JPS6084249A - カルボン酸アミド基含有化合物の製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 カルぎン酸アミド結合およびペプチド結合の製法に閣し
ては多数の方法が知られている（たとえばＨｏｕｂｅｎ
−Ｗｅｙ１氏による「Ｍｅｔｈｏｄｅｎ　ｄｅｒＯｒｇ
ａｎｉｓｃｂｅｎ　Ｃｈｅｍｉｅ　Ｊ　（Ｍｅｔｈｏｄ
ｓ　ｏｆ　ＯｒｇａｎｉｃＣｈｅｍｉｓｔ、ｒｙ　）第
Ｘｖ＠第■部第１〜３６．４頁およびまたＡｎｇｅｗ　
Ｃｈｅｍｉｅ　９２　ｒ　１２９（１９８０）を参照さ
れたいり。すべてのこれらの方法は多様な成功を伴って
おり、ペプチド類の合成に必要であるが、ラセミ化の存
在しない基準および高収量でしかも容易に入手しうる出
発物質を用いて穏和な条件下で実施される（α接的方法
の基準を確実にすることを目的としている。

カルボン酸アミド類の製法はＥ、Ｐ、　Ａｌ−５６，６
１８号明細書により知られており、そこではカルがキシ
ル基含有化合物をジアルキルホスフィン酸無水物の存在
下において遊離アミン基を含有する化合物と反応させて
いる。反応中遊離されるジアルキルホスフィン酸は最初
に反応混合物に添加される過剰の有機塩基または塩基バ
ッファーと結合する。

本発明方法はペプチド類およびアミド類の経済的合成法
のために前記栄件を最適にする新規方法を示す。

本発明によればカルボン酸アミド基を含有する化合物、
特にオリゴペプチド類は遊離アミノ基を含有する化合物
、０にカルボキシル基が保膿されているアミノカルボン
酸誘導体またはペプチドをジアルキルホスフィン酸無水
物の存在下において遊離カルボキシル基を含有する化合
物、特にアミノ基がアシル化さ扛ているアミノカルボン
酸またはペプチドと反応させることによシ穏和な条件下
でしかも良好な収率で製造されうるということが見出さ
れた。この新方法は塩基の計量添加によシ反応中一定の
範囲内に反応混合物の水素イオン濃度を維持することか
らなる。

官能基を保穫するために導入された基はペプチド合成の
場合にはその後常套手段で除去されうる。

ジアルキルホスフィン酸の無水物は式ＩＲ （式中、Ｒはアルキルを表す）の化合物である。

式に示されている置換基Ｒは同一であるかまたは異なる
ことができる。両方のＰ原子が同一置換基を有する無水
物が好ましい。

本発明の範囲内ではＲがそれぞれ、好ましくは１〜４個
の炭素原子を有する低級アルキルである式■の無水物が
特に適当である。

本発明にしたがって使用されるジアルキルホスフィン酸
無水物は無色の液体である。それらは室温で安定であり
、分解せずに減圧下で蒸留されうる。それらは大抵の非
水性溶媒、特にたとえばクロロホルムまたはメチレンク
ロライドのような脂質溶媒中において、しかしまたたと
えばＤＭＦおよびＤＭＡのような極性溶媒中においても
容易に可溶性である。

ジアルキルホスフィン酸無水物の例としてはたとえばメ
チルエチルホスフィン酸無水物、メチルプロピルホスフ
ィン岐無水物、メチルブチルホスフィン岐無水物、ジエ
チルホスフィン酸無水物、ジ−ｎ−プロピルホスフィン
酸無水物およびジ−ローブナルホスフィン酸無水物があ
げられる。

リアルキルホスフィン酸無水物の製造はたとえば１′５
０〜１６０℃におけるジアルキルホスフィノイルクロラ
イドとアルキルジアルキルホスフィネートとの反応（Ｈ
ｏｕｂｅｎ−Ｗｅｙ１氏による「Ｍｅｔｈｏｄｅｎ　ｄ
ｅｒ　Ｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｎ　Ｃｈｅｍｉｅ　Ｊ　１
９６５、第Ｘ■巻第２６６頁以降）のようなそれ自体既
知の方法で実施されうる。ジアルキルホスフィン酸、そ
れらの塩またはエステルをボスグンと反応させる方法は
特に好ましい（独国特許第２．１２’？、５８３号明細
杏、独国特許出願公告第２．２２５．５４５号明細書１
１：参照されたい）。

本発明による方法は狭いＩＪＩＩ範囲内で好ましくはお
よそ一定のｐｌｌで混合された水性の単−系または２相
系において実施するのが好ましい。反応混合物のｐＨに
５〜１ｏであることが可能だが、有利には中性また社弱
酸性範囲にあるべきであり、５．０〜７．０　（７）　
ｐＨ値が特に好ましい。しかしながら、また合成を弱ア
ルカリ性範囲で実施することもａＪ能である。ｐＨはア
ルカリ金稿水酸化物の濃水溶液のｉＩ′計された添カｕ
ｔてよりコントロールされるのが好ましいが、しかしま
たたとえばＮ−エチルモルホリン、トリエチルアミンま
たは６個才での炭？　ｌｅａ、子を有するトリアルキル
アミンを使用することも可能である。

本発明方法によるオリゴ波プチドの１＋！！造のだめに
使用される出発′１勿′ｎは一方では保護さｔまたカル
ボキシル基を有するアミノ酸″＋たけペプチドであり、
弛方でに［保護さ）１−たアミノ基を有するアミノ酸寸
介けはプチドである。

カルボキシル基保乃のた。Ｖ）に−！プチド合成で慣ｆ
ｊＩｊの、すべでの保護基を１史川することが可使であ
る。たとえばメタノール、エタノールおよび第３級ブタ
ノ・−ルのような直鎖状ｆたは分９鎖状の脂肪族アルコ
ールのエステルが’：！ｊ　ｋｃ適当υある。＋たたと
えばベンジルアルコールまたはジフェニルメチルカルビ
ノールのような芳−＆　Ｉｆ？１１／ｊ　ｍｔ’　フル
コールのエステルも使用できる。

同様Ｑこ、アミノ基保護のためにペプチド合成で慣例の
すべての保詐基を［実用することが可能である。特に適
当な基の例としてはたとえばカルボベ〕／ゾキシ基およ
びカルボ−第３級ブチルオキシ基があげられる。

溶媒としてはたとえばメチレンクロライＰ、クロロホル
ム、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、ジ
オキサンまだわしテトラヒドロフランのようなペプチド
合成で慣用されるすべての無水不活性溶媒を使用するこ
とができる。

この反応のために単−相の混合水性操作で使用されうる
溶媒は水および水と混和性の有機溶媒（たとえばジオキ
サン、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミドまだ
はジメチルアセトアミド）との混合物である。この型の
系を使用するのは主に水に可溶性であるペプチドを結合
させる際に特に有利である。

この反応のフコめの２相ｉｊ４　ｆ、、−７１ζｌ’ｌ
Ｅ　＋・・ｈ作では各々が水との不均一混合物であるた
とえは１′１１月１タエチル、ｆｉｉ：ｒＱプ′ロビル
、１〜′ｆ：Ｉ俊ｎ−フ゛チル、メチレンクロライド、
グリコールジメチルエーテル、３−メチルテトラヒドロ
フランも・よびクロロホルムのような系をｆ実用すると
とがでへろ。

Ｉｊｆ則として、反応Ｉ″ｔ、ｔ、十分化４！νに行わ
れる。穏和な加温は一丁にはならない。たとえば３０℃
以上のより高い温度は特にペプチド合成ではラセミ化の
危険があるので励められない。

０〜６０℃の反応温度が好ましいが、５〜２５℃が！持
に好ましい。

本発明方法は初めて、ｐＨがおよそ一定になる際に使用
される堰塞の消費により反応の経過を追跡することを可
能にしている。このためにこの反応は有利にはカルボキ
シル成分：アミン成分およびジアルキルホスフィン酸無
水物の各反応成分を含有する混合水性系を激しく用会し
ながら自動記録ヴｌ−スタット中で実施されるのが好゛
ましい。時間の置数としての塩基の消ψトのレコーダー
によ東用供されるグラフは反応の終了に近づいて横近線
になる曲線を示す（図に示された曲線を参照されたい）
。すなわち、本発明方法はその合成反応の終点を直接的
方法で検出することを可能々らしめる。記載の方法を使
用して測定さり、るこれらの混合水性系におけるパ児か
けの”　ＩＪＨ値がこれらの系における真のｐＨ値と異
なシうる点に注目すべきである。

ノセッファー溶液カシアルキルホスフィンｌ：ｉｊ９　
ｆトラップさせるための既知方法で使用される場合には
無機塩からなる過剰の塩が各パッチの母液中に生じるこ
とは避けられない。この方法を工業的に実施する場合に
は生成したジアルキルホスフィン酸を縮合剤から回収す
ることを困雛にししかも流出液問題を生じうる。

はんの限られた程度で水と混和性のリポイド相について
のアルカリ溶液からの抽出による反応生成物の単離中、
本発明方法のこの変法で塩基としてアルカリ金属水酸化
物が使用される際に反応経過中に生成されるアルカリ金
属塩は、それらの比較的高い親水性のためおよびいくつ
かのＰＲ１＠有磯塩基が使用される際に生成する塩に対
比して比較的容易に除去される。さらに、抽出される第
６級塩基によるこのリポイド相の汚染はこの方法では避
けられる。

本発明方法は実施するのに直接的でありそして高い光学
純度で高収率においてペプチドヲ提供する。さらに、そ
れは経済的であり、かつ環境的に許容しうる。

ジアルキルホスフィン酸無水物は低分子量を有し、容易
に得られかつ梢ｍｉれそして単位重量当たり高い割合の
反応性基を有し、しかも高い親油性を有する。これらの
ジアルキルホスフィン酸無水物および対応するジアルキ
ルホスフィン酸は脂質可溶性である。このことが適当な
脂質溶媒を「実用しての最初の沈殿王権により水溶性ペ
プチド誘導体を処理することを可能にする。

はプチド合成中にジアルキルホスフィン酸無水物から得
られるジアルキルホスフィン酸は合成反応後に残留する
溶液から回収されうる。この合成からの比較的多量の水
性母液よりのリアルキルホスフィン酸の回収はたとえば
クロロホルムおよびイソブタノールのような溶媒での抽
出、これに続く蒸留による後処理により実施されうる。

これに関連してリアルキルホスフィン酸が分解せずに真
空蒸留されうるということは特に工業上ｒ！を要である
。ついでこうして後処理から回収されたジアルキルホス
フィン酸は秒置特許出願公告第２，２２５，５４５号明
卸１書に記載の方法により対応するリアルキルホスフィ
ン酸無水物に容易ｌ（変慎されうる。

記載された混合水性操作ではイ′Ｊ４’ｉｋ塩基をアル
カリ金属水１・ぼ化物溶液により１１？き換えることが
可能であり、これは前記合成後の後処理中にジアルキル
ホスフィン酸の回収をかなり簡単にする。この場合１（
は抽出工徨を省くことが可能で、ｂる。ついで単離後に
ジアルキルホスフィン酸は合成からの蒸発された母液よ
りＩα接妓留されうるかあるいは２相操作ではそれはリ
ポイド相の除去後に１＋夕性化および抽出により水性相
から回収される。ついで中性の無栂地か水性相に残留す
る。

実施例１　カルボベンゾキシグリシンのエチルエステル 一５℃で攪拌しながら１２０ｄの酢酸エチル中における
１１５＃（０，０５モル）のカルボベンゾキシグリシン
の溶液に１０．９（（１０５モル）のＨ−ＧＬｙ−ＯＣ
Ｈ３・ＨＣＩを加える。生成する懸濁液に２０．９のメ
チルエチルホスフィン酸無水物を滴加する。ついで反応
混合物の田を、自動滴定器を使用して４ＮＮａＯＨを滴
加することにょシσ〜１０℃の温度で７．０に調整しそ
して高速攪拌で完全に混合される／セッチを、自動滴定
器に接続されたレコーダーが水酸化ナトリウム溶液の消
費曲線が時間軸に関して漸近するようになったことを示
すまでこの…に維持する。これは約６０分稜の状況であ
る。次に酢酸エチル相を除去し、５０ｄの飽和炭酸水素
ナトリウム溶液で２回抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥さ
せついで室温において２％空中で溶媒を除去すると８１
℃の融点を有する１２．２！ｌ’（理論値の８４％）の
２−ジペプチドエステルが得られる。

実施例２　カルボベンゾキシフェニルアラニンシクロへ
キシルアミド ３．０．９（０，０１モル）のＺ−Ｐｈｅ−ＯＨおよび
１、　Ｄ　、？　（０，０１モル、１２ｍ６）のシクロ
ヘキシルアミンを２０　ｍｌのテトラヒドロフラン卦よ
び５ゴの水の混合物に溶解する。反応混合物を−５”（
：、　Ｉｃ　冷却稜４　ｇのメチルエチルホスフィン酸
無水物を攪拌しながら加え、その反応溶液のｐＨを４　
Ｎ　ＮａＯＨで６．０に調整しそして反応時間中、実施
例１に記載のように水酸化ナトリウム溶液をｉｌｌして
添加することにより一定に′維持する。

この反応はアルカリ金總水酸化物の消費かられかるよう
に６０分後に実質的−に完了する。反応溶液を室温で真
空中において蒸発させ、残留物を１酢酸エチルと一緒に
しそしてその酢酸エチル溶液を５％強度の硫酸水素カリ
ウム溶液、飽和炭酸水素ナトリウム溶液および水で洗浄
し、硫酸す）　ＩＪウム上で乾燥させついで室温で真空
中において溶媒を除去しそして生成物をＰ２Ｏ５上で真
空中Ｋ　＋、−いて乾燥させて融点が１６７℃である３
、０Ｉの目的生成物を得る。〔α〕；Ｏ＝−ｇ、σ（ｃ
＝１、ＤＭＦ　）。

実施例３　Ｚ　−Ｔｒｐ　−ＧＬｙ−ＯＣＨ，５３，３
５，９（［１０１モル）のＺ　−Ｔｒｐ−ＯＨを２０　
ｒｒｔｌの酢酸イソプロピルに溶Ｙ１７シ、これに１．
２５　ｇ（α０１モル）のＨ−ＧＬｙ−ＯＣＨ３を加え
、その懸濁液を激しく攪拌しついで一５℃に冷却しそし
てこの温度で４．０ｄのメチルエチルホスフィン酸無水
物を加え、同時に実施例１に記載のように自動滴定器を
使用してその田を計量された４Ｎ断働　− ＮＩＩＯＨの添加により５．７に調整する。各相を完全
に混合すると反応はω分以内で終了する。酢酸エチル相
を除去しついで実施例２に記載のように彼処Ｊ即する。

収ｔ　：　３．５３　Ｉ！（理論値の８６チ）、〔（χ
鑞０＝−１３，５°　（ｃ　＝　０．１　、氷酢酸）。

実施例４　Ｚ　−Ｐｈｅ−Ａｒｇ’−Ｔｒｐ、−（）Ｌ
ｙ　−０（ＪＴ３２５ｔａｌの酢酸イソプロピル中にお
ける２、２６１！（０，［’］　０５モル）のＺ　−Ｐ
ｈｅ　−Ａｒｇ−ＯＨの溶液に１．５’５ｇ（０，０１
１５モル）のＨ’ｒｒｐ　ＧＬｙＯＣＨｓ’ＨＣＩを加
え、その懸濁液を？孜しく攪拌しついで一５℃に冷却す
る。ついで実施例１に記載のように４Ｎ付ａＯＨを使用
してそのｐＨを５．２の一宇に維持しながら、２　ｍ１
３のメチルエチルホスフィン酸無水物を滴加する。５分
後反応？Ｊ−／ｊ合物の副（年は故１ｇにより室温に達
する。反応時間に関すＺ。

ＮａＯＨ消費のグラフによシ示坏れるように７１〕分後
忙反応は実質的に完了する。次に酢酸エチル相を除去し
、水および飽和炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄しそして
反応生成物を室温での真空中における蒸発および残留物
の無水ジエチルエーテルでの温浸によりその乾燥溶液か
ら単離する。

エタノール／エーテルからの再結晶後の収骨：３．Ｏ，
！？（理論値の８４．５係）、〔α）：０＝２　ｓ、γ
（ｃ＝０．１　、ＤＭＦ　）。

実施例５　Ｚ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）　−Ｖａｌ　−Ｔｙｒ
−ＯＣＨ３１、９１９（０，００５モル）のＺ　−Ｔ−
＋ｙｓ　（Ｂｎｃ　）−ＯＨを水で飽和されている２５
Ｈの酢酸ブチル中に溶解し、これに１．６５ｇ（０，０
０５モル）のＨ−Ｖａｌ　−Ｔ７ｒ−ＯＣＨ３・Ｔ−Ｔ
Ｃｌを加え、その反応混合物を激しく攪拌しついで一５
℃に冷却しそしてその急速に攪拌された混合物のｐｆ（
を実施例１に記載のように４　Ｎ　ＮａＯＨでｚＯにし
ついでそれを反応時間（７０分）中この値に維持する。

この反応時間の最初の１０分間中の温度は一り℃〜Ｏ℃
に維持しついで放＋ｒｔ　シて室γ１１！に加温させし
める。目的生ＩＪｙ物を含有するｒＶ’ｐ　ＩＩＩ＋ｘ
ブチル相の紗処理は実施例２ｖこ示されたように実施さ
れる。

エタノール／エーテルからの再結晶後の収“菌：３．０
ｇ（理論値の９１係）、〔α）ｏ＝−２５’（ｃ＝１、
エタノール）。

実施列／）　Ｚ　−ＧＬｙ　−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−ＯＣＨ
３３ｒｔｔｌのリメチルアセトアミドおよび０．５ｍｅ
の水中における６　４２　ｖｎｇのＺ　−Ｊ］Ｌｙ−Ｌ
ｅｕ−ＯＨおよび４４９　ｍｑのＨ−八ｒｇ−ＯＭｅ−
ＨＣＩの溶液に１．３ｍ６のメチルエチルホスフィン酸
併水物を加え、その反応中のｐＨをｐＨ−スタットを使
用してＮ−エチルモルホリンおよび水（１：１、容量／
容ＩＴ＋）の混合物で７２に維持する。反応はレコーダ
ーのグラフにしたがって４０分後に完了する。、徒処理
は実施例２に記載のように実施するが、しかしそこに記
載されている５ｑ６硫酸水素カリウム溶液による酢酸エ
チル相の抽出は実施しない。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）ジアルキルホスフィン酸無水物の存在下においてカ
   ル？キシル基を含有する化合物を遊離アミン基を含有す
   る化合物と反応させることによシカル、１／ン酸アミド
   基含有化合物を製造するに際して塩基の計量添加によシ
   反応混合物中の水素イオン濃度を反応中一定の範囲内に
   維持しそして反応が終了した後に適切ならば他の官能基
   を輝ｌ血するために導入された基を除去することからな
   るカルがン酸アミド基含有化合物の製法。 ２）ペプチド類製造のための前記特許請求の範囲第１項
   に記載の方法。 ３）反応が均一または不均一の混合水性媒体中で実施さ
   れる前記特許請求の範囲第１項また鉱第２項に記載の方
   法。 ４）反応中の〆Ｉが塩基の計二蹟・添加によシ５〜１０
   に維持される前記特許請求の範囲第６項に記載の方法。 ５）使用される塩基がアルカリ金属水酸化物の水溶液で
   ある前記特許請求の範囲第１〜４項のいずれか一項に記
   載の方法。 ６）トリアルキルアミンが塩基として使用される前記性
   Ｗ＋　請求の範囲第１〜４項のいずれか一項に記載の方
   法。 ７）合成反応の終点がｐｌｌ−スタットにより記録され
   たグラフ（塩基の消費対反応時間）の助けによって定め
   られる前記特許請求の範囲第１〜６項のいずれか一項に
   記載の方法。 ８）反応が０〜３０℃で実施される前記特許請求の範囲
   第１〜７項のいずれか一項にＲｅ載の方法。