JPS6048160B2 - 抗生物質の精製法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は抗生物質を生産した醗酵液からまたは部分的に
精製した抗生物質を含有する溶液から構造式を有する新
規な抗生物質チエナマイシン （ＴＪｌｌｅｎａｍｙＣｌｎ）を採取精製する方法に関
するものである。

これは、抗生物質を生産した醗酵液または部分的に精製
した抗生物質の溶液を陰イオンまたは陽イオン交換樹脂
と接触せしめて抗生物質をこのような樹脂上に吸収させ
その後抗生物質を水または塩基で樹脂吸着体から溶離す
ることにより達成される。好適な溶離剤は、使用した樹
脂の型によつてきまつてくる。式（１）の抗生物質は、
また、ポリ−アクリルアミドゲルをを通してのゲル枦過
によつてまたはポリエステル重合体またはポリスチレン
、疎水性交叉結合ジビニルベンゼン重合体のような吸着
剤上のクロマトグラフィー処理によつて精製することも
できる。チエナマイシンは、種々なグラムー陰性及びグ
ラムー陽性菌の生長の抑制に有効である。

チエナマイシンは、調節された条件下において該化合物
を生産できるストレプトマイセス・カトレヤ（Ｓｔｒｅ
ｐｔＯｍｙｃｅｓＣａｔｔｌｅｙａ）の菌株によつて例
えは工業技術院微生物工業技術研究所に微生物受託番号
ゞ微工研菌寄第３３叩号（ＦＥＲＭ−ＰＮＯ．３３Ｏ９
）として保存されている菌株によつて適当な水性栄養培
地中て通気酉偕膵することにより生産される。

他の抗生物質の生産に対して使用される水性培地のよう
な水性培地が、チエナマイシンの生産に対して適当して
いる。

このような培地は、微生物によつて同化され得る炭素、
窒素及び無機塩源を含有している。一般に、糖類例えば
グリコーズ、フラクトーズ、マルトース、シユクローズ
、キシローズ、マンニトールなど及び澱粉類例えば殼類
例えばガラス麦、玉蜀黍澱粉、殼粉などのような炭水化
物を、栄養培地に単独でまたは組合せて同化し得る炭素
源として使用することができる。培地に利用される炭水
化物源の正確な量は、一部培地の他の成分によつてきま
つてくる。しかし乍ら、一般に、炭水化物の量は、培地
の約１〜６重量％に変化する。これらの炭素源は、個々
に使用することができるまたは幾つかのこのような炭素
源を培地中で一緒にすることができる。一般に、多くの
蛋白質物質を醗酵法における窒素源として使用すること
がてきる。適当な窒素源は例えは酵母加水分解物、プラ
イマリー、イースト、大豆粉、綿実粉、力ティンの加水
分解物、玉蜀黍浸出液、ジスチラーズ、ソリユーブルス
またはトマトペーストなどを包含する。窒素源は、単独
または一緒にして水性培地の約０．２〜６重量％の範囲
で使用されるへ培養培地の混合し得る栄養的無機塩は、
ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、フ
ォスフェート、サルフェート、クロライド、カーボネー
トなどのイオンを生じ得る普通の塩である。

また、コバルト、マンガン、鉄及びマグネシウムのよう
な微量の金属を包含する。実施例に説明した培地は使用
し得る広範囲な種々な培地の例であつてそして限定する
ために示すものでないことに注意すできである。醗酵は
、約２０〜３７℃の温度て実施される。

しかし乍ら、最適な結果を得るためには、醗酵を約２２
〜３０℃の温度で実施することが好適である。ストレプ
トマイセス・カトレヤを生長せしめそしてチエナマイシ
ンを生産せしめるのに適当した栄養培地のＰＨは、約６
．０〜８．０に変化することができる。抗生物質チエナ
マイシンは、表面及び深部培養によつて生産されるけれ
ども、醸酵を深部状態で実施することが好適である。抗
生物質の生産は微生物ストレプトマイセス．力トレヤに
限定されるものてないことは理解されるできである。

事実、Ｘ線一照射、紫外線照射、窒素マスタード、ファ
ージ露出（ＰｈａｇｅｅｘｐＯｓｕｒｅ）などのような
種々な手段によつて前述した微生物から得られる変種及
ひ他のチエナマイシン生産微生物の使用が望ましい。チ
エナマイシンは種々なグラムー陽性及びグラムー陰性細
菌に対して活性な価値ある抗生物質てあるそして従つて
人間及び家畜医薬として利用されるものである。

該化合物は、グラムー陽性またはグラムー陰性細菌例え
ばスタフイロコツカス．オーレウス．プロテウス．ミラ
ビリス．エシエリヒア．コリー．クレブシエラ．プノイ
モニー．プソイドモナスエールギノサ及びエンテロパク
ター．クロアカエにより超される惑染の治療に対する抗
菌剤として使用することがてきる。本発明の抗菌物質は
、更に、食品を保存するための動物食品に対する添加剤
としてそしてまた殺菌剤として利用することがてきる。
例えは、医薬及ひ歯科用装置上の有害な細菌の生長を破
壊及ひ阻止するために並ひに有害な細菌の生長を阻止す
るための工業的適用例えば水を基にしたペイント及びペ
ーパーミルの白水における殺菌剤として溶液１ミリオン
部当り抗生物質０．１〜１（４）部の濃度て水性組成物
に使用することがてきる。経口投与用の錠剤及びカプセ
ルは代表的な単位使用形態てありそして普通の担体を含
有している。

錠剤は、当該技術においてよく知れらている方法によつ
て被覆することができる。経口的液状製剤は、水性また
は油性懸濁液、溶液、乳濁液、シロツプ、エリキサーな
どの形態にあるまたは使用前に水または他の適当なベヒ
クルで再構成できる乾燥品として与えることができる。
このような液状製剤は普通の添加剤を含有する。坐薬は
普通の坐薬基剤例えばココア、バターまたは他のグリセ
ライドを含有する。注射用の組成物は、防腐剤と一緒に
したアソプルまたは多使用容器中の単位使用形態として
与え得る。

組成物は、油性または水性ベヒクル中の懸濁液、溶液、
乳濁液のような形態をとり得る。そして組成物は、懸濁
剤、安定剤及び（または）分散剤のような処方剤を含有
し得る。更に、活性成分は、使用前に適当なベヒクル例
えば滅菌した発熱性物質を含有していない水て再構成で
きる粉末の形態になし得る。また、担体以外に、本発明
の組成物は、安定剤、結合剤、酸化防止剤、防腐剤、潤
滑剤、懸濁剤、粘着剤または風味剤などのような他の成
分を含有し得る。

にわとり、牛、羊、豚などの治療におけるような家畜医
薬においては、組成物は、例えは長く作用するまたは急
速に放出する基体中の乳腺内製剤として処方し得る。

人間の細菌感染の治療においては、本発明の化Ｊ合物は
、約２〜６００ｍｇ／Ｋ９／日の量でそして好適には約
５〜１００ＷＬｇ／Ｋ９／日で（好適には分割した量例
えば１Ｂ１こついて３〜４回に分割した量て）抗生物質
を投与する普通の方法によつて経口的または非経口的に
投与される。

化合物は、適当な生７理学的に利用し得る担体または賦
形剤と共に活性成分を例えば２５，２５０，５００また
は１０００ｍ９を含有する使用単位形態として投与する
ことができる。使用単位形態は、溶液または懸濁液のよ
うな液状製剤の形態または錠剤またはカプセルのような
固体フの形態にある。投与される使用量は、大部分、処
理される客体の状態、宿主の重量及ひ惑染の型、投与の
方法及び頻度、一般的惑染に対して好適な非経口的方法
及び腸内惑染に対す経口法によつてきまつてくる。

勿論、小児使用に対してはより少量が使用されることは
理解されるであろう。このような調節のすべては、当該
分野における開業医の熱線の範囲にある。スタフイロコ
ツカス・オーレウスＡＴＣＣ６５３８Ｐを使用するディ
スクー拡散（Ｄｉｓｃ−ＤｉｆｆｕｓｉＯｎ）試験によ
つて試験した場合、前述した方法により生産された抗生
物質含有醗酵液は、１ｍ１当り約５０〜４０峰位の活性
度を有す。

プロス固体１ｍｇ当り少なくとも２単位の活性度を有す
る抗生物質製剤を精製することがてきるそして抗生物質
は多数の方法により採取される。１つのこのような方法
は、チエナマイシンを酸性ＰＨて強酸性陽イオン交換樹
脂上に吸着させ次に水性有機塩基て溶離することからな
る。

そのようにして得られた溶離液は次の方法により更に精
製することができる。ポリスチレン第４級アンモニウム
型の陰イオン交換樹脂上のクロマトグラフィー処理；緩
衝液または水を使用した陽イオン交換樹脂上のクロマト
グラフィー；ゲル沖過及び吸着樹脂上のクロマトグラフ
ィー。方法を実施する順序には制限はないが、より不純
な酪酵液及び溶液に対してイオン交換樹脂精製を使用し
そして既に少なくとも部分的に精製した物質に対してゲ
ル及ひ重合体吸着樹脂法を使用する順序を使用すること
が好適てある。

醗酵液からまたは抗生物質を含有する溶液から抗生物質
チエナマイシンを採取する好適な工程順序の例は、醗酵
液または抗生物質を含有する溶液をスルフォン酸交換基
を含有する陽イオン交換樹．脂て充填したカラムに通し
、樹脂吸着体を塩基て溶離し、溶離液を集め、活性フラ
クシヨンを合し、次に合したフラクシヨンを夫々１８０
０及び７００より大なる分子量を有する分子を排除する
ポリアクリルアミドまたはデキストランゲルて充填した
．カラムに通し、このゲルを水でまたは低級アルコール
の水溶液で溶離し、溶離液を集め次に活性フラクシヨン
を合することからなる。

醗酵液からまたは抗生物質を含有する溶液から抗生物質
チエナミンを採取する他の好適な工程順・序は、醗酵液
または抗生物質を含有する溶液をスルフォン酸交換基を
含有する陽イオン交換樹脂で充填したカラムに通し、樹
脂吸着体を塩基で溶離し、溶離液を集め、活性フラクシ
ヨンを合し、陽イオン交換樹脂から溶離した活性フラク
シヨンをポリスチレンー第４級アンモニウム型の陰イオ
ン交換樹脂で充填したカラムに通し、流出液を集め、こ
の流出液を夫々１８００及び７００より大なる分子量を
有する分子を排除するポリアクリルアミドまたはデキス
トランゲルで充填したカラムに通し、このゲルを水でま
たは低級アルコールの水溶液で溶離し、溶離液を集め次
に活性フラクシヨンを合することからなる。

ノ 醸酵液からまたは抗生物質を含有する溶液から抗生
物質チエナマイシンを採取する他の好適な工程順序は、
醗酵液または抗生物質を含有する溶液をスルフォン酸交
換基を含有する陽イオン交換樹脂て充填したカラムに通
し、樹脂吸着体を塩基で．溶離し、溶離液を集め、活性
フラクシヨンを合し、陽イオン交換樹脂から溶離した活
性フラクシヨンをポリスチレンー第４級アンモニウム型
の陰イオン交換樹脂で充填したカラムに通し、流出液を
濃縮し、濃縮した流出液をポリスチレン、疎水”性交叉
結合ビニルベンゼン重合体で充填したカラム上に吸着さ
せ、重合体を水またはフォスフェート緩衝液て溶離し、
溶離液を集め次に活性フラクシヨンを合しそしてフォス
フェート緩衝液溶離の場合においては、ジビニルベンゼ
ン重合体からの吸着及ひ溶離の最後の工程を溶離剤とし
て水を使用して反復することからなる。

本発明は、抗生物質チエナマイシン及び緩衝液塩のよう
な無機イオンを含有する溶液をポリスチレン樹脂ＸＡＤ
−２で充填したカラム上に吸着させ次に水で溶離して無
機イオンを含有していないチエナマイシンを得る方法を
包含するように企図するものである。

醗酵液からまたは抗生物質を含有する溶液から抗生物質
チエナマイシンを採取する更に他の好適な工程順序は、
醗酵液または抗生物質を含有する溶液をスルフォン酸交
換基を含有する陽イオン交換樹脂で充填したカラムに通
し、樹脂吸着体を塩基て溶離し、溶離液を集め、活性フ
ラクシヨンを合し、陽イオン交換樹脂から溶離した活性
フラクシヨンをポリスチレンー第４級アンモニウム型の
陰イオン交換樹脂で充填したカラムに通し、流出液を集
め、流出液を核スルフォン酸交換基を含有する陽イオン
交換樹脂て充填したカラムに通し、樹脂吸着体を緩衝液
または水て溶離し、活性フラクシヨンを合し、この活性
フラクシヨンを夫々１８００及ひ７００より大なる分子
量を有する分子を除いたポリアクリルアミドまたはデキ
ストランゲルで充填したカラムに通し、このゲルを水ま
たは稀緩衝液でまたは低級アルコールの水溶液で溶離し
、溶離液を集め、活性フラクシヨンを合し、このフラク
シヨンを濃縮し、これをポリスチレン樹脂ＸＡＤ−２で
充填したカラム上に吸着させ次に水で溶離することから
なる。

使用し得る有用な精製工程順序の例は次の通りである。

１ 陽イオン交換樹脂上のクロマトグラフィー処理；陰
イオン交換樹脂上のクロマトグラフィー処理；陽イオン
交換樹脂上のクロマトグラフィー処理の反復；吸着及ひ
吸着樹脂からの溶離次で第２の吸着及び吸着樹脂からの
溶離。２陽イオン交換樹脂上のクロマトグラフィー処理
；陰イオン交換樹脂上のクロマトグラフィー処理；陽イ
オン交換樹脂上のクロマトグラフィー処理の反復；吸着
及び吸着剤からの溶離；ゲ５ルろ過。

３陰イオン交換樹脂上のクロマトグラフィー処理；陽イ
オン交換樹脂上のクロマトグラフィー処理；ゲル淵過；
吸着及び吸着樹脂からの溶離。

チエナマイシンを精製する好適な方法は、樹脂上の対イ
オン（ＣＯｕｎｔｅｒｉＯｎ）がナトリウムまたはカリ
ウムのような現在当該技術において知られている何れか
の適当な対一イオンから選択されたものである強酸性陽
イオン交換樹脂上にチエナマイシンを吸着させることか
らなる。

このような樹脂の例は、スチレンージビニルベンゼン母
体を有するスルフォネート型のもの例えばナトリウムサ
イクル型のポリスチレン核スルフォン酸樹脂ダウエツク
ス５０×２（ミシガン洲ミドランドのタウ．ケミカル．
カンパニーにより製造された）である。強陽イオン交換
樹脂の級の他の代表的なものは、次のものを包含する。
ダウエツクス５０×４、ダウエツクス５０Ｘ８（ミシガ
ン州のミドランドのタウ．ケミカル．カンパニーにより
製造）、アンバーライロＲｌ２Ｏ（ペンシルバニア州フ
イラデルフイアのローム．アンド．バス．カンパニーに
より製造）、ジユオライトＣ２５Ｄ（カリフォルニア州
レッドウッド．シティのケミカルプロセス．カンパニー
により製造）、パームチツトＱ（ニユージヤー州バーミ
ンガムのパームチツト．カンパニーにより製造）、イオ
ナツクＣ−２４９（ニユージヤー州バーミンガムのイオ
ナツ久ケミカル．カンパニーにより製造）。吸着した抗
生物質は、ピリジン、α，βまたはγ−ピリコン，２．
３−，２．４一及び２．６−ルチジン，２．４６−ユリ
ジン及びアルキルアミン（アルキル基は２〜ｍ個好適に
は２〜６の炭素原子を含有している。

）のような有機塩基の水溶液で陽イオン交換樹脂から容
易に溶離される。陽イオン交換樹脂を溶離するのに好適
な塩基は、ピリジンである。そのようにして得られた溶
離液は、若し必要ならば、他の精製法によつて更に精製
することがてきる。精製は、例えば、陰性対−イオンが
、クロライドまたはアセテートのような現在当該技術に
おいて知られている適当な対一イオンから選択されたも
のであるポリスチレン−トリメチルアンモニウム型の陰
イオン交換樹脂上のクロマトグラフィー処理によつて達
成し得る。そのようにして得られた溶離液は、一定のＰ
Ｈで揮発性または非揮発性緩衝液を使用してポリスチレ
ンースルフォネート型の陽イオン交換樹脂上でクロマト
グラフィー処理することにより更に精製することができ
る。使用し得る緩衝液は、ＰＨを６〜８に保持てきるも
のである。適当な非揮発性緩衝液は、トリス（ヒドロキ
シメチル）アミノメタンマレエート，カコジル酸、ＫＦ
Ｉ２ＰＯ４またはＮａＨ２ＰＯ４から製造される。好適
な非揮発性緩衝液はＮａＨ２ＰＯ４てあノる。適当な揮
発性緩衝液は、Ｎ−エチルモルフオリン，α−，β−ま
たはγ−ピコリン、または２．３−２．４−または２．
６−ルチジンから製造される。好適な揮発性緩衝液は２
．６−ルチジンである。陽イオン交換樹脂クロマトグラ
フィー処理から７得られた溶離液を、ポリアクリルアミ
ドまたはデキストランゲルのようなゲル沖過樹脂を通し
て通過させる。一般に、２００〜２０００の分子量を有
する物質の分別及び脱塩を可能にする５０〜１００メッ
シュのゲルを使用する。５０×４００メッシュのゲルも
つまた使用することがてきる。

使用される特定のメッシュは、使用されるカラムのサイ
ズによつてきまつてくる。適当なゲルの例は、７００よ
り大なる分子量を有する分子を排除するスウーデンのフ
アルマシア．カンパニーからセフアデツクスＧ−１０と
してビーズ形態で得られるエピクロルヒドリンと交叉結
合したデキストラン及び１８００より大なる分子量を有
する分子を排除するカリフォルニア州リツチモンドのビ
オ．ラド．ラボラトリーズからビオ−ゲルＰ−２として
ビーズ形態で得られるメチレンビスアクリルアミドと交
叉結合したポリアクリルアミドである。精製される抗生
物質溶液のＰＨは、好適にはほぼ中性に調節されるそし
て溶液をゲルと接触平衡化させる。次に、抗生物質を水
または低級アルコールの水溶液のような他の適当な溶離
剤でゲルから除去する。溶離液をフラクシヨンとして集
めそして生物試験によつて最も活性であることが判つた
部分を合する。精製したチエナマイシンを採取する特に
好適な方法は、ＰＨを３〜５に調整した沖過醗酵液のよ
うな抗生物質の溶液をナトリウムサイクル型のスルフォ
ネート型の強陽イオン交換樹脂（ダウエツクス５０Ｘ２
）を含有するカラムに通すことである。

次に、得られた吸着物を２％水性ピリジンのような適当
な溶離剤で溶離する。溶離液をフラクシヨンに集める。
フラクシヨンのサイズは、使用されるカラムのサイズに
よつてきまつてくる。更に精製を次の方法順序によつて
達成し得る。ポリスチレン−トリメチルアンモニウム型
の陰イオン交換樹脂（例えはクロライドまたはアセテー
トサイクール型のダウエツクスー１×２）上のクロマト
グラフィー処理；ポリスチレンースルフォネート型の陽
イオン交換樹脂（例えば２．６−ルチジニウムサイクル
型のダウエツクスー５０）上のクロマトグラフィー処理
（この場合においてはカラムをＰＨ６．３！の２．６−
ルチジンアセテート緩衝液で溶離する）；ゲルー滲透樹
脂（例えばビオ−ゲルＰ−２，ポリアクリルアミド樹脂
）を通してのゲルろ過及ひ１回またはそれ以上の重合体
吸着剤（例えばＸＡＤ−２、ポリスチレン樹脂）上の吸
着及び３中性ＰＨの稀フォスフェート緩衝液または水を
使用した該重合体樹脂からの溶離・溶離液の生物活性は
、試験微生物としてスタフイロコツカス．オーレウスＡ
ＴＣＣ６５３８ｌｌ）を使用して溶離液を試験すること
によつて測定される。 ４以下の例
は、本発明の生成物を得る方法を示すものである。しか
し乍ら、以下の例は例示的に示すものであつてそして当
該技術に精通せし者に明らかであるように本発明は作用
的に均等な生成物及びその製法を包含するものである。
それ故に、同一生成物を形成する本明細に説明した方法
の何れの変形法も、類似方法を構成するものとして解釈
しなければならない。前述した方法は広範囲に変化及び
変形することができるそして何れの微小の離脱または拡
張も本発明の範囲に包含するものとしてみなされるべき
である。試験 抗菌活性度の試験は、特に説明しない限りは、）次のデ
ィスクー拡散法によつて行う。

試験プレートを次の方法で製造する。栄養プロス＋０．
２％酵母工キズ中の試験微生物スタフイロコツカス。オ
ーレウスＡＴＣＣ６５３８Ｐの一夜生長物を栄養プロス
＋０．２％酵母工キズで稀釈して６６０ｍμの波長５５
％・の透過率を有する懸濁液を得る。この懸濁液を４７
〜４８℃の２．０ｙ／ｅのジフコ．酵母工キズを補足し
たジフコ栄養寒天に加えて寒天１′当り懸濁液３３．２
ｍ１を含有する組成物をつくる。この懸濁液５ｍ１づつ
直径８５Ｔｒ０！ｔのペトリー皿に注加しそしてこれら
のプレートを冷却しそして使用するまで（最高５日）４
゜Ｃて保持する。誌験すべき抗生物質の試験をＰＨ７の
フォスフェート緩衝液中て適当な濃度に稀釈する。

直径０．５吋の沖紙ディスクを試験溶液に浸漬しそして
試験プレートの表面におく。普通夫々の試料に対する２
つのディスクを互に対立する１つのプレート上におく。
これらのプレートを３ｒＣで一夜培養しそして阻止帯域
を直径朗として測定する。順として測定した阻止帯域は
、相対的力価またはセフアロチソのような精製された参
照標準と比較した場合の抗生物質の力価（単位／ｍｌ）
を決定する。例４〜７に示した活性度の単位は、８，４
，２及び１ｐｙ／ｍｌのセフアロチン標準溶液に基くも
のである。１単位は、阻止帯域が１６及ひ２１Ｔ１ｒＩ
ｎの直径の間にあるセフアロチン１μ９／ＭＬと同じ阻
止を与えるように計算された量として定義される。

例１ ストレプトマイセスカトレヤの凍結乾燥培養物の管を無
菌的に開きそして内容物を次の組成を有する減菌デービ
ス．ソルト（Ｄａｖｉｓｓａｌｔｓ）０．７ｍ１を含有
する管中に懸濁する。

デービス，ソルト 拘樽酸ナトリウム ０．５ｙＫ２ＨＰ０
４７．０ダＫＨ２ＰＯ４３．Ｏｇ （ＮＨ４）２Ｓ０４１．０ダ ＭｇＳＯ４７Ｈ２ＯＯ．ｌｇ 蒸溜１（１，０１０００ｍ１ この懸濁液０．２ｍｔを使用して次の組成を有する培地
Ａ（十寒天）の斜面培養基に接種する。

培地Ａ酵母自己分解物（アルダミン＊）１０．０ｙグル
コース １０．０Ｖフォスフェート緩
衝液＊ ２．０ｍＬＭｇＳ０４７Ｈ２００．０５
ｙ蒸溜水 １０００ｍ１ｐＨ：
ＮａＯＨを使用して６．５に調整＊アルダミンニイース
ト．プロダクツ．コー ポレーシヨン＊フォスフェート
緩衝溶液 ＫＨ２ＰＯ４９ｌ．ＯｑＮａ２Ｆ ＩＰＯ４９５．Ｏｙ 蒸溜Ｈ２ＯｌＯＯＯｍｌ 斜面培養基に対して：寒天２５．０ｇ／ｆを加える。

接種した斜面培養基を２８゜Ｃて８日間培養しそして４
゜Ｃて保存する。この斜面培養基の胞子及ひ気中菌糸の
一部を使用して培地Ａ（寒天なし）５０ｒｔＬ１を含有
する阻板付の２５０ｍＬの種子三角フラスコに接種する
。

この種子フラスコを２２０ｒ′Ｐｍ振盪機〔スロー（Ｔ
ｈｒＯｗ）２″″〕上て２８゜Ｃで２日間振盪する。こ
の時間で生長は満足てある。夫々培坩弗４０ｍ１を含有
する拓個の２５０ｍＬ三角フラスコに、１フラスコ当り
種子フラスコからの生長物１ｍｔを接種する。

培地Ｂは次の組成を有す。培地Ｂ玉蜀黍粉
２０．０ｙジスチラーズ．ソリユーブルズ１０
．０ダ大豆粉 １５．０ｆ拘琳酸
ナトリウム ４．０ｙＣａＣ１２．２Ｈ２
００．５ｙＭｇＳ０４．７Ｈ２００．１ｙＣ０Ｃ１２．
１６Ｈ２００．０１ｙＦｅＳ０４．７Ｈ２ ００．０１ｙ ポリグリコール２０００宋末 ０．２熔量％蒸溜Ｈ
２ＯｌＯＯＯｍＬｐＨ：ＮａＯＨを使用して６．５に調
整する。

＊来ポリグリコールニダウ．ケミカル．ガン パニーこ
れからの１５個の生産フラスコを２２０ｒｐｍ振盪機（
スロー２″）上で２８℃で３日まで振盪する。

酪酵中試験を行う。試験は、遠心処理液を使用して行う
。試験前に、液のＰＨを次の表に示すように調整する。
培養（時間） ４８５３７２ＡＴＣＣ６５
３８Ｐに対す ３４／４０ｈ３５／４１ｈ３４る活性
度（帯域７ｒｒ！ｎ）初期ＰＨ６．３５．９５．Ｏ 調整ＰＨ６．８６．２ｈ ＝あいまい Ｂ時間の培養において、Ｂ個のフラスコからの醗酵液を
集める。

一部を遠心処理しそして試験する。残りの液を枦過し、
ＰＨ７に調整しそして５００ｍ１を凍結乾燥して固体１
０．７ｙを得る。これらの固体１．５ｙをｎ−ブチルア
ルコールニ水（１：９９）２５ｍＬに入れる。溶液のＰ
Ｈは７．０でする。この溶液を、予めｎ−ブチルアルコ
ールニ水で平衝化したビオ−ゲルＰ−２（２００〜４０
０メッシュ）の５×１１８Ｃ７！カラムに適用する。ゲ
ルを同溶液で１０ＴＴＬｔ／分て展関して６５０ｍ１の
前流次で夫々２０ｍ１づつ７５フラクシヨンを集める。
流出流れは、メコーマチツク．レコーデング．ジフアレ
ンシヤル．リフラクメーター（ＭｅｃｃＯ−Ｍａｔｉｃ
ｒｅｃＯｒｄｉｕｇｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｒｅｆｒ
ａｃｔＯｍｅｔｅｒ）で追跡する。夫々のフラクシヨン
を抗菌活性度について試験する。チエナマイシンは、フ
ラクシヨン３４〜４０（フラクシヨン３７で最高）に見
出される。フラクシヨン３７１０ｍ１を凍結乾・燥して
固体２．０ｍ９を得る。得られた固体を試験のため水５
ｍ１に入れる。試験プレートを２８゜Ｃで一夜培養する
。結果は以下の表に示す通りてある。例２ストレプトマ
イセス．カトレヤの凍結乾燥培養物の管を無菌的に開き
そして内容物を次の組成を女十ス襦苗ぞービスｅノノレ
ドｎ只ｍ′由Ｌデ？懲大斗る。

デービス．ソルト 拘樽酸ナトリウム ０．５ｑＫ２ＨＰ０４
７．０ｙＫＨ２Ｐ０４３．０ｙ（Ｎ］−１４）２Ｓ０４
１．０ダＭｇＳＯ４７Ｈ２ＯＯ．ｌｙ 蒸溜Ｈ２ＯｌＯＯＯｍｌ この懸濁液を使用して次の組成を有する培地Ａ（十寒天
）の４本の斜面培養基に接種する。

培地Ａ酵母自己分解物（アルダミン＊）１０．０Ｖグル
コース １０．０ｙフォスフェート
緩衝液来 ２．０ｍ１ＭｇＳ０４７Ｈ２００．
０５ｆ１蒸溜水 １０００ｍ１
ｐＨ：ＮａＯＨを使用して６．５に調整する。

米アルダミンニイースト．プロダクッ．コーポーシヨン
末フォスフェート緩衝溶液 ＫＨ２ＰＯ４９ｌ．Ｏダ Ｎａ２ｌ（ＰＯ４９５．Ｏｙ 蒸溜Ｈ２ＯｌＯＯＯｍｌ 斜面培養基に対して：寒天２５．０ｇ／ｆを加える。

接種した斜面培養基を２８℃て１週間培養しそして４゜
Ｃで保存する。この斜面培養基の１つの培養基の胞子及
び気中菌糸の一部を使用して培地Ａ５Ｏｍｌを含有する
阻板付２５０ｍＬ種子三角フラスコに接種する。

この種子フラスコ２２０ｒｐｍ振盪機（スロー２″）上
で２８゜Ｃで２日間振盪する。この時間で生長は満足で
ある。夫々培坩弗４０ｍＬを含有する托個の２５０ｍ１
三角フラスコに、１フラスコ当り種子フラスコからの生
長物１ｍ１を接種する。培地Ｂは次の組成を有す。培地
Ｂ玉蜀黍粉 ２０．０ｙ ジスチラーズ．ソリユーブルズ１０．０ｙ大豆粉
１５．０ｙ 拘樽酸ナトリウム ４．０ｙ ＣａＣＩ２．２Ｈ２００．５ダ ＭｇＳＯ４．７Ｈ２ＯＯ．ｌダ ＣＯＣｌ２．６Ｈ２ＯＯ．ＯｌｙＦｅＳＯ４．Ｈ２ＯＯ
．Ｏｌダポリグリコール２０００＊来 ０．２熔量
％蒸溜Ｈ２ＯｌＯＯＯｍｌｐＨ：ＮａＯＨを使用して６
．５に調整する。

′＊米ポリグリコール２０００：ダウ．ケミカル．力
ンノマニーこれらのフラスコを２２０ｒｐｍ振盪機（ス
ロー２″″）上て２８℃で３日間まで振盪する。

醗酵サイクル中試験を行う。試験は、遠心処理液の上澄
液を使用して行う。結果は次の通りである。培養（時間
） ４８５３７２ＰＨ６．７６．４５
．５ＡＴＣＣ６５３８Ｐに対する活性度３８４０３８順
５時間の培養において、Ｂ個のフラスコからの液を集め
そして沖過する。

沖液の４００ｍ１の部分のＰＨを稀Ｈｃｌで４．８に調
整しそしてこれを１４ｍ１／分の速度でダウエツクス５
０×２Ｎａ＋１４０ｍ１上に吸着させる。吸着物を脱イ
オン化水２００ｍｔで洗滌し次に水中の２％ピリジンで
溶離してフラクシヨン６×７０ｍｔを集める。フラクシ
ヨンのＰＨを７．０に調整する。試験をすべてのフラク
シヨンに対して行いそして帯域直径は次に表に示す通り
である。

枦過液 稀釈 帯域直径１：４３３
ｗＬ１：８３０ｍ；ｍ １：１６２７７ｍＩｎ１ ：３２２４ｒｆｒｍ 溶離液フラクシヨン 稀釈 帯域直径１１：５２
２．５。

２１ ：５３６＝ ３１：５２０ｍｎ４，５，６１ ：５０７７！７７！ これらの試験は、活性度の４５％が溶離液にあることを
示す。

溶離液フラクシヨン＃２を凍結乾燥して固体１１７ｍｇ
を得る。固体１１７ｍｇをｎ−ブチルアルコールニ水（
１：９９）１．５ｍ１に溶解する。

この溶液を予めｎ−ブチルアルコールニ水で平衝化した
ビオ−ゲルｐ−２の床１．４×８１．５αに適用する。
ゲルを１ｍｔ／分てｎ−ブチルアルコールニ水で展関し
てフラクシヨン２ｍＬを集める。流出流れは、メコーマ
テツク．レコーデングリフラクトメーターで追跡する。
フラクシヨンを１：２０の稀釈において抗菌活性度につ
いて試験する。チエナマイシン生活性はフラクシヨン４
４〜５３に観察される。フラクシヨン４６〜４９及びフ
ラクシヨン５０の半分を合する。合したフラクシヨンの
試料１ｍ１を試験のために除去しそして残りを凍結乾燥
して部分的に精製された抗生物質一４．２ＴｒＬ９を得
る。例３ ストレプトマイセス．カトレヤの凍結乾燥物の管を無菌
的に開きそして内容物を次の組成を有する滅菌デービス
ソルト０．８ｍ１に懸濁する。

１ デービス．ソルト 拘樽酸ナトリウ
ム ０．５ｇＫ２ＨＰ０４７．０ｆＫＨ２Ｐ
０，３．０ｙ（Ｎｌｌ４）２Ｓ０４１．０１ＭｇＳ０４
．７Ｈ２００．１ｙ蒸溜Ｈ２ＯｌＯＯＯｍｔ この懸濁液を使用して次の組成を有する培地Ａ（十寒天
）の４本の斜面培養基に接種する。

培地Ａ酵母自己分解物（アルダミン） １８．０′グル
コース １０．０ｆフォスフェート
緩衝液来 ２．０ｍ１ＭｇＳ０４．７Ｈ２００．０
５ｙ 蒸溜Ｈ２ＯｌＯＯＯｍＬｐＨ ：ＮａＯＨを使用して６．５に調整する。

末アルダミンニイースト．プロダクツ．コーポレーショ
ン来フォスフェート緩衝溶液 ＫＨ２ＰＯ４９ｌ．Ｏダ Ｎａ２ｌ−［ＰＯ４９５．Ｏｇ 蒸溜Ｈ２ＯｌＯＯＯｍｔ 斜面培養基に対して：寒天２５．０′／ｆを加える。

接種した斜面培養基を２８゜Ｃて１週間培養しそして４
゜Ｃで保存する。１つの斜面培養基の胞子及び気中菌糸
の一部を使用して夫々培坩Ａ５ＯｍＬを含有する３本の
阻板付２５０ｍＬ種子三角フラスコに接種する。

これらの種子フラスコを２２０ｒ′Ｐｍ振盪機（スロー
２″″）上て２８゜Ｃで１日間振盪する。この時間にい
て生長は満足てある。夫々培地Ｃ２５ＯＴＬｌを含有す
る１鉢の２０００ｍＬ三角フラスコに、３本の種子フラ
スコの内容物を無菌的に集めることによつて得られた懸
濁液７ｍＬを接種する。

培地ｃは次の組成を有す。培地Ｃ 玉蜀黍粉 ２０．０Ｖジスチラー
ズ．ソリユーブルズ１０．０ｙ大豆粉
１５．０ＪＣａＣＩ２．２Ｈ２００．５ｙＭｇ
Ｓ０４．７Ｈ２００．１９Ｃ０Ｃ１２．６Ｈ２００．０
１ｙＦｅＳ０４．７Ｈ２００．０１ｙｃａｃ０３
４．０ｙ ポリグリコール２０００来来 ０．２熔量％ 蒸溜
Ｈ２ＯｌＯＯＯｍＬｐＨ：ＮａＯＨを使用して６．５に
調整する。

これらのフラスコを２２０ｒ″Ｐｍ振盪機（スロー２″
″）上で２８℃で７３Ｖ間振盪する。

醗酵液を集めそして一部分を試験のために遠心処理する
。得られた液は７．４のＰＨを有しそして遠心処理液の
上澄液を使用した抗菌試験は４３醜である。液を淵過し
そして淵液のＰＨを稀ＨＣＬて４．０に調整しそして３
０００ｍｔを３０ｍｔ／分の速度でダウエツクス５０×
２Ｎａ＋３００ｍ１上に吸着させる。

吸着物を脱イオン化水３００ｍ１で洗滌し次に２％ピリ
ジンで溶離してフラクシヨン８×１５０ｍｔを集める。
フラクシヨンのＰＨを７．０に調整する。３００ｍ１か
らなる溶離液フラクシヨン≠２及び≠３集めるそしてダ
ウエツクス５０×２Ｎａ＋カラムに適用した全べての生
物学的に活性な物質の４８％を含有する。

前述したようにして得られたＰＨ７．Ｏのダウエツクス
５０×２Ｎａ＋溶離液のフラクシヨン２８０ｍ１をダウ
エツクス１×λ〒サイクル樹脂の４０ｍｔカラムに通す
。樹脂を脱イオン化水１６０ｍ１て洗滌する。流出液及
び洗滌フラクシヨンを合して溶液４４０ｍＬを得る。こ
の溶液を稀水酸化ナトリウムでＰＨ８．２に調整し、減
圧濃縮して３００ｒ１Ｌｔとなし、稀ＨＣｌでＰＨ７．
Ｏに調整し次に凍結乾燥して固体１８９ｍ９を得る。前
述したようにして得られた凍結乾燥した固体１８９ｍ９
をｎ−ブチルアルコールニ水（１：９９）に溶解する。
溶液２５ｍ１を、予めｎ−ブチルアルコールニ水て平衝
化したビオゲルＰ−２（２００〜４００メッシュ）のカ
ラム５Ｘ１０８αに適用する。次に、ゲルを６．７ｍＬ
／分でｎ−ブチルアルコールニ水で展関する。流出流れ
をメコーマテツ久レコーデング．ジフアレンシアル．リ
フラクトメーターで追跡する。前流５００ｍ１をとり次
で夫々２０ｍＬのフラクシヨンをとる。すべてのフラク
シヨンを１：２５の稀釈において抗菌活性について試験
する。生物学的活性度は、フラクシヨン３７〜４２（フ
ラクシヨン３９で最高）において観察される。全容量８
０ｍ１を有するフラクシヨン３８〜４１を合する。この
溶液をＰＨ７．Ｏにおいて濃縮して１．０ｍＬとなし次
に凍結乾燥する。凍結乾燥した固体１３．５ｍｇは、ス
タフイロコツカス．オーレウスデイスクー拡散試験によ
る比較を基にしてビオ−ゲルｐ−２カラムに充填した試
料の力価より約６倍高い相対的力価を有す。例４ストレ
プトマイセス．カトレヤの凍結乾燥培養物の管を無菌的
に開きそして内容物を次の組成を有する滅菌デービス．
ソルト０．８ｍ１に懸濁する。

デ゛−ビス．ソルト 拘樽酸ナトリウム
０．５ｙＫ２ＨＰ０４７．０ｙＫＨ２Ｐ０４３．０
ｆ１（ＮＨ４）２Ｓ０４１．０Ｉ１ＭｇＳ０４．７Ｈ２
００．１ｇ蒸溜Ｎ２ＯｌＯＯＯｍｌ二 この懸濁液を使用して次の組成を有する培地Ａ（十寒天
）の４本の斜面培養基に接種する。

培地Ａ 酵母自己分解物（アルダミン＊）１０．０ｑグ
ルコース １０．０ｑ２フォスフェー
ト緩衝液１＊ ２．０ｍ１ＭｇＳ０４．７Ｈ２００．
０５ダ 蒸溜Ｈ２ＯｌＯＯＯｍｌｐＨ ：ＮａＯＨを使用して６．５に調整する。

宋アルダミンニイースト．プロダクツ．コー３ポレーシ
ヨン来フォスフェート緩衝溶液 ＫＨ２ＰＯ４９ｌ．ＯｙＮａ２ＨＰＯ４９５．Ｏｙ蒸溜
Ｈ２ＯｌＯＯＯｍｌ３ 斜面培養基に対して：寒天２５．０ｆ／ｅを加える。

接種した斜面培養基２８℃で１週間培養し次に４℃に保
存する。培地ＡｌＯｍｌを１つの斜面培養基に無菌的に
入れ、胞子及ひ気中菌糸を懸濁液中にかきおとしそ４【
してこの懸濁液３．３ｍ１を使用して培地Ａ５ＯＯｍｔ
を含有する２ｅの阻板付三角フラスコに接種する。

この種子フラスコを１６０ｒ″Ｐｍ振盪機（スロー２″
″）上で２８゜Ｃで４８１１寺間振盪する。この時間に
おいて生長は満足である。この種子フラスコからの生長
物を使用して培地Ａｌ６Ｏｅのステンレススチール種子
タンクに接種する。

このタンクを１５０ｒ′Ｐｍ（７）攪拌速度及び１分当
り３立方フィートの空気流れを使用して２８℃で２橋間
操作する。脱泡剤ポリグリコール２０００（タウ．ケミ
カル．コーポレーション）を必要に応じて使用する（イ
）．１％を超えない量）。ＰＨ測定は次の通り。この種
子タンク中の生長物４３ｅを使用して次の組成を有する
培地Ｅ４６７ｅを含有する７５６ｅのステンレススチー
ル醗酵機に接種する。

培地Ｅ セロレーズ ２５．０ｑ玉蜀黍浸出液
（湿潤） １５．０ｙジスチラーズ．ソリユーブ
ルズ １０．０ｙ線実培地（フアルマメジア） ５．０
ダＣＯＣｌ２．６Ｈ２ＯＯ．ＯｌｙＣａＣＯ３（ＰＨ調
整後） ３．０ｙポリグリコール２００００
．２５％ 水道水 １０００ｍ１ｐＨ：
ＮａＯＨで７．３に調整する。

このタンクを９５ｒｐｍの攪拌速度及び１分当り１０立
フィートの空気流れを使用して２４゜Ｃで１２時間操作
する。

必要に応じて脱泡剤ポリグリコール２０００（０．１％
を超えない）を加える。抗菌試験を実施する。データー
は次の通りである。全体の醸酵液４００ｅを圧搾Ｐ過機
及びｐ過助剤を使用して？過する。

（エチレンジニトリロ）テトラ酢酸ナトリウム塩１．２
ｙを沖過に加える。？液を６酸Ｃに冷却し、ＰＨを４．
０±０．２に調整しそしてＢ６゜Ｃに保持する。冷却液
を４ｅ／分でダウエツクス５０×４Ｎａ＋（２０−５０
メッシュ）３８ｅ上に吸着させる。吸着物を脱イオン化
水４０ｅて洗滌する。吸着物を２％水性ピリジンで溶離
しそして夫々１９ｅのフラクシヨンを集めそして試験す
る。抗菌試験１は、溶離液フラクシヨン２及び３が適用
した活性度の２２％を含有していることを示す。これら
のフラクシヨンを合し、濃縮して３．８ｅとなし次にＰ
Ｈ７に調整する。前述したようにして得られた濃縮物３
．８′を、Ｊ２ＯＯｍｔ／分てダウエツクス１×２（５
０〜１００メッシュ）クロライドサイクル樹脂２．５ｅ
上に吸着させる。

この樹脂を同じ速度で脱イオン化水て溶離する。１ｅづ
つの１０のフラクシヨンを集めそして夫々のフラクシヨ
ンを必要に応じてＰＨ７．Ｏに調整；する。

試験は、生物学的活性度の７５％がフラクシヨン５〜８
にあることを示す。これらのフラクシヨンを合し次に０
．４５ミクロンのミリボアーを使用して枦過する。この
炉液３ｅを凍結乾燥して７弾位／Ｍｇの力価を有する固
体１６．６ｇを得る。前述したようにして得られた凍結
乾燥固体４ｇを、ＰＨ６．３の０．１Ｍ２．６−ルチジ
ンアセテート緩衝液５０ｍｔに入れる。溶液を酢酸の添
加によつてＰＨ６．３となしそして次のようにして製造
したダウエツクス５０×８カラムに適用する。ダウエツ
クス５０×８（２００〜４００メッシュ）水素サイクル
樹脂２．５ｅを２．６−ルチジンサイクルに変換する。

この樹脂を０．１Ｍ２．６−ルチジンアセテート緩衝液
（ＰＨ６．３）の５カラム容量で平衝化する。平衡化し
た樹脂床の寸法は、５×１１４ｃｒｎである。カラムは
、１４７７ＬＬ／分て０．１Ｍ緩衝液て展関する。流出
流れは、メコーマテツク．レコーデング．ジフアレンシ
アル．リフラクトメーターで追跡する。

展開は夫々２０ｍＬの２２０のフラクシヨンが集められ
るまて実施する。４４〜１４２のすべての他のフラクシ
ヨンを１：５０の稀釈で試験する。

生物学的活性度は、フラクシヨン７８〜１３６（フラク
シヨン９２〜９４で最高に達する。）に観察される。フ
ラクシヨン８２〜１１６を選択しそして合して溶液７０
０ｍ１を得る。この溶液を３５０ｍｔづつ２つに分割し
そして凍結乾燥する。凍結乾燥固体の一部分を０．１Ｍ
２．６−ルチジンアセテート緩衝液（ＰＨ７．Ｏ）に溶
解する。

この溶液２７Ｔｒｔｔを予め０．１Ｍ緩衝液で平衝化し
たビオ−ゲルｐ−２（２００〜４００メッシュ）のカラ
ム５×１０８ｃｍに適用する。次に、ゲルを１０ｍｔ／
分で同じ緩衝液で展関する。流出流れは、メコーマテツ
ク．レコーデング．ジフアレンシアル．リフラクトメー
ターで追跡する。

展開は、夫々２０ｍ１の１０５のフラクシヨンが集めら
れるまでつづける。５１〜９０のすべてのフラクシヨン
を１：５０の稀釈で試験する。

試験は、生物学的活性ピークがフラクシヨン６７〜７５
（フラクシヨン７０〜７１で最高）にあることを示す。
フラクシヨン６８〜７５を合して容量１６２ｍ１を得る
。合したフラクシヨン１４５ｍＬに３６０ｍＭ，ｐＨ７
．０のナトリウムフォスフェート緩衝液３７７１ｔを加
え次に溶液を濃縮して９ｍｔにする。ビオ−ゲルｐ−２
カラムに適用した全体の生物学的に活性な物質の７８％
を含有している濃縮物を凍結乾燥して１８５ｍ９を得る
。フラクシヨン６８〜７５の残りの１７ｍＬを凍結乾燥
して１０５０単位／Ｍｇの力価を有する固体１．９ｍ９
を得る。例５ストレプトマイセス●カトレヤの凍結乾燥
培養物の管を無菌的に開きそして内容物を次の組成を有
する滅菌デービス・ソルト０．８ｍ１に懸濁する。

デービス●ソルトノ 拘琳酸ナトリウム
０．５ｙＫ２ＨＰ０４７．０ｙＫＨ２Ｐ０
４３．０ｇ（ＮＨＯ２ＳＯ４ｌ．Ｏ９ＭｇＳＯ４・７Ｈ
２００．１ｙ５ 蒸溜Ｈ２ＯｌＯＯＯｍｌ この懸濁液を使用して次の組成を有する培地Ａ（十寒天
）の４本の斜面培養基に接種する。

培地Ａ 酵母自己分解物（アルダミン来）１０．０ｙ０
グルコース １０．０Ｖフォスフェー
ト緩衝液＊ ２．０ｍ１ＭｇＳ０４・７Ｈ２００．
０５ｑ 蒸溜Ｈ２ＯｌＯＯＯｍＬｐＨ ：ＮａＯＨを使用して６．５に調整する。

米アルダミンニイースト●プロダクツ．コーポ
レーシヨン木フォスフェート緩衝溶液 ＫＨ２ＰＯ４９ｌ．ＯｙＮａ２ＨＰＯ４９５．Ｏダ 蒸
溜Ｈ２ＯｌＯＯＯｍｌ 斜面培養基に対して：寒天２５．０ｙ／ｅを加える。

接種した斜面培養基を２８℃で１週間培養しそして４゜
Ｃで保存する。培地ＡｌＯｍｌを殺菌的に１つの斜面培
養基に移し、胞子及び気中菌糸を懸濁液中にかきおとし
次にこの懸濁液３．３ｍＬを使用して培地Ａ５ＯＯｍＬ
を含有する２ｅの阻板付三角フラスコに接種する。

この種子フラスコを１６０ｒｐｍ振盪機（スロー２″）
上で２８゜Ｃて４時間振盪する。この種子フラスコかり
の生長物を使用して培地Ａｌ６Ｏｅを含有する１９０ｅ
のステンレス・スチール種子タンクに接種する。

このタンクを１５０ｒｐｍの醋酵速度及び１分当り３立
方フィートの空気流れを使用して２８゜Ｃで２橢間操作
する。脱泡剤ポリグリコール２０００（タウ・ケミカル
・コーポレーション）を必要に応じて加え（０．１％を
超えない）。ＰＨ測定は次の通りである。この種子タン
ク中の生長物３５ｅを使用して次の組成を有する培地Ｅ
４６７ｆを含有する７５６ｅのステンレス・スチール醗
酵機に接種する。

培地Ｅ セレローズ ２５．０Ｖ 玉蜀黍浸出液（湿潤） １５．０ｙ ジスチラーズ・ソリユーブルズ１０．０ｙ線実培地（フ
アルマメジア） ５．０ノＣＯＣｌ２・６Ｈ２００．
０１ｙＣａＣ０，（ＣｐＨ調整後） ３．０
ｙポリグリコール２００００．２５％ 水道水 １０００ｍｔｐＨ：
ＮａＯＨを使用して７．３に調整する。

このタンクを９５ｒｐｍ（７）攪拌速度及び１分当り１
０立方フィートの空気流れを使用して２４℃で１２０時
・間操作する。脱胞剤ポリグリコールを必要に応じて加
える。（４）．１％を超えない）。抗菌試験を実施する
。データーは次の通りである。全体の醗酵液４００ｍ１
を圧搾Ｐ過機及び４Ｗ／Ｖ％の程度に混合した枦過助剤
を使用することにより？過する。

（エチレンジニトリロ）テトラ酢酸ナトリウム塩１．２
ｆを沖液に加える。戸液をＯ℃にノ冷却し、ＰＨを４．
０±０．２に調整しそして６℃に保持する。冷炉液を４
１）／分の速度でダウエツクス５０×４ＮＺ（２０−５
０メッシュ）３８ｅ上に吸着させる。吸着物を２％水性
ピリジンで溶離しそして夫々１９ｅの３つのフラクシヨ
ンを集めそして試験する。試験は、生物学活性度の２７
％が、フラクシヨン２及び３にあることを示す。溶離液
フラクシヨン２及び３を合し、３．７ｅに濃縮し次にＰ
Ｈ７に調整する。３．７ｅの溶離液濃縮液をＰＨ７．４
に調整し次に２００ｍ１／分でダウエツクス１×次了サ
イクル樹脂（５０〜１００メッシュ）２．５′上に吸着
させる。

次に、樹脂を同じ速度で脱イオン化水で溶離する。２×
２′、１×８００ｍ１、１×４ｆ及び１×２′フラクシ
ヨンを集め、必要に応じてＰＡを７．０に調整する。

濃縮物中に存在する活性度の５０％を含有するフラクシ
ヨン４（４ｅ）をミリボアー０．４５ミクロンＰ過機を
使用して泊過する。透明な炉液を凍結乾燥して２７０単
位／Ｍ９の力価を有する固体１２．４ｙを得る。凍結乾
燥した固体４ｙを０．１Ｍ２．６−ルチジンアセテート
緩衝液（ＰＨ６．３）に入れる。

酢酸の添加によつてＰＨ６．３にした溶液５０ｍ１を、
予め０．１Ｍ緩衝液て平衝化した寸法５×１１４Ｃｒｆ
Ｌを有するダウエツクス５０×８、２．６−ルチジンサ
イクル樹脂（２００〜４００メッシュ）のカラムに適用
する。次に樹脂を１４ｍ１／分で同じ０．１Ｍ緩衝液（
ＰＨ６．３）て展関する。流出流水は、メコーマチツク
・レコーデング・ジフアレンシアル●リフラクトメータ
ーで追跡する。

展開は、夫々２０ｍｔの１５０のフラクシヨンが集めら
れるまで実施する。７２〜１５０からのすべての他のフ
ラクシヨンを１：５０の稀釈で試験する。

フラクシヨン７６〜１４８での生物学的に活性なピーク
（フラクシヨン９２〜１０２が最高）が観察される。フ
１ラクシヨン８６〜１１３を合して溶液５８０ｍ１を得
る。この溶液は、ダウエツクス５０×８カラムに適用し
た生物学的活性度の７１％を含有している。次にこの溶
液を凍結乾燥する。得られた凍結乾燥固体をＰＨ７．Ｏ
（７）０．１Ｍ２．６−ルチジンアセテート緩衝液にと
かして２５ｍＬにする。

この溶液を、予め０．１Ｍ緩衝液で平衝化したビオ−ゲ
ルＰ−２（２００〜４００メッシュ）５×１０８ｃｒｎ
の床に適用する。次にゲルを９ｍ１／分で同じ緩衝液で
展関する。流出流れは、メコーマチツク・レコー；デン
グ●ジフアレンシアル●リフラクトメーターて追跡する
。展開は、夫々２０ｍ１の１０５のフラクシヨンが集め
られるまでつづける。すべてのフラクシヨン６５〜８０
を１：２００の稀釈で試験する。生物学的に活性なピー
クは、フラクシヨン６７〜７６にお−いて観察される。
フラクシヨン７０〜７２を合しそして凍結乾燥して１３
８００単位／Ｍ９の力価を有する１６．０ｍｇを得る。
フラクシヨン６９，７３及び７４を合しそして凍結乾燥
して５２００Ｊｊ／Ｌ位／Ｍｇの力価を有する２０．２
ｍｇを得る。凍結乾燥した固体１６ｍ９をＰＨ７．Ｏの
０．１Ｍ２．６−ルチジンアセテート緩衝液にとかして
１０ｍｔにする。

この溶液を、予め同じ緩衝液で平衝化したビオ−ゲルＰ
−２（２００〜４００メッシュ）５×１０８ｃｍの床に
適用する。ゲルを９ｍＬ／分の速度て緩衝剤で展関する
。流出流れは、メコーマテツク・レコーデング・ジフア
レンシアル・リフラクトメーターで追跡する。展開は、
夫々２０ｍ１の１０５のフラクシヨンが集められるまで
つづける。すべてのフラクシヨン６５〜８０を１：２０
０の稀釈て試験する。生物学的に活性なピークは、フラ
クシヨン６７〜７５において観察される。フラクシヨン
６８〜７２を合しそして凍結乾燥して、１５００嘩位／
Ｍｇの力価を有する９．１ｍｇを得る。例６ ストレプトマイセス●カトレヤの凍結乾燥培養物の管を
無菌的に開きそして内容物を２５０ｍｔの阻板付三角フ
ラスコ中に含有されている滅菌培地Ａ５Ｏｍｌに懸濁さ
せる。

培地Ａは次の組成を有す。培地Ａ酵母自已分解物（アル
ダミン木）１０．０ｙグルコース
１０．０ｙフォスフェート緩衝液＊ ２．０ｍ
１ＭｇＳ０４・７Ｈ２００．０５ｙ蒸溜Ｈ２ＯｌＯＯＯ
ｍｌｐＨ ：ＮａＯＨを使用して６．５に調整する。

米アルダミンニイースト●プロダクツ●コーポ
レーシヨン＊来フォスフェート緩衝溶液 ＫＨ２ＰＯ４９ｌ．ＯｙＮａ ？ＨＰＯ４９５．Ｏｙ 蒸溜水 １０００ｍ１接種したフラ
スコを２２０ｒｐｍ（スローゴ）で２８゜Ｃで詔時間振
盪する。

４時の醗酵液４０ｍＬを無菌的に取出し次に滅菌の２０
％（Ｖ／Ｖ）グリセロール／水４０ｍ１と混合する。

得られた混合物２ｍＬをピペットで１ドラムガラスびん
に入れ、これを凍結し次に液状窒素フリーザーの気相中
に保存する。凍結したガラスひん内容物を使用して培地
Ａ５ＯＴｎｔを含有する２５０ｍ１の阻板付三角フラス
コに接種する。この種子フラスコを１６０ｒ′Ｐｍの振
盪機上で２８゜Ｃでｕ時間振盪する。この種子フラスコ
からの１０ｍｔを使用して培地Ａ５ＯＯｍｌを含有する
２ｅの阻板付三角フラスコに接種する。

これらの種子フラスコを１６０ｒｐｍ振盪機上で２８゜
Ｃで２ｇＩ１間振盪する。これらの種子フラスコの集め
た内容物１００ｍ１を使用して培地Ａ４６７ｅを含有す
る７５６ｅのステンレ・ス・スチール醗酵機に接種する
。

このタンクを１３０ｒ′Ｐｍの攪拌速度及び１分当り１
０立方フィートの空気流れを使用して２８゜Ｃで２＠間
操作する。ポリグリコール２０００（タウ・ケミカル・
コーポレーション）を必要に応じて脱泡剤として使用す
る）（４）．１％を超えない量で）。ＰＨ及びデキスト
ローズの測定結果は次の通り。この生長物１５３ｅを使
用して次の組成を有する培地Ｅ４Ｏ８２ｌを含有する５
６７０ｅのステンレス・スチール酉偕膵機に接種する。

培地Ｅ セレローズ２５．０ｙ 玉蜀黍浸出液（湿潤）１５．０ｇ ジスチラーズ・ソリユーブルズ１０．０ダ線実培地（フ
アルマメジア）５．０９ Ｃ０ＣＩ，・６Ｈ２００．０１ｆＣａ Ｃ０３（ＰＨ調整後）３．０ダ ポリグリコール２００００．２５冑 水道水１０００ｍｊ ｐＨ：ＮａＯＨを使用して７．３に調整する。

このタンクを７０ｒｐｍ（７）攪拌速度及び１分当り５
４．３立方フィートの空気流れを使用して２４゜Ｃで１
４４時間操作する。脱泡剤ポリグリコール２０００苓必
要に応じて加える（０．１％を超えない量）。試験゛を
遠心処理液の上澄液を使用して行う。結果は“ＡＴＣＣ
６５３８Ｐに対する抗菌活性度“としては以下の表に示
す通りである。試験は、また３１８！］寸の枦紙ディス
ク及び１０ｍ１の試験プレートを使用するディスクー拡
散法によつて試験するそして結果は“抗菌活性度（１０
ｍ１プレート）〃として以下の表に示す通りである。１
０ｍ１の試験プレートは次のようにして製造される。

栄養プロス＋０．２％酵母工キズ中の試験菌スタフイロ
コツカス争オーレウスＡＴＣＣ６５３８Ｐの一夜生長物
を栄養プロス＋０．２％酵母工キズでうすめて６６０Ｔ
ｗｔの波長で４０％の透過率を有する懸濁液を得る。こ
の懸濁液を、ジフコ酵母工キズ２．０ｇ／ｒで補足した
ジフコ栄養寒天に加えて寒天１１当り懸濁液３３．２ｍ
Ｌを含有する組成物を得る。この懸濁液１０ｍ１を直径
８５Ｔ！ＲＩｒＬのペトリープレートに注加し、このプ
レートを冷却しそして使用するまで（最高５日）４゜Ｃ
で保持する。醗酵液４．０８２１を３印寸の圧搾ろ過機
及び４Ｗ／Ｖ％の程度に混合したろ過助剤を使用してろ
過する。（エチレンジニトリロ）テトラ酢酸＋ナトリウ
ム塩１２ダを戸液に加える。胛液を６゜Ｃに冷却し、Ｐ
Ｈを４．５士０．２に調整し次に６Ｃｃに保持する。冷
戸液を約４８１／分でタウエツクス５０×４ＮＺ（２０
−５０メッシュ）４８０ｆ上に吸着させる。吸着物を脱
イオン化水４８０ｅて洗滌し次に２４ｅ／分で２％水性
ピリジンて溶離し次に３００１、５２０１及ひ２４０１
の３つのフラクシヨンを集めそしてＰＨ７．Ｏで試験す
る。試験は、溶離液フラクシヨンが夫々ダウエツクス５
０×４Ｎａ＋カラム上に適用した生物学的活性度の４％
、１６％及び６％を含有していることを示す。溶離液フ
ラクシヨン２を濃縮して４８ｆとなし次にＰＨ７に調整
する。濃縮液４８１をＰＨ７．３に調整し次に７．６１
／分でダウエツクス１Ｘ２（５０〜１００メッシュ）ク
ロライドサイクル樹脂７６ｅ上に吸着させる。

樹脂を同速度で脱イオン化水で溶離する。４ｆ２フラク
シヨン、７０ｅ１フラクシヨン及び４８ｅ１フラクシヨ
ンの４つのフラクシヨンを集める。

各フラクシヨンをＰＨ７に調整する。試験は、出発生活
性度の６８％が、７０′のフラクシヨンになることを示
す。このフラクシヨンをＰＨ７．Ｏで濃縮して１８ｅに
し次に０．４５ミクロンのミリボアーろ過機を使用して
ろ過する。戸液を凍結乾燥して３１弾位／Ｍ９の力価を
有する生成物９９ｙを得る。凍結乾燥した固体１０ｙを
ＰＨ６．３の０．１Ｍ２．６−ルチジンアセテート緩衝
液に加加える。

酢酸でＰＨ６．３に再調整した溶液１２５ｍ１を、予め
緩衝液で平衝化した２．６−ルチジンサイクルのダウエ
ツクス５０×８（２００〜４００メッシュ）のカラム７
．６×１４２αに適用し次に２５ＴＬ１／分て０．１Ｍ
緩衝液で展関する。前流３ｅを集め次て夫々２０ｍ１の
２００のフラクシヨンを集める。すべてのフラクシヨン
３６〜１９２を１：２００の稀釈で試験する。生物学的
活性度はフラクシヨン５６〜１９２に含有されていて、
フラクシヨン９２〜９６て最高に達する。フラクシヨン
８０〜１３６を合しそして脱イオン化水５９０ｍＬを加
えて１７６０ｍ１を得る。ダウコツクス５０×８カラム
に適用した出発生物学的活性度の６２％を含有する集め
た稀釈溶液を凍結乾燥する。凍結乾燥した固体をＰＨ７
．Ｏ（７）０．１Ｍ２．６−ルチジンアセテート緩衝液
に溶解する。

溶液２７ｍ１を予め０．１Ｍ緩衝液で平衝化したビオ−
ゲルＰ−２（２００〜４００メッシュ）のカラム５×１
１２ｃｍに適用する。次に、ゲルを１０ｍＬ／分で同緩
衝液で展関する。流出流れは、メコーマテツク・レコー
デング・ジフアレンシアル●リフラクトメーターで追跡
する。展開は、夫々２０ｍ１の１０５のフラクシヨンが
集められるまでつづける。すべてのフラクシヨン７０〜
９３を１：３００の稀釈て試験する。生物学的活性はフ
ラクシヨン７３〜８２に見出され、フラクシヨン７７及
ひ７８て最高に達する。フラクシヨン７５〜８０を凍結
乾燥して１０００弾位／Ｍ９の平均力価を有する抗生物
質９０ｍｇを得る。凍結乾燥した固体９０ｍｇをＰＨ７
の０．０１Ｍ燐酸カリウム緩衝液４ｍ１に入れる。

５９６のヒドロキシルアミンー消減光学的密度単位（チ
エマイシン含量のこの測定はこの例の終りに説明する。

）を含有するこの溶液を、予備洗滌しそして使用前に５
℃でＰＨ７の０．０１Ｍ燐酸カリウム緩衝液１８０ｍ１
で平衝化したＸＡＤ−２の９０ｍ１で充填した直径１．
７ｃｗ１のカラムに適用する。ＸＡＤ−２は使用前に順
次に（１）ＩＮＮａＯＨ熔量次て流出液が中性になるま
で脱イオン化１１２０で、（２）ＩＮＨｃｌ熔量次て流
出液が中性になるまて脱イオン化Ｈ２Ｏで、（３）夫々
５容量のメタノール、アセトン、０．００１ＭＥＤＴＡ
テトラナトリウムそして最後に脱イオン化Ｈ２Ｏで洗滌
する。使用前に、真空をすべての溶剤に適用する。試料
をカラム上に適用した後に、フォスフェート緩衝液２ｍ
１づつで２回処理する。

カラムを２ＴＩＬＬ／分の流速で５゜Ｃて緩衝液で展関
する。溶離液４ｍ１づつのフラクシヨンを集める。溶離
液１００ｍ１を集めた後に得られそして、２５３ｍＬで
終るフラクシヨンを合しそして回転蒸発器上で真空下及
び１００Ｃ以下て濃縮して６ｍＬにする。４３６のヒド
ロキシルアミンー消減光学的密度単位を含有するこの溶
液を、前述したように予備洗滌しそして蒸溜水で５℃て
平衝化したＸ，ＡＤ−２の９０ｍｔで充填した直径１．
７ｃｍのカラムに適用する。

試料を蒸溜水２ｍＬづつで２回処理する。カラムを２ｍ
１／分の速度で蒸溜水で展関する。溶離液４ｍ１づつの
フラクシヨンを集める。溶離液１００ｍ１を集めた後そ
して１５１ｍ１で終るフラクシヨンを合しそして回転蒸
発器上で濃縮して２．７３ｍｔにする。そして溶液を凍
結乾燥してチエマイシン６．４９ｍｇを得る。１５２〜
３４５ｍＬの間で得られたフラクシヨンを集めそして回
転蒸発器上て濃縮して３．３４ｍＬとなし次に凍結乾燥
して抗生物質１１．５３ＴｒＬ９を得る。

これらのフラクシヨンは、全体て３６９のヒドロキシル
アミンー消減光学的密度単位を含有する。これは、はじ
めのＸＡＤ−２カラムに適用した物質の３．１培の精製
度を示しそして３１００弾位／Ｍ９の計算力価を与える
。この生成物の試料の分光測光的分析は、２９７ｎｍて
ＰＨ７のフォスフェート緩衝液中て測定した場合、Ｅ（
％−２５３を示す。ヒドロキシルアミンー消滅吸光度（
ＨｙｄｒＯｘｙ−１ａＭｉｎｅ上Ｘｔｉｎｇｕｊｓｈａ
ｂｌｅ．ＡｂｓＯｒｂａｎｃｅ）不純な試料中の抗生物
質含量に帰因する２９７ｎｍで測定した吸光度の割合は
、稀ヒドロキシルアミンと反応によるこの吸光度の選択
的消滅（抗菌活性の付随的不活性化）によつて測定され
る。

０．０５〜２．０の間の初期Ａ２９７を有するようにＰ
Ｈ７．Ｏの０．０１Ｍ燐酸カリウム緩衝液中で試料を製
造する。

新らく製造した中性のヒドロキシルアミン（ＮＨ２ＯＨ
−Ｈｃｌ＋最終ＰＨを７にするＮａＯＨ）を１０ｒＴ１
Ｍの最終濃度になるように加えそして室温で少なくとも
３吟反応を進行させる。初期の読みから引いたときに得
られたＡ２９７（添加試薬により稀釈に対して補正した
後）が、ヒドロキシルアミンー消滅吸光度を与える。純
粋なチエナマイシンの溶液は９４．５％のヒドロキシル
アミンー消滅吸光度を示す。例７ 例６におけるダウエツクス１×２精製により得られた凍
結乾燥固体９９ｙの一部１０ｙを、ＰＨ６．３の０．１
Ｍ２．６−ルチジンアセテート緩衝液に入れる。

酢酸てＰＨ６．３に再調整した溶液１２５ｍｔを、予め
緩衝液で平衝化した２．６−ルチジンサイクルのダウエ
ツクス５０×８の７．６×１４２ｃｍカラムに適用する
。カラムを３５ｍＬ／分で０．１Ｍ緩衝液で展関する。
前流３．６ｅを集め次て夫々２．０ｍ１の２００のフラ
クシヨンを集める。すべてのフラクシヨン６〜１９．４
を１：２００の稀釈で試験する。生物学的活性度は、フ
ラクシヨン１８〜１７８に含有されておりそしてフラク
シヨン６２〜８２において最高に達する。フラクシヨン
４２〜１０２を合しそして脱イオン化水６４０ｍ１を加
えて１９２０ｍＬにする。タウエツクス５０×８カラム
に適用した生物学的活性度の６３％を含有する集めた稀
増釈溶液を凍結乾燥する。凍結乾燥固体をＰＨ７．Ｏの
０．１Ｍ２．６−ルチジンアセテート緩衝液に溶解する
。

溶液２５ｍ１を、予め０．１Ｍ緩衝液で平衝化したビオ
−ゲルＰ−２（２００〜４００メッシュ）の５×１１２
ｃＴｎカラムに適用する。次にゲルを１０ｍＬ／分で同
じ緩衝剤で展関する。流出液をメコーマテツク・レコー
デング・ジフアレンシアル・リフラクトメーターで追跡
する。展開は、夫々２０ｍ１の１２５のフラクシヨンが
集められるまでつづける。すべてのフラクシヨン７０〜
８９を１：３００の稀釈て試験する。生物学的活性度は
、フラクシヨン７２〜８１に見出されそしてフラクシヨ
ン７７で最高に達する。フラクシヨン７５〜７９を−凍
結乾燥して８３２師位／Ｍ９の力価を有する抗生物質１
００．５ｍｇを得る。凍結乾燥した固体１００．５ｍｇ
をＰＨ７の０．０１Ｍ燐酸カリウム緩衝液４ｍ１に入れ
る。

６９２のヒドロキシルアミンー消減光学的単位を有する
この溶液を、使用前に５℃でＰＨ７の０．０１Ｍ燐酸カ
リウム緩衝液１８０ｍｔで平衝化した予備洗滌ＸＡＤ−
２９０ｍ１で充填した１．７ＣＴｆＬの直径のカラムに
適用する。

ＸＡＤ−２は使用前に順次に（１）ＩＮＮａＯＨ５容量
次いで流出液が中性となるまて脱イオン化Ｈ２Ｏで、（
２）ＩＮＨｃｌ５容量次で流出液が中性となるままで脱
イオン化Ｈ２Ｏで、（３）夫々５容量のメタノール、ア
セトン、０．００１ＭＥ−ＤＴＡテトラナトリウムそし
て最・後に脱イオン化Ｈ２Ｏて洗滌する。使用前にすべ
ての溶剤真空をする。試料をカラム上に適用した後にそ
れをフォスフェート緩衝液２ｍ１づつで２回処理する。

カラムを２ｍ１／分の流出速度で緩衝液で５゜Ｃで展関
する。溶離液４ｍ１づつを集める。溶離液１０９ｍ１を
集めた後そして３０９ｍ１で終るフラクシヨンを合する
。この合した溶離液に、１８６のヒドロキシルアミンー
消減光学的密度単位を有する例６て得られたＸＡＤ−２
精製抗生物質の試料１１．５３ｍ９を加える。”添加し
た抗生物質と共に合した溶離液を１０℃以下の温度て回
転蒸発機上で真空濃縮して７ｍ１を得る。７２０のヒド
ロキシルアミンー消減光学的密度単位を含有するこの溶
液を前述したように洗滌しそして使用前に蒸溜水で５゜
Ｃで平衝化したＸＡＤ−２９０ｍ１て充填した１．７Ｃ
７！の直径のカラム上に適用する。

この試料を蒸溜水２ｍＬづつで２回処理する。カラムを
２ｍＬ／分の速度で蒸溜水で展関する。溶離液４ｍ１づ
つのフラクシヨンを集める。溶離液１０９ｍ１を集めた
後そして３０１ｍ１で終るフラクシヨンを集めそして回
転蒸発機上て濃縮して１０３ｍ１にする。５８９のヒド
ロキシルアミンー消減光学的密度単位を含有するこの溶
液を凍結乾燥して３０１４弾位／Ｍ９の計算力価を有す
る抗生物質２３．６ｍ９を得る。

このようにして得られた抗生物質は、繊維様のコンシス
テンシー（ＣＯｒｌｓｉｓｔｅｎｃｙ）を有する白色の
無定形の固体である。

１分当り３℃の速度で上昇する温度にさらしたガラス毛
細管中の試料は、次の段階で液相の介在などに分解する
。

１３０〜１４０℃て軟化が起りそして１７０〜１７４。

Ｃまで固体の容量の収縮がつづき、物質は黄色化する。
１８０〜２０００Ｃの範囲において焼結しそして色が赤
色味を帯ひた褐色に漸次増す。そして最後に２０５゜Ｃ
で炭化しそして固体の残留微量が見出される。この物質
の試料は、分光測光的分析に対して２９６．５ｎｍでＥ
）％＝２６８．２の吸収ピークを示す。元素分析値は次
の結果を与える。（１）真空下室温で４時間乾燥すると
５．６７％の重量を損失する。（２）炭素４７．６８％
、水素５６．２２％、窒素１１．４８％の組成を示す。
これらの結果は、実験式ＣｌｌＨｌ６Ｎ２ＢＯ４Ｓ・
（ＮＨ３）。．２８と一致する。この実験式に相当する
計算元素組成は、Ｃ＝４７．６８％、Ｈ６．ｌ３％、Ｎ
＝１１．５２％、Ｓ＝１１．５７％及びＯ＝２３．１％
である。１０ｍＭ燐酸カリウム緩衝１液中のこの試料の
１７Ｆ１９／Ｍｔ溶液の偏光分析は、特異的光学的旋光
度〔α〕ｒ′Ｃ＋８０を示す。

この試料のヌジヨールマルの赤外線スペクトル（第１図
）は１７６５ｃｍ−１、１６５０〜１５５０ｃ『１、２
８００〜２５００ｃｍ一１及ひ３５００〜３１００ｃｍ
−１で特有の吸収ピークを示１す。Ｄ２Ｏに溶解したこ
の生成物の試料の１００ＭＨ２におけるＮＭＲスペクト
ルは、δ１２７５でタブレット、δ３．３３９で１対の
タブレットそしてδ３．１５及びδ４．２０でマルチプ
レツトを示す。これらのピークはチエナマイシンの特長
である。 ２本発明に適合するチエナマイシ
ンの単離及び精製に対する前記説明からの何れの逸脱も
、特許請求の範囲に包含すべく在図するものである。次
に本発明の実施態様を列記する。（１）特許請求の範囲
第１項記載の方法。（２）特許請求の範囲第２項記載の
方法。

（３）特許請求の範囲第３項記載の方法。

（４）特許請求の範囲第４項記載の方法。

（５）ポリスチレン疎水性交叉結合ジビニルベンゼン重
合体をフォスフェート緩衝液で溶離し、溶．離液を集め
、活性フラクシヨンを合し、この活性フラクシヨンをポ
リスチレン疎水性交叉結合ジビニルベンゼン重合体で充
填したカラム上に吸着させ、この重合体を水で溶離し、
溶離液を集め次に活性フラクシヨンを合することからな
る第４項の方法。

（６）チエナマイシン及び無機イオンを含有する溶液を
ポリスチレン樹脂ＸＡＤ−２て充填したカラム上に吸着
させ、この重合体を水で溶離し、溶離液を集め次に活性
フラクシヨンを合することを特徴とする無機イオンを含
有していない抗生物質チエナマイシンを採取する方法。

（７）更にポリアクリルアシドまたはデキストランゲル
から溶離した活性フラクシヨンを少なくとも１回ポリス
チレン疎水性交叉結合ジビニルベンゼン重合体で充填し
たカラムに通し、フォスフェート緩衝液または水で溶離
し、溶離液を集め次に活性フラクシヨンを合することか
らなる第３項の方法。（８）陽イオン交換樹脂がスチレ
ンージビニルベンゼン母体に結合したナトリウムサイク
ルのスルフォン交換基からなる第１項の方法。

（９）陽イオン交換樹脂がスチレンージビニルベンゼン
母体に結合したナトリウムサイクルのスルフォン交換基
からなる第２項の方法。

（１ａ）陽イオン交換樹脂がスチレンージビニルベンゼ
ン母体に結合したナトリウムサイクルのスルフォン交換
基からなる第３項の方法。

（１１）陰イオン交換樹脂がスチレンージビニルベンゼ
ン重合体母体に結合したクロライドサイクルの第４級ア
ンモニウム交換基からなる第２項の方法。

（１２）ポリアクリルアミドゲルをｎ−ブタノールニ水
（１：９９）て溶離する第１項の方法。

（１３）陽イオン交換樹脂て充填したカラムをピリジン
、α，β，γ−ピコリン，２．３−，２．４一及び２．
６−ルチジン，２．４．６−コリジン及びアルキル基が
２〜Ｗ個の炭素原子を含有するアルキルアミンからなる
群から選択された有機塩基の水溶液て溶離する第１項の
方法。（１４）緩衝剤がトリス（ヒドロキシメチル）ア
ミノメタンマレエート、カコジル酸、ＫＨ２ＰＯ４、Ｎ
−エチルモルフオリン、α−、β−またはγーピコリン
及び２．３−、２．４一及び２．６−ルチジンからなる
群から選択されたものである第３項の方法。

（１５）ポリスチレン疎水性交叉結合ジビニルベンゼン
重合体で充填したカラムを中性ＰＨのフォスフェート緩
衝液で溶離する第７項の方法。

（１６）実質的に前述したような幾つかの見地における
発明。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の抗生物質チエナマイシンの赤外スペク
トル図である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 抗生物質チエナマイシンを含有する醗酵液または溶
   液を、スルフォン酸交換基を含有する陽イオン交換樹脂
   を充填したカラムに通し；樹脂への吸着質を塩基で溶離
   し；溶離液を集め；活性フラクシヨンを合し；次に合し
   たフラクシヨンを、夫々１８００及び７００より大なる
   分子量を有する分子を排除するポリアクリルアミドまた
   はデキストランゲルを充填したカラムに通し；このゲル
   を水でまたは低級アルコールの水溶液で溶離し；溶離液
   を集め次に活性フラクシヨンを合することを特徴とする
   、チエナマイシン抗生物質を含有する醗酵液または溶液
   から抗生物質チエナマイシンを採取する方法。 ２ 抗生物質チエナマイシンを含有する醗酵液または溶
   液を、スルフォン酸交換基を含有する陽イオン交換樹脂
   を充填したカラムに通し；樹脂への吸着質を塩基で溶離
   し、溶離液を集め；活性フラクシヨンを合し；陽イオン
   交換樹脂から溶離した活性フラクションを、ポリスチレ
   ン−第４級アンモニウム型の陰イオン交換樹脂を充填し
   たカラムに通し；流出液を集め；この流出液を夫々１８
   ００及び７００より大なる分子量を有する分子を排除す
   るポリアクリルアミドまたはデキストランゲルを充填し
   たカラムに通し；水または低級アルコールの水溶液でゲ
   ルを溶離し；溶離液を集め次に活性フラクシヨンを合す
   ることを特徴とするチエナマイシン抗生物質を含有する
   醗酵液または溶液から抗生物質チエナマイシンを採取す
   る方法。 ３ 抗生物質チエナマイシンを含有する醗酵液または溶
   液を、スルフォン酸交換基を含有する陽イオン交換樹脂
   を充填したカラムに通し；樹脂への吸着質を塩基で溶離
   し；溶離液を集め；活性フラクシヨンを合し、陽イオン
   交換樹脂から溶離した活性フラクシヨンを、ポリスチレ
   ン−第４級アンモニウム型の陰イオン交換樹脂を充填し
   たカラムに通し；流出液を集め；この流出液を、核置換
   スルフォン酸交換基を含有する陽イオン交換樹脂を充填
   したカラムに通し；この樹脂への吸着質を緩衝液または
   水で溶離し；活性フラクシヨンを合し；この活性フラク
   シヨンを、夫々１８００及び７００より大なる分子量を
   有する分子を排除するポリアクリルアミドまたはデキス
   トランゲルを充填したカラムに通し；このゲルを水また
   は低級アルコールの水溶液で溶離し；溶離液を集め；活
   性フラクシヨンを合し；このフラクシヨンを濃縮し；濃
   縮物を、ポリスチレン疎水性交叉結合ジビニルベンゼン
   重合体を充填したカラム上に吸着させ；この重合体を水
   で溶離し；溶離液を集め次に活性フラクシヨンを合する
   ことを特徴とするチエナマイシン抗生物質を含有する醗
   酵液または溶液から抗生物質チエナマイシンを採取する
   方法。 ４ 抗生物質チエナマイシンを含有する醗酵液または溶
   液を、スルフォン酸交換基を含有する陽イオン交換樹脂
   を充填したカラムに通し；樹脂吸着質を塩基で溶離し；
   溶離液を集め；活性フラクシヨンを合し、陽イオン交換
   樹脂から溶離した活性フラクシヨンを、ポリスチレン−
   第４級アンモニウム型の陰イオン交換樹脂を充填したカ
   ラムに通し；流出液を濃縮し；濃縮した流出液を、ポリ
   スチレン疎水性交叉結合ジビニルベンゼン重合体を充填
   したカラム上に吸着させ；この重合体を水で溶離し；溶
   離液を集め次に活性フラクシヨンを合することを特徴と
   する抗生物質チエナマイシンを含有する醗酵液または溶
   液から抗生物質チエナマイシンを採用する方法。