JPS61280568A - 体液成分の測定方法 - Google Patents
体液成分の測定方法Info
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- JPS61280568A JPS61280568A JP12219685A JP12219685A JPS61280568A JP S61280568 A JPS61280568 A JP S61280568A JP 12219685 A JP12219685 A JP 12219685A JP 12219685 A JP12219685 A JP 12219685A JP S61280568 A JPS61280568 A JP S61280568A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
この発明は、抗原または抗体のような体液成分の測定方
法に関するものである。
法に関するものである。
従来の技術
体液中に含まれる抗原または抗体の濃度を測定するため
に、凝集反応（間接凝集反応）が多く用いられている。
に、凝集反応（間接凝集反応）が多く用いられている。
この凝集反応は、一般に担体としてラテックスを用いる
ところからラテックス凝集反応とも呼ばれる。
ところからラテックス凝集反応とも呼ばれる。
この凝集反応は第４図（Ａ＞に示すような反応機構で起
こる。すなわち、抗体を付着（吸着等）させたラテック
ス（感作ラテツクス）のような担体を抗原と混合すると
、抗原抗体反応により抗原が担体上の抗体と結合する。
こる。すなわち、抗体を付着（吸着等）させたラテック
ス（感作ラテツクス）のような担体を抗原と混合すると
、抗原抗体反応により抗原が担体上の抗体と結合する。
さらに、この結合した抗原に別の担体上のまだ抗原と結
合していない抗体が結合して２つの担体が凝集する。こ
の反応を順次くり返して２個凝集、３個凝集等の粒度分
布をもった粒子群が得られる。
合していない抗体が結合して２つの担体が凝集する。こ
の反応を順次くり返して２個凝集、３個凝集等の粒度分
布をもった粒子群が得られる。
反応後、粒子が分散した試料液をシースフローセルに導
き、レーザ等の光を照射し粒子からの散乱光を検出すれ
ば、未凝集、２個凝集、３個凝集・・・と分離した粒度
分布が得られる。この粒度分布における各凝集粒子の個
数から次式によって凝集率をもとめる。
き、レーザ等の光を照射し粒子からの散乱光を検出すれ
ば、未凝集、２個凝集、３個凝集・・・と分離した粒度
分布が得られる。この粒度分布における各凝集粒子の個
数から次式によって凝集率をもとめる。
凝集率−□ （１）
Σ −３−Ｐｊ
（式中、Ｐｉはｉ個凝集粒子の個数、副はｉ個凝集粒子
に付加する重み係数、ｐｊはｊ個凝集粒子の個数、Ｗｊ
はｊ個凝集粒子に付加する重み係数である） この凝集率から抗原濃度を知るために、検量線が利用さ
れる。この検量線は、抗原濃度と凝集率との関係を示す
ものであって、既知濃度の抗原を用いて一定時間凝集反
応を行わせ、これから凝集率を求めて得られるものであ
る。第５図に検量線の一例を示す。同図から、抗原濃度
が比較的低い状態では、担体量（すなわち、抗体量）を
一定にしておけば、抗原量の増加に伴ない凝集率が漸次
増加するのがわかる。しかし、抗原濃度がある濃度以上
では凝集率が減少するという現象が生じる。
に付加する重み係数、ｐｊはｊ個凝集粒子の個数、Ｗｊ
はｊ個凝集粒子に付加する重み係数である） この凝集率から抗原濃度を知るために、検量線が利用さ
れる。この検量線は、抗原濃度と凝集率との関係を示す
ものであって、既知濃度の抗原を用いて一定時間凝集反
応を行わせ、これから凝集率を求めて得られるものであ
る。第５図に検量線の一例を示す。同図から、抗原濃度
が比較的低い状態では、担体量（すなわち、抗体量）を
一定にしておけば、抗原量の増加に伴ない凝集率が漸次
増加するのがわかる。しかし、抗原濃度がある濃度以上
では凝集率が減少するという現象が生じる。
この現象は、第４図（Ｂ）に示すように、担体に付着し
た抗体のすべてに抗原が結合して凝集が抑制されること
に起因する。この場合、第５図に示す検量線のピーク値
を境にして低濃度側が抗体過剰領域Ａとなり、高濃度側
が抗原過剰領域Ｂ（プロゾーン）となる、抗体濃度を測
定する場合も、抗原を付着した担体を用いて同様の反応
が行なわれる。
た抗体のすべてに抗原が結合して凝集が抑制されること
に起因する。この場合、第５図に示す検量線のピーク値
を境にして低濃度側が抗体過剰領域Ａとなり、高濃度側
が抗原過剰領域Ｂ（プロゾーン）となる、抗体濃度を測
定する場合も、抗原を付着した担体を用いて同様の反応
が行なわれる。
発明が解決しようとする問題点
第５図において、凝集率がａ以上となると、ピーク値を
除き、測定凝集率から抗体過剰領域Ａおよび抗原過剰領
域Ｂのそれぞれについて抗原濃度が得られることになり
（たとえば凝集率ａでは２つの濃度ｃ、ｃ’が存在する
）、抗原濃度が定まらないという問題があった。
除き、測定凝集率から抗体過剰領域Ａおよび抗原過剰領
域Ｂのそれぞれについて抗原濃度が得られることになり
（たとえば凝集率ａでは２つの濃度ｃ、ｃ’が存在する
）、抗原濃度が定まらないという問題があった。
このため、従来は体液試料を希釈して再測定を行ってい
た。しかしながら、この方法では、別に希釈装置が必要
であり、また再測定のために処理検体数が減少せざるを
えなかった。
た。しかしながら、この方法では、別に希釈装置が必要
であり、また再測定のために処理検体数が減少せざるを
えなかった。
問題点を解決するための手段
この発明は畝上の問題点を排除すべく完成されたもので
ある。
ある。
すなわち、この発明の体液成分の測定方法は、体液中に
含まれる抗原（または抗体）と反応する抗体（または抗
原）を付着した担体を体液試料と混合して凝集反応を起
こさせる工程と、反応後。
含まれる抗原（または抗体）と反応する抗体（または抗
原）を付着した担体を体液試料と混合して凝集反応を起
こさせる工程と、反応後。
試料液に含まれる粒子を計測して粒子の凝集率を求める
工程と、あらかじめ抗原（または抗体）の濃度と凝集率
との関係を示す検量線を作成する工程と、前記体液試料
から求めた凝集率から前記検量線を用いて体液中に含ま
れる抗原（または抗体）の濃度を測定する工程とを含む
体液成分の測定方法において、 前記検量線を、凝集反応の反応時間Ｔ、およびＴ２につ
いてそれぞれ抗原過剰域および抗体過剰域を含む全域に
わたって作成するとともに、体液試料について検量線と
同じ反応時間Ｔ１およびＴ２における各凝集率を求め、
これらの凝集率に基づいて前記検量線から得た濃度値の
うち両反応時間に共通する濃度値を抗原（または抗体）
濃度とすることを特徴とするものである。
工程と、あらかじめ抗原（または抗体）の濃度と凝集率
との関係を示す検量線を作成する工程と、前記体液試料
から求めた凝集率から前記検量線を用いて体液中に含ま
れる抗原（または抗体）の濃度を測定する工程とを含む
体液成分の測定方法において、 前記検量線を、凝集反応の反応時間Ｔ、およびＴ２につ
いてそれぞれ抗原過剰域および抗体過剰域を含む全域に
わたって作成するとともに、体液試料について検量線と
同じ反応時間Ｔ１およびＴ２における各凝集率を求め、
これらの凝集率に基づいて前記検量線から得た濃度値の
うち両反応時間に共通する濃度値を抗原（または抗体）
濃度とすることを特徴とするものである。
作用
この発明によれば、凝集反応の反応時間Ｔ１およびＴ２
についてそれぞれ抗原過剰領域および抗体過剰領域の全
域にわたる検量線を求めるので、反応時間Ｔ、で測定し
た１つの凝集率に対して２つの抗原（または抗体）濃度
が存在する場合、これら２つの濃度にそれぞれ対応する
他の反応時間Ｔ２での凝集率は相互に異なっているので
、反応時間Ｔ２の凝集率を測定することにより、求める
試料の濃度を簡単に決定することができる。
についてそれぞれ抗原過剰領域および抗体過剰領域の全
域にわたる検量線を求めるので、反応時間Ｔ、で測定し
た１つの凝集率に対して２つの抗原（または抗体）濃度
が存在する場合、これら２つの濃度にそれぞれ対応する
他の反応時間Ｔ２での凝集率は相互に異なっているので
、反応時間Ｔ２の凝集率を測定することにより、求める
試料の濃度を簡単に決定することができる。
すなわち、この発明は、反応時間が異なれば濃度に対す
る凝集率の変化曲線も異なり、必ず一定の曲線にはなら
ないという知見に基づいている。
る凝集率の変化曲線も異なり、必ず一定の曲線にはなら
ないという知見に基づいている。
第１図は反応時間Ｔ、およびＴ２ （ただしＴ１〈Ｔ２
）における２つの検量線を示すグラフである。同図から
抗原濃度を検定する方法を説明する。
）における２つの検量線を示すグラフである。同図から
抗原濃度を検定する方法を説明する。
試料の凝集率が時間Ｔ２でＣ３であるとすると、抗原濃
度はＣ３またはＣ２のいずれかである。そして、反応時
間Ｔ１での試料の凝集率がＣ２であると、検量線からこ
れらの反応時間における共通する濃度値Ｃ２が求める試
料の抗原濃度となる。
度はＣ３またはＣ２のいずれかである。そして、反応時
間Ｔ１での試料の凝集率がＣ２であると、検量線からこ
れらの反応時間における共通する濃度値Ｃ２が求める試
料の抗原濃度となる。
一方、反応時間Ｔ、での試料の凝集率が３１であると、
試料の抗原濃度はｃｌとなる。
試料の抗原濃度はｃｌとなる。
実際の濃度決定にあたっては、反応時間Ｔ、よりも再現
性、感度ともにすぐれる反応時間Ｔ２で濃度決定を行う
のが好ましい、そして、抗原過剰領域内に試料濃度があ
って濃度が一義的に定まらない場合は前述したように２
つの検量線から濃度決定を行うのである。
性、感度ともにすぐれる反応時間Ｔ２で濃度決定を行う
のが好ましい、そして、抗原過剰領域内に試料濃度があ
って濃度が一義的に定まらない場合は前述したように２
つの検量線から濃度決定を行うのである。
実施例
つぎにα−フ二トプロテイン（抗原）（以下、ＡＦＰと
いう）の濃度測定方法について説明する。
いう）の濃度測定方法について説明する。
あらかじめ濃度を調整した標準ＡＦＰ溶液２５μ！と緩
衝液２００μｌを試験管にとり、これに抗ＡＦＰ抗体ラ
テックス試薬２５μｌを加え、４０℃に保ちながら攪拌
し凝集反応を行った。反応開始から適当な時間に反応液
をシースフローセルに送り、液中の粒子を列状に順番に
通過させた。これに半忠体レーザを照射し粒子からの散
乱光を電気信号に変換し、この信号を増幅して粒子を大
きさ別に区分し計数した。増幅信号の大きさは粒子の大
きさく凝集粒子）に対応しており、４３号の大きさ別の
計数結果から凝集率を算出した。
衝液２００μｌを試験管にとり、これに抗ＡＦＰ抗体ラ
テックス試薬２５μｌを加え、４０℃に保ちながら攪拌
し凝集反応を行った。反応開始から適当な時間に反応液
をシースフローセルに送り、液中の粒子を列状に順番に
通過させた。これに半忠体レーザを照射し粒子からの散
乱光を電気信号に変換し、この信号を増幅して粒子を大
きさ別に区分し計数した。増幅信号の大きさは粒子の大
きさく凝集粒子）に対応しており、４３号の大きさ別の
計数結果から凝集率を算出した。
第２図はＡＦＰ濃度が１．１０．１０”、１０コ。
１０’、１０’、９Ｘ１０’ ｎｇ／ｍｌのものについ
て反応開始から３００秒までの凝集率の時間変化を測定
したものである。第２図において、ＡＦＰｔ１度が１０
’ｎｇ／ｍｊ！と１０’ｎｇ／ｍｊ！の凝集率変化曲線
に着目すると、時間２７０秒で２つの曲線は互いに交わ
っており、同じ凝集率を存する２つの濃度が存在するこ
とになる。
て反応開始から３００秒までの凝集率の時間変化を測定
したものである。第２図において、ＡＦＰｔ１度が１０
’ｎｇ／ｍｊ！と１０’ｎｇ／ｍｊ！の凝集率変化曲線
に着目すると、時間２７０秒で２つの曲線は互いに交わ
っており、同じ凝集率を存する２つの濃度が存在するこ
とになる。
したがって、２７０秒における１回だけの測定では、試
料の濃度が２つのうちいずれであるのが判断することが
できない。しかしながら、この２つの濃度は凝集率の時
間変化がまったく異なっているため、２７０秒より前（
あるいは後）の時間で少なくとももう１点だけ凝集率を
測定しておけば、２つの濃度の与える凝集率に差がある
ため、いずれの濃度であるか容易に判断することができ
る。
料の濃度が２つのうちいずれであるのが判断することが
できない。しかしながら、この２つの濃度は凝集率の時
間変化がまったく異なっているため、２７０秒より前（
あるいは後）の時間で少なくとももう１点だけ凝集率を
測定しておけば、２つの濃度の与える凝集率に差がある
ため、いずれの濃度であるか容易に判断することができ
る。
第３図は第２図に示す凝集率とＡＦＰ濃度との関係から
時間２０秒および３００秒での検量線を示すものである
。第３図から明らかなように、はとんどの凝集率に対し
て検量線が漸次上昇している抗体過剰αｎ域の濃度と検
量線が漸次下降している抗原過剰領域の濃度とが存在す
る。
時間２０秒および３００秒での検量線を示すものである
。第３図から明らかなように、はとんどの凝集率に対し
て検量線が漸次上昇している抗体過剰αｎ域の濃度と検
量線が漸次下降している抗原過剰領域の濃度とが存在す
る。
このため、反応時間３００秒での１回だけの測定では、
２つの抗原濃度のうちどちらが正しい濃度であるのか決
定できないが、同じ試料を２０秒で測定した場合は３０
０秒での２つの濃度にそれぞれ対応する凝集率が異なる
ため、試料濃度が３００秒で測定した２つの濃度のうち
いずれであるかを容易に判断することができるのである
。
２つの抗原濃度のうちどちらが正しい濃度であるのか決
定できないが、同じ試料を２０秒で測定した場合は３０
０秒での２つの濃度にそれぞれ対応する凝集率が異なる
ため、試料濃度が３００秒で測定した２つの濃度のうち
いずれであるかを容易に判断することができるのである
。
なお、以上の説明では主としてＡＦＰといった抗原の濃
度測定方法について説明したが、他の抗原や抗体の濃度
測定の場合も同様にして測定可能である。
度測定方法について説明したが、他の抗原や抗体の濃度
測定の場合も同様にして測定可能である。
発明の効果
この発明によれば、抗原過剰領域および抗体過剰領域の
全域にわたって凝集反応の反応時間の異なる２つの検量
線を求めるので、１つの反応時間Ｔ１で測定した凝集率
に対して２つの抗原（または抗体）濃度が存在する場合
、これら２つの濃度にそれぞれ対応する他の反応時間Ｔ
２での凝集率は相互に異なっているので、反応時間Ｔ２
の凝集率を測定することにより、求める試料の濃度を簡
単に決定することができる。その結果、（Ａ）抗体過剰
領域（または抗原過剰領域）がら抗原過剰領域（または
抗体過剰領域）までを含む非常に広い範囲での濃度決定
が可能となる。（Ｂ）従来のように再測定のための希釈
装置を必要とせず、システムが簡単になる。（Ｃ）再測
定の必要がなくなるので、検体液処理数が向上するなど
の効果がある。
全域にわたって凝集反応の反応時間の異なる２つの検量
線を求めるので、１つの反応時間Ｔ１で測定した凝集率
に対して２つの抗原（または抗体）濃度が存在する場合
、これら２つの濃度にそれぞれ対応する他の反応時間Ｔ
２での凝集率は相互に異なっているので、反応時間Ｔ２
の凝集率を測定することにより、求める試料の濃度を簡
単に決定することができる。その結果、（Ａ）抗体過剰
領域（または抗原過剰領域）がら抗原過剰領域（または
抗体過剰領域）までを含む非常に広い範囲での濃度決定
が可能となる。（Ｂ）従来のように再測定のための希釈
装置を必要とせず、システムが簡単になる。（Ｃ）再測
定の必要がなくなるので、検体液処理数が向上するなど
の効果がある。
第１図はこの発明における検量線を示すグラフ、第２図
はこの発明の実施例における凝集率の時間変化を示すグ
ラフ、第３図はこの実施例における検量線のグラフ、第
４図（Ａ＞および（Ｂ）はいずれも凝集反応の機構を示
す説明図、第５図はある反応時間での検量線を示すグラ
フである。 第１図 □ 反 Ｒ詩 闇 （秒） 第２図 第３図
はこの発明の実施例における凝集率の時間変化を示すグ
ラフ、第３図はこの実施例における検量線のグラフ、第
４図（Ａ＞および（Ｂ）はいずれも凝集反応の機構を示
す説明図、第５図はある反応時間での検量線を示すグラ
フである。 第１図 □ 反 Ｒ詩 闇 （秒） 第２図 第３図
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 体液中に含まれる抗原（または抗体）と反応する抗体（
または抗原）を付着した担体を体液試料と混合して凝集
反応を起こさせる工程と、反応後、試料液に含まれる粒
子を計測して粒子の凝集率を求める工程と、あらかじめ
抗原（または抗体）の濃度と凝集率との関係を示す検量
線を作成する工程と、前記体液試料から求めた凝集率か
ら前記検量線を用いて体液中に含まれる抗原（または抗
体）の濃度を測定する工程とを含む体液成分の測定方法
において、 前記検量線を、凝集反応の反応時間Ｔ＿１およびＴ＿２
についてそれぞれ抗原過剰域および抗体過剰域を含む全
域にわたって作成するとともに、体液試料について反応
時間Ｔ＿１およびＴ＿２における各凝集率を求め、これ
らの凝集率に基づいて前記検量線から得た濃度値のうち
両反応時間に共通する濃度値を抗原（または抗体）濃度
とすることを特徴とする体液成分の測定方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60122196A JPH0635980B2 (ja) | 1985-06-05 | 1985-06-05 | 体液成分の測定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60122196A JPH0635980B2 (ja) | 1985-06-05 | 1985-06-05 | 体液成分の測定方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61280568A true JPS61280568A (ja) | 1986-12-11 |
| JPH0635980B2 JPH0635980B2 (ja) | 1994-05-11 |
Family
ID=14829940
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60122196A Expired - Lifetime JPH0635980B2 (ja) | 1985-06-05 | 1985-06-05 | 体液成分の測定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0635980B2 (ja) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63145959A (ja) * | 1986-07-30 | 1988-06-18 | Shinotesuto Kenkyusho:Kk | 免疫的測定方法及び免疫的測定用キット |
| JPH01237453A (ja) * | 1988-03-18 | 1989-09-21 | Hitachi Ltd | 試料分析方法及びこれを用いた自動分析装置 |
| JPH08101198A (ja) * | 1986-07-30 | 1996-04-16 | Shinotesuto:Kk | 免疫的測定方法及び装置 |
| WO2002052265A1 (fr) * | 2000-12-26 | 2002-07-04 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | Procede d'analyse de liaison specifique et dispositif d'analyse de liaison specifique correspondant |
| US9568488B2 (en) | 2004-10-22 | 2017-02-14 | Sysmex Corporation | Biological sample analyzing apparatus |
| JP2020024125A (ja) * | 2018-08-07 | 2020-02-13 | キヤノン株式会社 | 自動分析装置、自動分析方法、および、プログラム |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2014122851A (ja) * | 2012-12-21 | 2014-07-03 | Sysmex Corp | 免疫測定方法および免疫測定装置 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5446829A (en) * | 1977-09-21 | 1979-04-13 | Hitachi Ltd | Nephelometry |
-
1985
- 1985-06-05 JP JP60122196A patent/JPH0635980B2/ja not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5446829A (en) * | 1977-09-21 | 1979-04-13 | Hitachi Ltd | Nephelometry |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63145959A (ja) * | 1986-07-30 | 1988-06-18 | Shinotesuto Kenkyusho:Kk | 免疫的測定方法及び免疫的測定用キット |
| JPH0692969B2 (ja) * | 1986-07-30 | 1994-11-16 | 株式会社シノテスト | 免疫的測定方法 |
| JPH08101198A (ja) * | 1986-07-30 | 1996-04-16 | Shinotesuto:Kk | 免疫的測定方法及び装置 |
| JPH01237453A (ja) * | 1988-03-18 | 1989-09-21 | Hitachi Ltd | 試料分析方法及びこれを用いた自動分析装置 |
| WO2002052265A1 (fr) * | 2000-12-26 | 2002-07-04 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | Procede d'analyse de liaison specifique et dispositif d'analyse de liaison specifique correspondant |
| US9568488B2 (en) | 2004-10-22 | 2017-02-14 | Sysmex Corporation | Biological sample analyzing apparatus |
| JP2020024125A (ja) * | 2018-08-07 | 2020-02-13 | キヤノン株式会社 | 自動分析装置、自動分析方法、および、プログラム |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0635980B2 (ja) | 1994-05-11 |
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