JPS6028987A - 新規ジゴキシン誘導体 - Google Patents
新規ジゴキシン誘導体Info
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- JPS6028987A JPS6028987A JP13879483A JP13879483A JPS6028987A JP S6028987 A JPS6028987 A JP S6028987A JP 13879483 A JP13879483 A JP 13879483A JP 13879483 A JP13879483 A JP 13879483A JP S6028987 A JPS6028987 A JP S6028987A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
この発明は、免疫化学的方法によってジゴキシンを定量
する際に用いる抗体を作製するために有用な新規なジ′
ゴキシン誘導体に関する。
する際に用いる抗体を作製するために有用な新規なジ′
ゴキシン誘導体に関する。
シ゛ゴキシンは心臓刺激剤として用いられる強心性配糖
体である。この化合物の強心作用の速さはジギトキシン
より早く、スト０７アンチンより遅い。内服としても有
効であるが、一般に静注の１゜５倍量を必要とする。内
服としての１日の投与鼠は初期投与として０．７５ ｑ
〜１．５■、維持投与として０．２５ ｍｇ〜０．７５
■と極少量である。また治療としての効果の発現と、毒
性を発現する量との差は極くわずかである。それ故、血
清あるいは血雑 葉中のジゴキシン濃度を正解に把握しておくことは臨床
医にとって極めて重要なことである。このジゴキシン濃
度を正確に測定する方法としてはガスクルマドグラフィ
ー法等が多用されてきたが、最近においては免疫化学的
方法が多く用いられるようになり、中でも放射免疫測定
（ＲＩＡ） 、酵素免疫測定（ＥＩＡ）等が多用されて
いる。これらの方法に用いられる抗体を作製する際に宿
主動物に投与するハプテン抗原は、例えば以下に示す方
法によって製造されている。
体である。この化合物の強心作用の速さはジギトキシン
より早く、スト０７アンチンより遅い。内服としても有
効であるが、一般に静注の１゜５倍量を必要とする。内
服としての１日の投与鼠は初期投与として０．７５ ｑ
〜１．５■、維持投与として０．２５ ｍｇ〜０．７５
■と極少量である。また治療としての効果の発現と、毒
性を発現する量との差は極くわずかである。それ故、血
清あるいは血雑 葉中のジゴキシン濃度を正解に把握しておくことは臨床
医にとって極めて重要なことである。このジゴキシン濃
度を正確に測定する方法としてはガスクルマドグラフィ
ー法等が多用されてきたが、最近においては免疫化学的
方法が多く用いられるようになり、中でも放射免疫測定
（ＲＩＡ） 、酵素免疫測定（ＥＩＡ）等が多用されて
いる。これらの方法に用いられる抗体を作製する際に宿
主動物に投与するハプテン抗原は、例えば以下に示す方
法によって製造されている。
（Ｂ１００ＨＦ！ＭＩ８ＴＲＹ ９巻（２） １９７０
年３３１頁゛〜３３７頁参照） 上述した方法をはじめとして現在までに調製されている
ハプテン抗原は、いずれもジゴキシンの糖部分またはス
テ四イド核３位を介してキャリヤー蛋白と結合させたも
のである。そのため得られた抗体は糖部分の認識が不十
分であり、それ故。
年３３１頁゛〜３３７頁参照） 上述した方法をはじめとして現在までに調製されている
ハプテン抗原は、いずれもジゴキシンの糖部分またはス
テ四イド核３位を介してキャリヤー蛋白と結合させたも
のである。そのため得られた抗体は糖部分の認識が不十
分であり、それ故。
このような抗体を用いてジゴキシンの血中濃度を測定す
る場合は、生理作用の派別あるいは消失してしまった代
謝産物をもジゴキシンと同時に定量する結果となり、本
来の目的である生理作用を有するジゴキシンの血中濃度
を正確に把握することはできない。
る場合は、生理作用の派別あるいは消失してしまった代
謝産物をもジゴキシンと同時に定量する結果となり、本
来の目的である生理作用を有するジゴキシンの血中濃度
を正確に把握することはできない。
本発明者等は、上記事情に鑑み生理作用を有するジゴキ
シンにのみ高い特異性を有するジゴキシン抗体を得るた
めに種々のハプテンを作製し、さらにハプテン抗原を作
製して、それらの抗体の特異性を調べた結果、ステロイ
ド核の１７位を介して調製したハプテン抗原により得ら
れた抗体がジゴキシンとジゴキシン代謝産物との識別を
十分になし、従ってより正確なジゴキシンの血中濃度の
把握ができるとの知見を得、本発明を完成した。
シンにのみ高い特異性を有するジゴキシン抗体を得るた
めに種々のハプテンを作製し、さらにハプテン抗原を作
製して、それらの抗体の特異性を調べた結果、ステロイ
ド核の１７位を介して調製したハプテン抗原により得ら
れた抗体がジゴキシンとジゴキシン代謝産物との識別を
十分になし、従ってより正確なジゴキシンの血中濃度の
把握ができるとの知見を得、本発明を完成した。
即ち本発明は式
（式中Ｒバー０００Ｈ，−０ＯＮＨＯＨ２０００１１）
で表わされる新規な化合物である。
で表わされる新規な化合物である。
さらにまた本発明は上記式（１）で表わされる化合物の
ステロイド核１７位のＢに常法によりキャリヤー蛋白を
抱合してなる下記式ＣＩＦ） ＊表わされる新規な化合
物である。
ステロイド核１７位のＢに常法によりキャリヤー蛋白を
抱合してなる下記式ＣＩＦ） ＊表わされる新規な化合
物である。
式
（式中人は−ＮＨＹまたは−ＮＨＯＨ２００−ＮＨＹで
あり、−ＮＨＹはキャリヤー蛋白残基である。）本発明
の式ＣＩ）ならびに式（１）で表わされる化合物は、例
えば次の反応式に沿って製造することができる。
あり、−ＮＨＹはキャリヤー蛋白残基である。）本発明
の式ＣＩ）ならびに式（１）で表わされる化合物は、例
えば次の反応式に沿って製造することができる。
（反応式中Ａｃ はアセチル基を、Ｒおよび人は前記と
同じ） 上記反応式において、式ＣＩＩＩ）の化合物はジゴキシ
ンペンタアセテートであり、公知化合物であって、例え
ば）Ｌ −Ｗ、 Ｖｏｉｇｔｌｉｎｄｅｒ 、 Ｇ、
Ｂａｌｓａｍ、 Ａｒｃｈ、 Ｐｈａｒｍ、 。
同じ） 上記反応式において、式ＣＩＩＩ）の化合物はジゴキシ
ンペンタアセテートであり、公知化合物であって、例え
ば）Ｌ −Ｗ、 Ｖｏｉｇｔｌｉｎｄｅｒ 、 Ｇ、
Ｂａｌｓａｍ、 Ａｒｃｈ、 Ｐｈａｒｍ、 。
３０１、．２０Ｂ−２１９（１９６３）に示されている
方法によって得られる。この化合物を例えばアセトン。
方法によって得られる。この化合物を例えばアセトン。
酢酸あるいはメタノールの如き有機溶媒中で過マンガン
酸カリウム、西酢酸鉛、オゾン等の酸化剤を用いて酸化
反応に付したのち、反応液を常法の精製手段（例えば抽
出−カラムクロマトグラフィー−再結晶）で精製するこ
とにより式〔■〕の化合物（無色非結晶性物質）が得ら
れる。次いで、この化合物を例えばアルコール性水酸基
を有するアルカリ性済媒中で加水分解反応に付したのち
、反応液を常法により精製することにより式（１）中具
が一０００Ｈの化合物（ｒ（Ｉａ）の化合物」という）
撫色油状物質）が得られる。
酸カリウム、西酢酸鉛、オゾン等の酸化剤を用いて酸化
反応に付したのち、反応液を常法の精製手段（例えば抽
出−カラムクロマトグラフィー−再結晶）で精製するこ
とにより式〔■〕の化合物（無色非結晶性物質）が得ら
れる。次いで、この化合物を例えばアルコール性水酸基
を有するアルカリ性済媒中で加水分解反応に付したのち
、反応液を常法により精製することにより式（１）中具
が一０００Ｈの化合物（ｒ（Ｉａ）の化合物」という）
撫色油状物質）が得られる。
この（Ｉａ）の化合物を更にカルボキシル基とアミ７基
とをアミド結合によって結合させるための常套手段（例
えば、活性エステル法、混合酸無水物法、縮合剤を用い
る方法等）によってグリシンと反応させたのち、反応液
を常法により精製することにより式〔Ｉ〕中Ｒが一０Ｏ
ＮＨＯＨ２０００Ｈの化合物（ｒｌｌＩｂ）の化合物」
という）（無色非結晶性物質）が得られる。当該式ＣＩ
）で衷わされる化合物は新規であり、ジゴキシンのハプ
テン抗原作製用ハブテンとして有用な化合物である。更
に前記反応式に沿って式（１）の化合物と牛血清アルブ
ミンあるいはヒト血清アルブミンの如きキャリヤー蛋白
とを、カルボキシル基とアミノ基とをアミド結合によっ
て結合させるための前述の如き常套手段によって結合さ
せることにより式［１１）で表わされる化合物が得られ
る。当該化合物のうちＡが−ＮＨＹの化合物（ｒ（：Ｉ
ｌａ、Ｉの化合物」という）は前記（Ｉａ）の化合物に
キャリヤー蛋白を結合させることにより得られる。また
人が−Ｎ）ＩＯＨ２００−ＮＨＹの化合物（ｒ（ｌｂ〕
の化合物」という）は前記〔Ｉｂ）の化合物にキャリヤ
ー蛋白を結合させることにより得やれる。式ＣＩ〕で表
わされる化合物は新規であり、免疫化学的方法によりジ
ゴキシンを測定する際に用いる抗体を作製するのに従来
使用されていた他の化合物と同様の方法で抗原として使
用できる。
とをアミド結合によって結合させるための常套手段（例
えば、活性エステル法、混合酸無水物法、縮合剤を用い
る方法等）によってグリシンと反応させたのち、反応液
を常法により精製することにより式〔Ｉ〕中Ｒが一０Ｏ
ＮＨＯＨ２０００Ｈの化合物（ｒｌｌＩｂ）の化合物」
という）（無色非結晶性物質）が得られる。当該式ＣＩ
）で衷わされる化合物は新規であり、ジゴキシンのハプ
テン抗原作製用ハブテンとして有用な化合物である。更
に前記反応式に沿って式（１）の化合物と牛血清アルブ
ミンあるいはヒト血清アルブミンの如きキャリヤー蛋白
とを、カルボキシル基とアミノ基とをアミド結合によっ
て結合させるための前述の如き常套手段によって結合さ
せることにより式［１１）で表わされる化合物が得られ
る。当該化合物のうちＡが−ＮＨＹの化合物（ｒ（：Ｉ
ｌａ、Ｉの化合物」という）は前記（Ｉａ）の化合物に
キャリヤー蛋白を結合させることにより得られる。また
人が−Ｎ）ＩＯＨ２００−ＮＨＹの化合物（ｒ（ｌｂ〕
の化合物」という）は前記〔Ｉｂ）の化合物にキャリヤ
ー蛋白を結合させることにより得やれる。式ＣＩ〕で表
わされる化合物は新規であり、免疫化学的方法によりジ
ゴキシンを測定する際に用いる抗体を作製するのに従来
使用されていた他の化合物と同様の方法で抗原として使
用できる。
次に実施例並びに参考例によって本発明を説明する。
実施例Ｌ
（イ）ジゴキシンペンタアセテ−） （ＩＩ） １００
ｒｑをアセトン５−に溶解させたのち、過マンガン酸カ
リウム４０■加え、室温で１２時間放置した。反応終了
後、過剰の過マンガン酸カリウムを分解するためにしゅ
う酸を添加した。次いで沈澱物を炉別したのち、ν液を
酢酸エチルで抽出した。有機層をとり５％炭酸水素ナト
リウム水溶液および水で順次洗浄したのち無水硫酸ナト
リウムで乾燥後、溶媒を減圧濃縮により除去した。残渣
をクロ四ホルム：メタご−ル（１０： ＩＹ／ｖ）を溶
出液とするシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけ
た。
ｒｑをアセトン５−に溶解させたのち、過マンガン酸カ
リウム４０■加え、室温で１２時間放置した。反応終了
後、過剰の過マンガン酸カリウムを分解するためにしゅ
う酸を添加した。次いで沈澱物を炉別したのち、ν液を
酢酸エチルで抽出した。有機層をとり５％炭酸水素ナト
リウム水溶液および水で順次洗浄したのち無水硫酸ナト
リウムで乾燥後、溶媒を減圧濃縮により除去した。残渣
をクロ四ホルム：メタご−ル（１０： ＩＹ／ｖ）を溶
出液とするシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけ
た。
目的物を含む７ラクシ目ンをとり、減圧濃縮によりて溶
媒を除去したのち残渣をエーテルーヘキナンより再結晶
し、無色非結晶性の式〔■〕の化合物１０りを得た。
媒を除去したのち残渣をエーテルーヘキナンより再結晶
し、無色非結晶性の式〔■〕の化合物１０りを得た。
融点２１６〜２２０℃
〔α〕賃＋４０．０°（０＝０．１０．クロロホルム−
メタノール（１：１））。
メタノール（１：１））。
Ｎ Ｍ Ｒ／ （０ＤｓＯＤ −０ＤＯｊｔａ）δ：
０．９５（６Ｈ，ｂｒＳｏ １８− ｔ １９−０Ｈａ
） ｅ １．１５ （９Ｈ，ｖｙｈ、 ｓｕｇａｒ−Ｏ
Ｈ３） 、２．００ａｎｄ ２．１０（３Ｈａｎｄ １
２Ｈ，ｅａｃｈｓ。
０．９５（６Ｈ，ｂｒＳｏ １８− ｔ １９−０Ｈａ
） ｅ １．１５ （９Ｈ，ｖｙｈ、 ｓｕｇａｒ−Ｏ
Ｈ３） 、２．００ａｎｄ ２．１０（３Ｈａｎｄ １
２Ｈ，ｅａｃｈｓ。
１２− 、 ｓｕｇａｒ −００００Ｈ３）元素分析値
分子式０４８Ｈ７２０１９・Ｈ２ＯとしてＯＨ 理論値（２） ５９．３７ ７．６８ 実測値（１） ５９．０４ ７．３３ （ロ）（イ）の方法によって得た〔■〕の化合物１５■
をメタノール１．５１＋！７＋に溶解させ、これに１０
％水酸化ナトリーウムメタノール拵液０．５ ｖｔｌｌ
を加え室温で１２時間反応させた。次いで反応液に水１
０ゴを加えて希釈したのち減圧濃縮した。残溜液をアン
バーライトＸＡＤ−４（ロームアンドハース社製）カラ
ム（０，６ｔｙｎ Ｘ ２０ ｃｍ ）に通導し水で洗
浄後アンモニア性メタノールで溶出し、溶出液より［Ｉ
ａ）の化合物（無色油状物質）１０π１を得た０化学構
造を明らかにするために、この（Ｉａ ）の化合物５り
を、メタノール１ｄに溶解させ、ジアゾメタンのエーテ
ル溶液と反応させたのち常法により無色油状のメチルエ
ステル体を得た。
分子式０４８Ｈ７２０１９・Ｈ２ＯとしてＯＨ 理論値（２） ５９．３７ ７．６８ 実測値（１） ５９．０４ ７．３３ （ロ）（イ）の方法によって得た〔■〕の化合物１５■
をメタノール１．５１＋！７＋に溶解させ、これに１０
％水酸化ナトリーウムメタノール拵液０．５ ｖｔｌｌ
を加え室温で１２時間反応させた。次いで反応液に水１
０ゴを加えて希釈したのち減圧濃縮した。残溜液をアン
バーライトＸＡＤ−４（ロームアンドハース社製）カラ
ム（０，６ｔｙｎ Ｘ ２０ ｃｍ ）に通導し水で洗
浄後アンモニア性メタノールで溶出し、溶出液より［Ｉ
ａ）の化合物（無色油状物質）１０π１を得た０化学構
造を明らかにするために、この（Ｉａ ）の化合物５り
を、メタノール１ｄに溶解させ、ジアゾメタンのエーテ
ル溶液と反応させたのち常法により無色油状のメチルエ
ステル体を得た。
Ｎ Ｍ Ｒ（０ＤＯｆｉ３− ＯＤ３０Ｄ ）δ： ０
．９０（３Ｈ，、ｓ 、１Ｂ−ＯＨａ） 、 ０．９５
（３Ｈ，ｓ 、 １９−０Ｈｓ） 、 Ｌ２５ （９
Ｈ，ｍ、 ｓｕｇａｒ−ＯＨ３） ＋ ３．７０（３Ｈ
＋ ｓ 、 ０００ＣＨ３） 実施例２、 実施例１の方法によって製造されたＣＩａ）の化合物１
２ｒｎｇをジメチルホルムアミド０．８ ｔｘｌに溶解
、氷冷下トリー外−ブチルアミン１２１ｉとイソブチル
クロロホルメート６μＬを加えたのち４℃で２０分間放
置した。次いでグリシン溶液（４０■／−）（ｐＨ１０
） ｌＨｌを加えたのち更に４℃で１２時間放置した。
．９０（３Ｈ，、ｓ 、１Ｂ−ＯＨａ） 、 ０．９５
（３Ｈ，ｓ 、 １９−０Ｈｓ） 、 Ｌ２５ （９
Ｈ，ｍ、 ｓｕｇａｒ−ＯＨ３） ＋ ３．７０（３Ｈ
＋ ｓ 、 ０００ＣＨ３） 実施例２、 実施例１の方法によって製造されたＣＩａ）の化合物１
２ｒｎｇをジメチルホルムアミド０．８ ｔｘｌに溶解
、氷冷下トリー外−ブチルアミン１２１ｉとイソブチル
クロロホルメート６μＬを加えたのち４℃で２０分間放
置した。次いでグリシン溶液（４０■／−）（ｐＨ１０
） ｌＨｌを加えたのち更に４℃で１２時間放置した。
反応液をエーテルで抽出したのち、有機層をアンバーラ
イトＸ入Ｄ−４（ロームアンドハース社製）カラム（０
，６ａｎＸ２１）ｚ）にかけた。
イトＸ入Ｄ−４（ロームアンドハース社製）カラム（０
，６ａｎＸ２１）ｚ）にかけた。
水で洗浄後、アンモニア性メタノールで目的物を溶出し
、溶出液をクロルホルム：メタノール：水が８０：２０
：２．５の展開溶媒を用いて分取用薄層クロマトグラフ
ィーに付した。次いでＲｆ値が０゜１０のスポットを採
りクロロホルム：メタノール：水が７０：３０：３の溶
出液で目的物を溶出し、メタノール−エーテルから再結
晶し、（Ｉｂ）の化合物（無色非晶性物質）５．５π２
を得た。
、溶出液をクロルホルム：メタノール：水が８０：２０
：２．５の展開溶媒を用いて分取用薄層クロマトグラフ
ィーに付した。次いでＲｆ値が０゜１０のスポットを採
りクロロホルム：メタノール：水が７０：３０：３の溶
出液で目的物を溶出し、メタノール−エーテルから再結
晶し、（Ｉｂ）の化合物（無色非晶性物質）５．５π２
を得た。
融 点 １８０〜１８４℃
〔α）１．、’＋１５．０°（Ｃ子〇、１０．メタノー
ル）。
ル）。
構造を明らかにするために（Ｉｂ ）の化合物を実施例
１（ロ）（Ｉａ）の化合物のメチルエステル体を得る方
法と同様にして無色油状の（Ｉｂ ）の化合物のメチル
エステル体を得た。
１（ロ）（Ｉａ）の化合物のメチルエステル体を得る方
法と同様にして無色油状の（Ｉｂ ）の化合物のメチル
エステル体を得た。
Ｎ Ｍ Ｒ（ＯＤ３０Ｄ−ＯＤＯＪ！３）δ：０．９０
（３Ｈ，ｓ、１８−０Ｈｓ）、０．９５（３Ｈ，ｓ、１
９−０Ｈｓ）、１．３０（９Ｈ，ｗ、ｓｕｇａｒ−ＣＩ
Ｈ３）、３．７０（５Ｈ，ｓ 、Ｃｏ。
（３Ｈ，ｓ、１８−０Ｈｓ）、０．９５（３Ｈ，ｓ、１
９−０Ｈｓ）、１．３０（９Ｈ，ｗ、ｓｕｇａｒ−ＣＩ
Ｈ３）、３．７０（５Ｈ，ｓ 、Ｃｏ。
ＯＨ３，Ｎ０Ｈ２００）。
実施例３゜
実施例１の方法により得た（ Ｉａ ）の化合物７■を
ジメチルホルムアミド０．５ ｒｔｔｌに溶解させたの
ち、氷冷下トリー外−ブチルアミン１２μＬとイソブチ
ルクロロホルメート８μｍを加え３０分間攪拌した。
ジメチルホルムアミド０．５ ｒｔｔｌに溶解させたの
ち、氷冷下トリー外−ブチルアミン１２μＬとイソブチ
ルクロロホルメート８μｍを加え３０分間攪拌した。
次いで牛血清アルブミン（ＢＳＡ）溶液（３０１ｎｇ／
−）０．５ｄを加え、４℃で１２時間攪拌反応させた。
−）０．５ｄを加え、４℃で１２時間攪拌反応させた。
反応終了後反応液を冷流水で４８時間透析し、沈澱物を
析出させた。沈澱物を除去し、得られた上清を凍結乾燥
して［、ｌｂ’）の化合物（綿毛状の粉末）２０■を得
た。硫酸を用いて発色させ、吸光光度法により測定した
結果、ＢＳ人１モルに対し、２０モルの〔Ｉａ〕の化合
物が結合していることが確認された。
析出させた。沈澱物を除去し、得られた上清を凍結乾燥
して［、ｌｂ’）の化合物（綿毛状の粉末）２０■を得
た。硫酸を用いて発色させ、吸光光度法により測定した
結果、ＢＳ人１モルに対し、２０モルの〔Ｉａ〕の化合
物が結合していることが確認された。
実施例４゜
実施例２の方法により得た（Ｉｂ）の化合物を実施例３
と同様にして処理し、ＣＩ［ｂ：］の化合物（綿毛状の
粉末）２０■を得た。硫酸を用いて発色させる吸光光度
法により測定した結果、Ｂ５Ａｌモルに対し、２５モル
の〔より〕の化合物が結合していることが確認された。
と同様にして処理し、ＣＩ［ｂ：］の化合物（綿毛状の
粉末）２０■を得た。硫酸を用いて発色させる吸光光度
法により測定した結果、Ｂ５Ａｌモルに対し、２５モル
の〔より〕の化合物が結合していることが確認された。
参考例り
抗血清の作製
実施例３で得た３β、１２β、１４β−トリハイドロキ
シ−５β−１７β−エチアン＠３−トリジギトキソサイ
ドーＢＳＡ抱合体（（Ｉ［ａ）の化合物）６ｒＲＰを生
理食塩水１．５ ｄ 、フルインド完全アジュパン）（
Ｆｒｅｕｎｄ’ｓ ｃｏｍｐｌｅｔｅ ａｊｕｖａｎｔ
） Ｌ ５ ｙｄに乳濁させ、これを３羽の白色家兎
（オス）の四肢爪裏皮下魁よび背部及下数箇所に投与し
た。以後２週問おきに３回投与、次いで１力月に１度ず
つ投与を繰返し、初投与後６カ月に最終投与を行なった
。最終投与の１０日後にこの家兎より全採血しこれを３
０００回転、１０分間遠心分離し、抗血清を得た。この
抗血清をＢ Ｓ Ａ Ｏ，０６％、ウシガンマグ四プリ
ン０、０５ Ｘを含む０．０５ Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ
７，４）で１：１０００，１：２０００および１：４０
００の３種の稀釈率で稀釈し、量−反応曲線を作成した
。この３種の稀釈率による溶液の中では１：２０００の
割合で稀釈した標準曲線が測定に最適であった。
シ−５β−１７β−エチアン＠３−トリジギトキソサイ
ドーＢＳＡ抱合体（（Ｉ［ａ）の化合物）６ｒＲＰを生
理食塩水１．５ ｄ 、フルインド完全アジュパン）（
Ｆｒｅｕｎｄ’ｓ ｃｏｍｐｌｅｔｅ ａｊｕｖａｎｔ
） Ｌ ５ ｙｄに乳濁させ、これを３羽の白色家兎
（オス）の四肢爪裏皮下魁よび背部及下数箇所に投与し
た。以後２週問おきに３回投与、次いで１力月に１度ず
つ投与を繰返し、初投与後６カ月に最終投与を行なった
。最終投与の１０日後にこの家兎より全採血しこれを３
０００回転、１０分間遠心分離し、抗血清を得た。この
抗血清をＢ Ｓ Ａ Ｏ，０６％、ウシガンマグ四プリ
ン０、０５ Ｘを含む０．０５ Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ
７，４）で１：１０００，１：２０００および１：４０
００の３種の稀釈率で稀釈し、量−反応曲線を作成した
。この３種の稀釈率による溶液の中では１：２０００の
割合で稀釈した標準曲線が測定に最適であった。
測定方法
ジゴキシンを含む試料０．１ ｄにジゴキシン３Ｈ（約
７５００ ｄｐｍ ） ０．１−および抗血清０．１ｄ
を添加し、４℃で２時間インキュベートする。次いでデ
キストラン炭末溶液０．４πｌを添加し、４℃で５分間
放置し、次いで３０００回転で１５分間遠心し、得られ
た上澄液０．６ ｒ１１１！をとり放射活性を測定する
。
７５００ ｄｐｍ ） ０．１−および抗血清０．１ｄ
を添加し、４℃で２時間インキュベートする。次いでデ
キストラン炭末溶液０．４πｌを添加し、４℃で５分間
放置し、次いで３０００回転で１５分間遠心し、得られ
た上澄液０．６ ｒ１１１！をとり放射活性を測定する
。
交叉反応
前述の如くして得られた抗血清の特異性を、１３種のス
テロイドを用いてその交叉反応性を、ジゴことによって
調べた。その結果を奔１に示す。表中ｃｒｏｓｓ −ｒ
ｅａｃｔｉｖｉｔｙの楠の数値は非標識ジー？＝１＝キ
シンの５０Ｘ阻止量を１００とし、これに対する各種の
ステロイドの読みの比率の逆数を百分率で表示したもの
である。
テロイドを用いてその交叉反応性を、ジゴことによって
調べた。その結果を奔１に示す。表中ｃｒｏｓｓ −ｒ
ｅａｃｔｉｖｉｔｙの楠の数値は非標識ジー？＝１＝キ
シンの５０Ｘ阻止量を１００とし、これに対する各種の
ステロイドの読みの比率の逆数を百分率で表示したもの
である。
表−１
Ｓｔｅｒｏｉｄ ％Ｃｒｏｓｓ−ｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ
（５０％）本発明の新規な化合物からなる抗原より得
た抗体はジゴキシン及びシバイド四ジゴキシンに対し高
い反応特異性を示す一方、他のハプテンに対する反応性
の低いことが表−１から明らかである。
（５０％）本発明の新規な化合物からなる抗原より得
た抗体はジゴキシン及びシバイド四ジゴキシンに対し高
い反応特異性を示す一方、他のハプテンに対する反応性
の低いことが表−１から明らかである。
参考例２
実施例４で得た３β、１２β、１４β−トリハイドロキ
シ−５β、１７β−エチアノイルグリシン３−トリジギ
トキソサイドーＢ８ム抱合体（（ｌｂ）の化合物）を用
い、参考例１と同様にして抗血清を作製し、その反応特
異性を調べた。その結果を表−２に示す。
シ−５β、１７β−エチアノイルグリシン３−トリジギ
トキソサイドーＢ８ム抱合体（（ｌｂ）の化合物）を用
い、参考例１と同様にして抗血清を作製し、その反応特
異性を調べた。その結果を表−２に示す。
表−２
Ｓｔｅｒｏｉｄ ％Ｃｒｏｓｓ−ｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ
（５０％）本発明の新規な化合物からなる抗原より得
た抗体はジゴキシン及びジハイドロジゴキシンに対し、
高い反応特異性を示し、他のハプテンに対する反応性は
低いことが表−２から明らかである。
（５０％）本発明の新規な化合物からなる抗原より得
た抗体はジゴキシン及びジハイドロジゴキシンに対し、
高い反応特異性を示し、他のハプテンに対する反応性は
低いことが表−２から明らかである。
出願人 中外製薬株式会社
Claims (2)
- （１）式 （式中几は−０００Ｈ，−０ＯＮＨＯＨ２０００Ｈ）で
表わされる化合物。 - （２）式 （式中人は−ＮＨＹまたは−ＮＨＯＨ２００−ＮＨＹで
あり、−ＮＨＹはキャリヤー蛋白残基である）で表わさ
れる化合物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13879483A JPS6028987A (ja) | 1983-07-28 | 1983-07-28 | 新規ジゴキシン誘導体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13879483A JPS6028987A (ja) | 1983-07-28 | 1983-07-28 | 新規ジゴキシン誘導体 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6028987A true JPS6028987A (ja) | 1985-02-14 |
Family
ID=15230371
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP13879483A Pending JPS6028987A (ja) | 1983-07-28 | 1983-07-28 | 新規ジゴキシン誘導体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6028987A (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5028438A (en) * | 1986-12-09 | 1991-07-02 | Long Island Jewish Medical Center | Biologically active agent having anti-hypertensive activity in mammals |
| US5122371A (en) * | 1986-12-09 | 1992-06-16 | Chaslow Fred I | Biologically active agent having antihypertensive activity in mammals |
| JP2021502959A (ja) * | 2017-10-10 | 2021-02-04 | ニューロクライン バイオサイエンシーズ，インコーポレイテッド | 特定のｖｍａｔ２インヒビターを投与するための方法 |
| US11311532B2 (en) | 2017-09-21 | 2022-04-26 | Neurocrine Biosciences, Inc. | High dosage valbenazine formulation and compositions, methods, and kits related thereto |
| US11439629B2 (en) | 2017-01-27 | 2022-09-13 | Neurocrine Biosciences, Inc. | Methods for the administration of certain VMAT2 inhibitors |
-
1983
- 1983-07-28 JP JP13879483A patent/JPS6028987A/ja active Pending
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5028438A (en) * | 1986-12-09 | 1991-07-02 | Long Island Jewish Medical Center | Biologically active agent having anti-hypertensive activity in mammals |
| US5122371A (en) * | 1986-12-09 | 1992-06-16 | Chaslow Fred I | Biologically active agent having antihypertensive activity in mammals |
| US11439629B2 (en) | 2017-01-27 | 2022-09-13 | Neurocrine Biosciences, Inc. | Methods for the administration of certain VMAT2 inhibitors |
| US11311532B2 (en) | 2017-09-21 | 2022-04-26 | Neurocrine Biosciences, Inc. | High dosage valbenazine formulation and compositions, methods, and kits related thereto |
| JP2021502959A (ja) * | 2017-10-10 | 2021-02-04 | ニューロクライン バイオサイエンシーズ，インコーポレイテッド | 特定のｖｍａｔ２インヒビターを投与するための方法 |
| US11654142B2 (en) | 2017-10-10 | 2023-05-23 | Neurocrine Biosciences, Inc. | Methods for the administration of certain VMAT2 inhibitors |
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