アラニンを製造す
る方法（Ｅｕｒｏｐｅａｎ　Ｊ、Ａｐｐｌ、Ｍｉｃｒｏ
ｂｉｏｌ。

Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ　、、　１５巻、５９−６３頁（
１９８２））を、そしてＷｉｃｈｍａｎｎらはＬ−ロイ
シンを製造する方法（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ａ
ｎｄ　Ｂｉｏｅｎｇｌｎｅｅｒｉｎｇ、　２３巻ｔ２７
８９−２８０２頁（１９８１））をそれぞれ報告してい
る。

しかしながら、これら限外濾過膜を利用する方法では反
応液中に存在する蛋白質を中心とする高分子物質によっ
て繊維状のガム物質が生じ、この物質がストレーナ−２
次側で析出することによって限外濾過膜を閉塞するため
に、限外Ｅ過膜による濾過効率が低下し、有用物質の生
成効率が低下するという欠点を有している。

（本発明が解決しようとする問題点） 本発明が解決しようとする問題点は上記の従来の技術が
もっている欠点を解決し、効率の良い酵素を用いた有用
物質の製造法を確立することにある。

（問題点を解決するための手段） 本発明者らは従来の技術がもっている欠点、即ち酵素反
応液中に発生する繊維状のガム物質が限外濾過膜を閉塞
するという欠点を解決するために鋭意研究を行った結果
、酵素反応槽と限外濾過槽の間に２段以上のストレーナ
−を設置することＫより、１段目のストレーナ−２次側
に生ずる繊維力ζ 状のガム物質塗２段目以後のストレーナ−によって捕獲
されるために、この物質が限外濾過膜を閉塞させないこ
とを知った。本発明はこの知見に基づいてなされたもの
である。即ち、本発明は、酵素反応槽の排出側が２段以
上直列につ々がったストレーナ−に接続されており、ス
トレーナ−の排出側は限外濾過膜を付設した限外濾過装
置に接続されており、限外濾過装置の濾過残液側は酵素
反応槽に接続されている装置を用い、酵素反応槽に水性
媒体、原料及び原料を有用物質に変換する酵素より成る
酵素反応液を入れる工程（１）、この酵素反応液を一定
時間保温し、有用物質を生成せしめる工程（２）、工程
（２）の後に、この液の一定量を多段ストレーナ−を介
して限外濾過膜を付設した限外濾過装置の濾過残液側に
移し、限外濾過膜を介して濾過残液と濾液に分離し、Ｅ
液より有用物質を採取し、濾過残液及び一定の濃度とな
るように調整した水性媒体と原料を酵素反応槽に供給す
る工程（３）、工程（３）の後に工程（２）及び工程（
３）をくり返すことを特徴とする酵素を用しうた有用物
質の製造法に関する。

本発明において使用される酵素反応槽は多段ストレーナ
−を介し、限外濾過膜を付設した槽と連結している酵素
反応槽であれば形状、容量は特に　　　　゛限定されず
、どのようなものでも良い。

本発明で使用する酵素は、微生物の菌体をそのまま用い
てもよいし、微生物の菌体を超音波処理したもの、微生
物の菌体を破砕後酵素活性を有する区分を分画したもの
又は微生物の菌体を酵素が失活しなψ程度の温度、例え
ば温度４００〜５０℃で１０分間〜１０時間処理した菌
体であっても良い。微生物の菌体な得るためには微生物
が生育できる培地で培養し、微生物の菌体を製造すれば
良い。この時に培地中に有用物質又は有用物質を生産す
るための原料を添加すると酵素活性の強い菌体が得られ
る場合もある。

本発明で使用される水性媒体は各種無機塩類及び必要に
応じてメタノール、エタノールなどの水性有機溶剤を含
むものであり、原料を有用物質に変換する酵素の至適−
を維持するためのものであり、これらの酵素の種類によ
って水性媒体の組成は決められる。

本発明で使用される原料とは原料を有用物質に変換する
酵素の基質になるものである。本発明で使用する原料、
原料を有用物質に変換する酵素及び有用物質とは具体的
には例えばフマール酸とアンモニア供与体にアスＡルタ
ーゼを作用させて製造されるアスノ々ラギン酸、アスノ
＋ライン酸にＩ、−アスパルテートβ−デカルビキシラ
ーゼを作用させて製造されるＬ−アラニン、α−ケトイ
ソカシロン酸にＬ−ロイシンデヒドロデナーゼを作用さ
せて製造されるＬ−ロイシン、各種ヒダントインにヒダ
ントイナーゼを作用させて製造される各種芳香族Ｌ−ア
ミノ酸、ＤＬ−２−アミノ−Δ２−チアゾリンー４−カ
ルデン酸にＤＬ−２−アミノ−Δ２−チアゾリンー４−
カル？ン酸氷解酵素を作用させて製造されるＬ−システ
ィン、ＤＬ−α−アミノ−ε−カグロラクタムにＤＬ−
α−アミノ−ε−カプロラクタム氷解酵素を作用させて
製造されるＬ−リジン、各種ヒダントインにジヒドロビ
リミジナーゼを作用させて製造される各種Ｄ−アミノ酸
、各種アシルアミノ酸にアシラーゼを作用させて製造さ
れる各種Ｌ−アミ、ノ酸、インドールにトリプトファナ
ーゼあるいはトリシトファンシンセターゼ等を作用させ
て製造されるＬ−）リット７アン、フェノールにチロシ
ナーゼを作用させて製造されるＬ−チロシン及び３．４
−ジオキシ−Ｌ−フェニルアラニンなどの各種アミノ酸
類、フマル酸にフマラーゼを作用させて製造されるＬ−
リンゴ酸、ヒスチジンにビスチジンアンモニアリアーゼ
ヲ作用させて製造されるウロカニン酸、Ｌ−アミノ酸に
Ｌ−アミノ酸オキシダーゼを作用させて製造される各種
α−ケト酸などの各種有機酸類、澱粉あるいはセルロー
スにアミラーゼあるいはセルラーゼなどを作用させて製
造されるグルコース、シュクロースにインベルターゼを
作用させて製造されるグルコース及び７ラクトース、グ
ルコースにグルコースイソメラーゼを作用させて製造さ
れるフラクトースなどの各種糖類、被ニジリンＧＶ：、
ヘニシリンアシラーゼを作用させて製造される６−ＡＰ
Ａ。

７−フエニルアセドアミトデスアセトキシセフア　　　
Ｉロスポラン酸にセファロス４リンアシラーゼを作用さ
せて製造される７　−ＡＤＣＡなどの各種抗生物質、な
らびに５’−ＩＭＰに５’−ＡＶｉＰデアミナーゼ等を
作用させて製造される５’−ＩＭＦ、酵母菌体から製造
される各種核酸関連物質などがある。有用物質はこれら
の例のような最終製品となりうるものに限定されるもの
では表＜燈終製品を製造する各種の中間生成物であって
もよい。

本発明ｆお−ては酵素反応槽内で一定時間酵素反応を行
なわせた酵素反応液の一定量を多段スト良い。又、酵素
反応槽から限外濾過装置へ移行した濃度に見合う原料の
酵素反応槽への供給も連続的であっても断続的であって
も良い。

限外濾過装置の濾過残液に移された酵素反応液は限外濾
過膜を介して濾過残液と涙液に分離し、涙液より公知の
方法により有用物質を精製する。

濾過残液は酵素反応槽に供給する。

本発明において用いられる限外濾過装置は限外濾過膜を
附設されている装置であればどのような装置でも良い。

限外濾過膜としては有用物質は濾過され、酵素はＦ適さ
れない膜であればどのよう々膜でも使用可能である。

本発明で使用される限外濾過膜としては具体的に高分子
電解質複合体膜、セルロースアセテート膜、硝化セルロ
ース膜、ポリスルホン膜、ナイロン膜、ポリ−ｔｒａｎ
ｓ　−２１５−ジメチルピペラジンテレフタル酸アミド
膜、ポリオレフィンオキシド膜、塩素化ポリアミド膜、
ポリメチルメタアクリレート膜、ポリウレタン−ポリ−
Ｎ−ビニルピロリドンブレンド架橋ハイドログル膜、シ
アンエチル化テリビニルアルコール膜、セラミック膜、
ポリアクリルニトリル膜、酢酸セルロース膜、ポリアミ
ド膜、ポリカーぎネート膜、ポリプロピレン膜、エチレ
ンビニルアルコール共重合体膜、ポリエチレン膜、ポリ
エーテルサルホン膜、ポリフッ化ビニリデン膜、等が挙
げられる。

本発明で使用するストレーナ−は網目構造を有し１段目
のストレーナ−は１０〜１００メツシユの網目によりガ
ム状物質゛・を析出させ、２段目以後のストレーナ−は
１００〜５００メツシユの網目でガム状物質を補集する
構造であればよい。ストレーナ−でのガムの析出はスト
レーナ−における液の線速に関与し、線速か５〜２０　
ｉｎ／　ｓｅｅの付近が最もガム状物質が析出しやすい
。またストレーナ−内だ気泡の巻き込み等があるとさら
にガム析出は激しくなる。

本発明においては上記の多段ストレーナ−は酵素反応槽
の排出側と限外濾過膜を付設した装置の間に設置される
。設置されるストレーナ−の数は２台以上であれば良く
、酵素反応液中に発生する繊維状のガム物質の量及び酵
素反応槽から限外濾過装置に移す酵素反応液の速度など
によりストレーナ−の設置台数は決められる。

（作用及び効果） 本発明にお−ては酵素反応槽と限外濾過装置の間に多段
のストレーナ−を設置することにより、１段目のストレ
ーナ−２次側で発生する繊維状のガム物質を２段目以後
のストレーナ−で捕獲し、この物質が限外ヂ過膜を閉塞
することを防止する。

従って、濾過速度を低下することなく有用物質を製造す
ることができる。また、限外濾過膜の劣化を防ぐことも
でき、限外濾過膜の補修に要する費用及び時間も大巾に
節約することができる。

以下実施例にて説明する。

実施例１ 酵母エキス１０１／ｄｔ、′８！プトン１０１／ｄｔ　
、グルコース５　ｇ／ｄｔ及びＮｔｓＣｌ　５１１／　
ｄｔを含むｐ）１７．０の培地２１を５１容の発酵槽に
入れ、これに大腸菌（ＡＴＣＣ１０７９８）を接種して
、３０℃で２０時間好気的に培養した。培養液を遠心し
て菌体を得／、酵素源とした。次いで下記の工程を行っ
た。

工程（１）：フマル酸濃度００９／ｌにアンモニアを添
加し、ｐＨ８，５に調整した液に上記の酵素源を加え、
酵素液とした。この酵素反応液を酵素反応槽（Ａ槽）に
供給し、３７℃で保温した。

工程（２）　：　１時間保温後にＡ槽の酵素反応液の５
００ｍ１を限外濾過膜、ポリサルホン膜（アミコン社製
）′を付設した槽（Ｂ槽）の内液側に移した。この酵素
反応液を１段目５０メツシユの円筒形金網（表面積１０
０ｃｒｎ２）２段目以後２００メツシユの円筒形金網（
表面積２５　ｃｍ”　）のついたストレーナ−を２段又
は３段直列に通した後に限外濾過膜に送ることによって
限外濾過膜で濾過し、４００　ｍｌを濾過した。実験対
照区としてストレーナ−を１段用い限外濾過を行う実験
を行った。限外濾過膜に残った液をＡ槽に供給し、Ａ槽
の液量が１１でフマル酸濃度が２００１／ｌになるよう
に調整した。この工程（２）の操作を４回くりかえした
。

第１表にこの操作中のＢ槽の内液側の繊維状のガム状物
質の濃度、Ｂ槽の内液を４００　ｍｌ限外濾過する時の
平均炉速、外液側のＬ−アス・ぐラギン酸の濃度を示し
た。

なお、繊維状のガム物質は内液２０ＴＬｌを採取し５０
０Ｉで１０分間遠心分離し、沈澱物を乾燥させた重量を
もって表わした。

限外濾過は平均濾過圧１　ｋｇ／ｃｍ２．循環流速３１
Ａｍｌｎ、温度３０℃で行ない、限外濾過速度は限γ２ 外濾過膜１−１時間当りの濾過液量で表わした。

以下の実施例でも同様の測定法を用いた。

第１表に示したように多段スト１／−ナーを通すことに
より反応液内のがム状物質は減少し濾過速度も速い。

実施例２ フマル酸５ｇ／ｌ、大豆油５　ｇ／ｌ　、オレイン酸５
Ｅｌ／ｌ、　ＫＨ２ＰＯ４１ｊｉ／ｌ　１ＭｇＳＯ４・
７ｒ−ｘ２ｏ　１　ｇ／ＩＪ　、大豆蛋白酸加水分解物
１．，８ｍｌ／ｌを含むｐＨ７，０の培地２１をツヤ−
ファーメンタ−に仕込み、同様の培地で３０℃１５時間
培養したシー−トモナス・ダク＊（ＩＡＭｌ、１５２）
（７）種培養液１００ｍｌを接種シテ、３０℃で１５時
間培養した。次いで下記の工程を行った。

工程（１）　：　１．　ＯＭＬ−アス・！ラギン酸及び
１０−３Ｍピリドキサールリン酸を含むｐＨ５，５の溶
液に上記の酵素源を加え、酵素反応液とした。この酵素
反応液を酵素反応槽（ＡＩ’りに供給し、３７℃で保温
した。

工程（２）　：　１０時間保温後に、Ａ槽の酵素反応液
の５００ｍ１を限外濾過膜、セルロースアセテート膜（
旭メディカル社製）を付設した槽（Ｂ槽）の内液側に移
した。この酵素反応液を１段目５０メツシーの円筒形金
網（表面積１００ｔｙｎ２）　２段目以後２００メツシ
ユの円筒形金網（表面積２５　ｃｍ２）のついたストレ
ーナ−を２段又は３段直列に通した後に限外濾過膜に送
ることによって限外濾過膜で濾過し、４００ｍ１を濾過
した。実験対照区としてストレーナ−を１段用い限外濾
過を行う実験を行った。限外濾過膜に残った液をＡ槽に
供給し、Ａ槽の液量が１１でアスノ４’ラギン酸ＩＭ、
ピリドキサールリン酸１０’−３Ｍ　（Ｐｔ＋５．５　
）になるように調整した。

この工程（２）の操作を４回くりかえした。

第２表にこの操作中のＢ槽の内液側の繊維状のガム状物
質の濃度、Ｂ槽の内液を４００ｍ１限外濾過する時の平
均炉速、外液側のＬ−アラニンの濃度を示した。

■ 第２表に示したように多段ストレーナ−を通すことによ
り反応液内のガム状物質は減少し濾過速度も速い。

実施例３ グルコース５　ｇ／ｌ、硫安５　ｇ／ＩＩ、リン酸−カ
リウムＩ　Ｅｌ／ｌ、リン酸二カリウム３１１／ｌ！、
硫酸マグネシウムセ水塩０，１１１／ＩＩ、塩化カルシ
ウムニ水塩０．０１　ｇ／ｌ、　コ−７スティーデリカ
−５０ｍ１／１を含む培地（ｐ）（７，０）を５００　
ｍｌ容フラスコに入れ、１２０℃、１５分間殺菌した。

これにフラはバクテリウム・アミノダネスＦＥＲＭ　−
Ｐ　３１３３を接種し、３０℃で１２時間前培養を行な
った。一方上記培地にＤＬ　−）リフトファンヒダント
イン０．３５係を添加した培地２１を・シャーファーメ
ンタ−に仕込み殺菌後、上記前培養液を１００ｍ／！接
種し、３０℃、２０時間培養した。培養液を遠心して菌
体を得、酵素源とした。次いで下記の工程を行った。

工程（１）：　３０１／／ｌ　ＤＬ−５−ベンジルヒダ
ントイン溶液（ｐＨ８，０）に上記の酵素源を加え、酵
素（１８つ 反応液とした。この酵素反応液を酵素反応槽（Ａ槽）Ｋ
供給し、３７℃で保温した。

工程（２）　：　２０時間保温後にＡ槽の酵素反応液の
５００Ｉｎ！！を限外濾過膜、酢酸セルロース膜（ダイ
ノル社製）を付設した槽（ＢＩ３）の内液側に移した。

この酵素反応液を１段目５０メツシユの円筒形金網（表
面積１００ｚ２　）、２段目以後２００メツシユの円筒
形金網（表面積２５ｃｍ２）のついたストレーナ−を２
段又は３段直列に通した後に限外濾過膜に送ることによ
って限外濾過膜で沖過し、４００ｍ／を濾過した。実験
対照区としてストレーナ−を１段用い限外ｐ過を行う実
験を行った。限外濾過膜に残った液をＡ槽に供給し、Ａ
槽の液量が１１でＤＩ、−５−ペン・ゾルヒダントイン
３０　ｊｊ／ｌ　　（ｐＨ８，０９になるように調整し
た。この工程（２）の操作を４回くりかえした。

第３表にこの操作中のＢ槽の内液側の繊維状のガム状物
質の濃度、Ｂ槽の内液を４．００　ｍ、ｌ限外０ｊ過す
る時の平均沢速、外液側のＬ−フェニルアラニンの濃度
を示した。

第３表に示したように多段ストレーナ−を通すことによ
り反応液内のガム状物質は減少し濾過速度も速い。

実施例４ 実施例３の酵素源を用い、次いで下記の工程を行った０ 工程（１）：　１５ｇ／ｉ　ＤＬ−５−インドリルヒダ
ントイン溶液（ｐｔ（８，０）に上記の酵素源を加え、
この酵素反応液を酵素反応槽（Ａ槽〕に供給し、３７℃
で保温した。

工程（２）　：　１．０時間保温後にＡ槽の酵素反応液
の５００　ｍｌを限外濾過膜、ポリエーテルサルホン（
ダセ イＩル社製）を付設した槽（Ｂ槽）の内液側に移した。

この酵素反応液を１段目５０メツシユの円筒形金網（表
面積１００１００ｃ、２段目以後２００メツシユの円筒
形金網（表面積２５ｚｚ）のついたストレーナ−を２段
又は３段「１列に通した後ｆ限外濾過膜に送ることによ
って限外濾過膜で濾過し、４００　ｍ、ｌを濾過した。

実験対照区としてストレーナ−を１段用い限外濾過を行
う実験を行った。限外濾過膜に残った液をＡ槽に供給し
、Ａ槽の液量が１１でＤＬ−５−インドリルヒダントイ
ン濃度が１５１１／ｌ、ｐｉ（が８．０になるように調
整した。この工程（２）の操作を４回くりかえした。

第４表にこの操作中のＢ槽の内液側の繊維状のガム状物
質の濃度、Ｂ槽の内液を４００ｍ１限外沢過する時の平
均涙速、外液側のＬ　−）　リゾトファンの濃度を示し
た。

第４表に示したように多段ストレーナ−を通すことによ
り反応液内のガム状物質は減少し瀘過速度も速い。

実施例５ 実施例１の酵素源を用い次いで下記の工程を行つｆ？−
Ｏ 工程（１）：フマール酸２００ｇ／ｌにＮａＯＨを添加
しｐＨ７，Ｑに調整した液に上記の酵素源を加え酵素反
応液とした。この酵素反応液を酵累反応槽（Ａ槽）に供
給し、３７℃で保温した。

工程（２）　：　６時間保温後にＡ槽の酵素反応液の５
００　ｍｌヲ限外ＰＡ膜、エチレンビニルアルコール膜
（日東電工社製）を付設したＭ（Ｂ槽）の内液側に移し
た。この酵素反応液を１段目５０メツシユの円筒形金網
（表面積１００ｒｒｎ２）、２段目以後２００メツシユ
の円筒形金網（表面ｎｊ、２５　ｃｍ２）のついたスト
レーナ−を２段又は３段直列に通した後に限外濾過膜に
送ることによって限外濾過膜で　　　１濾過し、４００
　ｍｌを濾過した。実験対照区としてストレーナ−を１
段用い限外濾過を行う実、験を行りた。限外濾過膜に残
った液をＡ槽に供給し、Ａ槽の液量が１１でフマル酸の
濃度が２００１１／Ｉｔ。

ＰＨが７．０になるように調整した。この工程（２）の
操作を４回くりかえした。

第５表にこの操作中のＢ槽の内液側の繊維状のガム状物
質の濃度、Ｂ槽の内液を４００ｒｎｌ限外濾過する時の
平均炉速、外液側のＬ−リンゴ酸の濃度を示した。

第５表に示したように多段スｌ−１／−ナーを通すこと
により反応液内のガム状物質は減少しｐ過速度も速い・ 実施例６ グルコース２０　ｇ／　ｌ、　ＫＨ２ＰＯ４２ｇ／ｌ？
、　ＭｇＳＯ４・７Ｈ２０，１ｇ／ｌ、　　ＦｅＳＯ４
−７Ｈ２００，０２ｇ／／ｌ、ＭｎＳＯ４’　７Ｈ２０
０，６２ｇ／ｌｌ、　（ＮＨ４）２Ｓｏ４：Ｈ７／ｌ、
大豆蛋白分解液１０ｍ１／ｌを含む培地（Ｐ■］６．５
　）　２１１をジャーファーメーターに張り込み、１２
０℃で１５分間加熱・滅菌した。これにノー−トモナス
・デスモリチカＦＥＲＭ−Ｐ２８１６の種培養液５０ｍ
１Ｅを接種し、３０℃にて通気攪拌培養（１／２ｖｖｗ
、６　Ｑ　Ｏｒｐｍ　）を行なった。培養途中培養液の
ＰＩ］は６５にコントロールし、培養６時間後にＤＬ−
ＡＴＣ（ＤＬ−２−アミノ−チアゾリン−４−カルボン
酸）艶 を０．１％添加して、再に４時間培養を行なった。

得られた培養液を４０℃に３時間保持して熟成を行った
後、培養液を遠心して菌体な集め、酵素液とした。次い
で下記の工程を行った。

工程（１）　：　ＤＬ−ＡＴＣ１係、ＫＨ２ＰＯ４１循
、ヒドロキシルアミン・ＨＣ，ｅ　０１１４係を含みｐ
Ｈ３，０に調整した液に上記の酵素源を加え酵素反応液
とした。

この酵素反応液を酵累反応槽（Ａ槽）に供給し、３７℃
で保温した。

工程（２）　：　２０時間保温後にＡ槽の酵素反応液の
５００ｍ１を限外ｐ過膜、２リオレフイン膜（す）４化
成社製）を付設した槽（Ｂ槽〕の内液側に移した。

この酵素反応液を１段目５０メツシユの円筒形金網（表
面積１００ｍ２）、２段目以後２００メツシーの円筒形
金網（表面積２５ｒｒｎ２）のついたストレーナ−を２
段又は３段直列に通した後に限外濾過膜に送ることによ
って限外濾過膜で濾過し、４００ｍ１を濾過した。実験
対照区としてストレーナ−を１段用い限外濾過を行う実
験を行った。限外濾過膜に残った液をＡ槽に供給し、Ａ
槽の液量が１１でＤＬ−ＡＴＣＩ係、ＫＨ２ＰＯ４１チ
、　ヒドロキシルアミン・ＨＣｌ　０．１４係、ｐＨ８
，０になるように調整した。この工程（２）の操作を４
回ぐりかえ−した。　　　　　Ｉ第６表にこの操作中の
Ｂ槽の内液側の繊維状のガム状物質の濃度、Ｂ槽の内液
を４００　ｒｎｌ限外沖遇する時の平均炉速、外液側の
Ｌ−シスチンの濃度を示した。

第６表に示したよって多段ストレーナ−を］１０すこと
とより反応液内のガム状物質は減少し濾過速度も速い。

実施例７ エルビニーア・−、ルビコーラＡＴＣＣ２１４３３を肉
汁寒天斜面培地上に２８℃にて２０時間生育さぜ、５０
０ｍ／容坂ロコルペン内に下記組成の培地６０ｍ１に１
白金耳接種し、３１℃で２４時間振盪培養した。

培地組成 Ｌ−チロシン　　　　　２９／ｌ リン酸・１カリウム　　　　　　１　　〃硫酸マグネシ
ウム　　　　　０．５〃 フマール酸　　　　　　７　〃 酵母エキス　　　　　１０　〃 肉エキス　　　　　　　５　〃 ピリドキシン　　　　０．１〃 （ｐＨ７，５） この培養液２１を遠心分離して集菌し酵素液とした。次
いで下記の工程を行った。

工程（１）：フェノール１０　ｇ／ｌ、β−クロロアラ
ニン１０　ｇ／ｌにアンモニアを加え−１８．０に調整
した液に上記の酵素源を加え酵素反応液とした。この酵
素反応液を酵累反応槽（Ａ槽）に供給し、３７℃で保温
した。

工程（２）　：　１０時間保温後ＫＡ槽の酵素反応液の
５００ｍ１を限外涙過膜、ポリアミド膜（日東電工社製
）を付設した槽（Ｂ槽）の内液側に移した。この酵素反
応液を１段目５０メツシユの円筒形金網（表面積１００
ｃｍ２）、２段目以後２００メツシユの円筒形金網（表
面積２５Ｌ：ｔｎ２）のついたストレーナ−を２段又は
３段直列に通した後に限外濾過膜に送ることによって限
外濾過膜で濾過し、４００ｍ１を濾過した。実験対照区
としてストレーナ−を１段用い限外濾過を行う実験を行
った。限外涙過膜に残った液をＡ槽に供給し、Ａ槽の液
量が１１でフェノール１０１１／ＩＩ、β−クロロアラ
ニン１０、！？　／　ｌ　ｐＨ８，０になるように調整
した。この工程（２）の　　１操作を４回くりかえした
。

第７表にこの操作中のＢ槽の内液側の繊維状のガム状物
質の濃度、Ｂ槽の内液を４００ゴ限外濾過する時の平均
ν速、外液（ＩＩＩのＬ−チロシンの濃度を示Ｉ−だ。

第７表に示したように多段ストレーナ−を通すことＫよ
り反応液内のガム状物質は減少し濾過速度も速い。

実施例８ 実施例６と同様にして得た酵素を酵素源とした。

次いで下記の工程を行った。

工程（１）　：　ＤＬ−ＡＴＣ１０１／ｌ　、　ＫＨ２
ＰＯ４１０１！／ｌ。

ヒドロキシルアミン・ＨＣｌ　１．５　ｇ／ＩＩ、アセ
トン５０１１／１１を含みＰＨ８，０に調整した液に上
記の酵素源を加え酵素反応液とした。この酵素反応液を
酵素反応槽（Ａ槽）Ｋ供給し、３７℃で保温した。

工程（２）　：　２０時間保温後にＡｉの酵素反応液の
５００ｗＬｌを限外濾過膜、ポリメチルメタアクリレー
ト膜（東し社製）を付設した槽（Ｂ槽）の内液側に移し
た。この酵素反応液を１段目５０メツシユの円筒形金網
（表面積１００ｃｒｎ”）、２段目以後２００メツシユ
の円筒形金網（表面積２５ｃｒｎ２）のついたストレー
ナ−を２段又は３段直列に通した後に限外濾過膜に送る
ことによって限外濾過膜で濾過し、４．　ＯＯｍｅを濾
過した。実験対照区とじてストレーナ−を１段用い限外
濾過を行う実験を行った。限外濾過膜に残った液をＡ槽
に供給し、Ａ槽の液量が１１でＤ　Ｌ　−ＡＴＣ１０ｇ
／ｌ　、　ＫＩ（２ＰＯ４１，ＯＥ／１．ヒドロキシル
アミン・Ｈｃｔ　１．５１／　ｌ　、アセトン５０　ｇ
／ｌ　ｐｌ（８，ＯＫなるよう（（調整した。この工程
（２）の操作を４回くりかえした。得られた反応濾液４
００　ｍｌにモノクロル酢酸ナトリウム６．６９を添加
し、ＮａＯＨを加えてｐＨ１３，５に調整し、３０′℃
にて１時間反応を行なＶＳＦ３−カルづ？キシメチルー
Ｌ−システィン（ＳＭＣ）を得た。

第８表にこの操作中のＢ　ＩＷＯ内液側の繊維状のガム
状物質の濃度、Ｂ槽の内液を４００ｍ１限外濾過する時
の平均涙速、外液側のＳＭＣの濃度を示した。

□ 第８表に示したように多段ストレーナ−を通すことによ
り反応液内のガム状物質は減少し濾過速度も速い。

実施例９ ポリ啄ゾトン１０　ｇ／ｌ、酵母エキス１０１／／ｌ。

Ｋ２ＨＰＯ４３ｇ／１１に２ＨＰＯ４１ｇ／１１ＭｇＳ
Ｏ４・７Ｈ２００，５ｇ／ｌ！、Ｌ−フェニルアラニン
５ｇ／ｌを含む培地（ｐＨ６，０）を５００ｒｒＬｌ容
フラスコに５０ｒｆＬｌ入れ１１５℃で１５分間殺菌し
た。これにマルツエキス寒天培地で２５℃、７日間培養
したコラトスチリウム・コロカシェＩＦ０６６９８を一
白金耳接種し、２５℃にて１４日間培養した。この培養
液２１を遠心して菌体を得、酵素源とした。次いで下記
の工程を行った。

工程（１）　：　２０　ｉ／ｐ桂皮酸、２８係アンモニ
ア水５５０ｄ＃を含む液を塩酸でｐＨ１０，５に調整し
た液に上記の酵素源を加え酵素反応液とした。この酵素
反応液を酵素反応槽（Ａ槽）に供給し、３０℃で保温し
た。

工程（２）　：　７２時間保温後にＡ槽の酵素反応液の
５００ｍ１を限外濾過膜、ポリフッ化ビニリデン膜（Ａ
ｂｃｏｖ社製）を付設した槽（Ｂ槽）の内液側に移した
。この酵素反応液を１段目５ｏメノンユの円筒形金網（
表面積１００ｃｍ２）、２段目以後２００メツシユの円
筒形金網（表面積２５ｍ２）のついたストレーナ−を２
段又は３段直列に通した後に限外濾過膜に送ることとよ
って限外濾過膜で濾過し、４００　ｍｌを諷過した。実
験対照区としてストレーナ−を１段用い限外濾過を行う
実験を行った。限外濾過膜に残った液をＡ槽に供給し、
入槽の液量７％ＩＪｆ桂皮酸ノ濃度が２０　ｇ／ｚ　、
　ｐＨが１−０．５　ニなるよって調整した。、この工
程（２）の操作を４回くりかえした。

第９表にこの操作中のＢ　ｖｉの内液側の繊維状のガム
状物質の濃度、Ｂ槽の内液を４００　ｍｌ限外濾過する
時の平均Ｐ速、外液側のし一フェニルアラニンの濃度を
示した。

第９表に示したように多段ストレーナ−を通すことによ
り反応液内のガム状物質は減少し濾過速度も速い。

実施例１０ グリセロール２０Ｆ／ｌ、硫酸アンモニウム３１／ｌ　
、　ＫＨ２ＰＯ４１，ｇ／　ｌ　、　Ｋ２ＨＰＯ４３ｇ
／１３　、　ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，５１１１１！　
、　　ＦｅＳＯ４・７Ｈ２０１０ｍ９／ｌ　、　ＭｎＳ
Ｏ４−４、Ｈ２Ｏ１０ｍ９／Ｉ！、酵母エキ、’！、１
０ｊ９／１１．ペプトン１０　ｇ／ＩＩ　、マルトエキ
ス５　ｇ／ｌ、クロトン４タイン硫酸塩３　ｊｊ／ｌ、
炭酸力１１／’／ウム４０Ｆ／ｌ（Ｐ’７．０〕を５０
０ｍ１容フラスコに５０ｍ／入れ１２０℃で１５分間殺
菌した。これにブイヨン寒天培地で３０℃にて３０時間
培養したアシネトバクタ−・ルオーフィＡＴＣＣ９０３
６を−白金耳接種し、３０℃で１６時間培養した。この
培養液２１を遠心分離して菌体を得、酵素源とした。次
いで下記の工程を行った。

工程（１）：クロトンベタイン塩酸塩１５ｇ／ｌ、０、
１　Ｍ　＋）ン酸緩衝液を含みｐｉ（６，ＯＫ調整した
液に上記の酵素源を加え酵素反応液とした。。この酵素
反応液を酵素反応槽（Ａ槽）に供給し、３０℃で保温し
た。

工程（２）　：　２０時間保温後にＡ槽の酵素反応液の
５ＱＱｍｌを限外濾過膜、シアノエチル化ｌ？リビニル
アルコール膜を付設した槽（Ｂ槽）の内液側に移した。

この酵素反応液を１段目５０メツシユの円筒形金網（表
面積１００ｃｒｎ２）、２段目以後２００メツシユの円
筒形金網（表面積２５　Ｌ：ｒｎ”　）のついたストレ
ーナ−を２段又は３段直列に通した後に限外濾過膜に送
ることによって限外濾過膜で濾過し、４００ｍ１を濾過
した。実験対照区としてストレーナ−を１段用い限外濾
過を行う実験を行った。限外ヂ過膜に残った液をＡＶに
供給し、Ａ槽の液量が１１でクロトンベタイン塩酸塩１
５１１／ｌ、リン酸緩衝液０．１Ｍ（ｐＨ６，０）にガ
るように調整した。

この工程（２）の操作を４回くりかえした。

第１０表にこの操作中のＢ槽の内液側の繊維状のガム状
物質の濃度、Ｂ槽の内液を４．　ＯＯｍｌ限外濾過する
時の平均炉速、外液側のＬ−カルニチンの濃度を示した
。

第１０表に示したように多段ストレーナ−を通すことに
より反応液内のがム状物質は減少し濾過速度も速１７′
１．Ｊ 実施例１１ トリットファン２　ｇ／ｌ　、　Ｉ（Ｈ２ＰＯ４５ｇ／
ｌ　。

ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，５ｇ／ｌ　、　部用ドユ■≠
Ｅト男１１ＭｎＳＯ４醗４　Ｈ２Ｏ２ｐｐｍ　、グリセ
ロール２　ｇ／ｌ　、酵母エキス２　ｇ／ｌ、カザミノ
酸５　ｇ／ｌ　（ｐ’（７，０）からなる培地ｆ３’Ｑ
ｍｔにエルビニア・ヘルビコラＡＴＣＣ２１，４３３を
１白金耳接種１，３１℃にて２０時間培養した。この培
養液２１を原石分離して菌体を得、酵素源とした。次い
で下記の工程を行った。

工程（１）：インドールｉ、ＯＦ＃、１！、′ルピン酸
Ｎａ１２ｇ／ｌ、酢酸アンモニウム１．．２．９／ｌを
含みＰｌ−１８，０に調整した液に上記の酵素源を加え
酵素反応液とした。この酵素反応液を酵素反応槽（Ａ　
漕）に供給し、３０℃で保温した。

□ 工程（２）″、１０時間保温後にＡ１曹の酵素反応液の
５００ｍＺを限外濾過膜、セラミック膜（東芝セラミッ
ク社製）を付設した槽（ＢＮ）の内液側に移した。この
酵素反応液を１段目５０メツシユの円筒形金網（表面積
１００α２〕、２段目以後２００メツシユの円筒形金網
（表面積２５Ｌｙｎ２）のついたストレーナ−を２段又
は３段直列に通した後に限外濾過膜に送ることによって
限外ｐ過膜で濾過し、４００ｍ１を濾過した。実験対照
区としてストレーナ−を１段用い限外沖過を行う実験を
行った。限外濾過膜に残った液をＡ槽に供給し、Ａ槽の
液量が１１でインドール１０ｇ／ｌ、ピルビン酸Ｎａ１
２ｇ／ｌ、酢酸アンモニウム１．２　ｇ／ｌ　　（ｐＨ
８，０）になるように調整した。この工程（２）の操作
を４回くりかえした。

第１１表にこの操作中のＢ槽の内液側の繊維状のガム状
物質の濃度、Ｂ槽の内液を４００ｍ１限外濾過する時の
平均炉速、外液側のＬ　−）　ＩＪブトファンの濃度を
示した。

第１１表に示したように多段ストレーナ−を通すことに
より反応液内のガム状物質は減少し濾過速度も速い。

実施例１２ ＤＬ−α−アミノ−ε−カプロラクタム（ＤＬ−ＡＣＬ
　）　２１／Ｉ！、酵母エキス１０９／ｌ、−ｅプトン
１ｏｇ／ｌ、　ＮａＣｌ２．！ｉ７／Ｊ　（ｐＨ７，０
）の組成の培地５０ｍ１を５００　ｍｌ容坂ロフラスコ
に入れ殺菌した。

これにバチルス・サーキュランスＦＥＲＭ　−Ｐ　３６
１２を接種し、３０℃で２４時間振盪培養した。この培
養液２１を遠心分離して菌体を得、酵素源とした。次い
で下記の工程な行った。

工程（１）　：　）Ｇ（２ＰＯ４１０ｊ！／ｌ　、ビリ
ドキサルリン酸０．１　ｇ／ｌ　、　ＤＬ　−ＡＣＬ　
５１１／ｌを含む液をｐＨ７，０に調整した液に上記の
酵素源を加え酵素反応液とした。この酵素反応液を酵素
反応槽（Ａ槽）に供給し、３０℃で保温した。

工程（２）　：　４０時間保温後にＡ槽の酵素反応液の
５００ｍ１を限外濾過膜、ポリアクリロニトリル膜（旭
化成社製〕を付設した槽（Ｂ槽）の内液側に　　、移し
た。この酵素反応液を１段目５０メツシユの円筒形金網
（表面積１００ｃｒｎ”）、２段目以後２００メツシユ
の円筒形金網〔表面積２５σ２〕のついたストレーナ−
を２段又は３段直列に通した後に限外濾過膜に送ること
によって限外濾過膜で濾過し、４００ｍ１を濾過した。

実験対照区としてストレーナ−を１段用い限外濾過を行
う実験を行った。限外濾過膜に残った液をＡ槽に供給し
、Ａ槽の液量が１１でＫＨ２ＰＯ４１０１／１１　、ビ
リドキサルリン酸ｏ、　１ｐ７１．　ＤＬ−ＡＣＬ　５
　ｇｙＱｔ　（ｐＨ７，０）になるように調整した。こ
の工程（２）の操作を４回くりかえした。

第１２表にこの操作中のＢ槽の内液側の繊維状のガム状
物質の濃度、Ｂ槽の内液を４００１ｆＬｌ限外瀘過する
時の平均涙速、外液側のＬ　−ＩＪジンの濃度を示した
。

■ ＠１２表に示したように多段ストレーナ−を通すことに
より反応液内のガム状物質は減少し濾過速度も速い。

実施例１３ グルコース５１１／１１（ＮＨ４）２８０４５　Ｅ／１
．　ＫＩ（２ＰＯ４１１／ｌ、　Ｋ２ＨＰＯ４３Ｉ！／
１１ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，５１１／ｌ。

ＦＩＩＩＳＯ４−７Ｉ（２０１ｏｍｙ＃１ＭＴｌ５Ｏ４
−４）（２０１ｏｍｙ＃、酵母エキス１０　ｇ／１．ペ
ゾトン１０　ｇ／１％ＤＬ−５−イソゾロビルヒダント
イン２ｇ／ｌを含む培地（ｐｌ（７，０）を５００１ｎ
！！容フラスコに５０ｒｌｌ入れ１２０℃で１５分間殺
菌した。これにブイヨン寒天培地で３０℃に２４時間培
養したフラｙｌｒノ々クテリウム・フカタムＦＥＲＭ　
Ｐ　−７０５３を１白金耳液種し、３０℃で２０時間培
養した。この培養液２！を遠心分離して集菌して菌体な
得、酵素源とした。次いで下記の工程を行った。

工程（１）：α−５−イソゾロビルヒダントイン２０１
Ｉ１％０．ＬＭ）リス緩衝液を含むｐＨ９，０に調整し
た液に上記の酵素源を加え酵素反応液とした。

この酵素反応液を酵素反応槽（Ａ槽）に供給し、３０℃
で保温した。

工程（２）　：　２０時間保温後にＡ槽の酵素反応液の
５００１ｎｌ！を限外濾過膜、高分子電解質複合体膜（
ロース・ブーラン社製）を付設した槽（Ｂ槽）の内液側
に移した。この酵素反応液を１段目５ｏメツシユの円筒
形金網（表面ｆＲ１００ｔｙｎ２）、２段目以後２００
メツシユの円筒形金網（表面積２５ｃｒｎ２）のついた
ストレーナ−を２段又は３段直列に通した後に限外濾過
膜に送ることによって限外濾過膜で涙過し、４００ゴを
涙過した。実験対照区としてストレーナ−を１段用い限
外濾過を行う実験を行った。限外濾過膜に残った液をＡ
槽に供給し、Ａ槽の液量が１１でＤＬ−５−インプロピ
ルヒダントイン２０１！／ｌ、０．１　Ｍ　）リス緩衝
液（ｐＨ９，０）になるように調整した。この工程（２
）の操作を４回くりかえした。

第１３表にこの操作中のＢ槽の内液側の繊維状のガム状
物質の濃度、Ｂ槽の内液な４００ｍ１限外涙過する時の
平均ｐ速、外液側のＤ−バリンの濃度を示した。

第１３表に示したように多段ストレーナ−を通すことに
より反応液内のがム状物質は減少し涙過速度も速い。

実施例１４ グｙｖ　：ｌ−ス１０　Ｅ　／　ｌ　−Ｋ２ＨＰＯ４２
１１／　ｌ　、ＫＨ２ＰＯ４１１／ｌ　、　ＮＨ４Ｃｔ
１１１／ｌ、ＭｇＳＯ４−７Ｈ２Ｏ０，２ｆＺ／Ｌ酵母
ｘキス１１１／ｌ　、　Ｌ−Ｈｌｓ　・ＨＣｌ　Ｏ，２
、！７／ｄｔヲ含む培地（ｐｔ（７，Ｏ）　５０　ｍｌ
にフラボバクテリウム、喝−１フラペツセンス（ＩＦ０
３０８５）を−白金耳接種し、３０℃にて２４時間振盪
培養した。この培養液２１を遠心分離して菌体な得、酵
素源とした。次いで下記の工程を行った。

工ａ（１：　ＤＬ　−ヒスｆ　’）　７２０１／ｌ液ヲ
ｐＨ９，０に調整した液に上記の酵素源を加え酵素反応
液とした。この酵素反応液を酵累反応槽（Ａ槽）に供給
し、３５℃で保温した。

工程（２）　：　４０時間保温後にＡ槽の酵素反応液の
５００ｄを限外濾過膜、ポリサルホン膜（旭化成社製）
を付設した槽（Ｂ槽）の内液側に移した。この酵素反応
液を１段目５０メツシユの円筒形金網（表面積１００　
ｔｍ”　）、２段目以後２００メツシユの円筒形金網（
表面積２５ｃｒｎ２）のついたストレーナ−を２段又は
３段直列に通した後に限外濾過膜に送ることによって限
外濾過膜で濾過し、４００Ｍを涙過した。実験対照区と
してストレーナ−を１段用い限外濾過を行う実験を行っ
た。限外濾過膜に残った液をＡ槽に供給し、Ａ槽の液量
が１１で］）Ｌ−ヒスチジン２ｏ１！／ｌ　（ＰＨ９，
０）になるように調整した。との工程（２）の操作を４
回くりかえした。

第１４表にこの操作中のＢ槽の内液側の繊維状のガム状
物質の濃度、Ｂ槽の内液を４００４限外瀘過する時の平
均Ｆ速、外液側のウロカニン酸及びＤ−ヒスチジンの濃
度を示した。

第１４表に示したように多段ストレーナ−を通すことに
より反応液内のガム状物質は減少し濾過速度も速い。

実施例１５ グルコース柵ｇ　／　１１−　　（ＮＨ４）２５Ｏ４５
１／　／　Ａ！、ＫＨ２ＰＯ４１ｇ／ｌ！、Ｋ２ＨＰＯ
４１ｇ／１１　、　　ＭｇＳＯ４−７Ｈ２Ｏ０，５ｆ！
／ｌ　、　ＦｅＳＯ４”　７Ｔ（２０１０ｍ９／１１　
、　ＭｎＳＯ４’４Ｈ４Ｈ２Ｏ１０／ｌ、酵母エキス１
０　ｊｉ／ｌ　、　マルッｘキス５、！ｉｌ／１１．炭
酸カルシウ炭酸カルシウム４訃１２０℃で１５分間殺菌
した。これにブイヨン寒天培地で３０℃にて２４時間培
養したエシェリヒア　−　コリＦＥＲＭ　Ｐ　−　７　
０　５　５を１白金耳接種し３０’Ｃで２０時間培養し
た。この培養液２１を遠心分離して集菌して菌体を得、
酵素源とした。次いで下記の工程を行った。

工程（１）：　Ｌ−７ス＝５キン酸１００．９／ｌ，Ｌ
−フェニルアラニンメチルエステル塩酸塩２０（Ｊｇ／
Ｉｌ。

０、　Ｉ　Ｍ　ＩＪン酸緩衝液を含む溶液をＰ［（　５
．　４に調整した液に上記の酵素源を加え酵素反応液と
した。この酵素反応液を酵累反応槽（Ａ槽）に供給し、
３７℃で保温した。

工程（２）　：　２　０時間保温後にＡ槽の酵素反応液
の５００ｍノを限外濾過膜、目？リザルホン膜（住友ベ
ークライト社製〕を付設した槽（Ｂ槽）の内液側に移し
た。この酵素反応液を１段目５０メツシユ円筒形金網（
表面積１．　Ｏ　Ｏ　ｃｍ２）、２段目以後２００　・
メツシュの円筒形金網（表面積２５ｔＭ２）のついたス
トレーナ−を２段又は３段直列・に通した後に限外濾過
膜に送ることによって限外濾過膜で濾過し、４　０　０
　ｍ．ｌを濾過した。実験対照区としてストレーナ−を
１段用い限外濾過を行う実験を行った。限外濾過膜に残
った液をＡ槽に供給し、Ａ槽の液量力１．　ｌ　テＬ　
−　７　スノ４　ラキ７酸１００Ｆ／６，Ｌーフェニル
アラニンメチルエステル塩酸［　２　０　０　ｆ！／ｌ
、０、１Ｍリン酸緩衝液（　ｐ’（　５．　４　）にな
るように調整した。この工程（２）の操作を４回くりか
えした。

第１５表にこの操作中のＢ僧の内液側の繊維状のガム状
物質の濃度、Ｂ槽の内液を４００ｍ１限外濾過する時の
平均炉速、外液側のアス・２ルテームの濃度を示した。

第１５表に示したように多段ストレーナ−を通すことに
より反応液内のガム状物質は減少し濾過速度も速い。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 酵素反応槽の排出側が２個以上直列につながったストレ
   ーナーに接続されており、ストレーナーの排出側は限外
   濾過膜を付設した限外濾過装置に接続されており、限外
   濾過装置の濾過残液側は酵素反応槽に接続されている装
   置を用い、酵素反応槽に水性媒体、原料及び原料を有用
   物質に変換する酵素より成る酵素反応液を入れる工程（
   １）、この酵素反応液を一定時間保温し、有用物質を生
   成せしめる工程（２）、工程（２）の後に、この液の一
   定量を２個以上直列につながったストレーナーを介して
   限外濾過膜を付設した限外濾過装置の濾過残液側に移し
   、限外濾過膜を介して濾過残液と濾液に分離し、濾液よ
   り有用物質を採取し、濾過残液、一定の濃度となるよう
   に調整した水性媒体及び原料を酵素反応槽に供給する工
   程（３）、工程（３）の後に工程（２）及び工程（３）
   をくり返すことを特徴とする酵素を用いた有用物質の製
   造法。