SU707925A1 - Способ выделени и очистки декстраназы - Google Patents

Description

Предлагаемый способ относитс  к ферментной области лдакробиологической промышленности, он может быть использован в производстве и очистк ферментов, полученных из микроорганизмов . По этому способу осущестйл  с  выделение и очистка фермента дек раназы при глубинном культивировании микробных продуцентов, в частности , грибов рода Peniciliium или Fusarium с использованием приемов солевого осаждени  фермента и адсорбции его на алюмосиликатных глинистых минералах. Минеральные сорбенты широко используют дл  очистки ферментов. ;Известен способ 1, согласно кото:рому декстраназу сорбируют из исходного раствора культуральной жидкости на глине при рН 4,0-5,0 и десорбируют при рН 7-9. Затем добав л ют анионит ДЭАЭ-целлкшозы к попученному раствору фермента,при этом фермент св зываетс  с анионитом, после чего провод т элюирование фермента с ионита. В качестве глин-сорбентов, декстр назы примен ют каол«н/ получа  наилучшие результаты, атакже фулерову землю, флоридин, бентонит и другие . Основньлии недостатками известного способа очистки фермента  вл ютс  многостадийность-и трудность реализации способа в услови х крупномасштабного производства вследствие использовани  дорогосто щих анионитов на полисахаридной основе, а также наличи  стадии обессоливани  раствора фермента после элюировани  с ДЭАЭ-целлюлоэы, Кроме того, по известному способу не проводитс  предварительна  обработка глины с целью повышени  ее адсорбционной способности, нет сведений о степени очистки ферментного препарата от углеводных примесей. Цель изобретени  повышение степени чистоты фермента, а также упрощение .технологического процесса его получени . Цель достигаетс  тем, что перед сорбцией фермент осаждают из культуральной жидкости сульфатом аммони , полученный осадок раствор ют в воде или буфере, а сорбцию ведут при предварительно активированном минеральном сорбенте.

Дт1Я активировани  сорбента бьти и спытаны разные спосюбы: 1) обработка 3 объемами концентрированной сол ной кислоты в течение 2-3 ч при комнатной температуре с последующей промывкой глины водой и центрифугированием дл  отделени  глины от

жидкости; 2) прогрев сухого порошка аскангел  в сушильном шкафу при в течение 4-5 ч.

Сравнительные данные о вли нии способа обработки глины на результаты сорбции и десорбции приведены в табл.1.

Таблица 1

24600

49

Элюат (после десорбции)

25400

51

Примечание. Концентраци  аскангел  1%.

Из. табл.1 видно, что без активировани  глины выход фермента после десорбции составл ет только 51%, при активировании - повышаетс  до 80% 30 и более.,

Ферментные препараты, подвергавшиес  предварительной очистке путем осаждени  сульфатом аммони , содержат достаточно высокие концентрации этой 35 соли, отделение которых в лабораторных услови х может быть осуществлено диализом или гель-фильтрацией. В про- изводстве эти приемы привод т к значи«

Исходна  бесклеточна  культурсшьнад жидкость

Раствор, полученный по предлагаемому способу, посСпособ может найти применение при npOMtjiJineHHOM производстве высокоочищенных ферментов декстраназы медицинского назначени .

8000

18

26

3200

82

35500

90000

74

тельному удорожанию получаемого продукта . Однако оказалось, что присутствие сульфата аммони  в растворе

декстраназы не мешает сорбции этого фермента на глине, что позволило исключить промежуточную стадию обессоливани  раствора фермента после его фракционировани  сульфатом аммони .

В табл.2 приведена характеристика эффективности предлагаемого способа очистки декстраназы от примесей.

Т а б л и ц а 2

100

65

940

9900

Пример. Посевной материал гриба Penicillium funiculosum шт.15 выращивают 3 сут, на питательной среде (0,8% декстрана, 0,08% , 0,1%

Claims (3)

1. Формула изобретения

   1. Способ выделения и очистки декстраназы из культуральной жидкости плесневых грибов, предусматривающий сорбцию фермента на минеральном сорбенте при pH 4,0-5,0 и десорбцию его с минерального сорбента при pH 7,0-9,0, отличающийся тем, что, с целью повышения степени чистоты препарата и упрощения технологического процесса его получения, перед сорбцией фермент осаждают из культуральной жидкости сульфатом аммония, полученный осадок раство'ряют в воде или буфере, а сорбцию ведут на.предварительно активированном минеральном сорбенте,
2. 2. Способ поп.1, отличающий с я тем, что в качестве минерального сорбента используют аскангель .
3. 3. Способ по пп. 1и2, отли- , чающийся тем, что минеральный сорбент активируют концентрированной соляной кислотой или термообработкой.