JPS606613A - 抗腫瘍及び抗腫瘍転移剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 この発明は高血圧症、アンギーナ及び不整脈のような心
臓血管系疾患の治療に使用することが知られているカル
シウム径路遮断性化合物音、腫瘍の成長及び転移を阻害
するために使用することとした、抗腫瘍及び抗腫瘍転移
剤に、関する。この発明は特に、ニモジピン（Ｂ　Ａ　
Ｙ　ｅ　９７８６）及びニフェジピン（ＢＡＹ　ａ　１
０４０）並びにこれらの化合物に構造的に同類の化合物
から選択したカルシウム径路遮断性化合物またはその酸
付加塩を有効成分とする抗腫瘍及び抗腫瘍転移剤に係る
が、数多くの他のカルシウム径路遮断性化合物を利用す
ることもＥＪ能である。

（２）、従来技術 癌の治療及び研究の主たる焦点は、原発性ないし一次腫
瘍の処直に向けられて来ている。外科手術、放射線療法
及′ｏｙまたは化学療法を利用して、かなりの成功が達
成されて来ている。しかしながら転移、つまシ身体中で
物理的に離れている他の部位への一次腫瘍からの癌の拡
が９、も同等に生命ケおびやかすものであって、克服す
べきものである。転移の正確な過程はまだ知られていな
いが、−次腫瘍から放出され血管系或はリンパ管系中全
循環する腫瘍細胞が該系中の内皮基質へと付着ないし粘
着することが転移過程の重要な段階でちると、提唱され
ておシ、また成る程度に実証されて来ている。

転移過程は、単数或は複数の＠瘍細胞が転移の核になシ
おえることに成功するといった出来事の連鎖であると、
言うことが出来る。著者によって幾分、用語法を異にす
るけれども、転移過程は４つの連鎖的段階のものである
と考えることが出来る（　Ｗｅｉｓｓ　ｌ　Ｌ、著ｒＦ
ｕｎｄａｍｅｎｔａｌ　Ａｓｐｅｃｔｓ　ｏｆＭｅｔａ
ｓｔａｓ＋　Ｓ　Ｊ、ｐｐ、１−５　＋　１９７６年発
行；　ｐｉｅｄｌｅｒ＋１、　Ｊ、＋　Ｍｅｔｈｏｄｓ
　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、　２５＋　８９９−４８９＋
１９７８　、及びＣ１ａｒｋ　＋　Ｒ，Ｌ、＋　Ｃａｎ
ｃｅｒ　４Ｂ　ｅ　７９０−７９７＋１９７９　）。第
一には、腫瘍細胞または腫瘍細胞の塊が一次腫瘍によっ
て［脱ぎ捨て（５ｈｅｄ）　Ｊられなければならない。

第二に、腫瘍細胞が血管系またはリンパ管系に入り、宿
主の免疫性防御体（大食細胞、自然のキラー細胞、免疫
複合体等）による破壊を避けねばならない。第三に、腫
瘍細胞が血管系またはリンパ管系の内皮の内層に粘着し
なければならない。第四に、粘着している腫瘍細胞が追
い出しを避け、内皮全通して溢出し、分裂しなければな
らない。腫瘍細胞が宿主の血小板と作用してＩＷ瘍細胞
−血小板凝集体ないし血栓を形成することは、腫瘍細胞
が転移過程の最終段階を成功的に完結することを可能な
らしめることであろうと、提唱されている。

血小板凝集及び粘着は典型的に、カテコールアミン、グ
ロスフグランジン、免疫複合体、補体成分、ＡＤＰ及び
コラーゲンを含む数多くの可溶及び不溶の因子によって
開始せしめられるであろうと、考えられている（　Ｇｏ
ｒｄｏｎ　ｒ　Ｊ　、　Ｌ、＃ｉｌ著ｒＰｌａｔｅｌｅ
ｔｓｉｎ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｐａｔｈｏｌｏｇ
ｙＪ　−２＋　Ｅｌｓｖｉｅｒ　ＮｏｒｔｌｌＨｏｌ　
１ａｎｄ　Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ　Ｐｒｅｓｓ　（Ａｍ
ｓｔｅｒｄａｍ　）　１９８１年発行のｐｐ、１−７に
所載のＧｏｒｄｏｎ　＋　Ｊ　、Ｌ、の論文；Ｗｅｉｓ
ｓ　ｓ　Ｈ，Ｊ＋著［Ｐｌａｔｅｌｅｔｓ：Ｐａｔｈｏ
ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙａｎｄ　Ａｎｔｉｐｌａｔｅｌｅ
ｔ　Ｄｒｕｇ　Ｔｈｅｒａｐｙ　Ｊ＋　Ａｌａｎ　Ｒ，
Ｌｉ５ｓ＋Ｉｎｃ、　（Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ　）　＋　１
９８２年発行のｐｐ、１８−１７；及びＪａｍｉｅｓｏ
ｎ　＊　Ｇ、　Ａ、ｒ　Ｂａ５ｔｉｄａｙ　Ｅ＋及び０
ｒｄｉｎａｎｓ　＋　Ａ。

著「Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｐｌａｔｅｌｅｔ
ｓ　ａｎｄ　Ｔｕｍｏｒ　Ｃｅ１ｌＳＪＩＡｌａｎ　Ｒ
，Ｌｉ５ｓ＋　Ｉｎｃ　、　（Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ　）発
行のｐｐ、４０５−４１８）。また腫瘍細胞が血小板凝
集を誘発することもＪＩＴｆされている（　Ｇａ５１ｃ
＋　Ｇ、Ｊ　、＊　Ｇａ５１ｃ＋　’ＬＩＧａｌａｎｔ
ｉ＋　Ｎ、ｌ　Ｊｏｈｎｓｏｎ＋　Ｔ、　ａｎｄ　Ｍｕ
ｒｐｈｙ＋　Ｓ　、；Ｉｎｔ　−Ｊ　。

Ｃａｎｃｅｒ　１１＋　７０４−７１＆　１９７Ｂ°；
　Ｈａ　ｒ’ａｒ　ｎ、ｌ　’５ｔｅｉ＋ｉｅ、ｒ＋Ｍ
、’ａｎｄ、Ｂ：ａｌ−ｄｉ！ｎＬ：’Ｍ：Ｇ、＋、Ｃ
’ａｎ’ｃｅｒ　Ｒｅｓ、。

４０、１２１７−１２２２．１９８０．及びＢａ８ｔｉ
ｄａ＋　Ｅ、ｔ　０ｒｄｉｎａｒｎＡ、　ａｎｄ　’Ｊ
ａｍｉｅｓｏｎ＋　Ｇ−Ａ−＋　Ｎａｔｕｒｅ　２９Ｌ
　６６１−６６２＋１９８１　）。結果する１重傷細胞
−血小板の血栓が宿主の免疫系による攻撃から腫ｇＧ則
胞を保鰻ないし防御し、腫瘍細胞が血管系の内皮の内層
に粘着する可能性を増し、粘着（７ているＩｌｉ　瘍細
胞が追い出されるのを防ぐであろうことは、起こりうる
と考えられる現象である。このため血小板凝隼ケ阻害或
は減少する薬剤について、転移を抑制する能力が探求さ
れて来ている（　Ｇａ５１ｃ、　Ｇ、Ｊ　＋ｌ　Ｇａ５
１ｃ＋　Ｔ、Ｂ。

ａｎｄ　Ｓｔｅｗａｒｄ＋　Ｃ、Ｃ＋＋ｊ　Ｐｒｏｃ　
、Ｎａ　ｔ　Ｉ　、Ａｃａｄ　、Ｓｃ　ｉ　、ＵＳＡ’
６　Ｌ　４６−５２＋　１９６８　；Ｈｏｎｎ＋　Ｋ　
、Ｖ　−＋　Ｃｉ　ＣＯｎ＋　Ｂ　、　ａ　ｎｄ　５ｋ
ｏｆ　ＬＡ、＋　５ｃｉｅｎｃｅ　２１２＋　１２７０
−１２７２＋　１９８１；及びＭｅｎｔｅｒ＋Ｄ、＋　
Ｎｅａｇｏｓ＋　Ｇ、＋　Ｄｕｎｎ＋　Ｊ　＋ｌ　Ｐａ
１ａＺＯＯ＋　Ｒ，＋　Ｔｃｈｅｎ＋　Ｔ。

Ｔ＋＋ｌ　Ｔａｙｌｏｎ＋　Ｊ、Ｄ、ａｎｄ　Ｈｏｎｎ
＋　Ｋ、Ｖ、＋　「Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓａｎ
ｄ　Ｃａｎｃｅｒ、Ｉ　、　Ｆｉｒｓｔ　Ｉｎｔｌ　、
Ｃｏｎｆ　＋ｌ　ｐｐ、８０９−８１８＋１９８２　）
。

匍小坂凝隼はＪ１ｐ常、凝集剤となるｑｔＡ質が血小板
表面上の峙定のレセプタに１６１借的に作＃［「するこ
とからなる「−次」血小板凝集（Ｍｕｓｔａｒｄ、　Ｊ
　、Ｆ。

ａｎｄ　ＲａｃｋｈａＸＴｈＭ−Ａ、＋　Ｐｈａｒｍａ
ｃ　、Ｒｅｖ、　２２＋　９７−１０７＋１９７０　；
及びＪ、Ｌ、Ｇｏｒｄｏｎ編著ｒＰｌａｔｅｌｅｔｓ　
ｉｎ　Ｂｉｏｌｏｇｙａｎｄ　ＰａｔｈｏｌｏｇｙＪ、
　Ｎｏｒｔｈ　Ｈｏｌ　１ａｎｄ　Ｐｒｅｓｓ　（Ｎｅ
ｗ　Ｙｏｒｋ）１９７６年発行のＬ）Ｉ）、１５９−１
６８のＭｌ　１１ｓ＋　Ｄ　−Ｃ−及びＭａｃＦａｒｌ
ａｎｅ＋　Ｄ、Ｅ、の論文）と、貯蔵顆粒の解放及び細
胞外カルシウムの内向き輸送とを含みうる「二次」血小
板凝集（ｈｌｅｙｅｒｓ　＋　ＫＪ（、＋　５ｅａｃｈ
ｏｒｄ＋Ｃ，Ｌ、、ｌ　Ｈｏ１ｍ５ｅｎ＋　Ｈ，＋　Ｓ
ｍｉ　ｔｈ＋　Ｊ、Ｂ、　ａｎｄ　Ｐｒ１ｅｕｒ＋　Ｄ
、Ｊ　ｍ１Ｎａｔｕｒｅ　２８２＋　８８１−８８８＋
　１９７９；Ｓｈａｗ＋　Ｊ、Ｃ，ａｎｄ　Ｌｙｏｎｓ
彦Ｒ，Ｍ、＋　Ｂｉｏｃｈｉｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　
Ａｅｔａ　７１４＋　４９２−４９９＋１９８２；及び
ＩｍａＬ　Ａ、＋　ＫａｗａＬ　Ｋ、ａｎｄ　Ｎｏｚａ
ｗａ＋　ｙ、ＩＢｉ　ｏｃｈｅｍ　、Ｂｉｏｐｈｙｓ　
、Ｒｅｓ、Ｃｏ＋ｙｒｎｕｎ　、　１０８ｙ　（２１７
５２−７５９＋１９８２　）と、を含む逐次的な過程で
あると考えられている。二次血小板凝集に対抗するよう
に一次血小板凝集現象中に含まれる特定の血小板作用に
関してはなお若干の論争があるが、血小板内のカルシウ
ムイオン（Ｃａ）の増加と糸！１胞外カルシウムの内向
き輸送とは、確かに血小板凝集過程に含まれており、お
そらく引き金となる機序でもある（　Ｋａｃｔ　Ｋ、Ｊ
、＋　Ｓｏｍｍｅｒ＋　Ｊ、Ｒ，ａｎｄ　Ｐｉｚｚｏ＋
　Ｓ、Ｖ、、　Ｎａｔｕｒｅ２９２、　（５８１８）８
２−８４．１９８１；Ｊ、Ｌ、Ｇｏｒｄｏｎ　ａ￥ｉｒ
　Ｐｌａｔｅｌｅｔｓ　ｉｎ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄ
　Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ−２ＪｓＮｏｒｔｈ　ＨｏＩ］ａ
ｎｄ　Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ　Ｐｒｅｓｓ　（Ａｍｓｔ
ｅｒｄａｍ　）１９８１年発行のｐｐ、４０７−４３６
のＧｅ’ｒｒａｒｄ、’　Ｊ　、Ｍ、ｌ　Ｐｅｔｅｒｓ
ｏｎ＋Ｄ、Ａ、及びＷｈｉ　ｔｅｎ　Ｊ、Ｇ、の論文；
　ＲｉｔｔｅｎｈＱｕＳｅ　−８ｉｒｎｍｏｎｓ＋　Ｓ
、Ｊ、＋　Ｂｉｏｌ　、Ｃｈｅｍ、２５６＋（ａ）４１
５８−４１５５＋　１９８１；５ｈｕｋｌａ、ｓ、Ｄ、
ｌ　Ｌｉｆｅ　５ｃｉｅｎｃｅ　３ｉＬ　１３２Ｂ−１
８８５＋　１９８２；５ｅｒｈａｎ＋　ｃｅＮ、ｌ　Ｆ
ｒ１ｄｏｖｉ　ｓｂｙ　Ｊ　、＋　ＧｏｅｔｚｅＬ　Ｅ
、　Ｊ、、Ｄｕｎｈａｍ＋↑ Ｐ、Ｂ、ａｎｄ　Ｗｅｉｓｓｍａｎ＋　Ｇ、Ｊ、＋　Ｂ
ｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、２５７＋（ａ）４７４６４−岬岬■
■１１■−−−―−岬−■―−□−−−−４７５２．１
９８２；Ｇｏｒｍａｎ＋　Ｒ，Ｒ，Ｆｅｄ、Ｐｒｏｃ、
８８＋　１１１８８−８８＋−一一一一一■―■■■■
８−甲 １９７９　；及びＰａｒｉｓｅ＋　ｔ、、ｖ＊ｌ　Ｖｅ
ｎｔｏｎ＋　Ｄ、Ｌ、　ａｎｄ　Ｌｅｂｒｅｔｏｎ。

Ｇ、Ｄ、＋　Ｊ、Ｐｌｌａｒｍ、Ｅｘｐｔｌ、Ｔｈｅｒ
ａｐ、２２２．（１）２７６−２８１．１９８２）。

したがって最近では、カルシウム径路遮断剤がＡＤＰ或
はエピネフリンによって誘発される血小板凝集を阻宵し
うることは驚くべきことでないと、報告されている（　
Ｃ１ｒｃｕｌａｔｉｏｎ　６２　（Ｓｕｐｐｌ、１１１
１□−■■□１■Ｍ□普□便□す□□ Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｎａ１１２Ｂ、　１２５８　）Ａｂ
ｓｔｒａｃｔ　ｏｆ　５８ｒｄ　５ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ
Ｓｅｓｓｉｏｎｓ　６２５ｕｐｐｌ　Ｉｌｌ　０ｃｔｏ
ｂｅｒ　１９８０　）。

カルシウムイオンは細胞内及び細胞外のメツセンジャー
として、また無数の生理的機能を調節する制御物質とし
て、機能する。血小板凝集の調節は、カルシウムの一つ
の小さな制御機能に過ぎない。臨床とで最も重要である
機能の一つは、筋収縮の制御である。過去２０年の間に
、制限された血液流れ（血管動脈、肺動脈及び／または
冠状動脈ｆ、ｊｌｎじてのもの）及び不整脈（心臓収縮
の異常性）に起因する疾患の治療においてカルシウム効
果の遮断が臨床的にみて有効であシ得るといった考えが
、発展して来ている。

細胞内のＣａ＋＋の増加は、動脈の平滑筋組織と心臓の
心筋組織との両者に収縮をひき起こす。両者のタイプの
筋組織におきＣａ　の入り込みは、細胞収縮へと連らな
る２種の蛋白質（アクチン及びミオシン）の収縮を引き
起こし、心臓の収縮と動脈の直径及び動脈中の血液流量
とに対し影響を及ぼす。心臓及び動脈の筋肉細胞はＣａ
＋＋　を貯蔵及び放出する構造を含んでいるけれども、
筋肉収縮の引き金となるのは細胞膜中の選択的部位、い
わゆる［カルシウム径路（ｃａｌｃｉｕｍ　ｃｈａｎｎ
ｅｌｓ　）、ｊ％　ｔ”通し＋＋ ての外部からのＣａ　の入９込みである。身体の全ゆる
細胞の内外間に分ける陽イオン及び陰イオンの部分的ガ
不平衡よりして、筋肉細胞膜を含む生細胞膜の一面側と
他面側との間には数ミリボルトと測定しうる電位差が存
在する。カルシウム径路は休止筋肉什１胞中で通常は閉
じられておシ、筋肉細胞１１Ｆ！の脱分極（すなわち筋
肉１組ｉ胞膜の一面側と他面側との間の極性の逆転）中
にのみＣａ　Ｏ入シ込みを許容するようにｌｉｄ　（。

筋肉細胞膜中にはカルシウム径路の１灼閉をルー分極と
は独立して制御する（ν！造があり、キ念マンガンイオ
ンやコバルトイオンのような成る１１７）イオンケより
ルシウム径路全閉鎖状態に保もつるけれども、ｃｙｔら
の因子は全で、それが他の訓胞四能に影響することにお
・いては非（Ｆｅ＋界的である。

カルシウム径路遮断性有機１１シ１質は高度に特異的で
あり、ナノ（１０−’　）モル濃度でその効果を発揮し
つる。フレツクンスタイ二ノの王譬な？ｍにより、これ
らの化合物は筋肉紹織のカルシウム径路と電気的機能と
を選択的にブロックしうることが確認された（　Ｆｌｅ
ｃｋｅｎｓｔｅｉｎ　Ａ、＋　Ａｍ、　Ｒｅｖ、Ｐｈａ
ｒｍａｃｏｌ。

Ｔｏｘｊｃｏｌ、１７．　Ｊ４！１−１６６　（１９７
７））。カルシウム径路）空ｉ物質は、休止筋肉細胞膜
の「閉釦（ｃｌｏｓｅｃｌ　）Ｊ径路全実際に「密栓（
ｐｌｕｇｇｉｎ！Ｊ　）Ｊすることにより機能しうるか
にモジビン及びニフェジピン）、或は脱分極中に「開放
（ｏｐｅｎ　ｌｊカルシウム径路と相互作用しうる（ベ
ラパミール及びジルチアゼム）。「開放」カルシウム径
路遮断物質は、筋収縮中に最もよく機能する。

数多くの血管及び心筋障害を、カルシウム径路遮断物質
による治療によって血管拡張（すなわち血液流の増大を
もたらす動脈平滑筋の弛緩）を誘発させることで、緩和
できる。これらの障害にはｔｌ）プレンッメクル−アン
ギーナ（Ｐｒｅｎｚｍｅｔａｌ’ｓａｎｇｉｎａ　）ｅ
含む血管けいれん性アンギナ、（２）労作狭心症、（３
）急性心筋梗塞、（４）手術起因の心拍停止、（５）不
整脈、（６）全身性高血圧：症、（７）肺高血圧症、（
８）うつ血性心不全、（９）肥大性心筋症が、含まれる
。これらの障害は全て、共通して血液流或はその利用能
の減少をきたし、共通の免荷として、カルシウム径路遮
断物質の血管拡張効果により誘発可能である血液流の増
加或は容易化金もつ。

転移過徨（ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ　ｃａｓｃａｄｅ　）
を遮断するために異なった機構を利用して抗腫瘍及び抗
転移物質として機能する多くの化合物が、公知である。

木発１］Ｊ］者らによって、腫瘍転移が１ｒｌｔ瘍１補
胞の血小板との相互作用によシ促進されること、及びＩ
Ｉ瘍細胞−血小板の相互作用及び凝集を遮断ないし阻止
する物質が抗転移効果を有することが、提案されまた実
証されて来ている。研究されて来ている物質は、血液中
の血小板細胞の個数を減少させるか、或は血小板機能（
凝集）を阻止することによって、機能する。本発明者ら
の１人によって１９８２年９月２１日に出願された米国
特許出願Ｆｈ４２０，６４２には、アンチコアグリンの
一つであるナファザトローム（ｎａｆａｚａｔｒｏｍ　
）全抗腫瘍及び抗転移剤として用いることが、記載され
ている。

目　的 したがってこの発明の一つの目的とするところは、心血
管障害の治療に利用することが知られてい不カルシウム
径路遮断性化合物で哺乳動物中で腫瘍の成長と転移を阻
害する化合物を、提供するにある。他の目的は、以下の
記述から明らかとな□ る〇 一般的な説明 この発明は哺乳動物中での腫瘍の転移及び新生成長全減
少させるための治療剤であって、カルシウム径路遮断性
化合物またはその薬剤学的に許容感ｉしる酸付加塩を有
効成分とする治療剤に、関する。このような化合物は従
来、心血管障害の治療に用いられて来ている。同化合物
は腫゛瘍細胞誘導血小板凝集及び腫瘍細胞成長をガラス
容器内（イン・ヴイトロ）で阻害する能力を有し、同能
力は生体内（イン・グイヴオ）での活性に関係する。

この発明は特に、カルシウム径路遮断性化合物が１．４
−ジヒドロ−２，６−シメチルー４−（：（’ニトロフ
ェニル）−ピリジン−８−（β−メチオキシエチル　エ
ステル）−５−（インゾロビル　エステル）であるニモ
ジピン（ｎｉｍｏｄｉｐｉｎｅ　）　（ＢＡＹ　ｅ９７
８６　）である抗＠瘍及び抗腫瘍転移剤に関する。

この化合物は英国特許出願Ｎａ２，０１８，１８４　に
記載されている。他の好ましいカルシウム径路遮断性化
合物は、４−（２’−二トロフェニル−２，６−シメチ
ルー１．４−ジヒドロピリジンであるニフエジビｙ　（
ｎ１ｆｅｄｉｐｉｎｅ　）　（ＢＡＹ　ａ　１０４０　
）である。カルシウム径路遮断性化合物は、乾田特許Ｊ
、、４８０，９６１に記載されているところの、第四位
［ｌ￥１で置換されている１非暦換、ｌ餠換型の１，４
−ジヒドロピリジンであって血管拡張剤である１、４−
ジヒドロピリジンを、含む。ニフェジピン及びニモジピ
ンは１．４−ジヒドロ−２，６−シメチルー４−１’−
ニトロフェニル）−ピリジン−８−（低級フルー！、＋
レエステル）　−’−５−（低級アルキル　エステル）
の類のものであり、ここに低級アルキルは分岐鎖であシ
うる１から６個の炭素原子のものである。フエロジビｙ
　（　ｆｅｌｏｄｉｐｉｎｅ　）は、１．４−ジヒドロ
ピリンジンの類においてスエーデン国で開発されつつあ
る有力な新規化合物である。

カルシウム径路遮断性血管拡張化合物にはまたべ２ノ９
ミール（　ｖｅｒａｐａｍ目）、ジルチアゼム（　ｄｉ
ｌＨａｚｅｍ　）及びそれと同類の化合物が含１れ、こ
れらはメルク・インデックの第８版（ＭｅｒｋＩｎｄｅ
Ｘ＋　ｓｔｈ　Ｅｄｉｓｏｎ　）に記載されている。こ
れらの化合物は構造的にみて１．４−ヒドロピリジン化
合物とは関係がないが、やはり血小板凝集を阻止すると
信じられる。径路遮断性化合物として、ベラパミールは
フェニルアルキルアミンの類のものであり、ジルチアゼ
ムはベンゾチアフェンの類のものである。他のカルシウ
ム径＃ｐｒ遮断性化合物は、ジフェニルアルギルアミン
の類のものであるプレニラミン（ｐｒｅｎｙｌａｍｉｎ
ｅ　）及びリドフラシン（ｌ１ｄｏｆｌａｚｉｎｅ　）
である。各類には多くの化合物があり、これらは全て、
本技術分野に習熟した者に良く知られている。

この発明は′また腫瘍細胞誘導血小板凝集の阻害を検定
する検定法にも係り、同検定法は、＋対訳された血小板
及びＩＸＮ瘍細胞を、有効量のカルシウム径路連断性血
管拡張剤化合物或はその酸付加塩と共にガラス容器内（
イン・ヴイトロ）に挿入して、Ｊ：？化合物が嘴択され
た腫瘍剤、吻による血小板凝集を阻害するかどうか全検
定するものである。したがってこの検定法を利用すれば
、特定の哺乳動物からの浦択された腫瘍細胞と血小板と
の組合せが当該カルシウム径路遮断性化合物でもって処
置しうるかどうかを、決定できる。このことは、全ての
ｉ［ｌ細胞を全てのカルシウム径路遮断性化合物で処置
できるとは限らないことから重要であり、特にカルシウ
ム径路遮断性化合物と共に一次的な腫瘍治療剤化合物を
使用すべきかどうかを決定する上で重要である。生体系
中で転移過程の阻止を検出することｔ」：比較的困難で
あり、縦続的な検定が要求される。

薬剤構造 この発明に従ったアミン塩基の酸付加塩ないしアミン塩
は、遊離の塩基全薬剤学的に許容される有機或は無機酸
と反応させることで製造できる。

対応する酸付加塩を製造するために使用でへるところの
、薬剤学的に許容される数多ぐの有機及び無機酸のうち
の幾つかの例としては塩酸、臭化水素酸、硫酸、燐酸、
酢酸、クエン、酸、酒石酸、スルファミノ酸及び類似の
酸がある。「薬剤学的に許Ｈａれる酸（ｐｈａｒｍａｃ
ｅｕＮｃａｌｌｙ　−ａｃｃｅｐｔａｂｌｅａｃｉｄ月
といった用語は、腐食性ないし強い鉱酸のようにそれ自
体は薬剤的用途に対し許容されないものであったとして
も薬剤的用途に適合した塩を製造するのに用いることが
できる酸を、指す。

塩に関して「薬剤学的に許容される有機或は無機酸」と
いった用語と結び付けた術語「塩（５ａｌｔｓ）Ｊｉ、
生成方法についてよりむしろ化学構造について前人する
もので、中和反応によってか或は他の塩生成法によって
生成される塩を含む。

木明細書において「希釈剤もしくは担体（ｄｉｌｕｅｎ
ｔｏｒ　ｃａｒｒｉｅｒ　）Ｊなる表現は、活性（有効
）成分と混合されたときに同成分を膜力目的に適合した
イ、のとするところの、薬剤学的に許容される非毒性物
質を、意味する。この表現で指される物質からは、組成
物を等浸透性のものとする適正量の塩とか、緩衝剤、界
面活性剤、着色及び矯味矯臭剤、及び保存剤とかの他の
調薬と必要である成分が存在する場合を除き、水及び化
学合成で普通に使用される低分子量の有機溶剤は除外さ
れる。適当した同体及び液体の希釈剤及び担体の例とし
ては、ブドウ糖または塩の添加により等浸透圧性にする
ことが可能であるところの水含有緩衝剤、ノζラフイン
のような非毒性の有機溶剤、植物油、アルコール、グリ
コール、天然の粉砕鉱物（例えば力１−リン、アルミナ
、タルク或は石灰石）、合成鉱物粉（例えば高度に分散
させたシリカ戊はケイ酸塩）、及び庶糖がある。

経口投与は固体及び液体投薬単位形成、例えば粉剤、錠
剤、糖剤、カプセル剤、顆粒λｌｌ、懸濁剤或は溶液剤
等のような形成として、行ないうる。

適当した場合には経口投与のための投薬単位体を、例え
ばポリマーとかワックス等で粒状体を塗布するか埋込む
ことによシマイクロカプセルとして、放出時間を延長な
いし持続することもできる。

非経口投与は皮下注射、筋肉内注射或は静脈内注射用の
ものとした無菌溶液及び懸濁液剤のような液体投薬単位
形成で、行ないつる。これらは、水性または油脂性の媒
液のような注射用に適した非青性液状媒体中に秤量した
化合物を懸洞或は溶解させ、懸濁液或は溶液を殺菌する
ことにより、製造できる。殺菌剤、保存剤及び乳化剤も
ｔｔｎえうる。

一般に非経口投薬は１日当り、体重］　ｋａ当シの割合
でいって０．０１−５０ｗ／ｋｏ、好ましくは０．１−
１０ｍ／ｋｅの用量でなされる。経口投薬は１日当り、
体重１　ｋ、当９の割合でいって０．１−５００１１ｇ
／　ｋｓ、好マシくはＯ’、　５　１００　ｎ　／　ｋ
ｅの用量でなされる。

試験手順 投与用の組成物は、同組成物の約０．１９６から９０％
の活性成分を含むことができる。英国特許用ｑ１＊　２
，６１８．１　Ｂ　４ＩＩｉニモジピン（ＢＡＹ　ｅ　
８７８６）の種々の組成物を、記載している。

ニモジピン（ＢＡＹｅ９７８６）の抗転移特性を決定す
るために、以下の手順を採用した。試験には、得られる
結果が単一の＠瘍型に対し［特異的（ｕｎｊｇｕｅ　）
Ｊとなる可能性をなくすべく、非関連の２つのネズミ腫
瘍型（黒色腫と癌腫）を利用した。この両種の腫瘍は、
転移の機序の基本的な研究のためにきまって利用されて
いる。

現在では２つの１モデル」法が、生体内（イン・ヴイボ
）での転移を研究するために広く用いられている。その
うちの第１のモデル法は、動物中に腫瘍細胞全皮下注射
する手順金倉む。腫瘍細胞の皮下注射と次いでの一次腫
瘍の発生、引き続いての自発的な転移は「完全（ｆｕｌ
ｌ　）Ｊ転移であるとみなされる。他のモデル法は、腫
瘍細胞を尾部静脈から注入する手順を含む。転移の複雑
さに鑑み尾部静脈注射は人工的であシ′、転移の後期に
起こる出来事を表示することからして部分的のみのモデ
ル法であると、認識されている。しかしながら尾部静脈
モデル法は、実験条件を標準化するのに極めて有益であ
ると認められている（　Ｍｅｔｈｏｄ　１ｎＣａｎｃｅ
ｒ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　ｓ　Ｃｈａｐｔｅｒ　Ｖｌｔ　
Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ　。

Ｉｎｃ、＋１９７８参照）。

ニモジピン（ＢＡＹｅ９７８６）の抗転、移効果ケ、数
多くの異なった生体内及びガラス容器内定量法で検定し
た。マウスに対するニモジピンの持続的投与によシ自発
的転移が有為に減少されること、そしてニモジピンによ
る予処ａで同系のマウスに対するＢ１６ａの腫瘍細胞の
尾部静脈注射にょシ誘導される転移が減少されることが
、実証された。

ガラス容器内（生体外）では、ニモジピンが腫瘍細胞及
びＡＤＰによシ誘導される血小板凝集を大きく阻害する
ことが、実証された。発明者らはまたニモジピンが、５
日間にわたる試験期間で腫瘍細胞の成長速度を減少させ
、腫瘍細胞ＤＮＡ中への３：Ｈ−チミジンの°入パり込
み速度ｔｙｄらし、またグラスチック製培養器及びウィ
ルス的に変換された内皮細胞単層に対する腫瘍細胞の粘
着を減らすか抑止することを、実証した。

材料と方法 Ｂ　１６　ａｆｉ瘍のガラス容器内での維持Ｂ１６メラ
ニン欠乏黒色Ｒ（Ｂ１６ａ）とウォーカ（、Ｗａｌｋｅ
ｒ　）　２５６　Ｌ　−Ｐａｍ　ｌｉ’ｉ肉腫とを、ア
メリカ合衆国、マサチューセッツ州、ウオアセスターの
マソン・リサーチ・インスチチュート、アニマル・アン
ド・ヒユーマン・チューマ・バンクの痛治療部（Ｄｉｖ
ｉｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
＋　Ａｎｉｍａｌａｎｄ　Ｈｕｍａ’ｎ　Ｔｕｍｏｒ　
Ｂａｎｋ＋　Ｍａｓｏｎ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　１ｎｓｔ
ｉｔｕｔｅ＋Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒ　＋　Ｍａｓｓａｃｈ
ｕｓｅｔｔｓ　）から入手した。受領後に１型車を、同
種のＣ５７ＢＬ／６Ｊ雄マウス（Ｂ１６ａ）或は異種の
スブレーキュ・ダウレイ（５ｐｒａｑｕｅ　Ｄａｗｌｅ
ｙ　）−ラット（ウォーカ２５６Ｌ−Ｐａｍ　）中で４
回、継代接種した。継代接種は、１８ゲージ針を用い右
腕窩部中にＩ！！瘍片（約２×２ｓＩに細断）を皮下移
植する手順を含むものであった。体重が約２０グラムの
マウス（４ないし５週才）を、Ｂ１６ａ細胞系を継代接
種するのに用い、雌ラットを、ウオー・力２５６Ｌ−Ｐ
ａｍＩｖＩＴｌ胞系を継代接種するのに用いた。これら
のネズミヲ温度、給餌、光浴時間等の条件金等しくして
、飼育した。移植したＩｌｇＩｔ−移４ｒｉｒＲ約１４
日間、成長するにまかせた。

富血小板プラスマの調製 健康で睡眠十分でありアスピリンを販出していない（少
なくとも２週間。）男性の前眼窩から血液（４６ｍｌ）
を、５０　Ｕ　／　ｍｌのヘパリンを含み２５ｍＭのＨ
ＥＰＥＳ　（有機緩衝剤）でｐ　Ｈ７，５ヘと緩衝され
た４、　８　％のブドウ糖′ｆＣ５ｍｌ入れたグラスチ
ック製注射器中に採取した０溶血を阻止するために１８
ゲージ針を用いた。ヘパリン化した血液を、注射器を５
回、転回させることによりおだやかにγｄぜ合せ、次い
で血液金、２木の４０ｍ１のプラスチック製遠心分離管
中へ移し１６８Ｘｇ（ｇは重力学位）で１０分間、遠心
分離処理した。結果した血小板に富むプラスマ（富血小
叛プラスマ）（ｐｌａｔｅｌｅｔ　ｒｉｃｈ　ｐｌａｓ
ｍａ　＝　ＰＲＰ　）　（上澄み部分）を、調整ＢＪ能
なＳＭＩピペット・セ・ントを用いて６ｍｌに傾１した
。血小板が乏しいプラスマ（貧血小板プラスマ）　（ｐ
ａｌｔｅｌｅｔ　ｐｏｏｒ　ｐｌａｓｍａ　＝　ＰＰＰ
）を、Ｐ　ＲＰ　ｉ　ｌ　０分間、１０８５ＸＩＪで遠
心分離処理して１７４１１！！　した。このＰＰＰは、
ＰＲＰ中の血小板濃度’（ｚ８Ｘ１０’／ｍｌに標準化
するのに用いた０血小板濃度は、クールクー・モデルＺ
　Ｂ　１　（ＣｏｕｌｔｅｒＭｏｄｅｌ　ＺＢＩ　）の
細胞計数器を用いて測定したＯラットのｒｏｔ小板の調
製 雌のラットをナトリウム・ベンドパルビクール（５２■
／　ｋａ　）で摩酔し、腎静脈から採血した０各ラツト
からほぼ１０ｍ１の血液を、３９６のクエン酸ナトリウ
ムｆ　ｌ　ｍｌ含む注射器中に１８ゲージ針を通し−Ｃ
集めた。ラットの富血小板プラスマ（ＰＲＰ）を、ヒト
のＰＲＰについて述べたと同様の手段で調製して、最終
濃度が７．７Ｘ１０’血小板／ｍｌのものを得た。

血小板凝集をシインコ・モデルＤＰ−２４７Ｅ（５ｉｅ
ｎｃｏ　Ｍｏｄｅｌ　ＤＰ−２４７Ｅ　）Ｉ）双チャネ
ル凝集測定器（ｄｕａｌ　ｃｈａｎｎｅｌ　ａｇｇｒｅ
ｇｏｍｅｔｅｒ　）　ｋ用い光電式で測定し、シインコ
・モデルＢ　−６０００（Ｓｉｅｎｃ。

λ（ａｄｅ　Ｉ　Ｂ−５０００）の双チャネル記録計に
記録させた。ＰＲＰの両分（アリクオツド＞（８Ｘ１０
’血小板／ｍｌで２５（１，−１）を凝集測定用Φユベ
ット中へ移し、８７℃におき８００　ｒｐｍの一定速度
で撹拌した。血小板凝集についオの実験は、個別的に管
理した試料で行なうこととした０ＢＡＹ　ｅ、９７８６
　は、ＰＥＧ−４００またはジメチルスルホキシド（Ｄ
Ｍ　Ｓ　Ｏ）の何れかに溶解した。予備的な凝集測定実
験においてＢＡＹ　ｅ　９７８６をＰ　Ｅ　Ｇ　−４ｏ
ｍｍしたものとＤＭＳＯに溶解したものとの間に血小板
凝集に対１−効１４につき統計学的な有為差が伺ら認め
られな力為ったので、以後、Ｐ　Ｅ　Ｇ　−４００ｅ利
Ｊｔｌ　Ｌ、　７’Ｃ。

ＰＥＧ−４（１０に溶解したＢＡＹ　ｅ　８７８６のみ
を、ＰＲＰの霜加に先立ち複数キュベラＩ−１”１に区
分けした。ＰＲＰを添加後直ちに・Ｖユベットを、凝集
測定実験に移した０２分間（血／Ｊ％板のｌｌ’Ｊ製と
ＢＡＹ　ｅ　９７８６の混合とを安定イヒ′１″ろため
の時間）後にＡＤＰ或は腫瘍細胞を２０ｚｌの１区分は
試料けりクオツド・）中に、血小板凝集を誘導させるよ
うに添加した。

腫瘍細胞の分散及び傾蓬分離 皮下Ｂ１６ａ−次性腫ＷＩｆｔ、切除し細断して、コラ
ゲナーゼ消化によシ分散させた。１重傷片（４×４ｍ）
ｔ”、約５００ｍの区分は試料に公害０して無菌のポリ
カーボネート製フラスコに入れた。）ｌ■瘍分散溶液（
ｔｕｍｏｒ　ｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎ　５ｏｌｕｔｉｏｎ
　＝　ＴＤＳ　）の１０１宣を、各フラスコに加えた。

ＴＤＳは、以下に記載する組成物Ａと組成物Ｂと全混合
して調製した。

組成物Ａ　（Ｉｌ基準） ９、５　ｇ／　Ｎ　無菌のイーグル最小必須培地Ｏアメ
リカ合衆国、ニューヨーク州、 グランド・アイランド（Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ　）のギブコ（ＧＩＢＣＯ）社により市販
されている。

１０■Ｉ／ｌ　可欠アミノ酸 １０　ｍｌ　／　ｌ　ピルビン酸ナトリウム０．８５　
ｇ　／　ｌ　炭酸水素ナトリウム（１５ｍＭ）５、９　
ｑ　／　ｌ　ＨＥＰＥＳ　（２５ｍＭ０有機緩衝剤。ア
メリカ合衆国、ミズーリ州、セン トールイス（Ｓｔ、Ｌｏｕｉｓ　）のシグマ・ケミカル
・カンパニー（Ｓ　ｉ　ｇｍａＣｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ
、　）によシ市販されている。

１５０単位／ｍｌ　ペニシリン １００声ｇ／属１　硫酸ネオマイシン 上記した抗生物質は、バクテリアによる汚染が起きない
ようにするために加えたものである。

組成物Ｂは、クロストリペイン（クロストリジラム・ヒ
ストリチカム・プロテイナーゼＢ）と他のたんばく質分
解活性体とに乏しいコラゲナーゼ、ジオキシリボヌクレ
アーゼ（損傷細胞核から放出されるデオキシリボ核酸を
溶解するジオキリボヌクレアーゼ）、残留トリプシン活
性を全て排除するリマ豆（ｌｉｍａ　ｂｅａｎ）或はタ
イプのトリプシン抑制因子、及び非特異的たんばく質分
解酵素活性を消失させ損傷細胞膜から遊離されるペルオ
キシ及びヒドロペルオキシ脂肪酸を吸収するヒト血清ア
ルブミンを含む、乾性の混合物である。

組成物Ｂ 重ＪｆＡ／ｍ１組成物Ａ コラゲナーゼ　１□／Ｉｎ１ （ワーシングトン　タイプ■ −Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ　ｔｙｐｅ　Ｉ＋　）ジオキ
シリボヌクレアーゼＩ　７０ｆｉｇ／＋ａｌ（シグマ・
ケミカル−５ｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ　） タイプのトリプシン抑制因子　１００声ｇ／ｍｌ（ワー
シングトｙ−Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ　）ヒト血清アル
ブミン（脂肪酸　１０ＩＩｇ／■１非含有。シグマ・ケ
ミカル− ５ｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　） 組成物Ｂを秤量してフラスコに入れ、１００　ｍｌの組
成物Ａを加えた。

次にＴＤＳ中の細断組織を空気中で、ダブノフ代謝振動
器（Ｄｕｂｎｏｆｆ　Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ　５ｈａｋｅ
ｒ　）　（９０振動器分）中に分散させた。１澄み液を
、チーズクロスを通して蕪菌の５（）ｍｌのポリカーボ
ネート製丸底遠心分離管中へと集め、ソーパル５Ｓ−８
４回転Ｒ？ｒ　（５ｏｒｖａｌｌ　５Ｓ−８４ｒｏｔｏ
ｒ）中におき９００ｒｐｍ（１００ＸＥｒ）で１０分間
（２５℃）だけ遠心分離した。この遠心分離の後で、上
澄み部分を捨てた。得られた固形の細胞状物質（沈澱部
分）ｆ、、ＭＥＮ溶液で２回洗滌し、ＭＥＭ中に再懸濁
させて４℃に保った（　Ｔ　Ｉ）　Ｓの１０　ｍｌの部
分を残シの細断組織に添加し、ヒ述のようにして４５分
間、培養し、を澄み液を集め、と述のように処理した０
）。

ＴＤＳの１０−１の部分を残りの細断組織に加え、時間
を６０分としたことを除きと述のように、組織を代謝振
動器中で培災した。遠心分離全反復して、再懸濁細胞を
組合せた。

細胞生存能力を、生体染料排除法（ｖｉｔａｌ　ｄｙｅ
ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ　）　（Ｅｘｐｔｌ
、　Ｃｅ１ｌ　Ｒｅｓ、　１Ｂ＋　８１４−：（４７，
１９５７参照）により検定した。細胞算定は血球計中で
行なった。基質の細胞汚染、例えば大食細胞、赤血球細
胞等、は顕微鏡を用いて視覚的試験により検定した。得
られた最終の細胞懸濁物は９５９６より多い単分散細胞
より成り、約２５％の宿主基質細胞汚染があった。６ｇ
の細断Ｂ１６ａ腫瘍細胞からの典型的な収量として、８
Ｘ１０”から７’Ｘ１０’個の範囲の分散腫瘍細胞が得
られた。

役終の細胞懸濁物を次いで、腫瘍細胞の最終的分離のた
めに遠心水ひした。この遠心水ひにおいてイ用胞は分離
室内で２つの反対向きの力、つま９自転中の回転子によ
シ生成される遠心力界と逆向き請求心）方向の流体逆向
き流れ、とにさらされる。媒体中に懸濁している試料は
分離室に入る。

各細胞は、その沈降速度が分離室を通しての流体の流速
でちょうど平衡せしめられるような領域へと遊走しよう
とする。分離室の形状からして同室の一端から他端にか
けて流速に勾配が牛ぜしめられ、広範囲の異なった沈降
速度を持つ細胞を懸濁状態に保ちうる。水ひ分離用の流
体（分画媒体）の流速を段階的に増すか、回転器の速度
全域らすことで、比較的均一な細胞寸法？ｌ−有する逐
次的なイム団を分離室から、洗滌した状態でＩ１２出す
ことがで肯る。各集団は、それに先行する部分よりもよ
り大きい乃至より密な（つ−まりよシ迅速に沈降する）
細胞金倉むことになる。

遠心水ひを、［腫瘍再懸濁溶液（Ｔｕ＋ｎｏｒ　Ｒｅ５
ｕｓｐｅｎ−ｓｉｏｎ　５ｏｌｕｔｉｏｎ　）Ｊ　（Ｔ
Ｒ３）−組成物Ａのみ一中に腫瘍細胞を懸濁させること
により、行なった。ベックマンＪ−２−２１遠心分＊！
に４？’Ｊ　（Ｂｅｃｋｍａｎ　Ｊ　−２−２１ｃｅｎ
ｔｒｉｆｕｇｅ　）中で１４６　Ｏｒｐｍで作動するベ
ックマンＪＥ−６水ひ試験器回転子（ＢｅｃｋｍａｎＪ
Ｅ−６ｅｌｕｔｒｌａｔｏｒ　ｒｏｔｏｒ　）　ｋ用い
て、懸濁物を２６℃で水ひした。

分離媒体（ハングの均衡塩類溶液（Ｈａｎｋ’５Ｂａｌ
ａｎｃｅｄ　５ａｌｔ　５ｏｌｕｔｉｏｎ　）またはＭ
ＥＭまたは組成物Ａ＋０．０１％アルブミン（ネズミの
腫瘍細胞について）＋〇、Ｉ９６アルブミン（ＣＬＡ１
１８細胞について））　ｆｔ、ｔ＆ｔ７０１４ポンプ頭
を備えたコール・バルマー・マスク・フレックス　ポン
プ（ＣｏｌｅＰａｌｍｅｒ　Ｍａｓｔｅｒ　Ｆｌｅｘ　
ｐｕｍｐ　）　’ｆｃ用いて汲みとった。

ポンプの制御箱はｌＯ捲線の電位差計で修正した（　Ａ
ｎａｌ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　９８＋　１１２−１１５
＋　１９７９参照）。流速ハ、ブルツクスの双球７０−
バル７’　（Ｂｒｏｏｃｋｓｄｏｕｂｌｅ−ｂａｌｌ　
ｆｌｏｗ　ｖａｌｖｅ　）で測定した。

約５Ｘ］Ｏ’−ＩＸＩＯ”個の細胞を混合室中に、イン
ラインのＹ形管を通して注入した。細胞は分離室中に、
６ｍ１Ｚ分の流量で装填された。Ｙ形管からの住人位置
を清浄な組成物Ａのみが細胞を洗滌するように変更して
、６．９及び１２ｍ１／分の速度で洗滌し、各流速で１
００ｍ１’を収集した。

これらの収集物は捨てた。１５，２８．４０及び５２ｍ
１Ｚ分の洗滌流画分で、各両分当たり２００ｍ１（２０
’０　＋＋＋Ｉ　７画分）の細胞を収集した。これらの
画分を阿逆心分離しく　］　（１０Ｘ　ｇ　Ｘ　１　（
１分）、１−２　ｍｌ　ノＴ　ＲＳ中にｌｉ＋Ｉｉ千Ｑ
さ−ｅ　ｆｔ。

回収物は一般に、混合室中に注入したに１１１胞の７０
−７５パーセントであった。／［−存ａ１て力をｎ１１
述のようにして検定し／こ。ｊ’ｌｌｌ胞数はクールタ
ー（Ｃｏｕｌｔｅｒ　）　計数器（クールター・エレク
トロニクス−Ｃｏｕｌ　ｔｅｒ　Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ
ｓ−のモデル７、　Ｈｌ　）を用いて痴１定した。

増殖試験 Ｂ　Ｉ　６　ａ　ＩＪｆｉ瘍細胞のＭ　３’ｉに対する
ＢＡＹ　ｅ９７８６の効果を測定するために、増殖試験
全行−でうこととした。Ｂ　１６　ａ　ＩＮ且瘍；用胞
ｉ′ｒ−２５フラスコ中に入れ（４Ｘ１０４細胞／フラ
スコ）、３７℃で１６時間、成長するにまかせた。フラ
スコから培地を取去り、コロニー形成率會、クールター
（Ｃｏｕｌｔｅｒ　）計数Ｒｉ金用いて検定した０交代
培地をフラスコに加え、２４時間培養した。２４時間の
培養後にフラスコに対し、１０メｌ　の対照標準（培地
）、ＤＭＳＯまたはＤ　Ｍ　Ｓ　ＯＫ溶解り、７ｔＢＡ
Ｙ　ｅ　９７８６　（４９ｍ／ｍｌ）の何れかを加えた
。ＢＡＹ　ｅ　９７８６　を含む戒は含まない培地の交
代は４日間連続して、２４時間毎に行なった。対照フラ
スコ（３個）は増殖試験期間の毎日、終結させ、最終日
には４個の試験終結フラネコ金得た。

Ｂ　Ｉ　６　ａ　１３１瘍細胞のＤＮＡ中への８Ｈ−チ
ミジンの入り込みに対するニモジピン（ＢＡＹ　ｅ　９
７８６）の効果を測定するために、８Ｈ−チミジン入シ
込み試験全行なうこととした。Ｉ　Ｘ　Ｉ　Ｑ”細胞／
ｍｌの濃度の培養８１６ａｌｌ瘍細胞（ＭＥＭ＋　ｔ　
０９６ウシ胎児血清中で培養）の１ｍｌ’ｉ、プラスチ
ック製培養管に入れる。同細胞を、希釈剤（ＤＭＳＯ＝
ジメチルスルホキシド）のみ或は希釈剤を含むＢＡＹ　
ｅ　９７８６の５ｐｌの存在下で、３７℃で１５分間、
培養する。予培養期間と考えられる１５分間後に細胞を
、１マイクロキユリー（１ｍｌ当た９）の３Ｈ−チミジ
ンの存在下で１時間（３７℃で）、培養する。培養は、
１１１の冷たい玉塩化酢Ｍ’　（’ＴＣＡ　）　（６９
６ｗ　／　ｖ　）　ｋ添加することで終結する。

細胞を、１０，０００ＸｇＸ４分間で遠心分離する。

上澄み液を捨てる。得られる沈澱物を１ｍｌのＴＣＡ中
に再懸濁させ、１０，０００ＸｇＸ４分県で遠心処理し
て転回させ次いで再沈澱させる。上澄み液を捨てる。沈
澱物を、１００．ｓ／の組織可溶化液（アマ−ジャム・
コーポレーション−ＡｍｅｒｓｈａｍＣｏｒｐｏｒａｔ
ｉｏｎ　−ｊＪＪのＮＣ３）中に再懸濁させ、５０℃で
２時間、培養する。可溶化沈澱物の５０／ｌの両分（ア
リクオツド）ｔ：、８＋ｎ＋のシンチレーショ’ｙ液に
ュー・イングランド・ニュウクリアーＮｅｗ　Ｅｎｇｌ
ａｎｄ　Ｎｕｃｌｅａｒ−製のＥｃｏｎｏｆｌｕｏｒ）
　ｋ含むプラスチック製シンチレーション・バイアル中
に移し、放冷し、暗く調整し、計数する。

１２５１放射能標識腫瘍細胞の調製 ウォーカ（Ｗａｌｋｅｒ）　２５６　Ｌ−Ｐａｍ　ｔｌ
瘍細胞を、約５　Ｘ　１０！細胞／フラスコで平板培養
した。細胞ｔ１２５１−ＵＤＲ（ヨウ素処理したウリジ
ン・デオぎポ核酸）により、０．５マイクロキユリ一／
ｍｌ培地（５，０マイクロキユリー／フラスコ）に標識
した。細胞を約２４時間、培養し、細胞数／フラスコが
８．１４　Ｘ　１０Ｉ′細胞／フラスコであることを検
定した。各フラスコの細胞からの放射線を計数しくガン
マ線計数器）、平均が０．２４　ｃｐｍ／細胞であるこ
とを見出した。

生体外での付着検定 プラスチックに対する血小板促進腫瘍細胞付着を、４つ
の条件を用いて検定した。このうち条件Ａは１ｉｆｔ　
＊　＃ａ＋＋胞単独であり、条件Ｂは腫瘍細胞＋洗滌血
小板であシ、条件Ｃは腫瘍細胞＋貧血小板グラスマであ
り１条件りは腫瘍細胞＋洗滌血小板十貧血小板プラスマ
である。

培養物から得たウォーカ（Ｗａｌｋｅｒ）２５６　Ｌ　
−Ｐａｍ　ＩＰＲ瘍細胞を、■「１述のようにして１２
５１−ＵＤＲで放射能標識した。放射能標識細胞をＴ−
７５フラスコから、トリプシン（２ｍｌの０．２５９６
）リプシン及び０．０ｍ９６ＥＤＴＡ）を用いてＭＥＭ
へと取除いた０２分後に８Ｘ１　リプシン［消光（ｑｕ
ｅｎｃｈ月（ＭＥＭに溶解した１０％ウシ胎児血清を用
いる。）によシ、細胞溶解を阻止するためトリプシンを
消光し除去する。１１瘍細胞全フラスコからＭＥＭ中へ
取出し、’　２．５　Ｘ　１０Ｓ細胞／■夏に調整する
。ｌｏ。

ｐｇ　の腫瘍細胞懸濁物（２，５Ｘ１０’個の細胞を含
むｏ　）’ｔ　ｌ　６　ｍＭ　ｍｅ、培養容器（コスタ
ー−Ｃｏｓｔａｒ）中で平板培養し、２５０ｐ（ｌの洗
滌溶液陽２（血小板の調製の項で述べた・π２番目の洗
滌溶液）金刊加（重仝）した。細胞を室温（約２２℃）
で５分間、培養した。この培養に引続き、７．８５■／
　ｍｌ濃度の（ａ（Ｊ、溶液の１０ｐｌを培養容器に加
え、また条件Ｃ及びＤ用の培養容器には貧血小板プラス
マ（血小板洗滌容液隘２．でｌ：８２に希釈したもの。

）の２５０ｐｌｋ加え、さらに条件Ｂ及びＤ用の培養容
器には洗滌血小板（８Ｘ　１０”／　ｓｌのが終ｆ度の
もの。）の２５０７ｅを加えた。適当である場合には全
培養容器が等しい最終溶液量をもつように、培養容器（
条件Ａ及びＣ用のもの。）に洗滌溶液慮２を加えた。培
養容器について、３５℃で１時間、培養を行なった。こ
の１時間の培養後に、付着しない腫瘍細胞を含む培地を
全て吸引により除去し、容器全２　Ｘ、　ｌ　ｍｌのリ
ン酸ナトリウム緩衝液（ＰＢＳ）で洗滌した。粘着して
いるＭＩＩ胞をｎｒＩ述のようにトリズシン処理にょシ
取除き、ガンマ線計数器を用いて容器光たりの個数を計
数した。結果は、ｌ容器当シ培養された全Ｃｐｉｌ＋と
して検定した。

ト述の方法とほぼ間貸とした０唯一の実質的な差異は、
Ｅ述の定量法では各培養容器の而（フロア）が平板を形
成しているプラスチック材Ｊ：９成るものであるのに対
し、零定祉法ではプラスチック面が、ウィルス的に変換
されたラット大脳毛細曲管内皮ＩＩ′ＩＩｌ胞の融合性
（ｃｏｎｆｌｕｅｎｔ　）単層にて覆われることにある
０細胞を、Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｌｎｖｅｓｔｉｇａ
ｔｉｏｎｓｙＶｏｌ　４６＋　Ｎ１６．　ｐ５８４＋　
１９８２　（１）ｉｇｌｉｏ　ｓ　Ｃ，Ａ、５Ｇｒａｎ
ｖｎａｓ＋Ｐ、＋　ＧｉａｃｏｍｅｌｌＬ　Ｆ−＋　ａ
ｎｄ　Ｗｉｅｎｅｒ＋　Ｊ、＊　Ｌａ＋）。

ｌｎｖｅｓｔｉｇａｔｊｏｎｓ＋　Ｖｏｌ　４６１　Ｎ
１６．　ｐ、５５４−Ｆ１６Ｂ、　１９８２　）及びＪ
、　Ｃｅ１１．　Ｂｉｏｌ、（１９８８年３月、原稿受
理）（Ｄｉｇｌｉｏ、Ｃａｔ　Ｗｏｌｆｅ＋　Ｄ、Ｅ、
＋　ａｎｄ　Ｍｅｙｅｒｓ＋　Ｐ、Ｊ、＋Ｃｅ１１．　
Ｂｉｏｌ、＋　ｍａｎｕｓｃｒｉｐｔ　ｉｎ　ｐｒｅｓ
ｓ＋　１９８８　）に詳細に記載式れている方法で、調
製し平板培養したＯ昇約して述べると、ラット内皮細胞
全照準毛細血管系から、コラゲナーゼ処理に、Ｊニジ分
散させた。

遊走細胞と細胞増殖とがみら扛る。単離し７Ｃ細胞を培
養基中で、正常内皮に細胞の予期の［玉石（ｃｏｂｂｌ
ｅｓｔｏｎｅ　）Ｊ出現特性がイｑられるまで、増殖す
るにまかせる。

培養された（皮下融合性）正常内皮細胞を、シュミット
−ルピン　ラウス肉ｒｈｏウィルスー株Ｄ（Ｓ　Ｒ−Ｒ
Ｓ　Ｖ　−Ｄ）　（Ｓｃｈｍｉｄｔ−Ｒｕｐｐｉｎ　Ｒ
ｏｕｓＳａｒｃｏｍａ　ｖｉｒｕｓ−ｓｔｒａｉｎ　Ｄ
　（５Ｒ−Ｒ８Ｖ　−Ｄ）　）に感染させる。単一の変
換された病巣を単１１ｉ１１ｉ　Ｌ、再培養した。得ら
れた変換内皮細胞系は、ＲＣＥ−Ｔｌと命名された（Ｓ
Ｒ−ＤＩとしても知られている。晃実際の定量において
、プラスチックもしくは変換内皮細胞に対する腫瘍細胞
粘着の検定法は妨似している。これらの２方法間の差異
は、粘着している腫瘍細胞を取除くのに利用する方法論
にあった◇内皮細胞から粘着１Ｊ１瘍細胞金除去するに
はトリズシン溶液ｉ　２分間といった時間に代えて一晩
（約１６時間）、作用させておく。実際には腫瘍細胞が
内皮細胞から分離されず、トリプシンはこれらの両タイ
プの細胞全容器中で溶解する。したがって（各容器から
）除去され計数される吸引試ネ・１は、放射能標識され
た１ハ（瘍細胞の残分と容器面に付治し友内皮細胞とを
含んでいる。

腫ｇＳ細胞の成長及び転移に対するＢＡＹ　ｅ９７３６
の効果 腫瘍細胞の分散及び傾ン寥分離の項におき前述した方法
で得られたＢｔ６ａｌ１ｇ細胞を、ＢＡＹ　ｅ９７３６
の抗転移及び抗新形成効果金検定するのに使用した。

装約して述べると、ニモジピン（ＢＡＹｅ９７８６）の
抗転移効果を６種の異なった定格法を利用して生体内及
び生体外で検定しｌζ。生体内では、傾ら写分離したＢ
１６ａｌ庸瘍細胞の注入による肺コロニー形成の誘導（
例１）及び−次皮下Ｂ１６ａ　Ｉｌｊ瘍からの自発的な
肺コロニー転移（例２）について、ＢＡＹ　ｅ　９７８
６が形成される肺唾Ｗｆ数を阻止或は減少することが出
来るかどうかを検定した。生体外ではＢＡＹ　ｅ　９７
８６について、Ｂ１６　ａ　ｌ１ｍ１ｌＪｔ細胞の増殖
を抑制する能力（例８）、増殖中のＢ１６２Ｄ瘍細胞培
着物中への３Ｈ−チミジンの入り込みを抑制する能力（
例４）、プラスチック容器及びウィルス的に変侯された
内皮細胞単層に対するウォーカ（Ｗａｌｋｅｒ）　２５
６Ｌ−Ｐａｍ肝務細胞の粘着を抑制する能力（例５）、
及び腫瘍細胞注入或はアデノシンニ燐酸（Ａ　Ｄ　Ｐ）
誘導血小板凝集を抑制する能力（例６）を、検定した０
例７は、血小板凝集を阻害することにおいてのニフェジ
ピン（ＢＡＹ　ａ　［３４０）の効果を示す。

生体内転移 例　１ ＢＡＹ　ｅ　９７８６の４０■部金、１ｍ１（１）ポリ
エチレングリコール（ＰＥＧ−４（１０）に溶解した。

こｎの貯蔵溶液ｔ−ＰＥＧ−４００テｌ　：　５．　１
　：　１　（１゜１＝５０及びｔ　：　ｔｏｏｏに希釈
した。平均体重２０ｇのＣ５６ＢＬ／６Ｊのマウスに対
し希釈されたＢＡＹ　ｅ　９７８６の０．１ｍｌを、腫
瘍細胞の注入１時間前と１時間後とに経口的に投与した
。ＢＡＹ　ｅ　９７８６の第１回目の経口投与の１時間
後にマウスに対し、前述のようにして調製した８×１０
’＃Ｉ胞を含むＢ１６ａＭ瘍細胞懸濁液の０．０５ｍ１
を尾部静脈から注入した。対照マウスと処理マウスとを
温度、給餌、光浴時間等の条件を等しくて飼育しｆｃｏ
＋ｒｆｔ瘍細胞の尾部静細胞射から２１日間経過後に、
マウスを犠牲にして肺を切除し、ボーインズ溶液で定着
して、可視の左右の転移を計数した。

ＷＪ１表に掲げたデータにより実証されるようにＢＡＹ
　ｅ　９７８６は、試験した全濃度で肺１型車コロニー
を減少させるのに有効である。

第１表：Ｂ１６ａ腫瘍細胞の尾部静脈注射（注ａ参照）
によ）誘発された「試験的」転移 注ａ：８Ｘ１０’個の細胞を注入 注り：対照群における肺表面上の転移病巣数の平均値＝
１００９６ 注ｃ：Ｘ±ＳＥＭ；ｎ＝１２ 例　２ 一次皮下Ｂ１６ａＪＪｌｆｌｌＦからの自発的な肺への
転移に対するＢＡＹ　ｅ　９７８６の継続経口投与の効
果も、検定した。ＢＡＹ　ｅ　９７８６の１６ｍ＋＋部
を１ｍｌのＰＥＧ−４００に溶解し、さらにこれｔ−Ｐ
ＥＧ−４００で１：８，１：８２，１：８０及び１：８
００に希釈した。同種のＣ５６ＢＬ／６Ｊマウスに対し
、前述のようにして調製したｌ　Ｘ　１０’Ｂ１６ａ腫
瘍細胞、Ｑ、　ｌ　ｍｌ　ｆ皮下注射によシ注入した。

腫瘍細胞注入の１日後から出発してマウスに対しＢＡＹ
　ｅ　９７８６　ｅ１日１回、希釈したＢＡＹｅ　９７
８５の０．１■１宛を、２７日間にわたって経口的に投
与した。対照マウスと処理マウスとを温度、給飼、光浴
時間等の条件を等しくて飼育した◇腫瘍細胞の注入後の
２８日目にマウスを犠牲にし、肺をポーインズ溶液中へ
と切除して、可視の左右の転移を計数した。第２表中の
データにより示されるようにＢＡＹ　ｅ　９７＆６は試
験した全用量で、対照マウスと対比しての自発転移の個
数を減少させるのに有効である。

第２表：生体内へのＢ１６ａ腫瘍細胞の皮下移植からす
る「自発的」転移 注ａ　：ＢＡＹ　ｅ　９７８６の１日１回の経口的継続
投与 注り：対照群マウス中での肺への転移の平均数値−１０
０９６ 注ｃ：×±ＳＥＭ；Ｎ＝１０ 例　３ ＢＡＹ　ｅ　９７３６　の４０ａａ画分を、１ｍｌのジ
メチルスルホオキシドｐ、ＤＭｓＯ）に溶解した。この
４０１１ｇ／　ｍｌ濃度の貯蔵物を区分けしてその両分
のうちのいくつかｉＤＭＳＯで、２０　ｍｙ　／　Ｉｎ
Ｉ及び１０■／ｍｌの最終濃度へと希釈した。２８目と
その後の毎日１回、前述したようにして、増殖中のＢ　
１６　ａ腫瘍細胞を含むフラスコの新たな培地に対し４
（１ｍｌｍ１．２０■／ｍｌ及び１０■／讃１濃度のＢ
ＡＹ　ｅ　９７８６の１ＯｐＨ画分を、加えて行った。

第８表に掲けたようにＢＡＹ　ｅ　９７８６は４０．２
０及び１０ｐｇ　／　ｍｌの最終濃度で腫瘍細胞の増殖
を阻害する。

第３表：Ｂ１６ａ腫瘍細胞の生体外での増殖（注ａ参照
） 注ａ：培地は１日１回交換。薬剤（ＢＡＹｅ　９７３ｄ
）及びＤＭＳＯ対照とＤＭＳＯ金新たな培地に添加。

注ｂ：Ｘ±ＳＥＭ；ｎ＝４ 例　４ 前述した試験を変形した試験を利用して腫瘍細胞増殖の
他のパラメータ、つまシ腫瘍細胞のデオキシリポ核酸（
ＤＮＡ）中への３Ｈ−チミジンの入シ込みによって定量
されるところのＤＮＡの複製、に対するＢＡＹ　ｅ　９
７８６の効果を検定した０Ｂ１６８１１１ｆ！瘍細胞を
Ｔ−７５フラスコ中で成長させ、ウォーカ　２５６Ｌ−
ＰａｍＤｆｆｉ瘍細胞について前述したようにトリプシ
ンを用いて分離した。

Ｂｌ　６ａ細胞を消光し、洗滌して、培地（ＭＥＭ＋１
０９６ウシ胎児血清、Ｆｅ２）中に］　Ｘ　１０Ｉ！細
胞／ｍｌの濃度に再懸濁させた。この皿帛細胞懸濁液の
ｌ　ＩｎＩ　ｆ　５　ｍｌのプラスチック製培養管中に
移し、５ｍｌの培地、或は希釈剤、もしくは８．４また
は２ｍｌｍｌ濃度のＢＡＹ　ｅ　９７８６を含む希釈剤
を適当に、培養管に添加した。ｎｔｌ述したようにして
定量を継続し、終結し、Ｂｌ　６ａ腫瘍細胞ＤＮＡ全抽
出して計数した。第４表に示すように試験した全ての濃
度のＢＡＹ　ｅ　９７３６が、腫瘍ｇ。

胞ＤＮＡ中への３Ｈ−チミジンの入り込みを阻害した。

第４表：　Ｂ　１６　ａ　ＩＭｔｊｊｌ細胞培養物中へ
の３Ｈ−チミジン（注ａ参照）の入り込み（注す参照） 注ａ：ｌマイクロキュリー／　ｍｌ　８　Ｈ−チミジン
。１５分間、ＢＡＹ　ｅ　９７８６と共に予培養。

注り：薬剤の存在下、１時間での入シ込み。

注Ｃ：×±ＳＥＭ；　ｎ＝４ 生体外での腫瘍細胞の粘着 例　５ ウォーカＬ−Ｐａｍ＠瘍細胞のグラスチック製容器に対
する粘着もしくはウィルス的に変換された内皮細胞の融
合性単層に対する粘着に対するＢＡＹ　ｅ　９７８６の
効果を、単分散したウォーカＬ−Ｐａｍｌ用瘍細胞を培
養に先立ちＤＭＳＯ中に溶解したＢＡＹ　ｅ　９７８６
　でもって予処理し、検定した。プラスチックに対する
粘着試験は、トｔの予処理？除いては０１１述した手順
に従って遂行した。

ＢＡＹ　ｅ　９７３６の８■の試料金、１ｍｌのＤＭＳ
Ｏ中に溶解した。この８１１１ｇ／ｍｌ濃度のＢＡＹ　
ｅ９７３６の５ｐ（ｌを、各１ｍｌのＩｊＩ瘍細胞に添
加した。

４　（）ｐｇ／　ｍｌ（０，０４１Ｄｇ／　ｍｌ、最終
濃度）のＢＡＹｅ　９７８６と共に８０分間、予培穆す
ることによって、グラスチックＩＫ＋容器並びに内皮ａ
＋胞単層に対し粘着する細胞の割合が減小した。第５ａ
ｆｉ及び４５ｂ表に示されているようにＢＡＹ　ｅ　９
７８６の阻害効果は、基質が培養容器のプラスチック面
であるか変換内皮細胞の融合性単層であるかを間わず一
試験し几全群において有為であった。

第５ａ表ニブラスチックに対するＩＹ＃瘍細胞（注ａ参
照）の付着 注ａ　：　２．５　Ｘ　Ｉ　Ｏ’ｌｌ瘍細胞／容器注ｂ
：８Ｘ１０’血小板／容器 注Ｃ：貧血小板プラス了のｌ　Ｏｍｌ　ｆ培地でｌ：８
２に希釈 注ｄ：対照＝１００％。培養１時間後に粘着している腫
瘍細胞の合計個数（ｃｐｍとして測定）で対比。各条件
Ａ、Ｂ。

Ｃ及びＤは、個別に算定し１００％ として標準化。

注ｅ：ｘ±ＳＥＭ；ｎ＝４ 第５ｂ表：内皮細胞（注ｆ参照）に対する腫瘍細胞（注
ａ参照）の付着 注ａ　：　２．５　Ｘ　１０’＠Ｗｒ細胞／容器注ｂ：
５ｘｉｏ’血小板／容器 注Ｃ：貧血小飯プラスマのｌ　Ｑ　ｍｌ　ｆ培地で１＝
３２に希釈 注ｄ：対照＝１００％ｏｆ＠養１時間後に粘着している
腫瘍細胞の合計個数（ｃｐｍとして測定）で対比。各条
件Ａ、Ｂ。

Ｃ及びＤは、個別に算定し１００％ として標準化。

注ｅ：Ｘ±ＳＥＭ；ｎ＝４ 注ｆ：内皮細胞系　ＲＣＥ　−Ｔ　Ｉ 生体外での腫瘍細胞誘導血小板凝集 例　６ ＢＡＹ　ｅ　９７８６の２０■の試料を１ｍｌのポリエ
チレングリコール（ＰＥＧ−４０（１）中に溶解し、引
続いてＰＥＧ−４００を用い２．０．２及び０、０　’
２　ｗ　／　ｍｌの濃度へと希釈した。腫ｉ細胞銹導血
小板凝集（ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌｌ　１ｎｄｕｃｅｄ　ｐ
ｌａｔｅｌｅｔａｇｇｒｅｇａｔ　ｉｏｎ　＝　Ｔ　Ｃ
Ｉ　Ｐ　Ａ　）についての試験を、ｌｒ１述した手順を
用いて運行した。ＴＣＩ　ＰＡに対するＢＡＹ　ｅ　９
７８６の効果を、２０．　２．　０．２もしくは０．０
２　ｍｅ　／　＋ｎｌ　Ｉｔ度のＢＡＹ　ｅ　９７８６
の２メｌ或は５メｌの画分（アリクオツド）と富…Ｉ小
板グラス１　（ｐｌａｔｅｌｅｔ　ｒｉｃｈ　ｐｌａｓ
＋ｎａ＝　ＰＲＰ　）とを腫瘍細胞の添加、約８分ｉｔ
（に混合して、検定した。

第６表は本試験の結果全示している。ＢＡＹ　ｅ９７８
６はＴＣＩ　ＰＡを、４０１）　ｐｇ／　ｍｌがら０．
４ｐｇ／ｍｌの用量範囲では阻害しない。よｐ篩いＢＡ
Ｙ　ｅ９７Ｆ（６７１％度で太き７ｉ−阻害が観察され
ｆｃ。

アゾ／’／７二燐酸（ＡＤＰ）　ｆｔ、　１　ｍＭ　ｉ
’ｉ’？液く蒸留水中）として調製した。その２５ｐＨ
の両分金、対照とＰＲＰｆ含むＢＡＹ　ｅ　９７８６処
理キユベツトとに加えた。利用したＡＤＰ濃度は、迅速
な単相性血小板凝集を誘導する。比較的高濃度のＢＡＹ
　ｅ　９７８６は、かがる血小板凝集を有為に阻害する
。

第６表：凝集データ。腫瘍細胞及びＡＤＰ訪導血小板（
注ａ参照）凝集の阻害率（％）住ａ：全キュベツト中で
、ａｘｉｏ’血小板／　＋ｍｌ　で２５０声ｉＰ　ＲＰ 注ｂ　：　２５　Ｘ　１０’細胞／ｍｌで２０ｐｌ！の
腫瘍細胞 例　７ カルシウム径路遮断性化合物であるニフエジピ７　（ｎ
１ｆｅｄｉｐｉｎｅ　）について、ｉＪｔ　筋細胞ｆｔ
１ｙｉｓ血小板凝集（ＴＣＩ　ＰＡ）’ｅ阻害するず中
力′ｆｆ：検定した。

ニオジビン（２０＋ｏｇ）を、無水エタノール：ＰＥＧ
　−４（１０混合物（１：　Ｉ）の１ｍｌ中に溶解し、
次いで同様の無水エタノール：ＰＥＧ−４００ａ合物を
用いてｌ：１０に希釈した。本凝集４ｇｓ定法は、例６
で説明した凝集検定法とｌｉ＋　４１（１！であるが、
使用するｌＦＦ１１１１系として、Ｂ１６メラニン欠乏
性黒色肝（Ｂ　１６　ａ）に代えてルイス肺癌腫（Ｌｅ
ｗｉｓＬｕｎｇ　Ｃａｒｃｉｎｏｍａ）　（８Ｌ　Ｌ　
）　ｋ用いた点緊、例外としている。対照キュベツトの
光透過率を、１００％の凝集率として標準化した。対照
希釈物もしくは２０鳴／■ｌ或は２−／ｍｌのニフェジ
ピンを含む希釈物の２．ＣＪ声１両分を、対照と試験キ
ュベツトとにそれぞれ加え、その直後に２５０メｌのＰ
ＲＰｉ添加した。混合物Ｖｉ−凝集測定器中で３ガ間、
平衡化さゼ、その上で８ＬＬ細胞の２０ｐ１画分を各キ
ュベツトに添加して血小板Ｗ集を誘発させた。・耶７表
に掲げた結果ｔよ、ニフェジピンがその用量に依存した
轢様でＴＣＩＰＡ會ｐＩ＋害しうることを、示している
。さらにこれらの結果は、Ｂ１６ａＴ　ＣＩ　Ｐ　Ａ　
ｌ’（対するニフェジピンの作用が一般的な現象であり
、ニモジピン或はＢ　Ｉ　６　ａ　ｌ）ｎ筋細胞系に限
定されない仁とを、示唆している。

第７表 みに対するニフェジピンの効果にモジピンとの比較） 本試験はニフェジピンを用いたのを例外として上述した
のと同一の手法で遂行し、ニフェジピン（４０’￥’）
　ｋ先ず無水エフノーフレ（０，５ｍｌ　）に溶解し、
次いでＰＥＧ　４００（１，５ｍ１）により２゜ＩＩＩ
ｇ／ｍｌの最終濃度にまで希釈した。この２０■／ｍｌ
儂度のニアニジビン溶液の１．ｓｌ！を、１ｍｌのＢ　
１６ａ　ＩＦＪＴ瘍細胞に添加した（最終濃度を２　（
ｌ　ｐｇ　／　ｍｌとするように。）０前述のようにし
てニアジビン溶液し１ヒ。結果ｔ″７：ｆ１８表に示す
。

第８表 当業者にとって自明である通り、本発明は斂多く変形例
でもって利用しうるものであり、本発明はそのような変
形例も発明の範囲に含むものである。

本発明に係る抗腫瘍及び抗腫瘍転移剤について、特定の
呻瘍細胞に対し有効であるかど９かを検定するための検
定法を要約して述べると、次の通りである。

ｉｌｌ、Ｍ択された血小板及び腫瘍細胞を、有効量のカ
ルシウム径路遮断性血管拡張剤化合物或はその薬剤学的
に許容しうる酸付加塩と共にガラス容器内に挿入して、
上記化合物或は酸付加塩が逮択された腫瘍細胞による血
小板凝集を阻害するかどうか全検定する、＠瘍紬胞銹導
血小機凝集の検定法０ １２１、　６１１記化合物が第四位置で置換されている
ｌ。

４−ジヒドロピリジンである、第（１）項に記載の検定
法。

１３１、ｉｉｌ記化金化合物、４−ジヒドロ−２，６−
シメチルー４−（８’−二トロフェニル）　−ビリシン
−３−低級アルキルエステル）であって、上記低級アル
キルエステルが１から６個の炭素原子を含むものである
、第（１）項に記載の検定法０（４）、前記化合物が、
＝−７エジピ”／　（ＢＡＹ　ａ　ｌｌ＋４０）である
、第ｔ１１項に記載の検定法。

（５）、前記化合物がニモジピン（ＢＡＹ　ｅ　９７８
６）である、第＋１）項に記載の検定法。

（６）、前記化合物がベラバミールである、”Ｊｒ（’
１項に記載の検定法０ （７）、前記化合物がジルチアゼムである、第ｆｉ１項
に記載の検定法。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、　カルシウム径路遮断性化合物またはカルシウム径
   路遮断性化合物の薬剤学的に許容される酸付加塩を、有
   効成分とする抗腫瘍及び抗腫瘍転移剤。 ２１　前記化合物が第四位置で１腎換されているｔ４−
   ジヒドロピリジンである、特許請求の範囲第１項に記載
   の抗腫瘍及び抗腫瘍転移剤。 ３、前記化合物が１，４−ジヒドロ−２，６−ジメｆル
   ー　４−　（８’−ニトロフェニル）−ピリジン−５−
   （低級フルキルエステル）　−５−（低級フルキルエス
   テル）であって、１記載級アルキルエステルが１から６
   個の炭素原子を含むものである、特許請求の範囲第１項
   に記載の抗腫瘍及び抗腫瘍転移剤。 ４、ｉｌｌｌｌ金化合物フェジピン（ＢＡＹ　ａ１０４
   ０　）である、特許請求の範囲第１項に記載の抗腫瘍及
   び抗腫瘍転移剤。 ５、前記化合物がニモジピン（ＢＡＹ　ｅ９７８６　）
   である、特許請求の範囲第１項に記載の抗腫瘍及び抗腫
   瘍転移剤。 ６、前記化合物がベラバミールまたはジルチアゼムであ
   る、特許請求の範囲第１項に２載の抗腫瘍及び抗腫瘍転
   移剤。