JPS61268199A - 胆汁酸測定用試験紙およびその製造方法 - Google Patents
胆汁酸測定用試験紙およびその製造方法Info
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- JPS61268199A JPS61268199A JP11105885A JP11105885A JPS61268199A JP S61268199 A JPS61268199 A JP S61268199A JP 11105885 A JP11105885 A JP 11105885A JP 11105885 A JP11105885 A JP 11105885A JP S61268199 A JPS61268199 A JP S61268199A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は体液中の胆汁酸を検出しろる胆汁酸測定用試験
紙およびその製造方法に関する。
紙およびその製造方法に関する。
（従来の技術）
胆汁に含有される胆汁酸は血液、尿などの体液中にも微
量含有される。このような体液中の胆汁酸は肝胆道系疾
患によりその量が変化し、特に血液中の胆汁酸量はこの
ような疾患の鋭敏なマーカーとなることが知られている
。例えば、乳児の胆道閉塞症においては血液中もしくは
尿中の胆汁酸量が増加することが知られている。胆道閉
塞症は乳児約１万人あたり１人という高率で発生してお
り、患者は迅速な手術が必要とされる。疾病の認知が遅
れた場合には死亡率も高い。このような疾患を早期発見
するためにも体液中、特に、血液中の胆汁酸を集団検診
時などに精度良く測定することが望まれる。
量含有される。このような体液中の胆汁酸は肝胆道系疾
患によりその量が変化し、特に血液中の胆汁酸量はこの
ような疾患の鋭敏なマーカーとなることが知られている
。例えば、乳児の胆道閉塞症においては血液中もしくは
尿中の胆汁酸量が増加することが知られている。胆道閉
塞症は乳児約１万人あたり１人という高率で発生してお
り、患者は迅速な手術が必要とされる。疾病の認知が遅
れた場合には死亡率も高い。このような疾患を早期発見
するためにも体液中、特に、血液中の胆汁酸を集団検診
時などに精度良く測定することが望まれる。
胆汁酸を含有する試料溶液中の胆汁酸量を測定する方法
は１例えば、特公昭５９−１３１９７号公報に開示され
ている。それによれば、まず、胆汁酸を含む試料を酸性
下で熱処理し、乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）などの、測定
を妨害する酵素を失活させる。
は１例えば、特公昭５９−１３１９７号公報に開示され
ている。それによれば、まず、胆汁酸を含む試料を酸性
下で熱処理し、乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）などの、測定
を妨害する酵素を失活させる。
次いで、これに３α−ヒドロキシステロイドデヒドロゲ
ナーゼ（３α−Ｈ２Ｏ”） 、 ニコチンアミドアデ
ニンジヌクレオチド（ＮＡＤゝ）、ジアホラーゼおよび
テトラゾリウム塩を含有する反応用溶液をｐＨ８〜９の
アルカリ条件下で反応させる。胆汁酸の水酸基は３α−
〇ＳＤの存在下でＮＡＤ＋と反応してカルボニル基とな
り次のようにケト型の胆汁酸を生じる。
ナーゼ（３α−Ｈ２Ｏ”） 、 ニコチンアミドアデ
ニンジヌクレオチド（ＮＡＤゝ）、ジアホラーゼおよび
テトラゾリウム塩を含有する反応用溶液をｐＨ８〜９の
アルカリ条件下で反応させる。胆汁酸の水酸基は３α−
〇ＳＤの存在下でＮＡＤ＋と反応してカルボニル基とな
り次のようにケト型の胆汁酸を生じる。
Ｎ Ａ Ｄ １１はジアホラーゼの存在下でテトラゾリ
ウム塩と反応して次のようにホルマザンを生じる。ＮＡ
ＤＨは再び酸化されてＮＡＤ” となる。
ウム塩と反応して次のようにホルマザンを生じる。ＮＡ
ＤＨは再び酸化されてＮＡＤ” となる。
生じたホルマザンのモル数はＮＡＤＨのモル数（胆汁酸
のモル数）に相当する。そのため、このホルマザンの吸
光度を測定することにより胆汁酸を定量することが可能
である。
のモル数）に相当する。そのため、このホルマザンの吸
光度を測定することにより胆汁酸を定量することが可能
である。
このような方法により試料中の胆汁酸を感度良（測定す
ることができるが、溶液系での反応を利用した測定法で
あるため煩雑な操作を必要とする。
ることができるが、溶液系での反応を利用した測定法で
あるため煩雑な操作を必要とする。
そのため、マススクリーニングや簡便に胆汁酸を検出す
るためには不適当である。測定のために高価な吸光度測
定装置が必要であることも欠点である。
るためには不適当である。測定のために高価な吸光度測
定装置が必要であることも欠点である。
このような欠点を解決するため１発明者は、上記方法に
おいて使用する試薬およびアルカリ緩衝剤などを含有す
る水溶液を濾紙などの高分子素材からなる担体上に含浸
させて凍結乾燥し、試験紙を作製した。しかし、上記テ
トラゾリウム塩が不安定であるため凍結乾燥を行っても
試験紙自体が６〜２４時間以内に赤紫〜紫色に発色する
。さらに。
おいて使用する試薬およびアルカリ緩衝剤などを含有す
る水溶液を濾紙などの高分子素材からなる担体上に含浸
させて凍結乾燥し、試験紙を作製した。しかし、上記テ
トラゾリウム塩が不安定であるため凍結乾燥を行っても
試験紙自体が６〜２４時間以内に赤紫〜紫色に発色する
。さらに。
時間経過とともに着色度が進むため、このような方法で
得られた試験紙を用いて胆汁酸を検出することはできな
い。
得られた試験紙を用いて胆汁酸を検出することはできな
い。
（発明が解決しようとする問題点）
本発明は上記従来の欠点を解決するものであり５その目
的とするところは３体液中の胆汁酸量を簡便な方法を用
いて短時間で、かつ安価に測定しうる試験紙およびその
製造方法を提供することにある。本発明の他の目的は、
長時間安定に保存しうる胆汁酸測定用試験紙およびその
製造方法を提供することにある。
的とするところは３体液中の胆汁酸量を簡便な方法を用
いて短時間で、かつ安価に測定しうる試験紙およびその
製造方法を提供することにある。本発明の他の目的は、
長時間安定に保存しうる胆汁酸測定用試験紙およびその
製造方法を提供することにある。
（問題点を解決するための手段）
本発明の胆汁酸測定用試験紙は、高分子素材からなる担
体にテトラゾリウム塩、ニコチンアミドアデニンジヌク
レオチド、３α−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナー
ゼおよびジアホラーゼが１旦持され、そのことにより上
記目的が達成される。
体にテトラゾリウム塩、ニコチンアミドアデニンジヌク
レオチド、３α−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナー
ゼおよびジアホラーゼが１旦持され、そのことにより上
記目的が達成される。
本発明の胆汁酸測定用試験紙の製造方法は、（１）ニコ
チンアミドアデニンジヌクレオチド、３α−ヒドロキシ
ステロイドデヒドロゲナーゼおよびジアホラーゼを含有
する水溶液を、高分子素材からなる担体に含浸させる工
程、（２）該水溶液の含浸された該担体を凍結乾燥する
工程、および（３）該凍結乾燥後の担体にテトラゾリウ
ム塩の非水溶媒溶液を含浸させる工程、を包含し、その
ことにより上記目的が達成される。さらに２本発明の胆
汁酸測定用試験紙の製造方法は、（１）高分子素材から
なる担体表面に粘着剤層を形成する工程、および（２）
該粘着剤層の表面に、テトラゾリウム塩、ニコチンアミ
ドアデニンジヌクレオチド、３α−ヒドロキシステロイ
ドデヒドロゲナーゼおよびジアホラーゼの各粉末を付与
する工程、を包含し、そのことにより上記目的が達成さ
れる。
チンアミドアデニンジヌクレオチド、３α−ヒドロキシ
ステロイドデヒドロゲナーゼおよびジアホラーゼを含有
する水溶液を、高分子素材からなる担体に含浸させる工
程、（２）該水溶液の含浸された該担体を凍結乾燥する
工程、および（３）該凍結乾燥後の担体にテトラゾリウ
ム塩の非水溶媒溶液を含浸させる工程、を包含し、その
ことにより上記目的が達成される。さらに２本発明の胆
汁酸測定用試験紙の製造方法は、（１）高分子素材から
なる担体表面に粘着剤層を形成する工程、および（２）
該粘着剤層の表面に、テトラゾリウム塩、ニコチンアミ
ドアデニンジヌクレオチド、３α−ヒドロキシステロイ
ドデヒドロゲナーゼおよびジアホラーゼの各粉末を付与
する工程、を包含し、そのことにより上記目的が達成さ
れる。
本発明の胆汁酸測定用試験紙に用いられる高分子素材か
らなる担体としては、天然もしくは合成繊維からなる抄
紙や不織布のばかメンブレンフィルターなどが用いられ
る。試料が尿または血清である場合には、市販の濾紙な
ど天然もしくは合成繊維からなる抄紙や不織布が好適に
用いられる。
らなる担体としては、天然もしくは合成繊維からなる抄
紙や不織布のばかメンブレンフィルターなどが用いられ
る。試料が尿または血清である場合には、市販の濾紙な
ど天然もしくは合成繊維からなる抄紙や不織布が好適に
用いられる。
試料が全血である場合には１合成繊維からなる抄紙や不
織布、メンブレンフィルターなどが好適に用いられる。
織布、メンブレンフィルターなどが好適に用いられる。
メンブレンフィルターとしては、穴径が０．１〜０．４
μｍの酢酸セルロース系の膜が好ましい。合成紙として
は１例えば、積木化学工業■製のセルボア（親水性タイ
プ）が好適である。
μｍの酢酸セルロース系の膜が好ましい。合成紙として
は１例えば、積木化学工業■製のセルボア（親水性タイ
プ）が好適である。
これら担体には界面活性剤が含有される場合がある。こ
の界面活性剤は酵素反応を阻害することがあるため、あ
らかじめ有機溶媒で洗浄して除去することが必要である
。
の界面活性剤は酵素反応を阻害することがあるため、あ
らかじめ有機溶媒で洗浄して除去することが必要である
。
本発明方法により試験紙を製造する場合には。
まず、 ＮＡＤ” 、 ３α−Ｈ３Ｏおよびジアホ
ラーゼをアルカリ性緩衝液に溶解した水溶液を調製する
。
ラーゼをアルカリ性緩衝液に溶解した水溶液を調製する
。
これを上記担体に含浸させた後、凍結乾燥を行う。
アルカリ性緩衝液としては通常のリン酸緩衝液などが用
いられる。上記水溶液に、さらにデキストラン、澱粉、
寒天などの高分子化合物（多糖類）が添加されていると
、 ＮＡＤ”や酵素（３α−Ｈ２Ｏおよびジアホラー
ゼ）がこの高分子化合物に包含される。このような高分
子化合物は、後述のテトラゾリウム塩を担持させる工程
で使用される非水溶媒に溶解しないため、そこに包含さ
れる酵素が直接溶媒に接触しない。そのため、酵素が該
溶媒により失活することがない。高分子化合物は２通常
３α−Ｈ３Ｏおよびジアホラーゼの合計重量に対して１
０倍以上の割合で添加される。ここで用いられる３α−
）ＩＳＯとしてはシュードモナス テストステロニ（Ｐ
ｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｉ）由
来のものが、そしてジアホラーゼとしてはバシルス ス
テアロテモフイルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒｏ
ｔｈｅｒｍｏ−ｐｈｉｌｉｓ）由来のものが好適に用い
られる。これらは耐有機溶剤性および経時安定性に優れ
る。３α−ＩＩＳＯおよびジアホラーゼは担体１００Ｃ
Ｉ１１あたりそれぞれ０．１〜１０００１［Ｊの割合で
ＮＡＤ”は０．１〜１００ｍｇの割合で担持される。過
少であると胆汁酸による発色が充分におこらず、過剰で
あるとその分解生成物により酵素反応が阻害される。凍
結乾燥工程では、充分に水分を除去することが重要であ
る。
いられる。上記水溶液に、さらにデキストラン、澱粉、
寒天などの高分子化合物（多糖類）が添加されていると
、 ＮＡＤ”や酵素（３α−Ｈ２Ｏおよびジアホラー
ゼ）がこの高分子化合物に包含される。このような高分
子化合物は、後述のテトラゾリウム塩を担持させる工程
で使用される非水溶媒に溶解しないため、そこに包含さ
れる酵素が直接溶媒に接触しない。そのため、酵素が該
溶媒により失活することがない。高分子化合物は２通常
３α−Ｈ３Ｏおよびジアホラーゼの合計重量に対して１
０倍以上の割合で添加される。ここで用いられる３α−
）ＩＳＯとしてはシュードモナス テストステロニ（Ｐ
ｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｉ）由
来のものが、そしてジアホラーゼとしてはバシルス ス
テアロテモフイルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒｏ
ｔｈｅｒｍｏ−ｐｈｉｌｉｓ）由来のものが好適に用い
られる。これらは耐有機溶剤性および経時安定性に優れ
る。３α−ＩＩＳＯおよびジアホラーゼは担体１００Ｃ
Ｉ１１あたりそれぞれ０．１〜１０００１［Ｊの割合で
ＮＡＤ”は０．１〜１００ｍｇの割合で担持される。過
少であると胆汁酸による発色が充分におこらず、過剰で
あるとその分解生成物により酵素反応が阻害される。凍
結乾燥工程では、充分に水分を除去することが重要であ
る。
担体に水分が残留していると次工程で担持されるテトラ
ゾリウム塩の安定性が極端に低下する。
ゾリウム塩の安定性が極端に低下する。
次に、上記凍結乾燥後の担体にテトラゾリウム塩を非水
溶媒に溶解させた溶液を含浸させる。テトラゾリウム塩
としては、ニトロブルーテトラゾリウム（３・３’
−（３・３° −ジメトキシ−４・４゛−ジフェニレン
）ビス〔２−ｐ−ニトロフェニル）−５−フェニル−テ
トラゾリウムクロライド〕）が好適に用いられる。非水
溶媒は、テトラゾリウム塩を溶解させることが可能であ
ればよく。
溶媒に溶解させた溶液を含浸させる。テトラゾリウム塩
としては、ニトロブルーテトラゾリウム（３・３’
−（３・３° −ジメトキシ−４・４゛−ジフェニレン
）ビス〔２−ｐ−ニトロフェニル）−５−フェニル−テ
トラゾリウムクロライド〕）が好適に用いられる。非水
溶媒は、テトラゾリウム塩を溶解させることが可能であ
ればよく。
メタノール、エタノールなどのアルコール類；酢酸エチ
ルなどが用いられる。テトラゾリウム塩は担体１００ｄ
あたり０．１〜５００ｍｇの割合で担持される。過少で
あると胆汁酸による発色が充分におこらず、過剰である
と溶媒に溶けにく（なり、また下地の色が濃くなるので
色調の変色の判別が難しくなる。テトラゾリウム塩溶液
を含浸させた担体は速やかに１通常、凍結乾燥により乾
燥される。
ルなどが用いられる。テトラゾリウム塩は担体１００ｄ
あたり０．１〜５００ｍｇの割合で担持される。過少で
あると胆汁酸による発色が充分におこらず、過剰である
と溶媒に溶けにく（なり、また下地の色が濃くなるので
色調の変色の判別が難しくなる。テトラゾリウム塩溶液
を含浸させた担体は速やかに１通常、凍結乾燥により乾
燥される。
上記ＮＡＤ” 、酵素、テトラゾリウム塩を担体に担持
させるには次のような方法も利用されうる。
させるには次のような方法も利用されうる。
まず、担体表面に粘着剤層を薄く形成する。粘着剤とし
てはアクリル系など通常利用される粘着剤が用いられう
る。粘着剤層を形成するには１例えば、上記粘着剤の有
機溶媒や水系溶媒を用いた溶液もしくは懸濁液を担体上
に塗布・乾燥する。粘着剤の厚みは０．１〜１０μｍ、
好ましくは０．２〜２μｍである。粘着剤の懸濁液を塗
布して得られる粘着剤層は微細な粘着剤粒子を含む層と
なる。このようなミクロコロイダル粘着剤層が特に好ま
しい。この層は多孔質であるため、均一な粘着剤層と比
べると、該多孔質の粘着剤層を通して多量の液状物を担
体に吸収させることが可能である。そのため、試験紙に
調製したときに被検試料を充分に吸収して発色し、目視
観察により容易に発色度合を知ることができる。他方、
均一な粘着剤層は担体を粘着剤で完全にコーティングし
てしまうため、試料の担体への吸収量が少ない。そのた
め。
てはアクリル系など通常利用される粘着剤が用いられう
る。粘着剤層を形成するには１例えば、上記粘着剤の有
機溶媒や水系溶媒を用いた溶液もしくは懸濁液を担体上
に塗布・乾燥する。粘着剤の厚みは０．１〜１０μｍ、
好ましくは０．２〜２μｍである。粘着剤の懸濁液を塗
布して得られる粘着剤層は微細な粘着剤粒子を含む層と
なる。このようなミクロコロイダル粘着剤層が特に好ま
しい。この層は多孔質であるため、均一な粘着剤層と比
べると、該多孔質の粘着剤層を通して多量の液状物を担
体に吸収させることが可能である。そのため、試験紙に
調製したときに被検試料を充分に吸収して発色し、目視
観察により容易に発色度合を知ることができる。他方、
均一な粘着剤層は担体を粘着剤で完全にコーティングし
てしまうため、試料の担体への吸収量が少ない。そのた
め。
吸収される胆汁酸の絶対量が少なくなり１発色度がやや
低くなる。形成された粘着剤層は水分を実質的に含有し
ないことが重要である。水分が含有されていると次工程
で付与されるテトラゾリウム塩が変化するため、得られ
る試験紙の下地が短時間のうちに発色する。
低くなる。形成された粘着剤層は水分を実質的に含有し
ないことが重要である。水分が含有されていると次工程
で付与されるテトラゾリウム塩が変化するため、得られ
る試験紙の下地が短時間のうちに発色する。
次に、ＮＡＤ”、３α−Ｈ２Ｏ、ジアホラーゼ、テトラ
ゾリウム塩、高分子化合物および緩衝剤用の塩を粉末状
態で上記粘着剤層表面に付与する。使用する酵素の種類
や各粉末の付与量は、上記ＮＡＤ”３α−Ｈ２Ｏなどを
含む溶液を含浸させる方法と同様である。このようにし
て得られた試験紙は１例えば、直径３〜ｌＱｍｍの円形
に裁断しプラスチックフィルム製のスティックの端に接
着させて利用に供せられる。
ゾリウム塩、高分子化合物および緩衝剤用の塩を粉末状
態で上記粘着剤層表面に付与する。使用する酵素の種類
や各粉末の付与量は、上記ＮＡＤ”３α−Ｈ２Ｏなどを
含む溶液を含浸させる方法と同様である。このようにし
て得られた試験紙は１例えば、直径３〜ｌＱｍｍの円形
に裁断しプラスチックフィルム製のスティックの端に接
着させて利用に供せられる。
上記試験紙を用いて尿、血清などの試料中の胆汁酸の測
定が行われる。試料として血液を用いる場合は、あらか
じめオキサミン酸、ピルビン酸などを加えておく。この
ような前処理により、胆汁酸検出のための酵素反応を阻
害するＬ叶反応などを阻害させることができる。このよ
うに必要に応じて前処理された試料を試験紙に含浸させ
ると。
定が行われる。試料として血液を用いる場合は、あらか
じめオキサミン酸、ピルビン酸などを加えておく。この
ような前処理により、胆汁酸検出のための酵素反応を阻
害するＬ叶反応などを阻害させることができる。このよ
うに必要に応じて前処理された試料を試験紙に含浸させ
ると。
胆汁酸は３α−Ｈ２Ｏの存在下でＮＡＤ” と反応して
ケト型の胆汁酸となりＮＡＤ” はＮＡＤＩ＋となる。
ケト型の胆汁酸となりＮＡＤ” はＮＡＤＩ＋となる。
ＮＡＤＨはジアホラーゼの存在下でテトラゾリウム塩と
反応してホルマザンを生じる。これは、従来の技術の項
で述べた反応機構と同様である。試料を含浸させた後１
通常、１〜３００秒でホルマザンが生じ発色がおこる。
反応してホルマザンを生じる。これは、従来の技術の項
で述べた反応機構と同様である。試料を含浸させた後１
通常、１〜３００秒でホルマザンが生じ発色がおこる。
生じるホルマザンの量は胆汁酸の量に対応するため９発
色の度合を目視観察することにより、試料に含有される
胆汁酸の慨世を知ることができる。目視観察する代わり
に反射吸光装置などを利用した光学的方法によればさら
に正確に発色の度合を測定することが可能である。
色の度合を目視観察することにより、試料に含有される
胆汁酸の慨世を知ることができる。目視観察する代わり
に反射吸光装置などを利用した光学的方法によればさら
に正確に発色の度合を測定することが可能である。
（作用）
本発明によれば、このように、酵素反応を利用した胆汁
酸測定用の試験紙が得られる。ホルマザンを生じる色源
体であるテトラゾリウム塩を非水状態で担体上に担持さ
せることができるため、試験紙の保存中にテトラゾリウ
ム塩が変化して下地が発色することがない。試料中の胆
汁酸量に応じて発色度合が変わるため、これを観察する
ことにより胆汁酸量を知ることができる。このような試
験紙を用いると簡単な操作で短時間のうちに、しかも安
価に胆汁酸量を測定することができる。そのため、集団
検診やベッドサイドでの緊急検査に好適に用いられる。
酸測定用の試験紙が得られる。ホルマザンを生じる色源
体であるテトラゾリウム塩を非水状態で担体上に担持さ
せることができるため、試験紙の保存中にテトラゾリウ
ム塩が変化して下地が発色することがない。試料中の胆
汁酸量に応じて発色度合が変わるため、これを観察する
ことにより胆汁酸量を知ることができる。このような試
験紙を用いると簡単な操作で短時間のうちに、しかも安
価に胆汁酸量を測定することができる。そのため、集団
検診やベッドサイドでの緊急検査に好適に用いられる。
体液中の胆汁酸を測定することにより肝胆道系疾患を早
期発見することが可能である。
期発見することが可能である。
（実施例）
以下に本発明を実施例につき説明する。
大籐炎上
（Ａ）胆汁酸測定用試験紙の調製＝３α−Ｈ５Ｄ５０Ｉ
口、ジアホラーゼ５０１Ｕ、 β−ＮＡＤ” １０ｍ
ｇおよび寒天５０ｍｇをｐＨ８，５の５０ｍＭリン酸バ
ッフｙ５ｍｌｌに溶解した。この溶液を縦１０ｃｍ、横
１０ｃｍの濾紙（東洋濾紙光２）に含浸させ、約３０分
間風乾したのち凍結乾燥した。次に、ニトロブルーテト
ラゾリウム１０ｍｇをメタノール５ ｍｌｔに溶解し、
これを上記凍結乾燥後の濾紙に含浸させた後、速やかに
凍結乾燥を行った。このようにして得られた試験紙を５
ｍ Ｘ ５ 龍の小片に切断し、５ｍｍＸ６０ｍｍの
ポリスチレンフィルム製のスティックの端に両面テープ
で接着して試験紙片を得た。得られた試験紙を１ケ月間
保存したが下地の発色は認められなかった。
口、ジアホラーゼ５０１Ｕ、 β−ＮＡＤ” １０ｍ
ｇおよび寒天５０ｍｇをｐＨ８，５の５０ｍＭリン酸バ
ッフｙ５ｍｌｌに溶解した。この溶液を縦１０ｃｍ、横
１０ｃｍの濾紙（東洋濾紙光２）に含浸させ、約３０分
間風乾したのち凍結乾燥した。次に、ニトロブルーテト
ラゾリウム１０ｍｇをメタノール５ ｍｌｔに溶解し、
これを上記凍結乾燥後の濾紙に含浸させた後、速やかに
凍結乾燥を行った。このようにして得られた試験紙を５
ｍ Ｘ ５ 龍の小片に切断し、５ｍｍＸ６０ｍｍの
ポリスチレンフィルム製のスティックの端に両面テープ
で接着して試験紙片を得た。得られた試験紙を１ケ月間
保存したが下地の発色は認められなかった。
（Ｂ）胆汁酸の測定：生理食塩水に人血清アルブミンを
１％の割合で溶解させた溶液に胆汁酸（グリココール酸
）をその濃度が、それぞれ、 ０．２０゜５０、１００
および２００ μｍｏｌ／ ｌになるように添加し試料
溶液を得た。これら試料溶液を（Ａ）項で得られた試験
紙片にそれぞれ含浸させた。余分な試料溶液を除き、３
分後にその色度をあらかじめ既知濃度の胆汁酸溶液を用
いて作成した比色表と比較した。試料溶液の胆汁酸濃度
に応じて色度は高くなり、その色度は比色表における。
１％の割合で溶解させた溶液に胆汁酸（グリココール酸
）をその濃度が、それぞれ、 ０．２０゜５０、１００
および２００ μｍｏｌ／ ｌになるように添加し試料
溶液を得た。これら試料溶液を（Ａ）項で得られた試験
紙片にそれぞれ含浸させた。余分な試料溶液を除き、３
分後にその色度をあらかじめ既知濃度の胆汁酸溶液を用
いて作成した比色表と比較した。試料溶液の胆汁酸濃度
に応じて色度は高くなり、その色度は比色表における。
それぞれの胆汁酸濃度と一致した。
叉１斑叉
（Ａ）胆汁酸測定用試験紙の調製：３α−Ｈ５Ｄ５０Ｔ
Ｕ、 ジアホラーゼ５０ＩＵ、 β−ＮＡＤ” １
０ｍｇ、 ＝トロブルーテトラゾリウム１０ｍｇ、
リン酸２ナトリウム８．９ｍｇおよびセルロースパウダ
ー２００ｍｇを乾燥粉末状態で混合した。両面に離型紙
を有する両面テープ（１０ｃｍ Ｘ １０ｃｍ）の片面
の離型紙を除き、上記混合された粉末を均一にふりかけ
、余分の粉末をふるいおとした。得られた試験紙を５
ｗ Ｘ ５ ｍｍの小片に切断し、離型紙を外して５龍
Ｘ６０ｍのポリスチレンフィルム製スティックの端に接
着して試験紙片を得た。得られた試験紙を２ケ月間保存
したが下地の発色は認められなかった。
Ｕ、 ジアホラーゼ５０ＩＵ、 β−ＮＡＤ” １
０ｍｇ、 ＝トロブルーテトラゾリウム１０ｍｇ、
リン酸２ナトリウム８．９ｍｇおよびセルロースパウダ
ー２００ｍｇを乾燥粉末状態で混合した。両面に離型紙
を有する両面テープ（１０ｃｍ Ｘ １０ｃｍ）の片面
の離型紙を除き、上記混合された粉末を均一にふりかけ
、余分の粉末をふるいおとした。得られた試験紙を５
ｗ Ｘ ５ ｍｍの小片に切断し、離型紙を外して５龍
Ｘ６０ｍのポリスチレンフィルム製スティックの端に接
着して試験紙片を得た。得られた試験紙を２ケ月間保存
したが下地の発色は認められなかった。
（Ｂ）胆汁酸の測定：実施例１ （Ｂ）項と同様である
。
。
比較例
（Ａ）胆汁酸測定用試験紙の調製：３α−Ｈ３Ｄ５０Ｉ
Ｕ、 ジアホラーゼ５０１０．β−ＮＡＤ” １０ｍ
ｇおよびニトロブルーテトラゾリウム１０ｍｇをｐＨ８
，５の１０ｍＭリン酸バフファー５ ｍ（ｌに溶解した
。この溶液を縦１０ｃｍ、横１０ｃｍの濾紙（東洋濾紙
Ｎ［Ｌ２）に含浸させ、ただちに凍結乾燥した。得られ
た試験紙を５ｗ Ｘ ５ ｖｎａの小片に切断し、５ｇ
ｘ５Ｑｍのポリスチレンフィルム製スティックの端に両
面テープで接着して試験紙片を得た。得られた試験紙を
２４時間保存したところ、下地の発色が認められた。
Ｕ、 ジアホラーゼ５０１０．β−ＮＡＤ” １０ｍ
ｇおよびニトロブルーテトラゾリウム１０ｍｇをｐＨ８
，５の１０ｍＭリン酸バフファー５ ｍ（ｌに溶解した
。この溶液を縦１０ｃｍ、横１０ｃｍの濾紙（東洋濾紙
Ｎ［Ｌ２）に含浸させ、ただちに凍結乾燥した。得られ
た試験紙を５ｗ Ｘ ５ ｖｎａの小片に切断し、５ｇ
ｘ５Ｑｍのポリスチレンフィルム製スティックの端に両
面テープで接着して試験紙片を得た。得られた試験紙を
２４時間保存したところ、下地の発色が認められた。
（Ｂ）胆汁酸の測定：本比較例（Ａ）項で得られた調製
直後の試験紙片を用いて実施例１ （Ａ）項と同様の方
法で胆汁酸の測定を行ったところ同様の結果が得られた
。次に調製後２４時間経過した試験紙片を用いて同様の
方法で胆汁酸の測定を行ったが、下地が発色しているた
め測定が困難であった。
直後の試験紙片を用いて実施例１ （Ａ）項と同様の方
法で胆汁酸の測定を行ったところ同様の結果が得られた
。次に調製後２４時間経過した試験紙片を用いて同様の
方法で胆汁酸の測定を行ったが、下地が発色しているた
め測定が困難であった。
（発明の効果）
本発明によれば、このように、試料溶液中の胆汁酸量を
簡便な方法でしかも短時間のうちに測定しうる試験紙が
得られる。試験紙は長期間安定に保存され得３例えば、
経時的に成分が変化して下地が発色することがない。得
られた試験紙を用いて安価に胆汁酸の測定が行われるた
め、集団検診などで肝胆道系疾患を早期に発見すること
が可能である。ベッドサイドでの緊急時の検査にも利用
価値が高い。
簡便な方法でしかも短時間のうちに測定しうる試験紙が
得られる。試験紙は長期間安定に保存され得３例えば、
経時的に成分が変化して下地が発色することがない。得
られた試験紙を用いて安価に胆汁酸の測定が行われるた
め、集団検診などで肝胆道系疾患を早期に発見すること
が可能である。ベッドサイドでの緊急時の検査にも利用
価値が高い。
以上
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、高分子素材からなる担体にテトラゾリウム塩、ニコ
チンアミドアデニンジヌクレオチド、３α−ヒドロキシ
ステロイドデヒドロゲナーゼおよびジアホラーゼが担持
された胆汁酸測定用試験紙。 ２、（１）ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド、３
α−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼおよびジア
ホラーゼを含有する水溶液を、高分子素材からなる担体
に含浸させる工程、 （２）該水溶液の含浸された該担体を凍結乾燥する工程
、および （３）該凍結乾燥後の担体にテトラゾリウム塩の非水溶
媒溶液を含浸させる工程、 を包含する胆汁酸測定用試験紙の製造方法。 ３、前記水溶液が高分子化合物を含有する特許請求の範
囲第２項に記載の製造方法。 ４、（１）高分子素材からなる担体表面に粘着剤層を形
成する工程、および （２）該粘着剤層の表面に、テトラゾリウム塩、ニコチ
ンアミドアデニンジヌクレオチド、３α−ヒドロキシス
テロイドデヒドロゲナーゼおよびジアホラーゼの各粉末
を付与する工程、 を包含する胆汁酸測定用試験紙の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60111058A JPH0636758B2 (ja) | 1985-05-22 | 1985-05-22 | 胆汁酸測定用試験紙およびその製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60111058A JPH0636758B2 (ja) | 1985-05-22 | 1985-05-22 | 胆汁酸測定用試験紙およびその製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61268199A true JPS61268199A (ja) | 1986-11-27 |
| JPH0636758B2 JPH0636758B2 (ja) | 1994-05-18 |
Family
ID=14551333
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60111058A Expired - Lifetime JPH0636758B2 (ja) | 1985-05-22 | 1985-05-22 | 胆汁酸測定用試験紙およびその製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0636758B2 (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS645500A (en) * | 1987-06-29 | 1989-01-10 | Sekisui Chemical Co Ltd | Testing paper for determining living body components |
| JPH01117799A (ja) * | 1987-10-30 | 1989-05-10 | Sekisui Chem Co Ltd | 生体成分測定用試験紙 |
| JPH02200199A (ja) * | 1989-01-30 | 1990-08-08 | Sanwa Kagaku Kenkyusho Co Ltd | 血中胆汁酸の定量用組成物 |
| WO2006064488A1 (en) * | 2004-12-17 | 2006-06-22 | Megazyme Ip Limited | A kit for colorimetric assays of food and beverage analytes |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5321677A (en) * | 1976-08-11 | 1978-02-28 | Toshiki Nishiyama | Oneetouch type opening and closing bag useful to drivers |
| JPS5913197A (ja) * | 1982-07-14 | 1984-01-23 | 株式会社 テイエルブイ | フロ−ト操作弁 |
-
1985
- 1985-05-22 JP JP60111058A patent/JPH0636758B2/ja not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5321677A (en) * | 1976-08-11 | 1978-02-28 | Toshiki Nishiyama | Oneetouch type opening and closing bag useful to drivers |
| JPS5913197A (ja) * | 1982-07-14 | 1984-01-23 | 株式会社 テイエルブイ | フロ−ト操作弁 |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS645500A (en) * | 1987-06-29 | 1989-01-10 | Sekisui Chemical Co Ltd | Testing paper for determining living body components |
| JPH01117799A (ja) * | 1987-10-30 | 1989-05-10 | Sekisui Chem Co Ltd | 生体成分測定用試験紙 |
| JPH02200199A (ja) * | 1989-01-30 | 1990-08-08 | Sanwa Kagaku Kenkyusho Co Ltd | 血中胆汁酸の定量用組成物 |
| WO2006064488A1 (en) * | 2004-12-17 | 2006-06-22 | Megazyme Ip Limited | A kit for colorimetric assays of food and beverage analytes |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0636758B2 (ja) | 1994-05-18 |
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