JPS6066976A - ナイシン生産性誘導微生物とその製法及び使用法 - Google Patents
ナイシン生産性誘導微生物とその製法及び使用法Info
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- JPS6066976A JPS6066976A JP58229028A JP22902883A JPS6066976A JP S6066976 A JPS6066976 A JP S6066976A JP 58229028 A JP58229028 A JP 58229028A JP 22902883 A JP22902883 A JP 22902883A JP S6066976 A JPS6066976 A JP S6066976A
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- microorganism
- nisin
- producing
- nrrl
- productivity
- Prior art date
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- Pending
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/315—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Streptococcus (G), e.g. Enterococci
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/195—Antibiotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L13/00—Meat products; Meat meal; Preparation or treatment thereof
- A23L13/40—Meat products; Meat meal; Preparation or treatment thereof containing additives
- A23L13/45—Addition of, or treatment with, microorganisms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/46—Streptococcus ; Enterococcus; Lactococcus
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- General Engineering & Computer Science (AREA)
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- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Food Preservation Except Freezing, Refrigeration, And Drying (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
木り１細書には、ナイ／ン生産遺伝情報を有する外来１
） Ｎ Ａ ｌ含むＲ４導された微生物と、受答外微生
物中にＤＮＡを転移させて前記の討導微イ１．物を製造
する方法とが、開示Ａ力ている。北１１シ１の受容体微
生物としては、ナイ／ン生ｊ４！？ ｒｉｉｒを欠いて
いる細菌プぶ好１し、い。ナイノンｉＪ腐敗ｔＷの生育
を抑制し、食品？含む各４１！の物質中におきｔ［１に
冷蔵？ＡＡ度で物質保存のために使用さハる。ナインン
し）、１グξ１助物中で、動物の健康全増進するために
使用される。前記した外来ＤＮＡは供与体微生物から得
らノ］１、受容（４−微生物中に転移されるとナイシン
生産遺伝１１１４・号？１〜１４力する。
） Ｎ Ａ ｌ含むＲ４導された微生物と、受答外微生
物中にＤＮＡを転移させて前記の討導微イ１．物を製造
する方法とが、開示Ａ力ている。北１１シ１の受容体微
生物としては、ナイ／ン生ｊ４！？ ｒｉｉｒを欠いて
いる細菌プぶ好１し、い。ナイノンｉＪ腐敗ｔＷの生育
を抑制し、食品？含む各４１！の物質中におきｔ［１に
冷蔵？ＡＡ度で物質保存のために使用さハる。ナインン
し）、１グξ１助物中で、動物の健康全増進するために
使用される。前記した外来ＤＮＡは供与体微生物から得
らノ］１、受容（４−微生物中に転移されるとナイシン
生産遺伝１１１４・号？１〜１４力する。
この発りｊに係る新規微生物株は全て、ブダペスト条約
に基づく国際寄託当局の地位を有するＮＲＲＬに寄託さ
、！１てｊ？す、後述する受託番号を附与されている。
に基づく国際寄託当局の地位を有するＮＲＲＬに寄託さ
、！１てｊ？す、後述する受託番号を附与されている。
何人も、株名称と受託番号を明示して上記寄託当局に請
求することによシ、当該微生物全自由に入手できる。
求することによシ、当該微生物全自由に入手できる。
この発＋Ｉｌｌは、ナインン（ｎｆｓｉｎ ）生産遺伝
情報を有する外来ＤＮＡを含む新規な誘導微生物とその
製法に、関するものである。この発ＩＪ１は特に、ナイ
ノン生産遺伝情移を有する外来ＤＮＡ１含む誘勇細菌に
関する。
情報を有する外来ＤＮＡを含む新規な誘導微生物とその
製法に、関するものである。この発ＩＪ１は特に、ナイ
ノン生産遺伝情移を有する外来ＤＮＡ１含む誘勇細菌に
関する。
この発１３１］はさらに、誘導されたナインン牛産性倣
生物の使１１法に関する。
生物の使１１法に関する。
従来技術
（１ｊ、ナイシンについて
メルク・インデックス（Ｍｅｒｃｋ Ｉｎｄｅｘ ）第
８版はその第６８７５頁において、マチック及びバーシ
ュ（Ｍａｔｔｉｃｋ ａｎｄ Ｈｉｒｓｃｈ） ＊ Ｎ
ａｔｕｒｅ １５４ ＋ ５５１（１９４４）、マチッ
ク及びバーシュ（Ｍａｔｔｉｃｋ ａｎｄＨｉｒｓｃｈ
）＋ Ｌａｎｃｅｔ ２５−（ｊ−＋ ４１７ （＋
９４６ ）及び字エト５（１９４７）、バーリッジ等（
Ｂｅｒｒｉｄｇｅ ｅｔ ａｌ、）＋Ｂｉｏｃｈｅｍ−
Ｊ、５２ 、５２９ （１９５２）、米国特ｙ′ｒ 第
２．９ａ５．５ｏａ号（１９６０年）を含む種々の文献
を引用しつつ、ナイシンヲ総括的に、ポリペプチド抗生
物価として特徴付けている。その化学構造は、３４個の
アミノ酸残分（ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｒｅｓｉｄｕｅ
ｓ ）であって、グｏ ス（Ｇｒｏｓｓ）＋ Ｊ、 Ａ
ｍ、 Ｃｈｅｍ、 ５ｏＣ−＋ ９ａ １４６３４（１
９７１）に記載されているようにランチオ窒ニン（β炭
素でイオウに結合した２個のアラニン）及びβ−メチル
ランチオニンを含む８個は天然にほとんど見出せない３
４個のアミノ酸残分全、含んでいると記載されている。
８版はその第６８７５頁において、マチック及びバーシ
ュ（Ｍａｔｔｉｃｋ ａｎｄ Ｈｉｒｓｃｈ） ＊ Ｎ
ａｔｕｒｅ １５４ ＋ ５５１（１９４４）、マチッ
ク及びバーシュ（Ｍａｔｔｉｃｋ ａｎｄＨｉｒｓｃｈ
）＋ Ｌａｎｃｅｔ ２５−（ｊ−＋ ４１７ （＋
９４６ ）及び字エト５（１９４７）、バーリッジ等（
Ｂｅｒｒｉｄｇｅ ｅｔ ａｌ、）＋Ｂｉｏｃｈｅｍ−
Ｊ、５２ 、５２９ （１９５２）、米国特ｙ′ｒ 第
２．９ａ５．５ｏａ号（１９６０年）を含む種々の文献
を引用しつつ、ナイシンヲ総括的に、ポリペプチド抗生
物価として特徴付けている。その化学構造は、３４個の
アミノ酸残分（ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｒｅｓｉｄｕｅ
ｓ ）であって、グｏ ス（Ｇｒｏｓｓ）＋ Ｊ、 Ａ
ｍ、 Ｃｈｅｍ、 ５ｏＣ−＋ ９ａ １４６３４（１
９７１）に記載されているようにランチオ窒ニン（β炭
素でイオウに結合した２個のアラニン）及びβ−メチル
ランチオニンを含む８個は天然にほとんど見出せない３
４個のアミノ酸残分全、含んでいると記載されている。
ナイシンはエチルアルコールから結晶を生成し、また希
酸に可溶であると、述べられている。ナイシンは酸溶液
中での不沸に対し安定である。上記したメルク・インデ
ックスはさらに、ナインンは食品加工に用いられ、ま７
”Ｃ保存料として、チーズ及びかん詰の果物及び野菜用
に特に、使用されると述べている。
酸に可溶であると、述べられている。ナイシンは酸溶液
中での不沸に対し安定である。上記したメルク・インデ
ックスはさらに、ナインンは食品加工に用いられ、ま７
”Ｃ保存料として、チーズ及びかん詰の果物及び野菜用
に特に、使用されると述べている。
成る形のナインンの化学構造は、アメリカ公衆衛生院（
ナショナル・インスチテユート・オブ・ヘルスｒ Ｎａ
ｔｉｏｎａｌ Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔ
ｈ）のクロス（Ｇｒｏｓｓ ）及びモＬ／ ル（Ｍａｒ
ｔｅｌｌ ）によりＣｈｅｍ。
ナショナル・インスチテユート・オブ・ヘルスｒ Ｎａ
ｔｉｏｎａｌ Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔ
ｈ）のクロス（Ｇｒｏｓｓ ）及びモＬ／ ル（Ｍａｒ
ｔｅｌｌ ）によりＣｈｅｍ。
ａｎｄ Ｅｎｇ、 Ｎｅｗｓ第１８頁（１，９７８年９
月２４日）に、記載されている。同構造は末端のアミン
及び酸基の付近でアミノ酸中にα−β不飽和を含む。ナ
インンの活性は、影特される微生物中で不飽和アミノ酸
が酵素のスルフヒドリル基と反応することに関係してい
ると、推測されている。一般にナイシンは、約６８００
から７０００の範囲の分子量ヲ有すると、公表されてい
る。ナイシンはＮ群の乳ｈツヲ生注するストレプトコツ
シイ（５ｔｒｅｐｔｃｏｃｃｉ）によって生成される抗
生物質として、分類されている。本ＩＪｉ細書ではナイ
シンが食品自体の中で微生物、肋に細菌により生成せし
められる場合、「抗生物質（ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ）
Ｊといった用語よｐも「抑制物質（１ｎｈｉｂｉｔｏｒ
ｙ ５ｕｂｓｔａｎｃｅ月なる月１語の万全よく用いる
。
月２４日）に、記載されている。同構造は末端のアミン
及び酸基の付近でアミノ酸中にα−β不飽和を含む。ナ
インンの活性は、影特される微生物中で不飽和アミノ酸
が酵素のスルフヒドリル基と反応することに関係してい
ると、推測されている。一般にナイシンは、約６８００
から７０００の範囲の分子量ヲ有すると、公表されてい
る。ナイシンはＮ群の乳ｈツヲ生注するストレプトコツ
シイ（５ｔｒｅｐｔｃｏｃｃｉ）によって生成される抗
生物質として、分類されている。本ＩＪｉ細書ではナイ
シンが食品自体の中で微生物、肋に細菌により生成せし
められる場合、「抗生物質（ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ）
Ｊといった用語よｐも「抑制物質（１ｎｈｉｂｉｔｏｒ
ｙ ５ｕｂｓｔａｎｃｅ月なる月１語の万全よく用いる
。
食品中でナイシンは、食品の貯蔵がら結ｑ８する主安す
問題であるクロストリジウム腐敗（ｃｌｏｓｔｒｉｄｉ
ａｌｓｐｏｉ ｌａｇｅ ）を抑制する。捷だナインン
は、冷凍食品について特に問題となる向精神性Ｉ１１菌
をｊａｉｌ ｌｉ＋ｌｌする。したがってナイ／ントＪ
：Ａ、Ｔ３． Ｅ、Ｆ、Ｈ。
問題であるクロストリジウム腐敗（ｃｌｏｓｔｒｉｄｉ
ａｌｓｐｏｉ ｌａｇｅ ）を抑制する。捷だナインン
は、冷凍食品について特に問題となる向精神性Ｉ１１菌
をｊａｉｌ ｌｉ＋ｌｌする。したがってナイ／ントＪ
：Ａ、Ｔ３． Ｅ、Ｆ、Ｈ。
Ｋ、Ｍ及びＮ群のストレプトコツシイ （５ｔｒｅｐｔ
ｃｏｃｃｉ）、スクフイロコッンイ （５ｔｒａｐｈｙ
ｌｏｃｏｃｃｉ ） 、バチルス（＋３ａｃｉｌｌｕｓ
） （いくつかのｆｆｆｌＦ仁ついて）、クロストリ
ジウム（Ｃ１ｏｓｔ口ｄｉｕｍ）、マイコバクテリウム
（Ｍｉｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ） 、ラクトパテルア。
ｃｏｃｃｉ）、スクフイロコッンイ （５ｔｒａｐｈｙ
ｌｏｃｏｃｃｉ ） 、バチルス（＋３ａｃｉｌｌｕｓ
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ジウム（Ｃ１ｏｓｔ口ｄｉｕｍ）、マイコバクテリウム
（Ｍｉｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ） 、ラクトパテルア。
（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ） 、オクチノミッセ
ス（Ｏｃ ｔ ｉ ｎｏｍｙｃｅｓ ）及びエリジペロ
スリックス（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ）螢、抑
制する。食品が部分的ＶＣ熱処ｐＨさねたものであると
き、ナイシンは特に有効となる。食品が含む血清或は乳
類の存在によっては影響さゎない。
ス（Ｏｃ ｔ ｉ ｎｏｍｙｃｅｓ ）及びエリジペロ
スリックス（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ）螢、抑
制する。食品が部分的ＶＣ熱処ｐＨさねたものであると
き、ナイシンは特に有効となる。食品が含む血清或は乳
類の存在によっては影響さゎない。
したがってこれ°らの物頒が実質的な）Ａだけイｒ７Ｊ
する場合に有用である。現時点で米国におきナイシンを
食品中に添加することは出芽、ないが、世界の敞多くの
国では既に利用されている。米国においても認可される
方向にある。ナイシンを生成するストレプトコッカス・
ラクチス（５ｔｒｅｐｔｃｏｃｃｕｓｌａｃｔｉｓ）が
存在する場合には発酵食品、特に乳製品中でナイシンが
自然に生成することに、留意されるべきである。食品中
での使用についてはレディ等（Ｒｅｄｄｙ ｅｔ ａｌ
−） ＋ Ｊ、 ｏｆ Ｆｏｏｄ ５ｃｉｅｎｃｅ ３
５＋７８７−７９１ （１９７０）及びレディ等（Ｒｅ
ｄｄｙ ｅｔ ａｌ、）。
する場合に有用である。現時点で米国におきナイシンを
食品中に添加することは出芽、ないが、世界の敞多くの
国では既に利用されている。米国においても認可される
方向にある。ナイシンを生成するストレプトコッカス・
ラクチス（５ｔｒｅｐｔｃｏｃｃｕｓｌａｃｔｉｓ）が
存在する場合には発酵食品、特に乳製品中でナイシンが
自然に生成することに、留意されるべきである。食品中
での使用についてはレディ等（Ｒｅｄｄｙ ｅｔ ａｌ
−） ＋ Ｊ、 ｏｆ Ｆｏｏｄ ５ｃｉｅｎｃｅ ３
５＋７８７−７９１ （１９７０）及びレディ等（Ｒｅ
ｄｄｙ ｅｔ ａｌ、）。
Ｊ、 Ｆｏｏｄ ５ｃｉｅｎｃｅ ４０．３１４−３１
８ （１９７５）に、うホベられている。食品中での分
析法は、トレイナー等（１’ｒａｉｎｅｒ ＋ Ｊ、
ｅｔ ａｌ、 ） Ｊ、 Ｓｃｉ、 Ｆｄ、 Ａｇｒｉ
ｃｕｌｔｕｒｅ１５、 ５２２−５２８（１９６４）に
、またフオウラー等（Ｆｏｗｌｅｒ 、 Ｇ、Ｇ、 ；
Ｇａｒｖｉｓ ＋ Ｂ、 ；Ｔｒａｍｅｒ ＋ Ｊ−）
による論文「Ｔｉｄｅ Ａｓ５ａｙ ｏｆ Ｎ１５ｉｎ
Ｉｎ Ｆｏｏｄｓ （食品１コのナインンの分析）」
（英国、サマーセット、イエロビルのアビリン・アンド
−パレット・リミテッド−Ａｐｌｉｎ ＆ Ｂａｒｒｅ
ｔ Ｌｔｄ、−発行のＴｅｃｈｎｉｃａｌＳｅｒｉｅｓ
、 ５ｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏ
ｔｅｒｉｏｌｏｇｙ＋１９７５、階８． ＰＰ９ｌ−１
０５）に、記載されている。
８ （１９７５）に、うホベられている。食品中での分
析法は、トレイナー等（１’ｒａｉｎｅｒ ＋ Ｊ、
ｅｔ ａｌ、 ） Ｊ、 Ｓｃｉ、 Ｆｄ、 Ａｇｒｉ
ｃｕｌｔｕｒｅ１５、 ５２２−５２８（１９６４）に
、またフオウラー等（Ｆｏｗｌｅｒ 、 Ｇ、Ｇ、 ；
Ｇａｒｖｉｓ ＋ Ｂ、 ；Ｔｒａｍｅｒ ＋ Ｊ−）
による論文「Ｔｉｄｅ Ａｓ５ａｙ ｏｆ Ｎ１５ｉｎ
Ｉｎ Ｆｏｏｄｓ （食品１コのナインンの分析）」
（英国、サマーセット、イエロビルのアビリン・アンド
−パレット・リミテッド−Ａｐｌｉｎ ＆ Ｂａｒｒｅ
ｔ Ｌｔｄ、−発行のＴｅｃｈｎｉｃａｌＳｅｒｉｅｓ
、 ５ｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏ
ｔｅｒｉｏｌｏｇｙ＋１９７５、階８． ＰＰ９ｌ−１
０５）に、記載されている。
ストレプトコッカス・ラクチス（５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃ
ｃｕｓｌａｃｔｉｓ ）の神々の株がナイシンに生成す
ることが知られているが、ストレプトコッカス・グレモ
リス（Ｓ、 ｃｒｅｍｏｒｉｓ ）とストレプトコッカ
ス・ラクチス（Ｓ、 Ｉａｃｔｉｓ ）の能オ市シイ了
セチラクチス（ｄｉａｃｅｔｉｌａｃｔｉｓ ）はナイ
シンを生成しない。
ｃｕｓｌａｃｔｉｓ ）の神々の株がナイシンに生成す
ることが知られているが、ストレプトコッカス・グレモ
リス（Ｓ、 ｃｒｅｍｏｒｉｓ ）とストレプトコッカ
ス・ラクチス（Ｓ、 Ｉａｃｔｉｓ ）の能オ市シイ了
セチラクチス（ｄｉａｃｅｔｉｌａｃｔｉｓ ）はナイ
シンを生成しない。
この秤の菌株についてはマククリントク等（ＭｃＣＩｉ
ｎｔｏｋ ＋ Ｈ−ｅｔ ａｌ、） ＋ Ｊ、 Ｄａｉ
ｒｙ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ１９ 、１８７−１９３ （１
９５２）、カムグペル等（Ｃａｍｐｂｅ Ｉ ＬＬ、Ｌ
、 ｅｔ ａｌ、 ） 、 Ｆｏｏｄ Ｔｅｃｈ、 １
８．４６２−４６４ （１９５９）。
ｎｔｏｋ ＋ Ｈ−ｅｔ ａｌ、） ＋ Ｊ、 Ｄａｉ
ｒｙ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ１９ 、１８７−１９３ （１
９５２）、カムグペル等（Ｃａｍｐｂｅ Ｉ ＬＬ、Ｌ
、 ｅｔ ａｌ、 ） 、 Ｆｏｏｄ Ｔｅｃｈ、 １
８．４６２−４６４ （１９５９）。
バースト（Ｈｕｒｓｔ ） ＋ Ｊ、 Ｇｅｎ、 Ｍｉ
ｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ４４ ＋２０９−２２０ （１
９６６）、マツティック及びノ・−シュ（Ｍａｔｔｉｃ
ｋ ａｎｄ Ｈ４ｒｓｃｈ ） ＋ １２ｔｈ Ｉｎｔ
ｅｒｎ、 ＤａｉｒｙＣｏｎｇｒｅｓｓ ２（５ｅｃｔ
、 ３ ） 、 ５４６−５５０（１９４９） （第１
２回国隙孔製品会議２（第３部門）、第５４６−５５０
頁（１９４９年））、カムグペル等（Ｃａｍｐｂｅｌｌ
ｅｔ ａｌ、 ）著ｒ Ｆｏｏｄ Ｐｒｅｓｅｒｖａ
ｔｉｏｎ ｂｙＵｓｅ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（化
学品全使用しての食品保存法）Ｊ（１９６０年頃発行）
、マククリントク等（ＭｃＣＩｉｎｔｏｋ ｅｔ ａｌ
、 ） ＋ Ｊ、 Ｄａｉｒｙ Ｒｅｓ、１９ 、１８
７−１９３（１９５２） （フランス飴）、レイマン（
Ｒａｙｍａｎ ）＋Ａｐｐｌｉｅｄ ａｎｄ Ｅｎｖｉ
ｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｔｒｃｈ、４１ 、３７５ ＋
８８０（１９８１） 、スコツト等（５ｃｏｔｔ ｅｔ
ａｌ、）＋ Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ Ｆｏｏｄ ５ｃｉ
ｅｎｃｅ ４０ ＋ １１５−１２６（１９８１）、及
び米国特許第２，９８５，５０８号、ｉ８，０９３，５
５１号、第２，７８５，１０８ 号及び第８，２９５，
９８９号に、記載されている。
ｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ４４ ＋２０９−２２０ （１
９６６）、マツティック及びノ・−シュ（Ｍａｔｔｉｃ
ｋ ａｎｄ Ｈ４ｒｓｃｈ ） ＋ １２ｔｈ Ｉｎｔ
ｅｒｎ、 ＤａｉｒｙＣｏｎｇｒｅｓｓ ２（５ｅｃｔ
、 ３ ） 、 ５４６−５５０（１９４９） （第１
２回国隙孔製品会議２（第３部門）、第５４６−５５０
頁（１９４９年））、カムグペル等（Ｃａｍｐｂｅｌｌ
ｅｔ ａｌ、 ）著ｒ Ｆｏｏｄ Ｐｒｅｓｅｒｖａ
ｔｉｏｎ ｂｙＵｓｅ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（化
学品全使用しての食品保存法）Ｊ（１９６０年頃発行）
、マククリントク等（ＭｃＣＩｉｎｔｏｋ ｅｔ ａｌ
、 ） ＋ Ｊ、 Ｄａｉｒｙ Ｒｅｓ、１９ 、１８
７−１９３（１９５２） （フランス飴）、レイマン（
Ｒａｙｍａｎ ）＋Ａｐｐｌｉｅｄ ａｎｄ Ｅｎｖｉ
ｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｔｒｃｈ、４１ 、３７５ ＋
８８０（１９８１） 、スコツト等（５ｃｏｔｔ ｅｔ
ａｌ、）＋ Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ Ｆｏｏｄ ５ｃｉ
ｅｎｃｅ ４０ ＋ １１５−１２６（１９８１）、及
び米国特許第２，９８５，５０８号、ｉ８，０９３，５
５１号、第２，７８５，１０８ 号及び第８，２９５，
９８９号に、記載されている。
種々の技術文献がナイシン金生成するストレプトコッカ
ス・ラクチ、Ｘ （５ｔｒｅｐｔｃｏｃｃｕｓ １ａｃ
ｔｉｓ ）株について、記載している。これらの文献を
例示すると、ギース等（Ｇｅ１ｓ＋ Ａ、 ｅｔ ａｌ
、）＋ ＡＩ）ｐｌｉｅｄＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ
Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ４５ ＋ ２０５−２１
１（１９８８） 、：ｌザック等（Ｋｏｚａｋ ｅｔ
ａｌ、） ＋ Ｊ、 ｏｆＧｅｎ、 Ｍｉｃｒｏｂｉｏ
ｌｏｇｙ １４９ 、４２０−４２５（１９８２）、パ
ック等（Ｐａｃｋ ｅｔ、ａｌ、）＋ Ｊ、 Ｂａｃｔ
ｅｒｉｏｌｏｇｙ １４９ ｒ４２０−４２５ （１９
８２）、−ｆクヶイ等（ＭｃＫａｙ ＋ Ｌ、 ｅｔ
ａｌ、）Ａｐｐｌ ｉｅｄ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍ
ｅｎｔａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ４０ ｙ８４
−９１ （１９８０）、バー ７ト （Ｈｕｒｓｔ Ａ
、 Ｊ、 ）、 Ｇｅｎ。
ス・ラクチ、Ｘ （５ｔｒｅｐｔｃｏｃｃｕｓ １ａｃ
ｔｉｓ ）株について、記載している。これらの文献を
例示すると、ギース等（Ｇｅ１ｓ＋ Ａ、 ｅｔ ａｌ
、）＋ ＡＩ）ｐｌｉｅｄＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ
Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ４５ ＋ ２０５−２１
１（１９８８） 、：ｌザック等（Ｋｏｚａｋ ｅｔ
ａｌ、） ＋ Ｊ、 ｏｆＧｅｎ、 Ｍｉｃｒｏｂｉｏ
ｌｏｇｙ １４９ 、４２０−４２５（１９８２）、パ
ック等（Ｐａｃｋ ｅｔ、ａｌ、）＋ Ｊ、 Ｂａｃｔ
ｅｒｉｏｌｏｇｙ １４９ ｒ４２０−４２５ （１９
８２）、−ｆクヶイ等（ＭｃＫａｙ ＋ Ｌ、 ｅｔ
ａｌ、）Ａｐｐｌ ｉｅｄ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍ
ｅｎｔａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ４０ ｙ８４
−９１ （１９８０）、バー ７ト （Ｈｕｒｓｔ Ａ
、 Ｊ、 ）、 Ｇｅｎ。
Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ４４ 、２０９−２２０
（１９６６）、シャービッツ等（ＳｃｈｅｒｗｉＬｚ
、 Ｋ、 ｅｔ ａｌ、）＋ Ａｐｐ’１ｉｅｄ ａｎ
ｄＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ＭｉｃｒｏｂｉＯ！ｏ
ｇｙ ４５ ＋ １５０６−１５１２（１９１’１３
）、レブランク等（ＬｅＢｌａｎｃ ｌ Ｄ、 ｅｔ
ａｌ、）。
（１９６６）、シャービッツ等（ＳｃｈｅｒｗｉＬｚ
、 Ｋ、 ｅｔ ａｌ、）＋ Ａｐｐ’１ｉｅｄ ａｎ
ｄＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ＭｉｃｒｏｂｉＯ！ｏ
ｇｙ ４５ ＋ １５０６−１５１２（１９１’１３
）、レブランク等（ＬｅＢｌａｎｃ ｌ Ｄ、 ｅｔ
ａｌ、）。
Ｊ、ｏｆ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ １３７ 、８７
８−８８４ （１９７９）、及びレブランク等（ＬｅＢ
ｌａｎｃ ＋ Ｉ）、 ｅｔ ａｌ、）茗ｒＰＩａｓｍ
ｉｄｓａｎｄ Ｔｒａｎｓｐｏｓｏｎｓ、 Ｅｎｖｉｒ
ｏｎｍｅｎｔａｌ Ｉシｆｆｅｃｔｓ ａｎｄＭａｉｎ
ｔｅｎａｎｃｅ Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ Ｊ （Ａｃａ
ｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ −アカデミツク グレン−１
９８０年発行）の第３１−４１頁が、ある。これらの文
献のうちのいくつかは、ナイシン生産遺伝情報を有しう
るステレブトコックス・ラクチス中のプラスミド、’Ｎ
ｆに２８Ｍｄａｌ（メガダルトン）のゲラストについて
述べているが、これらの文献の何れも、ナイシン生産遺
伝情報を有するプラスミドをナイシン非生産性の受容体
細菌或は他の微生物中に転移することについては、記載
していない。
８−８８４ （１９７９）、及びレブランク等（ＬｅＢ
ｌａｎｃ ＋ Ｉ）、 ｅｔ ａｌ、）茗ｒＰＩａｓｍ
ｉｄｓａｎｄ Ｔｒａｎｓｐｏｓｏｎｓ、 Ｅｎｖｉｒ
ｏｎｍｅｎｔａｌ Ｉシｆｆｅｃｔｓ ａｎｄＭａｉｎ
ｔｅｎａｎｃｅ Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ Ｊ （Ａｃａ
ｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ −アカデミツク グレン−１
９８０年発行）の第３１−４１頁が、ある。これらの文
献のうちのいくつかは、ナイシン生産遺伝情報を有しう
るステレブトコックス・ラクチス中のプラスミド、’Ｎ
ｆに２８Ｍｄａｌ（メガダルトン）のゲラストについて
述べているが、これらの文献の何れも、ナイシン生産遺
伝情報を有するプラスミドをナイシン非生産性の受容体
細菌或は他の微生物中に転移することについては、記載
していない。
フルスト （Ｈｕｒｓｔ ＋ Ａ、）＋ Ａｄｖａｎｃ
ｅｓ ＡｐｐｌｉｅｄＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ２７
、８５−１２８ （１９８１）には、ナイシンについ
ての総説が記載されている。この文献は、ナイシンにつ
いて一般に知られていることを述べている。
ｅｓ ＡｐｐｌｉｅｄＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ２７
、８５−１２８ （１９８１）には、ナイシンについ
ての総説が記載されている。この文献は、ナイシンにつ
いて一般に知られていることを述べている。
同文献に記載されている主要な問題は、ナイシンを生産
するストレプトコッカス・ラクチス株のファージ感受性
（ｐｈａｇｅ ５ｕｓｃｅｐ目ｂｉｌｉｔ）’ ）にあ
る。他の問題は、天然のストレプトコッカス・ラクチス
株中ではナイシンが比較的低濃度しか生成しないと共に
、同菌株は増殖させるのが困難であることに、ある。別
の問題は、ナイシン単独では食品を腐敗させる微生物に
対す゛る抑制活性に一定の制限がある点に、存する。
するストレプトコッカス・ラクチス株のファージ感受性
（ｐｈａｇｅ ５ｕｓｃｅｐ目ｂｉｌｉｔ）’ ）にあ
る。他の問題は、天然のストレプトコッカス・ラクチス
株中ではナイシンが比較的低濃度しか生成しないと共に
、同菌株は増殖させるのが困難であることに、ある。別
の問題は、ナイシン単独では食品を腐敗させる微生物に
対す゛る抑制活性に一定の制限がある点に、存する。
目 的
したがってこの発Ｉｊ］の一つの目的とするところは、
ナインン生ｎ；鍜伝情報を有する外来ＤＮＡを含む、銹
ミされたティシン生産性微生物を提供するにある。この
発明の他の目的は、ファージ感受性と無縁であると共に
比較的多気、のナイシン全生産するナイシン生産性訪導
微生物を多量に収年することである。またこの発明は不
感受性クローン會所望の機能特性、特にナイシン生産１
ホ１性、の損失なしに選別するたりファージに対し直担
に働きかけることによりファーシネ感受性の誘２席体と
なることが’ｉｊｌ能であるナイ／／生産性飴心俤牛物
舎、提供しようとするものである。この発［Ｃ１の別の
目的とするところｄ１他の抑制物りＡ生産微生物と組合
せることができるナイシン生産性誘導微生物に提供する
にある。こｉｔら及びその他の目的は、以下の記述から
して明確に理解さｎよう。
ナインン生ｎ；鍜伝情報を有する外来ＤＮＡを含む、銹
ミされたティシン生産性微生物を提供するにある。この
発明の他の目的は、ファージ感受性と無縁であると共に
比較的多気、のナイシン全生産するナイシン生産性訪導
微生物を多量に収年することである。またこの発明は不
感受性クローン會所望の機能特性、特にナイシン生産１
ホ１性、の損失なしに選別するたりファージに対し直担
に働きかけることによりファーシネ感受性の誘２席体と
なることが’ｉｊｌ能であるナイ／／生産性飴心俤牛物
舎、提供しようとするものである。この発［Ｃ１の別の
目的とするところｄ１他の抑制物りＡ生産微生物と組合
せることができるナイシン生産性誘導微生物に提供する
にある。こｉｔら及びその他の目的は、以下の記述から
して明確に理解さｎよう。
一般的な説す１
この発ＩＪ４ ｉｊ、染色体性（ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａ
ｌ ） ニー／Ｊｊ：染色体外質ないし細胞：１！Ｊ（
ｅｘｔｒａｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ）でろりナイシン牛
産遺伝情報金有する外来１） Ｎ Ａであってナインン
生産性の供与体微生物からイ（すられ受容体微生物中へ
と転移されてナインン牛ｐｃ性を結果する外来ＤＮＡを
含むナイ／ン生産性誘ηλ微生物に関し、同微生物は通
常、ナイ／ン抵抗＋４の微生物である。この発明は僧に
、誘導さｉ］たに１）１菌、酵母またはカビから選択さ
れた、新規なティシン生産性誘導微生物に、関する。
ｌ ） ニー／Ｊｊ：染色体外質ないし細胞：１！Ｊ（
ｅｘｔｒａｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ）でろりナイシン牛
産遺伝情報金有する外来１） Ｎ Ａであってナインン
生産性の供与体微生物からイ（すられ受容体微生物中へ
と転移されてナインン牛ｐｃ性を結果する外来ＤＮＡを
含むナイ／ン生産性誘ηλ微生物に関し、同微生物は通
常、ナイ／ン抵抗＋４の微生物である。この発明は僧に
、誘導さｉ］たに１）１菌、酵母またはカビから選択さ
れた、新規なティシン生産性誘導微生物に、関する。
本明細書では用語を次のように定義して使用する。
ｉｌｌ、ｒ供与体微生物（ｄｏｎｏｒ ｍｉｃｒｏｏｒ
ｇａｎｉｓｍ）Ｊ・・・ナイシン生産遺伝情報を有する
転移可能なりＮＡ金含む親株。好１しくは天然でナイシ
ンを生産するストレプトコッカス・ラクチヌ株。
ｇａｎｉｓｍ）Ｊ・・・ナイシン生産遺伝情報を有する
転移可能なりＮＡ金含む親株。好１しくは天然でナイシ
ンを生産するストレプトコッカス・ラクチヌ株。
＋２１． ｒ受容体微生物（ｒｅｃｉｐｉｅｎｔ ｍｉ
ｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍ）Ｊ・・・天然ではナイシンを
生産しないが生産したとしても比較的少量しか生産しな
い親株、好ましくけ細菌。ナイシン感受性を有しナイシ
ンにより抑制されるかどうかは、問わない。
ｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍ）Ｊ・・・天然ではナイシンを
生産しないが生産したとしても比較的少量しか生産しな
い親株、好ましくけ細菌。ナイシン感受性を有しナイシ
ンにより抑制されるかどうかは、問わない。
＋３１． １−誘導微生物（ｄｅｒｉｖｅｄ ｍｉｃｒ
ｏｏｒｇａｎｉｓｍ）Ｊ・・・外来ＤＮＡを受容体微生
物に導入することがら結果するナイシン生産株。好まし
くＶｉナイシン生産性の供与体微生物をナイシン非生産
性またはナイシン低生産性の微生物と交配させることが
ら？ｒｆられるナイシン高生産性のナイシン生産株、特
に細菌。
ｏｏｒｇａｎｉｓｍ）Ｊ・・・外来ＤＮＡを受容体微生
物に導入することがら結果するナイシン生産株。好まし
くＶｉナイシン生産性の供与体微生物をナイシン非生産
性またはナイシン低生産性の微生物と交配させることが
ら？ｒｆられるナイシン高生産性のナイシン生産株、特
に細菌。
＋４１． ｒ外来Ｄ Ｎ Ａ （ｆｏｒｅｉｇｎ Ｄ
Ｎ Ａ） Ｊ −受容体細菌中に天然には存在しないＤ
Ｎ Ａ ｏこの外来ＤＮＡは、本発明の方法により受
容体細菌中に導入される。
Ｎ Ａ） Ｊ −受容体細菌中に天然には存在しないＤ
Ｎ Ａ ｏこの外来ＤＮＡは、本発明の方法により受
容体細菌中に導入される。
＋６１． 「抑制物質（１ｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ５ｕｂ
ｓｔａｎｃｅ ） Ｊ −微生物によシ生産されたナイ
シンを含み他の微ｌｔ物の生育を阻止する殺菌剤。
ｓｔａｎｃｅ ） Ｊ −微生物によシ生産されたナイ
シンを含み他の微ｌｔ物の生育を阻止する殺菌剤。
この発ＩＪＪ ｌｄ 特にストレプトコッカス（５ｔｒ
ｅｐｔｃｏｃｃｕｓ）種、ペジオコッカス（Ｐｅｄｉｏ
ｃｏｃｃｕｓ ） ｍ、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂ
ａｃ目１ｕｓ）１重、ブロビオニバクテ！Ｉ ’Ｚ ｈ
（Ｐｒｏｐｉｏｎｉζａ’ｃ ｔ ｅ”汁盗苧苓÷翻
聞雫考ヘトツク（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ） ’ＩＩ
Ｉ、スタフィロコッカス（５ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕ
ｓ ） 種、りｏストリジウム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕ
ｍ ） ｉ！ 、フラボバクテリウム（Ｆ１ａｖｏｂａ
ｃｔｅｒｉｕ＋ｎ ） ＩＮ！、ブレビバクテリウム（
Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ） ｌｉｕ、エシェリ
ヒア−コリ（Ｅ、 ｃｏｌｌｉ）及びシュードモナス（
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ）神から選択されたナイシン
生産性銹λす、バクテリアに、関する。
ｅｐｔｃｏｃｃｕｓ）種、ペジオコッカス（Ｐｅｄｉｏ
ｃｏｃｃｕｓ ） ｍ、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂ
ａｃ目１ｕｓ）１重、ブロビオニバクテ！Ｉ ’Ｚ ｈ
（Ｐｒｏｐｉｏｎｉζａ’ｃ ｔ ｅ”汁盗苧苓÷翻
聞雫考ヘトツク（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ） ’ＩＩ
Ｉ、スタフィロコッカス（５ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕ
ｓ ） 種、りｏストリジウム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕ
ｍ ） ｉ！ 、フラボバクテリウム（Ｆ１ａｖｏｂａ
ｃｔｅｒｉｕ＋ｎ ） ＩＮ！、ブレビバクテリウム（
Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ） ｌｉｕ、エシェリ
ヒア−コリ（Ｅ、 ｃｏｌｌｉ）及びシュードモナス（
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ）神から選択されたナイシン
生産性銹λす、バクテリアに、関する。
この発ｆｆｆ４１ｄ ｔた、サツカロミセス（Ｓａｃｃ
ｈａｒｏｍｙｃｅｓ ）ｌＶｉ、％にサツカロミセス・
セレビッシエ（Ｓ。
ｈａｒｏｍｙｃｅｓ ）ｌＶｉ、％にサツカロミセス・
セレビッシエ（Ｓ。
ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ ）、デバリオミセスＣＤ、ｅｂ
ａｒｙｏｍｙｃｅｓ ）種、特にデバリオミセス・ハン
セニ（Ｄ、 ｈａｎｓｅｎｉ＋）、トルログシス（Ｔｏ
ｒｕｌｏｐｓｉｓ）種、プレタノミセス（１３ｒｅｔｔ
・ａｎｏｍｙｃｅｓ ）種、カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ
） ｍ。
ａｒｙｏｍｙｃｅｓ ）種、特にデバリオミセス・ハン
セニ（Ｄ、 ｈａｎｓｅｎｉ＋）、トルログシス（Ｔｏ
ｒｕｌｏｐｓｉｓ）種、プレタノミセス（１３ｒｅｔｔ
・ａｎｏｍｙｃｅｓ ）種、カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ
） ｍ。
タレツケラ（Ｋｌｏｅｃｋｅｒａ ） 棟、クルイベロ
ミセス（１（ＩｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅＳ ）種及びシゾ
サツ力ロミセヌ（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｂａｒｏｍｙｃ
ｅｓ ）種から選択されたナイシン生産件誘導酵母に、
関する。
ミセス（１（ＩｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅＳ ）種及びシゾ
サツ力ロミセヌ（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｂａｒｏｍｙｃ
ｅｓ ）種から選択されたナイシン生産件誘導酵母に、
関する。
この発明はさらに、ベニシウム（Ｐｅｎ１ｃ目１ｉｕｍ
）ｆｌｌｌ、ム：７−ル（Ｍｕｃｏｒ） 種、リゾープ
ス（Ｒｈ１ｚｏｐｕｓ）１’ｉｌｌ、アスペルギｈ ｙ
ＣＡｓｐｅｒｇ目１ｕｓ ）種、ドイタロミセテス（
Ｄｅｕｔｅｒｏｍｙｃｅｔｅｓ ） 御、アスコミセテ
ス（Ａｓｃｏｍｙｃｅｔｅｓ ） １Ｂ、ジオトリクム
（Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ）１Φ及びモナスクス（Ｍｏｎ
ａｓｃｕｓ ） ’Ｉｇｌから選択されたナイシン生産
性訪導カビに、関する。
）ｆｌｌｌ、ム：７−ル（Ｍｕｃｏｒ） 種、リゾープ
ス（Ｒｈ１ｚｏｐｕｓ）１’ｉｌｌ、アスペルギｈ ｙ
ＣＡｓｐｅｒｇ目１ｕｓ ）種、ドイタロミセテス（
Ｄｅｕｔｅｒｏｍｙｃｅｔｅｓ ） 御、アスコミセテ
ス（Ａｓｃｏｍｙｃｅｔｅｓ ） １Ｂ、ジオトリクム
（Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ）１Φ及びモナスクス（Ｍｏｎ
ａｓｃｕｓ ） ’Ｉｇｌから選択されたナイシン生産
性訪導カビに、関する。
外来ＤＮＡは受容体微生物に対し、コーヘン（Ｃｏｈｅ
ｎ ）及びボイヤー（Ｂｏｙｅｒ ）に附与された米国
特許第４，２８７，２２４ 号及び関連する特許に記載
されている方法ＶＣより、ベクター中にナイシン生産遺
伝情報を有するＤＮＡをヌグライシングしてのせ、形質
転換により転移できる。ロナルドｘ’ｙチ オルセノ（
Ｒｏｎａｌｄ Ｈ，０１ｓｅｎ ）に附−リされた米国
特許ｆＰＪ４，８７４，２００ 及び類似の特許に西？
載されたベクターも、利用できる。供力体４゛ル生物Ｓ
と受容体微生物とのより普通の接合交配（ｃｏｎｊｕｇ
ａｌｍａｔｉｎｇ）も、転移のために利用でき、この転
杵法を利用するのが好ましい０ナイシン生産追伝（ｉ’
ｉ 報を有するＤＮＡのウィルス（ファージ）ｉｌｌい
ての形ダ１導入も、可能である。
ｎ ）及びボイヤー（Ｂｏｙｅｒ ）に附与された米国
特許第４，２８７，２２４ 号及び関連する特許に記載
されている方法ＶＣより、ベクター中にナイシン生産遺
伝情報を有するＤＮＡをヌグライシングしてのせ、形質
転換により転移できる。ロナルドｘ’ｙチ オルセノ（
Ｒｏｎａｌｄ Ｈ，０１ｓｅｎ ）に附−リされた米国
特許ｆＰＪ４，８７４，２００ 及び類似の特許に西？
載されたベクターも、利用できる。供力体４゛ル生物Ｓ
と受容体微生物とのより普通の接合交配（ｃｏｎｊｕｇ
ａｌｍａｔｉｎｇ）も、転移のために利用でき、この転
杵法を利用するのが好ましい０ナイシン生産追伝（ｉ’
ｉ 報を有するＤＮＡのウィルス（ファージ）ｉｌｌい
ての形ダ１導入も、可能である。
この発明はまた、ナイシン生産性誘／？昏ン生物全遺伝
子操作により製造する方法に１９４シ、同方法ｌ：Ｊ′
、供与体微生物中でナイシン生＃ＷＪ伝情報ケ有すると
ころのＤＮＡであって受容体微生物に対し外来性である
ＤＮＡ全受容体微生物中に転科して、ｈ記載） Ｎ Ａ
によりナイシン生産遺伝情報をイ】せしめられたナイシ
ン生ｉｐ性の誘導微生物を牛成さぜ、次いで上記したナ
イシン生産＋１の誘導微生物を中熱する方法に、係る。
子操作により製造する方法に１９４シ、同方法ｌ：Ｊ′
、供与体微生物中でナイシン生＃ＷＪ伝情報ケ有すると
ころのＤＮＡであって受容体微生物に対し外来性である
ＤＮＡ全受容体微生物中に転科して、ｈ記載） Ｎ Ａ
によりナイシン生産遺伝情報をイ】せしめられたナイシ
ン生ｉｐ性の誘導微生物を牛成さぜ、次いで上記したナ
イシン生産＋１の誘導微生物を中熱する方法に、係る。
この発明はさらに、外来ＤＮＡをイ■するナインン生乾
性誘導微生物により作成上れたナイシン含有製品に係る
。このす、イシン含有製品は、ナインン生産（４：ｕ導
倣牛′勅によｐ同時に作成されたものであることが望ま
しい他の抑制物質も、含みうる。
性誘導微生物により作成上れたナイシン含有製品に係る
。このす、イシン含有製品は、ナインン生産（４：ｕ導
倣牛′勅によｐ同時に作成されたものであることが望ま
しい他の抑制物質も、含みうる。
この発１す１ば、ナイシン非生産性のステレグトコッカ
ス・ラクチス（５ｔｒｅｐｔｃｏｃｃｕｓ １ａｃｔｉ
ｓ ）の亜ｆｉｌ＋ジアセチラクチス（ｄｉａｃｅｔｉ
ｌａｃｔｉｓ ） 捷たはナイシン抵抗ゼ４のものから
選すくさり、 ｆｃナインン生Ｍｆ−４１ｒ詩導倣牛物
と混合されている、純化学的抽出物或は粗ナイ／ン含有
抽出物としてのナインンの混合９勿にも、イ糸る。
ス・ラクチス（５ｔｒｅｐｔｃｏｃｃｕｓ １ａｃｔｉ
ｓ ）の亜ｆｉｌ＋ジアセチラクチス（ｄｉａｃｅｔｉ
ｌａｃｔｉｓ ） 捷たはナイシン抵抗ゼ４のものから
選すくさり、 ｆｃナインン生Ｍｆ−４１ｒ詩導倣牛物
と混合されている、純化学的抽出物或は粗ナイ／ン含有
抽出物としてのナインンの混合９勿にも、イ糸る。
このを、１０１はさらに、混合物として外来ＤＮＡを含
む２或はそｒＪニジ多いナイシン生産性如月汐生物株で
あって、これらの初数株が、ストリンジェント型の抗バ
クテリオファージに対する予防策なしにナインンの生Ｖ
を確保できるようにｎ、に異なったファージ感受性を有
するナイシン生産性訪２！９イ）゛＆生物株に、係る。
む２或はそｒＪニジ多いナイシン生産性如月汐生物株で
あって、これらの初数株が、ストリンジェント型の抗バ
クテリオファージに対する予防策なしにナインンの生Ｖ
を確保できるようにｎ、に異なったファージ感受性を有
するナイシン生産性訪２！９イ）゛＆生物株に、係る。
Ｌ記した複数株ｌ″ｉ、混合した形でも分離した形でも
、包装できる。
、包装できる。
］ｊ５ｒ号にこの発［夕］は、動物を処理する方法であ
って、外来ＤＮＡ−１含むナイシン生産微生物を単独或
１ｒ、１．他の微生物との混合物の形で動物に給餌する
方法に、係る。
って、外来ＤＮＡ−１含むナイシン生産微生物を単独或
１ｒ、１．他の微生物との混合物の形で動物に給餌する
方法に、係る。
この発明は、供与体微生物中でナインン生産ｔｆ＋報を
有するところのＤＮＡ全外来ＤＮＡとして′シロ′体仰
生物中に虐、入して角たなナイシン生産４′１誇導句生
物を提供できるといった事′井に、基づいている。結果
するナイシン生Ｍ＞ ｉ４ ｓｉ ；Ｆｔ倣生１シＨｂ
Ｊ、食品とか他の物竹奢保存できることとし、才た４′
、に小鳥とかｌＩ＋ｆｆ ｆｌ−動物といつ７を動物に
抑制物質を附与してｆ／ｉ８康全保持或は増進できるこ
ととする。外来ＤＮＡを含む同ナインン牛産（／Ｊ：ｉ
Ｗ ７’メ郊・生物は、ナインン非生ｔｐ杓であってナ
イシン不Δ・）′、侵件であるバクテリア或は他の微生
管１で何止しくけナイ７ンと構造的に異なる仙の抑制物
４’ｆ ’ｃ Ｌｈ Ｋ［１１ｆｉｔ゛なバクテリア或
は他の微生物と、川合せることがでへる。
有するところのＤＮＡ全外来ＤＮＡとして′シロ′体仰
生物中に虐、入して角たなナイシン生産４′１誇導句生
物を提供できるといった事′井に、基づいている。結果
するナイシン生Ｍ＞ ｉ４ ｓｉ ；Ｆｔ倣生１シＨｂ
Ｊ、食品とか他の物竹奢保存できることとし、才た４′
、に小鳥とかｌＩ＋ｆｆ ｆｌ−動物といつ７を動物に
抑制物質を附与してｆ／ｉ８康全保持或は増進できるこ
ととする。外来ＤＮＡを含む同ナインン牛産（／Ｊ：ｉ
Ｗ ７’メ郊・生物は、ナインン非生ｔｐ杓であってナ
イシン不Δ・）′、侵件であるバクテリア或は他の微生
管１で何止しくけナイ７ンと構造的に異なる仙の抑制物
４’ｆ ’ｃ Ｌｈ Ｋ［１１ｆｉｔ゛なバクテリア或
は他の微生物と、川合せることがでへる。
成る場合に天然のナインン牛汁件７−トレノ”ｉ・コツ
カス・ラクチス中においてナイシン牛産ＩＦ！１１’ｌ
＋ Ｉ−よ、プラスミドが有している。°またナイ／ン
生産渭伝情報を、１１″１−るプラスミドＤ Ｎ Ａ
ｔ−１２、天然のリゲーション（連結） ３ｆｉｉ稈（
（より受五体微生物のへ？魚体中へ押入されえ、こねに
より肋へ１２微４に物中のカインン生アｒ能會取去るこ
とが困雌となる。したがってこの発す１では転ｇ後の外
来ＤＮＡが誘導微生物中で、染色体（’ｌ或は細胞儂の
伺Ｊ１かであジうる。
カス・ラクチス中においてナイシン牛産ＩＦ！１１’ｌ
＋ Ｉ−よ、プラスミドが有している。°またナイ／ン
生産渭伝情報を、１１″１−るプラスミドＤ Ｎ Ａ
ｔ−１２、天然のリゲーション（連結） ３ｆｉｉ稈（
（より受五体微生物のへ？魚体中へ押入されえ、こねに
より肋へ１２微４に物中のカインン生アｒ能會取去るこ
とが困雌となる。したがってこの発す１では転ｇ後の外
来ＤＮＡが誘導微生物中で、染色体（’ｌ或は細胞儂の
伺Ｊ１かであジうる。
ナインン生産遺伝情報を有するＤＮＡは天然のナイ／ン
生ｈテ性ヌトレブトコツカス・ラクチスから、分１１３
されたフラグメント或はプラスミドの形で分離できる。
生ｈテ性ヌトレブトコツカス・ラクチスから、分１１３
されたフラグメント或はプラスミドの形で分離できる。
こｔｌはナイシン生産遺伝情報を有するＩ） Ｎ Ａの
再消化（ｒｅｄｉｇｅｓｔｉｏｎ ）により達成しうる
。上記フラグメントは次いで適当したベクター中へと挿
入してクローン化し、挿入されプヒＤＮＡ、！：共に受
容体微生物中に転移できる。導入さｎだ外来ＤＮＡはま
た、ウィルスを用いて染色体性１）Ｎ Ａ ＊はプラス
ミドＤＮＡｔ−形質導入することでも、転移できる。プ
ラスミドはまた、同相的（ｒｅｌａｔｅｄ ）或は非同
相的（ｕｎｒｅｌａｔｅａ ） ｆｚ属または秤のノ婬
合交配によっても、転移できる。本川Ｉ！ｊ！Ｉ ；Ａ
＞で１ハ「転移（ｔｒａｎｓｆｅｒ ） Ｊなる用語を
その最も広い煮義で、ナイシン生産遺伝情報を有するＤ
ＮＡを外米ＤＮＡとして受容体微生物中に移すための如
伺なる手段ｔも、指すものとして用いる。
再消化（ｒｅｄｉｇｅｓｔｉｏｎ ）により達成しうる
。上記フラグメントは次いで適当したベクター中へと挿
入してクローン化し、挿入されプヒＤＮＡ、！：共に受
容体微生物中に転移できる。導入さｎだ外来ＤＮＡはま
た、ウィルスを用いて染色体性１）Ｎ Ａ ＊はプラス
ミドＤＮＡｔ−形質導入することでも、転移できる。プ
ラスミドはまた、同相的（ｒｅｌａｔｅｄ ）或は非同
相的（ｕｎｒｅｌａｔｅａ ） ｆｚ属または秤のノ婬
合交配によっても、転移できる。本川Ｉ！ｊ！Ｉ ；Ａ
＞で１ハ「転移（ｔｒａｎｓｆｅｒ ） Ｊなる用語を
その最も広い煮義で、ナイシン生産遺伝情報を有するＤ
ＮＡを外米ＤＮＡとして受容体微生物中に移すための如
伺なる手段ｔも、指すものとして用いる。
結果するナイシン生産性銹導微生物は各細胞中に ′外
来ＤＮＡの多数の複写（コピー）全有しえ、そハはナイ
シンのｒ度に関し細胞的な制限を受け易いところの、ｌ
細胞光たり生類さ１するナインンの筒金、大きく増大さ
せうる。
来ＤＮＡの多数の複写（コピー）全有しえ、そハはナイ
シンのｒ度に関し細胞的な制限を受け易いところの、ｌ
細胞光たり生類さ１するナインンの筒金、大きく増大さ
せうる。
本技術分野で公知であるように誘導された微生物は、貯
蔵及び輸送中の生存性を高めるところの種々の保存形式
で提供しつる。かかる形式には１（々。
蔵及び輸送中の生存性を高めるところの種々の保存形式
で提供しつる。かかる形式には１（々。
状の非濃縮または鍛縮培養物、凍結または非凍結培養物
及び安定化さハた乾燥または凍結乾燥培寵物が含まれる
。培養物はｊｌｌｊ常、生物学的に純粋な形の誘導微生
物を含んでいる。保存形式Ｖこおいて！グ之ム肖り約１
０６（１６１の細胞誤用を超えるＧ〜生物ｈ）、好まし
くは】グラム当υ約Ｉ Ｘ １０Ｑ個の９４１１胞濃度
を超える浦の微生物笥が、望ましい。−Ｖに１グラム当
りｌＯ″′個の細胞儂度を超えるｃ度は、遠心法または
逆浸透法等によっての細胞からのｄり状生育培地の除去
に製氷する。グリ′セリンとかｌｒｆ乳（ミルクパウダ
ー）等のような各科の安Ｔ剤が、凍結及び凍結乾燥のた
めに利用される。計２ｎ微牛物の細胞は通常、炭素、チ
ッ素及び主要なミネラル金倉む生育培地中で増殖せしめ
られる。これらのことは全て、膨大な量の特許情報から
も明らかであるように当業者に周知である。
及び安定化さハた乾燥または凍結乾燥培寵物が含まれる
。培養物はｊｌｌｊ常、生物学的に純粋な形の誘導微生
物を含んでいる。保存形式Ｖこおいて！グ之ム肖り約１
０６（１６１の細胞誤用を超えるＧ〜生物ｈ）、好まし
くは】グラム当υ約Ｉ Ｘ １０Ｑ個の９４１１胞濃度
を超える浦の微生物笥が、望ましい。−Ｖに１グラム当
りｌＯ″′個の細胞儂度を超えるｃ度は、遠心法または
逆浸透法等によっての細胞からのｄり状生育培地の除去
に製氷する。グリ′セリンとかｌｒｆ乳（ミルクパウダ
ー）等のような各科の安Ｔ剤が、凍結及び凍結乾燥のた
めに利用される。計２ｎ微牛物の細胞は通常、炭素、チ
ッ素及び主要なミネラル金倉む生育培地中で増殖せしめ
られる。これらのことは全て、膨大な量の特許情報から
も明らかであるように当業者に周知である。
峙定した説明
この発り］は特に、生物学的に純粋なナイシン及び乳酸
生産性誘導細菌であって、ナイシン不感受性でありナイ
シン生産性のドナー（供与体）であるストレプトコッカ
ス・ラクチスからのナイシン生産遺伝情報を有するグラ
スミド由来のＤＮＡを含んでいて、該ＤＮＡがナイシン
感受性の受容体Ｍｌ＋菌中へ転移されることで生成さ七
たナイシン及び乳酸生産性誘導細菌に、係る。受容体微
生物として好ましいものは、ストレプトコッカス・ラク
チスの亜種（５ｕｂｓｐｅｃｉｅｓ ）ジアセチルラク
チスである。供与体ストレプトコッカス・ラクチスとし
て好ましいものはストレプトコッカス・ラクチスＡＴＣ
ＣＩＩ、４５４であり、この菌株は後記する第１表から
判り１するようにナイシン生産能（ｎ ｆ ｓ ｉ ｎ
ｔｒａｉｔ）ｉ同質遺伝子４ｇ ノ株（ｉｓｏｇｅｎｉ
ｃ ５ｔｒａｉｎｓ ）に対してのみ転移する。ショ糖
の利用能（ショ糖を分解して乳酸発酵を行なう能力）も
ナイシン生産能と一緒に転移される。同系の公知のナイ
シン生産菌株ＨＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４７０（ＮＩＲＤ
１４０４）であり、これも月１いえよう。誘導により得
られた供与体はストレプトコッカス・ラクチスＮＲＲＬ
−Ｂ−１５，４５９及びＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４６０で
あり、同菌株はナイシン生産能及びショ糖利用能金属内
で（ｉｎｔｅｒｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ）転移可能であ
る。
生産性誘導細菌であって、ナイシン不感受性でありナイ
シン生産性のドナー（供与体）であるストレプトコッカ
ス・ラクチスからのナイシン生産遺伝情報を有するグラ
スミド由来のＤＮＡを含んでいて、該ＤＮＡがナイシン
感受性の受容体Ｍｌ＋菌中へ転移されることで生成さ七
たナイシン及び乳酸生産性誘導細菌に、係る。受容体微
生物として好ましいものは、ストレプトコッカス・ラク
チスの亜種（５ｕｂｓｐｅｃｉｅｓ ）ジアセチルラク
チスである。供与体ストレプトコッカス・ラクチスとし
て好ましいものはストレプトコッカス・ラクチスＡＴＣ
ＣＩＩ、４５４であり、この菌株は後記する第１表から
判り１するようにナイシン生産能（ｎ ｆ ｓ ｉ ｎ
ｔｒａｉｔ）ｉ同質遺伝子４ｇ ノ株（ｉｓｏｇｅｎｉ
ｃ ５ｔｒａｉｎｓ ）に対してのみ転移する。ショ糖
の利用能（ショ糖を分解して乳酸発酵を行なう能力）も
ナイシン生産能と一緒に転移される。同系の公知のナイ
シン生産菌株ＨＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４７０（ＮＩＲＤ
１４０４）であり、これも月１いえよう。誘導により得
られた供与体はストレプトコッカス・ラクチスＮＲＲＬ
−Ｂ−１５，４５９及びＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４６０で
あり、同菌株はナイシン生産能及びショ糖利用能金属内
で（ｉｎｔｅｒｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ）転移可能であ
る。
トラスコンシュガントでめるナインン生ｕ ＋ｌ’ Ｒ
４導微生物の全てを、ナインン生死能のドナー（供与体
）として利Ｌ１４することができる。このＪｎ由は、ナ
イシン牛澱能及びツユ糖料Ｌｌ＋能を司どるプラスミド
が一次転移で修飾されてしまうことによるためであろう
。属内受イφ体細゛菌（１ｎｔｅｒσｅｎｅｔｔｃｒｅ
ｃｉｐｉｅｎｔ ｂａｃｔｅｒｉｕｍ ）として好まし
いものけ、ストレプトコッカス・ラクチスのｃＩｌｊ
ｆｌｉｔシア（−ヂラクチｙ、ＮＲＲＬ−Ｂ−１５，０
０５、Ｎ ＲＲＬ−Ｂ−１５，００６、ＮＲＲＬ−Ｂ−
１５，０１８、Ｎ ＲＲＬ−Ｂ −１２，０７０（ＤＲ
Ｃ８，ｃｒ１＋ Ｉａｃ→−）及びＮＲＲＬ−Ｂ−１２
０７１（ＤＲＣ３，ｌａｃ＋、ｃｉｔ’−）、並びにス
トレプトコッカス・ラクチス Ｎ ＲＲＬ−Ｂ−１５，
４５４、ＮＲ）ｅＬ−Ｂ−１５，４５２、ＮＲＲ’Ｌ
−Ｂ −１５，４５５、）ＪＲＲＬ−Ｂ−１５，４５６
及びＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４５７である。外来ＤＮＡを
有するところの結果するナイシン生産性訪導細菌は、ス
トレプトコッカス・ラクチスの亜種ジアセチルラクチス
ＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４６４（及び類似の交配からイＳ
られた同系のトランスコンシュガン）ＮＲＲＬ−Ｂ −
１５，４６５、１５，４６６、１５，４６７） 、ＮＲ
ＲＬ−Ｂ−１５，４６８及びＮ ＲＲＬ −Ｂ −１５
，４６９とこれらの同質遺伝子型の誘導体ノ（クチリア
から選択するのが好ましく、それについては選択によシ
除去される適当した抗生物質抵抗性のマーカーと共に後
に詳述する。
４導微生物の全てを、ナインン生死能のドナー（供与体
）として利Ｌ１４することができる。このＪｎ由は、ナ
イシン牛澱能及びツユ糖料Ｌｌ＋能を司どるプラスミド
が一次転移で修飾されてしまうことによるためであろう
。属内受イφ体細゛菌（１ｎｔｅｒσｅｎｅｔｔｃｒｅ
ｃｉｐｉｅｎｔ ｂａｃｔｅｒｉｕｍ ）として好まし
いものけ、ストレプトコッカス・ラクチスのｃＩｌｊ
ｆｌｉｔシア（−ヂラクチｙ、ＮＲＲＬ−Ｂ−１５，０
０５、Ｎ ＲＲＬ−Ｂ−１５，００６、ＮＲＲＬ−Ｂ−
１５，０１８、Ｎ ＲＲＬ−Ｂ −１２，０７０（ＤＲ
Ｃ８，ｃｒ１＋ Ｉａｃ→−）及びＮＲＲＬ−Ｂ−１２
０７１（ＤＲＣ３，ｌａｃ＋、ｃｉｔ’−）、並びにス
トレプトコッカス・ラクチス Ｎ ＲＲＬ−Ｂ−１５，
４５４、ＮＲ）ｅＬ−Ｂ−１５，４５２、ＮＲＲ’Ｌ
−Ｂ −１５，４５５、）ＪＲＲＬ−Ｂ−１５，４５６
及びＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４５７である。外来ＤＮＡを
有するところの結果するナイシン生産性訪導細菌は、ス
トレプトコッカス・ラクチスの亜種ジアセチルラクチス
ＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４６４（及び類似の交配からイＳ
られた同系のトランスコンシュガン）ＮＲＲＬ−Ｂ −
１５，４６５、１５，４６６、１５，４６７） 、ＮＲ
ＲＬ−Ｂ−１５，４６８及びＮ ＲＲＬ −Ｂ −１５
，４６９とこれらの同質遺伝子型の誘導体ノ（クチリア
から選択するのが好ましく、それについては選択によシ
除去される適当した抗生物質抵抗性のマーカーと共に後
に詳述する。
この発り］は特に、ナイシンに対し感受性を有しない、
生物学的に純粋なナイシン及び乳酸生産性細菌でおって
、供与体細菌中でナイシン生産遺伝情報全司どるところ
のプラスミドを含むティシン生産性ストレプトコッカス
・ラクチス（供与体細菌）をナイシン非生産性でナイシ
ン感受性の芋酸生産性受容体細菌と接合交配（ｃｏｎｊ
ｕｇａｌ ｍａｔｉｎｇ）させることで誘導されたナイ
シン及び乳酸牛ｇ、＋１細菌に、係る。接合交配によっ
てナイシン及りメ乳酸生産性肪導細菌が得られ、成る場
合には、ナイシン生産遺伝情報全司どる（１１．Ｊｉ体
からの原プラスミドが、受容体細菌の宿主染色体と１１
４結合することからしてナイシン及び乳酸生ｐＰ性？？
導ａ＋ｌｒ；、＋からグラスミドとして除去されえない
。ダ・冠体＋１ｉｌｌ ｉｆ’、ｉ Ｉは転移に先立ち
、ナイシンにより抑制できる。供力体ｒ：ｌＩ菌からの
ナイシン生産（及び／三１糖発配）遺伝情報を司どるグ
ラスミドは、（・・さて約２９ Ｍｄａｔであるのが好
オしく、Ｗ ７ｊ％ ＋ｆｌｔ！菌中で２９ Ｍｄａｌ
のもの或ｔよ変更された形、つまり縮小成Ｉｊ４７’：
太七）するか、宿主染色体ＤＮＡと再結合しプ辷形で、
存イ［シうる。
生物学的に純粋なナイシン及び乳酸生産性細菌でおって
、供与体細菌中でナイシン生産遺伝情報全司どるところ
のプラスミドを含むティシン生産性ストレプトコッカス
・ラクチス（供与体細菌）をナイシン非生産性でナイシ
ン感受性の芋酸生産性受容体細菌と接合交配（ｃｏｎｊ
ｕｇａｌ ｍａｔｉｎｇ）させることで誘導されたナイ
シン及び乳酸牛ｇ、＋１細菌に、係る。接合交配によっ
てナイシン及りメ乳酸生産性肪導細菌が得られ、成る場
合には、ナイシン生産遺伝情報全司どる（１１．Ｊｉ体
からの原プラスミドが、受容体細菌の宿主染色体と１１
４結合することからしてナイシン及び乳酸生ｐＰ性？？
導ａ＋ｌｒ；、＋からグラスミドとして除去されえない
。ダ・冠体＋１ｉｌｌ ｉｆ’、ｉ Ｉは転移に先立ち
、ナイシンにより抑制できる。供力体ｒ：ｌＩ菌からの
ナイシン生産（及び／三１糖発配）遺伝情報を司どるグ
ラスミドは、（・・さて約２９ Ｍｄａｔであるのが好
オしく、Ｗ ７ｊ％ ＋ｆｌｔ！菌中で２９ Ｍｄａｌ
のもの或ｔよ変更された形、つまり縮小成Ｉｊ４７’：
太七）するか、宿主染色体ＤＮＡと再結合しプ辷形で、
存イ［シうる。
この発り１は特に、ナイシンに対し感受に１でない）ナ
イシン及び乳酸生産性ｉ消却１菌を沖゛１造する力θ、
であって、供与体細菌中でナイシン生産逍伝柘報を司ど
るグラスミドを含むナイシン生産＋′１．２トレブトコ
ツカス・ラクチス（供与体細菌）ヲ、ナイシン非生ｐｆ
！性でナイシン感受性の乳酸生産付受容体Ａ４１１ ｖ
：４と振合交配させ、同交配により製造されたナイシン
及び乳酸生産性誘導細菌を単離する製造方法に、係る。
イシン及び乳酸生産性ｉ消却１菌を沖゛１造する力θ、
であって、供与体細菌中でナイシン生産逍伝柘報を司ど
るグラスミドを含むナイシン生産＋′１．２トレブトコ
ツカス・ラクチス（供与体細菌）ヲ、ナイシン非生ｐｆ
！性でナイシン感受性の乳酸生産付受容体Ａ４１１ ｖ
：４と振合交配させ、同交配により製造されたナイシン
及び乳酸生産性誘導細菌を単離する製造方法に、係る。
さらにこの発Ｌｖｌは、乳酸生産性誘導細菌を食品のよ
うｌ物ｌ＾中に１１１・大して該物質を保存する方法で
あって、Ｊ−記物質中に、ナイシンに対し感受性でない
ナイシン及び乳酸生産性誘導；１４！Ｉ ｒａであって
、ナイシン生産性供与体ストレプトコソカヌ・ラクチス
からのナイシン住陀遺伝情報金有するグラスミドであっ
て当ぽナインン及び乳酸生産性誘導細菌をｐ゛Ｃ生する
ようにナイシン感受性の受容体細菌へと転移さノｔてい
るグラスミドに由来するＤＮＡを含んでいるナイシンへ
び乳酸生産性誘導細菌を、挿入する方法に、係る。Ｌ記
（７た外来のＤＮＡはナインン生産）１（伝暗号を有し
、ｍ ｙ＃、 ４１１菌中で染色体中に一体にとり込ま
れているか染色体外にある。
うｌ物ｌ＾中に１１１・大して該物質を保存する方法で
あって、Ｊ−記物質中に、ナイシンに対し感受性でない
ナイシン及び乳酸生産性誘導；１４！Ｉ ｒａであって
、ナイシン生産性供与体ストレプトコソカヌ・ラクチス
からのナイシン住陀遺伝情報金有するグラスミドであっ
て当ぽナインン及び乳酸生産性誘導細菌をｐ゛Ｃ生する
ようにナイシン感受性の受容体細菌へと転移さノｔてい
るグラスミドに由来するＤＮＡを含んでいるナイシンへ
び乳酸生産性誘導細菌を、挿入する方法に、係る。Ｌ記
（７た外来のＤＮＡはナインン生産）１（伝暗号を有し
、ｍ ｙ＃、 ４１１菌中で染色体中に一体にとり込ま
れているか染色体外にある。
Ｊ：、記した被保存物質としては、サイロ貯蔵飼料、切
削卸及び食品を含む農業上、工業上、食品ト及び他の用
途のための全ゆる枦類の、セｒ生物にて劣化せしめられ
る産物がある。食品には生鮮肉、生鮮鶏肉、魚、牛乳及
びイ１１１の乳製品、市販用のサラダ、野菜、ドレッシ
ング、ソース、及び玲凍貯芭中に腐敗し易い他の食品が
、含まれる。
削卸及び食品を含む農業上、工業上、食品ト及び他の用
途のための全ゆる枦類の、セｒ生物にて劣化せしめられ
る産物がある。食品には生鮮肉、生鮮鶏肉、魚、牛乳及
びイ１１１の乳製品、市販用のサラダ、野菜、ドレッシ
ング、ソース、及び玲凍貯芭中に腐敗し易い他の食品が
、含まれる。
この発明はまた特に、乳酸生産誘導細菌は該誘導細菌に
よ！ｌｌ製造さね−た製品を押入することによってｌｔ
’ｌ造される、改良された被保存ルフ品であって、＋Ｉ
＋、ナイ／ンに対し感受性でないナイ／ン及び乳酸生産
性誘導細菌であって、該ツｉ７％ 斤！Ｉｆ ’ｉηを
製造するようにナイシン感受性のｑ−答体細ｆ／ａ中に
転移させた、ナインン牛）Ｕ件ストレプトコッカス・ラ
クチス（供与体細菌）からのナインン牛産遺伝暗号金有
するプラスミドに由来−するＩ） Ｎ Ａ金倉むナイン
ン及び乳酸生産性誘導細菌をＪｉｐ人しである被保存製
品、または（２）、北乱１した・ノーイゾン及び乳酸生
産誘導細菌から製造さｉｔたヲーインンが有製品を挿入
しである被保存製品、または（：ｔｌ−１−、、，６＋
したナインン含有製品を、能の抑制物ｙｒｔを／４：）
・ｒ−ｒるがナイシンは生産しない征、！生物と共に４
１１′人しである被保存製品、またはｆ４１． Ｊ：、
記したナイシン含有製品を、ナインンのほかに他の抑制
物質を生産する微生物と共に挿入しである被保存製品、
に係る。
よ！ｌｌ製造さね−た製品を押入することによってｌｔ
’ｌ造される、改良された被保存ルフ品であって、＋Ｉ
＋、ナイ／ンに対し感受性でないナイ／ン及び乳酸生産
性誘導細菌であって、該ツｉ７％ 斤！Ｉｆ ’ｉηを
製造するようにナイシン感受性のｑ−答体細ｆ／ａ中に
転移させた、ナインン牛）Ｕ件ストレプトコッカス・ラ
クチス（供与体細菌）からのナインン牛産遺伝暗号金有
するプラスミドに由来−するＩ） Ｎ Ａ金倉むナイン
ン及び乳酸生産性誘導細菌をＪｉｐ人しである被保存製
品、または（２）、北乱１した・ノーイゾン及び乳酸生
産誘導細菌から製造さｉｔたヲーインンが有製品を挿入
しである被保存製品、または（：ｔｌ−１−、、，６＋
したナインン含有製品を、能の抑制物ｙｒｔを／４：）
・ｒ−ｒるがナイシンは生産しない征、！生物と共に４
１１′人しである被保存製品、またはｆ４１． Ｊ：、
記したナイシン含有製品を、ナインンのほかに他の抑制
物質を生産する微生物と共に挿入しである被保存製品、
に係る。
最後にこの発り１は、１−記したナイシン含有製品であ
ってさらに、ストレプトコッカス・ラクチスの亜稍ジア
セチ弯ラクチス由来の抑制物＠を含むナイ７ン含有製品
に、伶る。
ってさらに、ストレプトコッカス・ラクチスの亜稍ジア
セチ弯ラクチス由来の抑制物＠を含むナイ７ン含有製品
に、伶る。
口月羽！１ な 説ＦＪＩ
実施例１
ショ糖利用能及びナイゾン生産性が接合（ｃｏｎｊｕｇ
ａ−ｔｉｏｎ）ＦＣより転移されうるかどうかをみるた
めにストレプトコッカス・ラクチス Ａ Ｔ ＣＣ−１
１，４５４（ショ糖を利用すると共にナイシンを生産す
る。）を、ストレプトコッカス・ラクチスの亜ｔＴｆジ
アセチ通うクチ、ス及び７トレプトコソカス・ラクチス
（何れもンヨ糖金利用せず、ナインンを生産しない株。
ａ−ｔｉｏｎ）ＦＣより転移されうるかどうかをみるた
めにストレプトコッカス・ラクチス Ａ Ｔ ＣＣ−１
１，４５４（ショ糖を利用すると共にナイシンを生産す
る。）を、ストレプトコッカス・ラクチスの亜ｔＴｆジ
アセチ通うクチ、ス及び７トレプトコソカス・ラクチス
（何れもンヨ糖金利用せず、ナインンを生産しない株。
）會ダ′容体株とした交配実験において、供与体株とし
て用いた。交配多件は、交配用フィルタ（ｍａｔｉｎｇ
ｆｉｌｔｅｒ ） ｆ寒天で被碕しなかった点を除い
て、ゴンザレツ及びクン力（Ｇｏｎｚａｌｅｚ＋Ｃａｒ
ｌｏｓ Ｆ、 ａｎｄ Ｂｌａｉｒ Ｓ、 Ｋｕｎｋａ
＋ Ａｐｐｌ、 Ｅｎｖｉｒｏｎ。
て用いた。交配多件は、交配用フィルタ（ｍａｔｉｎｇ
ｆｉｌｔｅｒ ） ｆ寒天で被碕しなかった点を除い
て、ゴンザレツ及びクン力（Ｇｏｎｚａｌｅｚ＋Ｃａｒ
ｌｏｓ Ｆ、 ａｎｄ Ｂｌａｉｒ Ｓ、 Ｋｕｎｋａ
＋ Ａｐｐｌ、 Ｅｎｖｉｒｏｎ。
Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、 ４６． １９８−１８２（１９
８３））に従った０寒天被覆するのに代えて、寒天表面
に対１而するＩｖＩＩ＋胞を備えたフィルタをＣＯ，／
Ｈｚ雰囲気のＢＢＬ（登録商標）嫌気瓶中に３〜４時
間、置いた。トランスコンシュガントを、受容体の染色
体週Ｌ ４ｔＣ，及びショ糖利用能またはナイシン（１
０００Ｊｌイｔ’Ｕ／−）に対する抵抗から選択した。
８３））に従った０寒天被覆するのに代えて、寒天表面
に対１而するＩｖＩＩ＋胞を備えたフィルタをＣＯ，／
Ｈｚ雰囲気のＢＢＬ（登録商標）嫌気瓶中に３〜４時
間、置いた。トランスコンシュガントを、受容体の染色
体週Ｌ ４ｔＣ，及びショ糖利用能またはナイシン（１
０００Ｊｌイｔ’Ｕ／−）に対する抵抗から選択した。
ストレプトコッカス・ラクチス Ａ Ｔ ＣＣ１１，４
５４の同質遺伝子型株（ｉｓｏｇｅｎｉｃ ５ｔｒａｉ
ｎ ） ’、ｒ４Ｍ成（７た０ストレプトコツカス・ラ
クチス Ａ Ｔ ＣＣ１ｌ、４５４株（乳糖及びショ糖
を利用し、ナイシン全４芝産する。）を加温した生育温
度（４０℃）にさら′１−ことで残分２９ Ｍｄａｌプ
ラヌミドにつき、熱除４ｅした。
５４の同質遺伝子型株（ｉｓｏｇｅｎｉｃ ５ｔｒａｉ
ｎ ） ’、ｒ４Ｍ成（７た０ストレプトコツカス・ラ
クチス Ａ Ｔ ＣＣ１ｌ、４５４株（乳糖及びショ糖
を利用し、ナイシン全４芝産する。）を加温した生育温
度（４０℃）にさら′１−ことで残分２９ Ｍｄａｌプ
ラヌミドにつき、熱除４ｅした。
この熱除去株は、乳糖は利用するかショ糖ｉｊ ＩＩ＋
１．１１せず、ナイシンを生産しなかった。次いでＲ
Ｋ ｅｌ、を追加の残分８２ Ｍｄａｌプラスミド全除
去するように４０℃で追加の熱除去処理し、ストレプト
コツカフ・ラクチス ＡＴＣＣＩＩ、４５４の構成株（
ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ５ｔｒａｉｎ’）を得た。同構
成株は乳糖を利用せず（Ｌａｃ３ｓシヨ糖全利用せず＜
５ｕｃ−）、ナインンを生産せず（Ｎｉ ｓつ、スト
レプトコッカス−ラクチスＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４５３
（Ｌａｃコ５ＩＪＣ−＋ Ｎｉｓつと名付けられた。こ
のＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４５ｉ１１を次いで、高濃度の
ストレプトマイシン（ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ ）に
さらして、＋ ０００７！Ｊ １ｍｔ Ｌｖｎ度におき
同抗生物質で染色体突然変異を得た。このＮＲＲＬ−Ｂ
−１５，４５８３ｍｒ（ストレプトマイシン抵抗性）株
は、ＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４５４と名付けられた。この
株ＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４５４に次いで、接合交配実験
で受答体として用いた。
１．１１せず、ナイシンを生産しなかった。次いでＲ
Ｋ ｅｌ、を追加の残分８２ Ｍｄａｌプラスミド全除
去するように４０℃で追加の熱除去処理し、ストレプト
コツカフ・ラクチス ＡＴＣＣＩＩ、４５４の構成株（
ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ５ｔｒａｉｎ’）を得た。同構
成株は乳糖を利用せず（Ｌａｃ３ｓシヨ糖全利用せず＜
５ｕｃ−）、ナインンを生産せず（Ｎｉ ｓつ、スト
レプトコッカス−ラクチスＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４５３
（Ｌａｃコ５ＩＪＣ−＋ Ｎｉｓつと名付けられた。こ
のＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４５ｉ１１を次いで、高濃度の
ストレプトマイシン（ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ ）に
さらして、＋ ０００７！Ｊ １ｍｔ Ｌｖｎ度におき
同抗生物質で染色体突然変異を得た。このＮＲＲＬ−Ｂ
−１５，４５８３ｍｒ（ストレプトマイシン抵抗性）株
は、ＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４５４と名付けられた。この
株ＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４５４に次いで、接合交配実験
で受答体として用いた。
第１表は、実験とその結果を記載している０これらの実
験におきショ糖利用能及びナイシン生産仙の両者の転移
は、同質遺伝子型受容体であるストレプトコッカス・ラ
クチスＮ ＲＲＬ −Ｂ −１５，４５４についてのみ
認められた。ストレプトコッカス・ラクチス ＡＴＣＣ
ＩＩ、４５４からストレプトコッカス・ラクチスＮＲＲ
Ｌ−Ｂ−１５，４５２及びストレプトコッカス・ラクチ
スの亜種ジアセテ曽ラクチスＮＲＲＬ−Ｂ−１５，００
６−５ｍ’に対するショ糖利用能及びナイシン生産能の
遺伝子的転移は、認められなかった。
験におきショ糖利用能及びナイシン生産仙の両者の転移
は、同質遺伝子型受容体であるストレプトコッカス・ラ
クチスＮ ＲＲＬ −Ｂ −１５，４５４についてのみ
認められた。ストレプトコッカス・ラクチス ＡＴＣＣ
ＩＩ、４５４からストレプトコッカス・ラクチスＮＲＲ
Ｌ−Ｂ−１５，４５２及びストレプトコッカス・ラクチ
スの亜種ジアセテ曽ラクチスＮＲＲＬ−Ｂ−１５，００
６−５ｍ’に対するショ糖利用能及びナイシン生産能の
遺伝子的転移は、認められなかった。
第１表において転移頻度（ｔｒａｎｓｆｅｒ ｆｒｅｑ
ｕｅｎｃｙ）は、供与体のコロニー形成単位（ｃｏｌｏ
ｎｙ ｆｏｒｍｉｎｇｕｎｉ ｔ ＋ ＣＦＵ ）当り
のナイシン抵抗性及びナイシン生産性コロニーの個数で
表わされている。供与体のＣＦＵ個敬は、交配前に測定
した。トランスコンシュガントは、受容体の染色体抵抗
性とショ糖利用能またはナイシン（１０００単位／−）
抵抗性とから選択した。
ｕｅｎｃｙ）は、供与体のコロニー形成単位（ｃｏｌｏ
ｎｙ ｆｏｒｍｉｎｇｕｎｉ ｔ ＋ ＣＦＵ ）当り
のナイシン抵抗性及びナイシン生産性コロニーの個数で
表わされている。供与体のＣＦＵ個敬は、交配前に測定
した。トランスコンシュガントは、受容体の染色体抵抗
性とショ糖利用能またはナイシン（１０００単位／−）
抵抗性とから選択した。
実施例２
ストレプトコッカス・ラクチス Ａ Ｔ ＣＣ１１，４
５４を高ｔＲ’％度のりファマイシン（ｒｉｆａｍｙｃ
ｉｎ ）にさらして、リファマイシン抵抗性（Ｒ４ｆ）
の突然変異体（＃度４００ ｐｇ 汐で抵抗性）を得た
。この突然変異体を、接合可能のプラスミドｐｌＰ５０
１を含むストレプトコッカス・サングイス（Ｓｔｒｅｐ
ｔｃｏｃｃ・ｓａｎｇｕｉｓ ） Ｖ ６８８株との接
合交配実験に用いた〇イｌられｆｃ ）ランスコンシュ
ガント（ストレプトコツカス−サングイスＡＴｃｃ １
１，４５４Ｒｉ ｆｒ（ｐｌ’Ｐ５０１）が単離さｔＬ
３ この菌株はストレプトコッカス・ラクテｙ Ｎ Ｒ
ＲＬ −Ｂ−１５，４５８と命名された。このストレプ
トコッカス・ラクチスＮＲＲＬ−Ｂ−１６，４５８をス
トレプトコッカス・う９ｆス ＡＴＣＣ１１，４５４と
共に、ナイシン生産遺伝子の接合転移をみるために同）
ｇ（遺伝子型（ｉｓｏｇｅｎｉｃ ）交配及び川内（ｉ
ｎｔｒａｇｅｎｅｒｉｃ ）交配実験で供与体として用
いた。木火験のための交配条件は、実施例１について前
述したのと同様とした。
５４を高ｔＲ’％度のりファマイシン（ｒｉｆａｍｙｃ
ｉｎ ）にさらして、リファマイシン抵抗性（Ｒ４ｆ）
の突然変異体（＃度４００ ｐｇ 汐で抵抗性）を得た
。この突然変異体を、接合可能のプラスミドｐｌＰ５０
１を含むストレプトコッカス・サングイス（Ｓｔｒｅｐ
ｔｃｏｃｃ・ｓａｎｇｕｉｓ ） Ｖ ６８８株との接
合交配実験に用いた〇イｌられｆｃ ）ランスコンシュ
ガント（ストレプトコツカス−サングイスＡＴｃｃ １
１，４５４Ｒｉ ｆｒ（ｐｌ’Ｐ５０１）が単離さｔＬ
３ この菌株はストレプトコッカス・ラクテｙ Ｎ Ｒ
ＲＬ −Ｂ−１５，４５８と命名された。このストレプ
トコッカス・ラクチスＮＲＲＬ−Ｂ−１６，４５８をス
トレプトコッカス・う９ｆス ＡＴＣＣ１１，４５４と
共に、ナイシン生産遺伝子の接合転移をみるために同）
ｇ（遺伝子型（ｉｓｏｇｅｎｉｃ ）交配及び川内（ｉ
ｎｔｒａｇｅｎｅｒｉｃ ）交配実験で供与体として用
いた。木火験のための交配条件は、実施例１について前
述したのと同様とした。
第２表は、ストレプトコッカス・ラクナスＮＲＲＬ−Ｂ
−１５，４５８株を供与体として用い、ストレプトコッ
カス・ラクチスＮ ＲＲＬ −Ｂ −１５，４５２、ス
トレプトコッカス・２クチ伍ＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４５
４（ストレプトコッカス・ラクチス ＡＴＣＣＩＩ、４
５４の同質遺伝子桑株）及びストレプト１ｓ コツカス
・ラクチスの亜種ジアセチ蚤ラクチスＮＲＲＬ Ｂ−１
６，００６３ｍｒｔ９容体トシテ用いた交配実験の結果
を、示している。プラスミドｐｌＰ２Ｏ３の転移は２つ
のストレプトコッカス・ラクテ７株において生じること
が認められぐストレプトコッカス・ラクチスの亜種ジア
セチ湾ラクチスに対しては＠川されなかった。ショ糖利
用能及びナインン／ｉ：、産能の転移は同質遺伝子型内
であるストレプトコッカス・ラクチスＮＲＲＬ−Ｂ−１
５，４５４に対してのみ認められ、その頻度は１．４ｘ
１ｏ−’ｃあった。
−１５，４５８株を供与体として用い、ストレプトコッ
カス・ラクチスＮ ＲＲＬ −Ｂ −１５，４５２、ス
トレプトコッカス・２クチ伍ＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４５
４（ストレプトコッカス・ラクチス ＡＴＣＣＩＩ、４
５４の同質遺伝子桑株）及びストレプト１ｓ コツカス
・ラクチスの亜種ジアセチ蚤ラクチスＮＲＲＬ Ｂ−１
６，００６３ｍｒｔ９容体トシテ用いた交配実験の結果
を、示している。プラスミドｐｌＰ２Ｏ３の転移は２つ
のストレプトコッカス・ラクテ７株において生じること
が認められぐストレプトコッカス・ラクチスの亜種ジア
セチ湾ラクチスに対しては＠川されなかった。ショ糖利
用能及びナインン／ｉ：、産能の転移は同質遺伝子型内
であるストレプトコッカス・ラクチスＮＲＲＬ−Ｂ−１
５，４５４に対してのみ認められ、その頻度は１．４ｘ
１ｏ−’ｃあった。
ストレプトコッカス・ラクチスＮＲＲＬ−Ｂ−Ｌ５，４
５８ｅストレプトコッカス・ラクチスＮＲＲＬ−Ｂ−１
５，４５４（同質遺伝子型内）と交配させたとき、２つ
の異なる表現型のトランスコンシュガントが得られた。
５８ｅストレプトコッカス・ラクチスＮＲＲＬ−Ｂ−１
５，４５４（同質遺伝子型内）と交配させたとき、２つ
の異なる表現型のトランスコンシュガントが得られた。
一つの表現型は乳酸に負（Ｉａｃ−５、ショ糖（Ｓｕｅ
’ ）に正であり、ナイシン全生産（Ｎｉｓ＋）した。
’ ）に正であり、ナイシン全生産（Ｎｉｓ＋）した。
この単離物はストレプトコッカス・ラクチスＮ ＲＲＬ
−Ｂ −１５，４５９と命名された。他の表現型のトラ
ンスコンシュガントは乳糖に対し負（ｌａｃ−）、ショ
糖に対し正（ｓｕｃ＋）であり、ナイシ７ｆ生産しく
ｎｉｓ＋）、ズラスミドｐ１．Ｐ５０１を含んでいた。
−Ｂ −１５，４５９と命名された。他の表現型のトラ
ンスコンシュガントは乳糖に対し負（ｌａｃ−）、ショ
糖に対し正（ｓｕｃ＋）であり、ナイシ７ｆ生産しく
ｎｉｓ＋）、ズラスミドｐ１．Ｐ５０１を含んでいた。
これの単離物はストレプトコッカス・ラクチスＮＲＲＬ
−Ｂ−１５，４６０と命名されたＯ これらの誘導株は供与体株と異なり、７トレプトマイシ
ン抵抗性でリファマイシン感受性であって、乳糖から酸
を生産しなかった。しかし受容体である親株と異なり、
ナイシン生産菌であり、炭素源としてショ糖を利用し酸
全生産可能であった。
−Ｂ−１５，４６０と命名されたＯ これらの誘導株は供与体株と異なり、７トレプトマイシ
ン抵抗性でリファマイシン感受性であって、乳糖から酸
を生産しなかった。しかし受容体である親株と異なり、
ナイシン生産菌であり、炭素源としてショ糖を利用し酸
全生産可能であった。
したがってショ糖利用能及びナイシン生産性を司どる遺
伝情報の同質遺伝子型内での転移のみが、ストレプトコ
ッカス・ラクチス Ａ Ｔ ＣＣ１１，４５４株とその
ｐＩＰ５０１誘導体であるストレプトコッカス・ラクチ
スＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４５８とによって、認められた
。
伝情報の同質遺伝子型内での転移のみが、ストレプトコ
ッカス・ラクチス Ａ Ｔ ＣＣ１１，４５４株とその
ｐＩＰ５０１誘導体であるストレプトコッカス・ラクチ
スＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４５８とによって、認められた
。
実施例３
ストレプトコッカス・ラクチスＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４
５９について、ストレプトコッカス・ラクチスＮＲＲＬ
−Ｂ −１５，４５２に対しナインン生産性全転移する
能力があるかどうかを、試験した。受容体であるＮＲＲ
Ｌ−Ｂ−１５，４５２株はナイシン生産性を有せず、酸
を生産するための炭素源としてショ糖全利用不能であっ
た。交配県外はりｒ施例ＩＶｃおけると同様であり、結
果は第３表に示さｉｌている。
５９について、ストレプトコッカス・ラクチスＮＲＲＬ
−Ｂ −１５，４５２に対しナインン生産性全転移する
能力があるかどうかを、試験した。受容体であるＮＲＲ
Ｌ−Ｂ−１５，４５２株はナイシン生産性を有せず、酸
を生産するための炭素源としてショ糖全利用不能であっ
た。交配県外はりｒ施例ＩＶｃおけると同様であり、結
果は第３表に示さｉｌている。
ストレプトコッカス・ラクチスＮ ＲＲＬ −Ｂ −１
５，４，５９は同質遺伝子型でなり株（ｎｏｎ −１ｓ
ｏｑｅｎｉｃｓｔｒａｉｎ ）あるストレプしコツカス
・ラクチスＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４５２に対し、ナイシ
ン生産Ｍ″及びナイシン抵抗性とショ糖利用能を転移Ｔ
ＴＪ能であった０ 実施例４ ストレプトコッカス・ラクチスＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４
６０について、ストレプトコッカス・ラクチスＮＲＲＬ
−Ｂ−１５，４５２とストレプトコッカス・ラクチスの
」ｉ秒ジアセチ〜ラクチｙ、 Ｎ ＲＲＴ−−Ｂ−１５
，４５５及びＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４５６に対しナイシ
ン生産性を転移する能力があるかどうかを、試験した。
５，４，５９は同質遺伝子型でなり株（ｎｏｎ −１ｓ
ｏｑｅｎｉｃｓｔｒａｉｎ ）あるストレプしコツカス
・ラクチスＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４５２に対し、ナイシ
ン生産Ｍ″及びナイシン抵抗性とショ糖利用能を転移Ｔ
ＴＪ能であった０ 実施例４ ストレプトコッカス・ラクチスＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４
６０について、ストレプトコッカス・ラクチスＮＲＲＬ
−Ｂ−１５，４５２とストレプトコッカス・ラクチスの
」ｉ秒ジアセチ〜ラクチｙ、 Ｎ ＲＲＴ−−Ｂ−１５
，４５５及びＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４５６に対しナイシ
ン生産性を転移する能力があるかどうかを、試験した。
受容体株であるＮ ＲＲＬ −Ｂ−１５，４５２、ＮＲ
ＲＬ−Ｂ−１５，４５５及びＮ ！＜ ＲＬ −Ｂ −
１５，４５６は何ハも、ナイシン生産性を有せず、ナイ
ンンに対し感受性であり、酸を生産するために／ヨわ１
；を炭素源として利用不能である。
ＲＬ−Ｂ−１５，４５５及びＮ ！＜ ＲＬ −Ｂ −
１５，４５６は何ハも、ナイシン生産性を有せず、ナイ
ンンに対し感受性であり、酸を生産するために／ヨわ１
；を炭素源として利用不能である。
交配条件及び選択法は実施例１におけると同様であり、
結果は第４衣に示されている。
結果は第４衣に示されている。
ストレプトコッカス・ラクチスＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４
６０ｆｄナイシン生産性、ナイシン抵抗性乃ヒショ糖利
用能を同質遺伝子型でない株ストレプトコッカス・ラク
チスＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４５２に対し、またストレプ
トコッカス・ラクチスの！ｌ［１８ジアテ殻ラクチスＮ
ＲＲＬ −Ｂ −１５，４，５５に対し、転移するこ
とができた。
６０ｆｄナイシン生産性、ナイシン抵抗性乃ヒショ糖利
用能を同質遺伝子型でない株ストレプトコッカス・ラク
チスＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４５２に対し、またストレプ
トコッカス・ラクチスの！ｌ［１８ジアテ殻ラクチスＮ
ＲＲＬ −Ｂ −１５，４，５５に対し、転移するこ
とができた。
数多くのトランスコンシュガント、っ１す＠２η。
株が、実施例３及び実施例４に記載した接合交配から単
離された。誘導さｉ″したストレプトコッカス・ラクチ
スＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４６１は、ストレプトコッカス
・ラクチスＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４５２のトランスコン
シュガントの典型的なものである。
離された。誘導さｉ″したストレプトコッカス・ラクチ
スＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４６１は、ストレプトコッカス
・ラクチスＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４５２のトランスコン
シュガントの典型的なものである。
誘導さ力たストレプトコッカス・ラクチスの亜種ジアセ
チラクチスＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４６９＆よ、ストレプ
トコッカス・ラクチスの亜種ジアセチラクチスＮＲＲＬ
−Ｂ−１５，４５６のトランスコンシュガントの典型的
なものである。
チラクチスＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４６９＆よ、ストレプ
トコッカス・ラクチスの亜種ジアセチラクチスＮＲＲＬ
−Ｂ−１５，４５６のトランスコンシュガントの典型的
なものである。
第５表は、実施例４にρ岐の交配からイ（１らねたトラ
ンスコンシュガント株の形ＩＱ特ｅｂ （ｐｌ＋ｅｎｏ
ｔ ｙｐ ｒ ｃｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ
） ｆ’！とめたものである。各交配から得られたトラ
ンスコンシュガントは選折マーカー及び非歯択マーカー
でもって分析した。トランスコンシュガントのプラスミ
ド含有管の分析により、トランスコンシュガントが受容
菌型のものであることを確認した。またトランスコンシ
ュガントについて、そのそれぞれの受容体の凹原特異的
ファージ（ｈｏｍｏｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐｈａｙｅｓ）
に対する感受性全試験した。トランスコンジュガントハ
ｍｊｌｆｆ情れ、使方、供与体対ｍは感受性を示さなが
っ７？：。
ンスコンシュガント株の形ＩＱ特ｅｂ （ｐｌ＋ｅｎｏ
ｔ ｙｐ ｒ ｃｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ
） ｆ’！とめたものである。各交配から得られたトラ
ンスコンシュガントは選折マーカー及び非歯択マーカー
でもって分析した。トランスコンシュガントのプラスミ
ド含有管の分析により、トランスコンシュガントが受容
菌型のものであることを確認した。またトランスコンシ
ュガントについて、そのそれぞれの受容体の凹原特異的
ファージ（ｈｏｍｏｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐｈａｙｅｓ）
に対する感受性全試験した。トランスコンジュガントハ
ｍｊｌｆｆ情れ、使方、供与体対ｍは感受性を示さなが
っ７？：。
実施例５
ストレプトコッカス・ラクチスの亜種ジアセチルラクチ
スＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４６４、つ１り第１回目の交配
により得られたナイシン生産性のトランスコンシュガン
ト株ヲ、ストレフトコツカス・ラクチスの亜種ジ了セテ
ヘラクチスＮＲＲＬ−Ｂ−１５，０１８−５ｍｒ（スト
レプトマイシン抵抗性）及びストレプトコッカス・ラク
チスの亜種ジアセチちラクチスＮ ＲＲＬ −Ｂ −１
５，００５−Ｆｕｓ’ （フランジ酸抵抗性）との同質
遺伝子型交配においＴ供与体として用いた。
スＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４６４、つ１り第１回目の交配
により得られたナイシン生産性のトランスコンシュガン
ト株ヲ、ストレフトコツカス・ラクチスの亜種ジ了セテ
ヘラクチスＮＲＲＬ−Ｂ−１５，０１８−５ｍｒ（スト
レプトマイシン抵抗性）及びストレプトコッカス・ラク
チスの亜種ジアセチちラクチスＮ ＲＲＬ −Ｂ −１
５，００５−Ｆｕｓ’ （フランジ酸抵抗性）との同質
遺伝子型交配においＴ供与体として用いた。
この交配実験の結果は、第６表に掲げられてＶる。ショ
糖利用能及びナシシン生産性遺伝情報（転移は、これら
の２つの同９を遺伝子型受容体株Ｖ（認められた。各交
配からするトランスコンシュガントについて、グラスミ
１゛含有量をしらべた〇−らに非選択マーカーについて
分析を行なった。。
糖利用能及びナシシン生産性遺伝情報（転移は、これら
の２つの同９を遺伝子型受容体株Ｖ（認められた。各交
配からするトランスコンシュガントについて、グラスミ
１゛含有量をしらべた〇−らに非選択マーカーについて
分析を行なった。。
ランスコンシュガントは受容体型のものである？とが確
認された。
認された。
実施例６
ナイシン生産性の誘導株であるストレプトコッカス・ラ
クチスのｄｌｊ Ｍジアセチ外うクチスＮＲＲＬ−Ｂ−
１５，４６４を、ひき肉に接種して１０℃で培養した。
クチスのｄｌｊ Ｍジアセチ外うクチスＮＲＲＬ−Ｂ−
１５，４６４を、ひき肉に接種して１０℃で培養した。
試験株の個別的なコロニーによりナイシンが生産さノま
たことを確認するために、ストレプトコッカス・クレモ
リス（５ｔｒｅｐｔｃｏｃｃｕｓ ｃｅｒｅｍｏｒｉｓ
） ＡＴＣＣ１４，３６５の１８時間培養物で予め滞流
したペプトン化牛乳寒天を含むペトリ皿中でコロニーを
複製した。ＡＴＣＣ１４，３６５株は、ナイシン生産全
検出するために使用されるナイシン感受性株である（
Ｊ、 Ｇｅｎ、 Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、 ４ ＋ ７１
（１９５０））。
たことを確認するために、ストレプトコッカス・クレモ
リス（５ｔｒｅｐｔｃｏｃｃｕｓ ｃｅｒｅｍｏｒｉｓ
） ＡＴＣＣ１４，３６５の１８時間培養物で予め滞流
したペプトン化牛乳寒天を含むペトリ皿中でコロニーを
複製した。ＡＴＣＣ１４，３６５株は、ナイシン生産全
検出するために使用されるナイシン感受性株である（
Ｊ、 Ｇｅｎ、 Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、 ４ ＋ ７１
（１９５０））。
１８時間培養した後、抑制帯域の現出でナイシン生産が
告知される。この方法はコザツク等（Ｋｏｚａｋｅｔ
ａｌ、 ）、 Ｊ、 Ｇｅｎ、 Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、
８Ｌ ２９５−３０２（１９７４）に記載さねたもの
である。
告知される。この方法はコザツク等（Ｋｏｚａｋｅｔ
ａｌ、 ）、 Ｊ、 Ｇｅｎ、 Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、
８Ｌ ２９５−３０２（１９７４）に記載さねたもの
である。
内申のナイシン含有量は、ファウラー等（Ｆｏｗｌｅｒ
ｅＬ ａｌ、 ）により「Ｔｈｅ Ｑｕａｎｔｉｔａｔ
ｉｖｅ Ａｇａｒ ＤｉｆｆｕｓｉｏｎＡｓｓａｙ ｕ
ｓｒ’ｄ ｆｏｒｔｈｅ ｅｓｔｉｍａｔｉｏｎ ａｎ
ｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆ ｎ１ｓｉｎ
ｉｎ ｆｏｏｄ（食品中のナイシンの４ｆ＃定及び鑑
別のために使用される定寸的寒天拡散分析法）」（Ｔｈ
ｅ Ａｓ５ａｙ ｏｆ Ｎ１５ｉｎ ｉｎ Ｆｏｏｄｓ
、 Ｆｏｗｌｅｒ ｒ ｃ、ｃ、。
ｅＬ ａｌ、 ）により「Ｔｈｅ Ｑｕａｎｔｉｔａｔ
ｉｖｅ Ａｇａｒ ＤｉｆｆｕｓｉｏｎＡｓｓａｙ ｕ
ｓｒ’ｄ ｆｏｒｔｈｅ ｅｓｔｉｍａｔｉｏｎ ａｎ
ｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆ ｎ１ｓｉｎ
ｉｎ ｆｏｏｄ（食品中のナイシンの４ｆ＃定及び鑑
別のために使用される定寸的寒天拡散分析法）」（Ｔｈ
ｅ Ａｓ５ａｙ ｏｆ Ｎ１５ｉｎ ｉｎ Ｆｏｏｄｓ
、 Ｆｏｗｌｅｒ ｒ ｃ、ｃ、。
Ｊａｒｖｉｓ ＋ Ｂ、＋ Ｔｒａｍｅｒ ｒ Ｊ、
； Ａｐｌｉｎ ＆ Ｂａｒｒｅｔ Ｌｔｄ、＋Ｙｅｏ
ｖｉ Ｌ Ｓｏｍｍｅｒｓｅｔ ＋ ＵＫ （英国）＋
ＴｅｃｈｎｉｃａｌＳｅｒｉｅｓ＋ ５ｏｃｉｅｔｙ
ｆｏｒ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ
。
； Ａｐｌｉｎ ＆ Ｂａｒｒｅｔ Ｌｔｄ、＋Ｙｅｏ
ｖｉ Ｌ Ｓｏｍｍｅｒｓｅｔ ＋ ＵＫ （英国）＋
ＴｅｃｈｎｉｃａｌＳｅｒｉｅｓ＋ ５ｏｃｉｅｔｙ
ｆｏｒ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ
。
１９７５、隘８ 、 ｐｐ、９−１０５． ）として述
べられている方法に依った。
べられている方法に依った。
標準曲線は、公知濃度の精製ナイシンを肉に添加するこ
とで作成した。次いで試料肉を、」−ル４のファウラー
等の方法によって処理した。内袖出物を寒天拡散法（ａ
ｇａｒ ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ）で分析
し、ナイシン饋度対数値対域直径寸法曲線（ｌｏｇｎｉ
ｓｉｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｙｓ、 ｚｏｎ
ｅ ｄｉａｍｅｔｅｒ ５ｉｚｅｃｕｒｖｅ ） ｋ作
成した。２トレプトコツカス・クレモ＋）ｘ ＡＴＣＣ
１４，３５６’ｒ、イア シ’Ｉ ９ Ｐ ／４−物と
して用いた。
とで作成した。次いで試料肉を、」−ル４のファウラー
等の方法によって処理した。内袖出物を寒天拡散法（ａ
ｇａｒ ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ）で分析
し、ナイシン饋度対数値対域直径寸法曲線（ｌｏｇｎｉ
ｓｉｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｙｓ、 ｚｏｎ
ｅ ｄｉａｍｅｔｅｒ ５ｉｚｅｃｕｒｖｅ ） ｋ作
成した。２トレプトコツカス・クレモ＋）ｘ ＡＴＣＣ
１４，３５６’ｒ、イア シ’Ｉ ９ Ｐ ／４−物と
して用いた。
高度に精製したナイシン（Ａｐｌｉｎ ｌ Ｂａｒｒｅ
ｔｔ ＋Ｌｉｄ、より入手）′ｆ、試料肉に加え、標準
曲線を用いてナイシン濃度を斜出した。
ｔｔ ＋Ｌｉｄ、より入手）′ｆ、試料肉に加え、標準
曲線を用いてナイシン濃度を斜出した。
試・験微生物の接種物を、５００−のＭ１７ブロｙ （
Ｔｅｒｚａｇｈｉ ａｎｄ ５ａｎｄｉｎｅ＋ Ａｐｐ
ｌ、 Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ。
Ｔｅｒｚａｇｈｉ ａｎｄ ５ａｎｄｉｎｅ＋ Ａｐｐ
ｌ、 Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ。
２９、８０７−８１８（１９７５））中でＮＲＲＬ−Ｂ
−１５，４６４をガ９殖させて作成した。細胞を得て１
０℃で１０分間、１０．００Ｏｒｐｍでの遠心法によ＃
）２回洗滌し、標準法リン酸緩両液（５ｔａｎｄａｒｄ
Ｍｅｔｈｏｄｓｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒ
） （Ｅ、 Ｈ，Ｍａｒｔｌｔ ＋ （Ｅｄ、） Ｓｔ
ａｎｄａｒｄＭｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｅｘａｍｉｎａ
ｔｉｏｎ ｏｆ Ｄａｉｒｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ −乳
製品試験のための標準法−８ｔｈ ｅｄ、 ｐ、６２
＋ Ａｍｅｒ。
−１５，４６４をガ９殖させて作成した。細胞を得て１
０℃で１０分間、１０．００Ｏｒｐｍでの遠心法によ＃
）２回洗滌し、標準法リン酸緩両液（５ｔａｎｄａｒｄ
Ｍｅｔｈｏｄｓｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒ
） （Ｅ、 Ｈ，Ｍａｒｔｌｔ ＋ （Ｅｄ、） Ｓｔ
ａｎｄａｒｄＭｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｅｘａｍｉｎａ
ｔｉｏｎ ｏｆ Ｄａｉｒｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ −乳
製品試験のための標準法−８ｔｈ ｅｄ、 ｐ、６２
＋ Ａｍｅｒ。
Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ ＡＳＳＯＣ，＋ Ｗａｓ
ｈｉｎｇｔｏｎ 、 Ｄ、 Ｃ，）中に再懸濁させた。
ｈｉｎｇｔｏｎ 、 Ｄ、 Ｃ，）中に再懸濁させた。
細胞懸濁物を分光光度測定法で、約１．５Ｘ１０書コロ
ニ一形成単位（ＣＦＵ）／−７へとＮｌ’ｆ ％しｆｃ
ｏ ′３Ｃ際ｆ）ｆａＷｎ １−７ Ｘ １０１’ＣＦ
Ｕ／、ｚであることを測？した。新鮮なブタ肩肉（ｔ
、皮つき）を、当地の食肉供給会社から購入した。皮を
十分に取除き、肉を殺菌したひき自機中で粉砕した０こ
の肉を次いで５０〜１００ｆの量宛に分け、無菌容器中
に入ねた。これらの容器について、次のような調整を行
なった。
ニ一形成単位（ＣＦＵ）／−７へとＮｌ’ｆ ％しｆｃ
ｏ ′３Ｃ際ｆ）ｆａＷｎ １−７ Ｘ １０１’ＣＦ
Ｕ／、ｚであることを測？した。新鮮なブタ肩肉（ｔ
、皮つき）を、当地の食肉供給会社から購入した。皮を
十分に取除き、肉を殺菌したひき自機中で粉砕した０こ
の肉を次いで５０〜１００ｆの量宛に分け、無菌容器中
に入ねた。これらの容器について、次のような調整を行
なった。
Ａ、１１個の容器については１００Ｆの肉にブドウ糖を
、０．５重量％の最終濃度にまで添加した。
、０．５重量％の最終濃度にまで添加した。
解析のためにこれらの試料全２群に等分した。一つの群
の試料は、さらに処理することなく分４ハ【７た。他の
群の試料は、公知ザの精製ナイ７ン（１０〇−２００単
位／食肉１１ｔ−添加して、棹漁曲紳を作成するのに用
いた。
の試料は、さらに処理することなく分４ハ【７た。他の
群の試料は、公知ザの精製ナイ７ン（１０〇−２００単
位／食肉１１ｔ−添加して、棹漁曲紳を作成するのに用
いた。
Ｂ、８個の容器についてｆｄ ５ （ｌ ｆの肉に、ブ
ドウ糖を０．５重量％の最糸冬６崇度Ｋまで、またナイ
ンンを肉Ｉｆ当り１００単位だけ、そ〕１ぞわ添加した
。水試料については毎日、ナイシンを分析した。
ドウ糖を０．５重量％の最糸冬６崇度Ｋまで、またナイ
ンンを肉Ｉｆ当り１００単位だけ、そ〕１ぞわ添加した
。水試料については毎日、ナイシンを分析した。
Ｃ，１１個の容器に′ついては１００Ｆの肉に、ブドウ
糖を０．５ ′Ｔ：頻％の最終淵度に１で、オたストレ
プトコッカス・ラクチスＮ ＲＲＬ −Ｂ −１５，４
６４株を１．７Ｘ１０フＣＦＵ／肉１Ｆの最Ｐハ度に１
で、それぞれ添加した。
糖を０．５ ′Ｔ：頻％の最終淵度に１で、オたストレ
プトコッカス・ラクチスＮ ＲＲＬ −Ｂ −１５，４
６４株を１．７Ｘ１０フＣＦＵ／肉１Ｆの最Ｐハ度に１
で、それぞれ添加した。
結果を′ＫＳｒ人に示す。同表において、ｒＮＩ）Ｊは
測牢しなかったことを示し、また肉質針側（ｊｈは次の
通りである。
測牢しなかったことを示し、また肉質針側（ｊｈは次の
通りである。
０・・・新鮮、線内芳香、真の赤色
ｌ・・・僅かに芳香を損失、真の赤色
２・・・僅かに芳香全損失、はっきりした赤３・・・芳
香損失、僅がの赤色 ４・・・腐臭、ぬるぬるした外観、赤色なし・隣 実施例７ 牛乳中のナイシン含有ｉｆ、実施例６で肉について利用
したのと同様の方法で測定した。
香損失、僅がの赤色 ４・・・腐臭、ぬるぬるした外観、赤色なし・隣 実施例７ 牛乳中のナイシン含有ｉｆ、実施例６で肉について利用
したのと同様の方法で測定した。
試験微生物の接種物を、Ｍ１７ブロヌ中で１８時間、微
生物を培養することで作成した。細胞を得て１０℃で１
０分間、１０．００ Ｏｒｐｍでの遠心法により２回洗
滌し、ｐ Ｈ７，２の標準法リン酸緩衝液中に再懸濁さ
せた。懸濁物を分光光度測定法で、１．５ｘｌｏａコロ
ニ一形成単位／−へと調整した。脱脂ドライミルク（１
０容量−％の水を含有）金３０分間、蒸気にあてたとで
冷却し、ブドウ糖を最終濃度０．５η１．量％まで添加
した。この牛乳とブドウ糖との混合物に培養微生物を約
１０６ＣＦ Ｕ／ ｍｌの割合で接種し、３２℃で培養
した。試料の分析は毎日性なった。
生物を培養することで作成した。細胞を得て１０℃で１
０分間、１０．００ Ｏｒｐｍでの遠心法により２回洗
滌し、ｐ Ｈ７，２の標準法リン酸緩衝液中に再懸濁さ
せた。懸濁物を分光光度測定法で、１．５ｘｌｏａコロ
ニ一形成単位／−へと調整した。脱脂ドライミルク（１
０容量−％の水を含有）金３０分間、蒸気にあてたとで
冷却し、ブドウ糖を最終濃度０．５η１．量％まで添加
した。この牛乳とブドウ糖との混合物に培養微生物を約
１０６ＣＦ Ｕ／ ｍｌの割合で接種し、３２℃で培養
した。試料の分析は毎日性なった。
ナイシンの分析手順は、次の通りである。（１）。
試料３０−を採取した。＋２）、５Ｎ ＨＣＩを用いて
ｐＨを２に調整した。（３）、試料金５分間、煮沸した
。（４）、試料を冷却した。（５）、試料を１０℃で１
０分間、Ｉ Ｏ，ＯＯＯｒｐｍで遠心分離処理した。
ｐＨを２に調整した。（３）、試料金５分間、煮沸した
。（４）、試料を冷却した。（５）、試料を１０℃で１
０分間、Ｉ Ｏ，ＯＯＯｒｐｍで遠心分離処理した。
（６）、上澄みを前述の子弁的寒天拡散法で分析した。
検定微生物は、→イシンに対し感受性であるＡＴＣＣ１
４，８６５とした。ＡＴＣＣＩＩ、４５１Ｊ：、ナイシ
ン及びナイシン生産株に対し不感受性である。
４，８６５とした。ＡＴＣＣＩＩ、４５１Ｊ：、ナイシ
ン及びナイシン生産株に対し不感受性である。
標準曲線は、牛乳試料にナイシン全１００単位／−の割
合で添加して、毎日作成した。結果を第８表に掲げる。
合で添加して、毎日作成した。結果を第８表に掲げる。
第８表において株Ｎ ＲＲＬ −Ｂ −１５，４５５、
ＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４５２及Ｕ Ｎ ＲＲＬ −Ｂ
−１５，４５６１Ｉｉ親型の株の代表的なものであり、
株ＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４６２、ＮＲＲＬ−Ｂ７１５，
４６１及びＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４６９はそれぞ冶、そ
の飴導株の代表的なものである。
ＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４５２及Ｕ Ｎ ＲＲＬ −Ｂ
−１５，４５６１Ｉｉ親型の株の代表的なものであり、
株ＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４６２、ＮＲＲＬ−Ｂ７１５，
４６１及びＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４６９はそれぞ冶、そ
の飴導株の代表的なものである。
この発明に係る誘導微生物、特に誘導糾１菌は冷蔵温度
でナイシンＣ及びｎＪ能性として微生物を抑制する他の
物質）を生産でき、このことは食品の保存とで極めて有
利である。この事実に第７ゲシ中の結果により示されて
おり、ト導徽生物を添加した肉が１０日目処至る寸でい
たみ始めなかったのに対して、誘導微生物を添加しなか
ったｖ＋ ＋！６肉は３白目でいたみ始め、７日目１で
に腺１敗してし寸っている。
でナイシンＣ及びｎＪ能性として微生物を抑制する他の
物質）を生産でき、このことは食品の保存とで極めて有
利である。この事実に第７ゲシ中の結果により示されて
おり、ト導徽生物を添加した肉が１０日目処至る寸でい
たみ始めなかったのに対して、誘導微生物を添加しなか
ったｖ＋ ＋！６肉は３白目でいたみ始め、７日目１で
に腺１敗してし寸っている。
好せしいストレグトコツカヌ・ラクチスの亜種ジアセチ
ルラクチスは、選択時に除去されるフシジン酸抵抗性マ
ーカーをもつＮ ＲＲＬ −Ｔζ−１５，４６９と、？
Ｍ択時に除去されるリファマイシン抵抗性マーカーをも
つＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４６４とである。
ルラクチスは、選択時に除去されるフシジン酸抵抗性マ
ーカーをもつＮ ＲＲＬ −Ｔζ−１５，４６９と、？
Ｍ択時に除去されるリファマイシン抵抗性マーカーをも
つＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４６４とである。
これらの誘導株の何名、も、乳糖利１ｆ、Ｉ能を有しな
い。
い。
第１頁の続き
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、 ナインン生産遺伝情報を有する染色体性成ｌｄ細
胞質の外来ＤＮＡであって、ナイシン生産性の供与体微
生物から取得して受容体微生物中にナイシン生産性誘導
徽生物を産生ずるように転移させた外来ＤＮＡを、含む
ナイシン生産性誂導微生物。 ２、特許請求の範囲第１項に記載のナイシン生産性訪導
僧住物であって、外来ＤＮＡを転移させである前記受容
体微生物が細菌、酵母もしくはカビから選択されたもの
であるティシン生産性誘導微生物。 ３．４？許請求の範囲第１項に記載のナインン生産性銹
導微生物であって、夕）来ＤＮＡ１転移させてあｈ ｉ
ｆｌ記受り体微生物がストレプトコッカス種、ヘシオコ
ッヵス種、ラクトバチルス種、りＤ ヒオニバクテリウ
ム種、ミ り ローフ ッ ヵ ス 釉、ロイコノスト
ック種、スタフィロコッカス種、クロストリジウム棟、
フラボバクテリウム種、ブレビバクテリウム拙、エシェ
リヒア・コリ神及びシュードモナ７種から成る菌種群か
ら１゛（択されたπ１１１菌であるティシン生産性誘導
微生物。 ４、特許請求の範囲第１項にＲ載のティシン生産性誘導
微生物であって、外来ＤＮＡ１転移させであるＩＩＩ記
受容体微生物がザッカロミセスイ重、特にサツカロミセ
ス・セレビッンエ、デバリオミセス札、特ニテハリオミ
セス・ハンセニ、トルロプシス拙、ブレクツミセス種、
カンジダ種、クレノケラ種、クルイベロミセスＫｆｊ及
び７ゾザツカロミセス（ルから成る酵母種群から選択さ
ｉｔた酵母であるティシン生産性誘導微生物。 ５、特許請求の範囲第１項に記載のナインン生産性訪褥
微生物であって、外来ＤＮＡを転移させである０１１記
受容体微生物がペニシリウ棹、ムコール種、リゾープス
種、アスペルギルスね、ドイクロミセテス種、アスコミ
セテス種、ジオトリクム行及びモナスクス種から成るカ
ビ種鮮から選択されたカビであるティシン生産性誘導微
生物。 ６ 特許請求の範囲第１項に記載のナインン生１２ｆｆ
伯訪導微生物でろって、Ｏｔ１記した供力体微生物、受
容体微生物及び詔導微生物がそれぞわ細菌であるナイノ
ン生汁性め導微生物。 ４″″！畔 ７ 行許ｆｋ’ｉ氷の範囲第１項に記載のナインン生ｆ
：（’ｊ誘導微生物であって、それより外米ＤＮＡを取
（ＯＬだ１ｊｉＪ記供与体微生物が、ナイシン生産性の
ストレプトコッカス・ラクチス株であるティシン生産性
誘導微生物。 ８ 特♂［，１ｔ″Ｉ求の範囲第１項に記載のナインン
生派性訪導微生物であって、それよシ外来ＤＮＡを弘移
させた０［」記但与佳微生物がストレプトコッカス・ラ
クチスでちゃ、前記受容体微生物が７トレブトコソカス ン生産性誘導微生物。 ９、 特許請求の範囲第１項に記載のナイシン生犀性航
７４ー′Ｉ倣生物であって、それより外来ＤＮＡ全転移
き一＋！：ＡＯｆｔ記供方体微生物がストレプトコッカ
ス・ラクチス ＡＴＣＣ１１．４５４、ＮＲＲＬ−Ｂ＝
１５，４５８、ＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４５９、ＮＲＲＬ
−Ｂ−１５，４６０、Ｎ Ｒ 、Ｒ Ｌ − Ｂ −
１ ５．４ ６ ］、］ＮＲＲＬーＢー１５，４６２び
ＮＲＲＬ−Ｂ−１５．４７０から成る群から選択された
ものであるティシン生産性誘導微生物。 １０ 特許請求の範囲第１項に記載のナインン生β−゛
性誘導微生物であって、ｎＩＪ記受客受容体微生物トレ
プトコッカス・ラクチ２の亜種ジアセチルラクチスＮ
Ｒ Ｒ Ｌ− Ｂ− １５，００５、ＮＲＲＬ−１３−
１ ５、０ ０ ６、ＮＲ Ｒ Ｌ−Ｂ− １５，０１
８、Ｎ Ｒ Ｒ Ｉ− −Ｂ−１２，０７０及びＮＲＲ
Ｌ−Ｂ−１２，０７１ 並びにその同質遺伝子型誘導体
から成る群から１゛を目１＜されたものであるナイン／
生産１／４已ｐｆ）微生物。 ＩＬ ｌｉ！？許請求の範囲第１項に記載のナインン生
産性誌導微生物であって、外来Ｔ） Ｎ Ａを転移させ
であるｎ１！記受容体微生物がクラｌ，陰１テ１４τｖ
１憤に低温菌、ｋ抑制する化合物を生蛾するものであり
、それから外来ＤＮＡ’ｅ取イｑしたＯ１１記（、Ｉ（
与体（１１）生物がナインンを生産するものであって、
Ｊ１記し７こ抑制化合物生産性とナイシン生産性とを共
に有しているティシン生産性誘導微生物。 １２、特許請求の範囲第１１項に記載のプーイシン住江
性誘導微生物であって、グラム１湯（ｉし菌、特に胞子
形成菌、全抑制づーると共にグラムｌ！へＭｒ，蟹、特
に低温菌、を抑制する性質を有するナイロン生産性誘漕
做生物。 １３ 特許請求の範囲第１．１ＪＮＫ記載のナイシン生
産性誘漕微生物で凸って、ストレプトコッカス・ラクチ
スの亜種ジアセチルラクチスＮ Ｒ Ｒ Ｌ −Ｂ−１
５，４６４、ＮＲＩｊＬ−Ｂ − １５，４６５、ＮＲ
ＲＬ−Ｂ−１５，４６６、ＮＲＲＬ −Ｂ−１５，４６
７、ＮＲ Ｒ． １− − Ｂ − １ ５．４ ６
８かびＮＲＲＬ−１３−１５，４６９０１２ひＶこその
同質遺伝子型の菌誘導体のうちの（ｉ’ｌれかーである
ナイシン生ｐｎ性Ｖ．導微生１勿。 １４、特許請求の範囲第１頂，に記載０ヲーイ／ン生産
４／４−誘尋微生物であって、液伏濃縮培養物、θ諧縮
凍結成り非凍結培養物、安定化８また乾燥ｊ名養９勿喧
１こはｉｊｌｊ結＃．燥培猜物の形で？：％！Ｍされて
（八るナインン牛産（４１： ｆｉん導稗．′牛物，つ
１５、特許請求の範囲第１項に記載のナインン生産性訪
導微生物であって、非枦縮形のものであるティシン生産
性誘導微生物。 １６、 ’ＪＫ許詰末の範囲第１項に記載の“ノーイン
ン生厘性訪導微生物であって、凍結、非線結成は非ン．
ｉｉｊ結乾燥の粉末、凍結乾燥した粉末、捷たけ安定化
された非凍結乾燥の乾燥粉末の′１１４で儂縮さねてい
るナインン生Ｎヨ性誘導微生物。 １７ 特許請求の範囲第１項に記載のティシン生産性誘
導微生物であって、ナインン生産能全イ１しない微生物
を混合しであるナイシン生産慴誘勇微（１：］］シｉシ
シシノ □８ 特ｒＦ 請求のｉｌｉｆｌ．１７ｔｉ第１拍に，
ｊｄ＆、のナイシン牛汗性誘心微θ；物であって、ナイ
ー／ン抵抗怖−のものから選択さｊ友ナインン非／＋Ｚ
産件のストレプトコッカス・ラクチスの！ｌＩＵ屯ジア
セチルラクチス全混合しであるナインン生産性け／；
Ｉｆ ｉｉｌ：’／牛物。 １９ 特許請求の範囲第１拍に八−載のティシン生産性
誘導微生物であって、ストリンジェント型の抗バクテリ
オファージに刻する予防策なしにナイシンの生産を確保
しうるように互に異なったファージ感受性を有する複数
株のナイシン生産性誘導微生物舎混合してなるティシン
生産性誘導微生物。 ２０、供与体微生物のティシン生産遺伝すＩ５報を有づ
−る染色体性或は細胞質のＬ）ＮＡを、ナイシン非生産
性です・ｒシンに対し感受性或は不感受性の受容体微生
物中に接合転移、形質導入或は形り■転換により転移Ｅ
せて、誘導されたティシン生産性誘導微生物であり、１
配したＤＮＡが受容体微生物に対し外来性のものでナイ
シン牛頬遺伝情報全有し、受容体微生物の染色体中に一
杯的にとり込まわるか染色体外にあってナインン生産性
を附与するものであるナイ／ン生産性計導微生物。 ２１、特許、（１７米の範ｖ４１第２０項に記載のナイ
ンン生産性助、導微生物であって、Ｉ） Ｎ ＡをｉＩ
ｔ／に移させである１ｉｆＪ記受容体微生物〃・ナイシ
ン感受性のものであるティシン生産性誘導微生物。 ２２、特許請求の範囲第２０項に記載のナイシン牛産性
訪尋微生物であって、Ｉ） Ｎ Ａ （ｌ−転移させで
ある１１［Ｊ記受￥手体微生物がナイシンにより抑制さ
れるものであり、誘導微生物がナイシンにより抑制さハ
ない形質を有しているナイシン生産灼肋導微生物。 ２３、特許ｎｔ’！氷の範囲第２０ ）ｙａに２載のナ
インン生産性読導微生物であって、外米Ｉ） Ｎ Ａを
転帰ｊゼであるｔｊ１ｉ記受容鉢受容体微ストレプトコ
ッカス釉、ヘシオコノヵス種、ラクトバチルスｆΦ、プ
ロピオニバクテリウム秤、ミ り ロ コ ノ ヵ ス
！甲、ロイコノストック（Φ、スフフィロコツカスＡ・
１１、クロストリジウノ、鍾、フラボバクテリウム種、
プレビバクテリウムオ・ト、エシェリヒア・コ＋） １
ｉ９及びシュードモナスＪ−Φがら成るｒｆ４にψ群カ
・らＩｚ′択された醒１１菌であるナインン生だ、性１
♂り導徹生物。 ２４ 柑Ｆ許請求の範囲第２０項に記載のナインン生産
４（ト訪２ｎ微生物１であって、外来Ｄ Ｎ Ａ全転移
さセテする前記受容体微生物がザノカロミセス（Φ、テ
ハリオミセス種、特にデバリオミセス・ハンセニ、トル
ロプンス棟、プレクノミｐス梠・、カンじダｆ：１１、
クレッヶラ万・■１、クルイベｒゴミセスｆ”ｆｆ ＆
ひミゾサツカロミセスｌから成る酵母ｆｌｉｊ群がらＪ
゛１（択さｔまた酵母であるティシン生産性誘導微生物
。 ２、特許請求の範囲第２０項ＶＣ記載のナイン〉生産性
誘導微生物であって、外来ＤＮＡを転移さｕ テｈ ル
ｒＪｉｌ記受容体微生物がペニシリウ種、ムコール種、
リゾーゲス種、アスペルギルス種、ドイクロミセテス種
、アスコミセテス種、ジオトリクム種及びモナスクス種
から成るカビ種酢がら選択されたカビであるティシン生
産性誘導微生物。 ２６、％許諸氷の範囲第２０項に記載のティシン生産性
誘導微生物であって、それよりＤＮＡを転移させた前記
供与体微生物がティシン生産性細菌でネるティシン生産
性誘導微生物。 ２、特許請求の範囲第２０項に記載のティシン生産性誘
導微生物であって、それよシＤＮＡを転移させた前記供
与体微生物がストレプトコッカス・ラクチス Ａ’ＴＣ
ＣＩＩ、４５４であるティシン生産性誘導微生物。 ２８ 特許請求の範囲第２０項に記載のナイシン生産性
訪導微生物であって、それよりＤＮＡを転移させたｌｊ
ｔ＋記供与体微生物がストレプトコッカス・ラクチスＡ
ＴＣＣＩＩ、４５４、ＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４５８、Ｎ
ＲＲＬ−Ｂ −１５，４５９、ＮＲＲＬ −Ｂ−１５，
４６０、ＮＲＲＬ−Ｂ −１５，４６］、 Ｎ ＲＲＬ
−Ｂ−１５，４６２及びＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４７０か
ら成る群から選択されたものであるナインン生産性銹導
微生物。 ２９、％許諸水の範囲第２０項に記載のナイシン生産性
訪導微生物であって、ＤＮＡ全転移さｉまた前記受容体
微生物がストレプトコッカス・ラクチスの亜種ジアセチ
ラクチスＮＲＲＩ−−Ｂ−１５，００５、ＮＲＲＬ−
Ｂ−１５，００６、ＮＲＲＬ−Ｂ−１５，０１８、ＮＲ
ＲＬ−Ｂ−１２，０７０及びＮ ＲＲＬ −Ｂ −１２
，０７１゜並ひにその同質遺伝子型誘導体から成る群か
ら選択されたものであるナイシン生産性＠漕微生物。 ３０、特許請求の範囲第２０項に記載のティシン生産性
誘導微生物であって、ナインン生産情の１１１１記供与
体微生物がストレグトコッヵス゛ラクナスＮＲ’ＲＬ−
Ｂ−１５，４６１及びＮ ＲＲＬ −Ｂ −１５，４（
ｉ２、並びにその同質遺伝子型誘導体から成る群からか
；択されたものであるナイシン生産性■’？６導微生物
。 ３１箱４請求の範囲第２０項に記載のナイシン生産性訪
導微生物であって、ストレプトコッカス・ラクチスの亜
種ジアセチノラクチスＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４６４、Ｎ
ＲＲＬ’−Ｂ −１５，４−６５、ＮＲＲＬ−Ｂ−１５
，４６６、ＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４６７、ＮＲＲＬ−Ｂ
−１５，４６８及びＮ ｘ＜Ｒｔ、 −Ｂ −１５，４
６９、並びにその同質遺伝子型の菌誘導体のうちの伺ノ
］、か−であるティシン生産性誘導微生物。 ３２、ティシン生産性誘導微生物を製造するための方法
であって、 （ａ）、供与体微生物中でナイシン生産遺伝情報を有す
るところのＤＮＡであって受容体微生物に対し外米性で
あるＤＮＡを受容体微生物中に転移させて、１：記ＤＮ
Ａによりナインン生産遺伝情報を有せしめられたナイシ
ン生産性の誘導微生物１ ％’生成させ、（１））、ｈ
記したナイシン生産性の誘導微生物を単離する、 ティシン生産性誘導微生物の製法。 ３３ 特許、Ｖ１￥水の範囲第３２項に記載のナイシン
生産性訪導微生物の製法であって、ｒＪｔ＋？受容体微
生物としてナイシン感受性のび・生ｑν１を用いる！１
１．′ノ法。 ３４゜特許請求の範囲第３２項に記載のナイシン生産性
銹導微生物の製法であって、１［ｉ客受容体微生物とし
てナインンにより抑制さ１する微生物音用い、誘導微生
物としてナインンにより抑制されない微生物を得る覆り
法。 ３５ 特許、請求の範囲第７３２項に記１１ｊ−のティ
シン生産性誘導微生物の製法であって、Ｉｉ’、ｌ客受
゛打＜Ａ−微生物としてストレフ”トコソカス下重、ベ
ジ刃゛コツカス種、ラクトバチルス種、プロピオニバク
ゾリウム種、ミ り Ｄ コ ッ カ スー神、ロイコ
ノストック秒、スフフィロコツカス種、クロ７トリジウ
ムイ市、フラボバクテリウム利１、ブレビバクテリウム
Ａ市、エシェリヒア・コリ秤及びンユードモナス棟から
成る菌石１ｊ群力・ら選択された細菌を、用いる製法。 ３６、特許請求の範囲第３２項に記載のティシン生産性
誘導微生物の製法であって、１１１記受容体微生物とし
てサツカロミセス（・ｐ、デバリオミセス種、４りニテ
バリオミでヌ・〕・ンセニ、トルロプシス粗ブレクツミ
セス種、カンジダ種、クレツケラ種、クルイベロミセ７
．５ｉ及びシゾサツカロミセス種から成る酵母種群から
選択された酵母を、用いる製法０ ３７、特許１ｆ１１水の範囲第３２項に記載のナイシン
生所性品尋微生物の製法であって、ｌｉＵ記受客受倣生
物としてペニシリウ種、ムコール１１７、リゾーゲス種
、了スペニギルス拙、ドイクロミセテス利ヘアスコミセ
テス種、ジ第１・リクム種及びモナスクス拙から成るカ
ビ独鮮から選択されたカビを、用いる製法。 ３８、特許請求の範囲第３２項に記１１＆のナイン二ノ
生産性誘２序微生物の製法であって、ｌ（１記した外来
ｏ Ｎ Ａ ｔ ｒｉｏｔ記受答客受生物中に、ナイシ
ン生産菌である＋’＋ｉＪ記供与イ木微生物との交配に
よって転移させる製法。 ３９、特許請求の範囲第３２項に記載のナイシン生産恰
ｔ＾樽微生物の製法であって、３り記供力体微ＣＣ１１
，４５４、Ｎ Ｒ、ＲＴ、−Ｂ−１５，４５８、Ｎ Ｒ
ＲＬ−Ｂ−１’５，４５９、Ｎ ＲＲＬ −］九−１５
，４６０、ＮＲＲＬ−Ｂ −１５，４６１、Ｎ ＲＲＬ
−Ｂ −１５，４６２、ＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４７０
、及でｙその伝１グ！［；四ｆｔ：、 Ｔ−７に’ジ誘
導体から成る群つ・ら帝釈さ１１．７′ζ・ものを、１
（１１ハ、乙製法。 ・１０．特許ｒｉＮｆ ’Ｒの滝囲第３２項に１１已キ
Ｖのり・インン生産性誘導倣生物の製法Ｃあつ゛て、曲
式九２了、容イ４・〜生物としてストレプトコッカス・
ラフ１スのＭｔｉ、 １重ジアセチ・・ラクチスＮＲＲ
Ｌ−Ｂ−１５，００５、ＮＲＲＬ−Ｂ−１５，００６、
Ｎ ＲＲＴ−−Ｉｓ −＋ ５，０１８、ＮＲＲＬ−Ｂ
−１２，０７０、Ｎ ＲＲＬ −Ｂ １２．（＋７１、
及びその同り１；；１伝子型諷痺イ、１・から成るＪｊ
Ｙ、 ；Ｑ・ら’、（ｌｊ ４Ｌ＜さｔしたものを、■
暇へる製７１九 ４１、４’８訂請求の範囲第３２〕ｎに記４戊のす、イ
ンン生産性８ル導微生物の製法であって、生１．■させ
た゛Ｊ−インン生産恰のｉ（１記誘導微牛物がストレプ
トコッカス・ラクチスの亜１．ｉ１１ジアーヒチ ラク
グ・スＮ ＲＩｔＬ−Ｂ−１５，４６４、Ｎ ＲＲ１，
−Ｂ −１５，４６５、ＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４６Ｇ、
Ｎ ＲＲＬ −１３−１５，４６７、ＮＲＲＬ−Ｂ−１
５，４６８及びＮ ＲＲＬ −Ｂ −１５，４６９並ひ
にその同質遺伝子型誘導体の何れか−である製法。 ４２ ティシン生産性誘導微生物を製造するための方法
であって、 （ａ）、ナイシン生産性の供与体微生物からナイシン生
産遺伝情報金有するＤＮＡｅ、同様にナイノン生産性の
受容体微生物中に転移させて、ナイゾン生産能を高めら
れたナイシン生派性の誘導微生物を生成させ、 （ｂ）、北乱１したナイシン生産性の訃勇微生物を単ｔ
ｉＩ（ｔする、 ナイシン生産性Ｌ［、微生物の製法。 ４３、ナインン生記性の供与体微生物から得られる、ナ
イシン生産遺伝情報を有する外来１）ＮＡであってティ
フン生産性微生物を生成するように受容体微生物中に転
移させである外来ＤＮＡｋ含むナインン生産性誘導微生
物奮、被保存物質に挿入することを４コ１徴としてなる
、ティフン生産性誘導微生物の使用法。 ４４、特許請求の範囲第４８項に記載のナイノン生産性
訪導微生物の使用法であって、ｎｆＪ Ｅ被保存物質が
農産物、工業製品もしくは食品の何れかであって微生物
により劣化もしくは腐敗さｈ易い物質である、使用法。 ４５、特許請求の範囲第４３１Ａに記載のナイシン生産
性誘４微生物の使用法であって、ｉ＋＋記受容体微生物
がナインン感受性のものである、使用法。 ４６、特許請求の範囲第４３項に記載のナイシン生産性
銹導微生物の使用法であって、前記受容体微生物がナイ
７ンにより抑制されるものであり、ＭｆＪ記誘ｆＩ−微
生物がナインンにより抑制μｉｔないものである、使用
法。 ４７ 特許請求の範囲第４３項に記載のティフン生産性
誘導微生物の使用法であって、外来１） Ｎ Ａを転移
させである「１１」客受容体微生物がストレプトコッカ
ス種、ベジオコッカス捗、ラクトバチルス沖、グロピオ
ニバクテリウム独、ミクロコツ、力、１ス＝ １ｍ 、
ロイコノストック種、スフフィロコツカス種、クロスト
リジウム椋、フラボバクテリウム独、ブレビバクテリウ
ム種、エシェリヒア・コリ種及びシュードモナス種から
成る菌種君や〃・ら選択された細菌である、使用法０ ４８、特許請求の範囲第４３項に記載のナイシン生産性
訪導微生物の使用法であって、外来ＤＮＡを転移させで
あるｌＩＪ記受客受微生物７５玉ダーツカロミセス棟、
デバリオミセス種、特にデノくリオミセヌ・ハンセニ、
トルログンス抽、プレクツミセスｔ’Ｍ、カンジダＩ１
１クレツケラ種、クルイベロミセス種及びシゾザツカロ
ミセス鍾から成る酵母種打力１ら選択された酵母である
、使用法。 ４９、特許請求の範囲第４３項に記載のナイシン生産性
肪導微生物の使用法であって、外来ＤＮＡを転移させで
ある前記受容体微生物がベニシ１ノウム種、ムコールｍ
、ｌＪゾープス種、アヌベルギルス柚、ドイクロミセテ
ス種、アスコミセテス稲、ジオトリクム利Ｉ及びモナス
クス種から成るカビ８［ｔ１１ηかも選択されたカビで
ある、使用法。 ５０、特許請求の範囲第４８項に記載のティシン生産性
誘導微生物の使用法であって、前記供与体微生物がナイ
シン生産菌である、使用ｖミ。 ５１、特許請求の範囲第４３項に記載のティシン生産性
誘導微生物の使用法であって、それより外来ＤＮＡ’（
ｒ転移させたｉｌｌ記供与体微生物力ｉストレプトコッ
カス・ラクチス ＡＴＣＣＩＩ、４５４、ＮＲＲＬ−Ｂ
−１５，４５８、ＮＲＲ１，−Ｂ −１５，４５９、Ｎ
ＲＲＬ−Ｂ−１５，４６０、Ｎ ＲＲＬ −Ｂ −１５
，４６１、ＮＩセＲＬ −Ｂ −１５，４６２及びＮ
ＲＲＬ −Ｂ −１５，４７０、並ひにその同質遺伝子
型誘導体から成る打力１ら選択されたものである、使用
法。 ５２、特許請求の範囲第４３項ｖＩ−記載のティフン生
産性誘導微生物の使用法であって、外来ＤＮＡを転移さ
せである曲客受容体倣生物かストレフ”トコツカス・ラ
クチスＮＲＲＬ−Ｂ −１１，４５２、ＮＲＲＬ−Ｂ−
１５，４５８及びＮ ＲＲＬ −Ｂ −１５，４５４、
並びにその等質遺伝子型誘導体から成る群から１宍択さ
ｉまたものである、使用法。 ５３．０許請求の範囲第４３項に記載のナインン生産性
訪導微生物の使用法であって、外来ＤＮＡを転移させで
あるｌｉＱ記受客受容体微生物トレフトコツカス・ラク
チスの亜１種ジアセチ・ラクチスＮＲ１１Ｌ−Ｂ−１５
，００５、ＮＲＲＬ−Ｂ −１５，（１０６、ＮＲＲＬ
−Ｂ−１５，０１８、Ｎ ＲＲＬ −Ｂ −１２，０７
０及びＮＲＲＬ−Ｂ−１２，０７１、並ひにその同質遺
伝子型誘導体から成る群から選択されたものである、使
用法。 ５４、、４￥許請求の範囲第４３項に記載のティシン生
産性誘導微生物の使用法であって、前記誘導微生物とし
て、ヌトレグトコツカス・ラクチスのｉ（トｆ：１ｉジ
アセチ ラクチスＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４６４、Ｎ Ｒ
ＩＩ Ｌ−Ｂ−１５，４６５、ＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４
６６、Ｎ ＲＲＬ −Ｂ −１５，４６７、ＮＲＲＬ−
Ｂ−１５，４６８及びＮＲＲＬ−Ｂ−１５，４６９、並
びにその同質遺伝子型誘導体のうちの倒れか−を用いる
、使用法。 ５５、ナイシン生産遺伝情報を有する染色体性或は細胞
質の外来ＤＮＡであってナイシン生産性の供与体微生物
から取得して受答外微生物中にナイシン生産性話導微生
物を産生ずるように転移させた外来ＤＮＡを含むティシ
ン生産性誘導微生物を、単独或は他の微生物と混合して
動物に対し給餌することを特徴とする、ナインン生派性
島漕微生物の使用法。 ５６ ナイ７ン牛酋遺伝情報をイ１″ｆる染色体性或は
細胞質の外来ＤＮＡであってナイシン生宿％ｌ：の供与
体微生物力・ら１１７得して受陰、伴徽生物中にナイシ
ン生産付誘導微生物ｆＩ：産牛するように転移させた夕
（米ＤＮＡを含むナイシン化宛性誘導（ｉ・）牛ｑ’、
；、１を、冷蔵温度で保存される生鮮食品或は発酵食品
に混合すること全特徴とする、ナインン生産性韻盾む１
！生物の使用法。
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