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ウリ科植物の組織培養方法
JPS602183A
Japan
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Junzo Hiratsuka 平塚 純造 Chuzo Kan 管 忠三 - Current Assignee
- Mitsui Petrochemical Industries Ltd
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Description
translated from
酸オキシダーゼが含有されており、このアスコルビン酸
オキシダーゼは、例えば臨床検査用の試薬としてその需
要が期待されてい−る。
する植物のアスコルビン酸オキシダーゼ含有組織から、
溶媒抽出によって新規なアスコルビン酸オキシダーゼを
分離回収することを提案している。しかしながら、これ
ら植物組織からの直接採取は、自然環境や天候に左右さ
れ、植物の収集にも時間と手間かかる。
アスコルビン酸オキシダーゼを効率よく生産することを
目的として検討した結果、キュウリ等のウリ科植物の培
養細胞を特定の液体培地で培養することにより、アスコ
ルビン酸オキシダーゼを多量に含む培養細胞が得られる
ことを見出し、本発明に到達した。
液体培地を用いることを特徴とするウリ科植 “物の組
織培養方法に関する。
．２μＭ以上、とくに０．２μＭないし２５μＭの範囲
内に調整されている限り、他の培地成分を広い範囲で変
えることができ、従来から植物の組織培養に用いられて
いる培地を種々改変して用いることができる。
キシダーゼの生成量が減少し、また、２５μＭを７越え
ても大きな変化はみられないが、わずかに生成量の減少
がみられる。
無機成分および炭素源を必須成分とし、これに植物ホル
モン類、ビタミン類およびアミノ酸類から選ばれる少な
くとも１種類以上の成分を添加したものがあり、必要に
応じてその他の成分も併用される。
ルシウム、マグネシウム、イオウ、鉄、マンガン、亜鉛
、ホウ素、モリブデン、塩素、ナトリウム、ヨウ素、コ
バルト等があり、具体的には硝酸カリウム、硝酸ナトリ
ウム、硝酸カルシウム、リン酸１カリウム、リン酸２ナ
トリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、硫酸マグネ
シウム、硫酸ナトリウム、硫酸第一鉄、硫酸第二鉄、硫
酸マンガン、硫酸亜鉛、ホウ酸、硫酸鋼、モリブデン酸
ナトリウム、二酸化モリブデン、ヨウ化カリウム、塩化
コバルトなどが例示される。
肪酸等の有機酸、エタノール等の１級アルコールなどが
例示される。
フタレン酢酸（ＮＡＡ）、ｐ−クロロフェノキシイソ酪
酸、２，４−ジクロロフェノキシ酢酸（２，４−Ｄ）な
どのオーキシン類、カイネチン、ゼアチン、ジヒドロゼ
アチン等のサイトカイニン類が例示される。
、ピリドキシン（ビタミンＢ６）、パントテン酸、アス
コルビン酸（ビタミンＣ）、イノシトール、ニコチン酸
などが例示される。
スティンなどが例示される。
変えることができる。通常は、無機成分を約０．１μＭ
〜約１００ｍＭ程度、炭素源を約１ｇ／Ａ！〜４０ｇ／
Ａ’程度、さらに植物ホルモン類を約０．０１μＭ〜約
２０μＭ程度、ビタミン類およびアミノ酸類を、それぞ
れ約０−１ ｍｇ／ｎ 〜約１５０ ｍｇ／＃程度とす
ることが行われる。
コルビン酸オキシダーゼの生成量をさらに増大させるこ
とも可能である。例えば全窒素源に対するアンモニウム
イオンの割合を約１０モル％以下にすれば、アスコルビ
ン酸オキシダーゼの生成量はさらに増大する。
ｕｃｕｍｉｓ ５ａｔｉｖｕｓ Ｌ−）、ハルドライキ
イ（Ｃ，ｈａｒｄｗｉｋｉｉ ）、メロン（Ｃ，ｍｅｌ
ｏ Ｌ、）、マクワウリ（Ｃ，ｍｅｌｏ Ｌ、 ｖａｒ
ｍａｋｕｗａ Ｍａｋｉｎｏ）、シロウリ（Ｃ，ｒｎ
ｅｌｏ Ｌ、 ｖａｒ ｃｏｎｏｍｏｎ Ｍａｌｃｉｎ
ｏ）などのキラリ属の植物、および二ホンカポチャ（Ｃ
ｕｃｕｒｂｉｔａ ｍｏｓｈａｔａ Ｄｕｃｈ）、ペボ
カボチャ（Ｃ，ｐｅｐｏ Ｌ、）、セイヨウカボチャ（
Ｃ、ｍａｘｉｍａ Ｄｕｃｈ ）などのカポチャ属の植
物などが好適に用いられ、その他に、ゴキヅル（Ａｃｔ
ｉｎｏｓｔｅｍｍａ ｌｏｂａｔｕｍ ’Ｍａｘｉ、ｍ
）、オオスズメウリ（キバナカラスウリ） （Ｔｈ１
ａｄ１ａｎｔ、ｈａｄｕｂｉ、ａ Ｂｇｅ、）、スズメ
ウリ（Ｍｅｌｏｔｈｒｉａｊａｐａｎｉｃａ Ｍａｘｉ
ｍ）、ホンガタスズメウリ（Ｍ。
メウリ（Ｍ−ｍａｄｅｒａｓｐａｔａｎａ Ｃｏｇｎ−
）、クロミノオキナワスズメウリ（Ｍ、 １ｉｕｋｉｕ
ｅｎｓｉｅ Ｎａｋａｉ ）、オキナワスズメウリ（Ｂ
ｒｙｏｎｏｐｓｉｓ １ａａｉｎｉｏｓａＮａｕｄ、）
、ミャマニガウリ（５ｃｈｉｚｏｐｅｐｏｎｂｒｙｏｎ
ｉａｅｆｏｌｉｕｓ Ｍａｘｉｍ）、アマチロズル（Ｇ
ｙｎｏｓｔｅｍｍａ’ ｐｅｎｔａｐｈｙｌｌｕｍ Ｍ
ａｋｉｎｏ ）、アレチウリ（８１ｃｙｏｓ ａｎｇｕ
ｌａｔｕｓ Ｌ、）、カラスウリ（Ｔｒｉｃｈｏｓａｎ
ｔｈｅｓ ｃｕｏｕｍｅｒｏｉｄｅｓ Ｍａｘｉｍ）、
キカラスウリ（Ｔ、 ｌｃｉｒｉｌｏｗｉｉ Ｍａｘｉ
ｍ）、テングカラスウリ（Ｔ、ｒｏｓｔｒａｔａ Ｋｉ
ｔａｍｕｒａ）、モミシカラスウリ（Ｔ、 ｍｕｌｔｊ
−１ｏｂａ、Ｍｉｑ、）、オオヵラスウリ（Ｔ、 ｂｒ
ａｃｔｅａｔ、ａ Ｖｏｉｇｔ、）１１ヘビウリ（Ｔ。
。
ｂａｌｌｉｕｍｅｌａｔｅｒｉ’ｕｍ ｋ−Ｒｌｃｈ、
）、ツルレイシ（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ Ｑｈａｒａｎｔ
ｉａ Ｌ−）、ヘチＶ （Ｌｕｒｒａｃｙｌｉｎｄｒｉ
ｃａＲｏｅｍｅｒ）、トヵドヘチマ（Ｌ。
ｆ ｒｕｌ ｌｕ、ｓｖｕｌｇａｒｌｓ ５ｃｈｒａｄ
、）、コロシント（Ｃ＋ｏｏ１ｏｃｙｎｔｈｌ ５ｃｈ
ｒａｄ＋）、トウガン（Ｂｅｎ１ｎｃａｓａ ’ｈｉｅ
ｐｉｄａ Ｃｏｇｎ、 ）、ユウガオ（Ｌａｇｅｎａｒ
ｉａ ５ｉｃｅｒａｒｉａ ５ｔａｎｄ−ｖａｒｈｉｓ
ｐｉｄａ Ｈａｒａ、）、ヒョウタン（Ｌ・５ｉｃｅｒ
ａｒｉａ ５ｔａｎｄ、 ｖａｒ ｇｏｕｒｄａ Ｈａ
ｒａ）、センナリヒョウタン（Ｌ、５ｉｃｅｒａｒｉａ
５ｔａｎｃ１． ｖａｒｍｉｃｒｏｃａｒｐ＋１ＬＨ
ａｒａ）、ハヤトウリ（Ｓｅｃｈｉｕｍｅｄｕｃｅ Ｓ
ｗａｒｔｚ ）などの他、デンドロシキオス属（Ｄｅｎ
ｄｒｏｓｉｃｙｏ ｓ ）、ホドグソニア属（Ｈｏｄｇ
ｓｏｎｉａ ）、バタダンウリ亜科（Ｃｙｃｌａｎｔｈ
ｅｒａ ）などに属す名植物も挙げられる。
、葉、茎、果実、種子などから採取された組織片を殺菌
処理後、寒天で固めたリンスマイヤー・スクーグ、の固
体培地上に置床し、１０〜３５°Ｃで７〜３０日程度経
過後、組織片の一部をカルス化させる。このようにして
得られたカルスを継代培養すると生育速度が漸次高まり
、安定化したカルスが得られる。
ヤー・スクーグの液体培地に移して増殖させる。液体培
地においてさらに生育速度が高められ、安定化したカル
スを本発明の液体培地に添加して培養する方法がある。
は、広い範囲で変えることができる。通常は液体培地１
１に対して、カルスを約１ｇ〜約２００ｇ（新鮮重量）
程度添加することが望ましい。
、かえって暗所での培養がアスコルビン酸オキシダーゼ
の生成に望ましく、培養温度は約１０°Ｃ未満６５°Ｃ
１とくに約２６°Ｃ〜約２８°Ｃが好適である。約１０
°Ｃ未満ではカルスの増殖速度が小さく、約６５℃を越
えても同様にカルスの増殖速度は小さくなる。
を分離採取するには、従来がら天然品のキュウリ等に適
用されている抽出等の方法を採用することができる。
た大量培養が可能であり、ざらにカルスを培地から分離
する方法として、デカンテーション、ｐ過等の簡便な操
作を採用できるので工業上有利である。
キシダーゼを確実に大量生産し採取することができる。
果皮の組織片を、リンスマイヤー・スクーグの寒天固体
培地に置床し、静置培養法でキュウリのカルスを得た。
培養することにより、カルスの生育速度を高めた。
の組成からなるリンスマイヤー・スクーグの液体培地（
ただし植物ホルモン類として、２．４−Ｄ１０μＭ１カ
イネチン１μＭおよび炭素源としてショ糖を３０ｇ／Ａ
’含む）３０ｔｎ＃入れ、１２０’Ｃ１１０分間滅菌し
た。このリンスマイヤー・スクーグの液体培地に、上記
の生育速度の高められたキュウリの新鮮カルス０．５ｇ
を添加して、２５°Ｃで１４日間、ロータリーシェーカ
ー上で、旋回培養（振幅２５ｍｍ。
（新鮮型）を測定し、液体培地１１あたりの培養細胞の
生育重量をめた。
した０・１Ｍクエン酸−０，２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６
−５）中でホモジナイズすることにより抽出した。アス
コルビン酸オキシダーゼの含量は、この抽出液１００μ
ｌを２０ｍＭ−アスコルビン酸を含む０・１Ｍクエン酸
−０，２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６＝０１ｍＭＥＤＴＡを
含む＞ ２．９ｒｎｊｌ中に加え、酸素電極を用いて減
少する溶存酸素量を、抽出液無添加の場合と比較するこ
とによって測定した。
濃度を第２表に示す値とする以外は比較第 １ 表
Claims (1)
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translated from
- （１）銅イオン濃度が０．２μＭ以上である液体培地を
用いることを特徴とするウリ科植物の２組織培養方法。