JPS61149082A - 発酵法によるｌ―トリプトファンの製造法 - Google Patents
発酵法によるｌ―トリプトファンの製造法Info
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- JPS61149082A JPS61149082A JP59277235A JP27723584A JPS61149082A JP S61149082 A JPS61149082 A JP S61149082A JP 59277235 A JP59277235 A JP 59277235A JP 27723584 A JP27723584 A JP 27723584A JP S61149082 A JPS61149082 A JP S61149082A
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- coryneform bacteria
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
この発明は、組換えＤＮＡ’を有するコリネ型細菌及び
それを用いるＬ −） ＩＪブトファンの製造法に関す
る。
それを用いるＬ −） ＩＪブトファンの製造法に関す
る。
従来の技術
Ｌ−トリプトファンは、アントラニル酸がアントラニル
酸ホスホリ？シルトランス７エラー セ、Ｎ −（５’
−ホスホリ？シル〕アントラニル酸イソメラーゼ、イン
ドール３−グリセロールリン酸シンターゼ、トリプトフ
ァンシンターゼの順に各酵素の作用を受け、生産される
。
酸ホスホリ？シルトランス７エラー セ、Ｎ −（５’
−ホスホリ？シル〕アントラニル酸イソメラーゼ、イン
ドール３−グリセロールリン酸シンターゼ、トリプトフ
ァンシンターゼの順に各酵素の作用を受け、生産される
。
以下アントラニル黴ホスホリゾジルトランスフェラーゼ
をＰＲＴ 、 ｌ −（５’−ホスホリボシル）アント
ラニル酸イソメラーゼ’ｉ ＰＲＡＩ 、インドール３
−グリセロールリン酸シンターゼ’ｋ ＩｎＧＰ ）リ
プトファンシンターゼｔ−ＴＳト記ス。
をＰＲＴ 、 ｌ −（５’−ホスホリボシル）アント
ラニル酸イソメラーゼ’ｉ ＰＲＡＩ 、インドール３
−グリセロールリン酸シンターゼ’ｋ ＩｎＧＰ ）リ
プトファンシンターゼｔ−ＴＳト記ス。
−万、組換えＤＮＡ法を用いて、コリネ型細菌における
Ｌ−トリプトファン生産菌を育種することは、特開昭５
９−１５６２９２で報告されているが、ＰＲＴ 、 Ｐ
ＲＡＩ 、 ＩｎＧＰ 、 ＴＳ をコードする遺伝子
（以下各々ＰＲＴ遺伝子、ＰＲＡＩ遺伝子、ＩｎＧＰ遺
伝子、ＴＳ遺伝子と記す）が組込まれたものではない。
Ｌ−トリプトファン生産菌を育種することは、特開昭５
９−１５６２９２で報告されているが、ＰＲＴ 、 Ｐ
ＲＡＩ 、 ＩｎＧＰ 、 ＴＳ をコードする遺伝子
（以下各々ＰＲＴ遺伝子、ＰＲＡＩ遺伝子、ＩｎＧＰ遺
伝子、ＴＳ遺伝子と記す）が組込まれたものではない。
発明が解決しようとする問題点
この発明は、Ｌ−トリプトファンの生産性がよシ高い微
生物を得ること、及びそれによってＬ−トリプトファン
のよシ効率のよい製造法を見い出すことにある。
生物を得ること、及びそれによってＬ−トリプトファン
のよシ効率のよい製造法を見い出すことにある。
問題点を解決するための手段
本発明者等は、叙上の問題点を解決するため研究の結果
、コリネ凰細菌細胞内で発現しＰＲＴ 。
、コリネ凰細菌細胞内で発現しＰＲＴ 。
ＰＲＡＩ 、 ＩｎＣＰ及びＴＳ ｔ−コードする遺伝
子がコリネ瑠細菌細胞内で増殖しうるプラスミドベクタ
ーに接続されている組換えＤＮＡを有するコリネ型細菌
を分離することに成功し、得られたコリネ型細菌がＬ−
トリプトファンの高い生産性を有することを見い出した
。
子がコリネ瑠細菌細胞内で増殖しうるプラスミドベクタ
ーに接続されている組換えＤＮＡを有するコリネ型細菌
を分離することに成功し、得られたコリネ型細菌がＬ−
トリプトファンの高い生産性を有することを見い出した
。
本発明にいうコリネ型細菌（Ｃｏｒｙｎｅｆｏｒｍｂａ
ｃｔｅｒｉａ）は、バーシース−マニュアル・オブ・ブ
タ−きネイティブ・バクテリウムゾ−（Ｂａｒｇｅｙｓ
Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ Ｂ
ａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ） 第８版５９９頁（１９７４
）に定義されてｂる一群の微生物であシ、好気性、ダラ
ム陽性、非抗酸性、胞子形成能を有しない桿菌である。
ｃｔｅｒｉａ）は、バーシース−マニュアル・オブ・ブ
タ−きネイティブ・バクテリウムゾ−（Ｂａｒｇｅｙｓ
Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ Ｂ
ａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ） 第８版５９９頁（１９７４
）に定義されてｂる一群の微生物であシ、好気性、ダラ
ム陽性、非抗酸性、胞子形成能を有しない桿菌である。
このよりなコリネ型細菌のうち特に以下に述べるよりな
コリネ型グルタミン酸生産性細菌が本発明においては、
最も好ましｈものである。
コリネ型グルタミン酸生産性細菌が本発明においては、
最も好ましｈものである。
コリネ型グルタミン酸生産性細菌の野性法の例としては
次のようなものがあげられる。
次のようなものがあげられる。
ブレビバクテリウム・ディパリカタム Ａ
ＴＣＣ１４０２０ブレビｄクテリウム・サラカロリティ
クム ＡＴＣＣ１４０６６プレビパクテリウム
・インマリオフィルム ＡＴＣＣ１４０６８ブ
レビバクテリウム・ラクトファーメンタム ＡＴ
ＣＣ１３８６９ブレビパクテ１Ｊウム・ロゼラム
ＡＴＣＣ１３８２５ブレビバクテリウム
・フラバム ＡＴＣｏ １３８２
６プレビバクテリウム・チオｒニタリス
ＡＴＣＣ１９２４０コリネバクテリウム・アセトアシド
フィルム ＡＴＣＣ１３８７０コリネバクテリウ
ム・アセトグルタミクム ＡＴＣＣ１５８０６
コリネパクテリクム・カルナエ Ａ
ＴＣＣ１５９９１コリネバクテリウム・グルタミクム
ＡＴＣＣ１３０３２，１３０６０コリネ
バクテリウム・リリウム ＡＴＣＣ
１５９９０コリネバクテリウム・メラセコーラ
ＡＴＣＣ１７９６５ミクロバクテリウム・アン
モニアフイラム ＡＴＣＣ１５３５４本発明の
コリネ型グルタミン酸生産性細菌には上記のようなグル
タミン酸生産性を有する野性法のほかにグルタミン酸生
産性を有するまたはグルタミン酸生産性を失った変異株
も含まれる。
ＴＣＣ１４０２０ブレビｄクテリウム・サラカロリティ
クム ＡＴＣＣ１４０６６プレビパクテリウム
・インマリオフィルム ＡＴＣＣ１４０６８ブ
レビバクテリウム・ラクトファーメンタム ＡＴ
ＣＣ１３８６９ブレビパクテ１Ｊウム・ロゼラム
ＡＴＣＣ１３８２５ブレビバクテリウム
・フラバム ＡＴＣｏ １３８２
６プレビバクテリウム・チオｒニタリス
ＡＴＣＣ１９２４０コリネバクテリウム・アセトアシド
フィルム ＡＴＣＣ１３８７０コリネバクテリウ
ム・アセトグルタミクム ＡＴＣＣ１５８０６
コリネパクテリクム・カルナエ Ａ
ＴＣＣ１５９９１コリネバクテリウム・グルタミクム
ＡＴＣＣ１３０３２，１３０６０コリネ
バクテリウム・リリウム ＡＴＣＣ
１５９９０コリネバクテリウム・メラセコーラ
ＡＴＣＣ１７９６５ミクロバクテリウム・アン
モニアフイラム ＡＴＣＣ１５３５４本発明の
コリネ型グルタミン酸生産性細菌には上記のようなグル
タミン酸生産性を有する野性法のほかにグルタミン酸生
産性を有するまたはグルタミン酸生産性を失った変異株
も含まれる。
ＰＲＴ ＊ ＰＲＡＩ −ＩｎＧＰ −ＴＳ各遺伝子を
単離する方法は、コリネ型細菌のＰＲＴ 、 ＰＲＡＩ
、 ＩｎＧＰ 、 ＴＳ各遺伝子を有している株よシ
、まず染色体遺伝子を抽出しく例えばＨ，５ａ１ｔｏ
ａｎｄ Ｋ、Ｍｉｕｒａ Ｂｉｏｃｈ＠ｍ。
単離する方法は、コリネ型細菌のＰＲＴ 、 ＰＲＡＩ
、 ＩｎＧＰ 、 ＴＳ各遺伝子を有している株よシ
、まず染色体遺伝子を抽出しく例えばＨ，５ａ１ｔｏ
ａｎｄ Ｋ、Ｍｉｕｒａ Ｂｉｏｃｈ＠ｍ。
Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ａｅｔａ７２ｅ６１９．（１９６３）
の方法が使用できる。〕、これを適当な制限酵素で切断
する。ついで、コリネ型細菌細胞内で増殖し得るプラス
ミドベクターに接続し、得られた組換えＤＮＡ ｔ−用
いてコリネ型細菌のＰＲＴ ｅ ＰＲＡＩ 、ＩｎＧＰ
。
の方法が使用できる。〕、これを適当な制限酵素で切断
する。ついで、コリネ型細菌細胞内で増殖し得るプラス
ミドベクターに接続し、得られた組換えＤＮＡ ｔ−用
いてコリネ型細菌のＰＲＴ ｅ ＰＲＡＩ 、ＩｎＧＰ
。
ＴＳ各遺伝子の欠損変異株を形質転換せしめ、ＰＲＴ
。
。
ＰＲＡＩ 、 ＩｎＧＰ 、 ＴＳ生成活性を保有する
にいたった菌株を単離し、これよりＰＲＴ 、 ＰＲＡ
Ｉ 、 ＩｎＣＰ 、 ＴＳ各遺伝子を分離できる。
にいたった菌株を単離し、これよりＰＲＴ 、 ＰＲＡ
Ｉ 、 ＩｎＣＰ 、 ＴＳ各遺伝子を分離できる。
染色体遺伝子を切断するために、切断反応時間等を調節
して切断の程度を調節すれば、巾広い種類の制限酵素が
使用できる。
して切断の程度を調節すれば、巾広い種類の制限酵素が
使用できる。
本発明にて使用されるプラスミドベクターは、コリネ型
細菌細胞内において増殖し得るものであればどのような
ものでも良い。具体的に例示すれば、以下のものがあげ
られる。
細菌細胞内において増殖し得るものであればどのような
ものでも良い。具体的に例示すれば、以下のものがあげ
られる。
（１） ｐＡＭ ３３０ 特開昭５８−６７６９９
参照（２） ｐＡＭ １５１９ ％開昭５８−７７
８９５参照（３） ｐＡＪ ６５５ 特開昭５８−
１９２９００参照（４） ｐＡＪ ６１１
同 上（５） ｐＡＪ １
８４４ 同 上（６） ｐ
ｃｃ １ 特開昭５７−１３４５００参照（７）
ｐｃｃ ２ 特開昭５８−３５１９７参照（８）
ｐＣＧ ４ ％開昭５７−１８３７９９参照（
９） ｐｃｃ １１ 同
上プラスミドベクターＤＮＡの開裂は、当該Ｄ
ＮＡ ｔ’一箇所で切断する制限酵素音用いて切断する
か、複数部位を切断する制限酵素を用いて部分的に切断
することによシ行う。
参照（２） ｐＡＭ １５１９ ％開昭５８−７７
８９５参照（３） ｐＡＪ ６５５ 特開昭５８−
１９２９００参照（４） ｐＡＪ ６１１
同 上（５） ｐＡＪ １
８４４ 同 上（６） ｐ
ｃｃ １ 特開昭５７−１３４５００参照（７）
ｐｃｃ ２ 特開昭５８−３５１９７参照（８）
ｐＣＧ ４ ％開昭５７−１８３７９９参照（
９） ｐｃｃ １１ 同
上プラスミドベクターＤＮＡの開裂は、当該Ｄ
ＮＡ ｔ’一箇所で切断する制限酵素音用いて切断する
か、複数部位を切断する制限酵素を用いて部分的に切断
することによシ行う。
ベクターＤＮＡは染色体遺伝子を切断した際く、用いら
れた制限酵素によシ切断され、または染色体ＤＮＡ切断
フラグメント及び切断されたベクターＤＮＡのそれぞれ
の両端に相補的な塩基配列を有するオリゴヌクレオチド
を接続せしめて、ついでプラスミドベクターと染色体Ｄ
ＮＡフラグメントとのライダージョン反応に付される。
れた制限酵素によシ切断され、または染色体ＤＮＡ切断
フラグメント及び切断されたベクターＤＮＡのそれぞれ
の両端に相補的な塩基配列を有するオリゴヌクレオチド
を接続せしめて、ついでプラスミドベクターと染色体Ｄ
ＮＡフラグメントとのライダージョン反応に付される。
このようにして得られた、染色体ＤＮＡとベクタープラ
スミドとの組換えＤＮＡ ｔ−コリネ型細菌に属する受
容菌へ導入するには、エシェリヒア・コリに−１２につ
因て報告されて騒る様な（ＭａｎｄｅＬＭ、 ａｎｄ
Ｈｌｇａ、Ａ、 、Ｊ、Ｍｏ１． 、 Ｂｉｏｌ、 、
５３ 、１５９（１９７０）受容菌細胞を塩化カルシ
ウムで処理してＤＮＡの透過性を増す方法、またはバチ
ルス・ズブチリスについて報告されている様に（Ｄｕｎ
ｃａｎ＋Ｃ＊Ｈ，、ＷｉｌｓｏｎｚＧ、Ａ、ａｎｄ Ｙ
ｏｕｎｇ＋Ｆ、Ｅ、 ｐＧｅｎｅ 、１ ｅ １５３（
１９７υ〕細胞がＤＮＡ を取シ込み得る様になる増殖
段階（いわゆるコンピテントセル９に導入する方法によ
シ可能である。あるいは、バチルス・ズブチリス、放腺
菌類および酵母について知られてｂる様に（Ｃｈａｎｇ
、 ｓ、 ａｎｄ Ｃｈｏ＠ｎ、 Ｓ、Ｎａ ＊ Ｍｏ
１ｅｃ、Ｇｅｎ、 ｒＧｏｎｅｔ、 、 １６８ 、１
１１ （１９７９） ： Ｂｉｂｂ。
スミドとの組換えＤＮＡ ｔ−コリネ型細菌に属する受
容菌へ導入するには、エシェリヒア・コリに−１２につ
因て報告されて騒る様な（ＭａｎｄｅＬＭ、 ａｎｄ
Ｈｌｇａ、Ａ、 、Ｊ、Ｍｏ１． 、 Ｂｉｏｌ、 、
５３ 、１５９（１９７０）受容菌細胞を塩化カルシ
ウムで処理してＤＮＡの透過性を増す方法、またはバチ
ルス・ズブチリスについて報告されている様に（Ｄｕｎ
ｃａｎ＋Ｃ＊Ｈ，、ＷｉｌｓｏｎｚＧ、Ａ、ａｎｄ Ｙ
ｏｕｎｇ＋Ｆ、Ｅ、 ｐＧｅｎｅ 、１ ｅ １５３（
１９７υ〕細胞がＤＮＡ を取シ込み得る様になる増殖
段階（いわゆるコンピテントセル９に導入する方法によ
シ可能である。あるいは、バチルス・ズブチリス、放腺
菌類および酵母について知られてｂる様に（Ｃｈａｎｇ
、 ｓ、 ａｎｄ Ｃｈｏ＠ｎ、 Ｓ、Ｎａ ＊ Ｍｏ
１ｅｃ、Ｇｅｎ、 ｒＧｏｎｅｔ、 、 １６８ 、１
１１ （１９７９） ： Ｂｉｂｂ。
Ｍ、 Ｊ、 ｒ Ｗａｒｄ＋ Ｊ、 Ｍ、 ａｎｄ Ｈ
ｏｐｗｏｏｃＬ Ｏ，Ａ、 ＋Ｎａｔｕｒｅ ｐ２７４
．３９８（１９７８）：Ｈｌｎｎａｎ、Ａ、。
ｏｐｗｏｏｃＬ Ｏ，Ａ、 ＋Ｎａｔｕｒｅ ｐ２７４
．３９８（１９７８）：Ｈｌｎｎａｎ、Ａ、。
Ｈｉｃｋｓ 、 Ｊ、Ｂ、 ａｎｄ Ｆｌｎｋ ＊ Ｇ
、Ｒ，＊ Ｐｒｏｅ、ＮａｔＬＡａａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳ
Ａ、 ７５ 、１９２９ （１９７８） ）、ＤＮＡ受
容菌を、プラスミドＤＮＡ ’ｉ容易に取り込むプロト
プラストまたはスフェロプラストにしてプラスミドｉ
ＤＮＡ受容菌に導入することも可能である・ プロトプラスト法では上記のバチルス・ズブチリスにお
いて使用されている方法でも充分高い頻度を得ることが
できるし、特開昭５７−１８３７９９に記載されたコリ
ネバクテリウム属またはブレビバクテリウム属のプロト
プラストに／リエチレングリコールまたは？リビニルア
ルコールと二価金属イオンとの存在下にＤＮＡ をとシ
込ませる方法も当然利用できる。ポリエチレングリコー
ルまたは゛ホリヒニルアルコールの代シに、カルボキシ
メチルセルロース、デキストラン、フィコール、プルｏ
＝ツクＦ６８（セルパ社）などの添加によってＤＮＡの
とシ込みを促進させる方法でも同等の結果が得られる。
、Ｒ，＊ Ｐｒｏｅ、ＮａｔＬＡａａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳ
Ａ、 ７５ 、１９２９ （１９７８） ）、ＤＮＡ受
容菌を、プラスミドＤＮＡ ’ｉ容易に取り込むプロト
プラストまたはスフェロプラストにしてプラスミドｉ
ＤＮＡ受容菌に導入することも可能である・ プロトプラスト法では上記のバチルス・ズブチリスにお
いて使用されている方法でも充分高い頻度を得ることが
できるし、特開昭５７−１８３７９９に記載されたコリ
ネバクテリウム属またはブレビバクテリウム属のプロト
プラストに／リエチレングリコールまたは？リビニルア
ルコールと二価金属イオンとの存在下にＤＮＡ をとシ
込ませる方法も当然利用できる。ポリエチレングリコー
ルまたは゛ホリヒニルアルコールの代シに、カルボキシ
メチルセルロース、デキストラン、フィコール、プルｏ
＝ツクＦ６８（セルパ社）などの添加によってＤＮＡの
とシ込みを促進させる方法でも同等の結果が得られる。
Ｌ−１リプトフアン生産菌として、ＰＲＴ 、 ＰＲＡ
Ｉ 。
Ｉ 。
ＩｎＧＰ 、 ＴＳ各欠損株を宿主として形質転換した
株を用いることができるが、以下に示すような宿主を用
いればよりＬ−トリプトファンの生産性が高い菌株が得
られることがある。
株を用いることができるが、以下に示すような宿主を用
いればよりＬ−トリプトファンの生産性が高い菌株が得
られることがある。
即ち、ブレビバクテリウム属の７エニルアラニン、チロ
シンを要求し、５−メチルトリプトファンに耐性を有す
る変異株（１，５ｈｉｌｏ ＃ Ｈ，５ａｔｏ ＊Ｍ、
Ｎａｋａｇａｗａ、 ＋Ａｇｒｉｃ−Ｂｉｏｌ、 Ｃ
ｈｅｍ、 ３６ ｅ ２３１５（１９７２））、ブレビ
バクテリウム属の７エ°ニルアラニア ｋ 要求１．
、ｍ−フルオロフェニルアラニン、５−フルオロトリプ
トファンに耐性ヲ有スる変異株（Ｌ Ｓｈｉ ｉｏ＋Ｓ
−Ｓｕｇｉｍｏｔｏ ｒ Ｍ、 Ｎａｋａｇａｗａ、
。
シンを要求し、５−メチルトリプトファンに耐性を有す
る変異株（１，５ｈｉｌｏ ＃ Ｈ，５ａｔｏ ＊Ｍ、
Ｎａｋａｇａｗａ、 ＋Ａｇｒｉｃ−Ｂｉｏｌ、 Ｃ
ｈｅｍ、 ３６ ｅ ２３１５（１９７２））、ブレビ
バクテリウム属の７エ°ニルアラニア ｋ 要求１．
、ｍ−フルオロフェニルアラニン、５−フルオロトリプ
トファンに耐性ヲ有スる変異株（Ｌ Ｓｈｉ ｉｏ＋Ｓ
−Ｓｕｇｉｍｏｔｏ ｒ Ｍ、 Ｎａｋａｇａｗａ、
。
Ａｇｒ ｉ ｃ、 Ｂ ｉ ｏ １． Ｃｈｅｍ富：、
３９，６２７（１９７５））、ブレビバクテリウム属の
チロシンを要求し、５−フルオロトリプトファン、アゾ
セリンに耐性を有する変異株、コリネバクテリウム属の
フェニルアラニン、チロシンを要求し、５−メチルトリ
プトファン、４−メチルトリプ）・ファン、６−フルオ
ロトリプトファン、トリプトファンヒドロキサメート、
ｐ−フルオロフェニルアラニン、チロシンヒドロキサメ
ート、フェニルアラニンヒｆロキサメートに耐性を有す
る変異株（Ｈ，Ｈａｇｉｎｏ ＋に、Ｎａｋａｙａｎｘ
ａ、 ｍＡｇｒｉｃ、ＢｉｏｌｅＣｈｅｍ−＋３９ ｅ
３４５（１９７５））等がある。
３９，６２７（１９７５））、ブレビバクテリウム属の
チロシンを要求し、５−フルオロトリプトファン、アゾ
セリンに耐性を有する変異株、コリネバクテリウム属の
フェニルアラニン、チロシンを要求し、５−メチルトリ
プトファン、４−メチルトリプ）・ファン、６−フルオ
ロトリプトファン、トリプトファンヒドロキサメート、
ｐ−フルオロフェニルアラニン、チロシンヒドロキサメ
ート、フェニルアラニンヒｆロキサメートに耐性を有す
る変異株（Ｈ，Ｈａｇｉｎｏ ＋に、Ｎａｋａｙａｎｘ
ａ、 ｍＡｇｒｉｃ、ＢｉｏｌｅＣｈｅｍ−＋３９ ｅ
３４５（１９７５））等がある。
このようにして得られたＬ−）リデトファン生産能を有
するコリネ凰細菌を培養してＬ −） ＩＪブトファン
を生成蓄積せしめる方法は、従来コリネ壓細菌忙よるＬ
−トリプトファンの製造のために使用されていた方法と
特に大きく違う点はない。
するコリネ凰細菌を培養してＬ −） ＩＪブトファン
を生成蓄積せしめる方法は、従来コリネ壓細菌忙よるＬ
−トリプトファンの製造のために使用されていた方法と
特に大きく違う点はない。
即ち、培地としては、炭素源、窒素源、無機イオン、更
に必要に応じアミノ酸、ビタミン等の有機微量栄養素を
含有する通常のものである。炭素源トシてハ、グルコー
ス、シェフロース、ラフ） −ス等及びこれら金含有す
る澱粉加水分解液、ホエイ、糖蜜等が用いられる。窒素
源としては、アンモニアガス、アンモニア水、アンモニ
ウム塩ソの他が使用できる。
に必要に応じアミノ酸、ビタミン等の有機微量栄養素を
含有する通常のものである。炭素源トシてハ、グルコー
ス、シェフロース、ラフ） −ス等及びこれら金含有す
る澱粉加水分解液、ホエイ、糖蜜等が用いられる。窒素
源としては、アンモニアガス、アンモニア水、アンモニ
ウム塩ソの他が使用できる。
培養は好気的条件下で一培地の−及び温度を適宜調節し
つつ、実質的にＬ −） ＩＪデトファンの生産蓄積が
停止するまで行なわれる。
つつ、実質的にＬ −） ＩＪデトファンの生産蓄積が
停止するまで行なわれる。
実施例
（１） ＰＲＴ 、 ＰＲＡＩ 、 Ｉｎ−Ｐ 、
ＴＳ各遺伝子を含む染色体ＤＮＡの調製 ブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタムＡＪ １２
０３６ （ＦＩＲＭ−Ｐ７５５９ ）を１！のＣＭＧ培
地（ペプトン１１／ｄｔ、酵母エキス１１１／ｄｌ 、
グルコース０、５１１７ｄｌ、及びＮａＣＡ ０．５１
／ｄｉ ｋ含み、ｐＨ７，２Ｋ調整したもの）に植菌し
、３０℃で約３時間振盪培養を行ない、対数増殖期の菌
体を集めた。
ＴＳ各遺伝子を含む染色体ＤＮＡの調製 ブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタムＡＪ １２
０３６ （ＦＩＲＭ−Ｐ７５５９ ）を１！のＣＭＧ培
地（ペプトン１１／ｄｔ、酵母エキス１１１／ｄｌ 、
グルコース０、５１１７ｄｌ、及びＮａＣＡ ０．５１
／ｄｉ ｋ含み、ｐＨ７，２Ｋ調整したもの）に植菌し
、３０℃で約３時間振盪培養を行ない、対数増殖期の菌
体を集めた。
この菌体ｉ １Ｊゾチーム・ＳＤＳで溶菌させたのち、
通常のフェノール処理法によシ、染色体ＤＮＡ を抽出
精製し、最終的Ｋ ３．５１１１９のＤＮＡを得た。
通常のフェノール処理法によシ、染色体ＤＮＡ を抽出
精製し、最終的Ｋ ３．５１１１９のＤＮＡを得た。
（２）ベクターＤＮＡの調製
ベクターとしてＰＡＪ １８４４ （分子量５．４メガ
ダルトン）を用い、そのＤＮＡ ｅ次の様にして調製し
た。
ダルトン）を用い、そのＤＮＡ ｅ次の様にして調製し
た。
まずｐＡＪ １８４４ ｔ−プラスミドとして保有する
ブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタムＡＪ １２
０３７’ｔ−１００ｄのＣＭＧ培地に接種し、３０℃で
対数増殖期後期まで培養したのち、リゾチームＳＤＳ処
理によシ溶薗させ、３０，０００ＸｆＩ、３０分の超遠
心によシ上清を得た。フェノール処理ののち、２容のエ
タノールを加えてＤＮＡ ｔ−沈澱回収した・これを少
量のＴ１：Ｎ緩衝液（２０ｍＭ ）リス塩酸塩、２０
ｍＭ ＮａＣ１、１ｍＭ ＥＤＴＡ （ｐＨｓ、 Ｏ）
）に溶解後、アガロースゲル電気泳動くかけ分離後、
切シ出してｐＡＪ １８４４プラスミドＤＮＡ約１５μ
Ｉを得た。
ブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタムＡＪ １２
０３７’ｔ−１００ｄのＣＭＧ培地に接種し、３０℃で
対数増殖期後期まで培養したのち、リゾチームＳＤＳ処
理によシ溶薗させ、３０，０００ＸｆＩ、３０分の超遠
心によシ上清を得た。フェノール処理ののち、２容のエ
タノールを加えてＤＮＡ ｔ−沈澱回収した・これを少
量のＴ１：Ｎ緩衝液（２０ｍＭ ）リス塩酸塩、２０
ｍＭ ＮａＣ１、１ｍＭ ＥＤＴＡ （ｐＨｓ、 Ｏ）
）に溶解後、アガロースゲル電気泳動くかけ分離後、
切シ出してｐＡＪ １８４４プラスミドＤＮＡ約１５μ
Ｉを得た。
（３） 染色体ＤＮＡ断片のベクターへの挿入（１）
で得た染色体ＤＮＡ １０μＩと（２）で得たプラスミ
ドＤＮＡ５μＩとを制限エンドヌクレアーゼＰｓｔ Ｉ
でそれぞれｔ−３７℃に１時間保持し、切断した。
で得た染色体ＤＮＡ １０μＩと（２）で得たプラスミ
ドＤＮＡ５μＩとを制限エンドヌクレアーゼＰｓｔ Ｉ
でそれぞれｔ−３７℃に１時間保持し、切断した。
６５℃に１０分間加熱した後、両反応液を混合し、ＡＴ
Ｐ及びジチオスレイトール存在下、Ｔ４７アージ由来の
ＤＮＡリガーゼによって１０℃に２４時間棟持しＤＮＡ
鎖を連結せしめた。ついで反応液ヲ、６５℃にて５分間
加熱し、反応液に２倍容のエタノールを加えて連結され
たＤＮＡの沈澱を採取した。
Ｐ及びジチオスレイトール存在下、Ｔ４７アージ由来の
ＤＮＡリガーゼによって１０℃に２４時間棟持しＤＮＡ
鎖を連結せしめた。ついで反応液ヲ、６５℃にて５分間
加熱し、反応液に２倍容のエタノールを加えて連結され
たＤＮＡの沈澱を採取した。
（４） コロニーバンクの作成
アントラニル酸シンターゼが欠損したブレビバクテリウ
ム・ラクトフェルメンタムＡｓ ６０ （ブレビバクテ
リウム・ラクトフェルメンタムＡＪ １２０３６ｔ−親
株として、Ｎ−メチル−Ｎ−ニトロ−Ｎ−ニトロソグア
ニジンによシ変異処理することによシ、アントラニル酸
を生育に要求する変異株として選択した。〕を受容菌と
して用いた。
ム・ラクトフェルメンタムＡｓ ６０ （ブレビバクテ
リウム・ラクトフェルメンタムＡＪ １２０３６ｔ−親
株として、Ｎ−メチル−Ｎ−ニトロ−Ｎ−ニトロソグア
ニジンによシ変異処理することによシ、アントラニル酸
を生育に要求する変異株として選択した。〕を受容菌と
して用いた。
形質転換の方法としては、デロトデラストトランスフォ
ーメーシｌン法を用いた。まず、菌株を５ｄのＣＭＧ液
体培地で対数増殖期の初期まで培養し、ペニシリンＧヲ
０゜６ユニ、ト／ｄ添加後、さらに１．５時間振盪培養
し、遠心分離によシ菌体を集め、菌体を０．５Ｍシェー
クロース、２０ｍＭマレイン酸、２０ｍＭ塩化ｉグネシ
ウム、３．５４ペナツセイプロス（Ｄｌｆｃｏ）からな
るＳＭＭＰ培地（ｐＨ６，５）０．５ ｍＪで洗浄した
。次いで１０−のりゾチームを含むＳＭＭＰ培地に懸濁
し３０℃で２０時間プロトプラスト化を図った。６００
０ｘｌ １０分間遠心分離後、プロトプラスト’ｉ Ｓ
ＭＭＰで洗浄し０．５ｄのＳＭＭＰに再度懸濁した。こ
の様にして得られたプロトプラストと（３）で調製した
ＤＮＡ １０μ１１を５ ｍＭＥＤＴＡ存在下で混合し
、ポリエチレングリコールを最終濃度が３０１になる様
に添加した後、ＤＮＡをプロトプラストに取シ込ませる
ために室温に２分間放置した。このプロトプラストをＳ
ＭＭＰ培地１ゴで洗浄後、ＳＭＭＰ培地１−に再懸濁し
、形質発現のため、３０℃で２時間培養した。この培養
液ｔ−ｐＨ７、０のプロトプラスト再生培地上に塗布し
た。プロトプラスト再生培地は蒸留水１！あ之りトリス
（ヒＰロキシメチル）アミノメタン１２ＩＩ％ＫＣｌ０
．５ Ｉｉ、グルコース１０ 、Ｉｆ 、 ＭｇＣｌ２
・６Ｈ２０８，Ｉ Ｎ 。
ーメーシｌン法を用いた。まず、菌株を５ｄのＣＭＧ液
体培地で対数増殖期の初期まで培養し、ペニシリンＧヲ
０゜６ユニ、ト／ｄ添加後、さらに１．５時間振盪培養
し、遠心分離によシ菌体を集め、菌体を０．５Ｍシェー
クロース、２０ｍＭマレイン酸、２０ｍＭ塩化ｉグネシ
ウム、３．５４ペナツセイプロス（Ｄｌｆｃｏ）からな
るＳＭＭＰ培地（ｐＨ６，５）０．５ ｍＪで洗浄した
。次いで１０−のりゾチームを含むＳＭＭＰ培地に懸濁
し３０℃で２０時間プロトプラスト化を図った。６００
０ｘｌ １０分間遠心分離後、プロトプラスト’ｉ Ｓ
ＭＭＰで洗浄し０．５ｄのＳＭＭＰに再度懸濁した。こ
の様にして得られたプロトプラストと（３）で調製した
ＤＮＡ １０μ１１を５ ｍＭＥＤＴＡ存在下で混合し
、ポリエチレングリコールを最終濃度が３０１になる様
に添加した後、ＤＮＡをプロトプラストに取シ込ませる
ために室温に２分間放置した。このプロトプラストをＳ
ＭＭＰ培地１ゴで洗浄後、ＳＭＭＰ培地１−に再懸濁し
、形質発現のため、３０℃で２時間培養した。この培養
液ｔ−ｐＨ７、０のプロトプラスト再生培地上に塗布し
た。プロトプラスト再生培地は蒸留水１！あ之りトリス
（ヒＰロキシメチル）アミノメタン１２ＩＩ％ＫＣｌ０
．５ Ｉｉ、グルコース１０ 、Ｉｆ 、 ＭｇＣｌ２
・６Ｈ２０８，Ｉ Ｎ 。
ＣＡＣＬ２’２Ｈ２０２，２１、ペプトン４Ｉ、粉末酵
母エキス４Ｊ’、カブミノ酸（Ｄｌｆｃｏ社） 、１
、Ｆ 、 Ｋ２ＨＰＯ４０，２１コハク酸ナトリウム１
３５１Ｉ、寒天８１Ｉ及ヒクロラムフエニコール３μｐ
Ｈｔ−含ｔｒ。
母エキス４Ｊ’、カブミノ酸（Ｄｌｆｃｏ社） 、１
、Ｆ 、 Ｋ２ＨＰＯ４０，２１コハク酸ナトリウム１
３５１Ｉ、寒天８１Ｉ及ヒクロラムフエニコール３μｐ
Ｈｔ−含ｔｒ。
３０℃で２週間培養後、５０°ｏｏｏ個のクロラムフェ
ニコール耐性コロニーが出現してきたのでこれ全全てか
きあつめ、：口二一パンクを作成した。
ニコール耐性コロニーが出現してきたのでこれ全全てか
きあつめ、：口二一パンクを作成した。
（５）トリプトファン生合成系遺伝子が増幅されたクロ
ーンの選択 コロニーバンクを適当に希釈したもの（約１０３〜１０
２乙ｄ）とアンピシリン耐性のプラスミドｐＵＣ８を有
する大腸菌の生育にトリプトファンを要求する変異株を
最少培地（２チグルコース、１チ硫酸アンモニウム、０
．３％尿素、０．１％リン酸二水素カリウム、０．０４
硫酸マグネシウム７水塩、２ｐｐｍ鉄イオン、２ ｐｐ
ｍマンガンイオン、２００μｍ１／Ｊサイアミン塩酸塩
、５０μＩ／Ｊビオチン、１０μｍ／／ｒｔｔｌクロラ
ムフェニコール、１００μｉ／Ｍｌアンピシリン、３チ
カデミノ酸（Ｄｉｆｃｏ社製ン、１００ ｍ９／Ｚアン
トラニル酸、ｐ）１７． Ｏ、寒天１．８チ）上に塗布
した。
ーンの選択 コロニーバンクを適当に希釈したもの（約１０３〜１０
２乙ｄ）とアンピシリン耐性のプラスミドｐＵＣ８を有
する大腸菌の生育にトリプトファンを要求する変異株を
最少培地（２チグルコース、１チ硫酸アンモニウム、０
．３％尿素、０．１％リン酸二水素カリウム、０．０４
硫酸マグネシウム７水塩、２ｐｐｍ鉄イオン、２ ｐｐ
ｍマンガンイオン、２００μｍ１／Ｊサイアミン塩酸塩
、５０μＩ／Ｊビオチン、１０μｍ／／ｒｔｔｌクロラ
ムフェニコール、１００μｉ／Ｍｌアンピシリン、３チ
カデミノ酸（Ｄｉｆｃｏ社製ン、１００ ｍ９／Ｚアン
トラニル酸、ｐ）１７． Ｏ、寒天１．８チ）上に塗布
した。
トリプトファン生合成系遺伝子が増幅され、トリプトフ
ァンが蓄積するようになった形質転換株の周辺には、ト
リプトファン要求性の大腸菌が増殖する。すると大腸菌
が保持しているプラスミドｐｔｙｃ ８にコードされる
β−ラクタマーゼによシ培地中のアンピシリンが分解さ
れ、形質転換株はさらに増殖し、コロニーを作る。一方
、トリプトファンを蓄積しない形質転換株は、その周辺
に大腸菌を増殖させない。したがってアンピシリンが分
解されないので、増殖できず、コロニーを形成しない。
ァンが蓄積するようになった形質転換株の周辺には、ト
リプトファン要求性の大腸菌が増殖する。すると大腸菌
が保持しているプラスミドｐｔｙｃ ８にコードされる
β−ラクタマーゼによシ培地中のアンピシリンが分解さ
れ、形質転換株はさらに増殖し、コロニーを作る。一方
、トリプトファンを蓄積しない形質転換株は、その周辺
に大腸菌を増殖させない。したがってアンピシリンが分
解されないので、増殖できず、コロニーを形成しない。
このような考え全もと九大腸菌とコロニーパンクを適当
に希釈したものとを混合して最少培地に塗布し、３０℃
にて４日間培養した。周囲に大腸菌が増殖しているコロ
ニーを釣シ上げ、単コロニー分離し、（２）で用いた方
法によシブラスミドを分離した。本プラスミド’ｊｉ
ｐＡＪ ２３４と名付けた。
に希釈したものとを混合して最少培地に塗布し、３０℃
にて４日間培養した。周囲に大腸菌が増殖しているコロ
ニーを釣シ上げ、単コロニー分離し、（２）で用いた方
法によシブラスミドを分離した。本プラスミド’ｊｉ
ｐＡＪ ２３４と名付けた。
ｐＡＪ ２３４は明らかにベクタープラスミドｐＡＪｉ
８４４よりも大きく、トリプトファン生合成系遺伝子が
挿入されていると考えられた。
８４４よりも大きく、トリプトファン生合成系遺伝子が
挿入されていると考えられた。
（６） ｐＡＪ ２３４が有するトリプトファン生合
成系遺伝子の同定 ６−１． ＰＲＴ 、 ＴＳ各遺伝子の同定ＰＲＴ遺伝
子、ＴＳＡサブユニット遺伝子（以下ＴＳＡ遺伝子と記
す）、ＴＳＢサブユニット遺伝子（以下ＴＳＢ遺伝子と
記す）が欠損した各菌株ブレビバクテリウム・ラクトフ
ェルメンタムＴ１３（ＮＲＲＬＢ−１５３４Ｔ）、ブレ
ビバクテリウム・ラクトフェルメンタム煮２１、ブレビ
バクテリウム・ラクトフェルメンタムＢ５、ｐＡＪ２３
４ｔ−（４）で述べた方法を用いて形質転換した。３０
℃にて１週間再生培地にて培養後生じたクロラムフェニ
コール耐性コロニーのうちそれぞれ１０個を釣シ上げト
リプトファン要求性をテストし九ところ、これらいずれ
もが要求性を消失しておシ、上記組換えプラスミド上に
ＰＲＴ遺伝子、ＴＳＡ遺伝子、ＴＳＢ遺伝子が存在する
ことが明らかになった。
成系遺伝子の同定 ６−１． ＰＲＴ 、 ＴＳ各遺伝子の同定ＰＲＴ遺伝
子、ＴＳＡサブユニット遺伝子（以下ＴＳＡ遺伝子と記
す）、ＴＳＢサブユニット遺伝子（以下ＴＳＢ遺伝子と
記す）が欠損した各菌株ブレビバクテリウム・ラクトフ
ェルメンタムＴ１３（ＮＲＲＬＢ−１５３４Ｔ）、ブレ
ビバクテリウム・ラクトフェルメンタム煮２１、ブレビ
バクテリウム・ラクトフェルメンタムＢ５、ｐＡＪ２３
４ｔ−（４）で述べた方法を用いて形質転換した。３０
℃にて１週間再生培地にて培養後生じたクロラムフェニ
コール耐性コロニーのうちそれぞれ１０個を釣シ上げト
リプトファン要求性をテストし九ところ、これらいずれ
もが要求性を消失しておシ、上記組換えプラスミド上に
ＰＲＴ遺伝子、ＴＳＡ遺伝子、ＴＳＢ遺伝子が存在する
ことが明らかになった。
６−２．ＰＲＡＩ 、 ＩｎＧＰ各遺伝子の同定大腸菌
ｔｒｐＣ欠損株ＣＧＳＣＡ ５８８９ （ｔｒｐＣ６０
゜ｐｙｒＦ ２８７ 、 ｈｉｓＧ １ ＃ １ａｃＺ
’５３ ＊ ｒｐｓＬ ８ ＋λ″″）にｐＡＪ ２３
４を導入した。ＤＮＡ受容菌細胞を塩化カルシウムで処
理してＤＮＡの透過性を増す方法を用いてｐＡＪ ２３
４ ’ｔ”形質転換し、生じたクロラムフェニルコール
耐生コロニーのうちそれぞれ１０個を釣り上げトリプト
ファン要求性を調べた。いずれもが要求性全消失してお
シ、上記組換えプラスミド上にＰＲＡＩ 、 ＩｎＧＰ
遺伝子が存在することが明らかとなった。
ｔｒｐＣ欠損株ＣＧＳＣＡ ５８８９ （ｔｒｐＣ６０
゜ｐｙｒＦ ２８７ 、 ｈｉｓＧ １ ＃ １ａｃＺ
’５３ ＊ ｒｐｓＬ ８ ＋λ″″）にｐＡＪ ２３
４を導入した。ＤＮＡ受容菌細胞を塩化カルシウムで処
理してＤＮＡの透過性を増す方法を用いてｐＡＪ ２３
４ ’ｔ”形質転換し、生じたクロラムフェニルコール
耐生コロニーのうちそれぞれ１０個を釣り上げトリプト
ファン要求性を調べた。いずれもが要求性全消失してお
シ、上記組換えプラスミド上にＰＲＡＩ 、 ＩｎＧＰ
遺伝子が存在することが明らかとなった。
（７）形質転換株のトリプトファン生産能上記ｆ） ｐ
ＡＪ ２３４ ｉ用い、ｍ−フルオロフェニルアラニン
及び５−フルオロトリプトファン耐性株ブレビバクテリ
ウム・ラクトフェルメンタムＭ２４７ｔ−（４）で述べ
た方法によシ形質転換し、クロラムフトファン生産能を
調べたところ第嘗表に示す結果を得た。
ＡＪ ２３４ ｉ用い、ｍ−フルオロフェニルアラニン
及び５−フルオロトリプトファン耐性株ブレビバクテリ
ウム・ラクトフェルメンタムＭ２４７ｔ−（４）で述べ
た方法によシ形質転換し、クロラムフトファン生産能を
調べたところ第嘗表に示す結果を得た。
培養はトリブトファン生産培地（グルコース１３０ Ｉ
Ｉ、 （ＮＨ４）２Ｓｏ４２５ Ｊ、 ７マル酸１２１
１酢’ｅＬ ３ ｍｌ 、 ＫＨ２Ｐ０．１１ 、 Ｍ
ｎ３Ｏ４”７Ｈ２０１０ｍｌ ｅＭｇＳ０４・７Ｈ２０
１Ｊ 、 ｄ−ビオチン５０ｉｔ１．サイアミン塩酸塩
２０００ ｔｔｌ 、メチオニｙ ４００ ｔｔｕｉ、
チロシン６５０７９、大豆蛋白酸加水分解液「味液」５
０ ｍｊ −ＣａＣＯ５５０１ｔ−水ＩＪに含む、ｐＨ
６，５゜）２０ｄｔ−５００，ｗｊの坂ロフラスコに入
れたものに被検菌株を植えつけ、３０℃にて７２時間、
振盪下に行なった。培養後、遠心上清中のＬ −） Ｉ
Ｊデトファンをロイコノストックφメセントロイデス（
Ｌ＠ｕｃｏｎｏａｔｏｃ ｍ＠５ｅｎｔｓｒｏｉｄｅｓ
） ＡＴＣＣ８０４２ｆ定量菌株として用いるバイオア
ッセイ法によって求めた。
Ｉ、 （ＮＨ４）２Ｓｏ４２５ Ｊ、 ７マル酸１２１
１酢’ｅＬ ３ ｍｌ 、 ＫＨ２Ｐ０．１１ 、 Ｍ
ｎ３Ｏ４”７Ｈ２０１０ｍｌ ｅＭｇＳ０４・７Ｈ２０
１Ｊ 、 ｄ−ビオチン５０ｉｔ１．サイアミン塩酸塩
２０００ ｔｔｌ 、メチオニｙ ４００ ｔｔｕｉ、
チロシン６５０７９、大豆蛋白酸加水分解液「味液」５
０ ｍｊ −ＣａＣＯ５５０１ｔ−水ＩＪに含む、ｐＨ
６，５゜）２０ｄｔ−５００，ｗｊの坂ロフラスコに入
れたものに被検菌株を植えつけ、３０℃にて７２時間、
振盪下に行なった。培養後、遠心上清中のＬ −） Ｉ
Ｊデトファンをロイコノストックφメセントロイデス（
Ｌ＠ｕｃｏｎｏａｔｏｃ ｍ＠５ｅｎｔｓｒｏｉｄｅｓ
） ＡＴＣＣ８０４２ｆ定量菌株として用いるバイオア
ッセイ法によって求めた。
尚、Ｍ ２４７ ｔ−得るためには寄託されたＡＪ １
２１９５よシ宿主細胞を損うことなく宿主細胞中の複合
プラスミドを除去することが可能である。即ち、プラス
ミドは宿主よシ自然に失表われることもあるし′、「除
去」操作によって除くこともできる他の除去操作の例は
以下の通シである。ＡＪ １２１９５ｔ−ＣＭＧ“液体
培地に接種し、３７℃で一晩培養（高温処理）後、培養
液を適当に希釈し、クロラムフェニコールを含有し又は
含有しないＣＭＧ寒天培地に塗布し・３０℃で１〜３日
間培養する。かくしてクロラムフェニコール感受性株と
して分離される株がＭ２４７である。
２１９５よシ宿主細胞を損うことなく宿主細胞中の複合
プラスミドを除去することが可能である。即ち、プラス
ミドは宿主よシ自然に失表われることもあるし′、「除
去」操作によって除くこともできる他の除去操作の例は
以下の通シである。ＡＪ １２１９５ｔ−ＣＭＧ“液体
培地に接種し、３７℃で一晩培養（高温処理）後、培養
液を適当に希釈し、クロラムフェニコールを含有し又は
含有しないＣＭＧ寒天培地に塗布し・３０℃で１〜３日
間培養する。かくしてクロラムフェニコール感受性株と
して分離される株がＭ２４７である。
Claims (2)
- （１）コリネ型細菌細胞内で発現し、少くともアントラ
ニル酸ホスホリボシルトランスフェラーゼ、Ｎ−（５′
−ホスホリボシル）アントラニル酸イソメラーゼ、イン
ドール３−グリセロールリン酸シンターゼ及びトリプト
ファンシンターゼをコードする遺伝子がコリネ型細菌細
胞内で増殖しうるプラスミドベクターに接続されている
組換えＤＮＡを有するコリネ型細菌。 - （２）コリネ型細菌細胞内で発現し、少くともアントラ
ニル酸ホスホリボシルトランスフェラーゼ、Ｎ−（５′
−ホスホリボシル）アントラニル酸イソメラーゼ、イン
ドール３−グリセロールリン酸シンターゼ及びトリプト
ファンシンターゼをコードする遺伝子がコリネ型細菌細
胞内で増殖しうるプラスミドベクターに接続されている
組換えＤＮＡを有するコリネ型細菌を培養することを特
徴とするＬ−トリプトファンの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59277235A JPS61149082A (ja) | 1984-12-25 | 1984-12-25 | 発酵法によるｌ―トリプトファンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59277235A JPS61149082A (ja) | 1984-12-25 | 1984-12-25 | 発酵法によるｌ―トリプトファンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61149082A true JPS61149082A (ja) | 1986-07-07 |
| JPH055479B2 JPH055479B2 (ja) | 1993-01-22 |
Family
ID=17580698
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59277235A Granted JPS61149082A (ja) | 1984-12-25 | 1984-12-25 | 発酵法によるｌ―トリプトファンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61149082A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01265892A (ja) * | 1988-04-18 | 1989-10-23 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | Ｌ−トリプトファンの製造法 |
| JPH0242988A (ja) * | 1988-08-03 | 1990-02-13 | Ajinomoto Co Inc | 組換えｄｎａ、該組換えｄｎａを有する微生物及び該微生物を用いるｌ−アミノ酸の製造法 |
| EP0401735A1 (en) | 1989-06-06 | 1990-12-12 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Process for producing -L-tryptophan |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS59156292A (ja) * | 1983-02-17 | 1984-09-05 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | トリプトフアンの製造法 |
| JPS59196098A (ja) * | 1983-04-23 | 1984-11-07 | Ajinomoto Co Inc | 発酵法によるｌ−トリプトフアンの製造法 |
-
1984
- 1984-12-25 JP JP59277235A patent/JPS61149082A/ja active Granted
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS59156292A (ja) * | 1983-02-17 | 1984-09-05 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | トリプトフアンの製造法 |
| JPS59196098A (ja) * | 1983-04-23 | 1984-11-07 | Ajinomoto Co Inc | 発酵法によるｌ−トリプトフアンの製造法 |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01265892A (ja) * | 1988-04-18 | 1989-10-23 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | Ｌ−トリプトファンの製造法 |
| EP0338474A2 (en) * | 1988-04-18 | 1989-10-25 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Process for producing L-tryptophan |
| US5563052A (en) * | 1988-04-18 | 1996-10-08 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd | Process for producing L-tryptophan |
| JPH0242988A (ja) * | 1988-08-03 | 1990-02-13 | Ajinomoto Co Inc | 組換えｄｎａ、該組換えｄｎａを有する微生物及び該微生物を用いるｌ−アミノ酸の製造法 |
| EP0401735A1 (en) | 1989-06-06 | 1990-12-12 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Process for producing -L-tryptophan |
| US5407824A (en) * | 1989-06-06 | 1995-04-18 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Recombinant coryneform bacterium for producing L-tryptophan |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH055479B2 (ja) | 1993-01-22 |
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