JPS6066981A - 不溶化ペニシリンアミダ−ゼおよびその製法 - Google Patents
不溶化ペニシリンアミダ−ゼおよびその製法Info
- Publication number
- JPS6066981A JPS6066981A JP59162771A JP16277184A JPS6066981A JP S6066981 A JPS6066981 A JP S6066981A JP 59162771 A JP59162771 A JP 59162771A JP 16277184 A JP16277184 A JP 16277184A JP S6066981 A JPS6066981 A JP S6066981A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- enzyme
- dialdehyde
- penicillin
- amidase
- immobilized
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P37/00—Preparation of compounds having a 4-thia-1-azabicyclo [3.2.0] heptane ring system, e.g. penicillin
- C12P37/06—Preparation of compounds having a 4-thia-1-azabicyclo [3.2.0] heptane ring system, e.g. penicillin by desacylation of the substituent in the 6 position
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P35/00—Preparation of compounds having a 5-thia-1-azabicyclo [4.2.0] octane ring system, e.g. cephalosporin
- C12P35/02—Preparation of compounds having a 5-thia-1-azabicyclo [4.2.0] octane ring system, e.g. cephalosporin by desacylation of the substituent in the 7 position
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/07—Bacillus
- C12R2001/11—Bacillus megaterium
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
発明の分野
本発明は不溶化ペニシリンアミダーゼおよびその製法に
関する。また、本発明は該不溶化ペニシリンアミダーゼ
を用いてペニシリンの６位またはセフ丁ロブ＋＋！ＩＩ
ンの７１ずｆＶ本土心哨−スフェニル酔耐９またはフェ
ノキシ酢酸を離脱させる方法にも関する。
関する。また、本発明は該不溶化ペニシリンアミダーゼ
を用いてペニシリンの６位またはセフ丁ロブ＋＋！ＩＩ
ンの７１ずｆＶ本土心哨−スフェニル酔耐９またはフェ
ノキシ酢酸を離脱させる方法にも関する。
発明の背景
有機および無機の種々な支持体物質の表面上への固定化
による酵素の不溶化は、通常可溶性の蛋白質の分殖およ
び再利用を可能ｌこする技術であって、広く利用されて
いる。精製または部分的ｉこイ青製した酵素は吸着、封
じ込め（ｃｎｉｒａｐｍｃｎりおよびマイクロカプセル
化のような物理的方法によって、あるいは極めて多種多
様の不溶性物質に対するイオン結合、または共有結合な
どの化学的方法によっても固定化できる。
による酵素の不溶化は、通常可溶性の蛋白質の分殖およ
び再利用を可能ｌこする技術であって、広く利用されて
いる。精製または部分的ｉこイ青製した酵素は吸着、封
じ込め（ｃｎｉｒａｐｍｃｎりおよびマイクロカプセル
化のような物理的方法によって、あるいは極めて多種多
様の不溶性物質に対するイオン結合、または共有結合な
どの化学的方法によっても固定化できる。
酵素沈澱の一般的な試みの一例は、米国特−許第３７’
３６２３１号に開示されており、ここでは、酵素の分散
水溶液を大過剰量のタンニン酸で処理して酵素−タンニ
ン醇複合体を形成し、その後、過剰のグルタルアルデヒ
ドと処理して酵素−タンニン酸グルタルアルデヒド混合
物を得、遠心によって溶液より分離する。ここで該発明
者らは、充填カラム内にて用いるために、該複合体をケ
イソウ土などのような不活性な担体または支持体と混合
することを提案しているが、該複合体が、特に、粒状ま
たは結晶状である場合は得られた生成物を直接用いても
よい。
３６２３１号に開示されており、ここでは、酵素の分散
水溶液を大過剰量のタンニン酸で処理して酵素−タンニ
ン醇複合体を形成し、その後、過剰のグルタルアルデヒ
ドと処理して酵素−タンニン酸グルタルアルデヒド混合
物を得、遠心によって溶液より分離する。ここで該発明
者らは、充填カラム内にて用いるために、該複合体をケ
イソウ土などのような不活性な担体または支持体と混合
することを提案しているが、該複合体が、特に、粒状ま
たは結晶状である場合は得られた生成物を直接用いても
よい。
エツソエリヒ７− コリ（Ｅｓｃｈｃｒｉｃｈｉａ ｃ
ｏｌ ｉ）およびハシ、ラス・メガテリウム（Ｂａｃｉ
１１旧ｍｃｇａＬｃ口聞りの双方から得られるペニシリ
ンアミダーゼは、一般に、細胞または他の不活性支持体
の内部における酵素のカプセル化あるいはそれらの表面
上への固定化のいずれかからなる数多く ′の方法によ
って固定化されている。イー・コリ（Ｅ、ｃｏｌりの細
胞内酵素は、微生物細胞全体をグルグルアルデヒドで処
理して細胞凝集物を形成させることにより、そのまま固
定化されている。この方法に関する別法は、インド画性
ｉＦ第１３９９０８号に開示されており、この方法ては
イー・コリの細胞１を破壊し、ペニシリンアミダーゼを
部分的に精製し、細胞質蛋白質をグルタルアルデヒドで
架橋して綿状沈澱を得ている。また、費用のかかる細胞
破壊および酵素精製工程の後に、該細胞質蛋白質を合成
繊維内に取り込むこともぜなわれている。ビー・メガテ
リウム（１３，ｍｃｇ；ｔＬｃｒｉｕｎりより産生され
る細胞外酵素は、ベントナイト上への吸＞”Ｊｌこよっ
て固定化されている。「）１ｊ記両微生物由来のペニシ
リンアミダーゼは、ペニシリン・マイセリウム（Ｐｅｎ
ｉｃｉｌｌｉｎ ｍｙｃｃｌｉｕｍ）およびハシラス・
メガテリウムの細胞の表面上に固定化されている（ドイ
ツ公開公報第２８４９７６４号）。
ｏｌ ｉ）およびハシ、ラス・メガテリウム（Ｂａｃｉ
１１旧ｍｃｇａＬｃ口聞りの双方から得られるペニシリ
ンアミダーゼは、一般に、細胞または他の不活性支持体
の内部における酵素のカプセル化あるいはそれらの表面
上への固定化のいずれかからなる数多く ′の方法によ
って固定化されている。イー・コリ（Ｅ、ｃｏｌりの細
胞内酵素は、微生物細胞全体をグルグルアルデヒドで処
理して細胞凝集物を形成させることにより、そのまま固
定化されている。この方法に関する別法は、インド画性
ｉＦ第１３９９０８号に開示されており、この方法ては
イー・コリの細胞１を破壊し、ペニシリンアミダーゼを
部分的に精製し、細胞質蛋白質をグルタルアルデヒドで
架橋して綿状沈澱を得ている。また、費用のかかる細胞
破壊および酵素精製工程の後に、該細胞質蛋白質を合成
繊維内に取り込むこともぜなわれている。ビー・メガテ
リウム（１３，ｍｃｇ；ｔＬｃｒｉｕｎりより産生され
る細胞外酵素は、ベントナイト上への吸＞”Ｊｌこよっ
て固定化されている。「）１ｊ記両微生物由来のペニシ
リンアミダーゼは、ペニシリン・マイセリウム（Ｐｅｎ
ｉｃｉｌｌｉｎ ｍｙｃｃｌｉｕｍ）およびハシラス・
メガテリウムの細胞の表面上に固定化されている（ドイ
ツ公開公報第２８４９７６４号）。
グルタルアルデヒドは、他の二官能性架橋試薬占同様Ｉ
こ、固体の不活性支持体上への酵素の固定化：不活性ゲ
ル内で固定化され得る可溶性ポリマーの形成、ならびに
、高度に架橋された蛋白質ゲルの形成に広く用いられて
いる。また、グルグルアルデヒドは、細胞内酵素を産生
ずる微生物、ｌ１１１胞を固定化することにまってそれ
を固定化するのｌこも用いられてきた。グルタルアルデ
ヒドは、蛋白質の過度の変性および失活を起さないので
酵素を支持体物質へ架橋するのに優れた試薬である。
こ、固体の不活性支持体上への酵素の固定化：不活性ゲ
ル内で固定化され得る可溶性ポリマーの形成、ならびに
、高度に架橋された蛋白質ゲルの形成に広く用いられて
いる。また、グルグルアルデヒドは、細胞内酵素を産生
ずる微生物、ｌ１１１胞を固定化することにまってそれ
を固定化するのｌこも用いられてきた。グルタルアルデ
ヒドは、蛋白質の過度の変性および失活を起さないので
酵素を支持体物質へ架橋するのに優れた試薬である。
酵素を不溶化するのに固体支持体を用いると、＄ ？ｒ
： ４ルｉ−ｆ ｔ−１，１’＋（以＋ Ｑ ｎ 〜Ｑ
Ｑ Ｑ ４）ｉ７「オろシーめに召ニ成物の活性容量
比は減少し、そのため、かかる調製物の比活性（ｓｐｃ
ｃｉ［ｉｃ ａｃｔｉｖｉｔγ）は制限される。さらに
、固体支持体」二に吸着された酵素は弱い物理的な力に
より固定された一層または最大数層からなる層により不
均一に該支持体を覆っており、使用中の酵素の再溶解に
より、必然的に触媒活性の低下を生ずる。支持体に対し
て共有結合された酵素は、より強固に保持されるが、酵
素を支持体へ結合さぜる化学反応中に、変性、活性部位
の遮断、または支持体表面の八による活性部位との反応
の結果、極めて著しい活性損失を生ずることが多く、そ
のため酵素の活性カ月代下する。また、固体支１，１ｊ
体」−に固定化された酵素の表面層は、酵素の活性一部
位を物理的に覆いｆ４Ｊる表面活性剤、脂肪酸エステル
お」：び他の物質により不活性化を受けやすい。
： ４ルｉ−ｆ ｔ−１，１’＋（以＋ Ｑ ｎ 〜Ｑ
Ｑ Ｑ ４）ｉ７「オろシーめに召ニ成物の活性容量
比は減少し、そのため、かかる調製物の比活性（ｓｐｃ
ｃｉ［ｉｃ ａｃｔｉｖｉｔγ）は制限される。さらに
、固体支持体」二に吸着された酵素は弱い物理的な力に
より固定された一層または最大数層からなる層により不
均一に該支持体を覆っており、使用中の酵素の再溶解に
より、必然的に触媒活性の低下を生ずる。支持体に対し
て共有結合された酵素は、より強固に保持されるが、酵
素を支持体へ結合さぜる化学反応中に、変性、活性部位
の遮断、または支持体表面の八による活性部位との反応
の結果、極めて著しい活性損失を生ずることが多く、そ
のため酵素の活性カ月代下する。また、固体支１，１ｊ
体」−に固定化された酵素の表面層は、酵素の活性一部
位を物理的に覆いｆ４Ｊる表面活性剤、脂肪酸エステル
お」：び他の物質により不活性化を受けやすい。
細胞内に酵素を固定化または安定化させ、かつ、細胞凝
集物を形成して所望大のフロックを得るグルグルアルデ
ヒドを用いた微生物細胞全体に対する処理は、卸！胞が
大量の不活性な細胞物ｒｒを含むため、到達可能な活性
によりその使用が限定される。また、酵素を産生ずる微
生物の能力は、固定化凝集物の比活性を制限する。この
場合、酵素は表１ｒＩｉ固定化の場合よりも不活性化試
薬に対してはるかｌこ安定である。その結果、かかる調
製物の寿命は、通當より畏くなる。この方法の主な欠点
としては基質および生成物の両方に対する拡散抵抗か増
加し、そのために実際の適用において極めて反応速度が
遅くなることである。
集物を形成して所望大のフロックを得るグルグルアルデ
ヒドを用いた微生物細胞全体に対する処理は、卸！胞が
大量の不活性な細胞物ｒｒを含むため、到達可能な活性
によりその使用が限定される。また、酵素を産生ずる微
生物の能力は、固定化凝集物の比活性を制限する。この
場合、酵素は表１ｒＩｉ固定化の場合よりも不活性化試
薬に対してはるかｌこ安定である。その結果、かかる調
製物の寿命は、通當より畏くなる。この方法の主な欠点
としては基質および生成物の両方に対する拡散抵抗か増
加し、そのために実際の適用において極めて反応速度が
遅くなることである。
発明の概要
本発明は、固体粒状の非水溶性分子間架橋されたベニシ
リンアミダーゼージアルデヒドイを加物（ジアルデヒド
は５〜７の炭素原子を含む）、その製法および該イ」加
物を触媒として用いる６−アミツヘニノラン酸オよび７
−アミノセファロスポラン酸の製法を提供するものであ
る。
リンアミダーゼージアルデヒドイを加物（ジアルデヒド
は５〜７の炭素原子を含む）、その製法および該イ」加
物を触媒として用いる６−アミツヘニノラン酸オよび７
−アミノセファロスポラン酸の製法を提供するものであ
る。
発明の詳細
な説明の自己固定化付加物の製造に用いられるアミダー
ゼは、ビー・メガテリウムＡＴＣ：Ｃ１４９４５を代表
とするバシラス・メガテリウム菌株がら都合よく得るこ
とができる。
ゼは、ビー・メガテリウムＡＴＣ：Ｃ１４９４５を代表
とするバシラス・メガテリウム菌株がら都合よく得るこ
とができる。
ペニシリンアミダーゼ源としてバシラス・メガテリウム
を選択することは、幾つかの理由で有利である。該酵素
は、細胞外酵素として産生され、該微生物が増殖するブ
ロス［１月こそれ自体が分泌される。ペニシリンアミダ
ーゼは、バソラス・メガテリウム菌株によって産生され
る数種の細胞外（ＴＥ白質のうちのひとつにすぎないが
、他の細胞夕１蛋白質に比較して多量に存在する。醗酵
ブロスの濃縮は、いくらかの分子債の小さい蛋白質を除
ノモすることによってペニシリンアミダーゼの割合をさ
らｌこ増加させ、不溶化調製物中にて得られる極めて高
い比活性を可能とする。同等の活性を細胞内ペニシリン
アミダーゼを産生ずるエツシエリヒア・コリのような微
生物によって得るのは、細胞内ペニシリンアミダーゼが
多くの他の細胞蛋白質と共ζこ存在し比活性が弱まるた
めに難しい。イー・コリ由来の該酵素の比活性を増加す
るには、細胞を破壊し、複雑で費用のかかる方法１こよ
って酵素を精製しなければならない。
を選択することは、幾つかの理由で有利である。該酵素
は、細胞外酵素として産生され、該微生物が増殖するブ
ロス［１月こそれ自体が分泌される。ペニシリンアミダ
ーゼは、バソラス・メガテリウム菌株によって産生され
る数種の細胞外（ＴＥ白質のうちのひとつにすぎないが
、他の細胞夕１蛋白質に比較して多量に存在する。醗酵
ブロスの濃縮は、いくらかの分子債の小さい蛋白質を除
ノモすることによってペニシリンアミダーゼの割合をさ
らｌこ増加させ、不溶化調製物中にて得られる極めて高
い比活性を可能とする。同等の活性を細胞内ペニシリン
アミダーゼを産生ずるエツシエリヒア・コリのような微
生物によって得るのは、細胞内ペニシリンアミダーゼが
多くの他の細胞蛋白質と共ζこ存在し比活性が弱まるた
めに難しい。イー・コリ由来の該酵素の比活性を増加す
るには、細胞を破壊し、複雑で費用のかかる方法１こよ
って酵素を精製しなければならない。
ペニシリンアミダーゼの自己固定化において架橋試薬と
して用いられるジアルデヒドは、グルタルアルデヒド（
１，５−ペンタンジアール）、アジポアルデヒド（１，
６−ヘキサンジアール）または１．７−へブタンジアー
ルのような容易に入手できるジアルデヒドから選択され
る。これらのジアルデヒドのうち、経済的で、かつ、架
橋ｌ１１ｊの酵素の変性を最少限にとどめることからグ
ルタルアルデヒドが好ましい。
して用いられるジアルデヒドは、グルタルアルデヒド（
１，５−ペンタンジアール）、アジポアルデヒド（１，
６−ヘキサンジアール）または１．７−へブタンジアー
ルのような容易に入手できるジアルデヒドから選択され
る。これらのジアルデヒドのうち、経済的で、かつ、架
橋ｌ１１ｊの酵素の変性を最少限にとどめることからグ
ルタルアルデヒドが好ましい。
ペニンリーンアミダーゼージアルデヒド（＝ｔ 加物Ｌ
Ｌ、種々の天然ペニシリン、好ましくはペンジルペニン
ジン（Ｐｅｎ Ｇ）マｔ：はフエ／キンメチルペニンリ
７ （Ｐｃｎ Ｖ）の加水分解による６−アミツペニソ
ラ７酸（６−ＡｐＡ）の生成において、あるいはベンジ
ルセファロスポリンＣまたは３−メチル−７−フエ／キ
シアセ°ドアミド−Δ３−セフェムー４−カルボキンレ
ートおよびその同族誘導体の加水分密による７−アミノ
セファロスポラン酸（７−ＡにＡ）または７−アミツー
ジスアセトキシ−セファロスポラン酸（７−ＡＩ）ＣＡ
）の形成にあたり、反復的に長期間使用するに適した化
学的および物理的性質を示す。
Ｌ、種々の天然ペニシリン、好ましくはペンジルペニン
ジン（Ｐｅｎ Ｇ）マｔ：はフエ／キンメチルペニンリ
７ （Ｐｃｎ Ｖ）の加水分解による６−アミツペニソ
ラ７酸（６−ＡｐＡ）の生成において、あるいはベンジ
ルセファロスポリンＣまたは３−メチル−７−フエ／キ
シアセ°ドアミド−Δ３−セフェムー４−カルボキンレ
ートおよびその同族誘導体の加水分密による７−アミノ
セファロスポラン酸（７−ＡにＡ）または７−アミツー
ジスアセトキシ−セファロスポラン酸（７−ＡＩ）ＣＡ
）の形成にあたり、反復的に長期間使用するに適した化
学的および物理的性質を示す。
本発明のペニシリンアミダーゼ−ジアルデヒド（＝ｊ加
物は、何ら他の支持体を要しない。該酵素−ジアルデヒ
ド付加物は、自己支持を行ない、その使用中において酵
素の分解による非常に緩やかな活性の低下を受ける。該
構造は好ましい機械的特性を酵素粒子に伺与して、撹拌
反応器、流動床またはカラムのような種々のタイプの酵
素反応器中における酵素の使用を可能ｌこし、沈降およ
びデカンテーション、ηゴ過または遠心による反応溶液
からの酵素の分離を容易として、ハツチ式、半連続式ま
たは連続式の操作による前記反応を可能とする。固定化
中、活性でない（不活性な）支持体物質は使用しないの
で、該固定化酵素の比活性は非常に高くなる。このため
、反応に使用されるべき触媒の量を非常に少なくして懸
濁された固体の容量および粘度を減少させることができ
、反応器の種類および形状に広い選択の余地を１５える
。
物は、何ら他の支持体を要しない。該酵素−ジアルデヒ
ド付加物は、自己支持を行ない、その使用中において酵
素の分解による非常に緩やかな活性の低下を受ける。該
構造は好ましい機械的特性を酵素粒子に伺与して、撹拌
反応器、流動床またはカラムのような種々のタイプの酵
素反応器中における酵素の使用を可能ｌこし、沈降およ
びデカンテーション、ηゴ過または遠心による反応溶液
からの酵素の分離を容易として、ハツチ式、半連続式ま
たは連続式の操作による前記反応を可能とする。固定化
中、活性でない（不活性な）支持体物質は使用しないの
で、該固定化酵素の比活性は非常に高くなる。このため
、反応に使用されるべき触媒の量を非常に少なくして懸
濁された固体の容量および粘度を減少させることができ
、反応器の種類および形状に広い選択の余地を１５える
。
従来技術の固定化システムのように酵素４１．を製物の
比活性が低い場合では、実用の範囲、特に、基質または
生成物（ペニシリンまたは６−ＡＰＡのような）が不安
定で、反応を行なうのに必要な条件下で望ましくない副
生物への分解が生ずるような場合においては、反応の持
続を維持するため１こ多量の触媒を使用しなければなら
ない。反応時間を短くし、かつ、収率を改善するには、
通常の固定化酵素では、反応溶液の容量に対して過剰の
多量の酵素を用いなけれはならない。このような場合に
おける唯一の実用的方法は、反応溶液を酵素を充填した
反応床またはカラムに通すことであるか、これには幾つ
かの欠点がある。ペニシリンの６− Ａ、 ｐ Ａへの
変換は■）ＩＩＫ化を伴なう。溶液の酸性度は、酵素床
を通過するにつれて増加し、ｌ）Ｉ＋が酵素活性に対す
る至適範囲よりも小さくなって、反応が遅くなったり停
止したりする。このため、反応床の高さは短かくなけれ
ばならず、１回の通ｊｌ＋’Ｍによる変換量は元の基質
濃度に対してわずかな一；１１−に限定される。したが
って、充分な変換収率が得られるまで基質のｐＨを調整
し、かつ、該溶液を再循環しなければならない。この結
果、複数のカラムを直列または並列に備え、複数のＰＩ
Ｉ調節器、ポンプおよび弁を備えた複雑なタイプの装置
ｉ４ｉが必要となる。酵素を至適１）Ｉ−１外で操作す
ると、カラム上のｐｔＩが変化し、その効率か低下する
。
比活性が低い場合では、実用の範囲、特に、基質または
生成物（ペニシリンまたは６−ＡＰＡのような）が不安
定で、反応を行なうのに必要な条件下で望ましくない副
生物への分解が生ずるような場合においては、反応の持
続を維持するため１こ多量の触媒を使用しなければなら
ない。反応時間を短くし、かつ、収率を改善するには、
通常の固定化酵素では、反応溶液の容量に対して過剰の
多量の酵素を用いなけれはならない。このような場合に
おける唯一の実用的方法は、反応溶液を酵素を充填した
反応床またはカラムに通すことであるか、これには幾つ
かの欠点がある。ペニシリンの６− Ａ、 ｐ Ａへの
変換は■）ＩＩＫ化を伴なう。溶液の酸性度は、酵素床
を通過するにつれて増加し、ｌ）Ｉ＋が酵素活性に対す
る至適範囲よりも小さくなって、反応が遅くなったり停
止したりする。このため、反応床の高さは短かくなけれ
ばならず、１回の通ｊｌ＋’Ｍによる変換量は元の基質
濃度に対してわずかな一；１１−に限定される。したが
って、充分な変換収率が得られるまで基質のｐＨを調整
し、かつ、該溶液を再循環しなければならない。この結
果、複数のカラムを直列または並列に備え、複数のＰＩ
Ｉ調節器、ポンプおよび弁を備えた複雑なタイプの装置
ｉ４ｉが必要となる。酵素を至適１）Ｉ−１外で操作す
ると、カラム上のｐｔＩが変化し、その効率か低下する
。
また、カラム内の酵素を完全に均一に充填することは不
可能である。そのため、カラムの効率を低下させるチャ
ンネリングが生じ、このような場所では酵素の一部は新
鮮な基質に供給されず、生成物は得られない。このこと
もｐａｌの低下および酵素の不活性化を引き起こす。カ
ラム」二の１）ＩＩ低下を最小限とするのに必要な高い
流速は、酵素の目５．１；まりを引き起こす。そのため
に生ずる圧力上昇は、漏出、危険な状態および液体循環
用動力の過剰な消費を生ずる。
可能である。そのため、カラムの効率を低下させるチャ
ンネリングが生じ、このような場所では酵素の一部は新
鮮な基質に供給されず、生成物は得られない。このこと
もｐａｌの低下および酵素の不活性化を引き起こす。カ
ラム」二の１）ＩＩ低下を最小限とするのに必要な高い
流速は、酵素の目５．１；まりを引き起こす。そのため
に生ずる圧力上昇は、漏出、危険な状態および液体循環
用動力の過剰な消費を生ずる。
本発明の自己固定化酵素の高い比活性は、基７ｊ溶液の
容量に対して１０係見、下の容量での酵素の使用全可能
１コシ（Ａ常、９〜１２ ％ （ｗ／Ｖ））、１時間以
内（通常、３０分〜４５分）での変換を可能とする。こ
のため、自己固定化酵素は、撹拌またはガス散４１１な
どの簡単な方法によって基質溶液中、流動形態にての使
用が可能となった。該粒子を溶液中に懸濁させておくに
は、きわめて少量のエネルギーの入力が必要であるにす
ぎない。これは自己固定化酵素が充填床および充填カラ
ムに使用できないことを意味するものでなく、流動形態
での操作の方がはるかに簡単で、エネルギーの必要量も
少な０ことを意味するものである。流動形態での操作は
、全酵素粒子を基質溶液と密に接触させ、チャンネリン
グが存在 せず、また撹拌により基質および生成物の物
質移動に対する拡散抵抗を減少させるという利点を有し
ている。Ｉ） １１および温度の調節は簡ｔ）ｔて、ｐ
Ｈはほとんど変動なしに最適ｐｔｌ に正確に保持する
ことができる。何ら高圧操作を必要とせず、ンール、ポ
ンプ、あるいは弁の問題もない。反応完了後、Ｔ’ｒ’
Ｐ素は、単純な沈降およびデカンテーション、あるいは
濾過または遠心によって除去することができる。短い反
応時間により損失が減少し、理論値の９８％の収戊ζＪ
１≦ンに１１号六）１．乙一 本発明の固定化調製物は、表面で固定化され、かつ、カ
プセル化されている酵素であるとし）う７１Ｊ点を有す
る。本発明のアミダーゼージアルデヒＩＪ刊加物の製造
に用いられる方法によれは、該固１化酵素は、ジアルデ
ヒドによって架橋され、相互に多層の網目構造の形態と
なった所望の酵素分子のみからなっていて、基質が容易
に内部に拡１１ダして生成物が生じ、細胞全体が架橋さ
れた集合体の場合はど拡散か制限されない。本発明の固
定化酵素の外層は内層に対する保護ノ＜リヤーとして働
くので表面層以外の不活性化は減少するか生じｆ、ｒ
くなる。たとえ外層力坏活性化されても、内部の酵素は
カプセル化された形態と同じ」：うに働く。この結果、
不活性化を起す不純物の存在下におりる寿命は４’＋く
なる。粒子全体が、基質にきわめて接近しやすい酵素か
ら成っているので、比活性（−髪、非常に高く、固定化
に用いられた酵素の純度によってのみ比活性は、制限さ
れる。該不溶化酵素は、乾燥重量ダラムあたり４５００
〜５６００国際？１′１位（１，Ｕ、／Ｑ）のペンジル
ペニシリン加水分）リイ活ｔ／１または９５００〜ｌ
２０００１．、Ｕ、／ｆｌの蛋白を示す。
容量に対して１０係見、下の容量での酵素の使用全可能
１コシ（Ａ常、９〜１２ ％ （ｗ／Ｖ））、１時間以
内（通常、３０分〜４５分）での変換を可能とする。こ
のため、自己固定化酵素は、撹拌またはガス散４１１な
どの簡単な方法によって基質溶液中、流動形態にての使
用が可能となった。該粒子を溶液中に懸濁させておくに
は、きわめて少量のエネルギーの入力が必要であるにす
ぎない。これは自己固定化酵素が充填床および充填カラ
ムに使用できないことを意味するものでなく、流動形態
での操作の方がはるかに簡単で、エネルギーの必要量も
少な０ことを意味するものである。流動形態での操作は
、全酵素粒子を基質溶液と密に接触させ、チャンネリン
グが存在 せず、また撹拌により基質および生成物の物
質移動に対する拡散抵抗を減少させるという利点を有し
ている。Ｉ） １１および温度の調節は簡ｔ）ｔて、ｐ
Ｈはほとんど変動なしに最適ｐｔｌ に正確に保持する
ことができる。何ら高圧操作を必要とせず、ンール、ポ
ンプ、あるいは弁の問題もない。反応完了後、Ｔ’ｒ’
Ｐ素は、単純な沈降およびデカンテーション、あるいは
濾過または遠心によって除去することができる。短い反
応時間により損失が減少し、理論値の９８％の収戊ζＪ
１≦ンに１１号六）１．乙一 本発明の固定化調製物は、表面で固定化され、かつ、カ
プセル化されている酵素であるとし）う７１Ｊ点を有す
る。本発明のアミダーゼージアルデヒＩＪ刊加物の製造
に用いられる方法によれは、該固１化酵素は、ジアルデ
ヒドによって架橋され、相互に多層の網目構造の形態と
なった所望の酵素分子のみからなっていて、基質が容易
に内部に拡１１ダして生成物が生じ、細胞全体が架橋さ
れた集合体の場合はど拡散か制限されない。本発明の固
定化酵素の外層は内層に対する保護ノ＜リヤーとして働
くので表面層以外の不活性化は減少するか生じｆ、ｒ
くなる。たとえ外層力坏活性化されても、内部の酵素は
カプセル化された形態と同じ」：うに働く。この結果、
不活性化を起す不純物の存在下におりる寿命は４’＋く
なる。粒子全体が、基質にきわめて接近しやすい酵素か
ら成っているので、比活性（−髪、非常に高く、固定化
に用いられた酵素の純度によってのみ比活性は、制限さ
れる。該不溶化酵素は、乾燥重量ダラムあたり４５００
〜５６００国際？１′１位（１，Ｕ、／Ｑ）のペンジル
ペニシリン加水分）リイ活ｔ／１または９５００〜ｌ
２０００１．、Ｕ、／ｆｌの蛋白を示す。
ペニシリンアミダーゼジアルデヒド付加物の製法は、本
発明のもう１つの態様を示すものである。
発明のもう１つの態様を示すものである。
本質的には、該方法は、炭素数５〜７を有する脂肪族ジ
アルデヒドを約６〜約９５のｐｉ−Ｉ Ｉごてペニシリ
ンアミダーゼの水溶液に加え、ついて０〜約３０℃の温
度ｌこで多価アニオンを含む塩を加え、沈澱生成物を回
収することからなる。温度は約１５〜約２５℃に保持す
るのが好ましく、室温がより好ましい。
アルデヒドを約６〜約９５のｐｉ−Ｉ Ｉごてペニシリ
ンアミダーゼの水溶液に加え、ついて０〜約３０℃の温
度ｌこで多価アニオンを含む塩を加え、沈澱生成物を回
収することからなる。温度は約１５〜約２５℃に保持す
るのが好ましく、室温がより好ましい。
さらに詳述すると、該自己−固定化ペニシリンアミダー
ゼ伺加物は、次の方法で調製される。）・シラス・メガ
テリウムをフェニル酢酸ＣＩ’ＡＡ）またはその類似化
合物を補った醗酵培地中で増殖させ、醗酵培地中に放出
される細胞外酵素ベニ７リノアミダーゼの産生を誘光す
る。細菌をフロキュレーション（凝集）、Ｐ、ｉｌ鼻お
よび／または遠心Ｉこよって醗酵培地より除去した後、
酵素を、分子（；ｊ’、’ １０．ＯＯＯ〜１００，０
００を分離するフィルターを用いて限外？濾過により、
該ブロスが一般に８〜１６ｍｆｌ／ｍｔの蛋白質および
１ｍハこつき３０〜３００１、Ｕ、のペニシリンアミダ
ーゼを含ムマで濃縮する。限外瀘過した酵素濃縮物を遠
心または／Ｊ−“過して大部分の残存する細菌を除去し
た後、ｐｒ＋を６〜９に調整し、０．１〜２．０ ％
Ｃｗ／Ｖ）の最終濃度マチジアルデヒド（グルタルアル
デヒドしい）を添加して酵素を固定化する。該ジアルデ
ヒドは、限外沖過した濃縮物と０〜３０℃にて５〜６０
分間反応させる。ジアルデヒドと反応を行１１つだ後、
好ましくはアルカリ金属塩（ナトリウムまたはカリウム
）またはアンモニウム塩としたリン酸塩、チオ硫酸塩、
ホウ酸塩、炭酸塩または硫酸塩のような多価アニオンの
Ｑ，５Ｍ溶液をジアルデヒド処理した酵素に加え、５〜
６０分間混合する。ジアルデヒド処理した酵素溶液への
リン酸塩、チオ硫酸塩、ホウ酸塩、炭酸塩または硫酸塩
の添加は、好ましし）特性、例えは非ゲル状で、フィル
ター１こまって保持しつる能力を備えた固定化酵素を得
るのに必要である。ジアルデヒドと同時にまたはそれ以
前に該アニオンを添加すると貧弱なフロックとなり、沢
過中保持されない。ついて、不ｔ＆化した酵素を遠心ま
たは濾過のいずれかによって採取し、２〜４倍量のトＩ
２０、またはｐｉｔ約７〜約９にて遊離の第一級アミ７
基を含む０．１Ｍグリシンまたは類似化合物などの遊離
アルデヒド遮断試薬で洗浄する。その後、該固定化酵素
を適宜の反応混合液中に懸濁させた後、５−ＡＩ’Ａお
よびフェニル酢酸（ １） Ａ Ａ ）を生成するＩ’
ｃｎＧ の加水分解、５−ＡＰＡおよびフェノキシ酢酸
（ＰＯＡＡ）を生成するＩ’ｃｎ Ｖ の加水分解、ま
たは７−ＡＣ：Ａおよびｐ Ａ Ａを生成するベンジル
セファロスポリンＣの加水分解に用いることかできる。
ゼ伺加物は、次の方法で調製される。）・シラス・メガ
テリウムをフェニル酢酸ＣＩ’ＡＡ）またはその類似化
合物を補った醗酵培地中で増殖させ、醗酵培地中に放出
される細胞外酵素ベニ７リノアミダーゼの産生を誘光す
る。細菌をフロキュレーション（凝集）、Ｐ、ｉｌ鼻お
よび／または遠心Ｉこよって醗酵培地より除去した後、
酵素を、分子（；ｊ’、’ １０．ＯＯＯ〜１００，０
００を分離するフィルターを用いて限外？濾過により、
該ブロスが一般に８〜１６ｍｆｌ／ｍｔの蛋白質および
１ｍハこつき３０〜３００１、Ｕ、のペニシリンアミダ
ーゼを含ムマで濃縮する。限外瀘過した酵素濃縮物を遠
心または／Ｊ−“過して大部分の残存する細菌を除去し
た後、ｐｒ＋を６〜９に調整し、０．１〜２．０ ％
Ｃｗ／Ｖ）の最終濃度マチジアルデヒド（グルタルアル
デヒドしい）を添加して酵素を固定化する。該ジアルデ
ヒドは、限外沖過した濃縮物と０〜３０℃にて５〜６０
分間反応させる。ジアルデヒドと反応を行１１つだ後、
好ましくはアルカリ金属塩（ナトリウムまたはカリウム
）またはアンモニウム塩としたリン酸塩、チオ硫酸塩、
ホウ酸塩、炭酸塩または硫酸塩のような多価アニオンの
Ｑ，５Ｍ溶液をジアルデヒド処理した酵素に加え、５〜
６０分間混合する。ジアルデヒド処理した酵素溶液への
リン酸塩、チオ硫酸塩、ホウ酸塩、炭酸塩または硫酸塩
の添加は、好ましし）特性、例えは非ゲル状で、フィル
ター１こまって保持しつる能力を備えた固定化酵素を得
るのに必要である。ジアルデヒドと同時にまたはそれ以
前に該アニオンを添加すると貧弱なフロックとなり、沢
過中保持されない。ついて、不ｔ＆化した酵素を遠心ま
たは濾過のいずれかによって採取し、２〜４倍量のトＩ
２０、またはｐｉｔ約７〜約９にて遊離の第一級アミ７
基を含む０．１Ｍグリシンまたは類似化合物などの遊離
アルデヒド遮断試薬で洗浄する。その後、該固定化酵素
を適宜の反応混合液中に懸濁させた後、５−ＡＩ’Ａお
よびフェニル酢酸（ １） Ａ Ａ ）を生成するＩ’
ｃｎＧ の加水分解、５−ＡＰＡおよびフェノキシ酢酸
（ＰＯＡＡ）を生成するＩ’ｃｎ Ｖ の加水分解、ま
たは７−ＡＣ：Ａおよびｐ Ａ Ａを生成するベンジル
セファロスポリンＣの加水分解に用いることかできる。
本発明のさらにもう１つの態様によれは、天然ペニシリ
ン、マたハ天然ペニシリンの６−アンル基に対応する７
−アソル基を有するセファロスポリンの水性溶液を約１
５〜約４２℃の温度にお０て、アンル基の除去に必要な
時間、ジアルデヒドが７へ炭素数５〜７を有するもので
ある固体の自己固定化ペニンリ／アミグーゼージアルデ
ヒドイ」加物とインキュベートすることからなる６−Ａ
Ｉ）Ａ、７−ＡＣＡまたは７−ＡＩ）ＧＡの製法が提供
される。
ン、マたハ天然ペニシリンの６−アンル基に対応する７
−アソル基を有するセファロスポリンの水性溶液を約１
５〜約４２℃の温度にお０て、アンル基の除去に必要な
時間、ジアルデヒドが７へ炭素数５〜７を有するもので
ある固体の自己固定化ペニンリ／アミグーゼージアルデ
ヒドイ」加物とインキュベートすることからなる６−Ａ
Ｉ）Ａ、７−ＡＣＡまたは７−ＡＩ）ＧＡの製法が提供
される。
本発明の方法には、ペニシリンアミダーゼジアルデヒド
付加物を６−ＡＰＡの製造における触媒として用いたも
ので、現在用いられている化学的方法よりも低床であり
、進行が速やがである。
付加物を６−ＡＰＡの製造における触媒として用いたも
ので、現在用いられている化学的方法よりも低床であり
、進行が速やがである。
本発明の固定化酵素は非常に高い活性および安定性を示
し、短かい変換時間および何回もの循環における酵素の
連続的循環が可能となる。その結果、本発明による５−
ＡＩ’Ａの製造において用いられる方法および製造器具
は、商業−Ｌ入手しうる固定化ベニノリ／アミダーゼ調
製物を使った６−ＡＩ’への製造にて必要とされるもの
よりも１７＋１ １１’．て、費用も安い。
し、短かい変換時間および何回もの循環における酵素の
連続的循環が可能となる。その結果、本発明による５−
ＡＩ’Ａの製造において用いられる方法および製造器具
は、商業−Ｌ入手しうる固定化ベニノリ／アミダーゼ調
製物を使った６−ＡＩ’への製造にて必要とされるもの
よりも１７＋１ １１’．て、費用も安い。
Ｐｃｎ Ｇ＋Ｐｅｎ Ｖｌ ベンジルセファロスポリン
Ｃまたは７−フエ／キンメチル−３−デスアセトキシ類
似体の加水分解のための反応混合液は、例えは、水また
はｐＨ ５〜１２の酢酸塩、クエン酸塩、リン酸塩 ］
” Ｊｉ Ｓ （ Ｎ − トリス−〔ヒドロキシメデ
ルコメチル−２−アミノエタンスルホン酸）、ホワ酸塩
、ＴＲＩ Ｓ （トリス−〔ヒト。キッメチル〕アミノ
メタン）、重炭酸塩、炭酸塩もしくはこれらの２つまた
はそれ以上からなる濃度０．０５〜０．５モル／ｌの混
合液の水性緩衝液で、Ｐｅｎ Ｇ＋Ｉ’ｃｎ Ｖ、ベン
ジルセファロスポリンＣまたは７−フニノキシメヂルー
３−デスアセトキシ−セファロスポリンのいずれかを０
．５〜１２ｇ／ｄ（３の濃度で含有しているものがよい
。典型的には、活性度試験用反応混合液は、０．０５Ｍ
四ホウ酸ナトリウム（ｐＨ８，５）からなりＩ’ｅｎ
Ｇ を３％ＣＷ／Ｖ）含有する。ついで、不溶化酵素を
含む反応混合液を１５〜４２℃にて時間を変えてインキ
ュベートする。酵素の初期反応速度を、反応混合液中に
存在する６ −Ａ Ｐ Ａ （１’ｃｎ ＧまたはＰｅ
ｎｖの場合）、７−ＡＣＡ（ベンジルセファロスポリン
Ｃの場合）または７−ＡＩ）ＣＡ（フェノキシメチル−
３−デスアセトキシセファロスポリンの場合）のｍを測
定することによって決定し、１時間あたりに産生される
５−ＡＰＡ、７−ＡＣＡまたは７−、ＡＩ）Ｃ：Ａが１
μｍｏｌｅ の場合を１単位としてｕｌｌｌｌ／ｒｎｌ
て、または】分間あたりに産生される５−Ａ、Ｉ’Ａ、
７−ＡＣＡまたは７−ＡＤＣＡが１μｍ０１Ｃの場合
を１国際年位（１，Ｕ、）として国際単位（Ｉｎｔｅｒ
ｎａｔｉｏｎａｌ Ｕｎｉｔ）／ｍ！ で表示される。
Ｃまたは７−フエ／キンメチル−３−デスアセトキシ類
似体の加水分解のための反応混合液は、例えは、水また
はｐＨ ５〜１２の酢酸塩、クエン酸塩、リン酸塩 ］
” Ｊｉ Ｓ （ Ｎ − トリス−〔ヒドロキシメデ
ルコメチル−２−アミノエタンスルホン酸）、ホワ酸塩
、ＴＲＩ Ｓ （トリス−〔ヒト。キッメチル〕アミノ
メタン）、重炭酸塩、炭酸塩もしくはこれらの２つまた
はそれ以上からなる濃度０．０５〜０．５モル／ｌの混
合液の水性緩衝液で、Ｐｅｎ Ｇ＋Ｉ’ｃｎ Ｖ、ベン
ジルセファロスポリンＣまたは７−フニノキシメヂルー
３−デスアセトキシ−セファロスポリンのいずれかを０
．５〜１２ｇ／ｄ（３の濃度で含有しているものがよい
。典型的には、活性度試験用反応混合液は、０．０５Ｍ
四ホウ酸ナトリウム（ｐＨ８，５）からなりＩ’ｅｎ
Ｇ を３％ＣＷ／Ｖ）含有する。ついで、不溶化酵素を
含む反応混合液を１５〜４２℃にて時間を変えてインキ
ュベートする。酵素の初期反応速度を、反応混合液中に
存在する６ −Ａ Ｐ Ａ （１’ｃｎ ＧまたはＰｅ
ｎｖの場合）、７−ＡＣＡ（ベンジルセファロスポリン
Ｃの場合）または７−ＡＩ）ＣＡ（フェノキシメチル−
３−デスアセトキシセファロスポリンの場合）のｍを測
定することによって決定し、１時間あたりに産生される
５−ＡＰＡ、７−ＡＣＡまたは７−、ＡＩ）Ｃ：Ａが１
μｍｏｌｅ の場合を１単位としてｕｌｌｌｌ／ｒｎｌ
て、または】分間あたりに産生される５−Ａ、Ｉ’Ａ、
７−ＡＣＡまたは７−ＡＤＣＡが１μｍ０１Ｃの場合
を１国際年位（１，Ｕ、）として国際単位（Ｉｎｔｅｒ
ｎａｔｉｏｎａｌ Ｕｎｉｔ）／ｍ！ で表示される。
５−ＡＩ’Ａ、７−ＡＣＡまたは７−ＡＩ）Ｃ，への反
応速度および収率は、ＡＧ ｌ −Ｘ ８、ＡＧ２−Ｘ
８、Ｉ）ｏｗｃｘ ｌ −Ｘ ８ およびアンパライト
ＩＲＡ−４００のようなイオン交換樹脂を反応混合液に
添加して加水分解生成液を除去することにより反応中顕
著に増加する。
応速度および収率は、ＡＧ ｌ −Ｘ ８、ＡＧ２−Ｘ
８、Ｉ）ｏｗｃｘ ｌ −Ｘ ８ およびアンパライト
ＩＲＡ−４００のようなイオン交換樹脂を反応混合液に
添加して加水分解生成液を除去することにより反応中顕
著に増加する。
以下に実施例によって本発明の固定化酵素の製法、また
ペニシリンおよびセファロスポリンからのアシル基の除
去におけるその利用ｆこつぃてさらに詳しく説明する。
ペニシリンおよびセファロスポリンからのアシル基の除
去におけるその利用ｆこつぃてさらに詳しく説明する。
実施例１
不溶化ペニシリンアミダーゼのＮｆａ ＩＭバシラス・
メガテリウムΔＴＣＣ１４９４５ＣＪ、Ｒａｃｔ、Ｖｏ
ｌ、９３，３０２（１９６７）’：ｌ に」二つて産生
されるペニシリンアミダーゼを分子ｆｉ２０゜０００〜
１００，０００を分離するフィルターを用いた限外濾過
法によって約３５〜１２０倍に濃縮する。遠心により細
胞および細胞片を全て除去した後、濃縮ブロス中の酵素
を不溶化する。
メガテリウムΔＴＣＣ１４９４５ＣＪ、Ｒａｃｔ、Ｖｏ
ｌ、９３，３０２（１９６７）’：ｌ に」二つて産生
されるペニシリンアミダーゼを分子ｆｉ２０゜０００〜
１００，０００を分離するフィルターを用いた限外濾過
法によって約３５〜１２０倍に濃縮する。遠心により細
胞および細胞片を全て除去した後、濃縮ブロス中の酵素
を不溶化する。
１３２．９１．Ｕ、／ｍｌのペニシリンアミダーゼを含
有する蛋白質１２．７’Ｑ７ｍｌの濃縮ブロス５０ｒｎ
ｌを希塩酸でｐｔ１７．０１こ調整する。該濃縮物を撹
拌しなからグルタルアルデヒドの８％水溶液３ ｍｌを
加える。室温にて３０分分間中かに撹拌した後、０゜５
Ｍリン酸ナトリウム緩衝液５ｍｔ （ｐＨ７，０）を該
調製物に加え、室温にてさらに３０分間撹拌を続ける。
有する蛋白質１２．７’Ｑ７ｍｌの濃縮ブロス５０ｒｎ
ｌを希塩酸でｐｔ１７．０１こ調整する。該濃縮物を撹
拌しなからグルタルアルデヒドの８％水溶液３ ｍｌを
加える。室温にて３０分分間中かに撹拌した後、０゜５
Ｍリン酸ナトリウム緩衝液５ｍｔ （ｐＨ７，０）を該
調製物に加え、室温にてさらに３０分間撹拌を続ける。
この処理によって得られる不溶化調製物を６５紙上に集
め、４倍惰の水で洗浄する。洗浄した生成物を７戸紙上
よりこすり落とし、激しい撹拌によってｏ、ｌ！湿潤重
計／水１ｒｎ！、の濃度で水に再懸濁させる。該不溶化
ペニシリンアミダーゼは、几のブロス濃縮物の初期１’
ｃｎＧ 加水分解活性の１５３％を保持し、３％（ｗ／
すＩ’ｃｎＧ を基質として用いた時、初期反応速度と
して５９７．６１．Ｕ。
め、４倍惰の水で洗浄する。洗浄した生成物を７戸紙上
よりこすり落とし、激しい撹拌によってｏ、ｌ！湿潤重
計／水１ｒｎ！、の濃度で水に再懸濁させる。該不溶化
ペニシリンアミダーゼは、几のブロス濃縮物の初期１’
ｃｎＧ 加水分解活性の１５３％を保持し、３％（ｗ／
すＩ’ｃｎＧ を基質として用いた時、初期反応速度と
して５９７．６１．Ｕ。
／ｆ／ＷＷおよび３６１９．０１．Ｕ、７ｇ６ｗが得ら
れる。
れる。
実施例２
不溶性ペニシリンアミダーゼの収率に及はすリン酸塩の
影響 バソラス・メガテリウムの醗酵より得られる濃縮ブロス
を実施例１と同様にして製造する。この濃縮ブロスのサ
ンプル５０ｍ！、中の酵素をｐｆｌ ７、Ｏに調整し、
８％グルタルアルデヒド３ｄを添加して不溶化する。０
．５Ｍリン酸ナトリウム５ ｍｌ、１）１１７．０をグ
ルタルアルデヒド添加前、またはグルグルアルデヒド添
加３０分後に添加するか、あるいは無添加のいずれかと
する。不溶化ペニシリンアミダーゼを１紙」二に集め、
水で洗浄し、ｌ’（ｎＧ加水分解活ｄニについて分析す
る。各不溶化調製物中に存在する湿潤重量の総ダラム数
Ｃｆ１ＷＷ）および実施例３ 不溶化ペニシリンアミダーゼによるベンジルペニシリン
、フェノキツメチルペニシリンおよヒペンジルセファロ
スポリ７Ｃの加水分解 不溶化ペニシリンアミダーゼを実施例１と同様の方法で
ｎｊＪ製する。ベンジルペニシリンおヨヒフエノキシメ
ヂルペニシリンの加水分解により６−アミ／ペニンラン
酸を生成する能力、あるいはベンジルセファロスポリン
Ｃより７−アミ／セファロスポラン酸を生成する能力に
ついて該調製物を分析する。異なった量の不溶化ペニシ
リンアミダーゼを１）ｃｎ Ｇ、 Ｐｅｎ Ｖ または
ベンジルセファロスポリンＣのいずれかを３！／ｄ（！
含有する０、１Ｍ四ホウ酸ナトリワム溶液、ｐＨ８，５
中で３７℃にてインキュベートし、４３−ＡＩ’Ａまた
は７−ＡＣＡ ：ｉ’＋”：の分析のため定期的に試料
採取を行なう。結果を、不溶化酵素のグラム湿潤ｆｆ１
４’ｌｊ：またはグラム乾燥重量あたりの国際単位（ｉ
、ｕ、）として表わし、第２表に記載する。
影響 バソラス・メガテリウムの醗酵より得られる濃縮ブロス
を実施例１と同様にして製造する。この濃縮ブロスのサ
ンプル５０ｍ！、中の酵素をｐｆｌ ７、Ｏに調整し、
８％グルタルアルデヒド３ｄを添加して不溶化する。０
．５Ｍリン酸ナトリウム５ ｍｌ、１）１１７．０をグ
ルタルアルデヒド添加前、またはグルグルアルデヒド添
加３０分後に添加するか、あるいは無添加のいずれかと
する。不溶化ペニシリンアミダーゼを１紙」二に集め、
水で洗浄し、ｌ’（ｎＧ加水分解活ｄニについて分析す
る。各不溶化調製物中に存在する湿潤重量の総ダラム数
Ｃｆ１ＷＷ）および実施例３ 不溶化ペニシリンアミダーゼによるベンジルペニシリン
、フェノキツメチルペニシリンおよヒペンジルセファロ
スポリ７Ｃの加水分解 不溶化ペニシリンアミダーゼを実施例１と同様の方法で
ｎｊＪ製する。ベンジルペニシリンおヨヒフエノキシメ
ヂルペニシリンの加水分解により６−アミ／ペニンラン
酸を生成する能力、あるいはベンジルセファロスポリン
Ｃより７−アミ／セファロスポラン酸を生成する能力に
ついて該調製物を分析する。異なった量の不溶化ペニシ
リンアミダーゼを１）ｃｎ Ｇ、 Ｐｅｎ Ｖ または
ベンジルセファロスポリンＣのいずれかを３！／ｄ（！
含有する０、１Ｍ四ホウ酸ナトリワム溶液、ｐＨ８，５
中で３７℃にてインキュベートし、４３−ＡＩ’Ａまた
は７−ＡＣＡ ：ｉ’＋”：の分析のため定期的に試料
採取を行なう。結果を、不溶化酵素のグラム湿潤ｆｆ１
４’ｌｊ：またはグラム乾燥重量あたりの国際単位（ｉ
、ｕ、）として表わし、第２表に記載する。
第２表
実施例４
ペニシリンアミダーゼの大量不溶化
実施例１と同様の方法で行なった８回の醗酵により得ら
れたベニンジンアミクーゼ；τイ・］濃縮ブロス液１５
ｊ’を、濃１ｊ１ｉ’＋酸を添加してＩ）１１７．０に
調整し、２０ ｌの醗酵槽に移す。室温にて檄しくかき
まぜながら１３．２％グルタルアルデヒドを添加してペ
ニシリンアミダーゼの不溶化を実施する。
れたベニンジンアミクーゼ；τイ・］濃縮ブロス液１５
ｊ’を、濃１ｊ１ｉ’＋酸を添加してＩ）１１７．０に
調整し、２０ ｌの醗酵槽に移す。室温にて檄しくかき
まぜながら１３．２％グルタルアルデヒドを添加してペ
ニシリンアミダーゼの不溶化を実施する。
３０分後に０．５Ｍリン酸ナトリウム（１）１１７．０
） １．、５１を添加し、該調製物をさらに３０分間か
きまぜる。不溶化ペニシリンアミダーゼをＯｆ取し、水
３０ｅて洗浄する。ｌ’ｃｎ Ｇ 加水分解活性は、１
１７７１、Ｕ、 ／ ｆ／ ｗ ｗ または５６００１
、Ｕ、／ｑｃＪｗ を示し、元の濃縮ブロス中の酵素
活性の４８，６％が不溶化形態中に保持されていた。
） １．、５１を添加し、該調製物をさらに３０分間か
きまぜる。不溶化ペニシリンアミダーゼをＯｆ取し、水
３０ｅて洗浄する。ｌ’ｃｎ Ｇ 加水分解活性は、１
１７７１、Ｕ、 ／ ｆ／ ｗ ｗ または５６００１
、Ｕ、／ｑｃＪｗ を示し、元の濃縮ブロス中の酵素
活性の４８，６％が不溶化形態中に保持されていた。
実施例５
ベンジルペニシリンの加水分解への不溶化ペニシリンア
ミダーゼの再利用 不溶化ペニシリンアミダーゼを実施例４と同様の方法で
調製する。１０ ％ （Ｗ、／Ｖ）不溶化ペニシリンア
ミダーゼ、５ ％ （Ｗ／ｖ）セライトおよび６％（ｗ
／ｖ）ベンジルペニシリンを含有する反応混合液中−Ｃ
撹拌セル反応器を用いてベンジルペニシリンを加水分解
する。ＮＵ ４０１−１を添加してｐ ｔｌを７．５に
維持し、反応温度を３７℃に保つ。各変換が完了した後
、撹拌セル反応器の底部にあるフィルターを通して液体
を不溶化酵素より分離し、新しいベンジルペニシリンを
反応器「１月こ残存する不溶化酵素へ加える。５回の連
続変換で加水分解された初期ベンジルペニシリンのパー
セント（ＮＩＩ４０ｉ１を用いた滴定にまって決定）を
第３表に記載した。
ミダーゼの再利用 不溶化ペニシリンアミダーゼを実施例４と同様の方法で
調製する。１０ ％ （Ｗ、／Ｖ）不溶化ペニシリンア
ミダーゼ、５ ％ （Ｗ／ｖ）セライトおよび６％（ｗ
／ｖ）ベンジルペニシリンを含有する反応混合液中−Ｃ
撹拌セル反応器を用いてベンジルペニシリンを加水分解
する。ＮＵ ４０１−１を添加してｐ ｔｌを７．５に
維持し、反応温度を３７℃に保つ。各変換が完了した後
、撹拌セル反応器の底部にあるフィルターを通して液体
を不溶化酵素より分離し、新しいベンジルペニシリンを
反応器「１月こ残存する不溶化酵素へ加える。５回の連
続変換で加水分解された初期ベンジルペニシリンのパー
セント（ＮＩＩ４０ｉ１を用いた滴定にまって決定）を
第３表に記載した。
第３表
実施例６
不溶化ペニシリンアミダーゼの安定性
ペニシリンアミダーゼを実施例４と同様にして不溶化す
る。該酵素を６．０５ ＭＴＥ Ｓ ［Ｎ−トリス−（
ヒドロキシメチル）メチル−２−アミノエタンスルホン
酸］ （ＰＩＩ７．６ ）または（１，０５Ｍ四ホウ酸
ナトリウム（ｐＨ８，８）のいずれかに、１０ｇ湿潤重
量／１００ｍ１緩衝液のＷｊ１度で１腎濁し、エルレン
マイヤーフラスコ内に移す。該フラスコを回転振盈機内
て２５０甲ｎにて１５００時間振艙させ、前述のように
ベンジルペニシリン加水分解活性を分析する。
る。該酵素を６．０５ ＭＴＥ Ｓ ［Ｎ−トリス−（
ヒドロキシメチル）メチル−２−アミノエタンスルホン
酸］ （ＰＩＩ７．６ ）または（１，０５Ｍ四ホウ酸
ナトリウム（ｐＨ８，８）のいずれかに、１０ｇ湿潤重
量／１００ｍ１緩衝液のＷｊ１度で１腎濁し、エルレン
マイヤーフラスコ内に移す。該フラスコを回転振盈機内
て２５０甲ｎにて１５００時間振艙させ、前述のように
ベンジルペニシリン加水分解活性を分析する。
初期活性の保持パーセントを第４表に示す。
実施例７
不溶化ペニシリンアミダーゼを用いたベンジルペニシリ
ンの加水分解にょる６−アミノ６０ソラン酸の製造 不溶化ペニシリンアミダーゼを実施例４と同様にして調
製する。１０４８．３１ 、Ｕ、７％ｗの活性を有する
６７５ｇ湿潤重徂の酵素を、９ ％ ＣＷ／Ｖ）ベンジ
ルペニシリン（変換グレード）を含む水に懸濁して全ｉ
危’、 ｌ ５ ｅとし、最終酵素濃度を４８−１１．
Ｕ。
ンの加水分解にょる６−アミノ６０ソラン酸の製造 不溶化ペニシリンアミダーゼを実施例４と同様にして調
製する。１０４８．３１ 、Ｕ、７％ｗの活性を有する
６７５ｇ湿潤重徂の酵素を、９ ％ ＣＷ／Ｖ）ベンジ
ルペニシリン（変換グレード）を含む水に懸濁して全ｉ
危’、 ｌ ５ ｅとし、最終酵素濃度を４８−１１．
Ｕ。
／ｎＪ、湿潤酵素に対する基質の比を１：０．５とする
。加水分解反応は４２°口こて、４ Ｎ Ｎｌ−１４０
１１の添加によりｐＩ−１を８．１１こ一定に維持して
行なう。
。加水分解反応は４２°口こて、４ Ｎ Ｎｌ−１４０
１１の添加によりｐＩ−１を８．１１こ一定に維持して
行なう。
３５分後に反応を停止したところ、高性能液体クロマト
グラフィーを用いた６１す定によるとこの時点で、理論
口、の５−ＡＰＡの９６．２％か生成していブこ。
グラフィーを用いた６１す定によるとこの時点で、理論
口、の５−ＡＰＡの９６．２％か生成していブこ。
許過した変換ブロス２１を氷浴中て冷却する。
温良を１０℃以下Ｉこ保ちなからこれに冷却メタノール
１３３０ｒｎｔを加える。ｌＩＣ４により、６？Ｘ／”
ｘ液の１）ＩＩを５．０に低下させ、このＩ）ＩＩを２
０分間保持する。その後、該溶液を順次１）１１４．８
、４．６．４．４および４．２に低下させ、各ｐＨ値
減少の間１０分間ｔｆ’ｌ 記％ Ｐ ＩＩ［直＋Ｃ保
持する。１）１１４．２ ＋ＣＴＪ ２時間結晶化させ
た悠、６− Ａ、 １’ Ａの結晶をｊｌ」過により集
め、］（）００％メタノ−で洗浄し、５０℃にて乾燥す
る。５−ＡＩ’Ａの結晶８８．８ｇが９９，９チの純度
で回収され、理論収計の９１．９％の収率を示した。
１３３０ｒｎｔを加える。ｌＩＣ４により、６？Ｘ／”
ｘ液の１）ＩＩを５．０に低下させ、このＩ）ＩＩを２
０分間保持する。その後、該溶液を順次１）１１４．８
、４．６．４．４および４．２に低下させ、各ｐＨ値
減少の間１０分間ｔｆ’ｌ 記％ Ｐ ＩＩ［直＋Ｃ保
持する。１）１１４．２ ＋ＣＴＪ ２時間結晶化させ
た悠、６− Ａ、 １’ Ａの結晶をｊｌ」過により集
め、］（）００％メタノ−で洗浄し、５０℃にて乾燥す
る。５−ＡＩ’Ａの結晶８８．８ｇが９９，９チの純度
で回収され、理論収計の９１．９％の収率を示した。
実施例８
不溶化ペニンリンアミダーゼによるベンジルペニシリン
の加水分解 不溶化ペニシリンアミダーゼを実施例４と同４子にして
ＡＩ！、１製する。
の加水分解 不溶化ペニシリンアミダーゼを実施例４と同４子にして
ＡＩ！、１製する。
１０４８．３１−Ｕ、／！ｌ／ｗ−νの活性を有する酵
素１３５０ｑ （湿潤重量）を、９％（Ｗ／Ｖ）ペンジ
ルペニシ１ノン（変換グレード）を含有する水１５１に
懸濁して最終酵素濃度９９．７１．、Ｕ、／ ｍｌおよ
び湿潤酵素に対する〕、（資化１：１とする。加水分解
反応を３７℃で行ない、３ Ｎ Ｎ １１４０Ｉ−１を
添加してｐＨを一定に保持しておく。反応を３５分後に
停止したところ、高性能液体クロマ１グラフイーをこよ
ってｌ１ｌｌ定すると、この１１５１点て理論量の６−
ＡＩ’への９６２係が生成していた。
素１３５０ｑ （湿潤重量）を、９％（Ｗ／Ｖ）ペンジ
ルペニシ１ノン（変換グレード）を含有する水１５１に
懸濁して最終酵素濃度９９．７１．、Ｕ、／ ｍｌおよ
び湿潤酵素に対する〕、（資化１：１とする。加水分解
反応を３７℃で行ない、３ Ｎ Ｎ １１４０Ｉ−１を
添加してｐＨを一定に保持しておく。反応を３５分後に
停止したところ、高性能液体クロマ１グラフイーをこよ
ってｌ１ｌｌ定すると、この１１５１点て理論量の６−
ＡＩ’への９６２係が生成していた。
％＋、ｔ’１出願人 アメリカン・７Ｉ−−ム・ブログ
ク・ン・コーポレイション
ク・ン・コーポレイション
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 （１）ハシラス・メガテリウム（Ｉ３ａｃｉｌｌｕｓ
ｍｅｇａ−ｔｃｒｉｕｍ）産生ペニシリンアミダーゼお
よび炭素数５〜７を有する脂肪族ジアルデヒドの固定化
分子間付加物。 （２）ジアルデヒドが、グルタルアルデヒドであるｔ）
：Ｉ記第（１）項のイづ加物。 （３）炭素数５〜７を有する脂肪族ジアルデヒドを１）
ＩＩ 約５〜約９５にてハシラス・メガテリウム産生ペ
ニシリンアミダーゼの溶液に加えて、約０〜約４５℃の
温度で約０１〜約２．０ （ｗ／ｖ ）パーセントの最
終ジアルデヒド０度を得、ついで多価アニオン含有塩を
加えることを特徴とする自己固定化ペニンジンアミダー
ゼージアルデヒド伺加物の製法。 （４）ジアルデヒドが、グルタルアルデヒドであるｒ＋
ｉｌ ｉ？己９Ｆ； ｆｉｌ ｍ ノｆＪ ？Ｊ： −
（５）多価アニオンがアルカリ金属塩またはアンモニウ
ム塩の形態のリン酸塩、チオ硫酸塩、ホウ酸塩、炭酸塩
または硫酸塩である前記第（３）項の方法。 （６）ペニシリンの６位またはセファロスポリンの７位
のアミ７基よりフェニル酢酸またはフェノキン酢酸を離
脱させる方法で、固定化アミダーゼを加水分解触媒とし
て用いる方法ｆこおいて、該固定化アミダーゼ触媒とし
て、ジアルデヒドが炭素数５〜７を有シ、ペニシリンア
ミダーゼがハシラス・メガテリウム由来である分子間架
橋ジアルデヒド−ペニシリンアミダーゼを月Ｊ＆するこ
とを４ｉｒ Ｃｇｙ、 、！：する方法。 （７）加水分解生成物が、アニオン交換樹脂を用いて触
媒の存在下Ｊ：り分離される前記第（６）頂の方法、３
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US53153783A | 1983-09-12 | 1983-09-12 | |
| US531537 | 1983-09-12 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6066981A true JPS6066981A (ja) | 1985-04-17 |
Family
ID=24118044
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59162771A Pending JPS6066981A (ja) | 1983-09-12 | 1984-07-31 | 不溶化ペニシリンアミダ−ゼおよびその製法 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0138338B1 (ja) |
| JP (1) | JPS6066981A (ja) |
| DE (1) | DE3466244D1 (ja) |
| GB (1) | GB2146336B (ja) |
| IE (1) | IE57588B1 (ja) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2036149A6 (es) * | 1989-12-12 | 1993-05-01 | Consejo Superior Investigacion | Procedimiento de sintesis de antibioticos semiestaticos en sistemas termodinamicamente controlados agua-cosolventes organicos miscibles apolares con el empleo de penicilina g acilasa. |
| PT97397B (pt) * | 1990-04-18 | 1998-08-31 | Gist Brocades Nv | Processo para a preparacao de penicilina g acilase e de genes que a codificam |
| DE19646550A1 (de) * | 1996-10-31 | 1998-05-07 | Fzb Biotechnik Gmbh | Kombiniertes Verfahren zur lösungsmittelarmen Gewinnung von Produkten aus der biokatalytischen Spaltung von Penicillin- oder Cephalosporin G-Lösungen |
| AU9254498A (en) * | 1997-07-03 | 1999-01-25 | Gist-Brocades B.V. | Preparation of enzyme with reduced beta-lactamase activity |
| GB9718740D0 (en) | 1997-09-05 | 1997-11-12 | Advanced Phytonics Ltd | Improvements in or relating to the preparation of a compound |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS4992277A (ja) * | 1972-09-11 | 1974-09-03 | ||
| JPS58873A (ja) * | 1981-06-01 | 1983-01-06 | ナビスコ・ブランズ・インコ−ポレイテツド | 安定な液体赤色ビ−ト着色料およびそれを含有するチユ−インガム |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3736231A (en) * | 1971-11-01 | 1973-05-29 | Us Agriculture | Preparation of insolubilized enzymes |
| GB1400468A (en) * | 1972-07-22 | 1975-07-16 | Beecham Group Ltd | Enzyme preparation and use thereof |
| CS208931B1 (en) * | 1978-01-19 | 1981-10-30 | Vladimir Vojtisek | Immobilized penicillinacylase for transformation of penicillin in 6-aminopenicillane acid and method of its preparation |
-
1984
- 1984-07-31 JP JP59162771A patent/JPS6066981A/ja active Pending
- 1984-08-24 DE DE8484305798T patent/DE3466244D1/de not_active Expired
- 1984-08-24 EP EP84305798A patent/EP0138338B1/en not_active Expired
- 1984-08-24 GB GB08421550A patent/GB2146336B/en not_active Expired
- 1984-09-11 IE IE2312/84A patent/IE57588B1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS4992277A (ja) * | 1972-09-11 | 1974-09-03 | ||
| JPS58873A (ja) * | 1981-06-01 | 1983-01-06 | ナビスコ・ブランズ・インコ−ポレイテツド | 安定な液体赤色ビ−ト着色料およびそれを含有するチユ−インガム |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0138338B1 (en) | 1987-09-16 |
| IE57588B1 (en) | 1993-01-13 |
| GB2146336B (en) | 1987-05-13 |
| EP0138338A1 (en) | 1985-04-24 |
| GB8421550D0 (en) | 1984-09-26 |
| GB2146336A (en) | 1985-04-17 |
| IE842312L (en) | 1985-03-12 |
| DE3466244D1 (de) | 1987-10-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4152210A (en) | Biologically active materials attached to a ferromagnetic support | |
| CA1254528A (en) | Process for encapsulation and encapsulated active material system | |
| JPS6321474B2 (ja) | ||
| US3883394A (en) | Water-insoluble penicillin acylase | |
| JPS6066981A (ja) | 不溶化ペニシリンアミダ−ゼおよびその製法 | |
| JPS6219835B2 (ja) | ||
| CN108239664A (zh) | 一种制备4-羟基-l-苏氨酸的工艺 | |
| EP0125105B1 (en) | Immobilization of catalytically active microorganisms in agar gel fibers | |
| CN106148319B (zh) | 基于反应吸附法制备固定化酶的方法 | |
| JPS6331538A (ja) | 固定化用担体 | |
| CA1298800C (en) | Immobilized enzyme preparation and its use | |
| US4775714A (en) | Method for producing highly-active biologically active compounds immobilized on a carrier | |
| US4113941A (en) | Process for purifying products obtained from enzymatic cleavage of beta-lactam antibiotics | |
| JPS6321475B2 (ja) | ||
| IE45997B1 (en) | Process for preparing 6-aminopenicillanic acid | |
| JP4255730B2 (ja) | 生体触媒を用いたカルボン酸アンモニウムの製造方法 | |
| JPS6144474B2 (ja) | ||
| JPS5928483A (ja) | 脂質の酵素分解法 | |
| JPH0779697B2 (ja) | 細胞培養用又は細胞生産物製造用の微細担体系、及びその製造方法 | |
| JPS6167489A (ja) | 枯草菌の固定化細胞、固定化方法及び７‐β‐アシルアミドセフアロスポラン酸からの３‐アセトキシ基の脱離に対する生成物の使用 | |
| JP2717227B2 (ja) | 固定化ウレアーゼとそれを用いた酒類の製造方法 | |
| Babu et al. | Immobilization of whole Escherichia coli containing penicillin amidase using cross-linking agents and fillers | |
| KR810000048B1 (ko) | 고정화 효소를 이용한 세팔랙신 제조방법 | |
| RU2210596C2 (ru) | Способ синтеза цефазолина | |
| Winnicki et al. | Immobilized microorganisms in wastewater treatment |