JPS61280271A - Ｈ↓２ｏ↓２−形成サルコシンオキシダーゼ、その取得法及びサルコシン、クレアチン又はクレアチニンの測定法 - Google Patents
Ｈ↓２ｏ↓２−形成サルコシンオキシダーゼ、その取得法及びサルコシン、クレアチン又はクレアチニンの測定法Info
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は従来公知のサルコシン−オキシダーゼに比較し
て改良された安定性（保存性）、特に界面活性剤含有分
析試系中での改良された安定性を有する新規サルコシン
オキシダーゼに関する。
て改良された安定性（保存性）、特に界面活性剤含有分
析試系中での改良された安定性を有する新規サルコシン
オキシダーゼに関する。
従来技術
サル；シンオキシダーゼ（Ｅ、Ｃ，１，５，３，１）は
特にサルコシン、クレアチン及びクレアチニンのｃＮＮ
素側測定使用可能である。特に、血清、血漿又は尿中の
クレアチニンの＃素側測定は臨床診断学において軍要で
ある。クレアチニンアミドヒドロラーゼＣＢ、Ｃ，３，
５，２，１０） 、クレアチンアミジノヒドロラーゼ（
Ｅ、Ｃ，３，５，３，３）及びサルコシンオキシダーゼ
により触媒される反応を組合せることにより、簡単な方
法で比色測定されるＨ２Ｏ２がクレアチニンから１：１
の化学ｉ−＝比で最終的に形成される；特に好適である
のはこの比色測定のために多数の色原体システム、例え
ば１トリンダ＝（Ｔｒｉｎｄｅｒ）タイプ１〔ベルグマ
イヤ−（Ｂｅｒｇｍｅｙｅｒ） 、’メトーデン・デル
・エンチイマテイツシエン・アナリューゼ（Ｍｅｔｈｏ
ｄｅｎ ｄｅｒ ｅｒＩｚｙｍａｔｉｓｃｈｅｎ Ａｎ
ａｌｙｓｅ ） ”第４改訂版、第１巻（１９８３年）
、第１９７頁参照〕のものがあり、この方法においては
ペルオキシダーゼの存在下に４−７ミノアンチビリン及
びフェノール性又はアニリン性カッグラ−からＨ２Ｏ２
により酸化的に色素が得られ、この色素の貴（もしくは
強度）は生じたＨ２Ｏ２１１１ｋに対して直線関係にあ
る。
特にサルコシン、クレアチン及びクレアチニンのｃＮＮ
素側測定使用可能である。特に、血清、血漿又は尿中の
クレアチニンの＃素側測定は臨床診断学において軍要で
ある。クレアチニンアミドヒドロラーゼＣＢ、Ｃ，３，
５，２，１０） 、クレアチンアミジノヒドロラーゼ（
Ｅ、Ｃ，３，５，３，３）及びサルコシンオキシダーゼ
により触媒される反応を組合せることにより、簡単な方
法で比色測定されるＨ２Ｏ２がクレアチニンから１：１
の化学ｉ−＝比で最終的に形成される；特に好適である
のはこの比色測定のために多数の色原体システム、例え
ば１トリンダ＝（Ｔｒｉｎｄｅｒ）タイプ１〔ベルグマ
イヤ−（Ｂｅｒｇｍｅｙｅｒ） 、’メトーデン・デル
・エンチイマテイツシエン・アナリューゼ（Ｍｅｔｈｏ
ｄｅｎ ｄｅｒ ｅｒＩｚｙｍａｔｉｓｃｈｅｎ Ａｎ
ａｌｙｓｅ ） ”第４改訂版、第１巻（１９８３年）
、第１９７頁参照〕のものがあり、この方法においては
ペルオキシダーゼの存在下に４−７ミノアンチビリン及
びフェノール性又はアニリン性カッグラ−からＨ２Ｏ２
により酸化的に色素が得られ、この色素の貴（もしくは
強度）は生じたＨ２Ｏ２１１１ｋに対して直線関係にあ
る。
る
サルコシンオキシダーゼ反応に因Ｚクレアチニン慣出法
は公知＃素側クレアチニンテストＣＢｅｒｇｍｅｙｅｒ
、 ’ Ｍｅｔｈｏｄｅｎ ｄｅｒｅｎｚｙｍａｔｉ
ｓｃｈｅｎＡｎａｌｙｓｅ ” 、第３改訂版、第１巻
（１９７４年）、第１８６４頁、タンガネリ（Ｔａｎｇ
ａｎｅｌｌｉ ）等著、クリニカル、ケミストリー（Ｃ
１１ｎ、Ｃｈｅｍ、 ）第２８巻、１９８３年、ｍ１１
４６１貞〕に対して明らかに高い検出感度（それぞれ使
用したカップラーの種類による）とい５オＵ点を有して
おり、このことは診断学上の利足範囲に２ける低い佃清
りレアチニン磯度（４４〜９７マイクロモル／ＪＪ）の
ために、まさに分析梢確さに関して非常に■要である。
は公知＃素側クレアチニンテストＣＢｅｒｇｍｅｙｅｒ
、 ’ Ｍｅｔｈｏｄｅｎ ｄｅｒｅｎｚｙｍａｔｉ
ｓｃｈｅｎＡｎａｌｙｓｅ ” 、第３改訂版、第１巻
（１９７４年）、第１８６４頁、タンガネリ（Ｔａｎｇ
ａｎｅｌｌｉ ）等著、クリニカル、ケミストリー（Ｃ
１１ｎ、Ｃｈｅｍ、 ）第２８巻、１９８３年、ｍ１１
４６１貞〕に対して明らかに高い検出感度（それぞれ使
用したカップラーの種類による）とい５オＵ点を有して
おり、このことは診断学上の利足範囲に２ける低い佃清
りレアチニン磯度（４４〜９７マイクロモル／ＪＪ）の
ために、まさに分析梢確さに関して非常に■要である。
史に、使用される中性、水性媒体中での色原体の安定性
はＵＶテストの指示％ ＮＡＤＨの安定性より良好であ
る。今日なお最も使用されている賞月法、ヤフエ（Ｊａ
ｆｆ’ｅ）によるクレアチニン測定法（ホツペ・セイラ
ーズ・ツアイトシュリフト・フユル・フイジオローギツ
シエ・ケミ−（Ｈｏｐｐｅ−８ｅｙｌｅｒｓ ｚ。
はＵＶテストの指示％ ＮＡＤＨの安定性より良好であ
る。今日なお最も使用されている賞月法、ヤフエ（Ｊａ
ｆｆ’ｅ）によるクレアチニン測定法（ホツペ・セイラ
ーズ・ツアイトシュリフト・フユル・フイジオローギツ
シエ・ケミ−（Ｈｏｐｐｅ−８ｅｙｌｅｒｓ ｚ。
ＰｈｙｓｉＯｌ、 Ｃｈｅｍ、）第１０巻、１８８６年
、第６９１頁）に比較して、この方法は、更に著しぐ高
い特異性及びこれによる改良された診断学的証言力を提
供し；更には腐蝕性の強アルカリ試薬との反応も回避さ
れる。
、第６９１頁）に比較して、この方法は、更に著しぐ高
い特異性及びこれによる改良された診断学的証言力を提
供し；更には腐蝕性の強アルカリ試薬との反応も回避さ
れる。
例えば、クレアチニン測定のためにサルコシンオキシダ
ーゼの使用は、これが調合済試薬中で０〜２５℃で少な
くとも数日間十分に貯蔵安定であり、史に測定の実施の
際に高めた温度（６０〜６７°Ｏ）においても必要な最
低反応時間にわたって者しい活性損失が生じないといつ
前提を有する。臨床化学においてはしばしば試料として
濁った、トリグリセリド濃厚血清が得られるので、Ｉ＃
素分析試薬が吏、にいわゆる澄明化システム管含有して
いるのが有利であり、該システムは多ぐの場合リパーゼ
と非イオン性界面后性剤（ポリオキ、ジエチル化アルキ
ル−又はアルアルキルアルコール）及び溶解助剤として
のコール散ナトリウムのよ５な胆汁酸の塩との組合わせ
からなり、これは強く脂肪前の試料にも妨害のない視覚
測定を可能とする。
ーゼの使用は、これが調合済試薬中で０〜２５℃で少な
くとも数日間十分に貯蔵安定であり、史に測定の実施の
際に高めた温度（６０〜６７°Ｏ）においても必要な最
低反応時間にわたって者しい活性損失が生じないといつ
前提を有する。臨床化学においてはしばしば試料として
濁った、トリグリセリド濃厚血清が得られるので、Ｉ＃
素分析試薬が吏、にいわゆる澄明化システム管含有して
いるのが有利であり、該システムは多ぐの場合リパーゼ
と非イオン性界面后性剤（ポリオキ、ジエチル化アルキ
ル−又はアルアルキルアルコール）及び溶解助剤として
のコール散ナトリウムのよ５な胆汁酸の塩との組合わせ
からなり、これは強く脂肪前の試料にも妨害のない視覚
測定を可能とする。
クレアチニン測定をこのような混濁試料中で実施するた
めには、サルコシンオキシダーゼが前記貯蔵もしくは反
応条件において界面活性剤による変性又は不活性化に対
して十分抵抗性である必要がある。
めには、サルコシンオキシダーゼが前記貯蔵もしくは反
応条件において界面活性剤による変性又は不活性化に対
して十分抵抗性である必要がある。
更に、サルコシンオキシダーゼが好適な酵素特性、例え
ばサルコシンに関する低いミバエリス定数及び高い最＾
反応率を有していることが必要である、それというのも
この特性により酵素的サルコシン−、クレアチン−及び
アレアチニン測定における反応時間が主に決定されるか
らである。例えばクレアチニンのｍ素側測定は高温（６
７℃）においても、かつ界面活性剤及び溶解助剤の存在
に２いても実施ｉＪ能であるべきなので、好適な酵素特
性はまさにこれらの不利な積項条件において重要なので
ある。
ばサルコシンに関する低いミバエリス定数及び高い最＾
反応率を有していることが必要である、それというのも
この特性により酵素的サルコシン−、クレアチン−及び
アレアチニン測定における反応時間が主に決定されるか
らである。例えばクレアチニンのｍ素側測定は高温（６
７℃）においても、かつ界面活性剤及び溶解助剤の存在
に２いても実施ｉＪ能であるべきなので、好適な酵素特
性はまさにこれらの不利な積項条件において重要なので
ある。
相応する実験は、公知サルコシンオキシダーゼがこのよ
うな界面活性剤含有分析試薬中で要貯 求を満たす屍蔵安定性及び／又は高めた反応温度におけ
る安定性を示さないということを示した。
うな界面活性剤含有分析試薬中で要貯 求を満たす屍蔵安定性及び／又は高めた反応温度におけ
る安定性を示さないということを示した。
従って、サルコシンオキシダーゼに対する要求はサルコ
シンオキシダーゼが前記特性、特に安定性基準を満たす
ことである。
シンオキシダーゼが前記特性、特に安定性基準を満たす
ことである。
該課題は本発明においてストレノトマイセタツ、ｚ −
（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｔａｃｅａｅ ）からのサル
コシンオキシダーゼを使用することにより解決する。
（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｔａｃｅａｅ ）からのサル
コシンオキシダーゼを使用することにより解決する。
このＨ２Ｏ２形成酵累は界面活性剤の存在で燐ばｐリウ
ム０．１５モル／４１ｐｉ−１７．９中で２５”Ｃにお
いて、２８俊に出発時活性ρ少なくとも４０チを示す。
ム０．１５モル／４１ｐｉ−１７．９中で２５”Ｃにお
いて、２８俊に出発時活性ρ少なくとも４０チを示す。
界面活性剤含有媒体中６７℃で、該酵素はサルコシンに
関してＫＭ−１直２〜４ミリモル／ぷを有する。これに
対し、公知で、該測定に十分に安定なサルコシンオキシ
ダーゼのＫＭ−値はこの条件において約１６〜２０ミリ
モル／Ｊである。
関してＫＭ−１直２〜４ミリモル／ぷを有する。これに
対し、公知で、該測定に十分に安定なサルコシンオキシ
ダーゼのＫＭ−値はこの条件において約１６〜２０ミリ
モル／Ｊである。
本発明による酵素はストレプトマイセタツエー科のすべ
ての属（Ｔｈｅ Ｐｒｏｋａｒｙｏｔｌｓ 、第■巻、
１９８１年、第２０２８頁）、例えばカイニア・ゾルゾ
ロブナ（Ｃｈａｉｎｉａ Ｐｕｒｐｕｒｏｇｅｌｎａ
） ＤＳＭ４３１５６、カイニア・オクラツエー（Ｃｈ
ａｌｎｉａｏｃｈｒａｃｅａｅ） ＤＳＭ ４３ ｉ
５５、ストレグトマイセスｅフロックルス（Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓ ｆｌｏｅｃｕＬｕｓ）０８Ｍ４０３２
７、ストレゾトフエルテイシリウム・スペシーズ（Ｓｔ
ｒｅｐｔｏｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｎ ｓｐ、）ＤＳＭ
４０２３７及びキタサトア・ゾルプレア（Ｋｉｔ、ａｓ
ａｔｏａ ｐｕｒｐｕｒｅａ ） ＤＡＭ ４３３６２
において児い出される。
ての属（Ｔｈｅ Ｐｒｏｋａｒｙｏｔｌｓ 、第■巻、
１９８１年、第２０２８頁）、例えばカイニア・ゾルゾ
ロブナ（Ｃｈａｉｎｉａ Ｐｕｒｐｕｒｏｇｅｌｎａ
） ＤＳＭ４３１５６、カイニア・オクラツエー（Ｃｈ
ａｌｎｉａｏｃｈｒａｃｅａｅ） ＤＳＭ ４３ ｉ
５５、ストレグトマイセスｅフロックルス（Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓ ｆｌｏｅｃｕＬｕｓ）０８Ｍ４０３２
７、ストレゾトフエルテイシリウム・スペシーズ（Ｓｔ
ｒｅｐｔｏｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｎ ｓｐ、）ＤＳＭ
４０２３７及びキタサトア・ゾルプレア（Ｋｉｔ、ａｓ
ａｔｏａ ｐｕｒｐｕｒｅａ ） ＤＡＭ ４３３６２
において児い出される。
本発明の酵素は４つの異なる下位単位
（Ｕｎｔｅｒｅｉｎｈｅｉ ｔ）からなる。分子蓋は約
１７０ｋＤである。
１７０ｋＤである。
該酵素は６〜９のｐｉ−１範囲及び４０℃を下まわる温
度で安定である。５０℃においては１５分間で不活性化
する。反応の最適な温度は約３７℃であり、…最適値は
−８，０である。高い基質特異性は基質類似物質の非電
にわずかな変換において明らかである；こうして例えば
Ｎ、Ｎ−ジメチルグリシンでの変換率はサルコシン特異
性反応のわずかに１％である。
度で安定である。５０℃においては１５分間で不活性化
する。反応の最適な温度は約３７℃であり、…最適値は
−８，０である。高い基質特異性は基質類似物質の非電
にわずかな変換において明らかである；こうして例えば
Ｎ、Ｎ−ジメチルグリシンでの変換率はサルコシン特異
性反応のわずかに１％である。
種々の不オリな試薬で２５℃で測定したサルコシンに関
する一一値（燐酸塩緩衝液； ’ｒＥｓ−緩衝液）は２
〜６ミリモル／Ｊである。■ は約ａｘ ６１／〜蛋白質である。次の第１表は本発明による酵素
の補々の製剤に関して、２５℃及び３７℃で測定し友サ
ルコシンのＫＭ値を示す。
する一一値（燐酸塩緩衝液； ’ｒＥｓ−緩衝液）は２
〜６ミリモル／Ｊである。■ は約ａｘ ６１／〜蛋白質である。次の第１表は本発明による酵素
の補々の製剤に関して、２５℃及び３７℃で測定し友サ
ルコシンのＫＭ値を示す。
比較のためには公知バシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ）酵
素に関する相応する値を示した。
素に関する相応する値を示した。
第 １ 表
第１表（＠き）
不利な試薬ａ（／−ｅ）
＃４酸カリウム肌１５モルもしくは’ｒＥＳ／ＫＯＨ−
Ｑ、ｉモル、ｐＨ７，９； ２ 、４ 、６− ）リゾ
ロム−３−ヒ「ワキシ安息香酸８．６ミリモル、４−７
ミノアンチビリ７０．８ミリモル、ｘ４（Ｆｅ＜ｃＮ）
ｅ） １０マイクロモル、コール酸ナトリウム５ミリモ
ル、ルテンソ／ｌ／ （Ｌｕｔｅｎｓｏｌ） ＯＮ ５
０ ０．５９４ＮａＮ３０．２％、ティトリプレックス
（’ｒｉｔｒｉｐｌｅｘ） ＭＯ０５ミリモル、リパー
ゼ２０００ Ｕ、ペルオキシダーゼ２０００ Ｕｌ ア
スコルビン酸オキシダーゼ１００ＤＯＵ。
Ｑ、ｉモル、ｐＨ７，９； ２ 、４ 、６− ）リゾ
ロム−３−ヒ「ワキシ安息香酸８．６ミリモル、４−７
ミノアンチビリ７０．８ミリモル、ｘ４（Ｆｅ＜ｃＮ）
ｅ） １０マイクロモル、コール酸ナトリウム５ミリモ
ル、ルテンソ／ｌ／ （Ｌｕｔｅｎｓｏｌ） ＯＮ ５
０ ０．５９４ＮａＮ３０．２％、ティトリプレックス
（’ｒｉｔｒｉｐｌｅｘ） ＭＯ０５ミリモル、リパー
ゼ２０００ Ｕ、ペルオキシダーゼ２０００ Ｕｌ ア
スコルビン酸オキシダーゼ１００ＤＯＵ。
本発明による酵素は界面活性剤含有媒体中３７℃ですぐ
れた安定性においてきわだっており、この安定性は柑抽
出液上皺においても又精製酵素にひいても示される。本
発明による酵素の安定性を公知サルコシンオキシダーゼ
に比較して次の第２表に示す。
れた安定性においてきわだっており、この安定性は柑抽
出液上皺においても又精製酵素にひいても示される。本
発明による酵素の安定性を公知サルコシンオキシダーゼ
に比較して次の第２表に示す。
不利な試薬ｂ（／ぶ）：
燐酸カリウム−７，９０，１５モル；２，４．６−ドリ
プロムー６−ヒドロキシ安息嘗ハ８．６ミリモル、４−
アミノアンチピリン０．８ミリモル、ｘ、（Ｆｅ（ｃＮ
）ａ） １０マイクロモル、コール酸ナトリウム５ミリ
モル、ルテンンル０Ｎ５０ ０．５１１ＮａＮ３０．２
％、ティトリテレックスＩ Ｏ０５０５モル、リパーゼ
２０００ Ｕ、ペルオキシダーゼ２０００ Ｕ、アスコ
ルビン酸オキシダーゼ１００００Ｕ１クレアチニナーゼ
２５０００ Ｕ１クレアチナーゼ１２０００Ｕ、サルコ
シンオキシダーゼ＞１００Ｕ。
プロムー６−ヒドロキシ安息嘗ハ８．６ミリモル、４−
アミノアンチピリン０．８ミリモル、ｘ、（Ｆｅ（ｃＮ
）ａ） １０マイクロモル、コール酸ナトリウム５ミリ
モル、ルテンンル０Ｎ５０ ０．５１１ＮａＮ３０．２
％、ティトリテレックスＩ Ｏ０５０５モル、リパーゼ
２０００ Ｕ、ペルオキシダーゼ２０００ Ｕ、アスコ
ルビン酸オキシダーゼ１００００Ｕ１クレアチニナーゼ
２５０００ Ｕ１クレアチナーゼ１２０００Ｕ、サルコ
シンオキシダーゼ＞１００Ｕ。
バシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）からの酵素のみが比較可
能な安定性を示し、すべての他の酵素は実施において完
全に不十分な安定性を有するということを前記表は示し
ている。
能な安定性を示し、すべての他の酵素は実施において完
全に不十分な安定性を有するということを前記表は示し
ている。
次の第３表中には本発明による酵素及びバシラス・スペ
シーズｆ＃累の２５℃における長期安定性を示す。
シーズｆ＃累の２５℃における長期安定性を示す。
第６表
不利な試薬Ｃ：
不利な試薬すと同じ組成、であるが、色原体染色システ
ムをぢ互加せず、燐酸カリウム−７，９０，１５モルと
共にＴＥＳ ／ ＫＯＨＤ、１モルを使用した。
ムをぢ互加せず、燐酸カリウム−７，９０，１５モルと
共にＴＥＳ ／ ＫＯＨＤ、１モルを使用した。
前記の値は、本発明の＃素が長期安定性において従来公
知の最鍋なサルコシンオキシダーゼ酵素より著しくすぐ
れていることを示す。このことは長期安犀注と相関関係
のある貯威安定性に関して特にＭ賛である。
知の最鍋なサルコシンオキシダーゼ酵素より著しくすぐ
れていることを示す。このことは長期安犀注と相関関係
のある貯威安定性に関して特にＭ賛である。
従って、不発明による酵素はその低いミバエリス足載の
ゆえにサルコシン、クレアチン又はクレアチニンの酵素
的測定の者しく迅速な実流シン−、クレアチン−又はク
レアチニン測定における恒ＹＩｉＡ保持時間にわたって
公知サルコシンオキシダーゼの多くのものより著しく安
定である。
ゆえにサルコシン、クレアチン又はクレアチニンの酵素
的測定の者しく迅速な実流シン−、クレアチン−又はク
レアチニン測定における恒ＹＩｉＡ保持時間にわたって
公知サルコシンオキシダーゼの多くのものより著しく安
定である。
実施例
次に実施例につき本発明を史に詳細に説明する。
例 １
カイ＝７・プルプロｒ＋Ｄｓｕ４３１５６の培養
生物を振盪フラスコ９次の組成の複合媒体中で培養しｆ
Ｃ： ＃母抽出穎５ｇ、ペプトン（蛋白消化処理）３ ９
、 ＮａＣ１２ｇ ％ Ｍｇ５Ｏ４ｘ ７ Ｈ
２Ｏ０−２４９、ＣａＣｌ２ ｘ ７ Ｈ２Ｏ０，０１
４ｇ、グルコース２ｇ、サルコシン１０９、Ｈ２Ｏ，１
形、ｐＨ７−Ｄｏ２８℃で培養した用地は６０時間後に
約４０００＃の活性を提供する。
Ｃ： ＃母抽出穎５ｇ、ペプトン（蛋白消化処理）３ ９
、 ＮａＣ１２ｇ ％ Ｍｇ５Ｏ４ｘ ７ Ｈ
２Ｏ０−２４９、ＣａＣｌ２ ｘ ７ Ｈ２Ｏ０，０１
４ｇ、グルコース２ｇ、サルコシン１０９、Ｈ２Ｏ，１
形、ｐＨ７−Ｄｏ２８℃で培養した用地は６０時間後に
約４０００＃の活性を提供する。
例 ２
カイニアからのサルコシンオキシダーゼＥ、Ｃ。
１．５．３．１の１４Ｌ都
カイニア・ゾルデロデナｐｓｕ ４３１５６の湿剃物實
２，９に９（培地９５２から得られた）を２０ミリモル
／Ｊ燐酸塩緩衝液、−８，０，１５ぶと共に懸濁し、リ
ゾチーム４ｇを用いて２５０Ｃで４時ｒＴ！ｌ溶解した
。該溶解懸濁液に、核酸と外来蛋白質との十分な分配が
達をられる景で１０％ポリエチレンイミン（ポリ−ｍｉ
ｎ （） −２０−）溶液（ＢＡＳＦ） ｆｅ添加した
。
２，９に９（培地９５２から得られた）を２０ミリモル
／Ｊ燐酸塩緩衝液、−８，０，１５ぶと共に懸濁し、リ
ゾチーム４ｇを用いて２５０Ｃで４時ｒＴ！ｌ溶解した
。該溶解懸濁液に、核酸と外来蛋白質との十分な分配が
達をられる景で１０％ポリエチレンイミン（ポリ−ｍｉ
ｎ （） −２０−）溶液（ＢＡＳＦ） ｆｅ添加した
。
サルコシンオキシダーゼ（上澄液中に存在）をわずかに
塩基性のにオン交換体（ＤＥＡＲ−セファデックス）に
＃６付させ、引き続き上昇する塩１唄糾醒漱で浴馳する
。浴離液を慎Ｃばアンモニウムで濃度０．６モル／、！
３に真如し、該酵素をフェニル−セファロースに結合し
、降下する硫酸アンモニウムｉｒａ斜浴欣（前記燭酸埴
媛倫液）でクロマトグラフィーにかげた。４Ｕ／〜蛋白
實を含弔゛する溶跳液を固体硫酸アンモニウムと共に２
．４モル／２までの繊度にした。沈殿を０．１モル／−
ｅ所ば塩緩泗液で城り込み、サルコシンオキシダーゼを
モレキュラーシーツ通過（セファクリル（Ｓｅｐｈａｃ
ｒｙｌ）−８−２００、ファルマシア（ｐｈａｒｍａｃ
ｉａ））により更に梢製した。
塩基性のにオン交換体（ＤＥＡＲ−セファデックス）に
＃６付させ、引き続き上昇する塩１唄糾醒漱で浴馳する
。浴離液を慎Ｃばアンモニウムで濃度０．６モル／、！
３に真如し、該酵素をフェニル−セファロースに結合し
、降下する硫酸アンモニウムｉｒａ斜浴欣（前記燭酸埴
媛倫液）でクロマトグラフィーにかげた。４Ｕ／〜蛋白
實を含弔゛する溶跳液を固体硫酸アンモニウムと共に２
．４モル／２までの繊度にした。沈殿を０．１モル／−
ｅ所ば塩緩泗液で城り込み、サルコシンオキシダーゼを
モレキュラーシーツ通過（セファクリル（Ｓｅｐｈａｃ
ｒｙｌ）−８−２００、ファルマシア（ｐｈａｒｍａｃ
ｉａ））により更に梢製した。
ａ製した酵素は５．５Ｕ／雫蛋白質の特異活性を有する
。
。
例 ６
クレアチニン測定のためのサルコシンオキシダーゼの使
用 ａ）試薬Ｉ（試料空値試粟） 燐酸カリウム（ｐｉ−１７，９）
１５０ミリモル１Ｊ３（又は’ｒＥｓ／ＫＯＨｐｌ′１
７．９ ０．１モル／詔）４−アミノアノチビリン
ロ、８ミリ七ル／！コール酸ナトリウ
ム ５ミリモル／１ルチンツ
ル■○Ｎ５０ ０．５％（Ｗ／
Ｖ）クレアチンアミジノヒドロラーゼ １
２ ０〜例２によるサルコシンオキシダーゼ ６
．５ Ｕ〜ルベルオキシダーゼ
２Ｕ／ｍｌリパーゼ ２
Ｕ／ｍｌアスコルビン酸オキシダーゼ
１［ＩＵ／ｍｂ）試薬１１（Ｋ料試薬）： Ｃ）試験法／測定配合物： 波長５４６ ｎｍ ；温度＝２５℃（又は６７℃）：層
厚＝１ｍ１空気に対Ｉて」り定２ ５℃又は３７℃で２０分間恒温保持、次いで吸光度Ｅ■
〜Ｅ■測定。
用 ａ）試薬Ｉ（試料空値試粟） 燐酸カリウム（ｐｉ−１７，９）
１５０ミリモル１Ｊ３（又は’ｒＥｓ／ＫＯＨｐｌ′１
７．９ ０．１モル／詔）４−アミノアノチビリン
ロ、８ミリ七ル／！コール酸ナトリウ
ム ５ミリモル／１ルチンツ
ル■○Ｎ５０ ０．５％（Ｗ／
Ｖ）クレアチンアミジノヒドロラーゼ １
２ ０〜例２によるサルコシンオキシダーゼ ６
．５ Ｕ〜ルベルオキシダーゼ
２Ｕ／ｍｌリパーゼ ２
Ｕ／ｍｌアスコルビン酸オキシダーゼ
１［ＩＵ／ｍｂ）試薬１１（Ｋ料試薬）： Ｃ）試験法／測定配合物： 波長５４６ ｎｍ ；温度＝２５℃（又は６７℃）：層
厚＝１ｍ１空気に対Ｉて」り定２ ５℃又は３７℃で２０分間恒温保持、次いで吸光度Ｅ■
〜Ｅ■測定。
Ｅ＝（Ｅ■−Ｅ■）−（Ｅ■−Ｅ■）。
試料中のクレアチニン濃度の評価ニ
ー緒に実施した水性スタンダード（２製／ｄ））に関し
て評価。このためにスタンダードを測定配合物中に試料
と同様に添加する。
て評価。このためにスタンダードを測定配合物中に試料
と同様に添加する。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、ストレプトマイセタツエーから得られ、界面活性剤
の存在で燐酸カリウム０．１５モル／ｌ、ｐＨ７．９中
２５℃で２日後なお開始時活性の少なくとも４０％の活
性を有するＨ＿２Ｏ＿２−形成サルコシンオキシダーゼ
。 ２、ストレプトマイセタツエーから得られ、界面活性剤
の存在で燐酸カリウム０．１５モル／ｌ、ｐＨ７．９中
２５℃で２日後なお開始時活性の少なくとも４０％の活
性を有するＨ＿２Ｏ＿２サルコシンオキシダーゼを取得
するために、処理にみあうだけのサルコシンオキシダー
ゼ含量のストレプトマイセタツエー科の菌株を培養し、
バイオマスから該酵素を取得することを特徴とするＨ＿
２Ｏ＿２−形成サルコシンオキシダーゼの取得法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3519218.6 | 1985-05-29 | ||
| DE19853519218 DE3519218A1 (de) | 1985-05-29 | 1985-05-29 | H(pfeil abwaerts)2(pfeil abwaerts)o(pfeil abwaerts)2(pfeil abwaerts)-bildende sarcosinoxidase, ihre herstellung und verwendung |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61280271A true JPS61280271A (ja) | 1986-12-10 |
| JPH0414957B2 JPH0414957B2 (ja) | 1992-03-16 |
Family
ID=6271899
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61120358A Granted JPS61280271A (ja) | 1985-05-29 | 1986-05-27 | Ｈ↓２ｏ↓２−形成サルコシンオキシダーゼ、その取得法及びサルコシン、クレアチン又はクレアチニンの測定法 |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US4743549A (ja) |
| EP (1) | EP0205967B1 (ja) |
| JP (1) | JPS61280271A (ja) |
| KR (1) | KR890004091B1 (ja) |
| AT (1) | ATE63944T1 (ja) |
| AU (1) | AU561098B2 (ja) |
| CA (1) | CA1277269C (ja) |
| DE (2) | DE3519218A1 (ja) |
| ES (1) | ES8800345A1 (ja) |
| FI (1) | FI91645C (ja) |
| SU (1) | SU1582993A3 (ja) |
| ZA (1) | ZA863143B (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63209585A (ja) * | 1987-02-27 | 1988-08-31 | Kobayashi Seiyaku Kk | サルコシン・オキシダ−ゼの製造法 |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3519218A1 (de) * | 1985-05-29 | 1986-12-04 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | H(pfeil abwaerts)2(pfeil abwaerts)o(pfeil abwaerts)2(pfeil abwaerts)-bildende sarcosinoxidase, ihre herstellung und verwendung |
| DE3774966D1 (de) * | 1986-08-28 | 1992-01-16 | Union Carbide Canada Ltd | Entfrostung und vereisungsverhindernde zusammensetzung fuer flugzeuge. |
| TW257792B (ja) * | 1992-10-01 | 1995-09-21 | Lilly Co Eli | |
| US9804154B2 (en) | 2013-03-12 | 2017-10-31 | Epinex Diagnostics, Inc. | Rapid test for urine albumin and urine creatinine |
| EP3415910A1 (en) | 2017-06-16 | 2018-12-19 | Prevention Medicals s.r.o. | A method of quantitative determination of sarcosine in a biological sample using anti-arcosine antibodies and peroxidase-active gold nanoparticles or quantum dots |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6029473B2 (ja) * | 1977-10-04 | 1985-07-10 | 東洋醸造株式会社 | ザルコシン・オキシダ−ゼの製法 |
| JPS5534001A (en) * | 1978-08-28 | 1980-03-10 | Noda Sangyo Kagaku Kenkyusho | Stabilization of sarcosine oxidase |
| JPS5692790A (en) * | 1979-12-26 | 1981-07-27 | Hideaki Yamada | Preparation of sarcosine oxidase |
| DE3326888A1 (de) * | 1983-07-26 | 1985-02-14 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Sarcosin-oxidase |
| JPS61162174A (ja) * | 1985-01-11 | 1986-07-22 | Noda Sangyo Kagaku Kenkyusho | 耐熱性ザルコシン・オキシダ−ゼｎ及びその製造法 |
| DE3519218A1 (de) * | 1985-05-29 | 1986-12-04 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | H(pfeil abwaerts)2(pfeil abwaerts)o(pfeil abwaerts)2(pfeil abwaerts)-bildende sarcosinoxidase, ihre herstellung und verwendung |
-
1985
- 1985-05-29 DE DE19853519218 patent/DE3519218A1/de not_active Withdrawn
-
1986
- 1986-04-28 ZA ZA863143A patent/ZA863143B/xx unknown
- 1986-04-29 AU AU56794/86A patent/AU561098B2/en not_active Ceased
- 1986-04-30 CA CA000507950A patent/CA1277269C/en not_active Expired - Lifetime
- 1986-05-13 ES ES554907A patent/ES8800345A1/es not_active Expired
- 1986-05-27 EP EP86107203A patent/EP0205967B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1986-05-27 DE DE8686107203T patent/DE3679455D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1986-05-27 AT AT86107203T patent/ATE63944T1/de not_active IP Right Cessation
- 1986-05-27 JP JP61120358A patent/JPS61280271A/ja active Granted
- 1986-05-28 FI FI862258A patent/FI91645C/fi not_active IP Right Cessation
- 1986-05-28 US US06/868,262 patent/US4743549A/en not_active Expired - Lifetime
- 1986-05-28 SU SU4027546A patent/SU1582993A3/ru active
- 1986-05-28 KR KR1019860004175A patent/KR890004091B1/ko not_active IP Right Cessation
-
1988
- 1988-02-09 US US07/153,976 patent/US4845029A/en not_active Expired - Lifetime
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63209585A (ja) * | 1987-02-27 | 1988-08-31 | Kobayashi Seiyaku Kk | サルコシン・オキシダ−ゼの製造法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU561098B2 (en) | 1987-04-30 |
| ES8800345A1 (es) | 1987-11-16 |
| ATE63944T1 (de) | 1991-06-15 |
| EP0205967B1 (de) | 1991-05-29 |
| DE3679455D1 (de) | 1991-07-04 |
| ZA863143B (en) | 1986-12-30 |
| AU5679486A (en) | 1986-12-04 |
| FI91645C (fi) | 1994-07-25 |
| EP0205967A2 (de) | 1986-12-30 |
| EP0205967A3 (en) | 1988-07-27 |
| DE3519218A1 (de) | 1986-12-04 |
| SU1582993A3 (ru) | 1990-07-30 |
| US4743549A (en) | 1988-05-10 |
| CA1277269C (en) | 1990-12-04 |
| KR890004091B1 (ko) | 1989-10-20 |
| JPH0414957B2 (ja) | 1992-03-16 |
| US4845029A (en) | 1989-07-04 |
| FI862258A (fi) | 1986-11-30 |
| FI862258A0 (fi) | 1986-05-28 |
| FI91645B (fi) | 1994-04-15 |
| KR860009127A (ko) | 1986-12-20 |
| ES554907A0 (es) | 1987-11-16 |
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