JP2709296B2 - 免疫学的分析方法 - Google Patents
免疫学的分析方法Info
- Publication number
- JP2709296B2 JP2709296B2 JP8131602A JP13160296A JP2709296B2 JP 2709296 B2 JP2709296 B2 JP 2709296B2 JP 8131602 A JP8131602 A JP 8131602A JP 13160296 A JP13160296 A JP 13160296A JP 2709296 B2 JP2709296 B2 JP 2709296B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- antigen
- antibody
- information
- reaction solution
- flowing
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Description
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、サンプル中の抗原
または抗体と反応する抗体または抗原を固相化した担体
を用いた免疫学的分析方法に関するものである。 【０００２】 【従来の技術】血液、体液等に含まれるグロブリン、酵
素等の蛋白質、ホルモン、細菌、ウイルス等はその分子
構造が類似していたり、ごく微量であるために、通常の
分析方法では同定、定量が困難である。そこで、これら
の物質の分析には、抗原または抗体を粒子状の担体に固
相化して抗原抗体反応を起こすようにした免疫学的な分
析方法が一般に用いられている。 【０００３】このような免疫学的分析方法には、例え
ば、標識物質を用いるものとして、ＲＩＡ（ラジオイム
ノアッセイ）、ＥＩＡ（エンザイムイムノアッセイ）、
ＦＩＡ（フルオロイムノアッセイ）等がある。また、こ
れらの標識物質を用いる分析方法は、測定系において、
例えば標識物質で標識した抗体（抗原）とサンプル中の
抗原（抗体）とが抗原抗体反応を起こした免疫複合体
（Ｂound）と、抗原抗体反応に関与せず、自由（Ｆree
）な状態で残余する未反応成分としての標識抗体（抗
原）とを分離する操作、いわゆるＢ−Ｆ分離を必要とす
るヘテロジニアス法と、必要としないホモジニアス法と
に分類される。 【０００４】上記のヘテロジニアス法による分析方法と
しては、特開昭53-10495号公報において、カラムクロマ
トグラフィーを利用してＢ−Ｆ分離を行うようにしたも
のが提案されている。これは、例えば溶液中の遊離物質
（Ｆree ）を選択的に吸着し、免疫複合体（Ｂound）を
吸着しないイオン交換樹脂や、分子ふるい効果を有する
ゲルクロマトグラフィー用の充填剤を吸着剤として用い
て、所要の反応時間後にサンプルを含む遊離成分を未反
応成分として、Ｂ−Ｆ分離するというものである。 【０００５】 【発明が解決しようとする課題】しかし、このようにＢ
−Ｆ分離をカラムクロマトグラフィーを用いて行うもの
において、多項目の分析を行うとすると、項目毎にカラ
ムを作成しなければならないと共に、反応液を項目毎に
異なるカラムに吸着させる操作が必要となる。したがっ
て、反応液の所要量が増すと共に、分析操作が煩雑にな
ってしまう。また、各カラムにおいて免疫複合体の大き
さや形状にばらつきがあったり、免疫複合体と遊離物質
との大きさが近接していると、Ｂ−Ｆ分離自体が困難と
なって精度が悪くなるとともに、Ｂ−Ｆ分離によってそ
れ以降の反応が起こらなくなるので、サンプルを効率良
く利用できない。しかも、例えば免疫グロブリン等の試
薬として用いる抗体と同じ分子や、化学的、物理的に類
似した分子の測定には使用できず、分析項目が極めて制
限される。 【０００６】本発明の目的は、上述した不具合を解決
し、免疫複合体の存在をＢ−Ｆ分離することなく、高精
度に測定できるとともに、分析全体に要する時間を短時
間で実施できる免疫学的分析方法を提供しようとするも
のである。また、本発明のもう１つの目的は、多項目の
分析を１台の自動化装置で高精度かつ容易に実行できる
免疫学的分析方法を提供しようとするものである。 【０００７】 【課題を解決するための手段】本発明は、ヘテロジニア
ス法によりサンプル中の抗原および／または抗体を検出
する方法であって、所定量のサンプルと所望の分析項目
に対応する抗原または抗体を固相化した充分な個数の担
体と標識物質で標識された抗原または抗体とを含む混合
された反応液を同時または逐次に得る工程と、前記反応
液を混合状態のままフロ−セル中に流す工程と、フロ−
セル内を流れる反応液に対してレ−ザ光を照射して担体
の存在を示す第１情報と抗原抗体反応の存在を示す第２
情報とを含む受光デ−タを得る工程と、受光した全ての
デ−タを前記第１情報と第２情報との組合せによって分
別し、第１情報と第２情報の両方が得られた時の受光デ
−タの総量を求める工程とを有することを特徴とする。
また、本発明は、ヘテロジニアス法によりサンプル中の
抗原および／または抗体を検出する方法であって、所定
量のサンプルと、互いに異なる粒径を有し、粒径毎に異
なる複数の分析項目に対応するモノクロ−ナル抗体を固
相化した充分な個数の担体と、標識物質で標識された抗
原または抗体とを含む混合された反応液を同時または逐
次に得る工程と、前記反応液を混合状態のままフロ−セ
ル中に流す工程と、フロ−セル内を流れる反応液に対し
てレ−ザ光を照射して担体の存在を示す第１情報と抗原
抗体反応の存在を示す第２情報とを含む受光デ−タを得
る工程と、受光した全てのデ−タを前記第１情報と第２
情報との組合せによって粒径毎に分別し、第１情報と第
２情報の両方が得られた時の受光デ−タの総量を粒径毎
に求める工程とを有することを特徴とする。なお、本発
明では、サンプル量が１０μｌ程度であるが、充分量の
緩衝液とともに、フロ−セル内を流すことにより、充分
個数の担体による受光デ−タを効率良く得るような構成
であることが好ましい。 【０００８】 【発明の実施の形態】図１は本発明の分析方法における
反応模式図の一実施形態を示すものである。本形態にお
いて、符号１，２および３はそれぞれ担体に用いるポリ
スチレン製のラテックスで粒径は例えばラテックス１が
0.5μｍ、ラテックス２が 1.0μｍ、ラテックス３が
1.5μｍというように、各径で均一なものを用いる。符
号４，５および６は各径のラテックス１，２および３に
それぞれ物理的吸着により固相化した固相抗体である。
また、符号７，８および９はサンプルである血清等に含
まれている抗原で、符号１０，１１および１２はそれぞ
れの抗原７，８および９に特異的に結合する抗体をＦＩ
ＴＣ等の蛍光物質で標識した標識抗体である。 【０００９】以下、ヒト免疫グロブリンクラスの特異性
分析を例にとって説明する。粒径 0.5μｍのラテックス
１には抗ヒトIgＧ抗体４を、粒径 1.0μｍのラテックス
２には抗ヒトIgＡ抗体５を、粒径 1.5μｍのラテックス
３には抗ヒトIgＭ抗体６をそれぞれ固相化する。なお、
これらの固相抗体には、ラテックス同志の非特異吸着を
なくす意味と、抗原との特異性を増強する意味で、モノ
クローナル抗体の使用が望ましい。反応は、反応用緩衝
液 200μｌにこれらの抗体結合ラテックス溶液50μｌ
と、ヒトIgＧ７、IgＡ８、IgＭ９等の抗原が含まれたサ
ンプル10μｌと、それぞれＦＩＴＣで標識した抗ヒトIg
Ｇ抗体１０、抗ヒトIgＡ抗体１１、抗ヒトIgＭ抗体１２
の混合溶液50μｌとを添加して行わせる。ここで、標識
抗体１０，１１，１２は非特異吸着を少なく、また反応
速度を高める目的でＦabフラグメントを用いることが望
ましい。また、これらの試薬類は全て同時に添加して反
応液を得るようにしても良いし、また、共通のサンプル
に対して各種の固相抗体および標識抗体を逐次添加した
反応液を得るようにしても良い。 【００１０】ここで、例えば37℃、10分間反応させる
と、各固相抗体ラテックス−抗原−標識抗体の免疫複合
体（Ｂound）１３，１４，１５と残余の標識抗体（Ｆre
e ）１６とが生成される。本例では、これを図２に示す
フローサイトメータに流して測定する。フローサイトメ
ータは既に知られているように、細胞の分析専用機であ
り、フローセル２１中のニードル２２に反応液２３を流
し、レーザ光２４をその流れに照射して細胞から発する
散乱光や蛍光を測定する。通常、前方散乱光はレーザ入
射光とほぼ水平に位置するディテクタ２５で検知され、
主に細胞サイズの測定に用いられる。蛍光は、レーザ光
２４の入射角に対して垂直方向に位置するディテクタ２
６で検知され、細胞表面の蛍光物質等の測定に用いられ
る。レーザ光２４は単一波長であるため、使用できる蛍
光色素に制限があるが、本例の分析方法において用いる
蛍光色素ＦＩＴＣは波長 489nm近くの光を吸収して波長
515nmの蛍光を発するので、この場合は波長 488nmのＡ
ｒレーザを用いれば良い。 【００１１】このようにして、反応後の図１に示す免疫
複合体１３，１４，１５と残余の標識抗体１６とが混ざ
り合った反応液２３をニードル２２からフローセル２１
中に導入し、ニードル２２中を流れる各免疫複合体と残
余の標識抗体等の各成分のレーザ光２４による散乱光お
よび蛍光をディテクタ２５および２６でそれぞれ検知す
れば、ディテクタ２５によって各免疫複合体の大きさが
測定され、しかもその大きさは各ラテックスの径が１μ
ｍ前後であれば、せいぜい数ｎｍの固体抗体−抗原−標
識抗体結合部は誤差範囲となるから、殆どラテックスの
粒径に依存する。また、同時にディテクタ２６により、
各ラテックス上に乗った蛍光量／１ラテックスが測定さ
れ、これら２つのパラメータによって図３に示すサイト
グラムが得られる。なお、図３において縦軸は蛍光量
を、横軸は粒子径を表す。 【００１２】ここで、抗原抗体反応に関与しなかった残
余の標識抗体は微径であるから、１標識抗体あたりの蛍
光量の位置３１に集中する。また、径が１番小さいラテ
ックスにより結合した図１の免疫複合体１３は位置３２
に、２番目に小さいラテックスにより結合した図１の免
疫複合体１４は、抗原濃度が高かったのでラテックス１
個あたりの蛍光量としてもかなり高い位置３３に示され
る。また、一番ラテックス径が大きかった図１の免疫複
合体１５は、抗原濃度が薄かったので位置３４に示され
ることになる。 【００１３】このようにして蛍光量測定値が得られれ
ば、予めIgＧ，IgＡ，IgＭ等各抗原の既知濃度系列から
同様にして求めた蛍光強度と抗原濃度との関係を表す検
量線に基づいてサンプル中の各抗原濃度を求めることが
できる。以上のように、フローサイトメータと、各抗原
に応じて異なる抗体を固相化したラテックスを用いるラ
テックスイムノアッセイとを組み合わせたことにより、
１台の測定装置で多項目の分析を高速かつ高精度に実施
できる。また、少量のサンプルと反応させた大量のラテ
ックスに関する免疫複合体の大きさを、Ｂ−Ｆ分離なし
にレ−ザ光によりもれなく測定するので、正確なデ−タ
を効率良く得られる。また、抗原の種類毎に粒径が異な
るラテックスを同時に用いるようにすれば抗原別の識別
が容易な表示も可能となる。 【００１４】なお、本発明は上述した実施形態にのみ限
定されるものではなく、幾多の変更または変形が可能で
ある。例えば、担体はラテックスに限らず、分子量の均
一な人工細胞等、測定対象に応じて任意の形状や大きさ
のものを用いることができる。また、フローサイトメー
タにソーティング機能を付加して、測定後に免疫複合
体、残余の標識抗体をそれぞれ分離することもできる。
このようにすれば、残余の標識抗体を分離して取り出す
ことができるから、これを再使用することができる。更
に、フローサイトメータに反応装置やオートサンプラ等
を付加することによって自動測定が容易に行うことがで
きる。この場合、フローサイトメータにおける測定速度
は約500 粒子／sec であるから、１つのサンプルについ
て１×106粒子を測定したとしても、３分前後で高速に
分析することができる。また、本発明は競合法による分
析にも有効に適用することができる。 【００１５】 【発明の効果】本発明によれば、ヘテロジニアス法を用
いるにも拘わらず、サンプルも過剰の標識物質も洗浄除
去する工程を不要とし、反応液をフロ−セル中で流す間
に短時間でかつ高精度に免疫学的結果を定量分析でき
る。しかも、粒径毎に異なる分析項目に対応したモノク
ロ−ナル抗体を固相化した担体を反応させた場合には、
多項目の分析を１台の自動化装置で容易に実行できる。
または抗体と反応する抗体または抗原を固相化した担体
を用いた免疫学的分析方法に関するものである。 【０００２】 【従来の技術】血液、体液等に含まれるグロブリン、酵
素等の蛋白質、ホルモン、細菌、ウイルス等はその分子
構造が類似していたり、ごく微量であるために、通常の
分析方法では同定、定量が困難である。そこで、これら
の物質の分析には、抗原または抗体を粒子状の担体に固
相化して抗原抗体反応を起こすようにした免疫学的な分
析方法が一般に用いられている。 【０００３】このような免疫学的分析方法には、例え
ば、標識物質を用いるものとして、ＲＩＡ（ラジオイム
ノアッセイ）、ＥＩＡ（エンザイムイムノアッセイ）、
ＦＩＡ（フルオロイムノアッセイ）等がある。また、こ
れらの標識物質を用いる分析方法は、測定系において、
例えば標識物質で標識した抗体（抗原）とサンプル中の
抗原（抗体）とが抗原抗体反応を起こした免疫複合体
（Ｂound）と、抗原抗体反応に関与せず、自由（Ｆree
）な状態で残余する未反応成分としての標識抗体（抗
原）とを分離する操作、いわゆるＢ−Ｆ分離を必要とす
るヘテロジニアス法と、必要としないホモジニアス法と
に分類される。 【０００４】上記のヘテロジニアス法による分析方法と
しては、特開昭53-10495号公報において、カラムクロマ
トグラフィーを利用してＢ−Ｆ分離を行うようにしたも
のが提案されている。これは、例えば溶液中の遊離物質
（Ｆree ）を選択的に吸着し、免疫複合体（Ｂound）を
吸着しないイオン交換樹脂や、分子ふるい効果を有する
ゲルクロマトグラフィー用の充填剤を吸着剤として用い
て、所要の反応時間後にサンプルを含む遊離成分を未反
応成分として、Ｂ−Ｆ分離するというものである。 【０００５】 【発明が解決しようとする課題】しかし、このようにＢ
−Ｆ分離をカラムクロマトグラフィーを用いて行うもの
において、多項目の分析を行うとすると、項目毎にカラ
ムを作成しなければならないと共に、反応液を項目毎に
異なるカラムに吸着させる操作が必要となる。したがっ
て、反応液の所要量が増すと共に、分析操作が煩雑にな
ってしまう。また、各カラムにおいて免疫複合体の大き
さや形状にばらつきがあったり、免疫複合体と遊離物質
との大きさが近接していると、Ｂ−Ｆ分離自体が困難と
なって精度が悪くなるとともに、Ｂ−Ｆ分離によってそ
れ以降の反応が起こらなくなるので、サンプルを効率良
く利用できない。しかも、例えば免疫グロブリン等の試
薬として用いる抗体と同じ分子や、化学的、物理的に類
似した分子の測定には使用できず、分析項目が極めて制
限される。 【０００６】本発明の目的は、上述した不具合を解決
し、免疫複合体の存在をＢ−Ｆ分離することなく、高精
度に測定できるとともに、分析全体に要する時間を短時
間で実施できる免疫学的分析方法を提供しようとするも
のである。また、本発明のもう１つの目的は、多項目の
分析を１台の自動化装置で高精度かつ容易に実行できる
免疫学的分析方法を提供しようとするものである。 【０００７】 【課題を解決するための手段】本発明は、ヘテロジニア
ス法によりサンプル中の抗原および／または抗体を検出
する方法であって、所定量のサンプルと所望の分析項目
に対応する抗原または抗体を固相化した充分な個数の担
体と標識物質で標識された抗原または抗体とを含む混合
された反応液を同時または逐次に得る工程と、前記反応
液を混合状態のままフロ−セル中に流す工程と、フロ−
セル内を流れる反応液に対してレ−ザ光を照射して担体
の存在を示す第１情報と抗原抗体反応の存在を示す第２
情報とを含む受光デ−タを得る工程と、受光した全ての
デ−タを前記第１情報と第２情報との組合せによって分
別し、第１情報と第２情報の両方が得られた時の受光デ
−タの総量を求める工程とを有することを特徴とする。
また、本発明は、ヘテロジニアス法によりサンプル中の
抗原および／または抗体を検出する方法であって、所定
量のサンプルと、互いに異なる粒径を有し、粒径毎に異
なる複数の分析項目に対応するモノクロ−ナル抗体を固
相化した充分な個数の担体と、標識物質で標識された抗
原または抗体とを含む混合された反応液を同時または逐
次に得る工程と、前記反応液を混合状態のままフロ−セ
ル中に流す工程と、フロ−セル内を流れる反応液に対し
てレ−ザ光を照射して担体の存在を示す第１情報と抗原
抗体反応の存在を示す第２情報とを含む受光デ−タを得
る工程と、受光した全てのデ−タを前記第１情報と第２
情報との組合せによって粒径毎に分別し、第１情報と第
２情報の両方が得られた時の受光デ−タの総量を粒径毎
に求める工程とを有することを特徴とする。なお、本発
明では、サンプル量が１０μｌ程度であるが、充分量の
緩衝液とともに、フロ−セル内を流すことにより、充分
個数の担体による受光デ−タを効率良く得るような構成
であることが好ましい。 【０００８】 【発明の実施の形態】図１は本発明の分析方法における
反応模式図の一実施形態を示すものである。本形態にお
いて、符号１，２および３はそれぞれ担体に用いるポリ
スチレン製のラテックスで粒径は例えばラテックス１が
0.5μｍ、ラテックス２が 1.0μｍ、ラテックス３が
1.5μｍというように、各径で均一なものを用いる。符
号４，５および６は各径のラテックス１，２および３に
それぞれ物理的吸着により固相化した固相抗体である。
また、符号７，８および９はサンプルである血清等に含
まれている抗原で、符号１０，１１および１２はそれぞ
れの抗原７，８および９に特異的に結合する抗体をＦＩ
ＴＣ等の蛍光物質で標識した標識抗体である。 【０００９】以下、ヒト免疫グロブリンクラスの特異性
分析を例にとって説明する。粒径 0.5μｍのラテックス
１には抗ヒトIgＧ抗体４を、粒径 1.0μｍのラテックス
２には抗ヒトIgＡ抗体５を、粒径 1.5μｍのラテックス
３には抗ヒトIgＭ抗体６をそれぞれ固相化する。なお、
これらの固相抗体には、ラテックス同志の非特異吸着を
なくす意味と、抗原との特異性を増強する意味で、モノ
クローナル抗体の使用が望ましい。反応は、反応用緩衝
液 200μｌにこれらの抗体結合ラテックス溶液50μｌ
と、ヒトIgＧ７、IgＡ８、IgＭ９等の抗原が含まれたサ
ンプル10μｌと、それぞれＦＩＴＣで標識した抗ヒトIg
Ｇ抗体１０、抗ヒトIgＡ抗体１１、抗ヒトIgＭ抗体１２
の混合溶液50μｌとを添加して行わせる。ここで、標識
抗体１０，１１，１２は非特異吸着を少なく、また反応
速度を高める目的でＦabフラグメントを用いることが望
ましい。また、これらの試薬類は全て同時に添加して反
応液を得るようにしても良いし、また、共通のサンプル
に対して各種の固相抗体および標識抗体を逐次添加した
反応液を得るようにしても良い。 【００１０】ここで、例えば37℃、10分間反応させる
と、各固相抗体ラテックス−抗原−標識抗体の免疫複合
体（Ｂound）１３，１４，１５と残余の標識抗体（Ｆre
e ）１６とが生成される。本例では、これを図２に示す
フローサイトメータに流して測定する。フローサイトメ
ータは既に知られているように、細胞の分析専用機であ
り、フローセル２１中のニードル２２に反応液２３を流
し、レーザ光２４をその流れに照射して細胞から発する
散乱光や蛍光を測定する。通常、前方散乱光はレーザ入
射光とほぼ水平に位置するディテクタ２５で検知され、
主に細胞サイズの測定に用いられる。蛍光は、レーザ光
２４の入射角に対して垂直方向に位置するディテクタ２
６で検知され、細胞表面の蛍光物質等の測定に用いられ
る。レーザ光２４は単一波長であるため、使用できる蛍
光色素に制限があるが、本例の分析方法において用いる
蛍光色素ＦＩＴＣは波長 489nm近くの光を吸収して波長
515nmの蛍光を発するので、この場合は波長 488nmのＡ
ｒレーザを用いれば良い。 【００１１】このようにして、反応後の図１に示す免疫
複合体１３，１４，１５と残余の標識抗体１６とが混ざ
り合った反応液２３をニードル２２からフローセル２１
中に導入し、ニードル２２中を流れる各免疫複合体と残
余の標識抗体等の各成分のレーザ光２４による散乱光お
よび蛍光をディテクタ２５および２６でそれぞれ検知す
れば、ディテクタ２５によって各免疫複合体の大きさが
測定され、しかもその大きさは各ラテックスの径が１μ
ｍ前後であれば、せいぜい数ｎｍの固体抗体−抗原−標
識抗体結合部は誤差範囲となるから、殆どラテックスの
粒径に依存する。また、同時にディテクタ２６により、
各ラテックス上に乗った蛍光量／１ラテックスが測定さ
れ、これら２つのパラメータによって図３に示すサイト
グラムが得られる。なお、図３において縦軸は蛍光量
を、横軸は粒子径を表す。 【００１２】ここで、抗原抗体反応に関与しなかった残
余の標識抗体は微径であるから、１標識抗体あたりの蛍
光量の位置３１に集中する。また、径が１番小さいラテ
ックスにより結合した図１の免疫複合体１３は位置３２
に、２番目に小さいラテックスにより結合した図１の免
疫複合体１４は、抗原濃度が高かったのでラテックス１
個あたりの蛍光量としてもかなり高い位置３３に示され
る。また、一番ラテックス径が大きかった図１の免疫複
合体１５は、抗原濃度が薄かったので位置３４に示され
ることになる。 【００１３】このようにして蛍光量測定値が得られれ
ば、予めIgＧ，IgＡ，IgＭ等各抗原の既知濃度系列から
同様にして求めた蛍光強度と抗原濃度との関係を表す検
量線に基づいてサンプル中の各抗原濃度を求めることが
できる。以上のように、フローサイトメータと、各抗原
に応じて異なる抗体を固相化したラテックスを用いるラ
テックスイムノアッセイとを組み合わせたことにより、
１台の測定装置で多項目の分析を高速かつ高精度に実施
できる。また、少量のサンプルと反応させた大量のラテ
ックスに関する免疫複合体の大きさを、Ｂ−Ｆ分離なし
にレ−ザ光によりもれなく測定するので、正確なデ−タ
を効率良く得られる。また、抗原の種類毎に粒径が異な
るラテックスを同時に用いるようにすれば抗原別の識別
が容易な表示も可能となる。 【００１４】なお、本発明は上述した実施形態にのみ限
定されるものではなく、幾多の変更または変形が可能で
ある。例えば、担体はラテックスに限らず、分子量の均
一な人工細胞等、測定対象に応じて任意の形状や大きさ
のものを用いることができる。また、フローサイトメー
タにソーティング機能を付加して、測定後に免疫複合
体、残余の標識抗体をそれぞれ分離することもできる。
このようにすれば、残余の標識抗体を分離して取り出す
ことができるから、これを再使用することができる。更
に、フローサイトメータに反応装置やオートサンプラ等
を付加することによって自動測定が容易に行うことがで
きる。この場合、フローサイトメータにおける測定速度
は約500 粒子／sec であるから、１つのサンプルについ
て１×106粒子を測定したとしても、３分前後で高速に
分析することができる。また、本発明は競合法による分
析にも有効に適用することができる。 【００１５】 【発明の効果】本発明によれば、ヘテロジニアス法を用
いるにも拘わらず、サンプルも過剰の標識物質も洗浄除
去する工程を不要とし、反応液をフロ−セル中で流す間
に短時間でかつ高精度に免疫学的結果を定量分析でき
る。しかも、粒径毎に異なる分析項目に対応したモノク
ロ−ナル抗体を固相化した担体を反応させた場合には、
多項目の分析を１台の自動化装置で容易に実行できる。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は本発明における一実施形態の反応模式図
である。 【図２】図２はフローサイトメータを説明するための図
である。 【図３】図３は測定データのサイトグラムを示す図であ
る。 【符号の説明】 １，２，３ ラテックス ４，５，６ 固相抗体 ７，８，９ 抗原 １０，１１，１２ 標識抗体 １３，１４，１５ 免疫複合体 １６ 残余の標識抗体 ２１ フローセル ２２ ニードル ２３ 反応液 ２４ レーザ光 ２５，２６ ディテクタ
である。 【図２】図２はフローサイトメータを説明するための図
である。 【図３】図３は測定データのサイトグラムを示す図であ
る。 【符号の説明】 １，２，３ ラテックス ４，５，６ 固相抗体 ７，８，９ 抗原 １０，１１，１２ 標識抗体 １３，１４，１５ 免疫複合体 １６ 残余の標識抗体 ２１ フローセル ２２ ニードル ２３ 反応液 ２４ レーザ光 ２５，２６ ディテクタ
Claims (1)
- (57)【特許請求の範囲】 １．ヘテロジニアス法によりサンプル中の抗原および／
または抗体を検出する方法であって、所定量のサンプル
と所望の分析項目に対応する抗原または抗体を固相化し
た充分な個数の担体と標識物質で標識された抗原または
抗体とを含む混合された反応液を同時または逐次に得る
工程と、前記反応液を混合状態のままフロ−セル中に流
す工程と、フロ−セル内を流れる反応液に対してレ−ザ
光を照射して担体の存在を示す第１情報と抗原抗体反応
の存在を示す第２情報とを含む受光デ−タを得る工程
と、受光した全てのデ−タを前記第１情報と第２情報と
の組合せによって分別し、第１情報と第２情報の両方が
得られた時の受光デ−タの総量を求める工程とを有する
ことを特徴とする免疫学的分析方法。 ２．ヘテロジニアス法によりサンプル中の抗原および／
または抗体を検出する方法であって、所定量のサンプル
と、互いに異なる粒径を有し、粒径毎に異なる複数の分
析項目に対応するモノクロ−ナル抗体を固相化した充分
な個数の担体と、標識物質で標識された抗原または抗体
とを含む混合された反応液を同時または逐次に得る工程
と、前記反応液を混合状態のままフロ−セル中に流す工
程と、フロ−セル内を流れる反応液に対してレ−ザ光を
照射して担体の存在を示す第１情報と抗原抗体反応の存
在を示す第２情報とを含む受光デ−タを得る工程と、受
光した全てのデ−タを前記第１情報と第２情報との組合
せによって粒径毎に分別し、第１情報と第２情報の両方
が得られた時の受光デ−タの総量を粒径毎に求める工程
とを有することを特徴とする免疫学的分析方法。 ３．サンプル量が１０μｌ程度であるが、充分量の緩衝
液とともに、フロ−セル内を流すことにより、充分個数
の担体による受光デ−タを効率良く得るような構成であ
ることを特徴とする請求項１または２に記載の免疫学的
分析方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8131602A JP2709296B2 (ja) | 1996-05-27 | 1996-05-27 | 免疫学的分析方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8131602A JP2709296B2 (ja) | 1996-05-27 | 1996-05-27 | 免疫学的分析方法 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP25520884A Division JPS61132870A (ja) | 1984-12-03 | 1984-12-03 | 免疫学的分析方法 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP16617797A Division JPH1054831A (ja) | 1997-06-23 | 1997-06-23 | 免疫学的分析装置 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09113512A JPH09113512A (ja) | 1997-05-02 |
| JP2709296B2 true JP2709296B2 (ja) | 1998-02-04 |
Family
ID=15061906
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8131602A Expired - Lifetime JP2709296B2 (ja) | 1996-05-27 | 1996-05-27 | 免疫学的分析方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2709296B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2260991C (en) | 1997-11-18 | 2009-03-24 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Multiplex flow immunoassays with magnetic particles as solid phase |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2632478A1 (de) * | 1975-07-23 | 1977-02-24 | Coulter Electronics | Verfahren zur erfassung und trennung von antigenen und antikoerperchen im blut und in anderen proben |
| CH642458A5 (en) * | 1980-04-25 | 1984-04-13 | Hoffmann La Roche | Immunological method |
| GB2107053A (en) * | 1980-06-20 | 1983-04-20 | Unilever Plc | Processes and apparatus for carrying out specific binding assays |
| NL185309C (nl) * | 1980-07-28 | 1990-03-01 | Akzo Nv | Methode voor het bepalen van antigenen met behulp van twee of meer monoklonale antilichamen alsmede immuunreagens. |
-
1996
- 1996-05-27 JP JP8131602A patent/JP2709296B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH09113512A (ja) | 1997-05-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3458860B2 (ja) | サンドイッチ分析用センサ装置 | |
| KR101159383B1 (ko) | 증가된 당쇄화 최종산물 측정을 위한 장치 | |
| US5132097A (en) | Apparatus for analysis of specific binding complexes | |
| JP2006098418A (ja) | リガンドの検出のための固相アッセイ | |
| NL7907939A (nl) | Gecombineerde heterogene specifieke bindingsproeven. | |
| JPS61277059A (ja) | 複数項目分析方法 | |
| JP4274944B2 (ja) | ダイナミックレンジが拡張された粒子利用リガンドアッセイ | |
| US4865997A (en) | Assay for ligands by separating bound and free tracer from sample | |
| AU592971B2 (en) | Solid phase diffusion assay | |
| US4138213A (en) | Agglutination immunoassay of immune complex with RF or Clq | |
| JP2005510706A5 (ja) | ||
| JPH0545361A (ja) | 液体試料の分析方法及び該方法に用いる液体試料分析用基板 | |
| JP2006292410A (ja) | 分析装置およびそれに使用する分析デバイス | |
| JPH055741A (ja) | 免疫学的定量分析方法 | |
| KR940701542A (ko) | 특이성 리간드를 검출하기 위한 분석법 | |
| JP2709296B2 (ja) | 免疫学的分析方法 | |
| JP2002340897A (ja) | 複数項目及び総含有量の同時分析可能なイムノクロマトグラフ法及びイムノクロマトグラフ用ストリップ | |
| US7851229B2 (en) | Two-phase optical assay with unitized container and double or single sensor systems | |
| JP2000258418A (ja) | 免疫クロマトグラフィーを用いた測定方法およびそれに用いる検体分析用具 | |
| JPS61110059A (ja) | 免疫学的分析方法 | |
| JPH1054831A (ja) | 免疫学的分析装置 | |
| JP4556605B2 (ja) | 標的物質の測定方法および測定試薬 | |
| JPH05215750A (ja) | 免疫学的分析方法 | |
| JPH0588423B2 (ja) | ||
| JPH0588422B2 (ja) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 19971007 |
|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |