JPS5940135B2 - インタ−フェロン誘起活性を有する１−３結合グルコ−スを主体とする高分子多糖体およびその製造方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は漢方薬桑白皮又はクワ料クワ属 （Ｍｏｒｕｓ）植物（マグワＭ、ａｌｂａＬｉｎｎｅ又
はヤマグワＭ、ｂｏｍｂｙｃｉｓＫｏｉｄ２ｕｍｉ等）
の根皮から得られる優れたインターフエロン誘起作用を
有する高分子多糖体物質〔以下モルサン（Ｍｏｒｕｓａ
ｎ）と呼ぷ〕及びその抽出製造方法に関するものである
。

ィンターフエロン誘起作用を有する天然物質は種々知ら
れているが、それらの多くは強い副作用を持つているの
でほとんど実用に供されていない。本発明者らは、漢方
薬桑白皮の成分について研究し、このものが著しいイン
ターフエロン誘起作用有し、且つほとんど副作用がない
ことを見い出し、その有効成分の分離精製に成功し、本
発明を完成したのである。桑白皮はクワ料クワ属植物の
根のあら皮を取去り、黄白色の内皮内鞘部を分離、乾燥
したもので、根の形成層の部分を主とするものである。

このものは生薬として古来種々の漢方の処方に配合使用
されているが、その成分についての研究は少なく、その
含有成分としてアデニン、ベタイン、α及びβ−アミリ
ン、シトステロール、パルミチン酸、ステアリン酸など
の報告があるが、いずれもクワ根に特異的な物質ではな
く、又低分子物質である。本発明による有効物質はクワ
属植物の特異的と思われる高分子の多糖様物質で、従来
桑白皮成分として報告されているいずれの物質にも該当
しないものである。本発明において、桑白皮から有効物
質を分離するには、乾燥原料を１０倍量の熱水（６０〜
１００℃）で抽出する。

１００℃で１時間以上加熱すると抽出物のインターフエ
ロン誘起作用の低下が見られる。

抽出に当つて中性の精製水を用いてもよいが、１／５０
ＮのＮａＯＨ水溶液にて抽出した方が収量は向上する。
抽出後、沢過又は遠心分離によつて上清液を分離し、透
明な上清液を減圧濃縮又は限外沢過によつて適当量まで
濃縮し、これにエタノール又はメタノールを加えて高分
子物質を沈殿させる。この沈殿に少量の水を加え、透析
して低分子物質及び有機溶媒の残存しているものを除く
。透析後、透析膜内容物を集め、必要があれば、減圧濃
縮又は限外沢過によつて濃縮し、次いで凍結乾燥するこ
とによつて、灰白色、無味、無臭の粉末が原料の０．５
％前後の収量で得られる。本物質の分子構造、組成につ
いては、いまだ十分に明らかになつていないが、弱酸性
、中性又はアルカリ性で水可溶（但し、コロイド溶液）
、水溶液は１／１００Ｎヨウ素溶液によつて５５０ｎｍ
に吸収極大を有する紫色のヨウ素反応を与える。加水分
解を行わずに、モリツシユ反応、トリプトフアン反応、
クロモトロープ酸反応等を呈するが、アントロン反応は
加水分解試料について始めて陽性となる。酸加水分解に
よつて単糖としてはグルコースのみを与え、ウロン酸、
ペントース及びグルコース以外のヘキソースの存在は認
められない。精製標品では窒素を含まない。糖以外には
リンが約０．６％存在する。過ヨウ素酸酸化によつて、
グルコース１モル当り過ヨウ素酸０．２７モルを消費す
るが、これはグルコースの結合が、１−３結合が主で、
１−６、１−４、１−２等の結合が少ないことを予想さ
せる。すなわち、本物質は、グルコース１−３結合を主
とする高分子（分子量２００００以上のグルカンが主成
分と考えられる構造を持つ高分子物と推定される。従来
、桑白皮の成分として報告されている各種の低分子物質
〔（１）奥正己、日農化、１２、５５５（１９３６）、
（２）吉村清尚、日蚕糸、４、３０５（１９３３）、（
３）塚本赳夫、薬学藁、２８７、２８９（１９４９）〕
、あるいはクワ葉の粘質物〔町田誠之、大有機化学第２
０巻、天然高分子化合物、第２１５ページ（１９６１）
朝倉書店〕とも組成、物理化学的性質の点で全く異なる
ものである。

本物質モルサンの物理化学的諸性状は以下の通りである
。（イ）分子量 スピンコＥ超遠心器による分析でＳｗ２Ｏ３．６、分子
量２００００以上、約６００００の部分を主とし、かな
りの幅に分散している。

（ロ）融点又は分解点 明瞭な融点、分解点を示さない（２２０℃付近から炭化
）。

ヒう 元素分析値（％） Ｃ：３８．８８Ｈ：５．９７Ｎ：０ Ｐ：０．６５ 以上の分析値から次の示性式が導かれる。

（Ｃ６Ｈｌ２Ｏ６）５０Ｐ （ニ）溶解性 （（１）化学的組成 全ヘキソース（グルコースとして）９６％（ハ）構成糖 （ａ）薄層クロマトグラフイ一による （２Ｎ−Ｈ２ＳＯ４ｌＯＯ℃、４時間加水分解）Ｄ−グ
ルコース（ｂ）酵素化学的方法による （加水分解物のグルコース−６−リン酸デヒドロゲナー
ゼ法） Ｄ−グルコース （ｃ）テクニコンシユガーアナライザ一による方法（Ｔ
ｙｐｅＳカラム使用） Ｄ−グルコース （ト）安定性 本物質は、１００℃、３０〜６０分の加熱では、その活
性に変化はみられない。

（力 紫外線スペクトル、赤外線吸収スペクトル本物質
の水中（１．０％）における紫外線吸収スベクトルは第
１図の通りあり、吸収は見られない。

ＫＢｒ錠剤法による赤外線吸収スペクトルは第２図の通
りであり、特異的な吸収は見られない。本発明における
物質モルサンは、後記実験結果からも明らかなように生
物学的活性作用（インターフエロン誘起活性）を示す。
生物学的活性試験 Ａ．モルサンのインターフエロン（ＩＦ）誘起能（１）
インビトロ法ウサギ（ニユージーランドホワイト、 ＳＰＦ、体重約１ｋ９♂）を採血して殺し、その牌臓、
骨髄及びリンパ節を採取し、浮遊細胞にして混合、その
２〜５×１０７細胞を含むように調製した細胞浮遊液に
、前記の桑白皮凍結乾燥材料１０ｔｔ７、１μ７及０．
１μ７を加え、２５゜Ｃ、２４時間培養し、その遠心清
液を採り、Ｆ活性を測定した。

（４）インビボ法 ウサギ（ニユージーランドホヮィト、 ＳＰＦ、体重約１ｋ９♂）に前記桑白皮凍結乾燥材料に
水を５００μ７／ｍｌの割合になるように加え、その２
ｍ１を静脈に注射し、１時間、２時間、４時間及び６時
間目に２ｍ１ずつ採血し、その血清中のＩＦ活性を測定
した。

（１１：） Ｆ活性測定 ＲＫｌ３ウサギ腎株化細胞を用いてベスキユラ、ストマ
テイテイス、ウイルス （ＶｅｓｃｕｌａｒＳｔＯｍａｔｉｔｉｃＶｉｒｕｓ）
を攻撃用ウイルスとしてプラーク５０％減少法で活性を
測定した。

結 果 上記試料によつて産生された活性物質は以下に述べるイ
ンターフエロンとしての特性を示す。

種特異性ウサギの細胞では効果を示すが、マウスＬ細胞
では無効である。

非特異性 ＲＫｌ３ウサギ腎株化細胞上でベスキユラ、ストマテイ
テイス、ウイルスの外ワクシニアウイルスの増殖を阻止
する。

その外トリプシンによつて失活する。

急性毒性試験 供試動物：Ｄｄｙマウス♂１０匹 投与：腹腔注射 １６０ｍ１ ＬＤ５０〉４．１６７／Ｋ９ 投与後、特にマウスの一般症状に変化は見られず、１週
間後、体重は正常に推移したっ実施例 １ 桑白皮３００７に３１の１／５０Ｎ−ＮａＯＨを加え、
６０℃、６０分間、次いで１００℃、２０分間加熱し、
沢過して▲液２３００ｍ１を得た。

残分ケーキは熱精製水４００ｍ１を加えて十分に洗浄し
、沢過した。沢液、洗液合計３０００ｍ１を得た。次に
これをダイアフローメンブレンによつて約３００ｍ１ま
で濃縮し、この濃縮液に対して１．５倍容量のエタノー
ル（９９．５％）をよくかきまぜながら、徐々に加え、
エタノール濃度を６０％（Ｖ／Ｖ）とし、氷室中にしば
らく静置して十分に生成した沈殿を沈降させ、次に遠心
分離（３０００ｒｐｍ．１０分間）によつて沈殿を集め
、この沈殿を少量の水に懸濁して透析チユーブ〔ビスキ
ング（Ｖｉｓｋｉｎｇ）２７／３２〕に移し、氷室中で
精製水に対して透析した。

透析後、透析膜内液を集め、不溶部分は遠心分離（３０
００ｒｐｍ、１０分間）によつて除去し、凍結乾燥して
６．７８７（２．２６％）の活性物質を得た。なお最初
の熱水抽出後の沢過に代えて、遠心分離（３０００ｒｐ
ｍＪ０分間）によつて分離した場合も上記とほとんど同
じ成積の結果を得た。

実施例 ２養蚕に使用するクワの根の部分を細かく切り
、その１００７に精製水１１を加え、６０分間、６０℃
に加熱し、沢過して沢液７５０ｍ１を得た。

次にこの沢液に対して１．５倍量のエタノール（９９．
５％）をよくかきまぜながら徐々に加え、エタノール濃
度を６０％（Ｖ／Ｖ）とし、氷室中にしばらく静置し、
生成した沈殿を遠心分離（３０００ｒｐｍＪ０分間）に
よつて集め、この沈殿を少量の水に溶解させ、透析チユ
ーブに移し、膜内液を集め、不溶部分は遠心分離（３０
００ｒｐｍ１１０分間）によつて除去し、凍結乾燥して
、活性物質１．１２７（１，１２％）を得た。このもの
のＩＦ産生量は桑白皮の約１／５である。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明の生物学的活性物質モルサンの紫外線
吸収スペクトル、第２図同物質の赤外線吸収スペクトル
である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ クワ料クワ属植物根皮より抽出して得られるインタ
   ーフエロン誘起活性および下記の理化学的性状を有する
   １−３結合グルコースを主体とする高分子多糖体、（イ
   ）分子量 沈降係数（Ｓｗ＿２＿０）３．６）、分子量２００００
   以上、約６００００の部分を主体とし、かなりの幅に分
   散している、（ロ）融点又は分解点 明瞭な融点、分解点を示さず、２２０℃付近から炭化、
   （ハ）元素分析値（％）及び示性式 Ｃ：３８．８８、Ｈ：５．９７、Ｎ：０、Ｐ：０．６６
   、 以上の分析値から次の示性式が導かれる、（Ｃ＿６Ｈ＿
   １＿２Ｏ＿６）＿５＿０Ｐ、（ニ）溶解性 水・ｎ−ブタノール飽和水に可溶、メタノール、エタノ
   ール、プロパノール、ｎ−ブタノール、アセトン、クロ
   ロホルム、氷酢酸に不溶、（ホ）化学組成全ヘキソース
   量はグルコースとして９６％、（ヘ）構成糖Ｄ−グルコ
   ース （ト）安定性 １００℃、３０〜４０分の加熱では活性に変化は見られ
   ない、（チ）紫外線吸収スペクトル 第１図の通り、 （リ）赤外線吸収スペクトル 第２図の通り。 ２ 漢方薬桑白皮又はクワ料クワ属植物の根皮を、熱水
   又は弱アルカリ性の熱水溶液にて抽出処理し、得られる
   抽出液を濃縮し、これにアルコール類、アセトン、クロ
   ロホルムのような有機溶剤を添加し、高分子物質を沈殿
   させ、次いでその沈殿物を少量の水に溶解させ、透析処
   理し、必要に応じて濃縮した後、透析膜内液を凍結乾燥
   することを特徴とする１−３結合グルコースを主体とす
   る高分子多糖体の製造方法。