JPS61289881A - 重水素含有物質および植物細胞培養によるその生産 - Google Patents
重水素含有物質および植物細胞培養によるその生産Info
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- JPS61289881A JPS61289881A JP60132809A JP13280985A JPS61289881A JP S61289881 A JPS61289881 A JP S61289881A JP 60132809 A JP60132809 A JP 60132809A JP 13280985 A JP13280985 A JP 13280985A JP S61289881 A JPS61289881 A JP S61289881A
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/12—Unicellular algae; Culture media therefor
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/0018—Culture media for cell or tissue culture
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は重水素含有物質および植物細胞培養によるその
生産、特に重水素原子を含有する植物細胞培養用培地、
該培地を用いる植物細胞培養方法、該培養方法によって
得られる植物細胞培養物、該培養物から重水素原子含有
物質を採取する方法および該採取方法によって得られる
重水素含有物質に関する。
生産、特に重水素原子を含有する植物細胞培養用培地、
該培地を用いる植物細胞培養方法、該培養方法によって
得られる植物細胞培養物、該培養物から重水素原子含有
物質を採取する方法および該採取方法によって得られる
重水素含有物質に関する。
（従来の技術）
重水素原子はいイつゆる標識化合物を製造４−ろ際の安
定核種の一つとして汎用されており、ごれまで重水素原
子で標識した多数の無機および有機化合物が知られてい
る。しかしながら、これらの化合物は、通常、化学合成
によって製造されており、分子構造が複雑になるにつれ
、重水素原子含有率の高い化合物を合成オろことは困雉
となる。他方、重水素原子含有率の高い化合物（」、近
年、動物に対する生理活性研究用試剤としてその需要が
高まりつつある。
定核種の一つとして汎用されており、ごれまで重水素原
子で標識した多数の無機および有機化合物が知られてい
る。しかしながら、これらの化合物は、通常、化学合成
によって製造されており、分子構造が複雑になるにつれ
、重水素原子含有率の高い化合物を合成オろことは困雉
となる。他方、重水素原子含有率の高い化合物（」、近
年、動物に対する生理活性研究用試剤としてその需要が
高まりつつある。
（発明が解決しようどする問題点）
本発明者ら（Ｊ植物細胞の物質生産能を利用し、かつ細
胞培養法を適用することにより重水素原子含有率の高い
化合物を効率よく生産ずろことを企図し、研究を進めた
。
胞培養法を適用することにより重水素原子含有率の高い
化合物を効率よく生産ずろことを企図し、研究を進めた
。
従来、バクテリヤ、カビなど種々の微生物についてこれ
を重水素原子含有培地中で培養すると、時に微生物の生
育が不可能で死滅することがある一方、時に生育が可能
で重水素原子含有物質の生産が認められろこともある。
を重水素原子含有培地中で培養すると、時に微生物の生
育が不可能で死滅することがある一方、時に生育が可能
で重水素原子含有物質の生産が認められろこともある。
しかしながら、微生物を除く植物細胞については、これ
を重水素原子含有培地中で培養した例はなく、従−）で
植物細胞がそのような重水素原子含有培地中で生育オろ
か否か、生育オろとして６重水素原子含有物質を回収可
能な程度に充分に生産オろことが出来るか否か全く不明
であった。
を重水素原子含有培地中で培養した例はなく、従−）で
植物細胞がそのような重水素原子含有培地中で生育オろ
か否か、生育オろとして６重水素原子含有物質を回収可
能な程度に充分に生産オろことが出来るか否か全く不明
であった。
（発明が解決しようとずろ問題点）
前記したところから明らかなように、本発明の究極の目
的は重水素原子を高い含有率で含んだ化学物質を植物細
胞の化学物質生産能を利用して効率よく製造することに
ある。植物細胞には普通の水素原子と重水素原子とを識
別４°ろ能力はないものと考えられるから、生産されろ
化学物質中に重水素原子を高い含有率で含有させろため
には、植物細胞を培養ずろ培地中に重水素原子を高濃度
に含有せしめる必要がある。そのような高濃度の重水素
原子存在下で植物細胞が生育４−ることか出来るか否か
品だ疑問視されたのであるが、現実には多少の抑制が認
められるものの、概ね良好に生育する事実が見出だされ
た。特に培地中の重水素原子濃度を徐々に高めて植物細
胞を次第に重水素原子に順応せしめることにより、生育
は順調に進行する。また、生育の進行に応じて目的とす
る重水素原子を高濃度に含有する化学物質が生産される
事実が明らかとなった。
的は重水素原子を高い含有率で含んだ化学物質を植物細
胞の化学物質生産能を利用して効率よく製造することに
ある。植物細胞には普通の水素原子と重水素原子とを識
別４°ろ能力はないものと考えられるから、生産されろ
化学物質中に重水素原子を高い含有率で含有させろため
には、植物細胞を培養ずろ培地中に重水素原子を高濃度
に含有せしめる必要がある。そのような高濃度の重水素
原子存在下で植物細胞が生育４−ることか出来るか否か
品だ疑問視されたのであるが、現実には多少の抑制が認
められるものの、概ね良好に生育する事実が見出だされ
た。特に培地中の重水素原子濃度を徐々に高めて植物細
胞を次第に重水素原子に順応せしめることにより、生育
は順調に進行する。また、生育の進行に応じて目的とす
る重水素原子を高濃度に含有する化学物質が生産される
事実が明らかとなった。
本発明は」ユ記の知見に基づいて完成されたムのであっ
て、培地中の全水素原子のうち８５％以」−が重水素原
子である植物細胞用培地を使用して植物細胞の培養を行
い、その培養物から重水素原子を高濃度に含有する化学
物質を採取する点に特徴がある。
て、培地中の全水素原子のうち８５％以」−が重水素原
子である植物細胞用培地を使用して植物細胞の培養を行
い、その培養物から重水素原子を高濃度に含有する化学
物質を採取する点に特徴がある。
′（作用）
以下、主としてクロレラ（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ ｅｌｌ
ｉｐｓｏｉ−ｄｅａ）を利用した重水素化トコフェロー
ルの製造を例にとって本発明を説明するが、本発明の技
術思想がこれのみに限定されるものでないことは前記お
よび後記の開示から明らかであろう。すなイつち、本発
明はクロレラに限らず種々の植物細胞を利用して種々の
化学物質を生産する場合に応用され得＝４− るちのである。特に光独立栄養的に増殖出来ろ植物細胞
の場合には、分子内の水素原子が総て重水素原子である
化学物質を得ることが可能であり、本発明の特徴的効果
が最もよく発揮される。
ｉｐｓｏｉ−ｄｅａ）を利用した重水素化トコフェロー
ルの製造を例にとって本発明を説明するが、本発明の技
術思想がこれのみに限定されるものでないことは前記お
よび後記の開示から明らかであろう。すなイつち、本発
明はクロレラに限らず種々の植物細胞を利用して種々の
化学物質を生産する場合に応用され得＝４− るちのである。特に光独立栄養的に増殖出来ろ植物細胞
の場合には、分子内の水素原子が総て重水素原子である
化学物質を得ることが可能であり、本発明の特徴的効果
が最もよく発揮される。
本発明方法により重水素原子含有率の高い化学物質を生
産オろためには、重水素原子を含有する培養培地に所望
の化学物質を産生ずる能力を有ずろ植物細胞を無菌的に
添加する。培養に使用される培地は、液体、固体のいず
れの培地であってもよく、目的に合わせて適宜選択され
てよい。たとえばクロレラの場合には、通常クロレラの
培養に使用されている金沢の培地を用い、その組成物中
の水を重水で置き換えたもの（重水素原子含有率８５％
以上）を使用すればよい。好ましくは更に水辺外の培地
成分の水素原子をすべて重水素原子に置き換える。これ
によって１００％重水素原子で置換された物質を得るこ
とが出来る。クロレラ以外の藻細胞ではたとえばポルボ
ックス培地、ブリスト−ル培地、ブトマー培地などを用
い、その中の水を重水で置換したものを使用する。また
、高６．う・植物細胞ではノことえげポワイト１７η地
、リンスマイヤー・スクーク培地などを用い、その中の
水を重水で置換したちのか用いられろ。これらの培地（
」植物細胞の添加に６日光−て除菌を行らのか音通てあ
り、このために（Ｊ通常オートタレーブ法や蒸気殺菌法
などが適用されてもよし）が、培地中の重水素原子含打
率か高し）場合に（ｊフィルター除菌やγ線照射による
殺菌を適用゛４′ろ方が好ましい。
産オろためには、重水素原子を含有する培養培地に所望
の化学物質を産生ずる能力を有ずろ植物細胞を無菌的に
添加する。培養に使用される培地は、液体、固体のいず
れの培地であってもよく、目的に合わせて適宜選択され
てよい。たとえばクロレラの場合には、通常クロレラの
培養に使用されている金沢の培地を用い、その組成物中
の水を重水で置き換えたもの（重水素原子含有率８５％
以上）を使用すればよい。好ましくは更に水辺外の培地
成分の水素原子をすべて重水素原子に置き換える。これ
によって１００％重水素原子で置換された物質を得るこ
とが出来る。クロレラ以外の藻細胞ではたとえばポルボ
ックス培地、ブリスト−ル培地、ブトマー培地などを用
い、その中の水を重水で置換したものを使用する。また
、高６．う・植物細胞ではノことえげポワイト１７η地
、リンスマイヤー・スクーク培地などを用い、その中の
水を重水で置換したちのか用いられろ。これらの培地（
」植物細胞の添加に６日光−て除菌を行らのか音通てあ
り、このために（Ｊ通常オートタレーブ法や蒸気殺菌法
などが適用されてもよし）が、培地中の重水素原子含打
率か高し）場合に（ｊフィルター除菌やγ線照射による
殺菌を適用゛４′ろ方が好ましい。
次に添加した植物細胞の種類や性質に応じて適宜の培地
ｐＩ＋を保持しつつ、適宜のｌ晶度で適当＋ＣＩＩ間培
養全培養。たとえば夕「ルうの場合に（Ｊ約２５°Ｃに
おいて約２週間に渡り培養を行う。培養方法は、振とう
培養、攪拌培養、静置培養等のとれを選択しても構わな
いが、用いろ植物細胞の種類、性質に応じて適宜決定さ
れる。また、培養期間も用いる細胞の種類や目的とオろ
物質の採取効率に応じて決定される。用いた植物細胞か
クロレラの３」；うに光独立栄養細胞の場合に（」、光
照射が必要である。光強度は通常ｌ０００ルックス以−
１＝−１好ましくは５０００ルツクス以上であることが
望ま１、い。必要に応じ培地に対し空気や酸素が導入さ
れるが、特に先独立栄養細胞の場合に（Ｊ通気に二酸化
炭素を富化させろと増殖が促進されるので好ましい。
ｐＩ＋を保持しつつ、適宜のｌ晶度で適当＋ＣＩＩ間培
養全培養。たとえば夕「ルうの場合に（Ｊ約２５°Ｃに
おいて約２週間に渡り培養を行う。培養方法は、振とう
培養、攪拌培養、静置培養等のとれを選択しても構わな
いが、用いろ植物細胞の種類、性質に応じて適宜決定さ
れる。また、培養期間も用いる細胞の種類や目的とオろ
物質の採取効率に応じて決定される。用いた植物細胞か
クロレラの３」；うに光独立栄養細胞の場合に（」、光
照射が必要である。光強度は通常ｌ０００ルックス以−
１＝−１好ましくは５０００ルツクス以上であることが
望ま１、い。必要に応じ培地に対し空気や酸素が導入さ
れるが、特に先独立栄養細胞の場合に（Ｊ通気に二酸化
炭素を富化させろと増殖が促進されるので好ましい。
本発明でいう植物細胞培養物とは、培養後の培養液全体
をいい、増殖した植物細胞と使用１−た培地から成る。
をいい、増殖した植物細胞と使用１−た培地から成る。
また、重水素原子含仔物質には、培養物から単離される
化合物だＩ：ｌでなく、抽出液、抽出物、細胞乾燥物、
その粉砕物等が含まれる。
化合物だＩ：ｌでなく、抽出液、抽出物、細胞乾燥物、
その粉砕物等が含まれる。
培養物から植物細胞を分離するには、通常用いられてい
る適宜の分離方法（たとえばろ過、遠心分離、抽出）を
採用すればよい。得られた植物細胞や培地は、凍結乾燥
や熱風乾燥などの方法によって乾燥物にすることが出来
る。乾燥あるいは生の植物細胞や培地から重水素原子含
有化合物を単離するには、対応する重水素原子非含有化
合物に適用される分離方法がそのまま採用されてよい。
る適宜の分離方法（たとえばろ過、遠心分離、抽出）を
採用すればよい。得られた植物細胞や培地は、凍結乾燥
や熱風乾燥などの方法によって乾燥物にすることが出来
る。乾燥あるいは生の植物細胞や培地から重水素原子含
有化合物を単離するには、対応する重水素原子非含有化
合物に適用される分離方法がそのまま採用されてよい。
たとえば化合物がステロールや脂肪酸のような非極性、
油溶性のものであればメタノール、アセトン、エーテル
、ヘンセン、酢酸エヂルなどの有機溶媒を用いて抽出し
、配糖体や多糖類のような水溶性のものであれば熱水、
水性アルコールなどを用いて抽出すればよい。たとえば
クロレラを培養して重水素化トコフェロールを生産する
場合、培養物をろ過して液体培地と固形分としてのクロ
レラに分離し、更に遠心分離、水洗、乾燥してクロレラ
乾燥物を得る。このクロレラ乾燥物を有機溶媒（たとえ
ばアセトン、メタノール）で抽出し、この抽出液から有
機溶媒を留去し、残渣をカラムクロマトグラフィーに付
して重水素化トコフェロールを採取する。
油溶性のものであればメタノール、アセトン、エーテル
、ヘンセン、酢酸エヂルなどの有機溶媒を用いて抽出し
、配糖体や多糖類のような水溶性のものであれば熱水、
水性アルコールなどを用いて抽出すればよい。たとえば
クロレラを培養して重水素化トコフェロールを生産する
場合、培養物をろ過して液体培地と固形分としてのクロ
レラに分離し、更に遠心分離、水洗、乾燥してクロレラ
乾燥物を得る。このクロレラ乾燥物を有機溶媒（たとえ
ばアセトン、メタノール）で抽出し、この抽出液から有
機溶媒を留去し、残渣をカラムクロマトグラフィーに付
して重水素化トコフェロールを採取する。
重水素化物が得られたかどうかの確認は、通常マススペ
クトルで行う。たとえば前記重水素化トコフェロールの
場合、培地中の重水素原子含有化合物００％でな０れば
重水素化トコフェロールの親ピークは標準物質の分子量
Ｃ２ｅＩ−１ｉｏ（Ｌ＝４３０から完全重水素化トコフ
ェロールＣ９ｑＤ５ｏＯ３−４８０まで分布すると考え
られる。標準物質はｍ／ｚ４３１．４３２にそれぞれｐ
＋１ 、ｐ＋２のピークを生じるので、重水素化トコフ
ェロールのｍ／ｚ４３０強度に対応する４３１，４３２
のピーク強度以上の強度を有するピークが４３１，４３
２に、また４３３以上にピークが観察されれば重水素化
物が存在することが確認できる。もちろんｍ／ｚ ４３
０から４７９までピークが観察されずｍ／ｚ４８０．４
８１．４８２のピークのみであればこれは完全重水素化
物であると確認できる。
クトルで行う。たとえば前記重水素化トコフェロールの
場合、培地中の重水素原子含有化合物００％でな０れば
重水素化トコフェロールの親ピークは標準物質の分子量
Ｃ２ｅＩ−１ｉｏ（Ｌ＝４３０から完全重水素化トコフ
ェロールＣ９ｑＤ５ｏＯ３−４８０まで分布すると考え
られる。標準物質はｍ／ｚ４３１．４３２にそれぞれｐ
＋１ 、ｐ＋２のピークを生じるので、重水素化トコフ
ェロールのｍ／ｚ４３０強度に対応する４３１，４３２
のピーク強度以上の強度を有するピークが４３１，４３
２に、また４３３以上にピークが観察されれば重水素化
物が存在することが確認できる。もちろんｍ／ｚ ４３
０から４７９までピークが観察されずｍ／ｚ４８０．４
８１．４８２のピークのみであればこれは完全重水素化
物であると確認できる。
培養物から単離された化合物ではなく、抽出物や細胞乾
燥物などが重水素化物であるかどうかの確認は、抽出物
や細胞乾燥物から代表的な成分を単離して、その化合物
が重水素化物であるかを確認することによって行う。
燥物などが重水素化物であるかどうかの確認は、抽出物
や細胞乾燥物から代表的な成分を単離して、その化合物
が重水素化物であるかを確認することによって行う。
（実施例）
以下に実施例を挙げて本発明の実施態様を具体的に説明
する。
する。
実施例１
京都市にて採集した地衣類アカザルオガセ（ザルオガセ
科）から誘導して得た菌と藻から成る培養組織（１９）
を下記組成を有するリリー・バーネット培地中で２０℃
において２か月間培養した。培地としては、ブドウ糖Ｉ
Ｏ９／Ｑ、、Ｉ７−アスパラギン２９／ρ、リン酸二水
素カリウ２． Ｉ ｇ／ρ、硫酸マグネソウム０５ｇ／
ρ、硝酸鉄０．２ｍｇ／（１，硫酸亜鉛０２ｗｔｇ／Ｑ
、塩酸チアミン１ｏｏμｇ／Ｑ、ビオチン５μ９／りを
１００ｍσの重水に溶解させ、ｐト■を５８に調整し、
更に０．２２ｘμのメンブランフィルタ−で除菌ろ過し
たもの（重水素原子含有率約９９％）を用いた。増殖し
た培養組織（５り）を１０時間凍結乾燥し、得られた乾
燥物（約１９）をｎ−ヘキサンに２４時間浸漬し、ろ過
後溶媒を留去してｎ−ヘキザン抽ｄｉ物（約２０ｍｇ）
を得た。ｎ−ヘキサン抽出物を少量のエーテルに溶解し
、シリカゲル薄層にスポツティングしてｎ−ヘキサン、
エーテルおよびギ酸から成る溶媒で展開した。風乾した
後、標品ウスニン酸と同一のＲｆ値を有し、紫外線で発
光するスポットをかき取り、マススペクトルを測定した
。標品ウスニン酸（ｃ、。Ｈ、８０７）はｍ／ｚ３４４
に親ピークが存在し、ｐ−１−１、ｐ＋２のピークが検
出される。本サンプルと標品のマススペクトルを比較す
ると、本サンプルにはｍ／ｚ ３４４以上の親ピークが
観察され、その結果本サンプル中に（Ｊウスニン酸の同
位体物質がγ７存することが確認された。
科）から誘導して得た菌と藻から成る培養組織（１９）
を下記組成を有するリリー・バーネット培地中で２０℃
において２か月間培養した。培地としては、ブドウ糖Ｉ
Ｏ９／Ｑ、、Ｉ７−アスパラギン２９／ρ、リン酸二水
素カリウ２． Ｉ ｇ／ρ、硫酸マグネソウム０５ｇ／
ρ、硝酸鉄０．２ｍｇ／（１，硫酸亜鉛０２ｗｔｇ／Ｑ
、塩酸チアミン１ｏｏμｇ／Ｑ、ビオチン５μ９／りを
１００ｍσの重水に溶解させ、ｐト■を５８に調整し、
更に０．２２ｘμのメンブランフィルタ−で除菌ろ過し
たもの（重水素原子含有率約９９％）を用いた。増殖し
た培養組織（５り）を１０時間凍結乾燥し、得られた乾
燥物（約１９）をｎ−ヘキサンに２４時間浸漬し、ろ過
後溶媒を留去してｎ−ヘキザン抽ｄｉ物（約２０ｍｇ）
を得た。ｎ−ヘキサン抽出物を少量のエーテルに溶解し
、シリカゲル薄層にスポツティングしてｎ−ヘキサン、
エーテルおよびギ酸から成る溶媒で展開した。風乾した
後、標品ウスニン酸と同一のＲｆ値を有し、紫外線で発
光するスポットをかき取り、マススペクトルを測定した
。標品ウスニン酸（ｃ、。Ｈ、８０７）はｍ／ｚ３４４
に親ピークが存在し、ｐ−１−１、ｐ＋２のピークが検
出される。本サンプルと標品のマススペクトルを比較す
ると、本サンプルにはｍ／ｚ ３４４以上の親ピークが
観察され、その結果本サンプル中に（Ｊウスニン酸の同
位体物質がγ７存することが確認された。
火施湾一点
ノチトメ（セリ稍）の葉柄から誘導して得たノヂドメ培
養細胞（１ｇ）を下記組成を有する１、ランデ・スクー
ク液体培地中で２５°Ｃにおいて暗所下４週間１４０
ｒｐｍで回転振とう培養した。培地としてはショ糖３０
ｇ／ρ、硝酸アンモニウム１６５ｇ１０、硝酸カリウＡ
ｌ、９ｇ／Ｑ、、塩化カルシウド４４０ｍｇ１０．、硫
酸マグネシウム３７０ｍ’ｉ／Ｑ、リン酸二水素カリウ
ム１７０ ｙｘ９／Ｑ、ホウ酸６ 、２ ｍｇ／ρ、硫
酸マンガン２２．３％ｇ／ρ、硫酸亜鉛８６ｎ９／ｆ２
．ヨウ化カリウム０ 、８３ ｍｇ／ｆ！、モリブデン
酸ナトリウム０ 、２５ Ｈ／Ｑ、塩化コバルト２５７
％ｇ／（１、硫酸銅２５μｇ／ρ、エヂレンジアミン四
酢酸ナトリウム３７ 、３ ｍｇ／Ｑ、硫酸第一鉄２７
．８ｍ９／（２、ミオイノシトール１００肩ｇ／Ｑ、グ
リシノ２ｒｐｇ／ρ、塩酸ピリドキンン０ 、５ ｕｇ
／ρ、ニコチン酸０．！５ｍｇ／（１、塩酸チアミン０
．１ｘｇ／ρ、２゜４−ンクロルフエノキシ酢酸１０’
Ｍ、カイネチンＩＯ’Ｍを１００７１Ｑの重水に溶解さ
せ、１）Ｔ−Ｔを６．０に調整し、更に０．２２ｍμの
メンブランフィルタ−で除菌ろ過したもの（重水素原子
含有率約９８％）を用いた。培養液をろ過して細胞と培
地とに分離し、細胞（約６９）をベンゼンに浸漬した。
養細胞（１ｇ）を下記組成を有する１、ランデ・スクー
ク液体培地中で２５°Ｃにおいて暗所下４週間１４０
ｒｐｍで回転振とう培養した。培地としてはショ糖３０
ｇ／ρ、硝酸アンモニウム１６５ｇ１０、硝酸カリウＡ
ｌ、９ｇ／Ｑ、、塩化カルシウド４４０ｍｇ１０．、硫
酸マグネシウム３７０ｍ’ｉ／Ｑ、リン酸二水素カリウ
ム１７０ ｙｘ９／Ｑ、ホウ酸６ 、２ ｍｇ／ρ、硫
酸マンガン２２．３％ｇ／ρ、硫酸亜鉛８６ｎ９／ｆ２
．ヨウ化カリウム０ 、８３ ｍｇ／ｆ！、モリブデン
酸ナトリウム０ 、２５ Ｈ／Ｑ、塩化コバルト２５７
％ｇ／（１、硫酸銅２５μｇ／ρ、エヂレンジアミン四
酢酸ナトリウム３７ 、３ ｍｇ／Ｑ、硫酸第一鉄２７
．８ｍ９／（２、ミオイノシトール１００肩ｇ／Ｑ、グ
リシノ２ｒｐｇ／ρ、塩酸ピリドキンン０ 、５ ｕｇ
／ρ、ニコチン酸０．！５ｍｇ／（１、塩酸チアミン０
．１ｘｇ／ρ、２゜４−ンクロルフエノキシ酢酸１０’
Ｍ、カイネチンＩＯ’Ｍを１００７１Ｑの重水に溶解さ
せ、１）Ｔ−Ｔを６．０に調整し、更に０．２２ｍμの
メンブランフィルタ−で除菌ろ過したもの（重水素原子
含有率約９８％）を用いた。培養液をろ過して細胞と培
地とに分離し、細胞（約６９）をベンゼンに浸漬した。
培地（１００ｉ（りにベンゼン（１００πＱ）を加え、
分液ロートで振とうしてベンゼン抽出液を得た。細胞の
ベンゼン抽出液と合わせて、溶媒を留去し、培養物のベ
ンゼン抽出物（約８屑９）を少量のベンゼンに溶解し、
シリカゲル薄層にスポツティングして、ｎ−ヘキサンと
酢酸エチルから成る溶媒で展開した。風乾した後、標品
ρ−セザミンと同一のＲｆ値を有し、紫外線で発光する
スポットをかき取り、マススペクトルで測定した。標品
ρヘセサミンはｍ／ｚ３５４に親ピークが存在し、ｐ＋
Ｌｐ＋２ピークが検出される。本サンプルにはｍ／ｚ
３５４以上の親ピークが観察され、その結果本サンプル
中にはぐ一セザミンの同位体物質が存在することが確認
された。
分液ロートで振とうしてベンゼン抽出液を得た。細胞の
ベンゼン抽出液と合わせて、溶媒を留去し、培養物のベ
ンゼン抽出物（約８屑９）を少量のベンゼンに溶解し、
シリカゲル薄層にスポツティングして、ｎ−ヘキサンと
酢酸エチルから成る溶媒で展開した。風乾した後、標品
ρ−セザミンと同一のＲｆ値を有し、紫外線で発光する
スポットをかき取り、マススペクトルで測定した。標品
ρヘセサミンはｍ／ｚ３５４に親ピークが存在し、ｐ＋
Ｌｐ＋２ピークが検出される。本サンプルにはｍ／ｚ
３５４以上の親ピークが観察され、その結果本サンプル
中にはぐ一セザミンの同位体物質が存在することが確認
された。
寒皺鯉劣
クロレラ培養株（１祿）を下記組成を有する培地（ＩＱ
）中で２５°Ｃにおいて１％の二酸化炭素を富化した乾
燥空気を通気しながら５０００ルツクスの光照射下攪拌
培養した。培地としては重水素化尿素０．６ｇ／ρ、リ
ン酸二重水素カリウム０３ｇ／ρ、無水硫酸マグネシウ
ム旧３ｇ／Ｑ、をＩσの重水に溶解し、ｐＨを重水人Ｉ
ＮのＮａ０Ｄで６．０に調整し、０２２ｍμのメンブラ
ンフィルタ−でろ過したもの（重水素含有率１００％）
を用いた。
）中で２５°Ｃにおいて１％の二酸化炭素を富化した乾
燥空気を通気しながら５０００ルツクスの光照射下攪拌
培養した。培地としては重水素化尿素０．６ｇ／ρ、リ
ン酸二重水素カリウム０３ｇ／ρ、無水硫酸マグネシウ
ム旧３ｇ／Ｑ、をＩσの重水に溶解し、ｐＨを重水人Ｉ
ＮのＮａ０Ｄで６．０に調整し、０２２ｍμのメンブラ
ンフィルタ−でろ過したもの（重水素含有率１００％）
を用いた。
４８時間後収穫し、遠心分離によって水洗後、乾燥し、
クロレラ乾燥物（約４ｇ）を得た。クロレラ乾燥物（約
１ｇ）を無水アセトンに２４時間浸漬した後、アセトン
を留去してアセトン抽出物（約２５０ｉｇ）を得た。こ
のアセトン抽出物を少量のエーテルに溶解後、不溶物を
除いた液をシリカゲル薄層にスポツティングした。ｎ−
ヘキサンと酢酸エチルから成る溶媒で展開し、乾燥空気
中で風乾した後、標品のトコフェロールと同一のＲｆ値
を有する部分をかき取った。かき取ったシリカゲルをマ
ススペクトル装置にか（づ、スペクトルを得た。
クロレラ乾燥物（約４ｇ）を得た。クロレラ乾燥物（約
１ｇ）を無水アセトンに２４時間浸漬した後、アセトン
を留去してアセトン抽出物（約２５０ｉｇ）を得た。こ
のアセトン抽出物を少量のエーテルに溶解後、不溶物を
除いた液をシリカゲル薄層にスポツティングした。ｎ−
ヘキサンと酢酸エチルから成る溶媒で展開し、乾燥空気
中で風乾した後、標品のトコフェロールと同一のＲｆ値
を有する部分をかき取った。かき取ったシリカゲルをマ
ススペクトル装置にか（づ、スペクトルを得た。
標品トコフェロール（ビタミンＥＣ２，Ｔ−Ｔ、。０２
）ｔＪｍ／ｚ４３０に親ピークが検出されるが、本ザン
プルはｍ／ｚ４８０に親ピークが検出され、その池水素
原子同位体物質に由来するｍ／ｚ４３０〜４７９まての
親ピークはほとんどＳ忍められなかった。このことは本
ザンプルが完全重水素化トコフェロールであることを示
す。また、これにより本クロレラ乾燥物が完全重水素化
クロレラ乾燥物であることが推定できる。
）ｔＪｍ／ｚ４３０に親ピークが検出されるが、本ザン
プルはｍ／ｚ４８０に親ピークが検出され、その池水素
原子同位体物質に由来するｍ／ｚ４３０〜４７９まての
親ピークはほとんどＳ忍められなかった。このことは本
ザンプルが完全重水素化トコフェロールであることを示
す。また、これにより本クロレラ乾燥物が完全重水素化
クロレラ乾燥物であることが推定できる。
特許出願人 日本ペイ ン ト株式会社代理人弁理士青
山葆 ほか１名 −Ａクク−
山葆 ほか１名 −Ａクク−
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、培地中の全水素原子のうち８５％以上が重水素原子
であることを特徴とする植物細胞培養用培地。 ２、培地の除菌が、ろ過および／またはγ線照射によっ
て行なわれる特許請求の範囲第１項記載の培地。 ３ 培地中の全水素原子のうち８５％以上が重水素原子
である植物細胞培養用培地において植物細胞を培養する
ことを特徴とする植物細胞の培養方法。 ４、培養が光照射下で行なわれる特許請求の範囲第３項
記載の培養方法。 ５、植物細胞が光独立栄養細胞である特許請求の範囲第
３項記載の培養方法。 ６、培地中の重水素原子含量を徐々に高めることにより
植物細胞を重水素原子に順応させながら培養を行う特許
請求の範囲第３項記載の培養方法。 ７、培地中の全水素原子のうち８５％以上が重水素原子
である植物細胞培養用培地において植物細胞を培養する
ことにより得られた植物細胞培養物。 ８、培地中の全水素原子のうち８５％以上が重水素原子
である植物細胞培養用培地において植物細胞を培養し、
得られた植物細胞培養物から重水素原子含有物質を採取
することを特徴とする重水素原子含有物質の製造法。
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60132809A JPS61289881A (ja) | 1985-06-17 | 1985-06-17 | 重水素含有物質および植物細胞培養によるその生産 |
| EP86304570A EP0206691A3 (en) | 1985-06-17 | 1986-06-13 | Production of deuterium-containing chemical substances |
| AU58766/86A AU5876686A (en) | 1985-06-17 | 1986-06-17 | Deuterated products from plant culture |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60132809A JPS61289881A (ja) | 1985-06-17 | 1985-06-17 | 重水素含有物質および植物細胞培養によるその生産 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61289881A true JPS61289881A (ja) | 1986-12-19 |
Family
ID=15090084
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60132809A Pending JPS61289881A (ja) | 1985-06-17 | 1985-06-17 | 重水素含有物質および植物細胞培養によるその生産 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0206691A3 (ja) |
| JP (1) | JPS61289881A (ja) |
| AU (1) | AU5876686A (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0197525B1 (en) * | 1985-04-06 | 1993-12-15 | Nippon Paint Co., Ltd. | Plant culture cell and use thereof |
| GB2304343A (en) * | 1995-08-19 | 1997-03-19 | Univ Manchester | Deuterated product from culture in a deuterated medium |
-
1985
- 1985-06-17 JP JP60132809A patent/JPS61289881A/ja active Pending
-
1986
- 1986-06-13 EP EP86304570A patent/EP0206691A3/en not_active Withdrawn
- 1986-06-17 AU AU58766/86A patent/AU5876686A/en not_active Abandoned
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU5876686A (en) | 1986-12-24 |
| EP0206691A2 (en) | 1986-12-30 |
| EP0206691A3 (en) | 1988-09-14 |
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