JPS6045521A - インタ−フェロン誘導剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 １０発明の背景 技術分野 本発明はインターフェロン誘導剤に関するものであり、
さらに詳しくは多糖体Ｎ９Ｇ　ｌからなるインターフェ
ロン誘導剤に関するものである。

インターフェロン誘導剤は生体に投与されて抗ウィルス
作用を有するインターフェロン（ウィルス抑制因子）の
産生を誘発するものであり、ウィルス感染症の予防や治
療に使用される。

先行技術 インターフェロン誘導剤として従来Ｐｏ１ｙ　Ｉ　：　
Ｃ。

コンカナバリンＡ、二重鎖ＲＮＡ　、ピラン共重合体等
の陰イオン性高分子等が知られている。しかし、これら
のインターフェロン誘導剤は、効力や毒性ならびに価格
の面から医薬として必ずしも満足のいくものではなく、
さらに優れたインターンエロン誘導剤の出現が望まれて
いる。

■１発明の目的 本発明は生体に投与された場合にインターフェロン産生
の誘発効果が大きく、かつ毒性の低いインターフェロン
誘導剤を提供することを目的とする。

かかる目的を達成するため、本発明は多糖体Ｎ９ＧＩか
らなるインターフェロン誘導体よシなる。

ここに多糖体Ｎ９ＧＩは下記の物理化学的特性を有する
。

（イ）色と形状 凍結乾・廃品は白色まだは淡黄褐色粉末である。

（ロ）赤外線吸収スペクトル ＩＲＶＫＢｒｃｗｉ−１：　３４００．２９２０，１６
３０．１４００゜１３６０．１１５０，１０７０，１０
３０，９２０，８４００う　紫外線吸収ス被りトル 水溶液中の測定で吸収極大を示さず末端吸収のみを示す
。

（→　溶解性 水に可溶でメタノール、エタノール、アセトン、エーテ
ル、クロロホルム、酢酸エチル、ベンゼンおよびヘキサ
ン等の有機溶媒に不溶である。

０）　呈色反応 フェノール硫酸反応、アンスロン硫酸反応に陽性でヨウ
素の添加により青緑色を呈する。

■１発明の詳細な説明 本発明においてインターフェロン誘導剤として使用され
る多糖体Ｎ９Ｇｌは、メリア・アザノラクタ樹皮の熱水
抽出物から得られる中性の多糖体である。

メリア・アザジラクタは学名をメリア・アザノラクタ・
リンネ（Ｍｅｌｉａ　ａｚａｄｉｒａｃｈＬａ　Ｌｉｎ
ｎ　）またはアザジラクタ・インディカ　ノヤス（Ａｚ
ａｄｉｒａｃｈｔａｉｎｄｉｃａ　Ｊｕｓｓ　）といい
、熱帯地域に自生する高さ１０ｍ以上に達する木本植物
である。

従来メリア・アザジラクタ抽出物が種々な薬理作用を有
することは知られている。即ち、メリア・アザジラクタ
の樹皮、葉耶、花部、果部、枝部、根皮または樹脂を水
または親水性溶媒で抽出するかあるいは微粉砕して皮膚
化粧料を得る方法（特公昭５２−２８８５３．同５２−
２８８５４および同５３−１０１２５）、上記メリア・
アザジラクタ原料を親水性溶媒および（または）熱水で
抽出して抗菌作用、胃腸・肝臓機能改善作用を有する成
分を得る方法（特公昭５３−１０１２４）および上記メ
リア・アザジラクタ原料を疎水性溶媒で抽出して皮膚疾
患およびリーラマチの治療に有効な成分を得る方法（特
公昭５３−１３６８９）が報告されている。

しかしながら、メリア・アザジラクタ抽出物がインター
フェロン産生の誘発作用を有することはまだ報告されて
いない。

本発明における多糖体Ｎ９ＧＩは、メリア・アザノラク
タ樹皮を熱水で抽出′し、抽出液を例えば次の（Ａ）乃
至（Ｑの方法で処理することによって得られる。

（Ｎ　上記抽出液を限外ろ過し、得られた限外ろ過内液
に低級アルコールを加え、生成する沈澱を採取する。

（Ｂ）　上記抽出液を透析膜法まだはアルコール沈澱法
によシ精製し、得られた精製物を水に溶解し、該水溶液
を分画分子量約１×１０〜１×１０　乃至１×１０５〜
２×１０５の分子篩剤を用いて分子篩処理し、３つに分
れる多糖体画分のうち最初の両分から多糖体を採取する
。

（Ｃ）　上記抽出液を透析膜法、アルコール沈澱法捷た
は限外ろ過法で精製し、得られた精製抽出液を分画分子
量範囲の」二限が７００〜５，０００で下限が１００以
下である架橋されたデキストランケ゛ルと接触させ、接
触水溶液から多糖体を採取する。

上記の方法において、メリア・アザソラクタ樹皮を熱水
で抽出処理する操作は常法に従って行なわれる。即ち、
細断した樹皮に熱水を加えるか、あるいは、樹皮に水を
加え、その混合物を加熱沸騰させることによって実施さ
れる。加熱は沸騰水浴中または直火で行うことができる
。抽出時間は原料の品質等に従って適宜決定されるが通
當Ｊ乃至４８時間である。抽出終了後、抽出混合物をろ
過することにより熱水抽出液が得られる。このような熱
水抽出に先立って、該樹皮を有機溶媒および（まだは）
常温の水で抽出前処理することにより、不要部分を予め
除去しておくことも望ましい。

抽出前処理に使用する溶媒としてはメタノール、エタノ
ール、プロパツール、ピリジノ、アセトンのような極性
有機溶媒、ベンゼン、トルエン、キンレン、ｎ−ヘキサ
ン、クロロホルム、四塩化炭素、酢酸エチルのような非
極性有機溶媒があげられる。

かくして得られた熱水抽出液は、上述した（Ａ）乃至（
Ｃ）の方法によって処理される。

Ａ法においては、熱水抽出液は濃縮することなくそのま
１限外ろ過に付される。限外ろ過は分画分子量約１０，
０００乃至５０，０００の限外ろ過膜を用い、常法に従
って加圧下に実施される。ろ過膜は、上記の分画分子量
を有するものであればよく材質等に特に制限はないが、
合成高分子を不織布等にキャスティングしたものが好適
に使用される。このようなろ過膜の例としては東洋曹達
工業（株）製品のＴＳＫ−ＵＦ膜：　ＴＳ−１０（分画
分子量１０，０００）、ＴＳ−３０（同３０，０００）
、ＴＳ−５０（同５０，０００）およびアミコン社製品
の限外ろ過膜：ＹＭｌｏ（分画分子量−ｉｏ、ｏｏｏ）
、ＰＭＩＯＣ同１０，０００）、ＹＭ３０（同３０，０
００）、ＰＭ３０　（同３ｏ、ｏｏｏ）およびＸＭ５０
（同５０，０００）が挙げられる。特にＴＳ−５０（〜
東洋曹達工業社製品）が好ましい。

ろ過に際しての加圧は約０１〜２ｋｇ／Ｃｒｎ２が適当
である。上記限外ろ過により熱水抽出液の濃縮と低分子
夾雑物の除去が同時に行なわれる。濃縮液の濃度は５〜
Ｑ　Ｏｔ１ｇ／ｒｎ１２、好適には１０〜１．５　ｍｇ
／ｍｅである。

次に、かくして得られたろ過内液（濃縮液）に、低級ア
ルコールを加え、生成する沈澱を常法に従って採取する
ことにより目的とする多糖体Ｎ９Ｇｌが得られる。

沈澱の生成に使用される低級アルコールの例としては、
特に低級アルキルアルコール、例えばメタノール、エタ
ノール、ｎ−プロパツール、ｎ−ブタノール等が挙げら
れるが、エタノールが最も望ましい。沈澱の生成は、内
液の２倍量のアルコールを加えて低温（０〜６℃）で数
時間乃至−昼夜放置することによって好適に実施される
。生成した沈澱は常法により、例えば、遠心分離、凍結
乾燥等によって採取される。かくして採取された沈澱は
必要により水に溶解し低級アルコールで再沈澱させて精
製する。

Ｂ法においては、上記抽出液は先ず透析膜法またはアル
コール沈澱法によシ精製される。アルコール沈澱法で精
製する場合には、上記抽出液にメタノール、エタノール
、プロノぐノールのようなアルコールを加え、生成した
沈澱を常法によシ、例えば遠心分離により採取する。透
析膜法によシ精製する場合は、該抽出液を透析膜に入れ
、水につけて透析し、透析内液を所望により濃縮乾固す
るかまたは凍結乾燥して抽出物を得る。透析膜としては
分画分子量５０，０００以下のもの、例えばスペクトラ
・ボア１〜６（商品名、スペクトラム・メディカル・イ
ンダストリーズ社製品）、ビスキング・チューブ（商品
名、ユニオンカーバイト社製品）が使用される。あるい
は、分画分子量が５，０００〜１０．ｏｏｏ程度のホロ
ーファイバー型透析器を用いてもよい。例えばテルモ株
式会社製品のクリランスＴＥ−１５（商品名）、アミコ
ン社のＨＩＰ５（商品名、分画分子量５，０００）また
はＨＩＰＩＯ（商品名、分画分子量１０，０００）を用
いることができる。精製度を上げるために、上記透析膜
法とアルコール沈澱法を組み合せることもできる。即ち
、上記透析内液にアルコールを加え、生成する沈澱を採
取することによシ梢製度の高い多糖体が得られる。かく
して得られた精製物を水に溶解し、該水溶液を分子篩処
理する。

分子篩処理は望ましくは、ダルろ過膜を用いたゲルろ過
によって行なわれる。ダルろ過膜は分画分子量約１×１
０５〜１×１０５乃至１×１０３〜２×１０５のものが
使用され、デキストランダル、ぼりアクリルアミドダル
、ポリビニル系のポリマーク９ル、多孔性ガラスピーズ
等が好適に使用される。これらは例えばセフアゾ、クス
Ｇ−１００，Ｇ−２００（ファルマシア社製品、スエー
デン）、バイオダルー１”１００　（パイオラ、ド社製
品、米国）、トヨｉ４−ルＨＷ−５０（東洋曹達工業社
製品、日本）等の製品名で市販されている。これらのダ
ルろ過膜を充填したカラムに前述した熱水抽出液を通し
、蒸留水で溶離すると多糖体が３つの両分に分画される
。最初に溶出する両分を集め、蒸留乾固または凍結乾燥
すると目的とする多糖体が得られる。

Ｃ法においては、上記抽出液は先ず上述した透析膜法、
アルコール沈澱法または限外ろ過法によって精製される
。

前記アルコール沈澱法で得られた沈澱物または透析膜法
において透析内液を乾燥して得られた固形物は、水に溶
かして精製抽出液とする。透析膜法または限外ろ過法に
おける内液はそのまま精製抽出液とする。

次に、上記精製抽出液を分画分子量範囲の上限が７００
〜５，０００で下限が１００以下である架橋されたデキ
ストラングルと接触させて不純物を該ケ゛ルに吸着させ
、接触水溶液から多糖体を採取することによシ所望の多
糖体が得られる。

本工程で吸着剤として使用されるグルは、架橋されたデ
キストランダルであシ、機械的強度に優れており、大規
模での精製に使用することができる。デキストランダル
は特に高度に架橋されたものが機械的強度の点で好まし
い。ゲルの分画分子量範囲は臨界的ではないが、上限が
７００〜５，０００で下限が１００以下のものが適当で
ある。このようなゲルの例としては、ファルマ／ア社製
品のセファデックスＧ−１０（分画分子量範囲７００以
下）、Ｇ−１５（同１．，５００以下）、Ｇ−２５（同
１００〜５，０００）が挙げられる。本工程は、精製抽
出液を上記ケ゛ルを充填したカラムに通し、水で溶出し
、溶出液を蒸発乾固または凍結乾固することによって実
施される。本処理においては、不純物がケ８ルに吸着さ
れ、所望の多糖体は吸着されない。

従って本工程はバッチ式で実施することもできる。

即ち、精製抽出液を上記ケ゛ルとともに攪拌し、次いで
ろ過または遠心分離によりケ゛ルを除去し、ろ液を蒸発
乾固または凍結乾燥することに」＝って所望の多糖体を
得ることができる。

かくして得られた多糖体Ｎ９Ｇ　ｌは下記の物理化学的
特性を有する。

（イ）　色と形状 凍結乾燥品は白色粉末であ （ロ）赤外線吸収スペクトル ＩＲｖＫＢｒｃｍ−’　：　３４００，２９２０，１６
３０，１４００゜ａＸ １３６０．１１５０，１０７０，１０３０，９２０．８
４００）紫外線吸収スペクトル 水溶液中の測定で吸収極大を示さず末端吸収のみを示す
。

に）　溶解性 水に可溶でメタノール、エタノール、アセトン、エーテ
ル、クロロホルム、酢酸エチル、ベンゼンおよびヘキサ
ン等の有機溶媒に不溶である。

（ホ）呈色反応 フェノール硫酸反応、アンスロン硫酸反応に陽性でヨウ
素の添加により青緑色を呈する。

参考までに、上で得られた多糖体Ｎ９ＧＩｆ：分画分子
量約１×１０〜２×１０５乃至１　ｘ　１　ｏ３〜８　
ｘ　１０”のグルろ過膜を充填したカラムにかけ、蒸留
水で溶離すると多糖体が２つの両分に分画される。最初
に溶出する画分を多糖体Ｎ９Ｇｌａ、後に溶出する多糖
体をＮ９ＧＩｂとする。上記グルろ過膜としてはデキス
トランダル、ポリアクリルアミドゲルポリビニル系のポ
リマーグル、多孔性ガラスピーズ等が使用される。これ
らは例えばセフアゾ、クスＧ−２００、セフアクリルＳ
−３００　（藺品名、ファルマ／ア社製品、スエーデン
）、バイオゲルＰ−３００（商品名、バイオラッド社製
品、米国）、トヨノｅ−ル■ＩＷ−６０（商品名、東洋
１達工業社製品、日本）等の製品名で市販されている。

多糖体Ｎ　９　Ｇ　ｌ　ａおよび多糖体Ｎ９Ｇｌｂの構
造および物理化学特性は下記の通りである。

多糖体Ｎ９Ｇｌａ イ）構造 α−（１→４）−グルカンの主鎖にアラビノースがα−
（１→６）結合し、グルコースとアラビノースの構成割
合が約５，１の中性多糖体。

口）色と形状 凍結乾燥品は白色粉末である。

ノ・）溶解性 水に可溶で、メタノール、エタノール、アセトン、エー
テル、クロロホルム、酢酸エチル、ベンゼン及びヘキサ
ン等の有機溶媒に不溶である。

二）呈色反ｊ７６ フェノール硫酸反応、アンメロン硫酸反応に陽性でヨウ
素の添加によシ青緑色を呈する。

ホ）分子量 セファデックスＧ−２００カラムダルクロマトグラフイ
で単一のピークを与え、分子量は約９４．０００である
。

へ）比旋光度 〔α〕ｉ５：　＋１３６．０°（Ｃ＝０．５　、　Ｈ２
Ｏ）ト）赤外線吸収スペクトル ＩＲシＫＥｒＩ−ｉ　：　３４００，２９３０．１’６
２０，１４１０゜ａＸ １３７０．１２６０，１１５０．１０８０チ）紫外線吸
収ス綬りトル 水溶液中の測定で吸収極太を示さず、末端吸収のみを示
す。

す）１５Ｃ核磁気共鳴スペクトル 重水中で外部基準にＴＭＳ　（テトラメチルシラン）？
：使用して測定した１　００　ＭＨｚ　”Ｃ核磁気共鳴
スペクトルは次の通りでちる。

δ　ｐｐｍ　：　６２．１．６２．７．６７．３，７２
．９，７４．８．７８．１゜７８．７，８２．４，８５
゜５．９９．２，１０１．１，１０８．９多糖体Ｎ９Ｇ
Ｉｂ イ）構造 α−（１→４）−グルカンを主鎖とし、主鎖中にβ−（
１→３）フコースを含み、分枝としてα−（１→６）ア
ラビノースを有し、グルコース、アラビノースおよびフ
コースの構成割合が約５：２：１の中性多糖体。

口）色と形状 凍結乾燥品は白色粉末である。

・→　溶解性 水に可溶で、メタノール、エタノール、アセトン、エー
テル、クロロホルム、酢酸エチル、ベンビンおよびヘキ
サン等の有機溶媒に不溶である０ 二）呈色反応 フェノール硫酸反応、アンスロン硫酸反応に陽性でヨウ
素の添加によシ青緑色を呈する。

ホ）分子量 てν セファデックスＧ−２００カラムクロマトグラフイで単
一のピークを与え、分子量は約２１，０００である。

へ）比旋光度 〔α〕。、＋１４３．７°（Ｃ＝０．５　、　ｌ−１２
０゜ト）赤外１１９吸収スペクトル ＫＢｒ　−１− ＩＲν　硼　、　３４００，２９３０，１６３０，１４
２０゜ａＸ １２６０　、１０８０　、１０２０　、８１０チ）紫外
線吸収スペクトル 水溶液中の測定で吸収極太を示さず、末端吸収のみを示
す。

す）１５Ｃ核磁気共鳴スペクトル 重水中で外部基準にＴＭＳ　（テトラメチルシラン）を
使用して粗」定した１　００　ＭＨｚ　１３Ｃ核磁気共
鳴ス啄クトルは次の通りである。

δｐｐｍ　：　１８．２，６２．３，６２．７．’６７
．４，７１．１，７２．０゜７３．２　、７４．９　、
７８．：ｌ　、　７８゜９　、８２．９　、８３．９　
。

８５．６，９９．４，１０１．２，１０５．０，１０９
．１本発明の多糖体Ｎ９ＧＩは上記多糖体Ｎ９ＧＩａお
よび多糖体Ｎ９Ｇｌｂの混合物とみることができ、多糖
体Ｎ９ＧＩａおよびＮ９Ｇｌｂは同様の薬理活性を示し
た。

本発明の多糖体Ｎ９ＧＩは、後に試験例で示すように、
顕著なインターフェロン産生誘発作用を有し、毒性は極
めて低いので、インターフェロン訪導剤として優れた性
質を有する。

本発明の多糖体Ｎ９ＧＩは各種のウィルス感染症に対し
て有効であり、投与量は、症状、年令、体重などによっ
て異なるが、通常は成人に対して１日１００〜２，５０
０■であり、１〜４回に分けて投与することができる。

本発明の多糖体は任意所要の製剤用担体または賦形剤を
用いて経口または非経口投内用に製剤化される。

経口投与用の錠剤、散剤、カプセル剤、顆粒剤等は慣用
の賦形剤例えば炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、と
うもろこしでんぷん、馬鈴哲でんぷん、砂糖、ラクトー
ス、タルク、ステアリン酸マグネシウム、アラビアゴム
等を含有していてもよい。経口投与用液体製剤は水性ま
たは油性懸濁液、溶液、／ロッゾ、エリキシル剤その他
であってもよい。

注射用製剤は溶液または懸濁液の形態であシ、懸濁化剤
、安定剤または分散剤のような処方剤を含んでいてもよ
く、滅菌蒸留水、精油たとえばビーナツツ油、とうもろ
こし油あるいは非水溶媒、ポリエチレングリコール、ポ
リプロピレングリコール等を含有していてもよい。

直腸内投与のためには生膜用組成物の形で提供され、周
知の製剤担体たとえばポリエチレングリコール、ラノリ
ン、ココナツツ油等を含有していてもよい。

次に本発明の多糖体Ｎ９’Ｇｌの製造例、試験例および
製剤例を示して本発明をさらに具体的に説明する。

多糖体Ｎ９Ｇ’ｌの製造例 （Ａ）　メリア・アザジラクタ樹皮２００　ｇｒに２！
のメタノールを加えて室温で５時間から一昼夜抽出する
。抽出液をろ別し更に２！のメタノールを加える。この
操作を合計３回繰り返した後、この樹皮に２〃の蒸留水
を加えて、２〜３時間煮沸抽出する。抽出液をろ過また
は遠心して集める。同様の操作を合計３回行ない、３回
分の抽出液、約５．５ｊを集める。この後、必要ならば
更に遠心して不溶物を除く。

この熱水抽出液２３ｋ（これには熱水抽出物が１’Ｊ７
．５ｇｒ含まれている）をＴＳＫ−ＵＦ膜ＴＳ−５０（
分画分子量５０，０００、商品名、東洋曹達工業社製品
）を装着した限外ろ過装置５ｃ−ｉ（商品名、東洋曹達
工業社製品）を用いて限外ろ過を行なう。

はじめに１００〜１５０＋！程度にまで製綿した後、こ
れに蒸留水を１５０〜２００ｄ加えて更に限外ろ過を行
ない、再び１００　ｍｌ程度寸で飛縮する。この操作（
［：５〜１０回繰り返して得られた内液］、　ＯＯｍｅ
（これには、１．９８ｇｒの固型分が溶けている）に２
倍量（即ち２００　ｔＩ＋ｌ　）のエタノールを加えて
、よく攪拌した後、低温（０〜６℃）で数時間から一昼
夜放置した後、遠心などの常法に従って沈澱物を集める
。沈澱物を再び７０　＋＋＋ｌの蒸留水に溶解し、２倍
量（１４０ｄ）のエタノールを加え、同様の操作を１〜
２回繰り返す。得られた沈澱物を６７％、７５チ、１０
０％のエタノールで順次洗浄した後、アセトン、エーテ
ルで脱水すると、淡黄色粉末として多糖体Ｎ　９　Ｇ　
Ｉ　（８０５ｍｙ　）が得られる。

これをセフアゾ、クスＧ−１００でグルろ過を行なうと
多糖体Ｎ９Ｇ　ｌ以外のものをほとんど含んでいないこ
とが分かる。

（Ｂ）　（１）　メリア・アザジラクタ樹皮乾燥品５０
ｇ・をベンゼン（５００＋ｎ１Ｘ３）　およびメタノー
ル（５００ｍｇＸ３）を用いて室温で２４時間抽出前処
理し、得られた抽出残渣を熱水２００−で３回抽出処理
した。得られた抽出液を合し、ロータリーエ・ぐボレー
ターで濃縮乾固し、１９６０．５ｍ９の粉末を得た。

（２）上記（１）で得られた粉末１０００ｍ９を水２０
０ｍ１に溶解し、得られた水溶液に純エタノールを攪拌
しながら室温で徐々に加え、水溶液中のエタノール濃度
が８０％になったときに添加をやめ、生成した沈澱を遠
心分離によシ採取し、５９４５ｍ’ｉの褐色粉末を得た
。

（３）上記（１）で得られた粉末５００　ｍ９を水５０
　ｍｌにとかし、この水溶液をスペクトラ　ポア６（分
画分子量５０，０００）に入れ、水に対して透析した。

透析内液をロータリーエバポレーターを用いて濃縮乾固
して褐色の粉末３１０ｒｎ９を得た。

（４）上記（２）または（３）で得られた熱水抽出物１
０２０ｍ９を２０艷の蒸留水に溶解し、セファデックス
Ｇ−１００を充填しだカラム（直径７．０ｃｍ、長さ３
５０ｃｒｒＬ）に注ぎ、蒸留水を用いてグルろ過を行っ
た。

フェノール硫酸法で溶出液中の糖含量を定量しつつケ８
ルろ過を行うと、多糖体＆″！、３つに分画される。

最初に溶出する両分から溶媒を留去し、目的とする多糖
体２７３　Ｉｎ９が得られた。

（Ｃ）　メリア・アザジラクタ樹皮２００ｇｒ′ｆ：各
２ｊのメタノールで３回抽出後、各２〃の蒸留水で３時
間煮沸抽出ｆ：３回行なう。熱水抽出液を集め、約５０
０＋ｎｅＫまで減圧濃縮する。次いでスペクトラボア２
透析膜を用いて、蒸留水に対して透析する。この内液を
遠心して不溶物を除き、約４５０−までｉｌＡ縮する。

これに２倍量のエタノールを加え、よく攪拌した後、低
温室（４℃）に−晩装置する。遠心して沈澱物を集め、
６７％次いで１００チエタノールで洗浄し、アセトン、
エーテルで脱水乾燥すると、淡褐色粉末３．４７ｇｒが
得られる。

この７６．５　ｍ９を５ｍ７！の蒸留水に溶解し、セフ
アゾ。

クスＧ−２５を充填したカラム（φ２．５　Ｘ　４５ｃ
ｍ　）にかけ、蒸留水で溶出すると、不純物はカラムに
吸着され、多糖体Ｎ９Ｇｌはそのまま溶出されるので溶
出液を集め、濃縮、凍結乾燥すると多糖体Ｎ９Ｇｌが２
８．９ｍ９得られる。

試験例１ （＋）１５〜１６週令雄ＩＣＲマウスの牌臓を摘出し、
シャーレ中にて牌臓内細胞をとシ出し、生理食塩水を含
むリン酸緩衝液（ｐＨ７，２）Ｃ以下ＰＥＳという）に
て細胞を洗浄する。この細胞をシャーレ（径９０朋）に
入れた１０ｍ１！、のＲｌＰｌＭ−Ｉ　、　（Ｒｏｓｗ
ｅｌ　ｌ　Ｐａｒｋ　Ｍｅｍｏ−ｒｉａｌ　Ｉｎ５ｔｉ
ｔｕｔｅ　）　１６４０培養液に１×１０８個懸濁する
。この中にさらに多糖体Ｎ　９　Ｇ　Ｉ　０．２５ｍｙ
を入れた後、３７℃で４８時間炭酸ガスインキュベータ
ー（５％ＣＯ□、９５％空気）中で培イ２する。この培
養液を遠心して上清液をとる。

（２）１５〜１６週令雄ＩＣＲマウスに、ＰＢＳに溶か
した多糖体Ｎ　９　Ｇ　ｌをマウス１　ｋｇ体重あたり
１００ｍｇを腹腔に投与する。投与後８時間後にＪｎＩ
液をとり、血清を得る。

（３）上記（２）と同様にして多糖体Ｎ９（、Ｉをマウ
ス腹腔に１日１回５日間連続して膜力し、投与終了後１
０日後に血液を採取し、血清を得る。

上記（１）乃至（３）のそれぞれの培養上清または血清
ｆ：ＶｓＶ−Ｌ９２９細胞系により常法に従ってインタ
ーフェロンを定量した。結果を表１に示す。対照として
毒性を有するが、２５μＶ７　誘導能をもつコンカナバ
リンＡを使用した。

表１から上記（１）および（３）における試料にインタ
ーフェロンが産生されていることが明らかである。

寸だ、それぞれの試料をｐｌ−１２に調整し、４℃にて
２４時間処理した後ＰＨｆ、　７にもどし、同様にして
インターフェロンを定量したところ、表１に示すように
１８Ｕ以下となシ、はとんど失活しているところから、
多糖体Ｎ９Ｇ　ｌによって産生されたインターフェロン
はガンマ−タイプと考えられる。

表１ Ｕ（単位） 試験例２ 多糖体Ｎ９Ｇ　ｌを体重２０±１ｇ−ノＩｃＲ雄マウス
に投与して急性毒性試験を行なった結果、ＬＤ５゜値は
腹腔内投与で６００ｍφｇ以上であった。

製剤例１ 製造例で得られた多糖体Ｎ　９　Ｇ　Ｉ　１０００＋＋
＋９を無菌５％注射用ブドウ糖溶１１５００−に溶解し
、この溶液を５ｍｌずつバイアルに無菌的に分注し、凍
結乾燥した。かくして、１バイアル中１０ｍ９の多糖体
Ｎ９Ｇｉを含む製剤を得た。用量、注射用蒸留水に溶解
して使用する。

製剤例２ 上記製剤例１と同様にしてバイアル製剤をつくった。た
だし、無菌５％注射用ブドウ糖溶液５００ゴの代りに生
理食塩水５００−を使用した。用量、注射用蒸留水に溶
解して使用する。

■１発明の具体的作用効果 本発明によれば、インターフェロン産生誘発作用の優れ
たインターフェロン誘導剤が提供される。

即ち、本発明によれば、多糖体Ｎ　９　Ｇ　ｌからなる
インターフェロン誘導剤が提供される。多糖体Ｎ９ＧＩ
は、メリア・アザジラクタ樹皮の熱水抽出物から得られ
る多糖体であって、毒性が極めて低く、各種のウィルス
感染症の予防または治療剤として有用である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 多糖体Ｎ９ＧＩからなるインターフェロン誘導剤。多糖
   体Ｎ９ＣＩは下記の物理化学的特性を有する。 （イ）　色と形状 凍結乾燥品は白色又は淡黄褐色粉末である。 （ロ）赤外線吸収スペクトル ＩＲＶＫＢ”ｃｍ−１：　３４００　、２９２０　、１
   ６３０　、１４００　。 ａＸ １３６０　、１１５０　、１０７０　、１０３０　、９
   ２０　、８４０（ハ）紫外線吸収スペクトル 水溶液中の測定で吸収極大を示さず末端吸収のみを示す
   。 に）　溶解性 水に可溶でメタノール、エタノール、アセトン、エーテ
   ル、クロロホルム、酢酸エチル、ベンゼンおよびヘキサ
   ン等の有機溶媒に不溶である。 （ホ）呈色反応 フェノール硫酸反応、アンスロン硫酸反応に陽性でヨウ
   素の添加により青緑色を呈する。