JPS61254600A - α−アミラ−ゼ阻害物質に対するモノクロ−ナル抗体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明はα−アミラーゼ阻害物質に対するモノクローナ
ル抗体に関する。

〔従来の技術〕

小麦中には２０種を超える蛋白質性のα−アミラーゼ阻
害物質（以下「アミラーゼインヒビター」と称す）が含
まれている。これらのアミラーゼインヒビターは分子の
大きさ及び阻害するアミラーゼの由来により３つのグル
ープに大別される。第一のグループは分子量１．２万ダ
ルトンのものであり、このグループに属するアミラーゼ
インヒビターは昆虫由来のアミラーゼを阻害する。第２
のグループは分子量２４万ダルトンで、昆虫及びホ乳類
由来のアミラーゼを阻害する。第３のグループは分子量
６万ダルトンであるが、まだ充分に研究がなされておら
ず、よくわからない部分が多い〔デポンテ、アール等：
セリアル　ケミストリー（Ｄｅｐｏｎｔｅ、Ｒ，ｅｔ　
ａｌ　：　Ｃｅｒｅａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　）　５
３巻８０５−８１９．１９７６年〕。これらのアミラー
ゼインヒビタ一群は、立体構造上極めてコンノくクトな
型をとっておシ、それが故に極めて熱安定である。例え
ば９０℃、１時間加熱してもその活性は失われない。特
に分子量２．．４万ダルト／に属するアミラーゼインヒ
ビターは、ヒトの唾液及び膵液アミラーゼを阻害するの
で、小麦粉製品の調理・加工条件は、当該アミラーゼイ
ンヒビター活性を大きく左右し、消化管における全ての
食品の消化吸収に重大な影響をおよぼしているものと考
えられている。一方欧米諸国では小麦およびライ麦に対
するアレルギー金持ち、これらを食すると激しい下痢を
起こす人が数多く知られており、大きな問題となってい
る。このアレルギー性下痢は、上記アミラーゼインヒビ
ターによるものではないかとの研究が発表された〔スト
口メイヤー、デー。

エッチ、：ニュートリツション　リポート、インターナ
ショナル（Ｓｔｒｕｍｅｙｅｒ、Ｄ、Ｈ，：　Ｎｕｔｒ
ｉｔｉｏｎＲｅｐｏｒｔ、　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａ
ｌ　）　１巻（５号）、第４５頁１９７２年〕。

〔発明が解決しようとする問題点〕

従って、小麦粉製品の調理加工中におけるアミラーゼイ
ンヒビターの状態を追跡できれば、該小麦粉製品の消化
吸収に対する最良の加工状態を知ることができる。

また、小麦種子中のアミラーゼインヒビターの追跡は、
品種改良の面からも重要である。すなわち、アミラーゼ
インヒビタ一群は小麦には含量の少ない必須アミノ酸を
バランスよく含むこと、更に昆虫による被害を昆虫のア
ミラーゼを阻害することによって最少限におさえている
と考えられることから重要である。従ってアミラーゼイ
ンヒビターの存在量は、小麦の品種改良に欠くべからざ
る指標となり得る。

通常、アミラーゼインヒビターの測定は、アミラーゼ活
性を測定する系の中に該インヒビターを加え、アミラー
ゼ活性がどの程度低下するかによシ逆算される。しかし
ながら、この方法は操作が複雑で測定誤差が大きく、し
かも結果を得るのに長時間を要するという欠点を有する
。従って、上記目的のために簡便且つ正確なアミラーゼ
インヒビターの測定手段の開発が望まれている〇〔問題
点を解決するための手段〕 上記実状に鑑み本発明者はアミラーゼインヒビターの実
用的な測定手段を見い出すべく種々検討した結果、その
測定を可能ならしめるアミラーゼインヒビターに対する
モノクローナル抗体を見い出し、本発明を完成した。

すなわち、本発明は小麦由来のα−アミラーゼ阻害物質
に対して特異的であることを特徴とするモノクローナル
抗体を提供するものである。

本発明のモノクローナル抗体には、ハイブリドーマ細胞
系ＨＡＷＡＩ−１，１（ＡＷＡＩ　−２又は１（ＡＷＡ
　Ｉ　−３がそれぞれ産生ずるＡＷＡＩ　−１、ＡＷＡ
Ｉ　−２およびＡＷＡＩ−３の３株類が含まれ、これら
はいずれも免疫グロプリンタラス臥ＩｇＧｘに属するも
のである。

本発明のモノクローナル抗体は、〕・イブリドーマ細胞
系ＨＡＷＡＩ−１、Ｉ（ＡＷＡ　Ｉ　−２又はＩ（ＡＷ
ＡＩ−３の培養上清から、あるいはこれらの細胞系を腹
腔内に投与され九マウスの腹腔液又は血清から採取する
ことＫより製造される。

本発明モノクローナル抗体を産生ずる〕・イブリドーマ
細胞系は、抗原として分子量（ゲル濾過法）２４．００
０であり、ポリアクリルアミドゲル電気泳動において移
動度０．５３を示すアミラーゼインヒビター（以下ｒ　
Ｏ，５３−インヒビター」と称す）を用いて動物を免疫
し、その動物から採取した牌細胞とマウスミエローマ細
胞とを融合させることによシ得られる。

抗原である前記０．５３−インヒビターは前出等の方法
〔前出等：アグリカルチエラル　アンドバイオロジカル
　ケミストリー（Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌａｎｄ　Ｂ
ｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　）　＋　４
１巻、第２８７３−２８７５頁、　１９８２年〕に従っ
て小麦より単離される。

０．５３−インヒビターを抗原とする牌細胞を採取する
には、マウス等の動物を０．５３−インヒビターで免疫
し、その動物の膵臓から採取するととにより行なわれる
。免疫は、抗原とフロイント完全アジュバントとの混合
物を皮下注射し、免疫を増強するために３週間後に再度
皮下注射し、更に２週間後に抗原を静脈注射することに
より行なわれる。牌細胞の採取は、最終投与の３日後に
動物を層殺し、摘出した膵臓より分離することにより行
なわれる。

マウスミエローマ細胞としては、Ｐ−８−ＮＳ−１／１
−Ａｇ４−１株又はこの株を継代培養したものが用いら
れる。継代培養は、例えば１０チウシ胎児血清を含むＲ
ＰＭＩ　１６４０培地を用い、炭酸ガスインキュベータ
にて３７℃付近で行なわれる。

細胞融合は、前記の牌細胞とミエローマ細胞とを、例え
ばケーラー、ジー、　　（Ｋｏｅｈｌｅｒ、　Ｇ、）及
びミルシュタイン、　シー　、　　（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ
、　Ｃ，）が確立した方法〔ネイーｙ−ヤ−（Ｎａｔｕ
ｒｅ　）　、　２５６巻、第４９５頁、　１９５４年〕
Ｋ準じて融合させることＫより行なわれる。すなわち、
ミエローマ細胞と牌細胞とをｌ：１０の割合でＲＰＭＩ
　１６４０培地に懸濁させ、これにポリエチレングリコ
ールを添加し、おだやかに攪拌することにより融合せし
める。ポリエチレングリコール等を除去して融合細胞懸
濁液を作製し、これを培養した後、細胞性放射免疫法（
ｃｅｌｌｕｌａｒ　ｒａｄｉｏ　ｉｍｍｕｎｏａｓｓａ
ｙ　ｌにて抗体産生株を選択する。

更に目的とする抗体産生細胞のみを単離するには、希釈
法によるクローニングを繰り返して、１つのクローンか
ら発生した全てのシングルクローンが抗体産生である様
にすることにより行なわれる。

斯くして得られたハイブリドーマ細胞系には前記本発明
のモノクローナル抗体ＡＷＡＩ−１、ＡＷＡ　Ｉ−２又
はＡＷＡ　Ｉ　−３をそれぞれ産生ずる３種類の細胞が
存在する。これらのハイブリドーマ細胞の特性は以下の
通りである。

■　３種類ともに、Ｐ−３−ＭＳ−１／１−Ａｇ４−１
　マウスミエローマ細胞とマウスＷＩ１ｍ胞を融合させ
た雑種細胞である。

■　３種類ともにＨＡＴ培地で増殖可能である。

■　３種類ともにＲＰＭＩ−１６４０培地（１０チウシ
胎児血清補添）で増殖可能であり、この培地でのｄｏｕ
ｂｌｉｎｇ　ｔｉｍｅ　（細胞が２倍に増殖するのに要
する時間）は約２４時間である。

■　３種類ともに■の培地に懸濁させた状態で一８０℃
以下で凍結保存可能である。

■　３種類ともに■の培地に懸濁させ、３７℃で長期継
代培養可能である（植え継ぎ周期は約４日）。

■　３種類ともにマウス（Ｂａ１ｂ　／　ｃ　）の腹腔
内にて縫代培養可能である（植え継ぎ周期は約３週間）
。

■　３稽類の細胞は０．５３−インヒビターとクロスす
る免疫グロブリンＩｇＧ１に属するモノクローナル抗体
ＡＷＡ　Ｉ−１、ＡＷＡ　Ｉ　−２およびＡＷＡＩ−３
をそれぞれ永久的に産生ずる。

以上の特性を有する３種類の細胞は、ＡＷＡ　Ｉ　−１
を産生ずる細胞をＨＡＷＡ　Ｉ−１、ＡＷＡＩ−２を産
生ずる細胞をＩ（ＡＷＡ　Ｉ　−２、ＡＷＡＩ−３を産
生ずる細胞をＨＡＷＡＩ−３と命名し、通商産業省工業
技術院微生物工業技術研究所に寄託すべく手続を行った
が、受託を拒否された（寄託受託拒否通知番号６ｏ微寄
文第４８４号、同第４８５号、同第４８６号）。

尚、これらの細胞は出願人において譲渡可能な状態で保
管しである。

抗体産生細胞ＨＡＷＡ　Ｉ−１、ＨＡＷＡＩ−２又はＨ
ＡＷＡＩ−３から本発明のモノクローナル抗体ＡＷＡ　
Ｉ−１、ＡＷＡ　Ｉ　−２又はＡＷＡＩ−３を製造する
方法としては以下の方法が挙げられる。

ａｌＨＡＷＡＩ−１、ＨＡＷＡ　Ｉ　−２又はＨＡＷＡ
Ｉ−３を栄養培地中で培養して、その上清から採取する
方法。

ｂｌ　　ＨＡＷＡＩ−１％ＨＡＷＡ　Ｉ−２又はＨＡＷ
ＡＩ−３をマウス腹腔内に投与して腹腔内で増殖させ、
腹腔液又は該マウスの血清から採取する方法。

就中、目的抗体の収量の面からｂ）における腹腔液から
採取する方法が好ましい。当核腹腔内で増殖させて腹腔
液から本発明モノクローナル抗体を採取する方法は、例
えば以下の如くして実施される。

ＨＡＷＡ　Ｉ−１、ＨＡＷＡＩ−２又はＨＡＷＡＩ−３
をマウス腹腔内に投与して約３週間後、腹腔内に貯溜し
た腹腔液を採取し、得られた腹腔液から遠心分離、透析
等の手段によりモノクローナル抗体ＡＷＡＩ−１、ＡＷ
Ａ　Ｉ　−２又はＡＷＡＩ−３が分離・精製される。

得られた本発明モノクローナル抗体ＡＷＡ　Ｉ−１、Ａ
ＷＡＩ−２及びＡＷＡＩ−３は以下の如き性質を有する
。

■　ＡＷＡＩ−１、ＡＷＡＩ−２及びＡＷＡＩ−３ｄい
ずれも免疫グロブリンクラスがＩｇＧ１に属する。

免疫沈降反応法（オフタロニー法）により、本発明抗体
はいずれもウサギ抗マウスＩｇＭ、ＩｇＧｚａ　、　Ｉ
ｇＧｇｂと反応せず、ウサギ抗マウスＩｇＧｔとのみ反
応する。

＠　　ＡＷＡＩ−１、ＡＷＡＩ−２及びＡＷＡＩ−３は
いずれも抗Ｆ（ａｂｌ’と反応するが、その反応性ｍＷ
ＡＩ−３）ＡＷＡＩ−２）ＡＷＡＩ−１の順である。

θ　ＡＷＡ　Ｉ−１、ＡＷＡＩ−２及びＡＷＡＩ−３は
いずれも０．５３−インヒビターに対し高い親和性を示
す（結合阻害実験法）。

〔作用及び発明の効果〕

本発明のモノクローナル抗体は、アミラーゼインヒビタ
ーに対し特異的であることから、小麦製品中のアミラー
ゼインヒビター測定用材料として極めて有用である。更
に小麦種子中のアミラーゼインヒビターの測定を容易な
らしめれば、その品種改良の面からも極めて有用である
。

〔実施例〕

次に実施例を挙げて本発明を説明する。

実施例１ ■抗原（０，５３−インヒビター）の調製：これは、前
出等の方法〔アグリカルチュラルアンド　バイオロジカ
ル　ケミストリー（Ａｇｒｉ−ｃｕｌｔｕｒａｌ　ａｎ
ｄ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　）、
　４１巻。

２８７３−２８７５ページ、　１９８２年〕にしたがっ
て行った。小麦粉１ｋｇをＩＯＡの水で抽出し、上澄を
凍結乾燥した。凍結乾燥粉末を５倍量の水に溶解し、７
０℃で３０分間加熱処理し、熱に不安定な蛋白質を除去
した。得られたアミラーゼインヒビター含有上澄にエタ
ノール（９９，９１）を攪拌しながら３℃において加え
、エタノール濃度が６０俤になるようにした。この濃度
で不要蛋白は沈澱する。アミラーゼインヒビタ一群は上
澄に残っているので・更にエタノールを加え、最終濃度
が９０チになるようにする。この濃度でアミラーゼイン
ヒビターは沈澱する。沈澱物を遠心機にて集め、カラム
クロマトグラフィーの出発物とする。第１段のカラムク
ロマトは、セファデックスＧ−７５（Ｚ７Ｘ７０ｍＪ上
で行う。緩衝液は、２５ｍＭ酢酸ナトリウム−酢酸、ｐ
Ｈ４，６である。０．５３−インヒビター含有区分は２
つ目の大きなピークとなりカラムから溶出する。このピ
ーク更に同一緩衝液で平衡化したＣＭセファロースＣＬ
−６Ｂ　　（λ７Ｘ３０ｔＭ）上において、０より０．
３Ｍの塩化ナトリウムのグラジェントでクロマトすると
、塩化ナトリウム濃度０．１Ｍのところで０．５３−イ
ンヒビターは溶出する。このインヒビターは、７ｔｓポ
リアクリルアミドゲル−気泳動上で、トリス−塩酸緩衝
液ｐＨ９，５の条件下で、色素ブロムフェノールブルー
を１としたとき０．５３の移動度を示す１本のバンドと
して検出された。

■免疫 Ｂａ、ｌｂ　／　ｃ−ｒウス（♀２５？）に、７０イン
ド完全アジユバントに溶解させた３０μ２の抗原（０，
５３−インヒビター）を皮下注射する。３週間後に同様
の皮下注射を行ない、更に２週間後３０μ？の０．５３
−インヒビターを静脈に注射した。

最終投与の３日後に牌細胞を採取し、細胞融合に用いる
細胞を得た。

■細胞融合のためのミエローマ細胞の調製マウスミエロ
ーマ細胞Ｐ−３−ＭＳ−１／１−Ａｇ４−１は、１０ｃ
ｓウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ　１６４０培地（日永製
薬■製）を用い、９５チ空気及び５チ炭酸ガスを含む気
流を流した炭酸ガスインキュベーターにて３７℃で継代
培養した。

■細胞融合 ケーラー及びミルシュタインが確立した方法（クーラー
ｓ　Ｇ　ｅ及びミルシュタインＣ：ネイチェアー（Ｎａ
ｔｕｒｅ　）　、　２５６巻、４９５ページ、１９７５
年）に準じ、ミエローマ細胞２Ｘ１０’個と上述した方
法で得られた牌細胞２Ｘ１０’個をＲＰＭＩ　１６４０
培地に３７℃で懸濁させ、１−の５０％ポリエチ　　細
し／クリコール（ポリエチレンクリコール４０００　、
　　　ンメルク社製）ｆ、１分間にわたりピペットの先
端で　　細細胞を軽く攪拌しながら県別する。添加後更
に１　　二分間ゆっくり攪拌する。ウシ胎児血清を含ま
ない　　の１０ｒｎｌのＲＰＭＩ　１６４０培地をゆっ
くり加えてポリ　　てエチレングリコールを希釈し、室
温にて４００×　　て？で５分間遠心分離を行ない、上
清を捨てる。約　　Ｈ８０ｒｎｌ＋７）１０％ＲＰＭＩ
　１６４０培地を細胞ペレット　　たに直接注ぎながら
ピペットで攪拌し、細胞懸濁液　　■をつくる。２Ｘ１
０’個／ｒｎｌの肺臓細胞を含む懸濁液ｆ：２４穴のカ
ルチャープレートにＩＷｌｌづつまき、　　し９５チの
空気−５−の炭酸ガスよ抄成る混合気流　　の中で、炭
酸ガス培養器を用いて２４時間培養した　　し後、それ
ぞれのウェルに１ｄのＨＡＴ培地を加え　　腔る。培養
後１０〜１４日後に残存するクローンに　　滴つき、目
的とする抗体産生株のアッセイを細胞性　　を放射免疫
法（ｃｅｌｌｕｌａｒ　ｒａｄｉｏ　ｉｍｍｕｎｏａａ
ｓａｙ　）で行　　得なう。抗体産生株を含むウェル内
容物を、ＨＡＴ　　　に培地で希釈して９６穴プレート
にまき目的とする　　す胞のクローニングをくり返し行
った。クローニゲは希釈法を用い、１ウエルあたり１個
の融合胞が含まれるようにした。この様にしてクローン
グを繰り返し、１つのクローンから出た全てシングルク
ローンが抗体産生であるときをもつ、クローンが確立さ
れたとした。このようにし、０．５３−インヒビターに
対する抗体産生細胞ＡＷＡ　Ｉ−１、ＨＡＷＡＩ−２及
び）（ＡＷＡＩ−３株を得抗体の製法 マウス腹腔内での継代培養又は組織培養で継代たＨＡＷ
ＡＩ−１，ＨＡＷＡＩ−２又はＨＡＷＡＩ−３株細胞約
１０″ケを、あらかじめプリステンを投与たマウスの腹
腔内に投与する。約３週間後、腹内に貯溜した腹腔液を
採取し、ヘパリンを数滴下して攪拌する。２０００　ｒ
ｐｍで５分間遠心分離行ない血球及び雑種細胞を除き、
上清液を得る。

られた腹水上清液に硫酸ナトリウムを１６１横なる様に
加え、攪拌後３７℃にて４５分間保持る。次いで５００
０ｒｐｍで遠心分離し、目的とする抗体の沈澱物を得る
。これを生理食塩水に溶解　　−３はしさせ、透析膜に
て生理食塩水に対して透析処理を　　属する。

行ない、抗体の生理食塩水溶液を得た。　　　　　　実
施例２寿施例２　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　Ｈ１１■−ＩＡＷＡ　Ｉ−１、ＡＷＡＩ−２及
びＡＷＡＩ−３の免疫グ　　ンとＡＷクロリンクラス　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　親ミコ上記抗体
を免疫沈降反応法（オフタロニー法）　　　ＨＡＷＡＩ
により１チアガロース上で各徨標品免疫グロブリ　　上
清にてンと反応させた。その結果を第１表に示す。　　
　　て、うう抗マづ ２表Ｃ （ａｂｌ’Ｊ 培養器 養土ｎ いる。

表中、＋は反応陽性を、−は反応陰性を示す。

第１表より、ＡＷＡ　Ｉ　−１、ＡＷＡＩ−２及びＡＷ
Ａ　Ｉ）ずれも免疫グロブリンクラスがＩｇＧｔに＝標
識されたウナギ抗マウス免疫グロプリ配Ｉ−１、ＡＷＡ
　Ｉ−２及びＡＷＡ　Ｉ　−３との反応性二ローマ細胞
培養液（対照）及び融合細胞−１、ＨＡＷＡ　Ｉ　−２
及びＨＡＷＡ　Ｉ　−３の培養液）き、その存在する免
疫グロブリンについジオ　イミュノアッセイ法（１２Ｓ
　工標識つサ□スＦ（ａｂ）’使用）を用いて調べた。

結果は声とおりである。融合細胞上清液のみ抗反応性を
示した。これは親ミエローマ細〔中には抗体としてのＩ
ｇＧは存在しないが、を中にはＩｇＧが産生されている
ことを示し以下余白 実施例４ ）ＩＡＷＡ　Ｉ−１、ＨＡＷＡＩ−２及びＨＡＷＡ　Ｉ
−３のモノクローン細胞性 クローニングを３回繰り返し得られたＨＡＷＡＩ−１、
）ＩＡＷＡＩ−２及びＨＡＷＡＩ−３系列の細胞を各７
個のウェルにまきそれぞれの培養上清のＩｇＧの存在を
＋ｔｓ　１標識ウサギＦ（ａｂｌ’を用いて調べた。結
果を第３表に示す。その結果、全てのウェルでＩｇＧ抗
体の産生が認められた。

実施例５ 抗体ＡＷＡ　Ｉ−１、ＡＷＡ　Ｉ−２及びＡＷＡ　Ｉ　
−３と抗原である０、５３−インヒビターとの親和性得
られた抗体の抗原に対する親和性は、細胞性ラジオ　イ
ムノアッセイ法により調べた。細胞性ラジオ　イムノア
ッセイ法には、結合阻害測定法（ｂｉｎｄｉｎｇ　１ｎ
ｈｉｂｉｔｉｏｎ　ａｓｓａｙ　）　ｔ＃用い、長谷ら
の方法〔プラント　アンド　セルフイジオロジー（Ｐｌ
ａｎｔ　ａｎｄ　Ｃｅ１ｌ　Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ　）
　、　２４巻、　１１４３ページ、　１９８３年〕に準
じて行った。即ち、抗原である０、５３−インヒビター
を１　Ｉｎ＋／／Ｉｌｌになるように生理食塩水に溶解
した。この抗原溶液を３．９．２７．８１、・・・と３
倍づつ希釈し、各々の希釈液２５μ形をウェルに分注し
、ＡＷＡ　Ｉ−１、ＡＷＡ　Ｉ−２及びＡＷＡ　Ｉ　−
３の培養上清を２５μ！加え、３℃で２４時間イ／キュ
ペ、＝ジョンした。次いで長谷らの方法（プラント　セ
ル　フィジオロジー。

２４巻、　１１４３ページ、　１９８３年）に準じて調
製した羊赤血球結合０．５３−インヒビター５０〃ｌヲ
加え、３℃で１時間インキュベーションした。

遠心分離で羊赤血球を沈降させ、リン酸緩衝生理食塩水
で３回洗滌して遊離の抗体を除去し、次いで２次抗体で
ある１２１　■標識ウサギ抗マウスＦ（ａｂ）’溶液５
　Ｑ　ｐ１３　　（３００，０００ｃｐｍ　）を加える
。３℃で１時間インキュベーションし、遠心分離した後
、上述のごとくリン酸緩衝生理食塩水で３回洗滌する。

羊赤血球−抗原に結合した抗体量（アイソトープ量）を
γ−カウンターで測定した。結果を第１図〜第３図に示
す。

実施例６ 抗体ＡＷＡ　Ｉ−１、ＡＷＡ　Ｉ　−２及びＡＷＡ　Ｉ
　−３の異種蛋白に対する交叉性 マウス腹水より調製した抗体（１０ＦＲ９）を、２−の
ブロモシアンにより活性化セファロース（ファルマシア
社）に結合させ、アフィニティーカラムを作製した。こ
のカラムに小麦水抽出物を流し、２５ｍＭ）リス−塩酸
緩衝液、ｐＨ７，５，で洗滌後、０，１Ｍ酢酸緩衝液（
含ＩＭ食塩）で、カラムに結合した蛋白を溶出した。こ
の溶出蛋白を、前　　　□述のポリアクリルアミド電気
泳動法で解析したところ、０．５３−インヒビターと共
に、０．１９−１０．３６−及び０．３８−インヒビタ
ーが検出された◇μ上の結果は、得られた３種のモノク
ローナル抗体に対して、０．１９−１０．３６−１０．
３８−及び０．５３−インヒビターが同一抗原部位を有
する事を示している。

【図面の簡単な説明】

第１図〜第３図は、ＡＷＡ　Ｉ−１、ＡＷＡ　Ｉ　−２
又はＡＷＡＩ−３を用いた場合における抗原蛋白（０，
５３−インヒビター）の希釈倍率と羊赤血球結合０．５
３−インヒビターに結合し九抗体量（アイソトープ量）
との関係をそれぞれ示す図面である。 以上 Ｉｚｓｌ（ｃｐｍ） 賃 手続補正書（自発） 昭和６１年゛　２月　４日

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、小麦由来のα−アミラーゼ阻害物質に対して特異的
   であることを特徴とするモノクローナル抗体。 ２、免疫グロブリンクラスがＩｇＧ＿１に属するもので
   ある特許請求の範囲第１項記載のモノクローナル抗体。 ３、小麦由来のα−アミラーゼ阻害物質が、分子量（ゲ
   ル濾過法）２４，０００であり、ポリアクリルアミドゲ
   ル電気泳動において移動度０．５３を示すものである特
   許請求の範囲第１項記載のモノクローナル抗体。 ４、小麦由来のα−アミラーゼ阻害物質によつて免疫さ
   れたマウスから採取される脾細胞と動物ミエローマ細胞
   とを融合させて得たハイブリドーマ細胞系ＨＡＷＡＩ−
   １、ＨＡＷＡＩ−２又はＨＡＷＡＩ−３が産生するもの
   である特許請求の範囲第１項記載のモノクローナル抗体
   。