JPS6123968A - クロマトグラフ検出方法 - Google Patents
クロマトグラフ検出方法Info
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- JPS6123968A JPS6123968A JP59143955A JP14395584A JPS6123968A JP S6123968 A JPS6123968 A JP S6123968A JP 59143955 A JP59143955 A JP 59143955A JP 14395584 A JP14395584 A JP 14395584A JP S6123968 A JPS6123968 A JP S6123968A
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- JP
- Japan
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- liquid
- fed
- mixer
- amino acid
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- Pending
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-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/84—Preparation of the fraction to be distributed
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
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- G01N30/84—Preparation of the fraction to be distributed
- G01N2030/8429—Preparation of the fraction to be distributed adding modificating material
- G01N2030/8435—Preparation of the fraction to be distributed adding modificating material for chemical reaction
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
［産業上の利用分野］
本発明は目的とする成分のみを高感度に検出出来るクロ
マトグラフ検出方法に関する。
マトグラフ検出方法に関する。
［従来の技術〕
液体クロマトグラフ装置では、分離カラムで試料を成分
毎に溶出させる為に展開液を該分離カラムに導入し、試
料成分が検出器に検出可能な特貢的性質を持つ様に、分
離カラムから溶出しくｙＫだ試料成分に試薬を添加号−
る様にしている。そして、この試薬と試料成分の反応液
の吸光度を検出器で測定し、試料成分のクロマ１〜グラ
フをレコーダに記録づる様にしている。
毎に溶出させる為に展開液を該分離カラムに導入し、試
料成分が検出器に検出可能な特貢的性質を持つ様に、分
離カラムから溶出しくｙＫだ試料成分に試薬を添加号−
る様にしている。そして、この試薬と試料成分の反応液
の吸光度を検出器で測定し、試料成分のクロマ１〜グラ
フをレコーダに記録づる様にしている。
［発明が解決しようと覆る問題点１
しかし、この様なりロマトグラフ検出方法において、次
の様な問題がある。
の様な問題がある。
■分前検出しようとする目的成分は決よ−）だ一定の成
分て・あっても、分析しようとする試料中に種々の成分
が含まれており、実際には、分離カラムから溶出して来
る目的と覆る成分中に不要な成分が含まれている為、目
的とする成分のみの検出が正確に行なえない。
分て・あっても、分析しようとする試料中に種々の成分
が含まれており、実際には、分離カラムから溶出して来
る目的と覆る成分中に不要な成分が含まれている為、目
的とする成分のみの検出が正確に行なえない。
■吸光度を検出する為の検出系に使用されている光源の
ちらつき等によるノイズが光検出器（フォトセル）に入
り、成分の検出感度が低下する。
ちらつき等によるノイズが光検出器（フォトセル）に入
り、成分の検出感度が低下する。
本発明はこの様な問題を解決し、目的とりる成分のみを
高感度に検出出来るり１」マｌ〜グラフ検出方法を提供
することを目的と覆る。
高感度に検出出来るり１」マｌ〜グラフ検出方法を提供
することを目的と覆る。
［問題点を解決するための手段］
本発明は、サンプルを分離カラムに導入し、該分離カラ
ムから順次溶出して来た成分の光学的強度を検出する様
にした方法において、前記分離カラムからの溶出液と、
該溶出液中の特定成分とのみ反応して特定物を発生する
試薬とを混合し、更に、該発生した特定物に化学発光試
薬を反応させて化学的励起を起こさせ、該励起により発
生した光の強度を検出する様にしたことを特徴とする。
ムから順次溶出して来た成分の光学的強度を検出する様
にした方法において、前記分離カラムからの溶出液と、
該溶出液中の特定成分とのみ反応して特定物を発生する
試薬とを混合し、更に、該発生した特定物に化学発光試
薬を反応させて化学的励起を起こさせ、該励起により発
生した光の強度を検出する様にしたことを特徴とする。
［実施例コ
添付図は、本発明の検出方法を実７ＩＩ！ｉスる為の液
体り１コマトゲラフ装置の一例を示す概略図である。
体り１コマトゲラフ装置の一例を示す概略図である。
図中１は例えば、イオン交換樹脂の如き充ｊ眞剤が装填
された分離カラム、２は該カラムに試料を注入する為の
試料注入装置（１ス後サンプラーと称ず）である。３は
展開液槽４がら展開液を吸い上げ、前記分離カラム１に
流す為の展開液ポンプである。５は酵素液槽６から酵素
を吸い上げ、前記分離カラム１から溶出して来る試料成
分と酵素を混合する為のミニ１リ−−７へ流し込む酵素
ポンプである。該酵素液槽の中には、前記分離カラム１
から溶出して来る６試料成分の内、目的と覆る成分丈と
反応して特定物（例えば、過酸化水素）を発生する酵素
が収容されている。８は前記ミキサー７からの課合液の
反応槽で、内部に加熱コイルが配置さねでいる。９．１
０は夫々、発光試薬液［１１、触媒液槽１２から発光試
薬液、触媒液を吸い上げ、前記反応槽８からの反応液と
発光試薬液と触媒液を混合させるミキサー７′に流し込
む為の発光試薬ポンプ、触媒ポンプである。１３は該ミ
キサー７−からの混合液の反応が行なわれるセルである
。該発光試薬液４１１１１の中には、前記反応槽８で生
成した特定物（例えば、過酸化水素）と反応すること【
こより、化学的に励起し、該特定物（過酸化水素）の量
に対応した強度の光を発する発光試薬が収容されている
。１４は前記セルでの発光強度を検出するフォトマルチ
プライアー、１５はアンプ、１６は該フォトマルヂプラ
イアーで検出した発光強度を表示するフォトメータ１６
である。尚、１７は排液槽である。
された分離カラム、２は該カラムに試料を注入する為の
試料注入装置（１ス後サンプラーと称ず）である。３は
展開液槽４がら展開液を吸い上げ、前記分離カラム１に
流す為の展開液ポンプである。５は酵素液槽６から酵素
を吸い上げ、前記分離カラム１から溶出して来る試料成
分と酵素を混合する為のミニ１リ−−７へ流し込む酵素
ポンプである。該酵素液槽の中には、前記分離カラム１
から溶出して来る６試料成分の内、目的と覆る成分丈と
反応して特定物（例えば、過酸化水素）を発生する酵素
が収容されている。８は前記ミキサー７からの課合液の
反応槽で、内部に加熱コイルが配置さねでいる。９．１
０は夫々、発光試薬液［１１、触媒液槽１２から発光試
薬液、触媒液を吸い上げ、前記反応槽８からの反応液と
発光試薬液と触媒液を混合させるミキサー７′に流し込
む為の発光試薬ポンプ、触媒ポンプである。１３は該ミ
キサー７−からの混合液の反応が行なわれるセルである
。該発光試薬液４１１１１の中には、前記反応槽８で生
成した特定物（例えば、過酸化水素）と反応すること【
こより、化学的に励起し、該特定物（過酸化水素）の量
に対応した強度の光を発する発光試薬が収容されている
。１４は前記セルでの発光強度を検出するフォトマルチ
プライアー、１５はアンプ、１６は該フォトマルヂプラ
イアーで検出した発光強度を表示するフォトメータ１６
である。尚、１７は排液槽である。
斯くの如き装置において、例えば、アミノ酸を検出すべ
ぎ成分とした場合、酵素液槽６には該アミノ酸と反応し
、過酸化水素を発生する様な酵素、例えば、アミノ酸オ
キシダーゼを、発光試薬液槽１１には過酸化水素と反応
して発光する様な発光試薬、例えば、ルミノールを、触
媒液槽１２には該発光反応を促進する触媒、例えば、フ
ェリシアン化カリウムを夫々収容しておく。
ぎ成分とした場合、酵素液槽６には該アミノ酸と反応し
、過酸化水素を発生する様な酵素、例えば、アミノ酸オ
キシダーゼを、発光試薬液槽１１には過酸化水素と反応
して発光する様な発光試薬、例えば、ルミノールを、触
媒液槽１２には該発光反応を促進する触媒、例えば、フ
ェリシアン化カリウムを夫々収容しておく。
先ず、展開液ポンプ３により展開液を分離カラム１に連
続的に流し、この状態で、サンプラー２から試料を分離
カラム１に注入する。そして、該分離カラムから順次溶
出して来る試料成分はミキサー７へ入る。この時、酵素
ポンプ５により、該ミキサーにアミノ酸オキシダーゼが
流し込まれ、ここで、試料成分とアミノ酸オキシダーゼ
が混合される。該混合液が流し込まれて来た反応槽８で
は、試料成分の内のアミノ酸丈がアミノ酸オキシダーゼ
と反応し、過酸化水素と該反応の副産物であるα−クト
酸を生成する。この生成された過酸化水素の量はアミノ
酸の趙に対応した量である。
続的に流し、この状態で、サンプラー２から試料を分離
カラム１に注入する。そして、該分離カラムから順次溶
出して来る試料成分はミキサー７へ入る。この時、酵素
ポンプ５により、該ミキサーにアミノ酸オキシダーゼが
流し込まれ、ここで、試料成分とアミノ酸オキシダーゼ
が混合される。該混合液が流し込まれて来た反応槽８で
は、試料成分の内のアミノ酸丈がアミノ酸オキシダーゼ
と反応し、過酸化水素と該反応の副産物であるα−クト
酸を生成する。この生成された過酸化水素の量はアミノ
酸の趙に対応した量である。
該生成物はミキサー７−に入る。該ミキサーには、発光
試薬ポンプ９と触媒ポンプ１０により、夫々ルミノール
とフェリシアン化カリウムが流し込まれ（いる。該ミキ
サー７′での混合液はセル１３に流し込まれるので、該
セルにおいて、過酸化水素とルミノールが反応し、ルミ
ノールが過酸化水素によって化学的に励起され、該過酸
化水素の量に応じた強さの光を発生する。形光は）Ａト
マルチプライア−１４により検出され、アンプ１５を介
してフッ＋１〜メータ１６に送られるので、該メータに
アミノ酸の量に対応した信号値が表示される。
試薬ポンプ９と触媒ポンプ１０により、夫々ルミノール
とフェリシアン化カリウムが流し込まれ（いる。該ミキ
サー７′での混合液はセル１３に流し込まれるので、該
セルにおいて、過酸化水素とルミノールが反応し、ルミ
ノールが過酸化水素によって化学的に励起され、該過酸
化水素の量に応じた強さの光を発生する。形光は）Ａト
マルチプライア−１４により検出され、アンプ１５を介
してフッ＋１〜メータ１６に送られるので、該メータに
アミノ酸の量に対応した信号値が表示される。
尚、セルからの液は廃液′Ｍ１７に捨てられる。
「発明の効果」
本発明によれば、目的とする成分のみのクロマトグラフ
を高感度に検出出来る。又、成分の量を光学的に検出づ
る時に光源を使用しないので、光源ノイズの混入の心配
がなく、成分の検出感度の低下の問題がない。
を高感度に検出出来る。又、成分の量を光学的に検出づ
る時に光源を使用しないので、光源ノイズの混入の心配
がなく、成分の検出感度の低下の問題がない。
添付図は本発明の検出方法を実施する為の液体クロマト
グラフ装置の一例を示ツ概略図である。 １：分離カラム ２：試料注入装置 ３二展開液ポンプ ／′ｌ：展開液槽 ５：酵素ポンプ ６：酵素液槽 ７．７′：ミキサー ９：発光試薬ポンプ １０：触媒ポンプ １１：発光試薬液槽 １２：触媒液槽 １３ニセル １４：フォトマルチプライアー １５：アンプ １６：フオトメータ
グラフ装置の一例を示ツ概略図である。 １：分離カラム ２：試料注入装置 ３二展開液ポンプ ／′ｌ：展開液槽 ５：酵素ポンプ ６：酵素液槽 ７．７′：ミキサー ９：発光試薬ポンプ １０：触媒ポンプ １１：発光試薬液槽 １２：触媒液槽 １３ニセル １４：フォトマルチプライアー １５：アンプ １６：フオトメータ
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、サンプルを分離カラムに導入し、該分離カラムから
順次溶出して来た成分の量を光学的に検出する様にした
方法において、前記分離カラムからの溶出液と、該溶出
液中の特定成分とのみ反応して特定物を発生する試薬と
を混合し、更に、該発生した特定物に化学発光試薬を反
応させて化学的励起を起こさせ、該励起により発生した
光の強度を検出する様にしたクロマトグラフ検出方法。 ２、前記特定物が過酸化水素である特許請求の範囲第１
項に記載のクロマトグラフ検出方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59143955A JPS6123968A (ja) | 1984-07-11 | 1984-07-11 | クロマトグラフ検出方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59143955A JPS6123968A (ja) | 1984-07-11 | 1984-07-11 | クロマトグラフ検出方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6123968A true JPS6123968A (ja) | 1986-02-01 |
Family
ID=15350935
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59143955A Pending JPS6123968A (ja) | 1984-07-11 | 1984-07-11 | クロマトグラフ検出方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6123968A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH03199944A (ja) * | 1989-12-27 | 1991-08-30 | Shimadzu Corp | アミノ化合物の分析方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5737261A (en) * | 1980-08-15 | 1982-03-01 | Otsuka Pharmaceut Co Ltd | Measuring method of physiological active substance |
| JPS5771399A (en) * | 1980-10-21 | 1982-05-04 | Aloka Co Ltd | Analytical method of minor constituent in specimen and apparatus |
| JPS5847255A (ja) * | 1981-09-14 | 1983-03-18 | Nisshin Denki Seisakusho:Kk | 液体クロマトグラフ装置 |
-
1984
- 1984-07-11 JP JP59143955A patent/JPS6123968A/ja active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5737261A (en) * | 1980-08-15 | 1982-03-01 | Otsuka Pharmaceut Co Ltd | Measuring method of physiological active substance |
| JPS5771399A (en) * | 1980-10-21 | 1982-05-04 | Aloka Co Ltd | Analytical method of minor constituent in specimen and apparatus |
| JPS5847255A (ja) * | 1981-09-14 | 1983-03-18 | Nisshin Denki Seisakusho:Kk | 液体クロマトグラフ装置 |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH03199944A (ja) * | 1989-12-27 | 1991-08-30 | Shimadzu Corp | アミノ化合物の分析方法 |
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