JPH076985B2 - 抗原−抗体反応の測定法 - Google Patents
抗原−抗体反応の測定法Info
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- JPH076985B2 JPH076985B2 JP61284878A JP28487886A JPH076985B2 JP H076985 B2 JPH076985 B2 JP H076985B2 JP 61284878 A JP61284878 A JP 61284878A JP 28487886 A JP28487886 A JP 28487886A JP H076985 B2 JPH076985 B2 JP H076985B2
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Landscapes
- Investigating Or Analysing Materials By Optical Means (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 （イ）産業上の利用分野 本発明は，抗原−抗体反応の測定法に関する。さらに詳
しくは，本発明は微細粒径の不溶性担体に抗体（又は抗
原）を担持させ，これに抗原（又は抗体）を反応させ
て，この抗原−抗体複合物に光を照射し，特定の波長に
おける吸光度を測定することにより抗原（又は抗体）を
定量する方法にに関する。
しくは，本発明は微細粒径の不溶性担体に抗体（又は抗
原）を担持させ，これに抗原（又は抗体）を反応させ
て，この抗原−抗体複合物に光を照射し，特定の波長に
おける吸光度を測定することにより抗原（又は抗体）を
定量する方法にに関する。
（ロ）従来の技術 近年，医療分野においては，病気の診断のために抗原あ
るいは抗体の濃度を定量的に検知することが重要な課題
となってきており，特に通常試料（血液など）中に微量
しか存在しない成分例えば急性相反応物質であるCRPや
腫瘍マーカであるAFPなどについて定量的に測定できる
高感度定量法の開発が課題となってきている。
るいは抗体の濃度を定量的に検知することが重要な課題
となってきており，特に通常試料（血液など）中に微量
しか存在しない成分例えば急性相反応物質であるCRPや
腫瘍マーカであるAFPなどについて定量的に測定できる
高感度定量法の開発が課題となってきている。
従来，第６図に示すように抗体（又は抗原）を担持させ
たラテックスを溶媒中に分散させ，これと抗原（又は抗
体）を反応させ，第７図に示すように，ラテックスの凝
集反応に伴なう濁度（吸光度）増加を波長600〜2400nm
で測定して，抗原（又は抗体）を定量する方法が特許公
開公報（昭58−11575）に示され，実用化されている。
たラテックスを溶媒中に分散させ，これと抗原（又は抗
体）を反応させ，第７図に示すように，ラテックスの凝
集反応に伴なう濁度（吸光度）増加を波長600〜2400nm
で測定して，抗原（又は抗体）を定量する方法が特許公
開公報（昭58−11575）に示され，実用化されている。
また最近第８図に示すように凝集したラテックス粒子を
含む溶液をシースフロー中で１個１個の凝集塊に分け，
レーザ光線による光散乱検出法により凝集の度合を解析
して抗原（又は抗体）を定量する方法が開発されてい
る。
含む溶液をシースフロー中で１個１個の凝集塊に分け，
レーザ光線による光散乱検出法により凝集の度合を解析
して抗原（又は抗体）を定量する方法が開発されてい
る。
（ハ）発明が解決しようとする問題点 しかしながら，上記の方法はつぎのような問題点があ
る。
る。
前者では，ラテックス溶液自身の吸光度に比べて，ラ
テックス凝集による吸光度の変化が小さく，測定波長の
選択により吸光度変化を大きくしようとしてもラテック
ス溶液自身の吸光度も大きくなってしまうため,S/Nの改
善にはならず，そのため第２図に示すように，同一の反
応液について，抗原−抗体反応開始後の一定時間後と，
それから一定時間経過後の２点について吸光度の変化分
だけを測定する２点法の採用が必要となり，十分な反応
時間後の吸光度から試薬であるラテックス溶液のみの吸
光度を差引く，いわゆるエンドポイント法（１点法）の
採用がむつかしく，試薬あるいは試料の分注から測定ま
で自動的にコントロールされる自動分析装置が必要とな
る。吸光度は粒子の大きさと，数によって決るためラ
テックス凝集の度合と吸光度の変化とは１対１に対応せ
ず，例えば第９図に示すように抗原の濃度の増加と共に
ラテックスの凝集が起っているにもかかわらず，ある濃
度以上では吸光度が減少しはじめるという反転現象が生
ずる場合がある。２点法においてはラテックス濃度を
減少させると凝集スピードが低下し，感度が悪くなるの
で高価なラテックス試薬を多量に必要とする。などの問
題があった。
テックス凝集による吸光度の変化が小さく，測定波長の
選択により吸光度変化を大きくしようとしてもラテック
ス溶液自身の吸光度も大きくなってしまうため,S/Nの改
善にはならず，そのため第２図に示すように，同一の反
応液について，抗原−抗体反応開始後の一定時間後と，
それから一定時間経過後の２点について吸光度の変化分
だけを測定する２点法の採用が必要となり，十分な反応
時間後の吸光度から試薬であるラテックス溶液のみの吸
光度を差引く，いわゆるエンドポイント法（１点法）の
採用がむつかしく，試薬あるいは試料の分注から測定ま
で自動的にコントロールされる自動分析装置が必要とな
る。吸光度は粒子の大きさと，数によって決るためラ
テックス凝集の度合と吸光度の変化とは１対１に対応せ
ず，例えば第９図に示すように抗原の濃度の増加と共に
ラテックスの凝集が起っているにもかかわらず，ある濃
度以上では吸光度が減少しはじめるという反転現象が生
ずる場合がある。２点法においてはラテックス濃度を
減少させると凝集スピードが低下し，感度が悪くなるの
で高価なラテックス試薬を多量に必要とする。などの問
題があった。
また後者ではラテックスの凝集と測定結果が１対１に対
応し，またエンドポイント法の採用が可能であり反応時
間を長くするほど凝集が進み高感度となり，かつラテッ
クス濃度を減少させても感度は変らないなど前者の欠点
が改善されているが，シースフロー構造とすることが必
要でかつ１個の粒子による散乱光を検出するためレーザ
光源が必要で専用装置とならざるを得ないという問題点
があった。
応し，またエンドポイント法の採用が可能であり反応時
間を長くするほど凝集が進み高感度となり，かつラテッ
クス濃度を減少させても感度は変らないなど前者の欠点
が改善されているが，シースフロー構造とすることが必
要でかつ１個の粒子による散乱光を検出するためレーザ
光源が必要で専用装置とならざるを得ないという問題点
があった。
この発明は，かかる状況に鑑みなされたものであり専用
装置を用いなくても，汎用の分光光度計を用いて，エン
ドポイント法により抗原（又は抗体）の濃度を測定する
方法を提供しようとするものである。
装置を用いなくても，汎用の分光光度計を用いて，エン
ドポイント法により抗原（又は抗体）の濃度を測定する
方法を提供しようとするものである。
（ニ）問題点を解決するための手段 かくしてこの発明によれば，抗原−抗体複合物を含有す
る被検液に光を照射して,2つの波長λ１，λ２における
吸光度Ａλ１,Aλ２の比Ａλ１/Aλ２を求め、その値よ
り抗原（又は抗体）の濃度を求めることを特徴とする抗
原−抗体反応の測定法が提供される。
る被検液に光を照射して,2つの波長λ１，λ２における
吸光度Ａλ１,Aλ２の比Ａλ１/Aλ２を求め、その値よ
り抗原（又は抗体）の濃度を求めることを特徴とする抗
原−抗体反応の測定法が提供される。
この発明の方法の最も特徴とする点は，異なる２波長の
吸光度比Ａλ１/Aλ２が被検液中に懸濁する粒子の平均
粒径の函数となることを利用するものであり，ラテック
スの凝集による平均粒径の増加を測定することにより，
抗原（又は抗体）の濃度を求めることができる。
吸光度比Ａλ１/Aλ２が被検液中に懸濁する粒子の平均
粒径の函数となることを利用するものであり，ラテック
スの凝集による平均粒径の増加を測定することにより，
抗原（又は抗体）の濃度を求めることができる。
２波長の吸光度の比は懸濁液の濃度に関係なく，粒子の
屈折率と，測定波長に対する粒子の相対的な大きさによ
るので,2波長の比をとる方法は，ラテックス濃度によ
り，あまり影響されないので，エンドポイント法の採用
が可能となる。
屈折率と，測定波長に対する粒子の相対的な大きさによ
るので,2波長の比をとる方法は，ラテックス濃度によ
り，あまり影響されないので，エンドポイント法の採用
が可能となる。
各種粒径のポリスチレンラテックスについて数段階の濃
度の懸濁液について,340nm〜1000nmの吸光度を測定し,1
000nmの吸光度A1000に対する他の波長の吸光度Ａλの比
Ａλ/A1000を求めた結果を第１図に示す。第１図のＡλ
/A1000の値は，数段階の濃度の懸濁液についての平均値
である。各波長での吸光度はラテックス濃度と共に増加
したが，その比Ａλ/A1000はほぼ一定であった。第１図
の結果より１例として，粒径A500/A1000およばA600/A10
00との関係を求めた結果を第２図に示す。第２図より，
粒径の増加と共にA500/A1000およびA600/A1000の値が減
少することが判る。
度の懸濁液について,340nm〜1000nmの吸光度を測定し,1
000nmの吸光度A1000に対する他の波長の吸光度Ａλの比
Ａλ/A1000を求めた結果を第１図に示す。第１図のＡλ
/A1000の値は，数段階の濃度の懸濁液についての平均値
である。各波長での吸光度はラテックス濃度と共に増加
したが，その比Ａλ/A1000はほぼ一定であった。第１図
の結果より１例として，粒径A500/A1000およばA600/A10
00との関係を求めた結果を第２図に示す。第２図より，
粒径の増加と共にA500/A1000およびA600/A1000の値が減
少することが判る。
以上より，抗体（又は抗原）を担持したラテックスの凝
集反応において，抗原（又は抗体）の濃度の増加と共に
凝集の度合も増加して平均粒径が増大した結果A500/A10
00あるいはA600/A1000の値が減少することが予測でき，
これにより抗原または抗体の定量が可能と思われる。
集反応において，抗原（又は抗体）の濃度の増加と共に
凝集の度合も増加して平均粒径が増大した結果A500/A10
00あるいはA600/A1000の値が減少することが予測でき，
これにより抗原または抗体の定量が可能と思われる。
この発明の方法に用いる２つの波長は,2波長が離れてい
るほど高感度となるが，短波長側では吸光度が大きくな
り，吸光度測定不能となる場合もあるので，使用するラ
テックスの大きさと濃度および抗原（又は抗体）の測定
濃度範囲によって最適条件を選択することが望ましい。
るほど高感度となるが，短波長側では吸光度が大きくな
り，吸光度測定不能となる場合もあるので，使用するラ
テックスの大きさと濃度および抗原（又は抗体）の測定
濃度範囲によって最適条件を選択することが望ましい。
通常の分光光度計においては，波長範囲は330〜1000nm,
吸光度範囲は2ABS以下であるので，ラテックス試薬とし
ては，ラテックスの直径が0.1〜0.3μｍで,500nmの吸光
度が2ABS以下になるような濃度に調整するのが望まし
い。
吸光度範囲は2ABS以下であるので，ラテックス試薬とし
ては，ラテックスの直径が0.1〜0.3μｍで,500nmの吸光
度が2ABS以下になるような濃度に調整するのが望まし
い。
（ホ）作用 この発明によれば，抗体（又は抗原）を担持したラテッ
クス試薬と，濃度既知の抗原（又は抗体）の希釈系列を
もたして調整した各試料とを一定時間反応させたときの
濃度とＡλ１/Aλ２の関係を示す検量線を求めておき，
この検量線を用いて濃度未知の試料中の抗原（又は抗
体）濃度を求めることになる。
クス試薬と，濃度既知の抗原（又は抗体）の希釈系列を
もたして調整した各試料とを一定時間反応させたときの
濃度とＡλ１/Aλ２の関係を示す検量線を求めておき，
この検量線を用いて濃度未知の試料中の抗原（又は抗
体）濃度を求めることになる。
以下実施例によりこの発明を詳細に説明するが，これに
よりこの発明が限定されるものではない。
よりこの発明が限定されるものではない。
（ヘ）実施例 第１表はCRP抗体を粒径約0.2μｍのラテック担持した試
薬と,CRP濃度既知の血清とを37℃で反応させた時の90分
後の各波長での吸光度A500〜A1000と吸光度比A500〜A60
0およびA600/A1000を示す。
薬と,CRP濃度既知の血清とを37℃で反応させた時の90分
後の各波長での吸光度A500〜A1000と吸光度比A500〜A60
0およびA600/A1000を示す。
また第３図にCRP濃度に対する各波長での吸光度の検量
線を示す。第３図においては添加するラテックス量のバ
ラツキによる測定点のバラツキが出ており，また濃度の
増加に対して,A500では吸光度の変化は大きく，感度が
高いことになるが，途中から吸光度が減少するという反
転現象が起っている。A1000ではこのような現象はない
が，吸光度の変化が小さく，感度が低いため，低濃度で
のS/Nが悪くなる。
線を示す。第３図においては添加するラテックス量のバ
ラツキによる測定点のバラツキが出ており，また濃度の
増加に対して,A500では吸光度の変化は大きく，感度が
高いことになるが，途中から吸光度が減少するという反
転現象が起っている。A1000ではこのような現象はない
が，吸光度の変化が小さく，感度が低いため，低濃度で
のS/Nが悪くなる。
第４図に本発明の例として,CRP濃度に対するA500/A1000
およびA600/A1000の検量線を示す。第４図においてA500
/A1000およびA600/A1000は低濃度域でもその変化率が大
きく高感度であり，かつ濃度増加していっても反転現象
は起っていない。また２波長の吸光度の比をとることに
より，ラテックス添加量のバラツキによる各吸光度のバ
ラツキが相殺されているので，測定点のバラツキもな
い。第５図に，第２図に示したA600/A1000の値を用いて
抗原−抗体複合物の各濃度における結果を示すが，これ
から本発明がラテックス凝集を的確にとらえることがで
きる簡便でかつ有用な方法であることが判る。
およびA600/A1000の検量線を示す。第４図においてA500
/A1000およびA600/A1000は低濃度域でもその変化率が大
きく高感度であり，かつ濃度増加していっても反転現象
は起っていない。また２波長の吸光度の比をとることに
より，ラテックス添加量のバラツキによる各吸光度のバ
ラツキが相殺されているので，測定点のバラツキもな
い。第５図に，第２図に示したA600/A1000の値を用いて
抗原−抗体複合物の各濃度における結果を示すが，これ
から本発明がラテックス凝集を的確にとらえることがで
きる簡便でかつ有用な方法であることが判る。
（ト）発明の効果 本発明により，専用の自動吸光度変化測定装置やシース
フローとレーザ光散乱法を用いた特殊な装置を用いなく
とも，汎用の分光光度計によりラテックス凝集を利用し
た抗原−抗体反応における抗原（又は抗体）の濃度を精
度よく高感度に測定することが可能となる。
フローとレーザ光散乱法を用いた特殊な装置を用いなく
とも，汎用の分光光度計によりラテックス凝集を利用し
た抗原−抗体反応における抗原（又は抗体）の濃度を精
度よく高感度に測定することが可能となる。
第１図は各種粒径のラテックス溶液の波長1000nmの吸光
度に対する他の波長での吸光度の比Ａλ/A1000を示す
図，第２図はラテックスの粒径と,A500/A1000およびA60
0/A1000の関係を示す図，第３図・第４図／第５図はラ
テックス凝集反応を利用してCRP濃度を測定する場合のC
RP濃度と各波長での吸光度,A500/A1000およびA600/A100
0,平均粒径の関係を示す図，第６図はラテックス凝集を
利用した抗原−抗体反応を示す図であり，第７図は吸光
度測定による従来のラテックス凝集反応を利用した抗原
−抗体反応の測定法．第８図はシースフローとレーザ光
散乱法による従来のラテックス凝集反応を利用した抗原
−抗体反応の測定法，第９図は抗原濃度と吸光度あるい
は凝集ラテックスの平均粒径の関係の１例を示す図であ
る。
度に対する他の波長での吸光度の比Ａλ/A1000を示す
図，第２図はラテックスの粒径と,A500/A1000およびA60
0/A1000の関係を示す図，第３図・第４図／第５図はラ
テックス凝集反応を利用してCRP濃度を測定する場合のC
RP濃度と各波長での吸光度,A500/A1000およびA600/A100
0,平均粒径の関係を示す図，第６図はラテックス凝集を
利用した抗原−抗体反応を示す図であり，第７図は吸光
度測定による従来のラテックス凝集反応を利用した抗原
−抗体反応の測定法．第８図はシースフローとレーザ光
散乱法による従来のラテックス凝集反応を利用した抗原
−抗体反応の測定法，第９図は抗原濃度と吸光度あるい
は凝集ラテックスの平均粒径の関係の１例を示す図であ
る。
Claims (1)
- 【請求項１】微細粒径の不溶性担体に抗体又は抗原を支
持したものを溶媒中に分散させ、これと抗原又は抗体を
反応させて生成する抗原−抗体複合物に該物質の粒径の
変化に伴い吸光度が変化する、異なる波長λ１、λ２の
光を照射して、各波長の吸光度Ａλ１、Ａλ２の比Ａλ
１/Aλ２を測定し、その値より抗原又は抗体の濃度を測
定することを特徴とする抗原−抗体反応の測定法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61284878A JPH076985B2 (ja) | 1986-11-28 | 1986-11-28 | 抗原−抗体反応の測定法 |
| US07/124,997 US5093271A (en) | 1986-11-28 | 1987-11-24 | Method for the quantitative determination of antigens and antibodies by ratio of absorbances at different wavelengths |
| DE87402674T DE3787706T2 (de) | 1986-11-28 | 1987-11-26 | Verfahren zur quantitativen Bestimmung der Antigene und Antikörper. |
| EP87402674A EP0269526B1 (en) | 1986-11-28 | 1987-11-26 | Method of quantitative determination of antigens and antibodies |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61284878A JPH076985B2 (ja) | 1986-11-28 | 1986-11-28 | 抗原−抗体反応の測定法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63138266A JPS63138266A (ja) | 1988-06-10 |
| JPH076985B2 true JPH076985B2 (ja) | 1995-01-30 |
Family
ID=17684204
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61284878A Expired - Lifetime JPH076985B2 (ja) | 1986-11-28 | 1986-11-28 | 抗原−抗体反応の測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH076985B2 (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105510200B (zh) * | 2015-11-23 | 2018-04-13 | 太原理工大学 | 一种定量评价纳米粒子悬浮液稳定性的装置 |
| CN106596963A (zh) * | 2016-05-27 | 2017-04-26 | 安徽伊普诺康生物技术股份有限公司 | 一种测定甲胎蛋白的试剂盒 |
| CN111795939B (zh) * | 2020-07-21 | 2023-06-23 | 郑州安图生物工程股份有限公司 | 一种监测磁微粒混悬液分装均匀度的方法 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6058826B2 (ja) * | 1977-09-21 | 1985-12-21 | 株式会社日立製作所 | ネフエロメトリ−法 |
| SE450528B (sv) * | 1981-03-19 | 1987-06-29 | Svenska Traeforskningsinst | Forfarande for metning av innehallet av kryll i pappersmassa |
| JPS5896251A (ja) * | 1981-12-04 | 1983-06-08 | Asahi Medical Kk | 抗原又は抗体の測定方法および測定用試薬 |
| JPS59100862A (ja) * | 1982-12-01 | 1984-06-11 | Hitachi Ltd | 自動分析装置 |
-
1986
- 1986-11-28 JP JP61284878A patent/JPH076985B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS63138266A (ja) | 1988-06-10 |
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