JPS61229868A - イミダゾ−ル誘導体及びこれを発色成分として用いる測定法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔発明の利用分野〕 本発明は、新規なイミダゾール誘導体・及び該化合物を
発色成分として用いる酸化性物質の定量方法並びにペル
オキシダーゼ様物質の定量方法に関する。

〔発明の背景〕

生体成分、例えば血液や尿などの体液成分を測定するこ
とは、その変動が疾病と大きく関連しているため、疾患
の診断、病態の解明、治療経過の判定を行なう上で、必
須なものとなっている０例えば、血液中のコレステロー
ル、トリグリセライド、グルコース、尿酸、リン脂質、
胆汁酸、モノアミンオキシダーゼなどを始め、非常に多
種類の微量成分の測定法が開発されており、疾病の診断
上役立っていることは周知の通りである。

現在、血清成分の測定法としては、それが酵素以外のも
のである場合には、目的成分に特異的に作用する酵素を
用い、また、目的成分が酵素の場合には、その基質とな
るべき化合物を用いて、夫々酵素反応を行ない、これに
よる生成物を測定して目的成分量を求める。所謂“酵素
法”が一般に広く普及している。なかでも、Ｈ２Ｏ２生
成酵素、例えば、オキシダーゼを働かせて目的成分に相
当するＨ２Ｏ２を生成させ、これをペルオキシダーゼ、
及び発色成分である被酸化性呈色試薬を用いて発色系に
導き、場の１己を比色定量することにより目的成分量を
求める方法が、被酸化性呈色試薬の開発と相まって増加
しつつある０例えば、コレステロール−コレステロール
オキシダーゼ、トリグリセライドーリボプロテインリバ
ーゼーグリセロールオキシダーゼ、尿酸−ウリカーゼな
どの組合せで発生するＨ２Ｏ２を、ペルオキシダーゼ（
ＰＯＤ）、被酸化性呈色試薬を用いて発色系に導き、そ
の呈色の吸光度を測定することにより目的成分量を求め
る方法である。この方法に於て用いられる発色成分であ
る被酸化性呈色試薬の代表的なものとしては、４−７ミ
ノアンチピリンと、フェノール系化合物又はＮ、Ｎ−ジ
置換アニリン系化合物とを組合せた被酸化性呈色試薬、
３−メチルベンゾチアゾリノンヒドラゾン（ＭＢＴＨ）
とアニリン系化合物との組合せ試薬、２，２゛−７ジノ
ビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸）
（ＡＢＴｓ）、トリフェニルメタン系ロイコ色素、ベン
ジジン誘導体、０−）リジン誘導体、ジフェニルアミン
誘導体、Ｏ−フェニレンジアミン等が挙げられる。しか
しながら、これら従来から用いられている被酸化性呈色
試薬は、ジフェニルアミン誘導体を除いて大部分がその
呈色波長が８００ｎｍ以下であり、ビリルビン、ヘモグ
ロビン等の血清成分の影響を受は易く（尿中成分測定時
には尿中の色素体の影響を受は易い）、又、４−７ミノ
アンチピリンとの組合せ試薬やトリフェニルメタン系ロ
イコ色素の一部を除いて、いずれも色原体の安定性が低
い等の問題点を有する。一方、比較的色原体の安定性が
良く、又呈色波長が比較的長波長側にある色原体として
染料前駆体（ロイコ色素）のトリアリルイミダゾール誘
導体が開示されている。（特公昭５７−５５１９号公報
、特公昭５７−２６１１８号公報、特開昭５８−４５５
５７号公報、米国特許第３２９７７１０号明細書等）こ
れらのイミダゾール誘導体は、いずれもその呈色波長が
　６００ｎｍ以上と比較的長波長側にあり感度も比較的
高いが、色原体の安定性は必ずしも未だ充分満足のいく
ものであるとは云えず、感度の高いものは特に色原体の
安定性に問題が残る。

〔発明の目的〕

本発明の目的は、呈色時の極大吸収波長が８００ｎ１１
以上の長波長側にあり、感度も高く、しかも色原体が極
めて安定なイミダゾール誘導体の開発と、該化合物を用
いる酸化性物質及びペルオキシダーゼ様物質の精度の高
い定量法を提供することにある。

〔発明の構成〕

上記目的を達成するため、本発明は次の構成からなる。

「 下記一般式（Ｉ） ［式中、Ｒ１，Ｒ２及びＲ３は夫々有機の基であって、
Ｒ１，Ｒ２及びＲ３のうち少くとも１つがそのオルト位
又はパラ位のどちらかが水酸基で置換されたアリール基
を表わし、残り２つのうち少くとも１つがそのオルト位
又はパラ位のどちらかが、アルコキシ基、アリールオキ
シ基又は置換基を有していてもよいアミン基で置換され
たアリール基を表わす、又、Ｒ４は置換基を有していて
もよいアルキル基、置換基を有していてもよいフェニル
基、アルケニル基、アシル基、アルキル置換カルバモイ
ル基、置換基を有していてもよいフェニル置換カルバモ
イル基を表わす、１で示されるイミダゾール誘導体及び
該化合物を発色成分として用いる酸化性物質並びにペル
オキシダーゼ様物質の定量〜 本発明は上記一般式ＣＩ）で示されるイミダゾール誘導
体が、いずれもその呈色波長が８００ｎｍ以上の長波長
側にあり、しかもイミダゾール環の３位のＮにＲ４で表
わされる基をつけることによって、呈色感度に拘わらず
色原体として極めて安定となり、これを酸化性物質やペ
ルオキシダーゼ様物質の定量に於ける発色成分として用
いることにより、より精度の高い測定を行い得ることを
本発明者らが見出し、完成するに到ったものである。

一般式（Ｉ）で示される本発明のイミダゾール誘導体に
於て　ｎｌ、Ｒ２及びＲ３で表わされるそのオルト位又
はパラ位のどちらかが水酸基で置換されたアリール基、
及びそのオルト位又はパラ位のどちらかがアルコキシ基
、アリールオキシ基又は置換基を有していてもよいアミ
ノ基で置換されたアリール基のオルト位又はパラ位以外
の置換基としては、例えば、メチル基、エチル基、プロ
ピル基、ブチル基、ペンチル基等炭素数１〜５の低級ア
ルキル基（直鎖状、分枝状の□いずれにても可、）１例
えばメトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、ブトキシ
基等炭素数１〜４の低級アルコキシ基（直鎖状１分枝状
のいずれにても可、）。

例えばフェノキシ基、メチルフェノキシ基、カルボキシ
フェノキシ基、クロロフェノキシ基等の７リールオキシ
基、塩素、臭素、弗素、沃素等のハロゲン原子、水酸基
、ニトロ基、アミン基、例えばメチル基、エチル基、プ
ロピル基、ブチル基等の低級アルキル基又は例えば−ｃ
２ｕ４ｏｏ基。

−０３Ｈ６０Ｈ基、　−Ｃ２Ｈ４ＮＨ５Ｏ２ＣＨ３基、
　−Ｃ２Ｈ４ＮＨＣＯ（Ｈ３基、　−Ｃ２Ｈ４ＳＯ３Ｈ
基（又バー　Ｇ２Ｈ４５Ｏ３Ｎａ基等）。

−（：３ＨＢＳＯ３Ｈ基（又は−Ｃ３Ｈ６ＳＯ３Ｎａ基
等）。

例えばメトキシカルボキニル、エトキシカルボニル基、
インプロポキシカルボニル基等低級アルコキシカルボニ
ル基、スルホニル基１例えばメチルスルホニル基、エチ
ルスルホニル基等低級アルキルスホニル基等が挙げられ
るが、これらに限定されるものではない、又、Ｒ１，Ｒ
２及びＲ３に於けるオルト位又はパラ位の置換基である
アルコキシ基としては、例えばメトキシ基、エトキシ基
、プロポキシ基、ブトキシ基等が挙げられ、アリールオ
キシ基としては、フェノキシ基、例えばメチルフェノキ
シ基、カルボキシフェノキシ基、スルホフェノキシ基、
クロロフェノキシ基等の置換フェノキシ基等が挙げられ
、置換基を有していてもよいアミノ基の置換基としては
１例えばメチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基等
の低級アルキル基、−Ｃ２Ｈ４ＯＨ基、−ｃ３Ｈ６ｏｕ
基、−Ｃ２Ｈ４ＮＩＳＯ２ＣＩ３基。

−Ｃ２Ｈ４ＮＨＣＯＣＨ３基、−ｃ２ｕ４ｓｏ３ｎ基（
又は−（：２Ｈ４ＳＯ３Ｎａ基＞　、−Ｃ３）１８ＳＯ
３）１基（又は−Ｃ３ＨＢＳＯ３Ｎａ基）。

Ｒ４で表わされる置換基を有していてもよいアルキル基
としては１例えば、メチル基、エチル基。

プロピル基、ブチル基、クロロメチル基、ヒドロキシエ
チル基等が挙げられ、置換基を有していてもよいフェニ
ル基としては例えば、フェニル基、メチルフェニル基、
クロロフェニル基、カルボキシフェニル基、スルホフェ
ニル基等が挙ケられ、アルケニル基としては、例えば、
ビニル基、プロペニル基、ブテニル基等が挙げられ、ア
シル基としては、例えば、アセチル基、プロピオニル基
、ブチリル基、バレリル基、ベンゾイル基、トルオイル
基、サリチロイル基、フタロイル基等が挙げられる。又
、アルキル置換カルバモイル基とじては、例えば、Ｎ−
メチルカバモイル基、Ｎ−エチルカルバモイル基、Ｎ−
イソプロピルカルバモイル基、Ｎ、Ｎ−ジメチルカルバ
モイル基、　ＮｌＮ−／’エチルカルバモイル イル基等の低級アルキル置換カルバモイル基が挙げられ
，置換基を有していてもよいフェニル置換カルバモイル
基の置換基としては、例えばメチル基，エチル基，プロ
ピル基等の低級アルキル基、例えばメトキシ基，ニドキ
シ基等の低級アルコキシ基，塩素，臭素，弗素，沃素等
のハロゲン原子等が挙げられ、これらの置換基を有して
いてもよいフェニル基のモノ又はジ置換カルバモイル基
が用いられる．又、Ｎ−アルキル−Ｎ−フェニルカルバ
モイル基も同様に用い得ることはいうまでもない。

一般式ＣＩ）で示される本発明のイミダゾール誘導体は
、例えば、ペルオキシダーゼの存在下過酸化水素を作用
させると、下記の如く反応する。

は置換基を有していてもよいアミノ基を表わす．）。

表わす．）とすると、 −Ｈ 基を表わす　）、　！？４　＝　−　ｃ−Ｒｌｏ（但し
、Ｒ１０はアルキル基又は置換基を有していてもよいフ
ェニル基を表わす．）とすると、 即ち、Ｒ４がアルキル置換カルバモイル基、又は置換基
を有していてもよいフェニル置換カルバモイル基のとき
は、これらの基は酸化反応の際にイミダゾール基より外
れて、例えば過酸化水素で酸化した場合にはＲＮＨＣＯ
ＯＨとなり、酸化により生成した色素とは全く別の存在
となる。即ち、Ｒ４で表わされるアルキル置換カルバモ
イル基、又は置換基を有していてもよいフェニル置換カ
ルバモイル基は、色原体の安定化（ブランクの安定化）
にのみ関与し、発色には何ら影響を与えない、一方、Ｒ
４が置換基を有していていてもよいアルキル基。

Ｍフェニル基、アルケニル基、アシル基の場合には、少
くとも過斂化水素−ペルオキシダーゼ系の酸化反応に於
てはイミダゾール基からは外れずにそのまま残っており
１色原体の安定化と共にＨ２Ｏ２当りの感度を２倍にす
る役目を果している。

表１に、一般式ＣＩ）で示される本発明化合物の具体例
数例と、その呈色時の極大吸収波長及び分子吸光係数ε
　（ｔｔ２ｏ２当り）、並びに色原体の安定性（ブラン
クの安定性）を示すが１本発明化合物はこれらに限定さ
れるものでないことはいうまでもない。

５０　ｔｓＭリン醜緩衝液（ｐＨ７，０）にＰＯＤ２０
００　Ｕ／ｌ、各／／　（７）　Ｃｆｆ　４１体３００
ＩＬｍａｌ／ｌ　＊溶解して試液とし、この試液の吸光
度と２５℃２４時間後の吸光度を比較して差がｏ、ｔｏ
ｏ以上のときを−、０，０５０〜０．１００のときを士
、　０−０５０以下のときを十とした。

表１より明らかな如く比較例で示される既存のトリアリ
ルイミダゾール誘導体のＲ４（＝水素）を本発明に係る
種々の置換基（アルキル置換カルバモイル基及び置換基
を有していてもよいフェニル置換カルバモイル基を除く
）で置きかえることによりＨ２Ｏ２当りの感度が約２倍
となる。

一般式〔１〕で示される本発明化合物は、公知の方法に
より容易に合成することができる。即ち、例えば、Ｏｒ
ｇａｎｉｃ　５ｙｎｔｈｅｓｅｓ　Ｖｏｌ、５．１１１
頁１９７３年に記載の方法に準じて、式（ＩＴ）で示さ
れるエタンジオンを合成し、 （式中、Ｒ２，Ｒ３，は前記と同じ、）次いで、これを
例えば米国特許第３２９７７１０号明細書に記載の方法
に準じてＲ’−ＣＨｏ　（Ｒ１は前記と同じ）なるアル
デヒド類及び酢酸アンモンと、酢酸溶媒中数時間加熱（
要すれば還流）反応させれば式（ＩＩＩ）で示されるイ
ミダゾール誘導体が得られるから、 （式中、Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３は前記と同じ、）得られたイ
ミダゾール誘導体を適当な溶媒の存在時間反応させれば
、目的物が収率よ〈得られる。

要すればこれを適当な精製方法、例えば再結晶、カラム
クロマトグラフィー等により精製すれば精製品が容易に
得られる。

本発明のイミダゾール誘導体は、酸化性物質の定量やペ
ルオキシダーゼ様物質の定量に於ける発色成分として有
効に用い得るが、とりわけ酵素反応により生成した過酸
化水素をペルオキシダーゼの存在下発色系に導き、その
呈色を比色定量することにより行う生体試料中の微量成
分の定量に於ける発色成分として特に有効に使用し得る
。

即ち１本発明の酸化性物質の定量法は、基質、又は酵素
反応により生成した物質に酸化酵素を作用させ、生成す
る過酸化水素を定量することにより行う生体試料中の基
質又は酵素活性の定量法として特に効果的に使用し得る
。

本発明の方法により測定可能な生体試料中の微量成分と
しては１例えば、コレステロール、グルコース、グリセ
リン、トリグリセライド、遊離脂肪酸、尿酸、リン脂質
、胆汁酸、モノアミンオキシダーゼ、７グアナーゼ、コ
リンエステラーゼ等が挙げられるが、これらに限定され
るものではなく、酵素反応により生成する過酸化水素を
定量することによって測定が可能な生体成分は全て定量
可能である。

本発明の方法による生体成分の定量に於て、過酸化水素
を生成させる酵素として用いられる酸化酵素（オキシダ
ーゼ）及びその他の目的で用いられる酵素類並びに酵素
反応に関与する基質及びその他の物質の種類及び使用量
は被酸化性呈色試薬を用いる自体公知の生体成分の定量
法に準じて夫々測定対象となる物質に応じて適宜選択す
ればよい、又、本発明による過酸化水素の定量に於て用
いられるペルオキシダーゼとしては、その起源。

由来に特に限定はなく、植物、動物、微生物起源のペル
オキシダーゼ又はペルオキシダーゼ様物質が、一種若し
くは要すれば二種以上組合せて用いられる。又、その使
用量は目的に応じて適宜定められ、特に限定されない。

本発明の方法による生体成分の定量は、通常、ｐＨ４，
０〜１０．０．より好ましくはｐＨ８，０〜８．０で実
施される。用いられる緩衝剤としては、リン酸塩、クエ
ン酸塩、ホウ酸塩、炭酸塩、トリス緩衝液、グツド（Ｇ
ｏａｄ’Ｓ）緩衝液などが挙げられるが、特にこれらに
限定されない。

本発明のイミダゾール誘導体は、過酸化水素等酸化性物
質の定量に有効に用い得るが、又、これと過酸化水素と
を組み合せることによりペルオキシダーゼ様物質の定量
を行うことも可能である。

ペルオキシダーゼ様物質としては、ペルオキシダーゼそ
のものの他、ヘモグロビンその他のヘム化合物が挙げら
れる。

即ち１本発明のイミダゾール誘導体は、例えば、ペルオ
キシダーゼを標識化合物に用いた酵素免疫測定法にも応
用可能であり、又、血清中のヘモグロビンを過酸化水素
若しくは過硼素酸ナトリウムのような酸化性物質を用い
て測定する場合などにも有効に使用し得る。

以下に実施例を挙げるが、本発明はこれら実施例により
何ら制約を受けるものではない。

〔実施例〕

実施例１．２−（４−ヒドロキシ−３，５−ジメトキシ
フェニル）　−３−Ｎ−メチルカルバモイル−４，５−
ビス（４−ジエチルアミノフェニル）イミダゾール〔本
発 明化合物（１）〕の合成 （ｉ）１．２−ビス　（４−ジエチルアミノフェニル）
エタン−１，２−ジオンの合成 無水塩化アルミニウム８．７ｇに二硫化炭素２０１を加
え氷冷下、Ｎ、Ｎ−ジエチルアニリン２０ｇを滴下した
。さらに撹拌下、氷冷しながらオキザリルクロリド　１
．５　ｇを滴下し、６０分間撹拌反応させた０反応後、
水５０１及びクロロホルム１００１を加え１分液して得
たクロロホルム層を減圧濃縮して結晶を析出せしめた。

析出した結晶を炉底し酢酸エチルから再結晶して黄色の
目的物５．０ｇを得た。

（ｉｉ）　２−　（４−ヒドロキシ−３，５−ジメトキ
シフェニル）−４，５−ビス（４−ジエチルアミノフェ
ニル）イミダゾールの合成 （ｉ）で得た１、２−ビス　（４−ジエチルアミノフェ
ニル）エタン−１，２−ジオン１．５ｇと４−ヒドロキ
シ−３，５−ジメトキシベンズアルデヒドｏ、ｓ　ｇ、
酢斂アンモニウム５ｇを酢酸３０層１中で２時間加熱還
流して反応させた。冷却後、水８０ｍ１を加え水冷下ア
ンモニア水で中和したところ結晶が析出した。析出した
結晶をか取、水洗、乾燥後、ヘキサンで処理ＩＪ＃ヨ色
の目的化合物０．８ｇを得た。

（ｉｉｉ）２−　　（４−ヒドロキシ−３，５−ジメト
キシフェニル）−３−Ｎ−メチルカルバモイル−４，５
−ビス　（４−ジエチルアミノフェニル）イミダゾール
の合成 （ｉ　ｉ）で得た２−（４−ヒドロキシ−３，５−ジメ
トキシフェニル）−４，５−ビス（４−ジエチルアミノ
フェニル）イミダゾール０．８ｇをクロロホルム５０ｍ
１に溶解し、撹拌下、イソシアン酸メチル５１を加え室
温で１２時間放置した０次いで、メタノール５０ｍ１を
加え反応を停止後濃縮した。濃縮物を、クロロホルムを
溶離液に用いたシリカゲルカラムで精製し、目的物（微
赤色粉末）　７８０ｍｇを得た。

ＮＭＲ（００Ｇ＋３．ＴＭＳ）　　ｐｐｍ　　：　　１
．２　　（１２Ｈ，ｔ　　。

（６Ｈ，ｓ　、　−０ＣＨ３）、　Ｂ、Ｆ；〜７．７　
（１０Ｈ，ｂｒｏａｄ、７　エニル水素）　、　７．９
　（Ｉ　Ｈ，ｓ、　−ＯＨ）ＫＢｒ　　　−１ １Ｒν　　　　（ｃｍ　　　）　　：　　３２５０　　
（ＯＨ）　　、　　２９８０　　（Ｃ）Ｉ）　　、ａｘ １７２０　　（Ｃ＝Ｑ　　）　　、　　１８０５．１５
３０．　１５０５実施例２．２−（４−ヒドロキシ−３
，５−ジメトキシフェニル）−３−７セチルー４．５−
ビス（４−ジエチルアミノフェニル） イミダゾール〔本発明化合物（２）〕の合成 実施例１と同様にして得た２−（４−ヒドロキシ−３，
５−ジメトキシフェニル）−４，５−ビス（４−ジエチ
ル７ミノフエニル）イミダゾール１．０ｇ、　ピリジン
０．４１をテトラヒドロフラン２００１に溶解し、塩化
アセチル０．２鳳ｌを加え室温で１２時間撹拌反応させ
た０次いで、氷水３００１を加え反応を停止後クロロホ
ルム５０Ｑｍｌを加え、クロロホルム層を分取し濃縮し
た。濃縮物を、クロロホルムを溶離液に用いたシリカゲ
ルカラムで精製し、目的物（微赤色粉末）　８０１ｍｇ
を得た。

ＮＭＲ（ＣＤＣｌ２．ＴＭＳ）　ｐｐｍ　：　１．２　
（１２Ｈ，ｔ　。

ＣＨ３−Ｃ−）　　、　３．８　（８Ｈ，ｑ　、　Ｃ−
ＣＨ２−）　、　３．８　（３Ｈ。

−〇　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　−ｓ　
、　−Ｃ−ＣＨ３）　、　４．０　（８Ｈ，ｓ　、　−
０−ＣＨ３）　、　８．８〜７．５　（１０１（、ｂｒ
ｏａｄ、　７　ｘ　ニル水素）　、　７．９　（ＬＨ。

ｓ　、　−ＯＨ） Ｉ　Ｒｙ　ＫＢ’（ｃｍ−’）　　：　３４５０　（Ｏ
Ｈ）　、　２９８０　（ＯＨ）、霞ａｘ １７８５　（Ｃ＝　０　）　、　１８０５．１５０Ｇ実
施例３．２−（４−ヒドロキシ−３，５−ジメトキシフ
ェニル）−３−ベンゾイル−４゜５−ビス（４−ジエチ
ルアミノフェ ニル）イミダゾール〔本発明化合物 （３）〕の合成 実施例１と同様にして得た２−（４−ヒドロキシ−３，
５−ジメトキシフェニル）　−４，５−ビス（４−ジエ
チルアミノフェニル）イミダゾール１．０　ｇ、ピリジ
ン０．４１をテトラヒドロフラン２００　ｍｌに溶解し
、塩化ベンゾイル０．２ｍｌを加え室温で１２時間撹拌
反応させた６次いで、氷水３００１を加え反応を停止後
クロロホルム５００１を加え。

クロロホルム層を分取し濃縮した。濃縮物を、クロロホ
ルムを溶離液に用いたシリカゲルカラムで精製し、目的
物（微赤色粉末）　８５０ｍｇを得た・ＮＭＲ（ＣＤＣ
ｌ２．ＴＭＳ）　ＰＰＩＩ　：　１．２　（１２）１．
　ｔ　。

ＣＨ３−Ｃ−）　、　３．８　（８Ｈ，ｑ　、　Ｃ−Ｃ
Ｈ２−）　、　３．９　（８Ｈ。

ｓ　、　−０−ＣＨ３）　、　８．５〜７．５　（１５
Ｈ，ｂｒｏａｄ、　７　ｘニル水素）　、　７．９　（
ＩＨ，Ｓ、　−０ｉＬ　）Ｉ　Ｒｙ　Ｋ１３’（ｃｍ−
１）　　：　３４００　（ＯＨ）　、　２９８０　（Ｏ
Ｈ）、履ａＸ １７４０　（Ｃ＝　Ｏ）　、１８０５．１５２０．１５
００実施例４　尿酸の定量 （１）試液　５０層ｍｏｌ／ＩＭＥ　Ｓ　（２−（Ｎ−
モルホリノ）エタンスルホン酸〕緩衝液（ｐＨ８，５）
にウリカーゼ１００■／Ｉ、ペルオキシダーゼ２０００
　Ｕ／Ｉ、本発明化合物（θ）　１００ｇ■ｏｌ／ｌの
濃度になるように溶解し調製した。

（２）試料　尿酸を蒸留水でＩ　Ｏ，？、５．５．２．
５Ｈ１ｇ／ｄｌになるように溶解し調製した。

（３）測定操作　各試料液及び蒸留水容５０１Ｌ１に試
液３，０１を加え、３７℃で５分間加温し７００ｎｒａ
の吸光度を盲検を対照に測定した。

第１図に尿酸濃度と吸光度ｔ６関係を示す、第１図より
明らかな如く、各尿酸濃度に対してプロットした吸光度
を結ぶ検量線は原点を通る直線となり、検量線は良好な
定量性を示している。

実施例５　過酸化水素の定量 （１）試液　５０ｍｍｏｌ／ｌ　　リン酸緩衝液（ｐ）
Ｉ　７．０）にペルオキシダーゼ２０００　Ｕ／Ｉ、本
発明化合物（２）１００ル膳ｏ１／ｌ　になるように溶
解し調製した。

（２）試料　市販過酸化水素水を蒸留水で希釈し２．０
．１．５．１．０．０．５　ｍｅａｌ／ｌになるように
溶解し調製した。

（３）測定操作　各試料液及び蒸留水容２０，１に試液
３．０鱈を加え、３７℃で３分間加温し８７０ｎｍの吸
光度を盲検を対照に測定した。

第２図に過酸化水素濃度と吸光度との関係を示す、第２
＠より明らかな如く、各過酸化水素濃度に対してプロッ
トした吸光度を結ぶ検量線は原点を通る直線となり、検
量線は良好な定量性を示している。

〔発明の効果〕

以上述べた如く１本発明の新規イミダゾール誘導体は、
その殆んどが呈色時の極大吸収波長が。

８００ｎｍ以上の長波長側にある為２例えば血清、尿等
生体試料中の微量成分の定量に於ける発色成分としてこ
れを用いた場合には、試料中に共存する有色の妨害物質
の影響をさほど受けずに測定を行うことができるという
点、及びイミダゾール環の３位の窒素に前述の如き置換
基をつけたことによしていてもよいフェニル基、アルケ
ニル基及びアシル基のときには、例えば過酸化水素−ペ
ルオキシダーゼ系での酸化反応に於ては過酸化水素当り
の呈色の感度が、置換基のない既存のイミダゾール誘導
体に比べ２倍になる点等に顕著な効果を奏するものであ
り、斯業に貢献するところ大なるものである。

【図面の簡単な説明】

第１図は、実施例４に於て得られた検量線を表わし、横
軸の各尿酸濃度（１ｇ／旧）について得られた吸光度を
縦軸に沿ってプロットした点を結んだものである。 第２図は、実施例５に於て得られた検量線を表わし、横
軸の各過酸化水素濃度（ｇａｏｌ／Ｉ）について得られ
た吸光度を縦軸に沿ρてプロットした点を結んだもので
ある。 特許出願人　和光純薬工業株式会社 シ ＃酸濃度（４ｎ＞Ａｌｌ　） 昭和６１年　６月　２０日

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. （１）下記一般式〔 I 〕 ▲数式、化学式、表等があります▼〔 I 〕 ［式中、Ｒ＾１、Ｒ＾２及びＲ＾３は夫々有機の基であ
   って、Ｒ＾１、Ｒ＾２及びＲ＾３のうち少くとも１つが
   そのオルト位又はパラ位のどちらかが水酸基で置換され
   たアリール基を表わし、残り２つのうち少くとも１つが
   そのオルト位又はパラ位のどちらかが、アルコキシ基、
   アリールオキシ基又は置換基を有していてもよいアミノ
   基で置換されたアリール基を表わす、又、Ｒ＾４は置換
   基を有していてもよいアルキル基、置換基を有していて
   もよいフェニル基、アルケニル基、アシル基、アルキル
   置換カルバモイル基、置換基を有していてもよいフェニ
   ル置換カルバモイル基を表わす。］で示されるイミダゾ
   ール誘導体。
2. （２）下記一般式〔 I 〕 ▲数式、化学式、表等があります▼〔 I 〕 ［式中、Ｒ＾１、Ｒ＾２及びＲ＾３は夫々有機の基であ
   って、Ｒ＾１、Ｒ＾２及びＲ＾３のうち少くとも１つが
   そのオルト位又はパラ位のどちらかが水酸基で置換され
   たアリール基を表わし、残り２つのうち少くとも１つが
   そのオルト位又はパラ位のどちらかが、アルコキシ基、
   アリールオキシ基又は置換基を有していてもよいアミノ
   基で置換されたアリール基を表わす、又、Ｒ＾４は置換
   基を有していてもよいアルキル基、置換基を有していて
   もよいフェニル基、アルケニル基、アシル基、アルキル
   置換カルバモイル基、置換基を有していてもよいフェニ
   ル置換カルバモイル基を表わす。］で示されるイミダゾ
   ール誘導体を発色成分として用いることを特徴とする酸
   化性物質の定量法。
3. （３）酸化性物質が過酸化水素である、特許請求の範囲
   第２項記載の定量法。
4. （４）ペルオキシダーゼの存在下、発色成分を酸化発色
   させてその呈色を比色定量する特許請求の範囲第３項記
   載の定量法。
5. （５）過酸化水素が、酵素反応により生成する過酸化水
   素である特許請求の範囲第３項又は第４項記載の定量法
   。
6. （６）過酸化水素が、生体試料中の微量成分の定量に於
   て酵素反応により生成する過酸化水素である特許請求の
   範囲第５項記載の定量法。
7. （７）生体試料中の微量成分の定量が、基質、又は酵素
   反応により生成した物質に酸化酵素を作用させ生成する
   過酸化水素を定量することにより行う生体試料中の基質
   又は酵素活性の定量である特許請求の範囲第６項記載の
   定量法。
8. （８）下記一般式〔 I 〕 ▲数式、化学式、表等があります▼〔 I 〕 ［式中、Ｒ＾１、Ｒ＾２及びＲ＾３は夫々有機の基であ
   って、Ｒ＾１、Ｒ＾２及びＲ＾３のうち少くとも１つが
   そのオルト位又はパラ位のどちらかが水酸基で置換され
   たアリール基を表わし、残り２つのうち少くとも１つが
   そのオルト位又はパラ位のどちらかが、アルコキシ基、
   アリールオキシ基又は置換基を有していてもよいアミノ
   基で置換されたアリール基を表わす、又、Ｒ＾４は置換
   基を有していてもよいアルキル基、置換基を有していて
   もよいフェニル基、アルケニル基、アシル基、アルキル
   置換カルバモイル基、置換基を有していてもよいフェニ
   ル置換カルバモイル基を表わす。］で示されるイミダゾ
   ール誘導体を発色成分として用いることを特徴とするペ
   ルオキシダーゼ様物質の定量法。
9. （９）ペルオキシダーゼ様物質がペルオキシダーゼであ
   る特許請求の範囲第８項記載の定量法。
10. （１０）ペルオキシダーゼ様物質がヘモグロビン又はそ
    の他のヘム化合物である特許請求の範囲第８項記載の定
    量法。