JPH0636758B2 - 胆汁酸測定用試験紙およびその製造方法 - Google Patents
胆汁酸測定用試験紙およびその製造方法Info
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- JPH0636758B2 JPH0636758B2 JP60111058A JP11105885A JPH0636758B2 JP H0636758 B2 JPH0636758 B2 JP H0636758B2 JP 60111058 A JP60111058 A JP 60111058A JP 11105885 A JP11105885 A JP 11105885A JP H0636758 B2 JPH0636758 B2 JP H0636758B2
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Description
【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は体液中の胆汁酸を検出しうる胆汁酸測定用試験
紙およびその製造方法に関する。
紙およびその製造方法に関する。
（従来の技術） 胆汁に含有される胆汁酸は血液，尿などの体液中にも微
量含有される。このような体液中の胆汁酸は肝胆道系疾
患によりその量が変化し，特に血液中の胆汁酸量はこの
ような疾患の鋭敏なマーカーとなることが知られてい
る。例えば，乳児の胆道閉塞症においては血液中もしく
は尿中の胆汁酸量が増加することが知られている。胆道
閉塞症は乳児約１万人あたり１人という高率で発生して
おり，患者は迅速な手術が必要とされる。疾病の認知が
遅れた場合には死亡率も高い。このような疾患を早期発
見するためにも体液中，特に，血液中の胆汁酸を集団検
診時などに精度良く測定することが望まれる。
量含有される。このような体液中の胆汁酸は肝胆道系疾
患によりその量が変化し，特に血液中の胆汁酸量はこの
ような疾患の鋭敏なマーカーとなることが知られてい
る。例えば，乳児の胆道閉塞症においては血液中もしく
は尿中の胆汁酸量が増加することが知られている。胆道
閉塞症は乳児約１万人あたり１人という高率で発生して
おり，患者は迅速な手術が必要とされる。疾病の認知が
遅れた場合には死亡率も高い。このような疾患を早期発
見するためにも体液中，特に，血液中の胆汁酸を集団検
診時などに精度良く測定することが望まれる。
胆汁酸を含有する試料溶液中の胆汁酸量を測定する方法
は，例えば，特公昭59-13197号公報に開示されている。
それによれば，まず，胆汁酸を含む試料を酸性下で熱処
理し，乳酸脱水素酵素(LDH)などの，測定を妨害する酵
素を失活させる。次いで，これに３α−ヒドロキシステ
ロイドデヒドロゲナーゼ（３α−HSD），ニコチンアミ
ドアデニンジヌクレオチド(NAD+)，ジアホラーゼおよび
テトラゾリウム塩を含有する反応用溶液をpH８〜９のア
ルカリ条件下で反応させる。胆汁酸の水酸基は３α−HS
Dの存在下でNAD+と反応してカルボニル基となり次のよ
うにケト型の胆汁酸を生じる。
は，例えば，特公昭59-13197号公報に開示されている。
それによれば，まず，胆汁酸を含む試料を酸性下で熱処
理し，乳酸脱水素酵素(LDH)などの，測定を妨害する酵
素を失活させる。次いで，これに３α−ヒドロキシステ
ロイドデヒドロゲナーゼ（３α−HSD），ニコチンアミ
ドアデニンジヌクレオチド(NAD+)，ジアホラーゼおよび
テトラゾリウム塩を含有する反応用溶液をpH８〜９のア
ルカリ条件下で反応させる。胆汁酸の水酸基は３α−HS
Dの存在下でNAD+と反応してカルボニル基となり次のよ
うにケト型の胆汁酸を生じる。
NADHはジアホラーゼの存在下でテトラゾリウム塩と反応
して次のようにホルマザンを生じる。NADHは再び酸化さ
れてNAD+となる。
して次のようにホルマザンを生じる。NADHは再び酸化さ
れてNAD+となる。
生じたホルマザンのモル数はNADHのモル数（胆汁酸のモ
ル数）に相当する。そのため，このホルマザンの吸光度
を測定することにより胆汁酸を定量することが可能であ
る。
ル数）に相当する。そのため，このホルマザンの吸光度
を測定することにより胆汁酸を定量することが可能であ
る。
このような方法により試料中の胆汁酸を感度良く測定す
ることができるが，溶液系での反応を利用した測定法で
あるため煩雑な操作を必要とする。そのため，マススク
リーニングや簡便に胆汁酸を検出するためには不適当で
ある。測定のために高価な吸光度測定装置が必要である
ことも欠点である。
ることができるが，溶液系での反応を利用した測定法で
あるため煩雑な操作を必要とする。そのため，マススク
リーニングや簡便に胆汁酸を検出するためには不適当で
ある。測定のために高価な吸光度測定装置が必要である
ことも欠点である。
このような欠点を解決するため，発明者は，上記方法に
おいて使用する試薬およびアルカリ緩衝剤などを含有す
る水溶液を濾紙などの高分子素材からなる担体上に含浸
させて凍結乾燥し，試験紙を作製した。しかし，上記テ
トラゾリウム塩が不安定であるため凍結乾燥を行っても
試験紙自体が６〜24時間以内に赤紫〜紫色に発色する。
さらに，時間経過とともに着色度が進むため，このよう
な方法で得られた試験紙を用いて胆汁酸を検出すること
はできない。
おいて使用する試薬およびアルカリ緩衝剤などを含有す
る水溶液を濾紙などの高分子素材からなる担体上に含浸
させて凍結乾燥し，試験紙を作製した。しかし，上記テ
トラゾリウム塩が不安定であるため凍結乾燥を行っても
試験紙自体が６〜24時間以内に赤紫〜紫色に発色する。
さらに，時間経過とともに着色度が進むため，このよう
な方法で得られた試験紙を用いて胆汁酸を検出すること
はできない。
（発明が解決しようとする問題点） 本発明は上記従来の欠点を解決するものであり，その目
的とするところは，体液中の胆汁酸量を簡便な方法を用
いて短時間で，かつ安価に測定しうる試験紙およびその
製造方法を提供することにある。本発明の他の目的は，
長時間安定に保存しうる胆汁酸測定用試験紙およびその
製造方法を提供することにある。
的とするところは，体液中の胆汁酸量を簡便な方法を用
いて短時間で，かつ安価に測定しうる試験紙およびその
製造方法を提供することにある。本発明の他の目的は，
長時間安定に保存しうる胆汁酸測定用試験紙およびその
製造方法を提供することにある。
（問題点を解決するための手段） 本発明の胆汁酸測定用試験紙の製造方法は，(1)ニコチ
ンアミドアデニンジヌクレオチド，３α−ヒドロキシス
テロイドデヒドロゲナーゼおよびジアホラーゼを含有す
る水溶液を，高分子素材からなる担体に含浸させる工
程，(2)該水溶液の含浸された該担体を凍結乾燥する工
程，および(3)該凍結乾燥後の担体にテトラリゾウム塩
の非水溶媒溶液を含浸させる工程，を包含し，そのこと
により上記目的が達成される。さらに，本発明の胆汁酸
測定用試験紙の製造方法は，(1)高分子素材からなる担
体表面に粘着剤層を形成する工程，および(2)該粘着剤
層の表面に，テトラリゾウム塩，ニコチンアミドアデニ
ンジヌクレオチド，３α−ヒドロキシステロイドデヒド
ロゲナーゼおよびジアホラーゼの各粉末を付与する工
程，を包含し，そのことにより上記目的が達成される。
ンアミドアデニンジヌクレオチド，３α−ヒドロキシス
テロイドデヒドロゲナーゼおよびジアホラーゼを含有す
る水溶液を，高分子素材からなる担体に含浸させる工
程，(2)該水溶液の含浸された該担体を凍結乾燥する工
程，および(3)該凍結乾燥後の担体にテトラリゾウム塩
の非水溶媒溶液を含浸させる工程，を包含し，そのこと
により上記目的が達成される。さらに，本発明の胆汁酸
測定用試験紙の製造方法は，(1)高分子素材からなる担
体表面に粘着剤層を形成する工程，および(2)該粘着剤
層の表面に，テトラリゾウム塩，ニコチンアミドアデニ
ンジヌクレオチド，３α−ヒドロキシステロイドデヒド
ロゲナーゼおよびジアホラーゼの各粉末を付与する工
程，を包含し，そのことにより上記目的が達成される。
本発明の胆汁酸測定用試験紙に用いられる高分子素材か
らなる担体としては，天然もしくは合成繊維からなる抄
紙や不織布のほかメンブレンフィルターなどが用いられ
る。試料が尿または血清である場合には，市販の濾紙な
ど天然もしくは合成繊維からなる抄紙や不織布が好適に
用いられる。試料が全血である場合には，合成繊維から
なる抄紙や不織布，メンブレンフィルターなどが好適に
用いられる。メンブレンフィルターとしては，穴系が0.
1〜0.4μｍの酢酸セルロース系の膜が好ましい。合成紙
としては，例えば，積水化学工業（株）製のセルポア
（親水性タイプ）が好適である。これら担体には界面活
性剤が含有される場合がある。この界面活性剤は酵素反
応を阻害することがあるため，あらかじめ有機溶媒で洗
浄して除去することが必要である。
らなる担体としては，天然もしくは合成繊維からなる抄
紙や不織布のほかメンブレンフィルターなどが用いられ
る。試料が尿または血清である場合には，市販の濾紙な
ど天然もしくは合成繊維からなる抄紙や不織布が好適に
用いられる。試料が全血である場合には，合成繊維から
なる抄紙や不織布，メンブレンフィルターなどが好適に
用いられる。メンブレンフィルターとしては，穴系が0.
1〜0.4μｍの酢酸セルロース系の膜が好ましい。合成紙
としては，例えば，積水化学工業（株）製のセルポア
（親水性タイプ）が好適である。これら担体には界面活
性剤が含有される場合がある。この界面活性剤は酵素反
応を阻害することがあるため，あらかじめ有機溶媒で洗
浄して除去することが必要である。
本発明方法により試験紙を製造する場合には，まず，NA
D+，３α−HSDおよびジアホラーゼをアルカリ性緩衝液
に溶解した水溶液を調製する。これを上記担体に含浸さ
せた後，凍結乾燥を行う。アルカリ性緩衝液としては通
常のリン酸緩衝液などが用いられる。上記水溶液に，さ
らにデキストラン，澱粉，寒天などの高分子化合物（多
糖類）が添加されていると，NAD+や酵素（３α−HSDお
よびジアホラーゼ）がこの高分子化合物に包含される。
このような高分子化合物は，後述のテトラリゾウム塩を
担持させる工程で使用される非水溶媒に溶解しないた
め，そこに包含される酵素が直接溶媒に接触しない。そ
のため，酵素が該溶媒により失活することがない。高分
子化合物は，通常３α−HSDおよびジアホラーゼの合計
重量に対して10倍以上の割合で添加される。ここで用い
られる３α−HSDとしてはシュードモナス テストステ
ロニ(Pseudomonas testosteroni)由来のものが，そして
ジアホラーゼとしてはバシルス ステアロテモフィルス
(Bacillus stearothrmophilis)由来のものが好適に用い
られる。これらは耐有機溶剤性および経時安定性に優れ
る。３α−HSDおよびジアホラーゼは担体100cm2あたり
それぞれ0.1〜1000IUの割合でNAD+は0.1〜100mgの割合
で担持される。過少であると胆汁酸による発色が充分に
おこらず，過剰であるとその分解生成物により酵素反応
が阻害される。凍結乾燥工程では，充分に水分を除去す
ることが重要である。担体に水分が残留していると次工
程で担持されるテトラゾリウム塩の安定性が極端に低下
する。
D+，３α−HSDおよびジアホラーゼをアルカリ性緩衝液
に溶解した水溶液を調製する。これを上記担体に含浸さ
せた後，凍結乾燥を行う。アルカリ性緩衝液としては通
常のリン酸緩衝液などが用いられる。上記水溶液に，さ
らにデキストラン，澱粉，寒天などの高分子化合物（多
糖類）が添加されていると，NAD+や酵素（３α−HSDお
よびジアホラーゼ）がこの高分子化合物に包含される。
このような高分子化合物は，後述のテトラリゾウム塩を
担持させる工程で使用される非水溶媒に溶解しないた
め，そこに包含される酵素が直接溶媒に接触しない。そ
のため，酵素が該溶媒により失活することがない。高分
子化合物は，通常３α−HSDおよびジアホラーゼの合計
重量に対して10倍以上の割合で添加される。ここで用い
られる３α−HSDとしてはシュードモナス テストステ
ロニ(Pseudomonas testosteroni)由来のものが，そして
ジアホラーゼとしてはバシルス ステアロテモフィルス
(Bacillus stearothrmophilis)由来のものが好適に用い
られる。これらは耐有機溶剤性および経時安定性に優れ
る。３α−HSDおよびジアホラーゼは担体100cm2あたり
それぞれ0.1〜1000IUの割合でNAD+は0.1〜100mgの割合
で担持される。過少であると胆汁酸による発色が充分に
おこらず，過剰であるとその分解生成物により酵素反応
が阻害される。凍結乾燥工程では，充分に水分を除去す
ることが重要である。担体に水分が残留していると次工
程で担持されるテトラゾリウム塩の安定性が極端に低下
する。
次に，上記凍結乾燥後の担体にテトラゾリウム塩を非水
溶媒に溶解させた溶液を含浸させる。テトラゾリウム塩
としては，ニトロブルーテトラゾリウム｛３・３′−
（３・３′−ジメトキシ−４・４′−ジフェニレン）ビ
ス〔２−ｐ−ニトロフェニル）−５−フェニル−テトラ
ゾリウムクロライド〕｝が好適に用いられる。非水溶媒
は，テトラゾリウム塩を溶解させることが可能であれば
よく，メタノール，エタノールなどのアルコール類；酢
酸エチルなどが用いられる。テトラゾリウム塩は担体10
0cm2あたり0.1〜500mgの割合で担持される。過少である
と胆汁酸による発色が充分におこらず，過剰であると溶
媒に溶けにくくなり，また下地の色が濃くなるので色調
の変色の判別が難しくなる。テトラゾリウム塩溶液を含
浸させた担体は速やかに，通常，凍結乾燥により乾燥さ
れる。
溶媒に溶解させた溶液を含浸させる。テトラゾリウム塩
としては，ニトロブルーテトラゾリウム｛３・３′−
（３・３′−ジメトキシ−４・４′−ジフェニレン）ビ
ス〔２−ｐ−ニトロフェニル）−５−フェニル−テトラ
ゾリウムクロライド〕｝が好適に用いられる。非水溶媒
は，テトラゾリウム塩を溶解させることが可能であれば
よく，メタノール，エタノールなどのアルコール類；酢
酸エチルなどが用いられる。テトラゾリウム塩は担体10
0cm2あたり0.1〜500mgの割合で担持される。過少である
と胆汁酸による発色が充分におこらず，過剰であると溶
媒に溶けにくくなり，また下地の色が濃くなるので色調
の変色の判別が難しくなる。テトラゾリウム塩溶液を含
浸させた担体は速やかに，通常，凍結乾燥により乾燥さ
れる。
上記NAD+，酵素，テトラゾリウム塩を担体に担持させる
には次のような方法も利用されうる。まず，担体表面に
粘着剤層を薄く形成する。粘着剤としてはアクリル系な
ど通常利用される粘着剤が用いられうる。粘着剤層を形
成するには，例えば，上記粘着剤の有機溶媒や水系溶媒
を用いた溶液もしくは懸濁液を担体上に塗布・乾燥す
る。粘着剤の厚みは0.1〜10μｍ，好ましくは0.2〜２μ
ｍである。粘着剤の懸濁液を塗布して得られる粘着剤層
は微細な粘着剤粒子を含む層となる。このようなミクロ
コロイダル粘着剤層が特に好ましい。この層は多孔質で
あるため，均一な粘着剤層と比べると，該多孔質の粘着
剤層を通して多量の液状物を担体に吸収させることが可
能である。そのため，試験紙に調製したときに被検試料
を充分に吸収して発色し，目視観察により容易に発色度
合を知ることができる。他方，均一な粘着剤層は担体を
粘着剤で完全にコーティングしてしまうため，試料の担
体への吸収量が少ない。そのため，吸収される胆汁酸の
絶対量が少なくなり，発色度がやや低くなる。形成され
た粘着剤層は水分を実質的に含有しないことが重要であ
る。水分が含有されていると次工程で付与されるテトラ
ゾリウム塩が変化するため，得られる試験紙の下地が短
時間のうちに発色する。
には次のような方法も利用されうる。まず，担体表面に
粘着剤層を薄く形成する。粘着剤としてはアクリル系な
ど通常利用される粘着剤が用いられうる。粘着剤層を形
成するには，例えば，上記粘着剤の有機溶媒や水系溶媒
を用いた溶液もしくは懸濁液を担体上に塗布・乾燥す
る。粘着剤の厚みは0.1〜10μｍ，好ましくは0.2〜２μ
ｍである。粘着剤の懸濁液を塗布して得られる粘着剤層
は微細な粘着剤粒子を含む層となる。このようなミクロ
コロイダル粘着剤層が特に好ましい。この層は多孔質で
あるため，均一な粘着剤層と比べると，該多孔質の粘着
剤層を通して多量の液状物を担体に吸収させることが可
能である。そのため，試験紙に調製したときに被検試料
を充分に吸収して発色し，目視観察により容易に発色度
合を知ることができる。他方，均一な粘着剤層は担体を
粘着剤で完全にコーティングしてしまうため，試料の担
体への吸収量が少ない。そのため，吸収される胆汁酸の
絶対量が少なくなり，発色度がやや低くなる。形成され
た粘着剤層は水分を実質的に含有しないことが重要であ
る。水分が含有されていると次工程で付与されるテトラ
ゾリウム塩が変化するため，得られる試験紙の下地が短
時間のうちに発色する。
次に，NAD+，３α−HSD，ジアホラーゼ，テトラゾリウ
ム塩，高分子化合物および緩衝剤用の塩を粉末状態で上
記粘着剤層表面に付与する。使用する酵素の種類や各粉
末の付与量は，上記NAD+，３α−HSDなどを含む溶液を
含浸させる方法と同様である。このようにして得られた
試験紙は，例えば，直径３〜10mmの円形に裁断しプラス
チックフィルム製のスティックの端に接着させて利用に
供せられる。
ム塩，高分子化合物および緩衝剤用の塩を粉末状態で上
記粘着剤層表面に付与する。使用する酵素の種類や各粉
末の付与量は，上記NAD+，３α−HSDなどを含む溶液を
含浸させる方法と同様である。このようにして得られた
試験紙は，例えば，直径３〜10mmの円形に裁断しプラス
チックフィルム製のスティックの端に接着させて利用に
供せられる。
上記試験紙を用いて尿，血清などの試料中の胆汁酸の測
定が行われる。試料として血液を用いる場合は，あらか
じめオキサミン酸，ピルビン酸などを加えておく。この
うような前処理により，胆汁酸検出のための酵素反応を
阻害するLDH反応などを阻害させることができる。この
ように必要に応じて前処理された試料を試験紙に含浸さ
せると，胆汁酸は３α−HSDの存在下でNAD+と反応して
ケト型の胆汁酸となりNAD+はNADHとなる。NADHはジアホ
ラーゼの存在下でテトラゾリウム塩と反応してホルマザ
ンを生じる。これは，従来の技術の項で述べた反応機構
と同様である。試料を含浸させた後，通常，１〜300秒
でホルマザンが生じ発色がおこる。生じるホルマザンの
量は胆汁酸の量に対応するため，発色の度合を目視観察
することにより，試料に含有される胆汁酸の概量を知る
ことができる。目視観察する代わりに反射吸光装置など
を利用した光学的方法によればさらに正確に発色の度合
を測定することが可能である。
定が行われる。試料として血液を用いる場合は，あらか
じめオキサミン酸，ピルビン酸などを加えておく。この
うような前処理により，胆汁酸検出のための酵素反応を
阻害するLDH反応などを阻害させることができる。この
ように必要に応じて前処理された試料を試験紙に含浸さ
せると，胆汁酸は３α−HSDの存在下でNAD+と反応して
ケト型の胆汁酸となりNAD+はNADHとなる。NADHはジアホ
ラーゼの存在下でテトラゾリウム塩と反応してホルマザ
ンを生じる。これは，従来の技術の項で述べた反応機構
と同様である。試料を含浸させた後，通常，１〜300秒
でホルマザンが生じ発色がおこる。生じるホルマザンの
量は胆汁酸の量に対応するため，発色の度合を目視観察
することにより，試料に含有される胆汁酸の概量を知る
ことができる。目視観察する代わりに反射吸光装置など
を利用した光学的方法によればさらに正確に発色の度合
を測定することが可能である。
（作用） 本発明によれば，このように，酵素反応を利用した胆汁
酸測定用の試験紙が得られる。ホルマザンを生じる色源
体であるテトラゾリウム塩を非水状態で担体上に担持さ
せることができるため，試験紙の保存中にテトラリゾウ
ム塩が変化して下地が発色することがない。試料中の胆
汁酸量に応じて発色度合が変わるため，これを観察する
ことにより胆汁酸量を知ることができる。このような試
験紙を用いると簡単な操作で短時間のうちに，しかも安
価に胆汁酸量を測定することができる。そのため，集団
検診やベッドサイドでの緊急検査に好適に用いられる。
体液中の胆汁酸を測定することにより肝胆道系疾患を早
期発見することが可能である。
酸測定用の試験紙が得られる。ホルマザンを生じる色源
体であるテトラゾリウム塩を非水状態で担体上に担持さ
せることができるため，試験紙の保存中にテトラリゾウ
ム塩が変化して下地が発色することがない。試料中の胆
汁酸量に応じて発色度合が変わるため，これを観察する
ことにより胆汁酸量を知ることができる。このような試
験紙を用いると簡単な操作で短時間のうちに，しかも安
価に胆汁酸量を測定することができる。そのため，集団
検診やベッドサイドでの緊急検査に好適に用いられる。
体液中の胆汁酸を測定することにより肝胆道系疾患を早
期発見することが可能である。
（実施例） 以下に本発明を実施例につき説明する。
実施例１ （Ａ）胆汁酸測定用試験紙の調製：３α−HSD 50IU，ジ
アホラーゼ50IU，β−NAD+ 10mgおよび寒天50mgをpH8.5
の50mMリン酸バッファー５ｍに溶解した。この溶液を
縦10cm，横10cmの濾紙（東洋濾紙NO.２）に含浸させ，
約30分間乾燥したのち凍結乾燥した。次に，ニトロブル
ーテトラゾリウム10mgをメタノール５ｍに溶解し，こ
れを上記凍結乾燥後の濾紙に含浸させた後，速やかに凍
結乾燥を行った。このようにして得られた試験紙を５mm
×５mmの小片に切断し，５mm×60mmのポリスチレンフィ
ルム製のスティックの端に両面テープで接着して試験紙
片を得た。得られた試験紙を１ケ月間保存したが下地の
発色は認められなかった。
アホラーゼ50IU，β−NAD+ 10mgおよび寒天50mgをpH8.5
の50mMリン酸バッファー５ｍに溶解した。この溶液を
縦10cm，横10cmの濾紙（東洋濾紙NO.２）に含浸させ，
約30分間乾燥したのち凍結乾燥した。次に，ニトロブル
ーテトラゾリウム10mgをメタノール５ｍに溶解し，こ
れを上記凍結乾燥後の濾紙に含浸させた後，速やかに凍
結乾燥を行った。このようにして得られた試験紙を５mm
×５mmの小片に切断し，５mm×60mmのポリスチレンフィ
ルム製のスティックの端に両面テープで接着して試験紙
片を得た。得られた試験紙を１ケ月間保存したが下地の
発色は認められなかった。
（Ｂ）胆汁酸の測定：生理食塩水に人血清アルブミンを
１％の割合で溶解させた溶液に胆汁酸（グリココール
酸）をその濃度が，それぞれ，０，20，50，100および2
00μmol／になるように添加し試料溶液を得た。これ
ら試料溶液を（Ａ）項で得られた試験紙片にそれぞれ含
浸させた。余分な試料溶液を除き，３分後にその色度を
あらかじめ既知濃度の胆汁酸溶液を用いて作成した比色
表と比較した。試料溶液の胆汁酸濃度に応じて色度は高
くなり，その色度は比色表における，それぞれの胆汁酸
濃度と一致した。
１％の割合で溶解させた溶液に胆汁酸（グリココール
酸）をその濃度が，それぞれ，０，20，50，100および2
00μmol／になるように添加し試料溶液を得た。これ
ら試料溶液を（Ａ）項で得られた試験紙片にそれぞれ含
浸させた。余分な試料溶液を除き，３分後にその色度を
あらかじめ既知濃度の胆汁酸溶液を用いて作成した比色
表と比較した。試料溶液の胆汁酸濃度に応じて色度は高
くなり，その色度は比色表における，それぞれの胆汁酸
濃度と一致した。
実施例２ （Ａ）胆汁酸測定用試験紙の調製：３α−HSD 50IU，ジ
アホラーゼ50IU，β−NAD+10mg，ニトロブルーテトラゾ
リウム10mg，リン酸２ナトリウム8.9mgおよびセルロー
スパウダー200mgを乾燥粉末状態で混合した。両面に離
型紙を有する両面テープ（10cm×10cm）の片面の離型紙
を除き，上記混合された粉末を均一にふりかけ，余分の
粉末をふるいおとした。得られた試験紙を５mm×５mmの
小片に切断し，離型紙を外して５mm×60mmのポリスチレ
ンフィルム製スティックの端に接着して試験紙片を得
た。得られた試験紙を２ケ月間保存したが下地の発色は
認められなかった。
アホラーゼ50IU，β−NAD+10mg，ニトロブルーテトラゾ
リウム10mg，リン酸２ナトリウム8.9mgおよびセルロー
スパウダー200mgを乾燥粉末状態で混合した。両面に離
型紙を有する両面テープ（10cm×10cm）の片面の離型紙
を除き，上記混合された粉末を均一にふりかけ，余分の
粉末をふるいおとした。得られた試験紙を５mm×５mmの
小片に切断し，離型紙を外して５mm×60mmのポリスチレ
ンフィルム製スティックの端に接着して試験紙片を得
た。得られた試験紙を２ケ月間保存したが下地の発色は
認められなかった。
（Ｂ）胆汁酸の測定：実施例１（Ｂ）項と同様である。
比較例 （Ａ）胆汁酸測定用試験紙の調製：３α−HSD 50IU，ジ
アホラーゼ50IU，β−NAD+10mgおよびニトロブルーテト
ラゾリウム10mgをpH8.5の10mMリン酸バッファー５ｍ
に溶解した。この溶液を縦10cm，横10cmの濾紙（東洋濾
紙NO.２）に含浸させ，ただちに凍結乾燥した。得られ
た試験紙を５mm×５mmの小片に切断し，５mm×60mmのポ
リスチレンフィルム製スティックの端に両面テープで接
着して試験紙片を得た。得らえた試験紙を24時間保存し
たところ，下地の発色が認められた。
アホラーゼ50IU，β−NAD+10mgおよびニトロブルーテト
ラゾリウム10mgをpH8.5の10mMリン酸バッファー５ｍ
に溶解した。この溶液を縦10cm，横10cmの濾紙（東洋濾
紙NO.２）に含浸させ，ただちに凍結乾燥した。得られ
た試験紙を５mm×５mmの小片に切断し，５mm×60mmのポ
リスチレンフィルム製スティックの端に両面テープで接
着して試験紙片を得た。得らえた試験紙を24時間保存し
たところ，下地の発色が認められた。
（Ｂ）胆汁酸の測定：本比較例（Ａ）項で得られた調製
直後の試験紙片を用いて実施例１（Ａ）項と同様の方法
で胆汁酸の測定を行ったところ同様の結果が得られた。
次に調製後24時間経過した試験紙片を用いて同様の方法
で胆汁酸の測定を行ったが，下地が発色しているため測
定が困難であった。
直後の試験紙片を用いて実施例１（Ａ）項と同様の方法
で胆汁酸の測定を行ったところ同様の結果が得られた。
次に調製後24時間経過した試験紙片を用いて同様の方法
で胆汁酸の測定を行ったが，下地が発色しているため測
定が困難であった。
（発明の効果） 本発明によれば，このように，試料溶液中の胆汁酸量を
簡便な方法でしかも短時間のうちに測定しうる試験紙が
得られる。試験紙は長時間安定に保存され得，例えば，
経時的に成分が変化して下地が発色することがない。得
られた試験紙を用いて安価に胆汁酸の測定が行われるた
め，集団検診などで肝胆道系疾患を早期に発見すること
が可能である。ベッドサイドでの緊急時の検査にも利用
価値が高い。
簡便な方法でしかも短時間のうちに測定しうる試験紙が
得られる。試験紙は長時間安定に保存され得，例えば，
経時的に成分が変化して下地が発色することがない。得
られた試験紙を用いて安価に胆汁酸の測定が行われるた
め，集団検診などで肝胆道系疾患を早期に発見すること
が可能である。ベッドサイドでの緊急時の検査にも利用
価値が高い。
Claims (2)
- 【請求項１】(1)ニコチンアミドアデニンジヌクレオチ
ド，３α−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼおよ
びジアホラーゼを含有する水溶液を，高分子素材からな
る担体に含浸させる工程， (2)該水溶液に含浸された該担体を凍結乾燥する工程，
および (3)該凍結乾燥後の担体にテトラゾリウム塩の非水溶媒
溶液を含浸させる工程， を包含する胆汁酸測定用試験紙の製造方法。 - 【請求項２】(1)高分子素材からなる担体表面に粘着剤
層を形成する工程，および (2)該粘着剤層の表面に，テトラゾリウム塩，ニコチン
アミドアデニンジヌクレオチド，３α−ヒドロキシステ
ロイドデヒドロゲナーゼおよびジアホラーゼの各粉末を
付与する工程， を包含する胆汁酸測定用試験紙の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60111058A JPH0636758B2 (ja) | 1985-05-22 | 1985-05-22 | 胆汁酸測定用試験紙およびその製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60111058A JPH0636758B2 (ja) | 1985-05-22 | 1985-05-22 | 胆汁酸測定用試験紙およびその製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61268199A JPS61268199A (ja) | 1986-11-27 |
| JPH0636758B2 true JPH0636758B2 (ja) | 1994-05-18 |
Family
ID=14551333
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60111058A Expired - Lifetime JPH0636758B2 (ja) | 1985-05-22 | 1985-05-22 | 胆汁酸測定用試験紙およびその製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0636758B2 (ja) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS645500A (en) * | 1987-06-29 | 1989-01-10 | Sekisui Chemical Co Ltd | Testing paper for determining living body components |
| JPH01117799A (ja) * | 1987-10-30 | 1989-05-10 | Sekisui Chem Co Ltd | 生体成分測定用試験紙 |
| JPH02200199A (ja) * | 1989-01-30 | 1990-08-08 | Sanwa Kagaku Kenkyusho Co Ltd | 血中胆汁酸の定量用組成物 |
| WO2006064488A1 (en) * | 2004-12-17 | 2006-06-22 | Megazyme Ip Limited | A kit for colorimetric assays of food and beverage analytes |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5321677A (en) * | 1976-08-11 | 1978-02-28 | Toshiki Nishiyama | Oneetouch type opening and closing bag useful to drivers |
| JPS5913197A (ja) * | 1982-07-14 | 1984-01-23 | 株式会社 テイエルブイ | フロ−ト操作弁 |
-
1985
- 1985-05-22 JP JP60111058A patent/JPH0636758B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS61268199A (ja) | 1986-11-27 |
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