JPS61271454A - 免疫学的分析方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 この発明は、免疫学的分析方法に関する。

〔従来の技術〕　　　　゛ サンプル中の所定の被検物質を免疫学的に分析する方法
の１つとして、細胞等の粒子状抗原が対応する抗体によ
って架橋され凝集するのを利用して、抗原または抗体を
同定する凝集反応が知られている。

また、最近では、所定の物質で標識した抗原または抗体
を用いて被検物質を同定、定里するＲＩ八（ラジオイム
ノア・ンセイ）、巳ＩＡ　　（エンザイムイムノアッセ
イ）、ＦＩＡ（フルオロノムノアッセイ）等の免疫検定
法も提案されている。

〔発明が解決しようとする問題点〕

しかしながら、凝集反応による分析においては反応液を
収容する反応容器をほぼ静置状態にして抗原抗体反応を
行なわせないと、その反応によって形成される凝集塊が
振動等によって破壊されて正確な分析ができなくなる。

また、凝集塊や粒子が反応容器の底部に沈降して凝集、
非凝集の明確なパターンを形成するためには、特別な反
応容器が必要であると共に、長時間の反応時間を要する
等の問題がある。また、通常の凝集反応では、不完全抗
体のように抗原とは結合するが、その抗原結合価やサイ
ズあるいは抗原表面の電気的性質等により凝集させる能
力をもたない物質は分析できないという問題もある。

これに対し、免疫検定法は、凝集反応によらず、抗原抗
体反応の高い特異性と検出感度を利用し、標識物質を介
して被検物質を分析するもので、不完全抗体を含む種々
の抗体、抗原を高精度で同定、定量できる利点がある。

しかし、この免疫検定法にあっては、競合法では分析す
べき物質と同一の物質を標識し、またサンドイツチ法で
は分析すべき物質と抗原抗体反応を起す物質を標識する
必要があるため、分析項目に応じた標識試薬が必要にな
るという問題がある。

この発明は、このような従来の問題点に着目してなされ
たもので、凝集反応によらず、しかも共通の標識試薬で
不完全抗体を含む種々の被検物質を高精度で同定、定量
できる新規な免疫学的分析方法を提供することを目的と
する。

〔問題点を解決するための手段および作用〕上記目的を
達成するため、この発明では、試薬としてサンプル中の
所定の被検物質に特異的に反応する抗原または抗体を有
する第１試薬と、抗原抗体複合体に非特異的に結合する
補体を所定の標識物質で標識した第２試薬とを用いて、
これら試薬とサンプルとを反応させ、サンプルと第１試
薬との反応により形成される抗原抗体複合体に補体を介
して結合した標識物質および／または結合しない標識物
質を介してサンプル中の所定の被検物質を分析する。

〔実施例〕

図面はこの発明の一実施例を示す反応模式図である。こ
の実施例では、サンプルである血清中に所定の抗体が産
出されているか否かを同定すると同時に定量する。この
ため、第１試薬として分析すべき抗体く例えばＩｇＧ抗
体）と特異的に反応する抗原１　（ＩｇＧ抗原）を有す
る血球２を用い、第２試薬として抗原１と分析すべき抗
体との抗原抗体反応による抗原抗体複合体に結合する補
体くＣ１）３（例えばモルモットの新鮮血清から抽出し
たもの）を所定の標識物質４（この実施例では酵素）で
標識したものを用い、これら試薬とサンプルとを反応容
器内で反応させる。

ここで、サンプル中に分析すべき抗体５があると、それ
らの抗体５は抗原抗体反応により抗原１に特異的に結合
し、その抗原抗体複合体に標識物質４で標識された補体
３が結合する。

次に、抗原抗体複合体に結合した補体３と結合していな
い残余の補体３とを洗浄により、いわゆるＢ−Ｆ分離し
て残余の補体３を除去してから、標識物質４と反応する
発色試薬を加えて反応させた後、その反応液をフローセ
ルで比色測定して抗体５を同定、定量する。

なお、上記の反応において、第１、第２試薬およびサン
プルは、同時に反応容器に注入してもよいし、また第１
試薬とサンプルとを反応させてから、第２試薬を注入す
る等、任意のタイミングで注入することができる。

この実施例によれば、凝集による分析ではなく、抗原抗
体反応と、その複合体に非特異的に結合する標識物質４
で標識した補体３の補体結合反応とを利用してサンプル
中の所定の抗体５を分析するものであるから、振動等に
影響されることなく、通常の反応容器を用いて短時間で
、しかも高精度の分析ができる。また、標識物質４で標
識した補体３は、抗原抗体複合体に非特異的に結合する
ので、これを種々の被検物質の分析に共用することがで
きる。

なお、この発明は上述した実施例にのみ限定されるもの
ではなく幾多の変更が可能である。例えば、分析すべき
被検物質は抗体に限らず抗原の分析にも有効に通用する
ことができる。この場合には、第１試薬として分析すべ
き抗原と特異的に反応する抗体を用いればよい。また、
第１試薬としての抗原または抗体は、ガラスあるいはプ
ラスチックビーズの表面に固相化してもよいし、あるい
は反応容器の内壁に固相化したり、またファイバやロッ
ドの端面に固相化してもよい。なお、ファイバやロッド
の端面に固相化する場合には、これを反応容器から取出
すことによってＢ−Ｆ分離を行おうことができると共に
、その後これを発色試薬に浸漬した状態で測光できる利
点がある。また、第２試薬の量を一定量とすることによ
り、抗原抗体複合体に結合しなかった補体３の標識物質
４を測定して被検物質を分析することもできるし、抗原
抗体複合体に結合した補体３と結合しなかった補体３の
それぞれの標識物質を測定して被検物質を分析すること
もできる。更に、標識物質４は酵素に限らず、螢光物質
や放射性物質等を用いることもできる。また、上述した
実施例では、血清中に所定の抗体が産出されているか否
かを分析するようにしたが、この発明はサンプルとして
の血球に所定の抗体または抗原が結合しているか否かを
分析する場合にも有効に適用することができる。この場
合には、標識物質で標識した補体とサンプルとしての血
球とを反応させればよい。

〔発明の効果〕

以上述べたように、この発明によれば抗原抗体反応の特
異性と、抗原抗体複合体に結合する補体結合反応の非特
異性とを利用し、補体を所定の標識物質で標識すること
により、被検物質を標識物質を介して分析するようにし
たので、不完全抗体を含む種々の被検物質を共通の標識
試薬を用いて短時間で高精度で同定、定量することがで
きる。

【図面の簡単な説明】

図面はこの発明の一実施例を示す反応模式図である。 １・・・抗原　　　　　　２・・・血球３・・・補体　
　　　　　４・・・標識物質５・・・抗体

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １、サンプルと、このサンプル中の所定の被検物質に特
   異的に反応する抗原または抗体を有する第１試薬と、抗
   原抗体複合体に非特異的に結合する補体を所定の標識物
   質で標識した第２試薬とを反応させ、この第２試薬の前
   記サンプル中の所定の被検物質と前記第１試薬との抗原
   抗体複合体に前記補体を介して結合した前記標識物質お
   よび／または結合しない標識物質に基いて、前記サンプ
   ル中の所定の被検物質を分析することを特徴とする免疫
   学的分析方法。