JPS6043379A - 微生物からのサルコシンオキシダ−ゼの製造法 - Google Patents
微生物からのサルコシンオキシダ−ゼの製造法Info
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- JPS6043379A JPS6043379A JP59153299A JP15329984A JPS6043379A JP S6043379 A JPS6043379 A JP S6043379A JP 59153299 A JP59153299 A JP 59153299A JP 15329984 A JP15329984 A JP 15329984A JP S6043379 A JPS6043379 A JP S6043379A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、微生物からのサルコシンオキシダーゼの製出
法に関する。
法に関する。
従来の技術
サルコシンオキシダーゼＥ、Ｃ，１，５，３，１は公知
であり、既に微生物、例えばコリネ・ζクチリア（Ｃｏ
ｒｙｎｅｂａｋｔｅｒｉｅｎ ） 、アルスロノζクタ
ー（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ）、バチルス（Ｂａｃ
ｉｌｌｕｓ ）及びシリンドロカルボン（Ｃｙｌｉｎｄ
ｒｏｃａｒｐｏｎ ）から製出された。酵素は、ザルコ
シン又はサルコシンに変換する化合物を測定する分野で
工業上重要である。これは反応を接触する： サルコシノ＋０２十Ｉ■２０→ＨＣＨＯ＋ＮＴ（２ＣＨ
２Ｃ００Ｈ十Ｈ２Ｏ２反応生成物、殊に■■２０２は公
知方法によって容易に測定することができる。
であり、既に微生物、例えばコリネ・ζクチリア（Ｃｏ
ｒｙｎｅｂａｋｔｅｒｉｅｎ ） 、アルスロノζクタ
ー（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ）、バチルス（Ｂａｃ
ｉｌｌｕｓ ）及びシリンドロカルボン（Ｃｙｌｉｎｄ
ｒｏｃａｒｐｏｎ ）から製出された。酵素は、ザルコ
シン又はサルコシンに変換する化合物を測定する分野で
工業上重要である。これは反応を接触する： サルコシノ＋０２十Ｉ■２０→ＨＣＨＯ＋ＮＴ（２ＣＨ
２Ｃ００Ｈ十Ｈ２Ｏ２反応生成物、殊に■■２０２は公
知方法によって容易に測定することができる。
かかる測定法でサルコシ／オキシダーゼを使用するため
の障害は、微生物からの製出は費用がかかることである
。それというのも従来酵素が得られたすべての微生物は
、殊にその培養に関して比較的費用がかかり過ぎるとみ
なされるからである。
の障害は、微生物からの製出は費用がかかることである
。それというのも従来酵素が得られたすべての微生物は
、殊にその培養に関して比較的費用がかかり過ぎるとみ
なされるからである。
発明が解決しようとする問題点
それ数本発明の課題は、容易に培養することができ、い
たるところに存在し費用のかからない微生物からザルコ
シンオキシダーゼを製出スる方法を得ることである。
たるところに存在し費用のかからない微生物からザルコ
シンオキシダーゼを製出スる方法を得ることである。
問題点を解決するだめの手段
この課題は微生物から、これを培養し、ビオマス又は培
養液から酵素を得ることによってサルコシンオキシダー
ゼを製出する際に、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏ
ｎａｓ ）菌株を培養する方法によって解決される。
養液から酵素を得ることによってサルコシンオキシダー
ゼを製出する際に、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏ
ｎａｓ ）菌株を培養する方法によって解決される。
シュードモナスン（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｄｅｎ ）が
サルコシンオキシダーゼを含有することは、意外なこと
である。それというのも従来これらの微生物ではザルコ
シ／デヒドロゲナーゼＥ、Ｃ，１，５゜９９．１の存在
が公知であるのに過ぎ力かったからである［Ａｇｒｉｃ
、 Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅｍ、 ４３巻、１１９７〜１２
０３頁（１９７９年）〕。それ故サすコシ／オキシダー
ゼを、前記性質、即ち容易な培養性、費用がかからない
及び広い存在によってすぐれている微生物で見出される
ことは予期することができなかった。
サルコシンオキシダーゼを含有することは、意外なこと
である。それというのも従来これらの微生物ではザルコ
シ／デヒドロゲナーゼＥ、Ｃ，１，５゜９９．１の存在
が公知であるのに過ぎ力かったからである［Ａｇｒｉｃ
、 Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅｍ、 ４３巻、１１９７〜１２
０３頁（１９７９年）〕。それ故サすコシ／オキシダー
ゼを、前記性質、即ち容易な培養性、費用がかからない
及び広い存在によってすぐれている微生物で見出される
ことは予期することができなかった。
本発明の特別の利点は、サルコシンオキシダーゼの著し
く大きい活量が得られ、サルコシンオキシダーゼからの
その可溶性蛋白質２０％までが存在する菌株を見出すこ
とができたことである。好ましくは本発明範囲内では、
次のシュードモナス菌株を使用する： シュードモナス・マルトフイリア（Ｐｓｅｕａｏｍ−ｏ
ｎａｓ ｍａｌｔｏｐｈＮｉａ） （ＢＭＴＵ ２５４
） ＤＳＭ ２７００゜シュードモナス・マルトフイリ
ア（Ｐｓｅｕｄｏｍ−ｏｎａｓ ｍａｌｔｏｐｈｉｌｉ
ａ） （ＢＭＴＵ ２８８） ＤＳＭ ２７０１゜本発
明によって使用するシュードモナス菌株は、炭素及び窒
素の源としてのクレアチン又はサルコシン並びに塩及び
痕跡の元素を含有する裸地で極めて簡学に培養すること
ができる。
く大きい活量が得られ、サルコシンオキシダーゼからの
その可溶性蛋白質２０％までが存在する菌株を見出すこ
とができたことである。好ましくは本発明範囲内では、
次のシュードモナス菌株を使用する： シュードモナス・マルトフイリア（Ｐｓｅｕａｏｍ−ｏ
ｎａｓ ｍａｌｔｏｐｈＮｉａ） （ＢＭＴＵ ２５４
） ＤＳＭ ２７００゜シュードモナス・マルトフイリ
ア（Ｐｓｅｕｄｏｍ−ｏｎａｓ ｍａｌｔｏｐｈｉｌｉ
ａ） （ＢＭＴＵ ２８８） ＤＳＭ ２７０１゜本発
明によって使用するシュードモナス菌株は、炭素及び窒
素の源としてのクレアチン又はサルコシン並びに塩及び
痕跡の元素を含有する裸地で極めて簡学に培養すること
ができる。
適当な極小培地は、例えばクレアチ／又はサルコシン、
ＭｇＳＯ４、ＮａＣＡ、ＮＨ４（Ｊ、ＫＨ２ＰＯ４及び
Ｎａ２ＨＰＯ４からなる。これは、特にサルコシンオキ
シダーゼを大量に含んだ菌株の選択に適当である。痕跡
元素の適当な溶液はＭｎ ＸＦｅ、 Ｃａ。
ＭｇＳＯ４、ＮａＣＡ、ＮＨ４（Ｊ、ＫＨ２ＰＯ４及び
Ｎａ２ＨＰＯ４からなる。これは、特にサルコシンオキ
シダーゼを大量に含んだ菌株の選択に適当である。痕跡
元素の適当な溶液はＭｎ ＸＦｅ、 Ｃａ。
ＣｕＸｚｎＸＭＯ及びＣｏを含有する。ｊ！！！出する
ためには、微生物を、好ましくはクレアチ／又はサルコ
シンと共になお酵母抽出物、トリジトン及びＮａＣ）を
含有する培地で成長させる。
ためには、微生物を、好ましくはクレアチ／又はサルコ
シンと共になお酵母抽出物、トリジトン及びＮａＣ）を
含有する培地で成長させる。
特に大きい収率は、微生物にニトロソグアニジンを接種
し、続いて前記極小培地で更に培養する場合に得ること
ができ、その際特に十分に成長するコロニーを単離し、
更に培養する。
し、続いて前記極小培地で更に培養する場合に得ること
ができ、その際特に十分に成長するコロニーを単離し、
更に培養する。
本発明によって得られる酵素は、次の性質を有する：
…最適値二８．０
温度の安定性３７℃で１０分間；Ｐ１′Ｉδ、Ｏｏ残留
活−１■δ４％。
活−１■δ４％。
４５℃で１０分間］−３％
ＫＭザルコシ／１．Ｊｌ ８． Ｏｉ ）リス緩衝液０
．１Ｍ。
．１Ｍ。
２５℃、ＰＡＰ検出系：４Ｘ１０ Ｍ。
酵素の（４ｉ離は酵素精製の常法、例えばＢｉｏｃ−ｈ
ｅｍ、 Ｂｉｏｐｈｙｓ、 Ｒｅｓ、 Ｃｏｍｍ、 ９
６巻、９２４〜９３０頁（１９８年）に記載のようにし
て行なうことができる。しかしながら好ましくは濃縮法
であり、この方法では溶解後に、例えば高圧分散でポリ
エチレンイミ／の分別を行ない、得られた活性フラクシ
ョンを疎水性フェニルセファロースにＪ二ってクロマト
グラフィーを行なう。
ｅｍ、 Ｂｉｏｐｈｙｓ、 Ｒｅｓ、 Ｃｏｍｍ、 ９
６巻、９２４〜９３０頁（１９８年）に記載のようにし
て行なうことができる。しかしながら好ましくは濃縮法
であり、この方法では溶解後に、例えば高圧分散でポリ
エチレンイミ／の分別を行ない、得られた活性フラクシ
ョンを疎水性フェニルセファロースにＪ二ってクロマト
グラフィーを行なう。
続いて分子篩の分別及びオクチルセファロースの精製を
行なう。この方法によって、収率３０％以−にで特有活
量８〜９ Ｕ／Ｉｎ９を有する調剤が得られる。
行なう。この方法によって、収率３０％以−にで特有活
量８〜９ Ｕ／Ｉｎ９を有する調剤が得られる。
微生物は捕穫後、好ましくはポリエチレンイミン０．１
〜０３重量％を含有するＰ１１６〜９５の緩衝液中で機
械的に溶解する。不溶物を分離し、こうして得られた溶
解物の上澄みを水又は緩衝液でポリエチレンイミノ含量
０．０５重量％以下に希釈し、その際サルコシンオキシ
ダーゼが沈殿し、沈殿物として製出する１゜ こうして得られた酵素調剤を精製するためには、奸才し
くけ調剤を再び緩衝液に吸収させ、疎水性フェニルセフ
ァロースによって分別し、好ましくは下降性グラジェン
トで活性フラクションを硫酸アンモニウムで分別し、１
．８〜２．３Ｍの硫酸アンモニウムで沈殿するフラクシ
ョンに、例えば架橋アガロースの分子篩の導通を施こし
、最後にオクチルセファロースによってクロマトグラフ
ィーを行々う。このようにして特有活量約８．４Ｕ／”
！？を有する純粋の酵素がイ１られる。
〜０３重量％を含有するＰ１１６〜９５の緩衝液中で機
械的に溶解する。不溶物を分離し、こうして得られた溶
解物の上澄みを水又は緩衝液でポリエチレンイミノ含量
０．０５重量％以下に希釈し、その際サルコシンオキシ
ダーゼが沈殿し、沈殿物として製出する１゜ こうして得られた酵素調剤を精製するためには、奸才し
くけ調剤を再び緩衝液に吸収させ、疎水性フェニルセフ
ァロースによって分別し、好ましくは下降性グラジェン
トで活性フラクションを硫酸アンモニウムで分別し、１
．８〜２．３Ｍの硫酸アンモニウムで沈殿するフラクシ
ョンに、例えば架橋アガロースの分子篩の導通を施こし
、最後にオクチルセファロースによってクロマトグラフ
ィーを行々う。このようにして特有活量約８．４Ｕ／”
！？を有する純粋の酵素がイ１られる。
酵素を分析の目的に使用するだめには、精製は不必要で
あるか又は十分な程度では必要ではない。ポリエチレン
イミ／で製出した測定用の粗製酵素がなお多くの副活性
物を含有する場合に十分な純度を得るためには、原則と
してフェニルセファロース及び硫酸アンモニウムでの分
別で十分である。
あるか又は十分な程度では必要ではない。ポリエチレン
イミ／で製出した測定用の粗製酵素がなお多くの副活性
物を含有する場合に十分な純度を得るためには、原則と
してフェニルセファロース及び硫酸アンモニウムでの分
別で十分である。
発明の効果
本発明によって得られる酵素はその性質が公知酵素に相
応し、それ故詳細な記載は不必要である。本発明方法に
よって、酵素を簡単な方法で高収率で製出することがで
き、例えば生物学」二の液体でサルコシン又はサルコシ
ンに変換する化合物、例えばクレアチニンを測定するた
めに使用することができる。
応し、それ故詳細な記載は不必要である。本発明方法に
よって、酵素を簡単な方法で高収率で製出することがで
き、例えば生物学」二の液体でサルコシン又はサルコシ
ンに変換する化合物、例えばクレアチニンを測定するた
めに使用することができる。
実施例
例１
シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ）菌株を１
次の組成の極小培地中で３０℃で約２０時間発酵させた
。
次の組成の極小培地中で３０℃で約２０時間発酵させた
。
■ｌ当り：
Ｎａ２ＨＰ０４Ｈ２）（、，０’７− Ｏｊｉ’ＫＩＩ
２ＰＯ４３０ｆ！ ＮｌＩ４Ｃ１１，０！ｉ’ ＮａＣ１０，０５９ Ｍｇ５０４・７）Ｉ２０” （１０％）５ｍｌ（滅菌後
に添加） 痕跡液 ｌ ｍｅ クレアチン又はサルコシン（分離して滅菌）Ｈ７ Ｉ１１００ｍｌ当りノ痕跡液： ＭｎＳＯ４・２Ｈ２００１ｙ−ＦｅＳＯ４・７１１２０
０．１ｖ−ＣａＣＡ ２ ・２ Ｉ２０ ｏ、Ｉ Ｐ
Ｃ１１ＳＯ４・５ Ｉ２０ ｏ、０１９ ＺｎＣｌ３２
０、Ｏ］Ｊ−（ＮＨ４）２ＭＯＯ４０，０１５’−Ｃｏ
ＳＯ４’７Ｈ２０ｏ、ｏ：ｔ、ｐこの場合、次のサルコ
シンオキシダーゼの活量を、生じたＨ２Ｏ２をはかつて
測定した：例 ２ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａ （
ＢＭＴＵ ２５４）ＤＳＭ２７００を、ＬＢ培地（ジフ
コ−；・リゾト／１％、ジフコー酵ｍ−抽出物０，５％
、Ｎａ（Ｊｏ、５％、ＰＨ７，２）中で２８°Ｃで０Ｄ
４００〜６００ｎｍ＝１まで好気性で培養した。細胞を
０．１ Ｍ−クエン酸塩緩衝液（＋ＪＩ ５．５ ）中
で洗浄し、ニトロソグアニジン（８０１１ｙ／’ｍｅ
）を有する同じ緩衝液中で３０°Ｃで６０分間培養し、
次いで０．１Ｍ−燐酸塩緩衝液（ｐＨ７，０）で洗浄し
た。続いて３工程の好気性培養をＬＢ培地で２８℃で行
なった。
２ＰＯ４３０ｆ！ ＮｌＩ４Ｃ１１，０！ｉ’ ＮａＣ１０，０５９ Ｍｇ５０４・７）Ｉ２０” （１０％）５ｍｌ（滅菌後
に添加） 痕跡液 ｌ ｍｅ クレアチン又はサルコシン（分離して滅菌）Ｈ７ Ｉ１１００ｍｌ当りノ痕跡液： ＭｎＳＯ４・２Ｈ２００１ｙ−ＦｅＳＯ４・７１１２０
０．１ｖ−ＣａＣＡ ２ ・２ Ｉ２０ ｏ、Ｉ Ｐ
Ｃ１１ＳＯ４・５ Ｉ２０ ｏ、０１９ ＺｎＣｌ３２
０、Ｏ］Ｊ−（ＮＨ４）２ＭＯＯ４０，０１５’−Ｃｏ
ＳＯ４’７Ｈ２０ｏ、ｏ：ｔ、ｐこの場合、次のサルコ
シンオキシダーゼの活量を、生じたＨ２Ｏ２をはかつて
測定した：例 ２ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａ （
ＢＭＴＵ ２５４）ＤＳＭ２７００を、ＬＢ培地（ジフ
コ−；・リゾト／１％、ジフコー酵ｍ−抽出物０，５％
、Ｎａ（Ｊｏ、５％、ＰＨ７，２）中で２８°Ｃで０Ｄ
４００〜６００ｎｍ＝１まで好気性で培養した。細胞を
０．１ Ｍ−クエン酸塩緩衝液（＋ＪＩ ５．５ ）中
で洗浄し、ニトロソグアニジン（８０１１ｙ／’ｍｅ
）を有する同じ緩衝液中で３０°Ｃで６０分間培養し、
次いで０．１Ｍ−燐酸塩緩衝液（ｐＨ７，０）で洗浄し
た。続いて３工程の好気性培養をＬＢ培地で２８℃で行
なった。
細胞を更に前記燐酸塩緩衝液で洗浄し、炭素及び窒素の
源としてのクレアチン又はザルコシンＯ９，５％を有す
る極小培地（培地１１当ｈ Ｎ ａ ２ＨＰＯ４０，６
％、ＫＨ２ＰＯ４０，３％、ＮａＣＡｏ、０５％、Ｍｇ
ＳＯ４１ｍＭＸＣａＣ６２０，１ｍＭ１痕跡ｄ”＞上に
平らにのばした。出発菌株と比較して十分に生長したム
ク／テン（Ｍｕｔａｎｔｅｎ ）を単離し、前記の原則
によって更にニトロソグアニジン処理及び続いてクレア
チン又はサルコシン０．５％を有する極小培地での選択
を施こした。
源としてのクレアチン又はザルコシンＯ９，５％を有す
る極小培地（培地１１当ｈ Ｎ ａ ２ＨＰＯ４０，６
％、ＫＨ２ＰＯ４０，３％、ＮａＣＡｏ、０５％、Ｍｇ
ＳＯ４１ｍＭＸＣａＣ６２０，１ｍＭ１痕跡ｄ”＞上に
平らにのばした。出発菌株と比較して十分に生長したム
ク／テン（Ｍｕｔａｎｔｅｎ ）を単離し、前記の原則
によって更にニトロソグアニジン処理及び続いてクレア
チン又はサルコシン０．５％を有する極小培地での選択
を施こした。
註（キ）痕跡液は工ＱＱｍ（！当り次のものを含イ１°
する・ Ｆｅ５０ Ｘ ７ＴＩ Ｏ０，００７！２ ＭｎＣｌ２Ｘ ４Ｈ２００，０１５’；ｌＺｎ５ＯＸ
７Ｈ２００−０１５！ Ｃｕ５ＯＸ ５Ｈ２００，ＯＯｌ ５ Ｓ’ＣａＣ１ｘ
５）ｒｏ Ｏ，０Ｏ１５Ｌｉ２ ＮａＭｏＯＸ ２ＨＯＯ，００１５’；！２ ＮｉＣＩ Ｘ６ＨＯＯ，００１５グ ２ この選択から得られた単離物を、次の組成の培地で約３
２時間発酵させた： ジフコートリプトノ １％ ジフコー酵母抽出物 ０．５％ サルコシン ０．５％ ＮａＣＡ Ｏ，５％ Ｐ＋４７．１ 、２５°Ｃ 活量１２００Ｕ／培養液ｌの活量の収揃が得られた。粗
製抽出物の上澄みで、サルコシンオキシダーゼの特有活
量１．９Ｕ／”９を測定した；これは可済性蛋白質約２
２％に相応する。
する・ Ｆｅ５０ Ｘ ７ＴＩ Ｏ０，００７！２ ＭｎＣｌ２Ｘ ４Ｈ２００，０１５’；ｌＺｎ５ＯＸ
７Ｈ２００−０１５！ Ｃｕ５ＯＸ ５Ｈ２００，ＯＯｌ ５ Ｓ’ＣａＣ１ｘ
５）ｒｏ Ｏ，０Ｏ１５Ｌｉ２ ＮａＭｏＯＸ ２ＨＯＯ，００１５’；！２ ＮｉＣＩ Ｘ６ＨＯＯ，００１５グ ２ この選択から得られた単離物を、次の組成の培地で約３
２時間発酵させた： ジフコートリプトノ １％ ジフコー酵母抽出物 ０．５％ サルコシン ０．５％ ＮａＣＡ Ｏ，５％ Ｐ＋４７．１ 、２５°Ｃ 活量１２００Ｕ／培養液ｌの活量の収揃が得られた。粗
製抽出物の上澄みで、サルコシンオキシダーゼの特有活
量１．９Ｕ／”９を測定した；これは可済性蛋白質約２
２％に相応する。
例 ３
サルコシ／オキシダーゼＥＣ１，５，３，１の単評１゜
湿潤物質のＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｍａｌｔｏｐｈｉ
ｌｉａ、 ＢＭＴＵ２５４、 ｒ）ＳＭ ２７００ ２
．ＩＫ９ （培養液１００２から得られた、例２）を、
ＴＲｌ５緩衝剤（ｐＨ８、Ｏ）２００ｍモル／ｌと懸濁
させ（１８１）、高圧分散機中で６５０ ａｔｍ、ｓ＋
で溶解した。溶解液にポリミノ（Ｐｏ１１ｍ１ｎ ）
Ｇ３．ＣＢＡＳＦ社製、西ドイツ国〕を、核酸及び異種
蛋白質の十分な分離が行なわれる（０．２％）ように大
量に添加した。
ｌｉａ、 ＢＭＴＵ２５４、 ｒ）ＳＭ ２７００ ２
．ＩＫ９ （培養液１００２から得られた、例２）を、
ＴＲｌ５緩衝剤（ｐＨ８、Ｏ）２００ｍモル／ｌと懸濁
させ（１８１）、高圧分散機中で６５０ ａｔｍ、ｓ＋
で溶解した。溶解液にポリミノ（Ｐｏ１１ｍ１ｎ ）
Ｇ３．ＣＢＡＳＦ社製、西ドイツ国〕を、核酸及び異種
蛋白質の十分な分離が行なわれる（０．２％）ように大
量に添加した。
明確な酵素の沈殿には、Ｈ２Ｏでの希釈で十分である。
ザルコシンオキシダーゼの沈殿を、硫酸アンモニウム１
ｍモル／ｌを含有する２０ｍモル／ｌのＴＲ１ｓ （ｐ
Ｈ８，０） １．５１Ｊで溶解し、透析した。フェニル
セファロース（ＰＨ８，０） ノ疎水性クロマトグラフ
ィーを下降グラジェントで行カッだ。硫酸アンモニウム
（１，８〜２．３モル／ｌ ）による塩の分別後に、セ
ファロースＳ 、、ｏｏ（ＰＨＡ−ＲＭＡＣＩＡ）の分
子篩の導通を行なった。サルコシンオキシダーゼのピー
クを、オクチルセファロースでｌ）Ｈ５，３〜７．０（
上昇ＰＬｌグラジェント）で８．３Ｕ／蛋白質■まで精
製した。精製酵素はウリカーゼ及びカタラーゼを含まず
、ＳＤＳディスク電気泳動でスズキ（５ｕｚｕｋｉ ）
（Ｊ、 Ｂｉｏ −ｃｈｅｍ、 ８９巻、５９９〜６
０７頁、１９８１年〕のコリネバクテリア（Ｃｏｒｙｎ
ｅｂａｅｔｅｒｉｕｍ ） ０９６からの酵素のように
、４つの異なる下位単位を示す。次表は濃縮及び収率を
示す。
ｍモル／ｌを含有する２０ｍモル／ｌのＴＲ１ｓ （ｐ
Ｈ８，０） １．５１Ｊで溶解し、透析した。フェニル
セファロース（ＰＨ８，０） ノ疎水性クロマトグラフ
ィーを下降グラジェントで行カッだ。硫酸アンモニウム
（１，８〜２．３モル／ｌ ）による塩の分別後に、セ
ファロースＳ 、、ｏｏ（ＰＨＡ−ＲＭＡＣＩＡ）の分
子篩の導通を行なった。サルコシンオキシダーゼのピー
クを、オクチルセファロースでｌ）Ｈ５，３〜７．０（
上昇ＰＬｌグラジェント）で８．３Ｕ／蛋白質■まで精
製した。精製酵素はウリカーゼ及びカタラーゼを含まず
、ＳＤＳディスク電気泳動でスズキ（５ｕｚｕｋｉ ）
（Ｊ、 Ｂｉｏ −ｃｈｅｍ、 ８９巻、５９９〜６
０７頁、１９８１年〕のコリネバクテリア（Ｃｏｒｙｎ
ｅｂａｅｔｅｒｉｕｍ ） ０９６からの酵素のように
、４つの異なる下位単位を示す。次表は濃縮及び収率を
示す。
湿潤物質のシュードモナス・マルトフイリア（Ｐｓｅｕ
ｄｏｍｏｎａｓ ｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａ ） ２．
Ｉ ＫＳ’からのサルコシンオキシダーゼの濃縮。
ｄｏｍｏｎａｓ ｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａ ） ２．
Ｉ ＫＳ’からのサルコシンオキシダーゼの濃縮。
第１頁の続き
Ｏ発明者 ハンス・ザイデル トイツ
ユトラ
０発 明 者 アルベルト・レーダー ドイツーク
連邦共和国トウライング・ヴアクセンシュタインシーセ
６
６
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 ｌ、微生物から、これを培養し、ビオマス又は培養液か
ら酵素を得ることによってサルコシンオキシダーゼを製
出する方法ニおいて、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍ
ｏｎａｓ ）菌株を培養することを特徴とする、微生物
からのサルコシンオキシダーゼの製出法。 ２、 シュードモナス・マルトフイリア（Ｐｓｅｕ −
ｄｏｍｏｎａｓ ｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａ ） （ＢＭ
ＴＵ ２５牛）ＤＳＭ２７００又はシュードモナス・マ
ルトフイリア（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｍａｌｔｏｐ
ｈｉｌｉａ ） （ＢＭＴＵ ２８８ ）ＤＳＭ ２７
０１を特徴する特許請求の範囲第１項記載の方法。 ３、野生菌株からニトロソグアニジンで処理して（ｌ
ラれるシュードモナス・ムタンテン（ｐ−ｓｅｕｄｏｍ
ｏｎａｓ−Ｍｕｔａｎｔｅｎ ）を特徴する特許請求の
範囲第２項記載の方法。 屯 炭素及び窒素の源としてのクレアチンでの選択を施
こしたシュードモナス・ムタ／テノ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏ
ｎａｓ−Ｍｕｔａｎｔｅｎ ）を特徴する特許請求の範
囲第２項又は第３項記載の方法。 ５、 クレアチン又は／及びサルコシン、トリシト／、
酵母抽出物及び食塩並びに痕跡の元素を含有する培地で
培養する、特許請求の範囲第１項から第４項までのいず
れか１項記載の方法。 ６ 微生物を、ポリエチレンイミ１０．１〜０．３重量
％を含有する緩衝液（ｐＨ６〜９．５）中で機械的に溶
解し、不溶物を分離し、その上澄みを水でポリエチレン
イミン最高０．０５％の含量に希釈し、形成した沈殿物
全製出する、特許請求の範囲第１項から第５項までのい
ずれか１項記載の方法。 ７、精製するために沈殿物を緩衝液に溶解し、疎水性フ
ェニルセファロースによって分別し、活性フラクション
を硫酸アンモニウムで処理し、１．８〜３．２Ｍ−硫酸
アンモニウムによって不溶性フラクションが得られ、分
子篩の分別及びオクチルセファロースによるクロマトグ
ラフィーを施こす、特許請求の範囲第６項記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
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| DE19833326888 DE3326888A1 (de) | 1983-07-26 | 1983-07-26 | Sarcosin-oxidase |
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| JPS6043379A true JPS6043379A (ja) | 1985-03-07 |
| JPS6219153B2 JPS6219153B2 (ja) | 1987-04-27 |
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