JPS61112093A - ヌクレオチド誘導体 - Google Patents
ヌクレオチド誘導体Info
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- JPS61112093A JPS61112093A JP59232941A JP23294184A JPS61112093A JP S61112093 A JPS61112093 A JP S61112093A JP 59232941 A JP59232941 A JP 59232941A JP 23294184 A JP23294184 A JP 23294184A JP S61112093 A JPS61112093 A JP S61112093A
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
- C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
- C07H19/06—Pyrimidine radicals
- C07H19/10—Pyrimidine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、新規ヌクレオチド誘導体に関する。
さらに具体的には、本発明は、デオキシゾチ、ジンの３
１−リン酸延長上にアルキレン基を介して一級アミノ基
を導入し、かつシトシンのアミノ基にスペーサーを介し
て押体と結合させたヌクレオチド誘導体に関するもので
ある。
１−リン酸延長上にアルキレン基を介して一級アミノ基
を導入し、かつシトシンのアミノ基にスペーサーを介し
て押体と結合させたヌクレオチド誘導体に関するもので
ある。
先行技術
本発明者らは、先に５１−末端にアミノアルキル基を導
入したオリゴヌクレオチド誘導体（以下、５１−末端ア
ミン化オリゴヌクレオチドという）およびその製造法に
ついて提案した（特開昭５９−９３０９８号、同５９−
９３０９９号および同５９−９３１００号各公報）。こ
の５′−末端アミノ化オリゴヌクレオチドは導入された
アミノ基を介して種々の標識物質や担体との結合が可能
である。
入したオリゴヌクレオチド誘導体（以下、５１−末端ア
ミン化オリゴヌクレオチドという）およびその製造法に
ついて提案した（特開昭５９−９３０９８号、同５９−
９３０９９号および同５９−９３１００号各公報）。こ
の５′−末端アミノ化オリゴヌクレオチドは導入された
アミノ基を介して種々の標識物質や担体との結合が可能
である。
この場合の標識物質としてはビオチン、２．４−ジニト
ロベンゼン、蛍光物ｆｆ （ローダミン、フルオレセイ
ンなど）、酵素タンパク（ワサビパーオキシダーゼ、ア
ルカリフォスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ）およ
び金属タンパク（フェリチンなど）などが考えられる。
ロベンゼン、蛍光物ｆｆ （ローダミン、フルオレセイ
ンなど）、酵素タンパク（ワサビパーオキシダーゼ、ア
ルカリフォスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ）およ
び金属タンパク（フェリチンなど）などが考えられる。
このうち、ビオチンおよび２，４−ジニトロベンゼンに
関し、これらを結合したオリゴヌクレオチド誘導体およ
びその製造法について本発明者らは既に提案している（
特開昭５９−１４８７９８号公報および特願昭５８−７
５８７８号）。また、担体としてはセファロースなどが
考えられるが、担体を結合させたオリゴヌクレオチド誘
導体（以下固定化ヌクレオチドという）およびその製造
法についても本発明者らによって既に提案済みである（
特開昭５９−２７９００号公報）。
関し、これらを結合したオリゴヌクレオチド誘導体およ
びその製造法について本発明者らは既に提案している（
特開昭５９−１４８７９８号公報および特願昭５８−７
５８７８号）。また、担体としてはセファロースなどが
考えられるが、担体を結合させたオリゴヌクレオチド誘
導体（以下固定化ヌクレオチドという）およびその製造
法についても本発明者らによって既に提案済みである（
特開昭５９−２７９００号公報）。
固定化ヌクレオチドの用途としては、一般的な−Ａの単
離、精製、特異的な塩基配列をもつｍＲＮＡの単離（Ｊ
、 Ｂｉｏｃｈｅｍ、 、 ８！ｊ９４１（１９７７）
］、二本鎖ＤＮＡの分離、一本領ＤＮＡの単離精製、
長鎖オリゴヌクレオチドの合成および核酸関連酵素の単
離精製などが考えられる。
離、精製、特異的な塩基配列をもつｍＲＮＡの単離（Ｊ
、 Ｂｉｏｃｈｅｍ、 、 ８！ｊ９４１（１９７７）
］、二本鎖ＤＮＡの分離、一本領ＤＮＡの単離精製、
長鎖オリゴヌクレオチドの合成および核酸関連酵素の単
離精製などが考えられる。
また、ビオチンや２，４−ジニトロベンゼンなどの＆ｐ
−識物質を結合したオリゴヌクレオチド誘導体は、非放
射性アフイニテイブロープとして標的遺伝子の検出、核
酸結合性タンパクの検出などに供され、ビオチン−アビ
ジン法（ＤＮＡ、 ３．２６９−２７７（１９８４）、
Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃ１ｄｓ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ、 ５
．３６３−３８４（１９７１１１）など〕、酵素免疫法
［Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａ、ｃｉｄｓＲｅｓｅａｒｃｈ、
１０ 、６７８９−６７９６（１９８２）など〕、蛍光
抗体法（Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃ１ｄｓ Ｒｅ５ｅａｒｃ
ｈ、 １２．１７９１−１８１０（１９８４１など〕、
電子顕微＃ｍ（上記Ｎｕｃｌｅｉｃムｃｉｄｓ Ｒｅ５
ｅａｒｃｈなど〕などに利用されろ。〔ＢＩＯ匹ＤＩｃ
！ＡＬ ＢＯ８ＩＮＫＳＥＩ ＩＮＴＲＲＩＩＡＴＩＯ
ＮＡＬ、 ７ 、７８〜７９（１９８４）、Ｎａｔｕｒ
ｅ、 ３０６．５９４１（１９８３）、ＤＮＡ、２゜７
２（１９８３）など〕。
−識物質を結合したオリゴヌクレオチド誘導体は、非放
射性アフイニテイブロープとして標的遺伝子の検出、核
酸結合性タンパクの検出などに供され、ビオチン−アビ
ジン法（ＤＮＡ、 ３．２６９−２７７（１９８４）、
Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃ１ｄｓ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ、 ５
．３６３−３８４（１９７１１１）など〕、酵素免疫法
［Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａ、ｃｉｄｓＲｅｓｅａｒｃｈ、
１０ 、６７８９−６７９６（１９８２）など〕、蛍光
抗体法（Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃ１ｄｓ Ｒｅ５ｅａｒｃ
ｈ、 １２．１７９１−１８１０（１９８４１など〕、
電子顕微＃ｍ（上記Ｎｕｃｌｅｉｃムｃｉｄｓ Ｒｅ５
ｅａｒｃｈなど〕などに利用されろ。〔ＢＩＯ匹ＤＩｃ
！ＡＬ ＢＯ８ＩＮＫＳＥＩ ＩＮＴＲＲＩＩＡＴＩＯ
ＮＡＬ、 ７ 、７８〜７９（１９８４）、Ｎａｔｕｒ
ｅ、 ３０６．５９４１（１９８３）、ＤＮＡ、２゜７
２（１９８３）など〕。
このようにオリゴヌクレオチドおよびその誘導体は潜在
的利用価値が非常に大きい（雑誌 「 ［
ＢＩＯＴＥｃｉＯＬＯｏＹＪ ＡＵＧＯ８Ｔ （１９８
３） ＮＡＴＯＲＦ、 ＰＯＢＬＩＳＨＩＮＩ００ＭＰ
ＡＮＹ刊）ところから、そσ】合成手段の確立および新
規な誘導体の遺戒が望まれているところである。
的利用価値が非常に大きい（雑誌 「 ［
ＢＩＯＴＥｃｉＯＬＯｏＹＪ ＡＵＧＯ８Ｔ （１９８
３） ＮＡＴＯＲＦ、 ＰＯＢＬＩＳＨＩＮＩ００ＭＰ
ＡＮＹ刊）ところから、そσ】合成手段の確立および新
規な誘導体の遺戒が望まれているところである。
そこで本発明者らは、上記５′−末端アミノ化オリゴヌ
クレオチドに続き ３１−末端にアミノアルキル基を導
入したオリゴヌクレオチド誘導体（以下、デー末端アミ
ノ化オリゴヌクレオチドという）についても提案を行っ
た（特願昭５９−２２４７４号、同５９−２２４７５号
各明細書参照）。この３１−末端アミノ化オリゴヌクレ
オチドは、上記５１−末端アミノ化オリゴヌクレオチド
と同様に種々の用途が考えられ、また対をなす化合物と
して５１−末端アミノ化オリゴヌクレオチドと組み合せ
て利用することも可能である。しかしながら、この３１
−末端アミノ化オリゴヌクレオチドは液相法でしか合成
できなかったため、下記のような問題点を抱えていた。
クレオチドに続き ３１−末端にアミノアルキル基を導
入したオリゴヌクレオチド誘導体（以下、デー末端アミ
ノ化オリゴヌクレオチドという）についても提案を行っ
た（特願昭５９−２２４７４号、同５９−２２４７５号
各明細書参照）。この３１−末端アミノ化オリゴヌクレ
オチドは、上記５１−末端アミノ化オリゴヌクレオチド
と同様に種々の用途が考えられ、また対をなす化合物と
して５１−末端アミノ化オリゴヌクレオチドと組み合せ
て利用することも可能である。しかしながら、この３１
−末端アミノ化オリゴヌクレオチドは液相法でしか合成
できなかったため、下記のような問題点を抱えていた。
（＋） 反応スケールが大きくなる。
（２） オリゴヌクレオチド合成の各段階（脱保護、
縮合なと）において中間体の精製が必要であり、そのう
えオリゴヌクレオチドの合成操作に熟練も必要である。
縮合なと）において中間体の精製が必要であり、そのう
えオリゴヌクレオチドの合成操作に熟練も必要である。
その結果、合成時間、労力がかかる。
従って、これらの諸問題を解決する方法の開発が望まれ
ているところであった。
ているところであった。
発明の概要
要旨
本発明は上記問題点に解決を与えろことを目的とし、３
１−末端アミノ化オリゴヌクレオチド合成に際して有用
な出発化合物を提供し、さらに本化合物を利用して該化
合物を製造する方法をも提供することにより本目的を達
成するもＬｆｌであ４）。
１−末端アミノ化オリゴヌクレオチド合成に際して有用
な出発化合物を提供し、さらに本化合物を利用して該化
合物を製造する方法をも提供することにより本目的を達
成するもＬｆｌであ４）。
したかって本発明によるヌクレオチド誘導体は、下式（
ＩＶＩで示されるものであ之・こと、を特徴とするもの
である。
ＩＶＩで示されるものであ之・こと、を特徴とするもの
である。
０ ｆｉ Ｐ −Ｙ −（ＣＨ２）。−ＮＨ−Ｒ２占Ｒ
０ 〔ただし、ｍおよびｎはそれぞれ自然数であり、Ｒｏは
リン酸基の保護基であり Ｒ１は水素、または５“水酸
基の保護基であり、Ｒ２は水素、またはアミノ基の保護
基であり Ｒ３はアばノ基を官能基として具備する担体
であり、Ｙは酸素原子（−〇−）またはイミノ基（−Ｎ
）１−）である。〕効果 本発明によるヌクレオチド誘導体は、デオキシンチジン
のアミン基延長上にスペーサーを介して担体と結合させ
ているので、３１−末端アミノ化オリゴヌクレオチドを
固相法により合成するための出発物質、すなわち樹脂（
ここで樹脂は担体に過ぎないが、樹脂に担持された本発
明の化合物は外観的には樹脂そのものと変らないので樹
脂に担持された化合物を以下において単に「樹脂」と呼
ぶことがある）として使用することができる。従って、
本発明の化合物を用いて３１−アミノアルキル化オリゴ
ヌクレオチドを合成するに際しては下記のような効果六
−得られる。
０ 〔ただし、ｍおよびｎはそれぞれ自然数であり、Ｒｏは
リン酸基の保護基であり Ｒ１は水素、または５“水酸
基の保護基であり、Ｒ２は水素、またはアミノ基の保護
基であり Ｒ３はアばノ基を官能基として具備する担体
であり、Ｙは酸素原子（−〇−）またはイミノ基（−Ｎ
）１−）である。〕効果 本発明によるヌクレオチド誘導体は、デオキシンチジン
のアミン基延長上にスペーサーを介して担体と結合させ
ているので、３１−末端アミノ化オリゴヌクレオチドを
固相法により合成するための出発物質、すなわち樹脂（
ここで樹脂は担体に過ぎないが、樹脂に担持された本発
明の化合物は外観的には樹脂そのものと変らないので樹
脂に担持された化合物を以下において単に「樹脂」と呼
ぶことがある）として使用することができる。従って、
本発明の化合物を用いて３１−アミノアルキル化オリゴ
ヌクレオチドを合成するに際しては下記のような効果六
−得られる。
（１）反応スケールを小さくすることができるので経済
的である。すなわち非放射性アフイニテイプロープなど
に利用されるオリゴヌクレオチドは微量（数マイクログ
ラム穆度）で十分であるので、反応スケールを小さくす
ることＫよって無駄がなくなる。
的である。すなわち非放射性アフイニテイプロープなど
に利用されるオリゴヌクレオチドは微量（数マイクログ
ラム穆度）で十分であるので、反応スケールを小さくす
ることＫよって無駄がなくなる。
（２）オリゴヌクレオチドの各合成段階で中間体の精製
の必要がないため合成操作が簡単であり、また、合成操
作に熟練の必要もない。従って、短時間で３１−末端ア
ミン化オリゴヌクレオチドが合成可能であって、省力化
、コスト低減かできる。
の必要がないため合成操作が簡単であり、また、合成操
作に熟練の必要もない。従って、短時間で３１−末端ア
ミン化オリゴヌクレオチドが合成可能であって、省力化
、コスト低減かできる。
なお、このような樹脂によれば、それを固体支持体とす
る固相法オリゴヌクレオチド合成が可能であって、その
ような可能性が得られることも本発明の効果の一つであ
る。この場合のオリゴヌクレオチドの合成は操作が簡単
なので、自動化（機械化）も可能であろう。
［本発明によるヌクレオチ
ド誘導体は、前記の式〔ＩＶ〕で示されるものである（
以下、このヌクレオチド誘導体を化合物〔Ｗ〕という）
。
る固相法オリゴヌクレオチド合成が可能であって、その
ような可能性が得られることも本発明の効果の一つであ
る。この場合のオリゴヌクレオチドの合成は操作が簡単
なので、自動化（機械化）も可能であろう。
［本発明によるヌクレオチ
ド誘導体は、前記の式〔ＩＶ〕で示されるものである（
以下、このヌクレオチド誘導体を化合物〔Ｗ〕という）
。
式中、（ｃａ２＞ｍはアルキレン基を示し、ｍは任意の
自然数である。その場合のｍは実用的には２〜２０であ
り、特に２−８が好ましい。また、式中Ｃ０（ＯＨ２）
ｎＣｏはスペーサーを示し、ｎは任意の自然数である。
自然数である。その場合のｍは実用的には２〜２０であ
り、特に２−８が好ましい。また、式中Ｃ０（ＯＨ２）
ｎＣｏはスペーサーを示し、ｎは任意の自然数である。
その場合のｎは実用的には２〜２０であり、特に３〜Ｂ
が好ましい。
が好ましい。
Ｒｅ はリン酸基を保護する置換基であって、オルトま
たはパラクロロフェニル基、フェニルチオ基、５−クロ
ロ−８−オキシキノリル基などを例示することができる
。通常は、オルトクロロフェニル基が用いられる。
たはパラクロロフェニル基、フェニルチオ基、５−クロ
ロ−８−オキシキノリル基などを例示することができる
。通常は、オルトクロロフェニル基が用いられる。
Ｒ１水素または５１−末端水酸基の保護基であって、こ
れが保護基である場合はトリチル基、モノまたはジメチ
ルトリチル基、トリメチルアセチル基、トリオキシアセ
チルなどを例示することができる。保護基としては、通
常ジメトキシトリチル基が用いられる。
れが保護基である場合はトリチル基、モノまたはジメチ
ルトリチル基、トリメチルアセチル基、トリオキシアセ
チルなどを例示することができる。保護基としては、通
常ジメトキシトリチル基が用いられる。
Ｒ２水素またはアミン基の保護基であって、これが保護
基である場合はトリオキシアセチル基、オルトニトロス
ルフェニル基などを岡示することができる。保籠基とし
ては、通常トリフロ井ロアセチル基が用（・られる。
基である場合はトリオキシアセチル基、オルトニトロス
ルフェニル基などを岡示することができる。保籠基とし
ては、通常トリフロ井ロアセチル基が用（・られる。
Ｒ３アミノ基を官能基として具備する担体であり、通常
アミノメチル化ポリスチレン、アミノプロピル化シリカ
ゲルおよび部分アミン化ポリアクリルモルフォリドなど
が用いられる。
アミノメチル化ポリスチレン、アミノプロピル化シリカ
ゲルおよび部分アミン化ポリアクリルモルフォリドなど
が用いられる。
化合物〔ＩＶ〕の合成
化合物（ｔＶ）、すなわち本発明によるヌクレオチド誘
導体、は合目的的な任意の方法によって合成することが
できる。
導体、は合目的的な任意の方法によって合成することが
できる。
一つの好ましい方法は、第１図のフローチャートに示し
た通りのものである。Ｒ０〜Ｒ３は前記した意味を有す
るものであり、ＢＺはベンゾイル基を示す。
た通りのものである。Ｒ０〜Ｒ３は前記した意味を有す
るものであり、ＢＺはベンゾイル基を示す。
第１図に従って、化合物〔〜〕合成の好ましい方法を述
べれば下記の通りである。
べれば下記の通りである。
まず、通常のヌクレオチド合成に適用される方法あるい
は本発明者らが先に提案したナシ〔特顧昭５９−２２４
７５号〕に従って完全に保護されたシチジン誘導体ＣＩ
〕を合成する。ついで化合物（ＴＩにおいて、塩基部分
のアミノ基の保誇基を選択的忙除去して化合物ｃｎ＋を
得る。塩基部分の保護基の選択的除去は、例えば、Ｔｅ
ｔ、ｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ。
は本発明者らが先に提案したナシ〔特顧昭５９−２２４
７５号〕に従って完全に保護されたシチジン誘導体ＣＩ
〕を合成する。ついで化合物（ＴＩにおいて、塩基部分
のアミノ基の保誇基を選択的忙除去して化合物ｃｎ＋を
得る。塩基部分の保護基の選択的除去は、例えば、Ｔｅ
ｔ、ｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ。
召、 ９９１−９９４（１９８１）の方法に従って行う
ことができる。すなわち、化合物ＣＩ’ｌを反応溶媒中
において４０“ＣでＩａｉｊｐ間処理すシ・ことＫより
化合物（ＩＴ）を得る。反応溶媒としては、ジクロロメ
タン、トリクロロメタン、Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミ
ドなども考えられるが、Ｒｏとして賞月されるオルトク
ロロフェニル基の分解が最も少ないという点でエチレン
ジアミン−フェノール（１： ４ （ｖ／ｖ）が好まし
い。
ことができる。すなわち、化合物ＣＩ’ｌを反応溶媒中
において４０“ＣでＩａｉｊｐ間処理すシ・ことＫより
化合物（ＩＴ）を得る。反応溶媒としては、ジクロロメ
タン、トリクロロメタン、Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミ
ドなども考えられるが、Ｒｏとして賞月されるオルトク
ロロフェニル基の分解が最も少ないという点でエチレン
ジアミン−フェノール（１： ４ （ｖ／ｖ）が好まし
い。
上記操作で遊離した化合物ＣＩＴつの塩基部分のアばノ
基にスペーサーを導入して化合物［ｍ〕を造成したのち
、これを担体に固定化することによって、化合物〔ＩＶ
〕を得る。すなわち、スペーサー（炭素数２〜２０のジ
カルボン酸であればよく、特にアジピン酸、グルタル酸
が好ましい）の導入をピリジン中で縮合剤〔例えばジシ
クロへキシルカルボジイミド責以下ＤＯＯ１］を用い−
て行って化合物〔■ｌ〕とする。つ−・で、化合物〔ｍ
〕σ）シトシン部分のアミノ基延長上に導入されたスペ
ーサーを介して担体と結合させることによって、化合物
［ｆＶｌを得る。
基にスペーサーを導入して化合物［ｍ〕を造成したのち
、これを担体に固定化することによって、化合物〔ＩＶ
〕を得る。すなわち、スペーサー（炭素数２〜２０のジ
カルボン酸であればよく、特にアジピン酸、グルタル酸
が好ましい）の導入をピリジン中で縮合剤〔例えばジシ
クロへキシルカルボジイミド責以下ＤＯＯ１］を用い−
て行って化合物〔■ｌ〕とする。つ−・で、化合物〔ｍ
〕σ）シトシン部分のアミノ基延長上に導入されたスペ
ーサーを介して担体と結合させることによって、化合物
［ｆＶｌを得る。
すなわち、化合物〔■〕とアミノ基を官卵基として有す
る担体（例えば、アミノメチル化ポリスチレン）とをピ
リジン中で縮合剤（例えばＤＣ！Ｏ）を用いて結合させ
ることによって、化合物［ｆＶｌを得ろことができる。
る担体（例えば、アミノメチル化ポリスチレン）とをピ
リジン中で縮合剤（例えばＤＣ！Ｏ）を用いて結合させ
ることによって、化合物［ｆＶｌを得ろことができる。
なお、一般的なヌクレオチド合成法は既に公知であって
、保護基の種類およびその導入ないし除去ならびに縮合
その他につ（・ての詳細は核酸の化学合成に関する取置
や総説、例えば「ヌクレオシド・ヌクレオチドの合成」
（丸々１９７７年）、「核酸有機化学」（化学同人１９
７９年）、「核酸」（朝倉讐−店１９７９年）、Ｔｅｔ
ｒａｈｅｄｒｏｎ。
、保護基の種類およびその導入ないし除去ならびに縮合
その他につ（・ての詳細は核酸の化学合成に関する取置
や総説、例えば「ヌクレオシド・ヌクレオチドの合成」
（丸々１９７７年）、「核酸有機化学」（化学同人１９
７９年）、「核酸」（朝倉讐−店１９７９年）、Ｔｅｔ
ｒａｈｅｄｒｏｎ。
ど、 ３１（１９７８）、有合化、に、 ７２３（１９
７８）および化 ［字の領域、３３．５６６
（１９７９）など、を参照された−・。
７８）および化 ［字の領域、３３．５６６
（１９７９）など、を参照された−・。
また、化合物ＣＩＶＩの合成操作の詳細は什記実験例を
参照されたい。
参照されたい。
化合物〔ＩＶ〕の利用／オリゴヌクレオチド本発明の化
合物（一般式〔ＩＶ〕）は、前記したように、３１−末
端アミノ化オリゴヌクレオチドな固相法で合成するため
の出発物質として官用である。
合物（一般式〔ＩＶ〕）は、前記したように、３１−末
端アミノ化オリゴヌクレオチドな固相法で合成するため
の出発物質として官用である。
本発明の化合物（ｒｖ〕を用いた３１゛−末端アミノ化
オリゴヌクレオチドの合成は、この化合物（［Ｖ］ ’
１じ１相合成法に使用する樹脂として用い、この樹脂に
核酸試薬としてヌクレオチドのダイマー、トリマーある
いはオリゴマーを順次縮合させる合目的的な任意の方法
によって行うことかできる。
オリゴヌクレオチドの合成は、この化合物（［Ｖ］ ’
１じ１相合成法に使用する樹脂として用い、この樹脂に
核酸試薬としてヌクレオチドのダイマー、トリマーある
いはオリゴマーを順次縮合させる合目的的な任意の方法
によって行うことかできる。
一つの好ましい方法？示せば、第２図のフローチャート
に示す通りである。なお、フローチャート中の記号は下
記の意味をもつ。
に示す通りである。なお、フローチャート中の記号は下
記の意味をもつ。
ＣＢ ７７ノエチル基を示す。
ＤＭＴ ｒ ジメトキシトリチル基ン示す。
ｐ 任意の自然数。
ｑ 任意の自然数。
Ｂｏ 保護された塩基を示すが、通常はＲ６−ベンゾイ
ルアデニン、Ｎ−イソブチリルグアニン Ｒ６−ペンジ
イルシトツノおよびチミン（すなわち、保護不要）より
選択される。
ルアデニン、Ｎ−イソブチリルグアニン Ｒ６−ペンジ
イルシトツノおよびチミン（すなわち、保護不要）より
選択される。
Ｂ 塩基を示すが、通常はアデニン、グアニン、シトシ
ンおよびアミンより選択される。
ンおよびアミンより選択される。
Ｒｏ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｙ、 ｒｎおよびｎは、ｆｐ
Ｊ記した通りである。
Ｊ記した通りである。
３′−末端アミン化オリゴヌクレオチドの合成法につい
て述べれば、下記の通りである。
て述べれば、下記の通りである。
化合物（［Ｖ］のＤＭＴｒ を除去したものと、通常の
オリゴヌクレオチド合成法で合成した化合％ａ［Ｏ’〕
のＯＲを除去したものとを縮合剤〔例えばメシチレンス
ルホニルニトロトリアゾリド（以下 ＭＳＮＴ ）〕存
金工で結合して、化合〔■〕を得る。この操作を適度に
繰り返すことにより所望の鎖長とし、つ（・でこの化合
物〔Ｖ〕を相体から脱離〔担体からの脱離操作はアルカ
リ処理で行うことができ、通常は儂アンモニアを用（・
る。なお、本発明の笑眸イシ・：においても濃アンモニ
ア処理を行ったが、こσ）処理で担体からの脱離ととも
に塩基部分の保護基およびトリフルオロアセチル基も除
去される〕することによって化合物ＣＩＸＩを得たのち
、ついでｓｌ−水酸基の保護基を除去〔保護基の除去は
酸処理、例えは０．Ｉ Ｎ塩酸処理、８０係酢酸処理な
どがあり、通常は後者である〕することによって、化合
物（Ｘ）を得る。
オリゴヌクレオチド合成法で合成した化合％ａ［Ｏ’〕
のＯＲを除去したものとを縮合剤〔例えばメシチレンス
ルホニルニトロトリアゾリド（以下 ＭＳＮＴ ）〕存
金工で結合して、化合〔■〕を得る。この操作を適度に
繰り返すことにより所望の鎖長とし、つ（・でこの化合
物〔Ｖ〕を相体から脱離〔担体からの脱離操作はアルカ
リ処理で行うことができ、通常は儂アンモニアを用（・
る。なお、本発明の笑眸イシ・：においても濃アンモニ
ア処理を行ったが、こσ）処理で担体からの脱離ととも
に塩基部分の保護基およびトリフルオロアセチル基も除
去される〕することによって化合物ＣＩＸＩを得たのち
、ついでｓｌ−水酸基の保護基を除去〔保護基の除去は
酸処理、例えは０．Ｉ Ｎ塩酸処理、８０係酢酸処理な
どがあり、通常は後者である〕することによって、化合
物（Ｘ）を得る。
また、上記と同様にして５′−および３１−末端にアば
ノアルキル基を導入した化合物〔■〕を得ることもでさ
る。化合物〔■〕合成の好ましい一例を示せば、第３図
のフローチャートに示ｆ通りである。
ノアルキル基を導入した化合物〔■〕を得ることもでさ
る。化合物〔■〕合成の好ましい一例を示せば、第３図
のフローチャートに示ｆ通りである。
なお、同図中の記号の意味は前記した通りである。
すなわち、化合物〔■〕の合成は通常のオリゴヌクレオ
チド合成法により造成した化合物〔ＯＩ〕を脱シアノエ
チルしたものと本発明の化合物［ｒｖ〕のＲ１（ＤＭＴ
ｒ ）を除去したものとの結合を縮合剤存在下で行っ
て所望の鎖長の化合物〔ｖ〕を得ろ。ついで、特開昭５
９−９３ｔ１９８号公報記載の方法に従って合成した化
合物（Ｖｌ’ｌを脱シアノエチルしたものと化合物（［
Ｖ”ｌのＲ” （ＤＭＴｒ ） を除去したものとの
結合を縮合剤存在下で行うことにより、化合物〔■〕を
得る。
チド合成法により造成した化合物〔ＯＩ〕を脱シアノエ
チルしたものと本発明の化合物［ｒｖ〕のＲ１（ＤＭＴ
ｒ ）を除去したものとの結合を縮合剤存在下で行っ
て所望の鎖長の化合物〔ｖ〕を得ろ。ついで、特開昭５
９−９３ｔ１９８号公報記載の方法に従って合成した化
合物（Ｖｌ’ｌを脱シアノエチルしたものと化合物（［
Ｖ”ｌのＲ” （ＤＭＴｒ ） を除去したものとの
結合を縮合剤存在下で行うことにより、化合物〔■〕を
得る。
最後に、化合物〔■〕の脱保護および担体からの脱離を
行うことにより、化合物〔■〕を得る。なお、オリゴヌ
クレオチドの固相合成法に関しては蔵書や文献が種々あ
るが、例えば下記の文献や公開特許公報および後記実験
例を参照することができる。
行うことにより、化合物〔■〕を得る。なお、オリゴヌ
クレオチドの固相合成法に関しては蔵書や文献が種々あ
るが、例えば下記の文献や公開特許公報および後記実験
例を参照することができる。
Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｏ Ｌｅｔｔｅｒｓ １９７９．
３６３５（１９７９）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃ１ｃｌｓ
Ｒｅ５ｅａｒｃｈ旦、５４７３（１９８Ｌｌ）Ｎｕｃｌ
ｅｉｃ Ａｃ１ｄｓ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ旦、５４９１（
１９８０）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃ１ｄｓ Ｒｅ５ｅａｒ
ｃｈ ８．５５０７（１９８０＞Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃ
１ｄｓ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ Ｓｙｍｐｏｅｉｕｍ ５ｅ
ｒｉｅＩＩ＋７、２８１（１９８（１） ％開昭５９−２７９００号、同５９−９３０９８号、同
５９−９３０９９号および同５９−９３１００号各公報
また、このようにして合成された３＋−末端アミノ化オ
リゴヌクレオチドは、−級アミノ基を介して標識物質な
どを結合することも可能で夛る（特開昭５９−１４８７
９８号公報、特願昭５８−７５８７８号明細者など参照
）。
３６３５（１９７９）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃ１ｃｌｓ
Ｒｅ５ｅａｒｃｈ旦、５４７３（１９８Ｌｌ）Ｎｕｃｌ
ｅｉｃ Ａｃ１ｄｓ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ旦、５４９１（
１９８０）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃ１ｄｓ Ｒｅ５ｅａｒ
ｃｈ ８．５５０７（１９８０＞Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃ
１ｄｓ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ Ｓｙｍｐｏｅｉｕｍ ５ｅ
ｒｉｅＩＩ＋７、２８１（１９８（１） ％開昭５９−２７９００号、同５９−９３０９８号、同
５９−９３０９９号および同５９−９３１００号各公報
また、このようにして合成された３＋−末端アミノ化オ
リゴヌクレオチドは、−級アミノ基を介して標識物質な
どを結合することも可能で夛る（特開昭５９−１４８７
９８号公報、特願昭５８−７５８７８号明細者など参照
）。
実験例
本発明の化合物（ｒｖ〕の合成を以下の手順に従つて行
った。
った。
化合物ＣＩ〕（Ｙ−０）の合成を第４図のフローチャー
トに従って行った（なお、図画の記号Ｘはハロゲン、ト
リアゾールまた汝ンゾトリアゾールを示し、他の記号の
意味は前記した通りである）。
トに従って行った（なお、図画の記号Ｘはハロゲン、ト
リアゾールまた汝ンゾトリアゾールを示し、他の記号の
意味は前記した通りである）。
すなわち、ピリジン共沸により無水にした化合物リアゾ
ールである化合物）のジオキサン溶液（７ｍユ／ｍＭＳ
１２．６ｍｌ ）を加えて２時間反応を行った。薄層
クロマトグラフィー（以下ＴＬＯ）により反応の終了を
確認した後、ピリジン共沸およびトルエン共沸により無
水にしたトリフロロアセチル−６−アミノヘキサノール
〔Ｙ薯０、Ｒ２＝ＯＦ３００ ）（５３０ｍｇ、 ２
．５ ｍＭ ）および１−７’チルーイミタゾール（２
００μｍ、２．５ｍ１１りを加えて、室温で一夜反応を
行った。反応終了後、溶媒を留去し、りｏｏホルム（以
下０ＨＣ１３） ３０ ｍｌに溶解し、水、０．５Ｍリ
ン酸二水素ナトリウム（以下ＮａＨ２ＰＯ４）、および
５憾炭酸水素ナトＩＪウム（以下Ｎ＆ＨＣＯ３）で洗浄
を行ったのち、無水硫酸ナトリワム（以下Ｎａ２８０４
）で乾燥を行った。Ｃ！ＨＯＩ ３層を＃相し、ノリ
力ゲルショートカラムで精製を行って、目的化物（Ｉ〕
（Ｙ−０）を得た〔収＄ ９１Ｏｎａｇ （１，ｔ４ｍ
Ｍ ＞、８１％〕。
ールである化合物）のジオキサン溶液（７ｍユ／ｍＭＳ
１２．６ｍｌ ）を加えて２時間反応を行った。薄層
クロマトグラフィー（以下ＴＬＯ）により反応の終了を
確認した後、ピリジン共沸およびトルエン共沸により無
水にしたトリフロロアセチル−６−アミノヘキサノール
〔Ｙ薯０、Ｒ２＝ＯＦ３００ ）（５３０ｍｇ、 ２
．５ ｍＭ ）および１−７’チルーイミタゾール（２
００μｍ、２．５ｍ１１りを加えて、室温で一夜反応を
行った。反応終了後、溶媒を留去し、りｏｏホルム（以
下０ＨＣ１３） ３０ ｍｌに溶解し、水、０．５Ｍリ
ン酸二水素ナトリウム（以下ＮａＨ２ＰＯ４）、および
５憾炭酸水素ナトＩＪウム（以下Ｎ＆ＨＣＯ３）で洗浄
を行ったのち、無水硫酸ナトリワム（以下Ｎａ２８０４
）で乾燥を行った。Ｃ！ＨＯＩ ３層を＃相し、ノリ
力ゲルショートカラムで精製を行って、目的化物（Ｉ〕
（Ｙ−０）を得た〔収＄ ９１Ｏｎａｇ （１，ｔ４ｍ
Ｍ ＞、８１％〕。
なお、シリカゲルカラムでの目的物の２出は、０〜４％
のメタノール含有ＣＨＣ！１３のグラディエントチ行ツ
タ〔以下この表現を「ＭｅＯＨ／（ＪＬＧＩ３（０層４
％）」とする〕。
のメタノール含有ＣＨＣ！１３のグラディエントチ行ツ
タ〔以下この表現を「ＭｅＯＨ／（ＪＬＧＩ３（０層４
％）」とする〕。
この化合物の確認は、核磁気共鳴スペクトルｃ以下ＮＭ
Ｒ）によって行った。
Ｒ）によって行った。
ＮＭＲ（ＣＤＯｌ、３ ： δ＝
８．１２（ｄｄ ｌＨ）、 ｔｉ、３０（ｍ Ｉ
Ｈ）５．３Ｌｌ （ｔ ＩＨ）、 ４．２０（ｍ
２Ｈ）３．７８ （８６Ｈ）、 ３．３３（ｍ
２Ｅ（）１．４０（ｍ ４Ｈ） ■ 化合物（１〕（Ｙ、ＮＨ）σ）合成上記と同様にし
て化合物［Ｉ］（Ｙ、、、ＮＨ）の合成を行ツタ。すな
わち、化合物［０１（１，３２ｇ、２ｍｍｏｌ ）を無
水とした後、オルトクロルフェニルホスホジペンゾトリ
アゾリドのジオキサン溶液（６ｍｌ ／ ｍＭ 、
１６−８ ｍｌ ）を加えて２時間反応を行った。これ
に、無水にしたモノトリフロロアセチル−１，６−ジア
ミツヘキサン（Ｙ ｍ Ｎ、 Ｒ” ｍ０Ｆ３ｃ。
Ｈ）５．３Ｌｌ （ｔ ＩＨ）、 ４．２０（ｍ
２Ｈ）３．７８ （８６Ｈ）、 ３．３３（ｍ
２Ｅ（）１．４０（ｍ ４Ｈ） ■ 化合物（１〕（Ｙ、ＮＨ）σ）合成上記と同様にし
て化合物［Ｉ］（Ｙ、、、ＮＨ）の合成を行ツタ。すな
わち、化合物［０１（１，３２ｇ、２ｍｍｏｌ ）を無
水とした後、オルトクロルフェニルホスホジペンゾトリ
アゾリドのジオキサン溶液（６ｍｌ ／ ｍＭ 、
１６−８ ｍｌ ）を加えて２時間反応を行った。これ
に、無水にしたモノトリフロロアセチル−１，６−ジア
ミツヘキサン（Ｙ ｍ Ｎ、 Ｒ” ｍ０Ｆ３ｃ。
〕塩酸塩（９００ｍｇ、３．６ｍＭ）およびｌ−メチル
−イミダゾ−Ａ／ （４４０ｍｇ、５．６ ｍＭ ）を
加えて一夜反応を行った。以下は上記と同様にして目的
の化合物［Ｉ］ （Ｙ ” ＮＨ）を得た〔収９−７１
０ ｍｇ （４４％）〕。なお、本化合物の確認もＮＭ
Ｒで行った。
−イミダゾ−Ａ／ （４４０ｍｇ、５．６ ｍＭ ）を
加えて一夜反応を行った。以下は上記と同様にして目的
の化合物［Ｉ］ （Ｙ ” ＮＨ）を得た〔収９−７１
０ ｍｇ （４４％）〕。なお、本化合物の確認もＮＭ
Ｒで行った。
ＮＭＲ（Ｃ！ＤＣ１３） ： δ＝
８．１３（ｄａ ＩＨ）、６．３４（ｔ ＩＨ）、５
．２８（ｍ ｔＨ１３，７７（１！ ６Ｈ）、３．３２
（ｍ ２１）、３．００（ｍ ２Ｈ）１．３４（ｍ ４
Ｈ） ■ 化合物［ｎ〕（Ｙ−０）の合成 化合物ＣＩ：） （Ｙ−０） （５５０ｍｇ、 ０．７
ｍＭ ） ′ｉｊＩ：Ｚチレンジアミン−フェノール
（ｌ： ４ （”／ｖ） ） ｔｓｍｌに溶解し、４０
’Ｃで３０分間反応を行った。ＴＬＯで反応の終了を確
認した後、溶液の濃縮を行った。
．２８（ｍ ｔＨ１３，７７（１！ ６Ｈ）、３．３２
（ｍ ２１）、３．００（ｍ ２Ｈ）１．３４（ｍ ４
Ｈ） ■ 化合物［ｎ〕（Ｙ−０）の合成 化合物ＣＩ：） （Ｙ−０） （５５０ｍｇ、 ０．７
ｍＭ ） ′ｉｊＩ：Ｚチレンジアミン−フェノール
（ｌ： ４ （”／ｖ） ） ｔｓｍｌに溶解し、４０
’Ｃで３０分間反応を行った。ＴＬＯで反応の終了を確
認した後、溶液の濃縮を行った。
残留物をＣＨｏｌｇに溶解し、ライで１．５ Ｍ Ｎａ
Ｈ２ＰＯ４，５％ＮａＨＯＯｓ、５％塩化ナトリウム（
以下Ｎａ１ｌ入および水で洗浄したのち、無水Ｎａ２８
０４で乾燥を行った。ＣＨＯ１３を留去したのち、ンリ
カゲルショートカラム〔ＩＶθ０Ｈ１０ＨＯ１３（０→
３％）〕で精夛゛・を行った。ついで、これをペンタン
に滴下することによって、化合物（ｌＩ”ｌの粉末を得
た（収ｆ、３６０ｍｇ、収出５４％）。なお、本発明の
化合物の確望もＮＭＲで行った。
Ｈ２ＰＯ４，５％ＮａＨＯＯｓ、５％塩化ナトリウム（
以下Ｎａ１ｌ入および水で洗浄したのち、無水Ｎａ２８
０４で乾燥を行った。ＣＨＯ１３を留去したのち、ンリ
カゲルショートカラム〔ＩＶθ０Ｈ１０ＨＯ１３（０→
３％）〕で精夛゛・を行った。ついで、これをペンタン
に滴下することによって、化合物（ｌＩ”ｌの粉末を得
た（収ｆ、３６０ｍｇ、収出５４％）。なお、本発明の
化合物の確望もＮＭＲで行った。
ＮＭＲ（ＣＤＣｌ２） ： δ＝
７．７７（ｔ ＩＨ／）、 ６．３４（（１１Ｈ）、
５．４５（ｄｄ２Ｈ）５．２６（ｍ ＩＨ）、 ４
．１９（ｍ ２Ｈ）、 ３．７７（ｓ ６Ｈ）３．３
１（ｔ ２Ｈ）、 ｔ、ａ７（ｍ ４Ｈ１■ 化合物（
ｎｌ） （Ｙ−０）の合成化合物（ＩＩＩ （Ｙ−０）
（１００ｍｇ、 ｌ）、１１ ｍ ｍｏｂ ）を無水
ピリジン（２ｍｇに溶解し、アジピン酸（５０ｍｇ、
０．３４ ｍ ｍｏｌ ）およびジシクロへキシルカ
ルボジイミド責以下ＤＯＣ１（１４０ｍｇ、 ０．６８
ｍｎｏｏｌ ［）を加えて、室温で反応を行っ
た。ＴＬＣで反応の終了を確認後、反応液を濾過し、Ｐ
液の濃縮を行ったのち、濃縮物をＣＨＩＪ３に溶解し、
水、５％ＮａＨＯＯ３、および５％ＮａＯユで洗浄を行
った。ついで、０ＨＯＩ３層を濃縮し、少量のベンゼン
に溶解したのち、ペンタンに滴下して粉末として、化合
物（ｍ”１（Ｙ−０）の粗精製物を得た（収１ｙ ９ｏ
ｍｇ、 ８０％）。粗精製物は、このまま次の反応に
用いた。
５．４５（ｄｄ２Ｈ）５．２６（ｍ ＩＨ）、 ４
．１９（ｍ ２Ｈ）、 ３．７７（ｓ ６Ｈ）３．３
１（ｔ ２Ｈ）、 ｔ、ａ７（ｍ ４Ｈ１■ 化合物（
ｎｌ） （Ｙ−０）の合成化合物（ＩＩＩ （Ｙ−０）
（１００ｍｇ、 ｌ）、１１ ｍ ｍｏｂ ）を無水
ピリジン（２ｍｇに溶解し、アジピン酸（５０ｍｇ、
０．３４ ｍ ｍｏｌ ）およびジシクロへキシルカ
ルボジイミド責以下ＤＯＣ１（１４０ｍｇ、 ０．６８
ｍｎｏｏｌ ［）を加えて、室温で反応を行っ
た。ＴＬＣで反応の終了を確認後、反応液を濾過し、Ｐ
液の濃縮を行ったのち、濃縮物をＣＨＩＪ３に溶解し、
水、５％ＮａＨＯＯ３、および５％ＮａＯユで洗浄を行
った。ついで、０ＨＯＩ３層を濃縮し、少量のベンゼン
に溶解したのち、ペンタンに滴下して粉末として、化合
物（ｍ”１（Ｙ−０）の粗精製物を得た（収１ｙ ９ｏ
ｍｇ、 ８０％）。粗精製物は、このまま次の反応に
用いた。
■ 化合物（ＩＶＩ（Ｙ−ｏ）の合成
化合物Ｃｍ〕（Ｙ＝Ｏ） （９０ｍｇ、 ０．０８６
ｍｍｏｌ ） ヲ、アミノメチル化ポリスチレン樹脂（
Ｕ、１２ ｍｍｏｌ／ｇ、４００ ｍｇ ） （市販品
）を懸濁したピリジン溶液（４ｍｌ ）に加えたのち、
ＤＯＣ（６０ｍｇ、 ｏ、３ ｍ ｍｏｂ ）を加えて
、室温で一夜反応を行った。反応終了後、樹脂をピリジ
ンで洗浄し、無水酢酸−ピリジン（１： ９ （ｖ／ｖ
） ） ５ｍユを加えて１時間反応を行ったのち、未反
応のアミン基をアセチル基で保護し、メタノールで洗浄
後、乾燥して、化合物（ＩＶ）を得た（ ４２０ ｍｇ
）。ここで、化合物〔ＩＶ〕を少量採ってトリチル基の
定−１ｉＫよりンチジン含量を計算すると、０ 、０４
６ ｍｍｏｌ ７ｇであツタ。
ｍｍｏｌ ） ヲ、アミノメチル化ポリスチレン樹脂（
Ｕ、１２ ｍｍｏｌ／ｇ、４００ ｍｇ ） （市販品
）を懸濁したピリジン溶液（４ｍｌ ）に加えたのち、
ＤＯＣ（６０ｍｇ、 ｏ、３ ｍ ｍｏｂ ）を加えて
、室温で一夜反応を行った。反応終了後、樹脂をピリジ
ンで洗浄し、無水酢酸−ピリジン（１： ９ （ｖ／ｖ
） ） ５ｍユを加えて１時間反応を行ったのち、未反
応のアミン基をアセチル基で保護し、メタノールで洗浄
後、乾燥して、化合物（ＩＶ）を得た（ ４２０ ｍｇ
）。ここで、化合物〔ＩＶ〕を少量採ってトリチル基の
定−１ｉＫよりンチジン含量を計算すると、０ 、０４
６ ｍｍｏｌ ７ｇであツタ。
また、精製した化合物［：ＤＩ］ （Ｙ−０） （１０
ｍｇ、 ９μｍ０１〕、アミノメチルポリスチレン樹脂
％ （ｏ、ｔ３ｍｍｏｌ／ｇ、 ４０ｍｇ＞およびＤＯ
Ｏ（２０ｍｇ、 ｌｕｏμｍｏｌ）を用いて上記方法に
従って化合物（ｒｖ〕（Ｙ−０）を合成した。なお、こ
の場合のンチジン含量は、上記と同様にトリチル基の定
員によればＵ、０９６ ｍｍｏｘ／ｇであった。
ｍｇ、 ９μｍ０１〕、アミノメチルポリスチレン樹脂
％ （ｏ、ｔ３ｍｍｏｌ／ｇ、 ４０ｍｇ＞およびＤＯ
Ｏ（２０ｍｇ、 ｌｕｏμｍｏｌ）を用いて上記方法に
従って化合物（ｒｖ〕（Ｙ−０）を合成した。なお、こ
の場合のンチジン含量は、上記と同様にトリチル基の定
員によればＵ、０９６ ｍｍｏｘ／ｇであった。
一方、化合物（ＩＶＩ （Ｙ −ＮＨ）も、上記方法に
従って得ることができた。
従って得ることができた。
Ｂ、オリゴヌクレオチドの合成
本発明の化合物（一般式〔ＩＶ〕）を用いて、オリゴヌ
クレオチドの合成を行った。
クレオチドの合成を行った。
上記化合物〔Ｘ〕の合成を第２図のフローチャートにし
たがって行った。すなわち、樹脂［ＩＶＩ （Ｙ＝Ｏ）
２０ｍｇ、 Ｕ、Ｕ９６ ｍｍｏｌ／ｇ、 １．９
μｍ０１（ここで樹脂は担体に過ぎないが、樹脂に担持
された本発明の化合物は外観的には樹脂そのものと変ら
ないので、樹脂に担持された当該化合物を以下において
単に樹脂と呼ぶことにする）を■ジクロロメタン（以下
０Ｈ２Ｃ１２） １ ｍｌで５回洗浄したのち、■３％
トリクロロ酢酸含有ＯＨ２０１ｇ （以下３壬ＴＣＡ
／ ＣＨ２０１２） ｌ ｍｌを用いる２０秒間の反応
を計６回行った。このようにして脱トリチル化した化合
物（ｒｖ”ｌ ｗθ０Ｈ２０１□１ ｍｌおよびビリ９
フ１ｍｌ各各で５回ずつ洗浄し、さらにＣＨ２０１２１
ｒｎｌで５回洗浄後、真空乾燥を行った。ついでＯ縮合
剤メシチレンスルホニルニトロトリアゾリド（以下ＭＳ
ＮＴ） ２５ ｍｇおよび脱シアンエチル化したチミジ
ンダイマー（化合物〔０１〕圧おいてｐ−２、Ｂ’、Ｔ
）２５ｍｇを溶解した無水ピリジン３００μｍを加えて
、４００分間反応行った。反応終了後、樹脂を■ピグ９
フ１ メチルアミノピリジン（以下ＤＭＡＰ ） （ １００
μｍ−９００ ｐｌ− １０ ｍｇ″１ｌＩＩｌ１１を
加えて５分間反応を行って未反応５′−水酸基をアセチ
ル化したのち、■ピリジンｉｍ１で５回洗浄を行った（
以上で１回の縮合操作終了）。引き続き、脱シアンエチ
ル化したチミジンダイマーを用い、上記Φ〜■の縮合操
作を５回くり返すことにより、化合物（Ｖ：］（ｙ−ｏ
、Ｂ．、Ｔ，ｐ−２）を得た〔トリチル基の定量による
収率は通算５７％（平均９１％）であった〕。
たがって行った。すなわち、樹脂［ＩＶＩ （Ｙ＝Ｏ）
２０ｍｇ、 Ｕ、Ｕ９６ ｍｍｏｌ／ｇ、 １．９
μｍ０１（ここで樹脂は担体に過ぎないが、樹脂に担持
された本発明の化合物は外観的には樹脂そのものと変ら
ないので、樹脂に担持された当該化合物を以下において
単に樹脂と呼ぶことにする）を■ジクロロメタン（以下
０Ｈ２Ｃ１２） １ ｍｌで５回洗浄したのち、■３％
トリクロロ酢酸含有ＯＨ２０１ｇ （以下３壬ＴＣＡ
／ ＣＨ２０１２） ｌ ｍｌを用いる２０秒間の反応
を計６回行った。このようにして脱トリチル化した化合
物（ｒｖ”ｌ ｗθ０Ｈ２０１□１ ｍｌおよびビリ９
フ１ｍｌ各各で５回ずつ洗浄し、さらにＣＨ２０１２１
ｒｎｌで５回洗浄後、真空乾燥を行った。ついでＯ縮合
剤メシチレンスルホニルニトロトリアゾリド（以下ＭＳ
ＮＴ） ２５ ｍｇおよび脱シアンエチル化したチミジ
ンダイマー（化合物〔０１〕圧おいてｐ−２、Ｂ’、Ｔ
）２５ｍｇを溶解した無水ピリジン３００μｍを加えて
、４００分間反応行った。反応終了後、樹脂を■ピグ９
フ１ メチルアミノピリジン（以下ＤＭＡＰ ） （ １００
μｍ−９００ ｐｌ− １０ ｍｇ″１ｌＩＩｌ１１を
加えて５分間反応を行って未反応５′−水酸基をアセチ
ル化したのち、■ピリジンｉｍ１で５回洗浄を行った（
以上で１回の縮合操作終了）。引き続き、脱シアンエチ
ル化したチミジンダイマーを用い、上記Φ〜■の縮合操
作を５回くり返すことにより、化合物（Ｖ：］（ｙ−ｏ
、Ｂ．、Ｔ，ｐ−２）を得た〔トリチル基の定量による
収率は通算５７％（平均９１％）であった〕。
ついで、化合吟〔Ｖ）を０．５ Ｍテトラメチルグアニ
ジン−ピリジン−２−カルボアルドキ７ムのピリジン−
水（９：ｌ（’Ｚ，））溶液３００μｍに溶解し、室温
で一夜処理後、濃アンモニア水（３ｍｌ）を加え、密栓
して５０℃で一夜処理を行った。処理後、樹脂をＰ別し
、ｒ液の濃縮を行い、残渣を５ＱｍＭテトラエチルアン
モニウムバイカーボネート（以下ＴＥＡＢ ） ｐＨ
７．５、ｌ ｍｌに溶解し、エーテル１ｍｌで３回洗浄
した。水層を濃縮後、ＴＥＡＢに溶解し、その半量をセ
ファデックス０．−５ｏｃ直径１．５ｃｍ×長さ１２０
Ｃｍ，溶出液５０ ｍＭ ＴＩＬＡＢ ）にかけて粗
精製を行って化合物（ｐ（）（Ｙ＝Ｏ１Ｂ，、、Ｔ，
ｐ−１２）の粗精製物６．０〜９．９ ＯＤを得て、つ
いでこれを逆相カラムを用いた高速液体クロマトグラフ
ィー（以下ＨＰＬＯ ）で分離精製した（そのときの溶
出パターンを第５図に示ｊ）。 ＨＰＬＣで分取した化
合物Ｑｘ）ｇ８（ｌ酢駿で１０分間処理したのち、再び
ＨＰＬＣ で分離精製を行って化合物［：Ｘ］（Ｙ−０
、Ｂ−Ｔ，ｐ−２）を得た（そのときの溶出パターンを
＃．６図に示す）。第５図および第６図において、溶出
パターンはいずれも単一ピークを示し、従って化合物〔
Ｘ〕の精製物を得ることができた。
ジン−ピリジン−２−カルボアルドキ７ムのピリジン−
水（９：ｌ（’Ｚ，））溶液３００μｍに溶解し、室温
で一夜処理後、濃アンモニア水（３ｍｌ）を加え、密栓
して５０℃で一夜処理を行った。処理後、樹脂をＰ別し
、ｒ液の濃縮を行い、残渣を５ＱｍＭテトラエチルアン
モニウムバイカーボネート（以下ＴＥＡＢ ） ｐＨ
７．５、ｌ ｍｌに溶解し、エーテル１ｍｌで３回洗浄
した。水層を濃縮後、ＴＥＡＢに溶解し、その半量をセ
ファデックス０．−５ｏｃ直径１．５ｃｍ×長さ１２０
Ｃｍ，溶出液５０ ｍＭ ＴＩＬＡＢ ）にかけて粗
精製を行って化合物（ｐ（）（Ｙ＝Ｏ１Ｂ，、、Ｔ，
ｐ−１２）の粗精製物６．０〜９．９ ＯＤを得て、つ
いでこれを逆相カラムを用いた高速液体クロマトグラフ
ィー（以下ＨＰＬＯ ）で分離精製した（そのときの溶
出パターンを第５図に示ｊ）。 ＨＰＬＣで分取した化
合物Ｑｘ）ｇ８（ｌ酢駿で１０分間処理したのち、再び
ＨＰＬＣ で分離精製を行って化合物［：Ｘ］（Ｙ−０
、Ｂ−Ｔ，ｐ−２）を得た（そのときの溶出パターンを
＃．６図に示す）。第５図および第６図において、溶出
パターンはいずれも単一ピークを示し、従って化合物〔
Ｘ〕の精製物を得ることができた。
また、化合物（Ｘ”ｌの確認は８２ｐでラベル化したの
ち、ポリアクリルアミドゲルｉ気泳動を行なうことによ
っても行った。
ち、ポリアクリルアミドゲルｉ気泳動を行なうことによ
っても行った。
なお、上記のＨＰＬＯの条件は、下記の通りである。
カラＡ ： μＢｏｎｄａｐａｋ Ｏ ＩＢ温度二５０
℃ 流速：２ｍｌ／分 溶出液ｈ ： ｓｏ ｍＭ ）リエチルアンモニウムア
セテート（以下ＴＦＪＡ ） ｐＨ ７．２Ｂ ： ５
０ ｍＭ ＴＦｉＡＡ （ ｐＨ７．２ ）−アセトニ
トリル（ ０Ｈ３ＯＮ） − （ １ ： １ （ｖ／
ｖ） ）化合物〔■〕の場合は、溶液Ｂの２０ − ６
０％の直線濃度勾配とし、溶出時間は【６分であった。
℃ 流速：２ｍｌ／分 溶出液ｈ ： ｓｏ ｍＭ ）リエチルアンモニウムア
セテート（以下ＴＦＪＡ ） ｐＨ ７．２Ｂ ： ５
０ ｍＭ ＴＦｉＡＡ （ ｐＨ７．２ ）−アセトニ
トリル（ ０Ｈ３ＯＮ） − （ １ ： １ （ｖ／
ｖ） ）化合物〔■〕の場合は、溶液Ｂの２０ − ６
０％の直線濃度勾配とし、溶出時間は【６分であった。
以下このような内容の表現を（遺蓑舟酬２０ − ６０
％Ｂ緩衝液／１６分）とする。また噂、化合物〔Ｘ〕の
場合は、（ＩＪ−４０％Ｂ緩衝液／１６分）である。
％Ｂ緩衝液／１６分）とする。また噂、化合物〔Ｘ〕の
場合は、（ＩＪ−４０％Ｂ緩衝液／１６分）である。
樹脂〔ＩＶ〕（４０ｍｇ， ０．０４６ ｍｍｏｌ／ｇ
， ！．８μｍｏｌ）と核酸試薬としてアデノシンダ
イマー（２５ｍｇ）を無水ピリジン（４００μｍ）に溶
解したものを用い、上記実験（ａｌのΦ〜■の操作に従
って化合物〔Ｘ′３σ〕合成を行った（平均収率９０チ
）。第７図は、本実験（１））の化合物［Ｘ］をＨＰＬ
Ｏ （ ０→４０％Ｂ緩衝液／Ｌ６分）で分離精製した
ときの溶出パターンであお・。
， ！．８μｍｏｌ）と核酸試薬としてアデノシンダ
イマー（２５ｍｇ）を無水ピリジン（４００μｍ）に溶
解したものを用い、上記実験（ａｌのΦ〜■の操作に従
って化合物〔Ｘ′３σ〕合成を行った（平均収率９０チ
）。第７図は、本実験（１））の化合物［Ｘ］をＨＰＬ
Ｏ （ ０→４０％Ｂ緩衝液／Ｌ６分）で分離精製した
ときの溶出パターンであお・。
（０） 化合物００ （ Ｙ−ｏ、１１−Ｋ Ｂは第
１表参照）の合成樹月旨 ＱＶ） （ １ｏｏ
ｒｎｇ 、 ｏ．ｕ４６ ｍｍｏｌ／ｇ 、
４．６ μｍｏｌ）と核酸試薬として種々のダ
イマー（ Ｇｏ， ＴＡ、Ａ ＴＧ， ＧＡ，冷所１びＴＴＩこの順に縮合）を無水ピ
リジン（８００μｍ）に浴所したものを用い、他の操作
は前記実験（ａｌの■〜のに従って化合物〔Ｘ〕の合成
を行った。第８図は、本実験（Ｃ１の化合物〔Ｘ″ｌｌ
ケＨＰＬＣ０→４０％Ｂ緩衝液／１６分）で分離精製し
たときの溶出パターンである。
１表参照）の合成樹月旨 ＱＶ） （ １ｏｏ
ｒｎｇ 、 ｏ．ｕ４６ ｍｍｏｌ／ｇ 、
４．６ μｍｏｌ）と核酸試薬として種々のダ
イマー（ Ｇｏ， ＴＡ、Ａ ＴＧ， ＧＡ，冷所１びＴＴＩこの順に縮合）を無水ピ
リジン（８００μｍ）に浴所したものを用い、他の操作
は前記実験（ａｌの■〜のに従って化合物〔Ｘ〕の合成
を行った。第８図は、本実験（Ｃ１の化合物〔Ｘ″ｌｌ
ケＨＰＬＣ０→４０％Ｂ緩衝液／１６分）で分離精製し
たときの溶出パターンである。
なお、上記実験（ａｌ〜（Ｃ）で合成した化合物の内容
を示せば第１表の１涌りである。
を示せば第１表の１涌りである。
第１表
上表および上記文中において、Ｔはチミン、Ａはアデニ
ン、Ｇはグアニン、Ｃはシトンンを示すものとして本発
明の技術分野において了承されている略号である。
ン、Ｇはグアニン、Ｃはシトンンを示すものとして本発
明の技術分野において了承されている略号である。
第３図の７０−チャートに従って化合物〔■〕（Ｙ−０
、Ｂ−第２表に記載、ｐ＋ｑ−ｉ４）を合成した。
、Ｂ−第２表に記載、ｐ＋ｑ−ｉ４）を合成した。
まず、上記実験（ａ）〜（Ｃ１と同様の方法で化合物〔
Ｖ〕（Ｒ’ ＝ｓ ＤＭＴｒ 、 Ｒ” ！ ０Ｆ３
ＣＯ−１Ｙ＝０二 Ｂ ＝ ０ＡＯ（！ＧＡＴＧＴＡＧ
ＩＩＩ：、 ｐ−１２、ｍ−６，９口４ ）の合成を行
った〇（イ）化合物［ＩＶＩの合成 化合物［０１］ （Ｒ” ｍ Ｈ，Ｂｌ ！ Ｔ、 Ｒ
’−オルトクロロフェニル、ｐ−２１（４５０ｍｇ、
０．５ ｍ ｍｏｂ ：ｌ をピリジン共沸して無水
とし、これにオルトクロロフェニルホスホジペンゾトリ
アゾリドのジオキサ／溶液（０，７ｍｍｏｌ ）を加え
て、２時間反応を行った。
Ｖ〕（Ｒ’ ＝ｓ ＤＭＴｒ 、 Ｒ” ！ ０Ｆ３
ＣＯ−１Ｙ＝０二 Ｂ ＝ ０ＡＯ（！ＧＡＴＧＴＡＧ
ＩＩＩ：、 ｐ−１２、ｍ−６，９口４ ）の合成を行
った〇（イ）化合物［ＩＶＩの合成 化合物［０１］ （Ｒ” ｍ Ｈ，Ｂｌ ！ Ｔ、 Ｒ
’−オルトクロロフェニル、ｐ−２１（４５０ｍｇ、
０．５ ｍ ｍｏｂ ：ｌ をピリジン共沸して無水
とし、これにオルトクロロフェニルホスホジペンゾトリ
アゾリドのジオキサ／溶液（０，７ｍｍｏｌ ）を加え
て、２時間反応を行った。
ＴＬＯで反応の進行を確認したのち、トリフロロアセチ
ル−６−アミンヘキサノール（１９０ｍｇ、０．９１！
ｌｍ０１）および１−メチル−イミダゾ−＃ （７５ｍ
ｇ。
ル−６−アミンヘキサノール（１９０ｍｇ、０．９１！
ｌｍ０１）および１−メチル−イミダゾ−＃ （７５ｍ
ｇ。
ｇｏｇ ｍｍｏｌ １を加えて、３時間反応を行った。
反応終了後、溶液の濃縮を行い、濃縮物をＣＨＣｌ３に
溶解し、水、５％ＮａＨ００３，０，５Ｍ ＮａＨ２Ｐ
Ｏ４および５％Ｎａ１ｌで洗浄したのち、無水Ｎａ２Ｓ
Ｏ４で乾燥を行った。ついで、０１ＮＯ１３層を濃縮し
、シリカゲルショートカラムでｆｌｌして、化合物（Ｖ
ｌ：ｌ（Ｒ’−オルトクロロフェニル、Ｒ” ＃ ０Ｆ
３Ｃｏ、Ｂ’−Ｔ、ｑ＝２）を得た。なお、目的物はＤ
−ペンタ／に滴下して粉末とした〔収ｉ ４６０ ｍｇ
（７２係）〕。
溶解し、水、５％ＮａＨ００３，０，５Ｍ ＮａＨ２Ｐ
Ｏ４および５％Ｎａ１ｌで洗浄したのち、無水Ｎａ２Ｓ
Ｏ４で乾燥を行った。ついで、０１ＮＯ１３層を濃縮し
、シリカゲルショートカラムでｆｌｌして、化合物（Ｖ
ｌ：ｌ（Ｒ’−オルトクロロフェニル、Ｒ” ＃ ０Ｆ
３Ｃｏ、Ｂ’−Ｔ、ｑ＝２）を得た。なお、目的物はＤ
−ペンタ／に滴下して粉末とした〔収ｉ ４６０ ｍｇ
（７２係）〕。
つぎに、化合物（Ｖ）のＤＭＴｒ を除去したものと化
合物［Ｖｌ）の０１を除去したものとをＭＳ ＮＴ存在
下で縮合させて、化合物〔■〕（Ｒｏ−オルトクロロフ
ェニル、 Ｒ２！ Ｃ！Ｆ３００、Ｒ３−アミノメチル
化ポリスチレン、ｎｍ ４、ｍ−６、’Ｐ＋１−１４、
Ｙｌｏ）を得た。ついで、これを前記実験（ａ）と同様
に濃アンモニア処理および８０％酢酸処理によってすべ
ての保護基をはずしたのち、旺ＬＣで精製して、化合物
（ｍ：１（Ｙ−０、ｐ＋ｑ−１２、ｍ−６）を得た。
合物［Ｖｌ）の０１を除去したものとをＭＳ ＮＴ存在
下で縮合させて、化合物〔■〕（Ｒｏ−オルトクロロフ
ェニル、 Ｒ２！ Ｃ！Ｆ３００、Ｒ３−アミノメチル
化ポリスチレン、ｎｍ ４、ｍ−６、’Ｐ＋１−１４、
Ｙｌｏ）を得た。ついで、これを前記実験（ａ）と同様
に濃アンモニア処理および８０％酢酸処理によってすべ
ての保護基をはずしたのち、旺ＬＣで精製して、化合物
（ｍ：１（Ｙ−０、ｐ＋ｑ−１２、ｍ−６）を得た。
なお、ＨＰＬＯでの化合物〔■〕の溶出パターンは、第
９図に示す通りであった。
９図に示す通りであった。
ピリジン共沸により無水にした化合物［：ＯＩ〕（Ｒ０
＝オルトクロロフェニル、１１ｍＨ％Ｂ’−ｓＴ、 ｐ
Ｗｌ） （１ｍｍｏｌ、４８０ ｍｇ ）にオルトクロ
ロフェニルホスホジベンゾトリアゾリドのジオキサ／溶
液（１，４ｍｍｏｌ ）を加えて１時間反応を行った。
＝オルトクロロフェニル、１１ｍＨ％Ｂ’−ｓＴ、 ｐ
Ｗｌ） （１ｍｍｏｌ、４８０ ｍｇ ）にオルトクロ
ロフェニルホスホジベンゾトリアゾリドのジオキサ／溶
液（１，４ｍｍｏｌ ）を加えて１時間反応を行った。
つ（・で、これに無水にしたモノトリフロロアセチル−
１，６−ジアミツヘキサン塩酸塩（１，８ｍｍｏｌ、４
５ｏｍｇ）および１−メチルイばダゾール（２，８ｍｍ
ｏｂ、２２０ ｍｇ）を加えて２時間反応を行った。以
後、実Ｍ （ａ）の（イ）と同様にして、化合物〔■〕
を得た。
１，６−ジアミツヘキサン塩酸塩（１，８ｍｍｏｌ、４
５ｏｍｇ）および１−メチルイばダゾール（２，８ｍｍ
ｏｂ、２２０ ｍｇ）を加えて２時間反応を行った。以
後、実Ｍ （ａ）の（イ）と同様にして、化合物〔■〕
を得た。
つぎに、化合物（Ｖｌ〕と化合物〔Ｖ〕とを用い上記実
験（ｄ）σ）（ロ）と同様の操作で化合物〔〜Ｉ′ｌｌ
（第２表参照）を得た。第１０図は、化合物〔ＹＩ！〕
を）ＬＰＬＣで精製した際の溶出パターンである。
験（ｄ）σ）（ロ）と同様の操作で化合物〔〜Ｉ′ｌｌ
（第２表参照）を得た。第１０図は、化合物〔ＹＩ！〕
を）ＬＰＬＣで精製した際の溶出パターンである。
なお、実験（＋１１および（ｅ）で合成した化合物の内
容を示せば、第２表の通りである。
容を示せば、第２表の通りである。
第２表
第１図は、本発明の化合物（ＩＶＩを合成する方法の一
例を示すフローチャートである。 第２図は、本発明の化合物〔ＩＶ〕を用いてオリゴヌク
レオチド誘導体〔Ｘ″ｌを合成する方法の一例を示すフ
ローチャートである。 第３図は、本発明の化合物（ｒｖ〕ｗ用（・てオリゴヌ
クレオチド誘導体〔■〕を合成する方法の一例を示すフ
ローチャートでｈ １．＞。 第４図は、本発明の化合物（ＩＶ）を合成するために用
いた化合物〔■〕を合成する方法の一例を示すフローチ
ャートである。 縁５図は、化合物〔■〕をＨＰＬＯで分離精製したとき
のクロマトグラムを模写したものである。 第６図は、実験（ａ）の化合物〔Ｘ〕をＨＰＬＩ：！で
分離精製したときのクロマトグラムを模写したものであ
る。 第、７図は、実験（１）ｌの化合物〔Ｘ〕をＨＰＬＣで
分離精興したときのクロマトグラムを模写したものであ
る。 第８図は、実験（Ｃ）の化合物〔Ｘ〕をＨＰＬＯで分離
精製したときのクロマトグラムを模写したものである。 第９図は、実験（ｄｌの化合物〔■〕を肝ＬＣで分離精
製したときのクロマトグラムを模写したものである。 第１０図は、実験（８１の化合物〔■〕をＨＰＬＯで分
離精製したときのクロマトグラムを模写したものである
。 第４図 ［Ｉ］ 第５図 ａ詩的間（８） 第６図 保Ｊ′ｇ時間（分） 児７図 保持Ｆｓ間（分） 光８図 保 持 時 間 （８） 児９図 保 持 ｖＪ 間 （分）
例を示すフローチャートである。 第２図は、本発明の化合物〔ＩＶ〕を用いてオリゴヌク
レオチド誘導体〔Ｘ″ｌを合成する方法の一例を示すフ
ローチャートである。 第３図は、本発明の化合物（ｒｖ〕ｗ用（・てオリゴヌ
クレオチド誘導体〔■〕を合成する方法の一例を示すフ
ローチャートでｈ １．＞。 第４図は、本発明の化合物（ＩＶ）を合成するために用
いた化合物〔■〕を合成する方法の一例を示すフローチ
ャートである。 縁５図は、化合物〔■〕をＨＰＬＯで分離精製したとき
のクロマトグラムを模写したものである。 第６図は、実験（ａ）の化合物〔Ｘ〕をＨＰＬＩ：！で
分離精製したときのクロマトグラムを模写したものであ
る。 第、７図は、実験（１）ｌの化合物〔Ｘ〕をＨＰＬＣで
分離精興したときのクロマトグラムを模写したものであ
る。 第８図は、実験（Ｃ）の化合物〔Ｘ〕をＨＰＬＯで分離
精製したときのクロマトグラムを模写したものである。 第９図は、実験（ｄｌの化合物〔■〕を肝ＬＣで分離精
製したときのクロマトグラムを模写したものである。 第１０図は、実験（８１の化合物〔■〕をＨＰＬＯで分
離精製したときのクロマトグラムを模写したものである
。 第４図 ［Ｉ］ 第５図 ａ詩的間（８） 第６図 保Ｊ′ｇ時間（分） 児７図 保持Ｆｓ間（分） 光８図 保 持 時 間 （８） 児９図 保 持 ｖＪ 間 （分）
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 下式〔IV〕で示されるものであることを特徴とするヌク
レオチド誘導体。 ▲数式、化学式、表等があります▼〔IV〕 〔ただし、ｍおよびｎはそれぞれ自然数であり、Ｒ＾０
はリン酸基の保護基であり、Ｒ＾１は水素、または５′
水酸基の保護基であり、Ｒ＾２は水素、またはアミノ基
の保護基であり、Ｒ＾３はアミノ基を官能基として具備
する担体であり、Ｙは酸素原子（−Ｏ−）またはイミノ
基（−ＮＨ−）である。〕
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59232941A JPS61112093A (ja) | 1984-11-05 | 1984-11-05 | ヌクレオチド誘導体 |
| US06/792,824 US4816569A (en) | 1984-11-05 | 1985-10-30 | Nucleotide derivative |
| EP85113988A EP0180945B1 (en) | 1984-11-05 | 1985-11-04 | Nucleotide derivative |
| CA000494505A CA1260930A (en) | 1984-11-05 | 1985-11-04 | Nucleotide derivative |
| DE8585113988T DE3570440D1 (en) | 1984-11-05 | 1985-11-04 | Nucleotide derivative |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59232941A JPS61112093A (ja) | 1984-11-05 | 1984-11-05 | ヌクレオチド誘導体 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61112093A true JPS61112093A (ja) | 1986-05-30 |
| JPH0468320B2 JPH0468320B2 (ja) | 1992-11-02 |
Family
ID=16947246
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59232941A Granted JPS61112093A (ja) | 1984-11-05 | 1984-11-05 | ヌクレオチド誘導体 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4816569A (ja) |
| EP (1) | EP0180945B1 (ja) |
| JP (1) | JPS61112093A (ja) |
| CA (1) | CA1260930A (ja) |
| DE (1) | DE3570440D1 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007142202A1 (ja) | 2006-06-06 | 2007-12-13 | Panasonic Corporation | ヌクレオチド鎖修飾方法 |
| JPWO2013122236A1 (ja) * | 2012-02-17 | 2015-05-18 | 味の素株式会社 | 塩基部保護オリゴヌクレオチド |
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|---|---|---|---|---|
| US4818681A (en) * | 1985-02-22 | 1989-04-04 | Molecular Diagnostics, Inc. | Fast and specific immobilization of nucleic acids to solid supports |
| US4950745A (en) * | 1986-10-30 | 1990-08-21 | Daicel Chemical Industries, Ltd. | Process for synthesis of oligonucleotides and compound for forming polymeric protecting group |
| US4994558A (en) * | 1986-12-24 | 1991-02-19 | Eli Lilly And Company | Immunoglobulin conjugates |
| CA1327358C (en) * | 1987-11-17 | 1994-03-01 | Morio Fujiu | Fluoro cytidine derivatives |
| JPH084519B2 (ja) * | 1987-12-25 | 1996-01-24 | エフ・ホフマン―ラ ロシュ アーゲー | ハイブリッド形成用担体およびその調整方法 |
| DE3916871A1 (de) * | 1989-05-24 | 1990-11-29 | Boehringer Mannheim Gmbh | Modifiziertes phosphoramidit-verfahren zur herstellung von modifizierten nukleinsaeuren |
| US6358931B1 (en) | 1990-01-11 | 2002-03-19 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for modulating RNA |
| US5359051A (en) * | 1990-01-11 | 1994-10-25 | Isis Pharmaceuticals | Compounds useful in the synthesis of nucleic acids capable of cleaning RNA |
| JPH07200714A (ja) * | 1993-12-28 | 1995-08-04 | Nec Corp | 光学記号読取装置 |
| WO2000056749A1 (en) | 1999-03-24 | 2000-09-28 | The Government Of The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | N-acylphosphoramidites and their use in oligonucleotide synthesis |
| WO2003048179A2 (en) * | 2001-12-03 | 2003-06-12 | The Government Of The United States Of America, Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Thermolabile hydroxyl protecting groups and methods of use |
| WO2006065751A2 (en) * | 2004-12-13 | 2006-06-22 | Government Of The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Cpg oligonucleotide prodrugs, compositions thereof and associated therapeutic methods |
| US8846885B2 (en) | 2012-02-17 | 2014-09-30 | Ajinomoto Co., Inc. | Oligonucleotide with protected base |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1529974A (en) * | 1974-10-15 | 1978-10-25 | Asahi Chemical Ind | Nucleotide derivatives and process for preparing the same |
| GB2037289B (en) * | 1978-10-31 | 1983-05-05 | Katsunuma N | Nucleoside derivatives and an antileukemial agent containing the same as an active ingredient |
| US4415732A (en) * | 1981-03-27 | 1983-11-15 | University Patents, Inc. | Phosphoramidite compounds and processes |
| US4417046A (en) * | 1981-08-24 | 1983-11-22 | Eli Lilly And Company | Process for isolating oligonucleotide product from a coupling reaction mixture |
| JPS5927900A (ja) * | 1982-08-09 | 1984-02-14 | Wakunaga Seiyaku Kk | 固定化オリゴヌクレオチド |
-
1984
- 1984-11-05 JP JP59232941A patent/JPS61112093A/ja active Granted
-
1985
- 1985-10-30 US US06/792,824 patent/US4816569A/en not_active Expired - Fee Related
- 1985-11-04 CA CA000494505A patent/CA1260930A/en not_active Expired
- 1985-11-04 EP EP85113988A patent/EP0180945B1/en not_active Expired
- 1985-11-04 DE DE8585113988T patent/DE3570440D1/de not_active Expired
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007142202A1 (ja) | 2006-06-06 | 2007-12-13 | Panasonic Corporation | ヌクレオチド鎖修飾方法 |
| JPWO2013122236A1 (ja) * | 2012-02-17 | 2015-05-18 | 味の素株式会社 | 塩基部保護オリゴヌクレオチド |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0468320B2 (ja) | 1992-11-02 |
| US4816569A (en) | 1989-03-28 |
| EP0180945A2 (en) | 1986-05-14 |
| EP0180945B1 (en) | 1989-05-24 |
| CA1260930A (en) | 1989-09-26 |
| EP0180945A3 (en) | 1987-02-04 |
| DE3570440D1 (en) | 1989-06-29 |
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