JPS60248176A - ヒ−トシヨツクプロモ−タ−および遺伝子 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （概要） ヒートショック遺伝子もしくはストレス遺伝子として知
られる類の遺伝子は細菌からヒトにいたる全ての生物に
存在する。これらの遺伝子の転写はストレス処理（例え
ば、ヒートショック）に伴って開始しそして該転写物の
翻訳により蛋白質が生産され、該蛋白質はおそらく細胞
を一時的に保護する。ストレス下では、正常なポリリポ
ソームは速やかにこわれてモノリポソームとなりこれら
はその後ヒートショックｍＲＮＡを翻訳するために利用
される。ストレス処理する前に存在していた正常なｍＲ
ＮＡはストレス処理中は何らかの方法で保護されそして
ストレス終了に伴ってそれらは翻訳に再利用される。ヒ
ートショックｍＲＮＡおよび蛋白質の生産は単に一時的
な現象にすぎずまたヒートショック遺伝子の発現は数時
間後には平衡状態に達しそしてその後は下降する。もし
温度を急激にではなくむしろ徐々に上げたならば。

生物はその温度が致死的であるにもかかわらす耐えるこ
とができ、すなわち生物はより高い温度に適応できる。

（発明の背景） ２０年以上も１１１ノに、トロソフィラ・ハスキー（Ｄ
ｒｏｓｏｐｈｉｌａ　ｂｕｓｃｋｉｉ）の多糸染色体に
おいて特異なパフ形成パターンが短時間の熱処理によっ
て誘導され得ることが発見されたくリトノサ、エフ（１
９６２）　エクスベリエンティア」影：　５７１−５７
３　（Ｒｉｔｏｓｓａ、　Ｆ、（１９６２）　Ｅｘｐｅ
ｒｉｅｎＬｉａ　１８　：　５７１−５７３）　）。

ドロソフィラ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ）種の多糸染色体
におけるこのパフ形成部位はｍＲＮＡが活発に合成され
ている場所であり、したがって活性遺伝子座位であるこ
とを示している（ビアマン、ダブリュ。

（１９５６）コールド　スプリング　バーバー　エスワ
イエムビー、キューユーエーエヌティー、ビーアイオー
エル、　２１　：　２１７−２３２　（Ｂｅｅｒｍａｎ
、　Ｗ、　（］９５６）Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　ｌ１
ａｒｂｏｒ　Ｓｙｍｐ、　Ｑｕａｎｔ、　Ｂｉｏｌ、　
２１　：２１７−２３２）　）。その後、様々な因子が
９例えば亜砒酸塩もしくは嫌気的条件が、熱により誘導
されるのと似た反応を引き起こし得ることが示されてき
たため、これらの遺伝子に対するより適切な名称は「ス
トレス遺伝子」であるべきだと提唱された。

しかしながら、「ヒートショック」遺伝子という命名法
は今や明らかに確立し以後この命名法を採用する。

１９５０年代の初期以来ディブチラン・シーバー（Ｄｉ
ｐｔｃｒａｎ　１ａｒｖａｅ）の多糸染色体におけるパ
フのパターンが発生中に規則性をもって変化することが
知られ、また、これらの変化がエフジステロイドホルモ
ンによりコントロールされていることが示された（クレ
ハー、ニー、およびピー、カールソン（１９６０）イー
エクスピー、シーイーエルエル。

アールイーニス、　２０　：　６２３−６２６　；ベソ
カー、エイチ、ジェイ、（１９６２）クロモツマ基：　
３４１−３８４（Ｃ１ｅｖｅｒ、　Ｌｌ、およびＰ、Ｋ
ａｒｌｓｏｎ　（１９６０）　Ｅｘｐ、Ｃｅ１ｌ。

Ｒｅｓ、　２０　：　６２３−６２６　；　Ｂｅｃｋｅ
ｒ、　Ｉｌ、　Ｊ、　（１９６２）Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍ
ａ　１３　：　３４１−３８４））　ｏ特に、このパフ
形成のパターンが短時間の熱処理（もしくはある化学薬
品を用いた処理）によって破壊されそしてその結果とし
て３つの新しいパフの出現することが示された。これら
の新しいパフの誘導は非常に速やかでありピー１−ショ
ック処理後数分内に起こるが、その誘導は一時的なもの
であった。例えば。

温度を２５℃から３７°Ｃに上げたとき、３０分以内で
パフの大きさは最大となりそれからもとに戻った。

同時に、ヒートショック前に活性化していた全てノパフ
が処理後もとに戻った。このヒートショックに対するパ
フ形成反応は、研究された全ての組織においてそして発
生の全ての段階で起こることもまた見出された。

その後ヒートショック処理は少量のポリペプチドの合成
を誘導しそして他のほとんどのものの合成は抑制するこ
とがわかり（ティソシーレ、ニー。

等（１９７４）ジエイ、エムオーエル、ビーアイオーエ
ル、　８４　：　３８９−３９８　（Ｔｉｓｓｉｅｒｅ
ｓ、Ａ、等（１９７４）Ｊ、　Ｍｏ１．　Ｂｉｏｌ、　
８４　＝　３８９−３９８）　）また新しいヒートショ
ックにより誘導されたパフで生産されたｍＲＮＡは新し
く誘導されたポリペプチドをコードすることが示された
（ルイス、エム、ジェイ０等（１９７５）ピーアールオ
ーシー、エヌエーティー。

ニーシーニーディー、ニスシーアイ、ニーニスニー７２
　：　３６０４−３６０８　（Ｌｅｗｉｓ、　Ｍ、　Ｊ
、等（１９７５）　Ｐｒｏｃ。

Ｎａｔ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ　７２　：　
３６０４−３６０８＞。

ヒートショック後数分以内で、全てのポリリポソームは
分解して速やかに新しいポリリポソームビークに置き換
わる。この新しいポリリポソームはヒートショック蛋白
ｍＲＮＡを含む。このｍＲＮＡはヒートショックにより
＝’Ｊされたパフに戻ってハイブリダイズされそしてイ
ンビトロでヒートショック蛋白質に翻訳された（マツケ
ンジー。

ニス、　等（１９７７）ジエイ、エムオーエル、ビーア
イオーエル、旦互：　２７９−２８３　、ミラウル、エ
ム。

イー、等（１９７８）コールド　スプリング　エイチェ
ーアールビー、エスワイエムピー、キューユーエーエヌ
ティー、ビーアイオーエル、　４２　：　８１９−８２
７　（ＭｃＫｅｎｚｉｅ、　Ｓ、等（１９７７）　Ｊ、
　Ｍｏ１．　Ｂｉｏｌ。

１１７　：　２’７９−２８３　；　Ｍｉｒａｕｌｔ、
Ｍ、Ｂ、　等　（１９７８）　ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇ　
Ｈａｒｂ、　Ｓｙｍｐ、　Ｑｕａｎｔ、　Ｂｉｏｌ、　
４２　：　８１９−８２７）全てのポリリポソームが分
解してそして新しく誘導されたｈｓ−ｍＲＮＡが選択的
に翻訳されるにもかかわらず、正常なｍＲＮＡのほとん
どがヒートショック中にも残存することに注目すると興
味深い（アシュバーナー、エヌ、およびジェイ、エフ。

ホーナー（１９７９）セル　、１ご７　：　’２４１ｆ
ｆ　（八５ｈｂｕｒｎｅｒ。

Ｎ、およびＪ、　ｌｉ、　Ｂｏｎｎｅｒ　（１９７９）
　Ｃｅ１ｌ　１’７　：　２４１ｆｆ）　）。

ヒートショック遺伝子に関する初期の研究の大部分はド
ロソフィラ（Ｄｒｏｓｏｐｈ　ｉ　Ｉａ　）種を用いて
行われた。しかし、　１９７８年に、同様のストレス反
応がニワトリの胚繊維芽細胞（ケリイ、ピー、およびエ
ム、ジェイ、シュレジンガ−（１９７８）セル１５　：
　１２７７−１２８６　（Ｋｅｌｌｙ、　Ｐ、およびＭ
、　Ｊ。

Ｓｃｈｌｅｓｉｎｇｅｒ　（１９７Ｂ）　Ｃｅ１ｌ　１
５　：　１２７７−１２８６＞　）　。

チャイニーズハムスターの卵巣細胞（Ｂｏｕｃｈｅ。

Ｇｏ等（１９７９）　Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒ
ｅ５ｅａｒｃｈ　７　：　１７３９−１７４７）　、大
腸菌（Ｌｅｍｅａｕｘ、　Ｐ、　Ｇ１等（１９７８）　
Ｃｅ１１１３　：　４２７−４３４）　、酵母（Ｍｉｌ
ｌｅｒ、　Ｍ、　Ｊ、等（１９７９）Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ
、八ｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ　７６　：　５２２２−５
２２５）　。

ナエグレリア（Ｗａｌｓｈ、　Ｃ，（１９８０）　Ｊ、
　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ。

２２５　：　２６２９−２６３２）、テトラヒメナ（Ｆ
ｉｎｋ、　Ｋ、および　Ｅ、Ｚｅｕｔｈｅｕ　（１９７
８）　ＩＣＮ−ＵＣＬＡ　Ｓｙｍｐ、Ｍｏ１．’　Ｃｅ
１ｌ。

Ｂｉｏｌ、　１２　：　１０３−１１５）そして他の多
くの種においても発見された。この中には植物も（Ｂａ
ｒｎｅｔｔ、　Ｔ。

等（１９８０）　Ｄｅｖ、　Ｇｅｎｅｔ、　１　：　３
３１−３４０）含まれている。同じようなパターンのヒ
ートショック蛋白合成は液体培地で生育するタバコおよ
びダイズ細胞についても報告され（Ｂａｒｎｅｔｔ、　
’　Ｔ、等（１９８０）ｓｕｐｒａ）ダイズ苗の組織で
も報告されている。を推動物の細胞に対する創傷の影響
がヒートショックの効果と類似していることもまた示さ
れた（）１ｉｇｈｔｏｗｅｒ、　Ｌ、　Ｅ＋およびＦ、
　Ｐ、　Ｗｈｉｔｅ　（１９８１）　Ｊ。

Ｃｅ１１．　Ｐｈｙｓｉｏｌ　１０８　：　２６１）。

ヒートショック遺伝子の転写時および翻訳時の制御は自
己調節であるらしい。このようにこれらの遺伝子の活性
は細胞中に存在するヒートショック蛋白質の濃度によっ
て制御されるらしい。したメクって、ヒートショック遺
伝子の誘導物質はヒートショック蛋白質を壊すかまたは
それらを細胞内で効果的に利用できない状態にする因子
９例えば。

様々な細胞小器官に結合させて利用できなくするような
因子であろう。

ドロソフィラ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ）でのヒートショ
ック遺伝子の活性化およびそれに続く抑制の研究はクロ
ーン化した小断片をドロソフィラ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌ
ａ）細胞中に導入することにより行われてきた。Ｐ成分
を媒体とした形質転換系が使われ、これによるとクロー
ン化したドロソフィラ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ）　遺伝
子をドロソフィラ（Ｄｒｏｓｏｐｈ　ｉ　］　ａ　）胚
細胞（ｇｅｒｍｌ　１ｎｅ）に導入することができた（
Ｒｕｂｉｎ、　Ｇ、　Ｍ、および＾。

Ｃ，Ｓｐｒａｄｌｉｎｇ　（１９８２）　５ｃｉｅｎｃ
ｅ　２１８　：　３４８−３５３）。

このようにして構築された遺伝子は安定した単体コピー
として存在することがよくありそして染色体の様々な位
置でかなり一定した活性を有する（Ｓｃｈｏｌｎｉｃｋ
、　ｓ、　Ｂ、等（１９８３）　Ｃｅ１ｌ　３４　：　
３７−４５　；Ｇｏｌｄｂｅｒｇ、　Ｄ、等（１９８３
）　Ｃｅｌｌ　３４　：　５９−７３　；Ｓｐｒａｄｌ
ｉｎｇ、八、Ｃ９およびＧ、　Ｍ、　Ｒｕｂｉｎ　（１
９８３）Ｃｅｌｌ　３４　：　４７−５７）。特にドロ
ソフィラｈｓｐ７０遺伝子がＥ、　ｃｏｌｉβ−ガラク
トシダーゼ構造遺伝子に融合され、このようにして雑種
遺伝子の活性を感受性ドロソフィラ（Ｄｒｏｓｏｐｈ　
ｉ　ｌａ　）における５つの内在性ｈｓｐ７０ヒートシ
ョック遺伝子から区別できるようになった。ドロソフィ
ラヒートショック遺伝子はまた様々な異種系にも導入さ
れそしてそこでの活性が研究されてきた。そして、特に
、ザルのＣＯ８細胞（Ｐｅｌｈａｍ、　ＨｏＲ，Ｂ、　
（１９８２）　Ｃｅ１１３０　：　５１７−５２８　；
　Ｍｉｒａｕｌｔ、　Ｍ、　Ｅ、等（１９８２）　ＥＭ
［ｌＯＪ、　１　：　１２７９−１２８５）およびマウ
スの細胞（Ｃｏｒｃｅｓ＋Ｖ８等（１９８１）　Ｐｒｏ
ｃ、　Ｎａｔ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　７８　：　７
０３８−７０４２）に導入された。

この雑種ｈｓｐ７０−１ａｃＺ遺伝子はドロソフィラ（
Ｄｒｏｓｏｐｈｉ　ｌａ）胚細胞（ｇｅｒｍ　１ｉｎｅ
）中に組み込まれると正常なヒートショック制御下にあ
るらしい（Ｌｉｓ、　Ｊ、　Ｔ、等（１９８３）　Ｃｅ
１ｌ　３５　：　４０３−４１０）。組み込まれた３つ
の異なる部位はヒートショックに反応して大きなパフを
形成した。パフ形成および退縮の動力学は８７Ｃ遺伝子
座位の動力学と全く同じであり、この部位からｈｓｐ７
０遺伝子の組み込みコピーが単離された。７０００塩基
対のエセリシア・コリ　（Ｅ、　ｃｏｌｉ）β−ガラク
トシダーゼＤＮＡ断片をｈｓｐ７０構造遺伝子の真中に
挿入してもパフ形成反応に対する反作用は生じなかった
ようであった。

形質転換体中のβ−ガラクトシダーゼ活性はヒートショ
ックにより調節された。

ドロソフィラｈｓｐ７０ヒートショックプロモーターの
欠失分析によりＴＡＴＡボックスの上流の配列が同定さ
れた。この配列はヒートショック誘導に必要である。こ
の配列は他のヒートショック遺伝子におＬｊるものと相
同もしくは類似した配列を含みそして共通配列ＣＴｘＧ
ＡＡｘｘＴＴＣｘＡＧが構築されていた（Ｐｅｌｌ＋ａ
ｍ、　Ｈ，Ｒ，Ｂ、およびＭ、　’Ｂｉｅｎｚ（１９８
２）ＥＭＢＯＪ、　１　：　１４７３−１４７７）。こ
の共通配列の塩基配列を基本とする合成オリゴヌクレオ
チドを構築しそしてヘルペスウィルス　チミジンキナー
ゼ遺伝子（ｔｋ）のＴ　Ａ　Ｔ　Ａボックスの上流に（
正常な上流プロモーター成分の代わりに）配置すると、
その結果生した組み換え遺伝子はサルのｃｏｓ細胞およ
びゼノパスの卵母細胞のいずれにおいてもし一ト誘導性
であった。このｔｋ自身はヒート誘導性ではなくそして
おそらくいかなる進化上の圧迫もｔＫをヒート誘導性に
するようにはががらながったのであろう。しかし以上の
事実がらｔｋがヒートショックにより簡単に、すなわち
正常な上流プロモーター成分に代わってヒートショック
遺伝子プロモーターと相同な配列を有する短い合成配列
を配置することによって、誘導し得ることが示唆される
。

ＴＡＴＡボックスの上流の逆反復配列はヒートショック
プロモーターの多くに普通に見られる特色であり研究さ
れてきた（Ｈｏｌｍｇｒｅｎ、　Ｒ，等（１９８１）Ｐ
ｒｏｃ、　Ｎａｔ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＬＩＳＡ
　７８　：　３７７５−３７７８）。

７個のドロソフィラプロモーターのうち５個において、
この逆反復配列は同一配列の後ろから２番目のＡ残基の
５”側に集中しているが、逆反復自身の配列は保護され
ていない（Ｐｅｌｈａｍ、　Ｈ，Ｒ，Ｂ。

（１９Ｂ２）　Ｃｅ１ｌ　３０　：　５１７−５２８）
　、しかしながら、いくつかの場合では、この逆反復配
列がＴＡＴＡボックスの上流に出現しそして共通配列は
存在しない。これらの場合ではヒート誘導可能性はなく
したがって逆反復が存在しても共通配列の代用とはなら
ない。

ヒートショック反応の機能上の意義は知られていない。

おそらくそれらは細胞を外界のストレスから保護しそし
てストレス状態が終わった後も細胞がその機能を維持し
得るように作用するのであろう。これらの結論は「獲得
された温度耐性」として知られる現象により支持されて
いる。単発ヒートショック、またはいくつかの他のスト
レスにさらされた細胞は、２回目のヒートショックの影
響に対し、それが致死的なヒートショックであるにもか
かわらず、かなり抵抗性を示す（Ｌｉ、　Ｇ、　Ｃ。

およびＧ、　Ｍ、　１ｌａｈｎ　（１９７８）　Ｎａｔ
ｕｒｅ　２７４　：　６９９−７０１；Ｈｅｎ１ｅ、　
Ｋ、　Ｊ、およびり、　Ａ、　Ｄｅｔｈｌｅｆｓｅｎ　
（１９７Ｂ）Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、　３８　：　１８
４３−１８５１　；　Ｍｉｔｃｈｅｌｌ、　ｔｔ、　Ｋ
。

等（１９７９）　Ｄｅｖ、　Ｇｅｎｅｔ、　１　：　１
８１−１９２　；　ＭｃＡｌｉｓｔｅｒ。

Ｌ、およびり、　Ｂ、　Ｆｉｎｋｅｌｓｔｅｉｎ　（１
９８０）　Ｂｉｏｃｈｅｍ。

Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ、　ＣＯｍｍｏｎ、　９３　
：　８１９−８２４）。

より高等な植物では、ヒートショック（ｈｓ）現象はま
ず最初にダイスにおける蛋白質合成の段階で発見された
＜Ｋｅｙ、　Ｊ、　Ｌ、等（１９８１）　Ｐｒｏｃ、　
Ｎａｔ。

Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ　７８　：　３５２６−３５
３０　；　Ｂａｒｎｅｔｔ、Ｔ。

等（１９８０）　５ｕｐｒａ）。いくつかの他の植物１
例えば。

エントウ豆、キビ、トウモロコシ、ヒマフリ。綿花そし
て小麦はダイスに対し同様に反応し、このダイスにおい
てはヒートショック処理により分子量が大体同じである
真人な数の新しい蛋白質が誘導されている。種間に生じ
る主な相違としては次のようなものがある。ｈｓ蛋白質
を誘導する最適温度、ブレイクポイント温度（すなわち
、この温度以上は致死的であるという温度）　、　１５
−２０ｋＤのヒートショック蛋白質の二次元ゲル上の分
布、そしてヒートシラツク中に生ずる正常な蛋白質合成
の相対的な段階。温度を２８℃から４０℃に上げるとい
くつかのｈｓ蛋白質（ｈｓｐ）メージャー集団が新たに
誘導デノポ合成され、このｂｓｐの分子量はドロソフィ
ラ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ）で発見されたものと類憤し
ていることが示された。しかし、これら２つの生物間に
はｈｓｐの低分子量（１ｍｗ）集団の複雑性という点で
明らかな違いがある。ドロソフィラ（Ｄｒｏ−ｓｏｐｈ
ｉｌａ　）は２２．２３．２６そして２７キロダルトン
の４　ｈｓｐを合成し、ダイスは分子量が１５〜１８キ
ロダルトンの範囲にわたる２０以上のｈｓｐを合成する
。

翻訳時のｈｓ−ｍ　ＲＮ　Ａに対する優先性は、明らか
ではあるが、ダイスにおいては（Ｋｅｙ、　Ｊ、　Ｌ、
等（１９８１）　５ｕｐｒａ）ドロソフィラ（Ｄｒｏｓ
ｏｐｈｊｌａ）におけるよりも（Ｓｔｏｒｔｉ、　Ｒ，
Ｖ、等（１９８０）　Ｃｅ１ｌ　２訂８２５−８３４）
それほど顕著ではないらしい。ダイスでｈｓに特異的な
ｍ　ＲＮ　Ａの新しいセントが誘導されることはｐｏｌ
ｙ（＾）”　ＲＮＡのインビトロ翻訳により支持された
。ヒート処理された植物体中に新奇のＲＮＡが存在する
ことの証拠はさらに蔗糖密度勾配分析により出され、こ
の分析によりタバコおよびササゲの葉のヒート処理中に
０．４９　Ｘ　１０６ダルトンのＲＮＡが蓄積すること
が示された（Ｄａｅｖｓｏｎ＋騨、０．およびＧ、　Ｌ
、　Ｇｒａｎｔｈａｍ　（１９８１）　Ｂｉｏｃｈｅｍ
。

Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ、　Ｃｏｍｍｕｎ、　１００
　：　２３−３０　）　ｏ　ドロソフィラ（Ｄｒｏｓｏ
ｐｈｉｌａ）では、　ｈｓ蛋白質合成の転写時の制御が
明らかになっているが、これらの遺伝子が同調発現する
ための信号構造を見つけるための試みがなされた（Ｈｏ
ｌｍｇｒｅｎ、　Ｒ，等（１９８１）　Ｐｒｏｃ。

Ｎａｔ、＾ｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ　７８　：　３
７７５−３７７８）　、ダイスのｐｏｌｙ（Ａ）”　ｍ
　ＲＮ　Ａに対するｈｓの影響はｃＤＮＡ／　ｐｏｌｙ
（八）”　ＲＮＡハイフ゛リダイゼーション分析および
クローン化ｃＤＮＡ／ナザン法（ナザンブロソトハイプ
リダイゼーション）分析を用いて評価された（Ｓｃｈｏ
ｆｆｌ、　Ｆ、およびＪ、　Ｌ、　Ｋｅｙ　（１９８２
）Ｊ、　Ｍｏ１．　Ａｐｐｌ、　Ｇｅｎｅｔ、　１　：
　３０１−３１４）　、ダイスでのこのｈｓ反応は以下
の２つによって特徴づけられる。１つは新しく非常に豊
富な種類のｐｏｌｙ（Ａ）”ＲＮＡが出現することでこ
れらは平均の長さが８００〜９００ヌクレオチドの約２
０種の異なる塩基配列から成る。そしてもう１つは２８
℃塩基配列の相対的な豊富性の変化に伴って全体的にｐ
ｏｌｙ（＾）“ＲＮＡの複雑性が減少することである。

この新しい豊富なりラスのｐｏｌｙ（Ａ）”　ＲＮ　Ａ
は４０℃のヒートショック２時間後に細胞あたり約１５
，０００〜２０，０００コピー存在する。これら４つの
ドロソフィラｈｓｐに対する遺伝子は類似した配列を有
する小さなｈｓ遺伝子ファミリーを含み、この配列はま
たα−クリスタリンの配列とも関係している（Ｉｎｇｏ
ｌｉａ、　Ｔ。

Ｄ、およびＥ、　Ａ、　Ｃｒａｉｇ　（１９Ｂ２）　Ｐ
ｒｏｃ、　Ｎａｔ、　Ａｃａｄ。

Ｓｃｉ、　ＬＩＳＡ　７９　：　２３６０−２３６４）
　。そしてこのことばある構造ドメイン（おそらく機能
的な凝集のためのもの）がこれらの蛋白質により共有さ
れていることを示している。ダイスのｌ　ｍｗ−ｈｓｐ
の遺伝子はｈｓ条件下で最も活発に発現されそして同等
に調節された遺伝子である（Ｓｃｈｏｆｆｌ、　Ｆ、お
よびＪ、　ＬＫｅｙ　（１９８２）　Ｊ、’　Ｍｏ１．
　Ａｐｐｌ、　Ｇｅｎｅｔ、１　：　３０１−３１４）
。

それらのｈｓｐは普通は高温で精製された核と結合して
いる。しかしながらまた低温では解離する（Ｋｅｙ、　
Ｊ、　ｌ、５等（１９８２）　ｉｎ　：　Ｓｃｈｌｅｓ
ｉｎｇｅｒ＋　Ｍ、　Ｊ、。

＾５ｈｂｕｒｎｅｒ＋　Ｍ、およびＡ、　Ｔｉ５ｓｉｅ
ｒｅｓ　（ｅｄｓ）　）ｆｅａｔｓｈｏｃｋ　ｆｒｏｔ
ｎ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｔｏ　ｍａｎ、Ｃｏ１ｄ　Ｓｐ
ｒｉｎｇ　Ｈａｒ−ｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、　
ｐｐ、３２９−３３６）　ｏ　これはｈｓ反応でのこれ
らの蛋白質に対して一般的な機能を示唆している。その
機能はおそらく蛋白質および遺伝子における一般的な構
造上の特徴と関係があるであろう。ｌ　ｍｗ−１＋ｓｐ
遺伝子はさらに８種類に分けられ。

これらはｐｏｌｙ（Ａ）”　ｍ　ＲＮ　Ａ間の配列の相
同性によって区別される。この８種のうち２種は遺伝子
発現に関して特に興味深い。というのはそれらはｌ　ｍ
ｗ−ｈｓｐＪ伝子の末端成分に相当するからである。

これらはクラス■およびクラス■と命名されている：ク
ラスＩが１３の密接に関連するｈｓｐ遺伝子から成るの
に対し、クラス■の方は単にｌ　ｈｓｐを有するだけで
このｈｓｐについては他のｈｓ遺伝子との配列の相同性
は知られていなかった。後にクラス■はクラスＩと同じ
グループに入り得るという報告がなされた。２つの種類
の区分は根本的にはｐＨ２０１９の３゛　−翻訳末端の
末梢部の試験を基にしてなされた。

広範囲の穀物植物はヒートショック条件の温度を上げる
と多量の（３０あるいはそれ以上）　ｈｓ蛋白質を合成
して反応する（Ｋｅｙ、　Ｊ、　Ｌ、等（１９８３）Ｃ
ｕｒｒｅｕｔ　Ｔｏｐｉｃｓ　ｉｎ　Ｐｌａｎｔ、Ｂｉ
ｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ　
ｅｄｓ、　Ｄ、　Ｄ、　Ｒａｎｄａｌｌ、　Ｄ、　Ｇ、
　Ｂｌｅｖｉｎｓ＋Ｒ１Ｌ、ＬａｒｓｏｎおよびＢ、　
Ｊ、　Ｒａｍｐ、　Ｖｏｌ、２＋　Ｕｎｉｖ。

ｏｆ　）ＨｓｓｏｕｒＬ　Ｃｏｌｕｍｂｉａ＋　ｐｐ１
０７−１１７）　ｏ高分子量ｈｓ蛋白質は電気泳動分析
上では種間で類似している。低分子量（１５〜２７ｋｄ
）　ｈｓ蛋白質のより複雑なパターンとして種間で電気
泳動的にかなり異質であることが示された。確かに特定
のダイズｈｓｃＤＮＡクローンは異なるダイスｈｓ−ｐ
ｏｌｙ（Ａ）　ＲＮ　Ａ“に対して他の種のいかなるｈ
ｓＲＮＡに対するよりもより大きな交叉ハイブリダイゼ
ーションを示し。

そしてこのように他の種とのハイブリダイゼーションが
限定されていることは低分子量ｈｓ蛋白質の電気泳動上
の異質性が観察されたことと一致した。

細菌からヒトにいたる範囲の生物にわたってｈｓ蛋白質
が進化」二保存されてきたことはｈｓ蛋白質に対する本
質的な機能を示唆している。経験的に言うと、１つの機
能は許容範囲をこえたｈＳｇ度にもかかわらずそれに対
し温度上の保護もしくは温度抵抗性を示すことである（
Ｓｃｈｌｅｓｉｎｇｅｒ、　Ｍ、等く１９８２）Ｈｅａ
ｔｓｈｏｃｋ　ｆｒｏｍ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｔｏ　ｍ
ａｎ、　ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇ　１ｌａｒｂｏｒ　Ｌａ
ｂｏｒａｔｏｒｙ＋　Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒ
ｂｏｒ＋ＮＹ　ｐ、３２９）。明らかに許容範囲のヒー
トショック温度で合成されたまうなｈｓ蛋白質は生命体
がより高い温度でもｈｓ蛋白質およびｈｓ−ｍＲＮＡを
合成し続けることそして本来なら致死的な温度でも生き
残ることを可能にする（Ｋｅｙ、　Ｊ、　Ｌ、等（１９
８２）Ｉｎ　：　Ｈｅａｔ　５ｈｏｃｋ　ｆｒｏｍ　ｂ
ａｃｔｅｒｉａ　ｔｏ　ｍａｎ、　Ｍ、　Ｊ。

Ｓｃｈｌｅｓｉｎｇｅｒ、　Ｍ、　Ａｃｈｂｕｒｎｅｒ
および八、　Ｔｉ５ｓｆｅｒｅｓ。

ｅｄｓ、Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａ
ｂｏｒａｔｏｒｙ、ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏ
ｒ、　ＮＹ　ｐ３２９）　ｏ許容範囲の温度とはここで
はヒートショック反応を誘導するのに充分高（しかし致
死的ではないような温度として定義される。ブレイクポ
イント温度以上の温度は温度抵抗性を獲得していない植
物にとって致死的である。ダイズではこのブレイクポイ
ント温度は約４０℃である。ダイス面は許容範囲のｈＳ
’／？Ａ度でインキュベイトして前処理しておくと致死
的な温度でインキュベイトしても生き残ることが以前に
示されていた（Ｋｅｙ、　Ｊ、　Ｌ、等（１９８３）　
Ｉｎ　：　ＮＡＴＯ八ｄｒへｎｃｅｄＳｔｕｄｉｅｓ　
Ｗｏｒｋｓｈｏｐ　ｏｎ　Ｇｅｎｏｍｅ　Ｏｒｇａｎｉ
ｚａｔｉｏｎ　ａｎｄＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　Ｐ
ｌａｎｔｓ、　Ｌ、　Ｄｕｒｅ、　ｅｄ、　Ｐｌｅｎｕ
ｍＰｒｅｓｓ）。

許容範囲でのヒートショ、りをいくつかの異なった処理
法で行うとダイス面において温度抵抗性の進展が生じる
。これらの処理として以下のものを含む：ｆａ）４Ｑ℃
で１〜２時間連続ヒートショック後、４５℃でインキュ
ベーション、（ｂ）４０’Ｃで３０分間ヒートショック
後、２８℃で２〜３時間してから４５℃にシフト、（Ｃ
１４５℃で１０分間ヒートショック後。

２８℃で約２時間してから４５℃にシフト；そして（ｄ
ｌ苗を２８℃で３時間以上５０μｍ亜砒酸塩処理後、４
５℃にシフト。これらの処理が一般的に有する重要な特
徴は可能な致死温度でインキュベーションする前にヒー
トショック蛋白質の合成を誘導しそして蓄積することで
ある。事実上、苗を上記の条件の１つで前処理しておく
とｈｓ−ｍ　ＲＮ　Ａおよびｈｓ蛋白質のいずれの合成
も４５°Ｃで起こることが示されてきた。ｈｓ蛋白質の
よく似た役割としてヒートショック中でも致命的な機能
および構造（例えば。

転写、翻訳、そしてエネルギー生産機構）を保護し、そ
して好適温度に戻ったとき正常な機能が速やかに回復で
きるようにすることがあげられる。

温度を正常（例えば２８°Ｃ）に戻したとき正常なｍＲ
ＮＡおよび蛋白質合成が速やかに回復することが知られ
ている（Ｋｅｙ、　Ｊ、　Ｉｌｏ等＜１９８１）　Ｐｒ
ｏｃ、　Ｎａｔ。

八ｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ　７８　：　３５２６−３５
３０　；　Ｓｃｈｌｅｓｉｎｇｅｒ。

Ｍ、　Ｊ、等（１９８２）　Ｔｒｅｎｄｓ　Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ、　Ｓｃｉ、１　：　２２２−２２５）。正常な蛋
白合成の回復には１回復中に新しく合成されたｍＲＮＡ
と同様にヒートショック中に保存されていたｍＲＮＡも
利用され、そして正常温度に戻した３〜４時間後にはヒ
ートショック蛋白質の合成は見られない。しかし、４０
℃のヒートショック中に合成されたようなヒートショッ
ク蛋白質は（″Ｈ−ロイシンの取込みにより認識される
）それに続く非標識ロイシンでの追跡中も非常に安定で
あり、これは追跡を２８℃または４０’Ｃのいずれで行
うかには無関係である；すなわち２０時間にわたる追跡
中ラベルの約８０％がヒートショック蛋白質中に保持さ
れている。

温度抵抗性の獲得はヒートショック蛋白質の合成ばかり
でなくそれらの細胞内での選択的局在にも依存するよう
である。ダイス面では、いくつかのｈｓ蛋白質は選択的
に核、ミトコンドリアおよびリポソーム内もしくはそれ
らに結合して局在するようになり、この状態は密度勾配
精製されたこれらの細胞内小器官の分画中でｈｓ蛋白質
を単離できるようなものである。特に、　１５〜１８キ
ロダルトンｈｓ蛋白質の複合体群はダイス面のヒートシ
ョック中にこれらの分画に選択的に局在する。ｈｓ蛋白
質のこの選択的局在は温度依存性である。ｈｓ蛋白質（
ミトコンドリア分画に所属する２２−２４ｋｄのｈｓ蛋
白質を除く）は２８℃４時間のインキュベーション中は
細胞内小器官の分画から離れそしてヒートショック温度
での追跡中は細胞内小器官に結合したままである。さら
に、２８℃４時間追跡後の２回目のヒートショックによ
りｈｓ蛋白質は速やかに（１５分以内に）細胞内小器官
と再結合する。ヒートショック蛋白質の核とのこの結合
はｈｓ蛋白質が「クロマチン蛋白質」もしくはおそらく
マトリクス構造の一部になるということによって説明で
きた；いずれの示唆ともその後のドロソフィラ系を用い
た局在性の研究を提供してきた（Ａｒｒｉｇｏ、　Ａ、
　Ｐ。

等（１９８０）　Ｄｅｖ、　Ｂｉｏｌ、　７８　：　８
６−１０３）　、これらの発見は基本的にはオートラジ
オグラフィーの結果と一致しており、このオートラジオ
グラフィーではｈｓ蛋白質は多糸染色体のバンド内領域
に局在していた（Ｖｅｌａｚｑｕｅｚ、　Ｊ、等（１９
８０）　Ｃｅ１ｌ　２０　：　６７９−６８９および（
１９８４）　Ｃｅ１ｌ　３６　：　６５５−６６２）。

植物でのヒートショックの研究の大半は主に操作が簡単
であるということから日光を当てないで青白くした苗を
用いて行われてきた。ヒートショック蛋白質は正常植物
の緑色組織において広く分析されてきたが、緑葉組織と
青白い苗とではｈｓ−ｍＲＮＡの蓄積の程度がほぼ同じ
ことが示された。

さらに、はとんどの試験的研究は約１０℃という大きな
温度変化で行われてきた。しかし、このような非生理学
的な変化に対する反応は、ダイスの場合では２８℃から
４７．５℃に徐々に上昇させた場合と。

ｈｓ−ｍＲＮＡおよびｈｓ蛋白質の合成そして蓄積の両
レベルにおいてよく似ている。したがって、非生理学的
な実験と思われるようなその結果はより正常な生理学的
条件のヒートショックのもとで。

この条件はいかにもおそらく正常な植物環境でのものだ
が、青白い苗および緑色植物を用いて複製できる。

（以下余白） （発明の要旨） ダイスの４つのヒートショック遺伝子をクローン化しそ
して配列を決定した。これら４つのヒートショック遺伝
子のヒートショックプロモーター断片をサブクローン化
しそして遺伝子操作によりこれをＴ−ＤＮＡシャトルベ
クターに導入した。

そして、これらの組み換えＤＮＡ断片、すなわちダイズ
ヒートショソク遺伝子プロモーターを保持するＴ−ＤＮ
Ａシャトルベクターに結合したベクターをヘルパープラ
スミドの助けをかりてアグロバクテリウム・チューメフ
ァシエンス（Ａｇｒｏ−ｂａｃｔｅｒｉｕｍ　Ｌｕｍｅ
ｆａｃｉｅｎｓ）内に転送させ、この細菌内で組み換え
ＤＮＡ断片をＴｉ−プラスミド内に組み込ませる。そし
てこのＴｉ−プラスミドのＴ−ＤＮＡ部分を植物ゲノム
へ転送させ、こうして植物の形質転換ができた。

ヒートショック遺伝子プロモーターは植物ゲノムに転送
されそしてヒートショックもしくはストレス処理後一時
的に活性化されるので、外来遺伝子を組み換えＤＮＡプ
ラスミド内に取り込ませるのに有用である。そしてこの
取り込ませる場所はヒートショック遺伝子プロモーター
の制御下で発現できるような位置である。このようにし
て取り込まれた外来遺伝子はＴ−ＤＮＡによって形質転
換した植物細胞を認識するのに利用できるかもしくは一
時的に活性化することが可能である。このような一時的
な活性化はバシラス・チューリンギエンシス（Ｂａｃｉ
ｌｌｕｓ　ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）の結晶性毒素
の産生、除草剤抵抗性の産生、または病原菌に対する抵
抗性の誘導において有用である。

本発明の細菌株は９組み換えＤＮＡプラスミドを保持し
かつ複製するものであり、以下の（ａ）、　（ｂｌそし
てＴｏ）を有する： （ａ）ベクター。

（ｂ）ＴｉプラスミドのＴ−ＤＮＡ断片に挿入されたア
グロバクテリウム（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）株由
来のヒートショック遺伝子の発現を制御する植物ＤＮＡ
の断片、そして （Ｃ１植物ＤＮＡの前記断片の制御下にある外来遺伝子
またはダイス遺伝子。

植物ＤＮＡの前記断片がダイス植物から得られ。

該断片は次の配列を有するか、もしくは実質的にそれと
相同である：　５’−Ｔ−＾−Ｃ−＾−Ｔ−Ｇ−、Ｇ−
Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−＾−Ｇ−＾−＾−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ａ
−Ａ−Ｃ−Ｃ−Ａ−＾−＾−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ａ−Ａ−
Ａ−Ａ−Ａ−Ｇ−Ｔ−Ａ−Ｇ−Ｇ−八−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ
−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−＾−八へＣ−Ａ−Ｔ−＾−Ｃ−
＾−＾−Ｇ−ＡｍＴ−Ｔ−＾−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｔ
−Ｃ−Ａ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ａ−ミー
へ−Ｔ−＾−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ｃ−Ｇ−Ｔ−＾−Ｔ
−Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−
Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−＾−＾−＾−Ｃ−Ｇ−Ａ−＾−Ｇ−Ａ
−Ａ−＾−＾−Ａ−Ａ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−＾−Ｃ−Ｃ−Ｔ−
Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｇ−Ａ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−＾
−Ｔ−Ｔ−Ａ−Ｃ−八−八−Ｔ−Ｃ−ＴへＣへＣ−Ｃ−
Ｔ−八−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ａ−Ａ−Ｔ−Ｃ−Ｔ
−Ｃ−八−Ｇ−３゛。

植物ＤＮＡの前記断片がダイス植物から得られ。

該断片は次の配列を有するか、もしくは実質的にそれと
相同である：　５’−Ｔ−＾−Ｃ−＾−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ｔ
−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ａ−Ｇ−八−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ａ−
＾−Ｃ−Ｃ−＾−Ａ−Ａ−丁−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ａ−＾−Ａ
−Ａ−Ａ−Ｇ−Ｔ−＾−Ｇ−Ｇ−＾−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−
Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ａ−＾−Ｃ−Ａ−Ｔ−Ａ−Ｃ−＾
−＾−Ｇ−＾−Ｔ−Ｔ−八−Ｔ−ＣへＣ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−
Ｃ−Ａ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ａ−Ａ−＾
−Ｔ−Ａ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ａ−Ｔ−
Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｃ
−Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ａ−＾−Ａ−Ｃ−Ｇ−＾−Ａ−Ｇ−＾−
Ａ−Ａ−＾−Ａ−＾−Ｇ−Ｔ−Ｔ−八−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｇ
−ＴへＴ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｇ−Ａ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ａ−
Ｔ−Ｔ−Ａ−Ｃ−＾−Ａ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ｔ
−Ａ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ａ−＾−Ｔ−Ｃ−Ｔ−
Ｃ−＾−Ｇ−Ｃ−Ｔ−Ａ−＾−Ｇ−Ａ−Ａ−Ａ−Ａ−＾
−Ｃ−Ｃ−＾−＾−Ａ−Ａ−Ｇ−＾−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−
Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−＾−Ｇ−Ｇ−Ｔ
−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ｃ−
Ｃ−Ｇ−Ａ−Ａ−Ｇ−Ｇ−＾−Ｇ−Ｃ−Ａ−Ａ−Ｃ−Ｇ
−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ａ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ａ−Ｔ−
Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−＾−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ａ−Ｃ−Ａ−Ｔ
−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−３’。

植物ＤＮＡの前記断片がダイズ植物から得られ。

該断片は次の配列を有するか、もしくは実質的にそれと
相同である：　５’　−Ａ−Ｇ−Ａ−Ｃ−Ｃ−Ａ−Ａ−
Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−＾−Ａ−Ｃ−Ｃ−Ａ−Ａ−Ｔ−Ｇ−Ｔ
−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ａ−Ａ−Ｇ−Ａ−Ｔ−Ｇ−
Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ａ−Ａ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ｇ−Ａ−Ａ
−Ａ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ａ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−
Ｇ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ａ−Ａ−Ｇ−Ａ−Ａ−Ｇ−Ｃ
−Ｃ−Ａ−Ｇ−Ａ−＾−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−
Ｇ−Ａ−Ａ−Ａ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ａ−Ｇ−＾−Ａ
−Ａ−八−Ｔ−ＴへＣ−Ｔ−Ａ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−
Ｇ−Ａ−Ｇ−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−＾−Ｇ−Ａ−＾
−Ｇ−Ｔ−Ａ−Ｃ−Ｇ−Ｇ−Ｃ−Ａ−Ｔ−Ｇ−Ａ−Ｔ−
Ｇ−Ａ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−＾−Ｔ−Ａ−Ａ−Ｃ−Ａ−Ａ−に
−Ｇ−Ａ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ａ−Ａ−
Ａ−Ｇ−Ｔ−Ａ−Ｃ−Ｔ−Ａ−７−＾−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｃ
−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ａ−Ｃ−Ａ−Ｔ−Ｃ−Ａ−
Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−八−Ａ−Ａ−Ｔ−Ａ−Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ｃ
−＾−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−
Ａ−ミーＧ−Ａ−Ｃ−＾−Ｃ−＾−Ｔ−Ｃ−Ａ−Ｃ−Ａ
−Ｇ−＾−Ａ−Ａ−Ｇ−八−八−Ｇ−ＴへＧへＡ−Ａ−
Ｇ−Ｇ−Ｃ−Ａ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ａ−Ｇ−Ｃ−Ａ
−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−＾−Ｇ−＾−Ｔ−Ｔ−
Ｃ−八−＾−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｃへ＾−八へＴ−Ｔ−Ｔ−Ｇ
−Ｃ−Ａ−Ｇ−＾−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ａ＝Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−
Ｃ−Ｔ−＾−＾−Ｔ−Ａ−Ｔ−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−＾−Ｃ
−＾−Ｃ−Ａ−Ａ−Ｇ−＾−Ｃ−Ｔ−Ｇ−八−Ｃ−Ｃ−
Ｃ−３’。

植物ＤＮＡの前記断片がダイズ植物から得られ。

該断片は次の配列を有するか、もしくは実質的にそれと
相同である＝５′−＾−Ｇ−Ａ−Ｃ−Ｃ−Ａ−Ａ−Ｔ−
Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ａ−Ａ−Ｃ−Ｃ−＾−八へＴ−Ｇ−Ｔ−Ｃ
−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ａ−Ａ−Ｇ−Ａ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−
Ｔ−Ｃ−Ｃ−八−＾−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ｇ−八一八−八
−Ｃ−Ｔ−ＴミーへＴへＡ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｇ−
Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ａ−Ａ−Ｇ−Ａ−Ａ−Ｇ−Ｃ−Ｃ
−Ａ−Ｇ−Ａ−＾−Ｔ−Ｇ−Ｔ＝Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−
＾−八へΔ−Ｇ　−Ｔ　−Ｔ　−’Ｔ　−Ｃ−＾−Ｇ−
Ａ−Ａ−Ａ−＾−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−＾−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ
、−Ｔ−Ｇ−＾−Ｇ−へ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−ミーＧ
−Ａ−Ａ−Ｇ−Ｔ−Ａ−Ｃ−Ｇ−Ｇ−Ｃ−Ａ−Ｔ−Ｇ−
へ−Ｔ−Ｇ−Ａ−丁−Ｇ−Ｃ−Ａ−Ｔ−Ａ−Ａ−Ｃ−＾
−Ａ−Ｇ−Ｇ−Ａ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−
Ａ−Ａ−Ａ−Ｇ−１°−＾−Ｃ−Ｔ−Ａ−Ｔ−Ａ−Ｔ−
Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ａ−Ｃ−＾−Ｔ
−Ｃ−＾−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−＾−Ａ−Ａ−Ｔ−Ａ−Ｃ−
Ｃ−Ｃ−Ｃ−＾−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ
−Ｔ−Ｇ−Ａ−＾−Ｇ−Ａ−Ｃ−八−Ｃ−八−ＴへＣ−
へへＣ−へ−Ｇ−Ａ−Ａ−Ａ−Ｇ−Ａ−Ａ−Ｇ−Ｔ−Ｇ
−Ａ−Ａ−Ｇ−Ｇ−Ｃ−＾−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−八−
Ｇ−Ｃ−＾−Ｇ−ＴへＴ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ａ−Ｇ−Ａ
−Ｔ−Ｔ−Ｃ−＾−＾−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−＾−八−Ｔ−
Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−＾へＧ−＾−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ａ−Ｃ−Ｇ
−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ａ−八−Ｔ−＾−Ｔ−Ａ−Ｔ−Ｔ−
Ｔ−Ａ−Ｃ−Ａ−Ｃ−Ａ−へ−Ｇ−Ａ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−へ
−Ｔ−へ−＾−Ｇ−Ａ−Ｇ−Ａ−八−＾〜Ａ−Ｔ−Ｇへ
Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ａ−Ａ
−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−ロー６−Ｔ−Ｇ−
Ｇ−Ｃ−Ｃ−Ｇ−Ａ−Ａ−Ｇ−Ｇ−Ａ−Ｇ−Ｃ−＾−Ｇ
−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−＾−Ｃ−Ｃ−Ｃ−
Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−（ニーＣ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−へ−
Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−３！。

本発明の組み換えＤＮＡプラスミドは以下の＋ａ）およ
び（ｂ）を有する： （ａｌベクター、そして （ｂｌアグロバクテリウム（＾ｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕ
ｎ＋）株由来のＴｉ−プラスミドのＴ−ＤＮＡ断片に挿
入されるヒートショック遺伝子の発現を制御する植物Ｄ
ＮＡの断片。

植物ＤＮＡの前記断片がダイズ植物から得られ。

該断片は次の配列を有するか、もしくは実質的にそれと
相同である：　５’−Ｔ−＾−Ｃ−Ａ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ｔ
−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ａ−Ｇ−＾−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−＾−
八−Ｃ−Ｃ−＾−＾−八へＴへＴ−Ｇ−Ｃ−＾−Ａ−＾
−Ａ−＾−Ｇ−Ｔ−Ａ−Ｇ−Ｇ−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−
Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−八−八−Ｃ−八−Ｔ−Ａ−Ｃ−Ａ
−Ａ−Ｇ−Ａ−Ｔ−Ｔ−＾−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−
Ｃ−＾−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ａ−Ａ−Ａ
−Ｔ−Ａ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ａ　−Ｔ
−Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−
Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ａ−＾−Ａ−Ｃ−Ｇ−＾−八−Ｇ−Ａ
−Ａ−＾へＡ−Ａ−Ａ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−＾−Ｃ−Ｃ−Ｔ−
Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｇ−ミーＴ−Ｃ−↑−Ｃ−＾
−Ｔ−Ｔ−＾−Ｃ−八−＾−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｃ−
Ｔ−八−Ｇ−Ｔ　−Ｔ　−Ｔ　−Ｃ−Ｔ　−＾−Ａ−Ｔ
−Ｃ−Ｔ−Ｃ−＾−６−３゛。

植物ＤＮＡの前記断片がダイズ植物から得られ。

該断片は次の配列を有するか、もしくは実質的にそれと
相同である：　５’　−Ｔ−Ａ−Ｃ−Ａ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−
Ｔ−Ｇ−τ−Ｇ−Ｇ−＾−Ｇ−Ａ−＾−Ｔ−Ｔ−Ｃ−＾
−Ａ−Ｃ−Ｃ−Ａ−＾−＾−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−＾−Ａ−
Ａ−Ａ−＾−Ｇ−Ｔ−＾−Ｇ−Ｇ−＾−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ
　−Ｔ　−Ｃ−Ｔ　−Ｇ−Ｇ　−Ａ−＾−Ｃ−Ａ−Ｔ−
Ａ−Ｃ−＾−＾−Ｇ−＾−Ｔ−７−＾−？−Ｃ−Ｃ−Ｔ
−Ｔ−Ｔ−Ｃ−八−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−
八−Ａ−＾−Ｔ−八−ＣへＣ−Ｔ−（ニーＧ−Ｃ−Ｇ−
Ｔ−Ａ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ｃ
−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−＾−Ａ−Ａ−Ｃ−Ｇ−Ａ−
＾−Ｇ−Ａ−＾−Ａ−＾−Ａ−＾−Ｇ−Ｔ−Ｔ−八−Ｃ
−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｇ−Ａ−Ｔ−Ｃ−
Ｔ−Ｃ−４−Ｔ−Ｔ−ミー〇−へ−へ〜Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ
−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ａ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−＾−＾−
Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−八−Ｇ−Ｃ−Ｔ−八−ＡへＧ−Ａ−＾
−八へＡ−Ａ−Ｃ−Ｃ−八へＡ−Ａ−Ａ−Ｇ−Ａ−Ｔ−
Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−八−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−＾
−Ｇ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ｇ−Ｔ−
Ｇ−Ｇ−Ｃ−Ｃ−Ｇ−Ａ−Ａ−Ｇ−Ｇ−＾−Ｇ−Ｃ−Ａ
−Ａ−Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｇ〜＾−Ｔ−Ｃ−
Ｃ−＾−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−＾−Ｃ−Ｔ、−Ｃ−Ｇ−
＾−Ｃ−Ａ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−３’。

植物ＤＮＡの前記断片がダイズ植物から得られ。

該断片は次の配列を有するか、もしくは実質的にそれと
相同である＝５′−＾−Ｇ−Ａ−Ｃ−Ｃ−Ａ−Ａ−Ｔ−
Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ａ−＾−Ｃ−Ｃ−Ａ−Ａ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｃ
−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−＾−八へＧ−＾−Ｔ−Ｇ−Ｇ−
Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ａ−八−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ｇ−八−八−八
−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−八−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｇ−
Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−ミーへ−Ｇ−へ−Ａ−Ｇ−Ｃ−Ｃ
−へ−Ｇ−八−Ａ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−
Ａ−Ａ−八−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−へ−Ｇ−へ−＾−へ
−へ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ａ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−
Ａ−Ｇ−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−′ｒ−Ｃ−八−Ｇ−へ−Ａ−
Ｇ−Ｔ−八−Ｃ−Ｇ−Ｇ−Ｃ−八−Ｔ−Ｇ−Ａ−Ｔ−Ｇ
−Ａ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−八−Ｔ−八−八−Ｃ−ミーへ−Ｇ−
Ｇ−Ａ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−八−八−Ａ
−Ｇ−Ｔ−へ−Ｃ−Ｔ−Ａ−Ｔ−ミーＴ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−
Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−＾−Ｃ−八−ＴへＣ−八−Ｔ
へＴ−Ｔ−Ｔ−Ａ−Ａ−Ａ−Ｔ−Ａ−Ｃ−ＣＬＣ−Ｃ−
Ａ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−八
−八−Ｇ−Ａ−Ｃ−八−Ｃ−Ａ−Ｔ−Ｃ−へ−Ｃ−Ａ−
Ｇ−Ａ−へ　八−Ｇ−八−＾−Ｇ−Ｔ−Ｇ−八−Ａ−Ｇ
−ＧへＣ−へ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−へ−Ｇ−Ｃ−八−
Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ａ−Ｇ−へ−Ｔ−Ｔ−Ｃ
−Ａ＝へ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ａ−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−
Ｃ−Ａ−Ｇ−八−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ａ−Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｃ
−Ｔ−へ〜＾−Ｔ−へ−Ｔ−ミーＴ−Ｔ−Ｔ−Ａ−Ｃ−
Ａ−（ニール−八−Ｇ−Ａ−へ−Ｔ−Ｇ−八−Ｃ−Ｃ−
ミー３”。

植物ＤＮＡの前記断片がダイズ植物から得られ。

該断片は次の配列を有するか、もしくは実質的にそれと
相同である＝　５”−Ａ−Ｇ−Δ−Ｃ−Ｃ−八−Ａ−Ｔ
へＣ−Ｃ−Ｔ−Ａ−Ａ−Ｃ−Ｃ−Ａ−八−Ｔ−Ｇ−Ｔ−
Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−八−八−Ｇ−八−Ｔ−Ｇ−Ｇ
−Ｔ−Ｃ−Ｃ−へ−Ａ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ｇ−Ａ−へ−
Ａ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−八−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｇ
−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ａ−八−Ｇ−Ａ−へ−Ｇ−Ｃ−
Ｃ−へ−Ｇ−Ａ−ミーＴ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ　Ｇ
−八−八−へ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ａ−Ｇ−へ−八−
八−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ａ−Ｇ−Ｔ−’Ｉ’　Ｔ−Ｔ
−Ｇ−Ａ−Ｇ−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ａ−Ｇ−Ａ−
Ａ−Ｇ−Ｔ−八−Ｃ−Ｇ−Ｇ−Ｃ−ミーＴ−Ｇ−Ａ−Ｔ
−Ｇ−Ａ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ａ−Ｔ−Ａ−Ａ−Ｃ−八−八−
Ｇ−Ｇ−Ａ−Ｃ−Ｔ−′ｒ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ａ−
Ａ−へ−Ｇ−Ｔ−へ−Ｃ−Ｔ−Ａ−Ｔ−へ−Ｔ−Ｔ−Ｇ
−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ａ−Ｃ−八−Ｔ−Ｃ−
Δ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−＾−八−八−Ｔ−八−ｃ−ｃへｃ
へｃ−ミーＴ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−
Ｇ−Ａ−Ａ−Ｇ−八−Ｃ−Ａ−Ｃ−八−Ｔ−Ｃ−Ａ−Ｃ
−八−Ｇ−八−Ａ−Ａ−Ｇ−八−Ａ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−八−
八−Ｇ−Ｇ−Ｃ−へ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−へ−Ｇ−Ｃ
−八−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−へ−Ｇ−Ａ−Ｔ−
Ｔ−Ｃ−へ−へ−Ｃ，−Ｃ−Ｔ　−Ｃ−Δ−Ａ−Ｔ−Ｔ
−Ｔ−Ｇ−Ｃ−＾−Ｇ−八−Ｇ−Ｔ−Ｔ−へ−Ｃ−Ｇ−
Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−へ−Ａ−Ｔ−Ａ−Ｔ−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｔ
−Ａ−Ｃ−Ａ−Ｃ’−Ａ−八−Ｇ−八−Ｃ−Ｔ−Ｇ−へ
−Ｔ−へ−Ａ−Ｇ−Ａ−Ｇ−へ−へ−八−八−Ｔ−Ｇ−
Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−へ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−へ−Δ
−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−
Ｇ−Ｃ−Ｃ−Ｇ−八−八−Ｇ−Ｇ−八−Ｇ−Ｃ−ミーＧ
−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ａ−Ｃ−Ｃ−Ｃ−
Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−ミーＴ
−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−３”。

植物ＤＮＡの前記断片がダイズ植物から得られ。

該断片は次の配列を有するか、もしくは実質的にそれと
相同である：　５’−Ｔ−Ａ−Ｃ−八−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ｔ
−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ａ−Ｇ−八−八−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ａ−
八−Ｃ−Ｃ−Ａ−八−Δ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−八−Ａ−Ａ
−八−ＡへＧ−Ｔ−八へＧ−Ｇ　八−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−
Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−八−八−Ｃ−ミー丁一へ−Ｃ−Ａ
−ミーＧ−＾−Ｔ−Ｔ−Ａ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−
Ｃ−＾−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−八−八−ミ
ーＴ−Ａ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ｃ−Ｇ−Ｔ−八−Ｔ−
Ｃ−（ニーＣ−Ｃ〜Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ４
ニーＧ−Ｔ−Ｃ−Δ−八へ八へＣ−Ｇ−八へ八へＧ−八
へ八−へ−Ａ−へ−へ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ａ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−
Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｇ−ミーＴ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ａ
−Ｔ−Ｔ−Ａ−Ｃ−八−Ａ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｃ−
Ｔ−ミーＧ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ａ−Ａ−Ｔ−Ｃ−Ｔ
−Ｃ−へ−Ｇ−Ｃ−Ｔ−へ−Ａ−Ｇ−Ａ−へ−へ−八−
八−Ｃ−Ｃ−八−Ａ−八−八−Ｇ−八−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｃ
−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−八−Ｇ−Ｇ−
Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ｃ
−Ｃ−Ｇ−八−Ａ−［；−Ｇ−Ａ−Ｇ−Ｃ−ミーへ−Ｃ
−Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−＾−Ｔ−Ｃ−Ｃ−八−
Ｔ−Ｔ−ＣへＴ−Ｃ−八−（ニーＴ−Ｃ−Ｇ−へ−Ｃ−
へ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−３’。

本発明〕、アグロハタテリウム（八ｇｒｏｂａｃｔｅｒ
ｉｕｍ）種のＴ−ＤＮＡにより形質転換した植物細胞を
認識する方法は、ダイズヒートショソク遺伝子プロモー
ターの制御下で形質転換認識遺伝子を発現させることに
よるものであり９次の工程を含む二（ａ）ダイズヒート
ショソク遺伝子プロモーター配列、ヒートショック遺伝
子コード配列および該ヒートショック遺伝子配列の下流
塩基配列を有すルタイズヒートショソク遺伝子を単離す
ること。

ｆｂｌ前記形質転換認識遺伝子を単離し、そしてポリリ
ンカーを付着すること。

（Ｃ）前記形質転換認識遺伝子を前記ダイズヒートショ
ソク遺伝子に、前記ヒートショック遺伝子コード配列お
よび前記形質転換認識遺伝子の読み取りの枠を保存する
ような位置に挿入して組み換えダイズヒートショソク遺
伝子を生産すること。

該組み換えダイズヒートショソク遺伝子内では前記形質
転換認識遺伝子は前記ダイズヒートショソク遺伝子プロ
モーター配列に対してその制御下で発現できるような方
向で配置されている。

（ｄｌ前記組の換えダイズヒートショソク遺伝子をＴ−
ＤＮＡシャトルへクターヘクローニングし共に取り込ま
れた組み換えＤＮＡ断片を生産すること。

ｔｅｌ前記共に取り込まれた組み換えＤＮＡ断片を、細
菌株へ形質転換すること、該細菌株は前記共に取り込ま
れた組み換えＤＮＡ断片の複製を維持し得る。

（ｆｌ前記細菌株をヘルパープラスミドを有する第２の
細菌株と混合すること、該ヘルパープラスミドは前記共
に取り込まれた組み換えＤ　ＮＡ断片を第３の細菌株に
転送することができる。該第３の細菌株は前記共に取り
込まれた組み換えＤＮＡ断片の複製を維持し得す、該第
３の細菌株は内在性プラスミドを有する。

ｆｇ）前記共に取り込まれた組み換えＤＮＡ断片および
前記内在性プラスミド間の組み換え体を選択し組み換え
内在性プラスミドを生産すること。

（ｈ）前記第３の細菌株を植物に感染させること。

該第３の細菌株は前記組み換え内在性プラスミドを保持
しかつそこで複製する。そして （１）前記組み換えダイズヒートショソク遺伝子を保持
する植物細胞を有する植物を選択すること。

このようにして前記植物細胞の形質転換を証明すること
。

前記ヒートショックプロモーター配列が次の塩基配列を
有するか、もしくは実質的にそれと相同である： 前記ヒートショックプロモーター配列が次の塩基配列を
有するか、もしくは実質的にそれと相同である：５′−
八−Ｇ−Ａ−Ｃ−Ｃ−Ａ−＾−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ａ−Ａ
−Ｃ−Ｃ−八−＾−Ｔ−Ｇ、−ｒ−ｃ−ｒ−ｃ−ｃ−Ｔ
−Ｔ〜＾−Ａ−Ｇ−Ａ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−ミー
ミーＴ−Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ｇ−Ａ−＾−Δ−Ｃ−Ｔ−Ｔ、Ｃ
−Ｔ−＾−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｇ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−
Ｇ−＾−八へＧ−八へ八へＧ−Ｃ−Ｃ−Ａ−Ｇ−Ａ−＾
−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ａ−Ａ−Ａ−Ｇ−
Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ａ−Ｇ−八−＾−Ａ−八−ＴへＴ−Ｃ
−Ｔ−Ａ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−へ−Ｇ−ミーＴ−
Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ａ−Ｇ−Ａ−＾−Ｇ−Ｔ〜八−Ｃ−Ｇ
へＧ−Ｃ−Ａ−Ｔ−Ｇ−八−Ｔ−Ｇ−へ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−
Ａ−Ｔ−へ−へ−Ｃ−Ａ−八−Ｇ−Ｇ−Ａ−Ｃ−Ｔ−Ｔ
−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−＾−Ａ−Ａ−Ｇ−Ｔ−八−Ｃ−
Ｔ−八−ＴへＡ−Ｔ−ＴへＧ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｃ
−Ｔ−＾−Ｃ−Ａ−Ｔ−Ｃ−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ａ−
Ａ−Ａ−Ｔ−Ａ−Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ａ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｇ
−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−八−Ａ−Ｇ−Ａ−Ｃ−
＾−Ｃ−Ａ−Ｔ−Ｃ−Ａ−Ｃ−八−Ｇ−八−＾−Ａ−Ｇ
−ＡへＡ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−八−八−Ｇ−Ｇ−Ｃ−Ａ−Ｔ−
Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−＾−Ｇ−Ｃ−八−Ｇ−ＴへＴ−Ｔ−Ｔ
−Ｇ−Ｔ−Ａ−Ｇ−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ａ−八−Ｃ−Ｃ−
Ｔ−Ｃ−八−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ａ−Ｇ−＾−Ｇ
−Ｔ−Ｔ−Ａ−Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ　＾−Ａ−Ｔ−
八−Ｔ−ＡへＴ−Ｔ−Ｔ−八−Ｃ−Ａ−Ｃ−八−八−Ｇ
−Ａ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ａ−Ｔ−Ａ−Ａ−Ｇ−Ａ−Ｇ−八−
八−Ａ−Ａ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ａ−Ｔ
−Ｔ−Ｃ−Ｃ−八−八−Ｇ−Ｔ−Ｔ　−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｔ
　−Ｃ−Ｇ−Ｇ−Ｔ　−Ｇ　−Ｇ−Ｃ−Ｃ−Ｇ　−＾−
八へＧ−に−Ａ−Ｇ−Ｃ−八−Ｇ−Ｔ−ＧへＴ−Ｔ−Ｔ
−Ｔ−Ｃ−Ｇ−八−Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−
Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ａ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｇ
−Ｇ−３’。

本発明のダイズヒートショソク遺伝子プロモーターの制
御下で構造遺伝子を発現させる方法は。

以下の工程を包含する： ｆａ）前記ダイズヒートショソク遺伝子プロモーター断
片を単離すること。

（ｂｌ前記ダイズヒートショソク遺伝子プロモーター断
片をＴ−ＤＮＡシャトルへクターヘクローニングし組み
換えＤＮＡプラスミドを生産すること。

（Ｃ）外来構造遺伝子もしくはダイズ遺伝子を有するＤ
ＮＡ断片を単離しそして該ＤＮＡ断片を前記組み換えＤ
ＮＡプラスミド中の前記ダイズヒートショソク遺伝子プ
ロモーターの読み取り鎖３゛−側の位置に挿入しヒート
ショック発現プラスミドを生産すること、該ヒートショ
ック発現プラスミド内では前記ＤＮＡ断片は前記ダイズ
ヒートショソク遺伝子プロモーターに対してその制御下
で発現できるような方向に配置されている。

（ｄｌ前記ヒートショック発現プラスミドを第１の細菌
株へ形質転換すること、該細菌株は前記ヒートショック
発現プラスミドの複製を、維持し得る。

ｌｅｔ前記ヒートショック発現プラスミドの複製を維持
し得る前記細菌株をヘルパープラスミドを有する第２の
細菌株と混合すること、該ヘルパープラスミドは前記ヒ
ートショック発現プラスミドを第３の細菌株に転送する
ことができる。該第３の細菌株は前記ヒートショック発
現プラスミドの複製を維持し得す、該第３の細菌株は内
在性プラスミドを有する。

（ｆｌ前記ヒートショック発現プラスミドおよび前記内
在性プラスミド間の組み換え体を選択し。

組み換え内在性プラスミドを生産すること。

ｔｇ＋前記第３の細菌株を植物もしくは植物培養細胞に
感染させること、該第３の細菌株は前記組み換え内在性
プラスミドを保持しかつそこで複製する。そして ｆｈｌ前記外来構造遺伝子もしくはダイズ遺伝子を保持
する植物細胞を含有する植物体または植物培養細胞を前
記ダイズヒートショソク遺伝子プロモーターの制御下で
選択すること、該ダイズヒートショック遺伝子プロモー
ターは前記組み換え内在性プラスミドから前記植物細胞
へ転送されたものであり、該外来構造遺伝子もしくはダ
イズ遺伝子はヒートショック処理または他のストレス処
理により発現する。

前記ヒートショック遺伝子プロモーター断片が次の塩基
配列を有するか、もしくは実質的にそれと相同である：
　５’　−Ｔ−Ａ−Ｃ−Ａ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−
Ｇ−Ｇ−Ａ−Ｇ−＾−八へＴ−Ｔ−Ｃ−Ａ−Ａ−Ｃ−Ｉ
Ｃ−Ａ−＾−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ａ−八−八−Ａ−ミ
ーＧ−Ｔ−ＡへＧへＧ−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−
Ｔ−Ｇ−Ｇ−＾−八へＣ−Ａ−Ｔ−Ａ−Ｃ−＾−Ａ−Ｇ
−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ａ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ａ−
Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ａ−＾−Ａ−Ｔ−Ａ
−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ｃ−Ｇ−Ｔ−ミーＴ−Ｃ−Ｃ−
Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ｔ
−（ニーＡ−＾−Ａ−Ｃ−Ｇ−＾−＾−Ｇ−へ−Ａ−へ
−へ−へ−Ａ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−＾−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−
Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｇ−Ａ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ａ−Ｔ−Ｔ
−Ａ−Ｃ−Ａ−＾−Ｔ−Ｃ−Ｔ−（ニーＣ−Ｃ−Ｔ−ミ
ーＧ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−八−Ａ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−
＾−Ｇ−３’　。

前記ヒートショック遺伝子プロモーター断片が次の塩基
配列を有するか、もしくは実質的にそれと相同である：
　５’−Ａ−Ｇ−Ａ−Ｃ−Ｃ−Ａ−Ａ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ
−＾−Ａ−Ｃ−Ｃ−Ａ−Ａ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−
Ｇ−Ｔ−Ｔ−＾−八へＧ−Ａ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−ｃ
−ａ−ａ−７−ｃ−ｃ−ｃ−６−八−Ａ−Ａ−Ｃ−Ｔ−
Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ａ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｇ−Ｇ−Ｔ−Ｔ
−Ｃ−Ｇ−八−＾−Ｇ−八−＾へＧ−Ｃ−Ｃ−Ａ−Ｇ−
Ａ−＾−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−丁−Ｃ−Ｔ−Ｇ−＾−＾−八
−ＧへＴ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−八−Ｇへ八−Ａ−Ａ−Ａ、−Ｔ
−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ａ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−＾−Ｇ−
Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−八−Ｇ−Ａ−＾−Ｇ−Ｔ−Ａ
−ＣへＧ−Ｇ−Ｃ−＾−Ｔ−Ｇ−八−Ｔ−Ｇ−Ａ−Ｔ−
Ｇ−Ｃ−Ａ−Ｔ−Ａ−Ａ−Ｃ−Ａ−Ａ−Ｇ−Ｇ−＾−Ｃ
−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−八−八−Ａ−Ｇ−Ｔ−
Ａ−Ｃ−Ｔ−ミーＴ−＾−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｃ
−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ａ−Ｃ−ミーＴ−Ｃ−＾−Ｔ−Ｔ−Ｔ−
Ｔ−Ａ−八−＾−Ｔ−Ａ−Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ｃ−Δ−Ｔ−Ｇ
−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−＾−八へＧ−
八へＣ−Ａ−Ｃ−Ａ−Ｔ−Ｃ−へ−Ｃ−Ａ−Ｇ−Ａ−Ａ
−＾−Ｇ−へ−ミーＧ−Ｔ−Ｇ−Ａ−Ａ−Ｇ−Ｇ−Ｃ−
へ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−ミーＧ−Ｃ−Ａ−Ｇ−Ｔ−Ｔ
−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−＾−Ｇ−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ａ−八−
Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−へ−ＡへＴ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−へ−Ｇ
−Ａ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ａ−Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−ミー
Ａ−Ｔ−Ａ−Ｔ−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−八−Ｃ−Ａ−Ｃ−ミ
ーへ−Ｇ−＾−Ｃ−Ｔ　−Ｇ−ミーＣ−Ｃ−Ｃ−３’。

（発明の構成） 以下に本発明の詳細な説明する。

ダイズ精製核゛から単離した染色体Ｄ　Ｎ　Ａを制限酵
素分析およびサチン法（サザン　プロット　ハイブリダ
イゼーション）にかけた、ハイブリダイゼーションプロ
ーブとしてクローン化ｈｓ−ｃ　Ｄ　ＮＡを用いた。６
セツトのｃＤＮＡクローンを同定した。これらは１５〜
２７キロダルトンにわたるｈｓ蛋白質に対して（植物に
はこの範囲のサイズのｈｓ蛋白質が少な（とも３０はあ
る）「異なる」複遺伝子族のメンバーを写している。さ
らに、プローブとしてｃＤＮＡクローン１９６Ｂを用い
て１つの遺伝子クローン（ｈｓ６８７１）を単離した。

これらのグループは以下の通りである； （以下余白） λ１０５９ダイズライブラリー（Ａｇｒｉｇｅｎｅｔｉ
ｃｓ　Ａｄ−ｖａｎｃｅｄ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｌａｂ
ｏｒａｔｏｒｙ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ
で構築された）から単離されるゲノムクローンを単離す
ること、制限地図を作ること、サブクローニングするこ
と、そして配列決定を行うこと、および上記のｃＤＮＡ
クローンのＤＮＡ配列分析に主に努力専念した。

４つのサブクローン、名称はｐＥ２０１９．　ｐＬ２０
０５．　Ｉ）Ｍ２Ｏ２Ｓそしてｈｓ６Ｂ７１をλゲノム
クローンから作った。

これら４つのサブクローンは３つの異なる遺伝子族を表
している。すなわち、　ｃＤＮＡクローン２００５．２
０１９そして１９６８である。これらゲノムクローン由
来のｃＤＮＡに相同であることに基づいてＥｃｏ　Ｒ１
断片を選択しそしてｐＵＣ９へサブクローン化した。こ
れら挿入物の部分の配列分析を行った。すなわち。

ｐＥ２０１９の８５６ヌクレオチド（第１図）　、　ｐ
Ｌ２００５の９７１ヌクレオチド、ｐＭ２００５の９４
４ヌクレオチド。

そしてｈｓ６Ｂ７１の１５３６ヌクエオチドそれぞれに
ついて行った。配列相同性分析（Ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｈ
ｏｍｏｌｏ−ｇｙ　ａｎａｌｙｓｉｓ　）によりそれぞ
れのゲノムサブクローン配列内で相当するｃＤＮ＾相同
性の位置を探した。

交叉相同性分析（Ｃｒｏｓｓ−ｈｏｍｏｌｏｇｙ　ａｎ
ａｌｙｓｉｓ　）によりゲノムサブクローンにおいて次
のような実質的なｃＤＮ＾相同性がしめされた：　（ａ
　）　ｐＥ２０１９はｐＦＳ２０１９ｃＤＮ八クローン
の３４０塩基について９８％以上の相同性に相当する。

（ｂ）この２０１９相同性の直接上流は、３５０塩基の
ｐＣＥ５３　ｃＤＮＡクローン配列に対して９０％以上
の相同性を示す領域である。従って配列データおよび雑
種選択／翻訳のデータはｐＣＥ５３がｐＰｓ２００５遺
伝子族のメンバーであることを示唆する。（Ｃ）さらに
、　ｐＦｓ２０１９は２００５遺伝子族のメンバーの３
゛−側の翻訳されない領域であることがわかった。（ｄ
）ホモロジーマトリクス分析により交叉相補結合（クロ
スハイブリダイズ）しないｃＤＮＡ　（例えば、　ｐＣ
Ｅ７５およびＰＦ５２０３３　）でさえも４０ヌクレオ
チドにいたる長さについて７０％の相同性とともに５０
％以上の相同性を示す長い範囲を含むことが示された。

ｃ　Ｄ　Ｎ　Ａ２０１９に相補結合（ハイブリダイズ）
するダイズゲノムクローンｐＥ２０１９の７０００塩基
ＨｉｎｄｌｌＩ断片（Ｈ２）を同定した（第２図）。ｐ
Ｅ　２０１９遺伝子をＨ２の左末端Ｂａｎ旧小断片（Ｏ
Ｈと呼ばれる一第２図）にマツプした。というのはこの
領域はｃＤＮＡ２０１９プローブに相補結合する唯一の
部分であることが示されたからである。この断片を配列
決定の研究およびＴｉ−プラスミドへの導入のために選
別した。Ｍ１３キロプリージョン戦法（［１ａｒｎｅｓ
＋Ｗ、Ｍ、およびＢｓｖａｎ　（１９８３）　Ｎｕｃｌ
ｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅ−５ｅａｒｃｈ　１１　：　
３４９−３６８）によりＢＨ断片の配列を決定しそして
この小断片を欠失した一連の欠失ファージを構築した。

ドロソフィラヒートショック共通配列（ＣＴｘＧＡＡｘ
ｘＴＴＣｘＡＧ）　（第３図）について７８％の相同性
を示す、またＳＶ４０反復塩基対（ＧＧＴＧＴＧＧＡＡ
ＡＧ　）　（第３図）について７３％の相同性を示すい
くつかの領域は興味深い。

Ｈ２において転写およびｃＤＮＡ相同性の位置に損性が
あること（コード配列は第４図参照）から遺伝子２０１
９に対するプロモーターがＨ２上でサブ断片ＢＨのＢａ
ｍ■■部位の右側約１９０塩基対の所に位置することが
証明された。この２０１９遺伝子の極性は１１２の一番
左のＢａｍ　Ｉ１１部位の１５７ヌクレオチド上流から
左Ｈ４ｎｄｌｌ［部位に向かって５”−から３°−と進
む。

この結論は阿１３一本鎖プローブのハイブリダイゼーシ
ジンおよびダイズヒートショックＲＮＡを用いたＳ１雑
種保存（ｈｙｂｒｉｄ　ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ　）の研
究をもとにしている。全ての３つの遺伝子の５°末端は
“ＴＡＴＡ″モチーフ（ＴＴＡＡＡＴＡＣ）の最初のＴ
から３２から２８塩基の位置にあり、この領域がプロモ
ーターとして作用することを示唆している。ナザン法お
よびヒートショックＲＮＡを用いたＳ１雑種保存の結果
から転写物は長さが６８０−９００塩基で、長さ約１５
０塩基と示されているｐｏｌｙ　（Ａ）束部を含まない
ことが示された。ｃＤＮＡは全長より短く　（約３５０
塩基）そしてオリゴ−ｄＴをプライマーとして得たので
従ってそれは転写物の３′一部分に相当する。

従って、Ｂ１！断片上のｃＤＮＡ相同性の位置より、転
写物は３°−から５゛一方向に部位５９０からＢａｍ　
Ｈ１部位へそしてそれを越えて伸びているにちがいない
。

この結論は３゛−標識ＢＨ断片を用いたＳ１雑種保存マ
ツピングにより確実になった。５９０　±１０塩基対の
保存されたバンドが見られ、これはｃＤＮＡ相同性の３
′−末端と一致する。そして５゛末端およびプロモータ
ーがＢａｍ旧部位の右方に存在することが示された。ク
ローンｐＥ２０１９のコード配列を完成した（第４図）
。図中の空欄はヌクレオチド配列もしくはアミノ酸配列
と同一であることを示す。図中の”Ｄｅｌはコドンの削
除を示す。それは４６２塩基対のオープンリーディング
フレームから成る。

さらに、　ＡＴＧ翻訳開始コドンの５゛側（すなわち。

上流）の２９１塩基対の配列を決定した。これら２９１
の塩基対はプロモーター領域の本質的な因子、すなわち
、　ＣＡＡＴボックス、　ＴＡＡＴＡボックスそして転
写開始点の全てを含む。その上、「共通配列」があり（
翻訳開始コドンＡＴＧから１３１−１４４塩基対上流に
あり５’ＣＴｘＧＡＡ　ｘｘＴＴＣｘへＧ−３’　の配
列を持つ）これはすべてのヒートショック遺伝子で見い
出されておりしかもヒート誘導に必要とされる（Ｐｅｌ
ｈａｍ。

Ｈ，Ｒ，ＢおよびＭ、Ｂｉｅｎｚ　（１９８２）　ＥＭ
ＢＯＪ、旦：　１４７３−１４７７）。仮にこの共通配
列がプロモーター領域から欠失したならば、ヒートショ
ックのストレスまたは他のいかなるストレスによっても
ヒートショック遺伝子は誘導されない。翻訳開始コドン
から１７２−１８５塩基対上流に」［４０エンハンサ−
配列に高度に相同な別の配列が生じているが、目下この
発見の意義は定かではない。保存配列は、はるか上流に
存在しそしてこの配列はまた２つのドロソフィラヒーｌ
ショックプロモーターのよく似た位置で見つけられてい
る。最後に、停止コドンＴＧＡの３゛側（ずなわら、下
流）上の７３１の塩基対の配列を明らかにした（第５図
にこの配列の一部を示す）。

他の３つのヒートショック遺伝子（すなわちクローンｐ
Ｍ２００５．　ｐＬ２００５およびｈｓ６８７１）のコ
ード配列およびフランキング配列を決定した。９Ｍ２０
０５については、４２３塩基対のオープンリーデングフ
レームも決定した（第４図）。同様に翻訳開始コドンＡ
ＴＧから４１８塩基対上流（そして前節中でｐＨ２０１
９に対して記載した全てのプロモーター調節配列を含ん
でいる）（第３図）、および停止コドンＴＡＡから１７
１塩基対下流（そのうち１００塩基対を第５図に示す）
も決定した。ｐＬ２００５については、４５０塩基対の
オープンリーデングフレーム（第４図）。

翻訳開始コドンＡＴＧから４２２上流（そして前節中で
ｐＨ２０１９に対して記載したすべてのプロモーター調
節配列を含んでいる）（第３図）、および停止コドンＴ
へへから８４２塩基対下流（そのうち１００塩基対を第
５図に示す）を決定した。ｈｓ６８７１については、４
５９塩基対のオープンリーデングフレーム（第４図）、
翻訳開始コドンＡＴＧかも４５６上流（そして前節中で
ｐＨ２０１９に対して記載した全てのプロモーター調節
配列を含む）（第３図）、および停止コドンＴＡＡから
９４３塩基対下流（そのうち１００塩基対を第５図に示
す）を決定した。これら４つのヒートショック遺伝子は
コード領域中に実質的に相同な配列を有する（第４図）
。上流プロモーター領域（第３図）ではクローンｐＥ２
０１９．　ｐＨ２００５およびｐＬ２００５は実質的に
相同な配列を有するが。

これら３つのクローンの塩基配列とｈｓ６８７１の塩基
配列の間には多くの違いがある。しかしながら。

４つのクローン全ての“ヒートショック共通配列”すな
わちＣＴｘＧＡＡｘｘＴＡＣｘｘの間には強い類似性が
あること（ま注目すべきである（第３図）。この４つの
配列について停止コドンの下流にある１００塩基対のデ
ータを示す（第５図）。非常に小さな配列相同性が生じ
ていることが明らかである。重要なことに、これら４つ
のダイズヒートショソク遺伝子のコード配列、上流プロ
モーター領域（すなわち翻訳開始コドンの５゛側）およ
び下流フランキング領域（すなわら停止コドンの３゛側
）はドロソフィラヒートショソク遺伝子の対応する領域
とほとんど１ＨＩｕ性を持たない　（Ｈａｃｋｅｔ、　
Ｒ，Ｗ、およびＪ、Ｔ、Ｌｉｓ　（１９８３）　Ｎｕｃ
ｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅｓ、旦：　７０１１−７０
３１　：　Ｉｎｇｏｌｉａ、Ｔ、Ｄ、およびＥ、八、Ｃ
ｒａｉｇ　（１９Ｂ２）Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ、Ａｃａｄ、
Ｓｃｉ、ＵＳＡ　７９　：　２３６０−２３６４　；Ｓ
ｏｕｔｈｇａｔｅ＋　Ｒ，等（１９８３）　Ｊ、Ｍｏ１
．Ｂｉｏｌ、１６５　：　３５−６７）。

ドロソフィラおよびダイズヒートショソク遺伝子由来の
プロモーター領域の「共通配列」の間には類似性はある
が、ダイズヒートショソク遺伝子のプロモーター領域は
ドロソフィラ遺伝子に特徴的な逆反復配列を持たない。

ダイズヒートショソク遺伝子のプロモーター領域は外来
遺伝子もしくはダイズ遺伝子の一時的な活性化が必要な
時はいつでも多くの方法で利用することができる。〔外
来遺伝子とはここではダイズ以外のいかなる種のゲノム
においても正常に見い出されるあらゆる遺伝子として定
義される。〕例えば、アグロハタテリウム・チューメツ
アシニー７　Ｚ　（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕ
ｍｅｆａｃｉｅｎｓ　）の野生株Ｔｉ−プラスミド由来
のＴ−ＤＮＡを植物ゲノム内へ転送した場合、その結果
形質転換した植物細胞は腫瘍である。組織培養中のこれ
らの形質転換した腫瘍植物細胞は完全な植物体の再生に
は利用できない。一方、仮に“能力を失った”Ｔ−ＤＮ
Ａ領域を使えば、形質転換した植物細胞から組織培養に
より完全な植物体を再生できるが、しかし形質転換した
細胞と形質転換していない細胞とを区別することは難し
い。本発明ではヒートショックを誘導できる制御下でエ
セシリア・コリー（Ｅ、ｃｏｌｉ）のβ−ガラクトシダ
ーゼ遺伝子をダイズヒートショ・７り遺伝子プロモータ
ー・で置き換えることによりこの困難は除りた。この組
み換え構造はダイズヒートショックプロモーター領域お
よびヒートショック遺伝子の５”末端における２４のコ
ドンをコードとする領域を有する（実施例５参照）。こ
の組み換えＤＮＡ断片はその後Ｔｉ−プラスミドのＴ−
ＤＮＡ内に組み込まれそして植物細胞を形質転換するの
に使われる。適当な基質存在下では２組織培養中の形質
転換細胞はヒートショック処理により青色に生育するの
で形質転換していない細胞と区別できる。このようにβ
−ガラ′クトシダーゼーヒートショソクプロモーター複
合体は形質転換細胞を認識する手段として利用される。

本発明はβ−ガラクトシダーゼ遺伝子の例に限らず、そ
して他の遺伝子も含むであろう。その遺伝子とは植物ヒ
ートショック遺伝子プロモーターの制御下で置き換えら
れたときに特異的な植物細胞の型を認識するのに利用し
得るものである。形質転換細胞の認識に有用であるこの
ような遺伝子をここでは形質転換認識遺伝子と定義する
。実施例２では一時的な発現を望む遺伝子をダイズヒー
トショソクプロモーターの制御下で置き換えること以外
は上記のプロトコールに従うのが有用であろう。この組
み換え構造は単にダイズし一トプロモーター領域を含む
だけである。すなわちＡｌｕＩ部位（翻訳開始コドンＡ
ＴＧから１７塩基対上流）からＥｃｏ　Ｒ１部位（翻訳
開始コドンＡＴＧから１７６塩基対上流）まで伸びてい
る１５９塩基対だけを含む（実施例７参照）。

仮に殺虫剤蛋白質を（バシラス・チューリンギエンシス
の結晶性内毒素と＼限定はしないがそれを含む）植物ヒ
ートショック遺伝子プロモーター制御下で置き換えれば
、そのｉのヒート中に殺虫剤蛋白質の発現を活性化する
ことができる。この時期は昆虫の幼虫の摂食時と一致し
、従って植物に対する抵抗性が昆虫に与えられる。しか
しこれば各日々の限定された微妙な時期のみである。同
様に。

除草剤抵抗性を与えるような遺伝子をヒートショック遺
伝子の制御下で置き換えると、除草剤抵抗性遺伝子がそ
の日のヒート中に活性化した後除草剤を野原にまくこと
ができる。

摩ｒ（’ｔ−） ダイズマメ　（グリシンマックス変種ハイネ）を湿らせ
たバーミキュライト中で暗黒、２８℃−３０°Ｃのもと
に３日間発芽させた。その後植物体を２×１０−３Ｍの
２，４−ジクロルフェノキシ酢酸とともにまき、２４時
間後成熟した胚軸組織を収穫した。

組織を１％シヨ糖、１＋ｎＭＫ−リン酸塩（ｐ）１６．
０　）　。

５０μｇ／ｎｌｘクロラムフェニコール、１０μｇ　７
ｍβ２．４−ジクロルフェノキシ酢酸を含む緩衝液中で
。

２８℃（コントロール）または４０℃および４２．５℃
（ヒートショック）でそれぞれ、別に指定がなければ２
時間インキユヘイトした。

インキベーション後（実施例１参照）胚軸組織から全Ｉ
？ＮＡを抽出し、そしてｐｏｌｙ（Ａ＞“ＲＮＡを従来
の方法（Ｓｉ１ｆｌｏｉｙ、Ｃ，Ｄ、等（１９７９）　
Ｂｉｏ−ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　２３　：　２７２５−２
７３１　）に従って変法（Ｋｅｙ。

、ｒ、ｍ、等（１９８１）　Ｐｒｏｃ、ＮａＴ、Ａｃａ
ｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ　７８　：　３５２６−３５３０　
’）を用いて単離した。ｈｓダダイ胚軸由来のＰｏ１ｙ
　（Ａ）　”ＲＮＡをオリゴ−（ｄＴ）−プライマー二
重鎖ｃＤＮＡ合成の鋳型として用いた。

（Ｗｉｃｋｅｎｓ＋Ｍ、Ｐ、等（１９７Ｂ）　Ｊ、Ｂｉ
ｏｌ、Ｃｈｅｍ、２５３　；２４８５−２４９５　；　
ＢａｕｌｃｏＩＩｌｂｅ、Ｄ、Ｃ，およびＪ、Ｌ、Ｋｅ
ｙ　（１９８０）　Ｊ。

Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、２５５　：　８９０７−８９１３
による変法）。さらなる変法として、第１鎖の合成は標
識せずそして２０／ｊＭ　（”Ｐ、）　ｄＣＴＰ　（４
００Ｃｉ　／　ｍＭ、Ａｍｅｒｓｈａｎ＋）をＤＮＡポ
リメラーゼＩ　（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ　Ｍａｎｎｈｅ
ｉｍ　）による第２鎖合成に対するトレーサーとして用
いた。Ｓｌ−断片化二重鎖ｃＤＮＡをシｇ糖密度勾配法
でサイズ分画した。ショ糖の濃度は１０〜３０％。

緩栃液は１０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｊ！ＰＨ７，５，１ｍ
Ｍ　ＥＤＴ＾および１００ａ＋Ｍ　ＮａＣ１を含み、遠
心はベックマン５Ｗ５０．１０−ターを用いて２０℃の
もとで５０．ＯＯＯｒｐｍ　６時間行った。約０，５　
ｐｇの二重鎖ｃＤＮＡ（長さは５００　ｂｐ以上）にホ
モポリマーをティリングした。末端トランスフェラーゼ
（Ｂｅｔｈｅｓｄａ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　１ａｂｏ−ｒ
ａｔｏｒｉｅｓ）を用いて断片の３′末端にｐｏｌｙ　
（ｄＣ）を付加した（Ｒｏｙｃｈｏｕｄｈｕｒｙ、　Ｒ
，およびＲ，Ｗｕ　（１９８０）Ｉｎ　：　Ｇｒｏｓｓ
ｍａｎ、　Ｌ、　＋　Ｍｏ１ｄａｖｅ＋　Ｋ、　、編集
、　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎＥｎｚｙｍｏｌ、Ｖｏｌ、６
５　；　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ　：　Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐ
ｒｅｓｓ＋ｐｐ。

４３−６２　）。　平均の長さ３０ヌクレオチド／末端
が合成された。同様の反応によりＩ　ＩＩｇのハ［■切
断ｐＢＲ３２２にｐｏｌｙ　（ｄＧ）を同程度ティリン
グした。

０．７μｇの（＋ＩＧ）−尾部ｐＢＲ３２２および０，
１４μｇの（ｄＣ）−尾部ｃＤＮＡをアニーリイング反
応に用いた。アリール化した分子を用いてエセリシア・
コリー（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉｇ　ｃｏｌｉ）　５Ｋ１
５９０を形質転換させた（Ｋｕｓｈｎｅｒ、Ｓ、Ｒ，（
１９７８）　Ｉｎ　：　Ｂｏｙｅｒ＋　Ｈ，Ｗ、＋Ｎ１
ｃｏｓｉａ、Ｓ、編集、Ｇｅｎｅｔｉｃ　Ｅｎｇｉｎｅ
ｅｒｉｎｇ＋Ａｍｓｔｅｒｄａｍ　：Ｅｌｓｅｖｉｅｒ
／Ｎｏｒｔｈ　１ｌｏｌｌａｎｄ　Ｂｉｏｍｅｄｉｃａ
ｌ　Ｐｒｅｓｓ＋ｐｐ１７−２３　）。形質転換体をテ
トラサイタリン含有培地で選択し、そのうち９９％がＴ
ｃＲＡｐＳ表現型で示されるような組み換えプラスミド
を有していた。

実施例３　ニグイズゲノムＤＮＡライブラリーの選囲 本質的には従来の方法で（Ｎａｇａｏ、　Ｒ，等（１９
８１）ＤＮＡ叢：１−９）精製核から高分子量ＤＮＡを
単離した。グイズゲノムＤＮＡライブラリーの選別、λ
シャロン４八ベクターのＥｃｏ　ＲＩ部位へのクローン
化を従来の方法（Ｎａｇａｏ、Ｒ，Ｔ、等（１９８１）
　ＤＮＡ１　：１−９）に基づいて行った。このときｃ
ＤＮＡクローンの放射活性標識挿入プローグを用いたｃ
ＤＮＡクローンはヒートショック処理したダイズ胚軸の
ｐｏｌｙ　（Ａ）　’″ＲＮＡから合成されたものであ
る（Ｓｃｈｏｆｆｌ、　Ｆ　、およびＪ、　Ｋｅｙ　（
１９８２）Ｊ、Ｍｏ１．Ａｐｐｌ、Ｇｅｎｅｔ、１　：
３０１−３１４　）。

制限エンドヌクレアーゼＥｃｏ　Ｒ１，Ｈｉｎｄ　ＩＩ
およびＰｓｔ　ＩによるＤＮＡ切断の分析条件は従来の
方法（Ｍａｎｉａｔｉｓ、Ｔｏ等、　（１９８２）　Ｍ
ｏ１ｅｃｕｌａｒ　ｃｌｏｎｉｎｇ。

ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏ１ｄ　
Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａ−ｔｏｒｙ
）に基づきそして１％アガロースゲル上でのＤＮＡ断片
の標準的な電気泳動もまた従来の方法（Ｓｃｈｏｆｆｌ
、’Ｆ、および＾、Ｐｕｈｌｅｒ　（１９７９）　Ｇｅ
ｎｅｔ、Ｒｅｓ。

Ｃａ＋ｗｂ、　３４　：　２８７−３０１）に依った。

ダイズ染色体ＤＮＡの切断には１０．ｃｒｇ　／レイン
そしてスラスミドもしくはλ−ＤＮＡの切断には約０．
５μｇ／レイン使用した。ダイズｒＤＮＡプローブ（Ｄ
ｒ、　Ｒ。

Ｎａｇａｏ、１Ｉｎｉｖｅｒｓｉｔ、ｙ　ｏｆ　Ｇｅｏ
ｒｇｉａから親切にも頂いた）を用いた・す・ザンブロ
ソトハイブリダイゼーションによってダイズ染色体ＤＮ
Ａの切断が完全であるかどうか調べた。断片の大きさは
一般に、λ−ＤＮＡ断片（旺Ｉ１１．肛閃Ｉ［１，Ｅｃ
虹１１１　／肛閃■）と同じゲルに流してこれと比較す
ることにより決定した。グイズゲノムＤＮＡのＥｃｏ　
Ｒ１／Ｈｉｎｄ■断片をｐＢＲ３２２の各部位にサブク
ローニングするのは従来の方法（Ｍａｎｉａｔｉｓ、Ｔ
、等（ｉ９Ｊ３２）前出）に基づいて行った。潜在性組
み換えクローンの選別は、クローン化ＤＮＡ断片のサイ
ズをｐ７０参考に用いて測定することにより行った。特
異的クローンの固定は、クローン１９６８のｃＤＮＡプ
ローブを用いた　サザンブロソトハイブリダイゼーショ
ン　により行った（Ｓｃｈｏｆ　ｆ　１　、　Ｆ、およ
びＪ、Ｌ、Ｋｅｙ　（１９８２）　Ｊ、Ｍｏ１．八ｐｐ
１．　Ｇｅｎｅｔ、土：　３０１−３１４　）　。

五豊北を本・ この構築の出発材料（ここでは組み換えダイズヒートシ
ジ・ツク遺伝子と定義する）は、ヒートショック遺伝子
２０１９のプロモーターを保持する７キロベース（ｋｂ
）の財皿■断片（Ｒ２）　、同じヒートショック遺伝子
のコード配列およびこのコード配列の読み取り鎖の３′
側上のフランキング配列である（以後、　ｈｓ２０１９
と記す）（第６図）。このＲ２配列を制限エンドヌクレ
アーゼＥｃｏ　ＲＩで切断しそしてその産物をアガロー
スゲル電気泳動によ・り分離する。それからヒートショ
ック遺伝子２０１９の全構成要素を含むような１．７８
ｋｂのＦｌｉｎｄ　ＤＩ　−Ｅｃｏ　Ｒ１を、前もって
ＨｉｎｄＩ［［およびＥｃｏ　Ｒ１で切断したプラスミ
ドｐＢＲ３２２内へ挿入する。この組み換えプラスミド
（ｐＢＲ３２２−ｈｓ２０１９）をＥ、ｃｏｌｉ　ＪＭ
ｌｏｌへ形質転換し、ここで増幅させる。増幅させた後
、　ｐＢＲ３２２−ｈｓ２０１９をＢａｎ＋旧で部分切
断し、そしてＺ遺伝子（β−ガラクトシダーゼをコード
する）をｈｓ２０１９Ｂａｍ旧部位に挿入する。このＺ
遺伝子は両末端にポリリンカーを有している（Ｃａｓａ
ｄａｂａｎ、Ｍ、Ｊ、等（１９８３）　Ｍｅｔｈｏｄｓ
　Ｅｎｚｙｍｏｌ、１００　：　２９３−３０８　）　
、　Ｚ遺伝子の各末端上のポリリンカーを前もってＢａ
ａ　Ｈｌで切断しておく。Ｚ遺伝子がｐＢＲ３２２のＢ
ａｎ旧部位にも挿入する可能性があることに注意すべき
である。この２部位における挿入は制限マツピングによ
り識別できる。ｈｓ２０１９遺伝子のＢａａ　Ｈ１部位
はｈｓ２０１９コード領域のコドン２４に位置し、従っ
てこの構築物はｈｓ２０１９遺伝子の最初の２４コドン
に続いてＺ遺伝子インフレームのコード領域を保持する
こと　になる。ｐＢＲ３２２に挿入されたこの組み換え
ダイズヒートショソク遺伝子は以下ｐＢＲ３２２／　５
Ｂ１３と呼ふ（ずなわｈｓ２０１９プロモーター−ｈｓ
２（１１９コ一ド配列の２４コドン−Ｚ遺伝子−ｈｓ２
０１９コード配列−３゛フランキング配を有するｐＢＲ
３２２）。５Ｂ１３（以下２組み換えダイズヒートショ
ソク遺伝子と記す）は１ｌｉｎｄｌｌ［およびＥｃｏ　
Ｒ１で切断してｐＢＲ３２２／５Ｂ１３から回収し続い
てその産物をアガロースゲル電気泳動に分離することが
可能である。

の、アグロバクテリウム・チューメファシエンス（Ａ　
ｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ　）
　Ｔｉ−プラス旺ｐＢＲ３２２およびアグロバクテリウ
ム・チューメファシエンス（＾、ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎ
ｓ　）のＴｉ−プラスミドのＴＬ−ＤＮＡを保持するＴ
−ＤＮＡシャトルベクターｐ２３３　Ｇをアグリジェネ
テイクス　アドバンスト　リサーチ　ラボラトリ−、マ
ジソン、ウイスコンシン（ｔｈｅ　Ａｇｒｉｇｅｎｅｔ
ｉｃｓ　Ａｄｖａｎｃｅｄ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈＬａｂｏ
ｒａｔｏｒｙ、　Ｍａｄｉｓｏｎ、　Ｗｉｓｃｏｎｓｉ
ｎ）から得た。このＴ−ＤＮＡシャトルベクター（ｐ２
３３Ｇ）は１ｃｏｌｉＪＭ１０１へ形質転換されていた
。ｐＢＲ３２２はアンピシリン（ａ＋ｓｐ’　）および
テトラサイクリン（ｔｅｔ’　）のいずれにも抵抗性で
あるが、　ｐ２３３Ｇはａｍｐ’にのみ抵抗性である。

というのはｔｅｔ’遺伝子中にＴＬ　−ＤＮＡが挿入さ
れてしまっており従ってその活性を破壊するからである
（第７図）。増殖させた後、　ｐ２３３Ｇを単離し、そ
してアグロバクテリウム　チューメファシエンス（＾、
　ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）株１５９５５由来のＴ−Ｄ
ＮＡの転写体１０番中の展Ｉ制限エンドヌクレアーゼ部
位で切断する（Ｂａｒｋｅｒ＋Ｒ，Ｆ、等（１９８３）
　Ｐｌａｎｔ　Ｍｏ１．Ｂｉｏｌ−，２：　３３５−３
５０　）。

このＳａ＋ａ　１部位に１■リンカ−を結合して１１−
Ｉ［で切断する。

５Ｂ１３．　ＤＩ順（■および匡ｏＲＩでｐＢＲ３２２
／　５Ｂ１３を切断して前もって回収したものには体鎖
末端が突き出ており、これはこれら制限エンドヌクレア
ーゼの作用で生じたものである。これらの重なりをＤＮ
Ａポリメラーゼ■　（クレノー断片）を用いてふさぎ、
そしてＢｇｌ　ＩＩリンカ−をプラント末端に結合する
（第７図）。その後５Ｂ１３をｈしＩＩ制限エンドヌク
レアーゼで切断し、そして打ＬＩ［断片をアガロースゲ
ル電気泳動で分離する。Ｌ■制限部位がｈｓ２０１９　
ｍＲＮ　Ａの３゛末端から３９塩基対で生じること（第
２図）、従ってこのハＬＩ［部位はｈＬＩＩ断片の一端
に相当することが注目されるであろう。この理由から、
５Ｂ１３断片の名称は５Ｂ１３゜と変わる。ｚｎ断片は
その後線状化ｐ２３３　Ｇ　、すなわちＴ−Ｄ　Ｎ　Ａ
シャトルベクター内へ挿入し、その結果プラスミドｐ２
３３Ｇ／５Ｂ１３’　（ここでは共にとりこまれた組み
換えＤＮＡ断片と定義する）ができる、そしてこれをＥ
、ｃｏｌｉ株Ｊ旧０１へ形質転換する。増幅さ−Ｕた後
、以下（１）、（２）および（３）を用い−ζζトリプ
ルマツチングを行う、　（１）影至り」−株のヘルパー
プラスミド（ｐＲＫ２０１３　）　。

（２）Ｌ部具１１０１のプラスミドｐ２３３　Ｇ　／　
５Ｂ１３’　。

（３ンＴｉ−プラスミドを含むアゲロバ゛クテリウムチ
ューメファシエンス（八、ｔｕｍｅｆａｃｊｅｎｓ　）
株１５９５５（第８図）。１５９５５株はストレプトマ
イシン抵抗性である（　ｓｔｒ’　）。ｐＲＫ２０１３
および組み換えシャトルヘクターｐ２３３　Ｇ　／　５
Ｂ１３’　は複製開始点を有するがこれらはＥ、ｃｏｌ
ｉ株では機能するがアグロバクテリウム　チューメファ
シエンス（紅則調ユｆａｃｉｅｎｓ　）では機能しない
。従ってヘルパープラスミドは、正常では転送すること
ができないような第２のプラスミドをある細菌株から他
へ転送するのを促進するプラスミドとして定義すること
ができる。しかし、　ｐＢＲ３２２は動員８部位（ｍｏ
ｂ　）を有しこれはｐＲＫ２０１３の転送遺伝子（ｔｒ
ａ　）によって認識されるので従って組み換えシセトル
ヘクターｐ２３３Ｇ／５Ｂ１３’　は１アグロバクテリ
ウム　チューメファシエンス（Ａ、　ｔｕｍｅｆａｃｉ
μは−）に転送さｈ　得る。しかしながら、　ｐ２３３
　Ｇ　／　ＳＲ］、３’　はアグロハクテリウムチュー
メファシエンス（Ａ、ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ　）では
複製できず、よってその存在は内在性Ｔｉ−プラスミド
を用いた組み換え（１回の交叉もしくは２重連交叉）に
よって安定化されるにすぎない。

これら３株を混合そして１６時間インキユヘイトした後
組み換え内在性Ｔｉ−プラスミド（すなわちＴｉ−ｐ２
３３Ｇ／５Ｂ１３’　）をストレプトマイシンおよびカ
ーへニジリンを含む培地に７２時間プレートして選択す
る。ストレプトマイシンはアグロバクテリウム（Ａｇｒ
ｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）を選択し、そしてカー−、ニジ
リンはｐＢＲ３２２を選択する。アグロハタテリウムチ
ューメファシエンス（Ａ、ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ　）
株１５９５内の組み換えＴｉ−ｐ２３３Ｇ／５Ｂ１３’
　プロモータープラスミドは今や利用可能である。

今２組み換えＴｉ　−ｐ２３３　Ｇ　／　５Ｂ１３’　
内在性プラスミドはβ−ガラクトシダーゼ誘導遺伝子（
すなわち、Ｚ遺伝子）を保持し、この遺伝子はＴｉ−プ
ラスミドのＴ−ＤＮＡ内のｈｓ２０１９ヒートシヨ’７
クブクロモーターの制御下にありまたアグロバクテリウ
ム　チューメファシェンス（Ａ、ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎ
ｓ　）株１５９５５で安定な形で存在する。この細菌を
植物または植物培養細胞に感染させるとＴ−ＤＮＡは植
物ゲノムへと転送され得る。このようにして形質転換し
た植物組織または植物細胞はＺ遺伝子（ここでは形質転
換認識遺伝子と定義する）の発現により認識することが
可能である。すなわちＺ遺伝子が発現すると５−ブロモ
−４−クロル−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトシダ
ーゼ（Ｘ−ｇａ＋）を含む培地で熱処理した後青色に生
育する（旧１１ｅｒ。

Ｊ、Ｍ、　（ｅｄ、　）（１９７５）　Ｅｘｐｅｒｉｍ
ｅｎｔｓ　ｉｎ　Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒＧｅｎｅｔｉｃｓ
、　Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂ、Ｌａｂ、＋　
Ｃｏ１ｄ　ＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ、Ｎｅｗ　Ｙｏｒ
ｋ　）　、最も重要なのはこの青色の発現が単に一時的
であることである。

遺伝子２０】９ヒートシヨツクプロモーター単離の出発
材料はｐｖｃ　ａ由来クローンＢＥ２５０である（第２
図）。プラスミドｐＵＣ８−ＢＥ２５０　ばＨ２のハＬ
旧−Ｅｃｏ　ＲＩ小断片を保持し、この展旧−Ｅｃｏ　
ＲＩ小断片はヒートショック遺伝子２０１９のプロモー
ターおよびコード領域の一部を含む。このプラスミドを
制限エンドヌクレアーゼＡｌｕ　Ｉで切断しそしてプロ
モーター含有断片を単離する（第８図）。この断片は転
写開始点の下流６５塩基対　に広がりその結果翻訳され
ない先導配列の主要部分を含む、しかし翻訳開始コドン
は含まない。ｆｌｉｎｇ■リンカ−をこの断片のプラン
ト末端に結合しそしてこの結合産物をＨｉｎｄｎ［およ
びＢａｍ　ＩＩＩで再切断して同様に切断されたｐＵＣ
８へクローン化する。

単離された３遺伝子（Ｅ２０１９．　Ｍ２Ｏ０５，Ｌ２
００５）全てに由来するヒートショックプロモーターを
同様にクローン化してそれぞれｈｓｐｒＥ２０１９．ｈ
ｓｐｒ　Ｍ２Ｏ０５゜およびｈｓｐｒＬ２００５　と呼
ぶ。プラスミドｐ２３３　ＧをＢｇｌ　ＩＩで切断しそ
の結果性じた１本鎖末端をＤＮＡポリメラーゼＩのクレ
ノー断片を用いてふさぐ。合成ポリリンカー（５’　−
ＧＡＧＡＴＣＴＡＡＧＣＴＴＣＴＡＧＡＣ−３′。

二本鎖）をｐ２３３　Ｇのこのふさがれた傾し■部位に
結合する。このポリリンカーはＢｇｌ　Ｈ，ＨｉｎｄＩ
［［およびＸｂａＩエンドヌクレアーゼの制限部位を有
し。

ソシてハ１ｔｌｌ／　ｌ１ｉｎｄ　ＩＩを両端に有する
プロモーター断片および肚皿１１１／Ｘｂａｌが両端の
コード領域断片いづれもの挿入に利用される。コード領
域断片は、この断片が翻訳開始コドン以外の上流ＡＴＧ
配列を含まない限りいかなる遺伝子からも得ることがで
きる。コード断片はｍ　ＲＮＡの正確なプロセシングの
ためにｐｏｌｙＡ付着部位をともなう翻訳されない３゛
−尾部（ＡＡＴＡＡＡ）を有するに違いない。

このようなヒートショック発現プラスミドはそのＩＥ、
ｃｏｌｉ株９例えば、　ＪＭＩＯＩ　もしくはＪＭ１０
３へ形質転換し、そしてこれは複製可能である。このよ
うな宿主株内で増幅させた後、ヒートショック発現プラ
ミスドをアグロバクテリウム株へ転送し。

これは実施例６で記述法の植物細胞を形質転換するのに
利用できる。

犬１雌〔Ｌ辷豆二上乞ｌＪ叉１七ｑ−ｔｙ三：！濯印坦
Ｕからのヒートショックプロモニター配列の−ｍ組み換
えプラスミドｐｈｓ６８７１を作るためのダイズヒート
ショソク遺伝子の単離およびこの遺伝子のｐＢＲ３２２
への挿入の方法は報告されている５ｃｈｏｆｆｌ。

Ｆ、およびＪ、Ｌ、Ｋｅｙ　（１９８３）　Ｐｌａｎｔ
　Ｍｏ１．Ｂｉｏｌ、２　Ｆ　２６９−２７８　）　、
　Ｅ、ｃｏｌｉ株に１２内で増殖させた後１組み換えプ
ラスミドを単離しそして制限エンドヌクレアーゼＣｆｒ
ｌおよびＡ匹■の混合物で切断する。

翻訳開始コドンＡＴＧの最初のヌクレオチドＡに＋１の
番号をつけると、これら２つの制限エンドヌクレア゛−
ゼを用いた切断によりヌクレオチド−３１４（すなわち
、上記Ａの「上流」３１４個のヌクレオチド）にわたる
断片ができる（第８図）。上流とはここではＤＮＡの読
み取り鎖上の翻訳開始コドンＡＴＧのＡヌクレオチドか
ら５゛　一方向そして下流は３”　一方向と定義する。

その後この断片を単離しそして制限酵素により出来た１
本鎖の突出部分を当業者に周知な方法（Ｍａｎｉａｔｉ
ｓ、　Ｔ、等。

１９８２　）　Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　ｃｌｏｎｉｎｇ−
ａ　１ａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｍａｎｕａｌ。

Ｇｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａ
−ｔｏｒｙ）でプラントエンドする。そしてＥｃｏ　Ｒ
１リンカ−をこの断片の両端に付着してＭ１３ｍｐ９の
Ｅｃｏ　Ｒ１部位へクローン化する。Ｅ、ｃｏｌｉＪＭ
　１０３へ形質転換した後、クローン化断片を増幅させ
そしてヒートショック遺伝子の読み取り鎖に相当する１
本鎖鋳型をまとめて培地へ溶出する。これら１本鎖鋳型
を上流から回収して宿主菌を除く。４種のデオキシヌク
レオチド３リン酸（うち１つは放射活性を有する）存在
下で、４塩基対でミスマツチがあるような合成りＮＡプ
ライマー（５°ＴＴＴＣＣＣ皿虹ＴＣ＾ＧＴＣＴＴＧＴ
Ｇ−３′）を１０倍量前もって構築しておきこれとＤＮ
ＡポリメラーゼＩ　（クレノー断片）を用いて修飾され
た２本鎖ＤＮＡを作る。４つのミスマツチヌクレオチド
ＣＣＧＧＧは下線で示しである。混合物を３７℃で十分
な時間インキュベイトして複製全２周期を行わせる。そ
れからｈｓ６８７１プロモーター領域を含む断片を単離
精製し制限エンドヌクレアーゼＥｃｏ　Ｒ１およびＳｍ
ａｌで混合切断する。Ｅ、ｃｏＲＩ混合切断する。Ｅｃ
ｏ　Ｒ１切断でできた突出部をプラントエンドしこの断
片（両末端ともプラントである）をｐ２３３　ＧのＳｍ
ａＩ部位へプラントエンド結合させそしてこの組み換え
ＤＮＡプラスミドを増幅させ適当な宿主へ形質転換する
。ミスマツチ合成りＮＡプライマーから開始した全２周
期のＤＮＡ複製によりＳｍａｌ制限部位が生しることが
注目されるｈｓ６８７１プロモーターを含む断片をｐ２
３３　ＧのＳｍａＩ部位に両方向性で挿入するが、この
両方向性の場合ｈｓ６８７１プロモーター配列の下流に
Ｓｍａ１部位が再生されこれは外来遺伝子もしくは興味
深いことにダイズ遺伝子の挿入に利用できる。特に、　
ｈｓ６８Ｔ１プロモーター領域の上流にはＳｍａＩ部位
は全くできないことに注意すべきである。　実施例７で
記述したように、挿入ヒートショックプロモーターｈｓ
６８７１を有するｐ２３３　Ｇ構築物は組み換えＤＮＡ
プラスミドと定義する。外来遺伝子もしくはダイズ遺伝
子が挿入されたこれら組み換えＤＮＡプラスミドを（実
施例７と同様に）ヒートショック発現プラスミドと命名
する。ヒートショック発現プラスミドの植物ゲノムへの
転送を実施例７の記述に従い完了する。

【図面の簡単な説明】

第１図はｐＦ２０１９の制限部位および塩基配列、第２
図はＨ，（２０１９）のマツプ、第３図はｐＨ２０１９
゜ｐＭ２００５．　ｐｌ、２００５およびｈｓ６８７１
ヒートショック遺伝子プロモーターの塩基配列、第４図
はｐＨ２０１９゜ｐＭ２００５．　ｐＬ２００５および
ｈｓ６８７１ヒートシ’ａｙり遺伝子コード配列の塩基
配列、第５図ｐＥ２０１９．　ｐＭ２００５゜ｐＬ２０
０５およびｈｓ６Ｂ７１のコード配列の下流領域（すな
わち、停止コドンの３°側）の塩基配列、第６図はダイ
ズヒートショソク遺伝子２０１９のコード領域に挿入さ
れたβ−ガラクトシダーゼ遺伝子を保持する組み換えプ
ラスミドの作成手順を示す工程図、第７図はダイズｈｓ
−プロモーター〜β−ガラクトシダーゼ−ｈｓコード−
ｈｓ３’　−尾部（すなわち、５Ｂ１３）をアグロバク
テリウム・チューメファシエンスに組み込む手順を示す
工程図、第８図はダイズヒートショック遺伝子２０１９
からのヒートショックプロモーターの単離およびこのヒ
ートショックプロモーターのプラスミドｐ２３３　Ｇの
ＴＬＤＮＡへの挿入手順を示す工程図、第９図は制限部
位およびｈｓ６８７１の配列である。 以上 ゛　代理人　弁理士　山本秀策 図面の浄書（内容に変更なし） ＦＩＧ、Ｉ ＡＴＧＡＴＧＡ　ＴＧＡＡＡＡＡＴ（ＡＡＡＭＡＣＣＴ
ＡＣＴＡＡＴＧＴＡＴＴＴＡ　ＴＧＡＡＴＡＡＴＧＴＣ
ＣＡＧＡＡＧ７１− ＣＧ Ｓａｕｊ＾ ’　ＦＩＧ、　Ｉ　ｒｎ七き） ＋１ｐａｌ１ ５ｐｈ！ ＦＩＧ、　２ ＦＩＧ、　３ ＦＩＧ、　４ ＦＩＧ、４　（条し＆ン ｈｓ６８７１１　１　１　１　１　１　１　１　１　Ｇ
ｌ　ｌ　ｌ　ＧｌｐＥ２０１９　ＩＡ　Ａ　ＧＩＧ　Ｔ
　ＴＩＣＡ　ＧＩＡ　Ｔ　ＴＩＧ　Ａ　ＡＩＧ　Ａ　Ｔ
ＩＧ　Ａ　ＴＩＡ　Ｇ　ＧＩＧ　Ｔ　丁Ｉｃ　Ｔ　ＴＩ
ＣＡ　ＧＩＡ　Ｔ　丁１ｐ＜ｏｏｓ　、Ｌｙｓ、Ｖａｌ
　、ＧＩｎ、ｌＩｅ、ＧＩｕ、Ａｓｐｌ”ｓｐ　、　Ａ
ｒｇ　、　Ｖａｌ　、　Ｌｅｕ　、　Ｇｌ”Ｉｌｅ、。 ｐｕｏｏｓｌ　ｉ　ｌ　ｌ　ｌ　ｌ　ｌ　ｌ　ｌ　ｌ　
ｌ　ｌ　１ｈｓ６８７１　ｌ　ｌＣＧＩＧ　ＩＩｃ　１
１Ｇｃ、ｌ　Ａｌ　ｌ　ｌ　ｌ　＾ＩＬｅｕ　Ｇｌｕ　
Ｇｌｎ　Ｇｌｙ ｈｓ６ａｎｌ　ｌ　ｌ　ｌ　ｌ　丁１　１　１　ＡＩ　
ｌ　ｌ　ｌ　ＴｌＦＩＧ、　４　（廷と〉 ＦＩＧ、　５ ｐ８Ｒ３２２／５８１３ ＦＩＧ、　７ 手続補正書（自発） 昭和６０年５月２２日 昭和６０年特許願第７９１２７号 ２、発明の名称 ヒートショックプロモーターおよび遺伝子３、補正をす
る者 事件との関係　特許出願人 住所　アメリカ合衆国　コロラド８０３０１−２２４４
ポールグー、ミンチエル　レーン３３フ５名称　アグリ
ジェネティクス　リサーチアソシエイツ　リミテッド 代表者　ゾール　ジェイ、ハンセン 国籍　アメリカ合衆国 ４、代理人 住所　〒５３０大阪府大阪市北区西天満電話（大阪）　
０６−３６１−１１３９５、補正の対象 願書の特許出願人の代表者の欄　図面 および委任状 ６、補正の内容 願書の特許出願人の代表者の欄は別紙のとおり。 トレーシングペーパーに濃茶で描いた正式図面（内容に
変更なし）および委任状（訳文添付）を別紙のとおり差
し出します。 手続補正書（方式） ％式％ １、事件の表示 昭和６０年特許願第７９１２７号 ２、発明の名称 ヒートショックプロモーターおよび遺伝子３、補正をす
る者 事件との関係　特許出願人 住所　アメリカ合衆国　コロラド８０３０１−２２４４
ボールグー、ミンチエル　レーン３３フ５名称　アグリ
ジェネティクス　リサーチアソシエイッ　リミテッド 代表者　ゾール　ジェイ、ハンセン 国籍　アメリカ合衆国 ４、代理人 住所　〒５３０大阪府大阪市北区西天満１ｉＬｊ２ｉ　
Ｌ人ＶｉノＵｂ−Ｊｂｌ　−１１３９５、補正の対象 明細書全文 ６、補正の内容 別紙のとおり（浄書のため内容に変更なし）手続補正書
（自発） １．事件の表示 昭和６０年特許願第７９１２７号 ２、発明の名称 ヒートショックプロモーターおよび逍イ云二Ｆ３、補正
をする者 事件との関係　特許出願人 住所　アメリカ合衆国　コロラド８０３０１−２２４４
ボールダー、ミノチェル　レーン３３フ５名称　アグリ
ジェ不ティクス　リザーチアソシエイツ　リミテッド 代表者　ゾール　ジェイ、ハンセン 国籍　アメリカ合衆国 ４、代理人 住所　〒５３０大阪府大阪市北区西天満５、補正の対象 明細書の発明の詳細な説明の欄 ６、補正の内容 ｆｉｌ明細書第５２頁１６行から１８行の「植物ＤＮＡ
の前記断片がダ・ｆズ植物から得られ、該断片は次の配
列を有するか、ｉ）ｂ＜は実質的にそれと相同である：
」を削除しまず。 （２）明細書第５２頁１８行から第５３頁１０行の「５
”−Ｔ−Ａ−Ｃ−＾−Ｔ−Ｇ４ｉ　１’　Ｇ−Ｔ−Ｇ−
Ｇ−＾−Ｇ−八−八へＴへＴ−Ｃ−八−ＡへＣ−Ｃ−ミ
ーへ−＾−Ｔ−１’−Ｇ　Ｃ八　八　八−＾−八へＧ−
Ｔ−八へＧ−Ｇ−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｇ
−Ｇ−八　八−Ｃ−＾−Ｔ・八−Ｃ−Ａ−Ａ−Ｇ−八−
Ｔ−Ｔ−八−Ｔ、−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−八−Ｃ１
”ｌ’−ＣＣ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ａ−八−Ａ−Ｔ−八−Ｃ−
Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ｃ−［；−Ｔ−ミーＴ−Ｃ−Ｃ−Ｃ−
Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ｃ
−八−八−Ａ−Ｃ−Ｇ−＾−八　Ｇ−八−八−八−八−
ミーへ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−へ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ
−Ｇ−Ｃ−Ｇ　Ａ−Ｔ−、Ｃ−Ｔ−Ｃ−八−Ｔ−Ｔ−Ａ
−Ｃ−Ａ−Ａ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−八−に−
Ｔ　’ｌ’　１’−Ｃ−Ｔ−ミーへ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−
Ａ−Ｇ−Ｃ−Ｔ−八−八−Ｇ−Ａ−Ａ−Ａ−Ａ−八　Ｃ
Ｃ八−八−Ａ−八−Ｇ−八−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−
Ｔ−Ｇ−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ａ　Ｉ：　Ｇ　Ｔ−Ｔ−
Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ｃ−Ｃ−Ｇ
−八−Ａ−Ｇ−Ｇ−ＡＧＣ八＾へＣ，、Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ｔ
−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ａ、−Ｔ−Ｃ−Ｃ−へ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ
−Ｃ−へ　ＣＴＣＧ−Δ−Ｃ−＾−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｇ
−３’、Ｊを削除し、これを明細書第５５頁１６行から
１２）行の「前記ヒートショックプロモーター配列が次
の塩括配列を有するか、もしくは実質的にそれと相同で
ある：」の後ろに挿入いたします。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、以下の（ａ）、　（ｂ）そして（Ｃ）を有する組み
   換えＤＮＡプラスミドを保持し、かつそこで複製する細
   菌株； （ａ）ベクター。 （ｂ）Ｔｉ−プラスミドのＴ−ＤＮＡ断片に挿入された
   アグロバクテリウム（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）株
   由来のヒートショック遺伝子の発現を制御する植物ＤＮ
   Ａの断片、そして （Ｃ１植物ＤＮＡの前記断片の制御下に穐る外来遺伝子
   またはダイズ遺伝子。 ２、前記ベクターがｐＢＲ３２２である特許請求の範囲
   第１項に記載の細菌株。 ３、植物ＤＮＡの前記断片がダイズＤＮＡの断片である
   特許請求の範囲第１項に記載の細菌株。 ４、植物ＤＮＡの前記断片がダイズ植物から得られ、該
   断片は次の配列を有するか、もしくは実質的にそれと相
   同である特許請求の範囲第１項に記載の細菌株：　５’
   −Ｔ−Ａ−Ｃ−Ａ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−
   Ａ。 Ｇ−Ａ−＾−Ｔ−Ｔ−Ｃ−＾−八−Ｃ−Ｃ−Ａ−ＡへＡ
   −Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−＾−Ａ−Ａ−Ａ−’Ａ−Ｇ−Ｔ−Ａ
   −Ｇ−Ｇ−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−
   Ａ−Ａ−Ｃ−Ａ−Ｔ−＾−Ｃ−八一八へＧへ＾−Ｔ−Ｔ
   −八−ＴへＣ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ａ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−
   Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ａ−Ａ−＾−Ｔ−＾−Ｃ−Ｃ−Ｔ
   −Ｃ−Ｇ−Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ａ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−
   Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−＾−Ａ
   −八−ＣへＧ−Ａ−八−ＧへＡ−Ａ−＾−Ａ−Ａ−Ａ−
   Ｇ−Ｔ−Ｔ−＾−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｃ
   −Ｇ−へ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−＾−Ｔ−Ｔ−Ａ−Ｃ−＾−
   八へＴ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ａ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ
   −Ｃ−Ｔ−Ａ−＾−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−八−Ｇ−３’。 ５、植物ＤＮＡの前記断片がダイズ植物から得られ、該
   断片は次の配列を有するか、もしくは実質的にそれと相
   同である特許請求の範囲第１項に記載の細菌株：　５’
   −Ｔ−＾−Ｃ−Ａ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−
   Ａ−Ｇ−Ａ−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−＾−＾−Ｃ−Ｃ−Ａ−八
   −＾−Ｔ−Ｔ−ＧへＣ−Ａ−Ａ、−Ａ−Ａ−へ−Ｇ−Ｔ
   −へ−Ｇ−Ｇ−へ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−
   Ｇ−Ａ−Ａ−Ｃ−八−Ｔ−Ａ−Ｃ−Ａ−Ａ−Ｇ−Ａ−Ｔ
   −Ｔ−Ａ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ａ−Ｃ−Ｔ−
   Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ａ−Ａ−Ａ　−Ｔ−Ａ−Ｃ−
   Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ｃ−Ｇ　−Ｔ−Ａ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｃ−
   Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ｃ
   −＾−八へ＾−Ｃ−Ｇ−Ａ−Ａ−Ｇ−＾−八−Ａ−Ａ−
   Ａ−Ａ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−＾−Ｃ−Ｃ−Ｔ　−Ｇ　−Ｔ−Ｔ
   −Ｔ　−Ｇ−Ｃ−Ｇ−八−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−＾−Ｔ−Ｔ
   −Ａ−、Ｃ−Ａ−Ａ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ａ
   −Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ａ−八−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−
   八−Ｇ−Ｃ−Ｔ−Δ−Ａ−Ｇ−八−Ａ−ＡへＡ−Ａ−Ｃ
   −Ｃ−Ａ−八−Ａ−ＡｍＧ−Ａ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−
   Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−ＡｍＧ−Ｇ−Ｔ−Ｔ
   −Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−（ニーＧ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ｃ−（
   ニーＧ−Ａ−Ａ−Ｇ−Ｇ−Ａ−Ｇ−Ｃ−ＡｍＡ−Ｃ−Ｇ
   −Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ａ−、Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ａ−Ｔ
   −Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ａ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ａ−Ｃ−Ａ−
   Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−３’。 ６、植物ＤＮＡの前記断片がダイズ植物から得られ、該
   断片は次の配列を有するか、もしくは実質的にそれと相
   同である特許請求の範囲第１項に記載の細菌株：５’−
   Ａ−Ｇ−Ａ−Ｃ−Ｃ−Ａ−Ａ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ａ−Ａ
   −Ｃ−Ｃ−Ａ−Ａ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ｔ−
   Ｔ−Ａ−Ａ−Ｇ−Ａ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−へ一へ
   −Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ｇ−へ−へ−Ａ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−
   Ｔ−八−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−（ニーＧ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−
   Ｇ−へ−Ａ−Ｇ−＾−＾−Ｇ−Ｃ−Ｃ−Ａ−Ｇ−Ａ−Ａ
   −Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−八−Ａ−Ａ−Ｇ−
   Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ａ−Ｇ−Ａ−八−八−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｃ
   −Ｔ−Ａ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ａ−Ｇ−八−Ｔ−
   Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ａ−Ｇ−八−Ａ−Ｇ−Ｔ−Ａ−Ｃ−Ｇ
   −Ｇ−Ｃ−ＡｍＴ−Ｇ−へ−Ｔ−Ｇ−八−Ｔ−へ−Ｃ−
   ＾−Ｔ−へ一へ〜Ｃ−へ−へ−Ｇ−Ｇ−Ａ−Ｃ−Ｔ−Ｔ
   −Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ａ−八−＾−Ｇ−Ｔ−八−Ｃ−
   Ｔへ八−Ｔ−八へＴ−ＴへＧ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｃ
   −Ｔ−Ａ−Ｃ−へ−Ｔ−Ｃ−へ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−へ−
   Ａ−Ａ−Ｔ−Ａ−Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ａ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｇ
   −Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−ＴＬＴ−Ｇ−八−＾−Ｇ−Ａ−Ｃ−
   Ａ−Ｃ−八−Ｔ−Ｃ−Ａ−Ｃ−ＡへＧ−Ａ−Ａ−八−Ｇ
   −Ａ−ＡｍＧ−Ｔ−Ｇ−Ａ−Ａ−Ｇ−Ｇ−Ｃ−へ−Ｔ−
   Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−へ−Ｇ−Ｃ−八−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ
   、、Ｇ−Ｔ−Ａ−Ｇ−＾−Ｔ−Ｔ−Ｃ−八−＾−Ｃ−Ｃ
   へＴ−Ｃ−へ一へ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ａ−Ｇ−へ−
   Ｇ−Ｔ−Ｔ−へ−Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−＾−八へＴ
   −八へＴ−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ａ−Ｃ−へ−Ｃ−へ−Ａ−
   Ｇ−Ａ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−八−Ｃ−Ｃ−Ｃ−３’。 ７、植物ＤＮＡの前記断片がダイズ植物から得られ、該
   断片は次の配列を有するか、もしくは実質的にそれと相
   同である特許請求の範囲第１項に記載の細菌株：　５’
   −Ａ−Ｇ−Ａ−Ｃ−Ｃ−Ａ−八−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ａ−
   Ａ−Ｃ−Ｃ−八−Ａ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ｔ
   −Ｔ−八−八−Ｇ−Ａ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ａ−
   Ａ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ｇ−Ａ−Ａ−Ａ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ
   −Ｔ−八−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｇ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−
   Ｇ−八−Δ−Ｇ−Ａ−Ａ−Ｇ−Ｃ−Ｃ−八−Ｇ−八−Ａ
   −Ｔ−Ｇ−ＴへＴ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−へ一へ−へ−Ｇ−
   Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−へ−Ｇ−Δ−八へ八へ八へＴ−Ｔ−Ｃ
   −Ｔ−Ａ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ａ−Ｇ−八−Ｔ−
   Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−＾−Ｇ−八−ＡへＧ−Ｔ−Ａ−Ｃ−Ｇ
   −Ｇ−Ｃ−＾−Ｔ−Ｇ−八−Ｔ−Ｇへ＾−Ｔ−Ｇ−Ｃ−
   Ａ−Ｔ−八−＾−Ｃ−Ａ−Ａ−Ｇ−Ｇ−Ａ−Ｃ−Ｔ−Ｔ
   −Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ａ−Ａ−Ａ−Ｇ−Ｔ−Ａ−Ｃ−
   Ｔ−Ａ−Ｔ−八−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｃ
   −Ｔ−Ａ−Ｃ−八−Ｔ−Ｃ−八−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ａ−
   Δ−Ａ−Ｔ−Ａ−Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ｃ−八−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｇ
   −Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ａ−Ａ−に−八へＣ−
   Ａ−Ｃ−＾−Ｔ−Ｃ−八へＣ−Ａ−Ｇ−八−八−Ａ−Ｇ
   −Ａ−八−Ｇ−Ｔ−Ｇ−八−Ａ−Ｇ−Ｇ−Ｃ−Ａ−Ｔ−
   Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−八−Ｇ−Ｃ−＾−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ
   −Ｇ−Ｔ−Ａ−Ｇ−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−へ一へ−ＣＣ−Ｔ
   −Ｃ−八−八−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−’Ｃ−Ａ−Ｇ−Ａ−Ｇ
   −Ｔ−Ｔ−＾−Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−八−Ａ−Ｔ−
   へ−Ｔ−へ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−へ−Ｃ−へ−Ｃ−へ一へ−Ｇ
   −Ａ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ａ−Ｔ−へ一へ−Ｇ−Δ−Ｇ−＾−
   へ−へ−＾−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−へ−Ｔ
   −Ｔ−Ｃ−Ｃ−へ−へ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−
   Ｃ−Ｇ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ｃ−Ｃ−Ｇ−Ａ−八−Ｇ−Ｇ
   −Δ−Ｇ−Ｃ−八−Ｇ−ＴへＧ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−
   Ｇ−Ａ−Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｃ
   −Ｔ−Ｃ−Ｇ−ＡｍＴ−Ｇ　−Ｔ　−Ｇ　−Ｔ　−Ｇ　
   −Ｇ　−３’　ａ８、前記株がエセリシア・コリである
   特許請求の範囲第１項に記載の細菌株。 ９、前記株がアグロバクテリウム（Ａｇｒｏｂａｃ　ｔ
   ｅｒ　ｉｕｍ）属の一員である特許請求の範囲第１項に
   記載の細菌株。 １０、前記株がアグロバクテリウム・チューメファシエ
   ンス（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｍｅｆａｃｉ
   ｅｎｓ）である特許請求の範囲第９項に記載の細菌株。 １１、前記株がアグロバクテリウム・リゾゲネス（Ａｇ
   ｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ）であ
   る特許請求の範囲第９項に記載の細菌株。 １２、前記構造遺伝子が外来遺伝子である特許請求の範
   囲第１項に記載の細菌株。 １３、前記外来遺伝子がβ−ガラクトシダーゼをコード
   するＺ遺伝子である特許請求の範囲第１２項に記載の細
   菌株。 １４、前記外来遺伝子が結晶性内毒素遺伝子である特許
   請求の範囲第１２項に記載の細菌株。 １５、前記結晶性内毒素遺伝子がハシラス・チューリン
   ギエンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎ
   ｓｉｓ）の結晶性内毒素遺伝子である特許請求の範囲第
   １４項に記載の細菌株。 １６、前記構造遺伝子がダイズ遺伝子である特許請求の
   範囲第１項に記載の細菌株。 １７、以下のＦａ）そして（ｂｌを有する組み換えＤＮ
   Ａプラスミド： ＋ａ）ヘクター、そして （ｂｌアグロバクテリウム（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕ
   ｍ）株由来のＴｉ−プラスミドのＴ−ＤＮＡ断片に挿入
   されるヒートショック遺伝子の発現を制御する植物ＤＮ
   Ａの断片。 １８、前記ヘクターがｐＢＲ３２２である特許請求の範
   囲第１７項に記載の組み換えＤＮＡプラスミド。 １９、植物１）　Ｎ　Ａの前記断片がダイズＤＮＡの断
   片である特許請求の範囲第１７項に記載の組み換えＤＮ
   Ａプラスミド。 ２０．植物１）ＮＡの前記断片がダイズ植物から得られ
   、該断片は次の配列を有するか、もしくは実質的にそれ
   と相同である特許請求の範囲第１７項に記載の組み換え
   ＤＮＡプラスミド：　５’−Ｔ−＾−Ｃ−Ａ−Ｔ−Ｇ−
   Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ａ−Ｇ−＾−＾−Ｔ−Ｔ−Ｃ
   −八−Ａ−Ｃ−Ｃ−ΔへΔ−＾−Ｔ−Ｔ−Ｇ、Ｃ−八−
   Ａ−Ａ−Ａ−Ａ−Ｇ−ＴへＡｍＧ−（、Ａ−Ｔ４−Ｔ−
   Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−＾−＾−Ｃ−＾−Ｔ−＾−Ｃ
   −＾−Ａ−Ｇ−ＡｍＴ−Ｔ−Ａ〜Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−
   Ｔ−Ｃ−Ａ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ａ−八
   −Ａ−Ｔ−Ａ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ｃ−Ｇ−Ｔ−八〜
   Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ
   −Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−＾−Ａ−Ａ−Ｃ−Ｇ−八−八−Ｇ−
   Ａ−ＡへＡへへ一へ一へ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ａ−Ｃ−Ｃ−Ｔ
   −Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｇ−へ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−
   へ−Ｔ−Ｔ−Ａ−Ｃ−八−Ａ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｃ
   −Ｔ−へ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−へ−Ａ−Ｔ−Ｃ−
   Ｔ−Ｃ−八−６−３゛。 ２１、植物ＤＮＡの前記断片がダイズ植物から得られ、
   該断片は次の配列を有するか、もしくは実質的にそれと
   相同である特許請求の範囲第１７項に記載の組み換えＤ
   ＮＡプラスミド＝　５”−Ｔ−Ａ−Ｃ−八−Ｔ−Ｇ−Ｇ
   −Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ａ−Ｇ−Ａ−八−Ｔ−Ｔ−Ｃ−
   八−八−Ｃ−Ｃ−Ａ−＾−八へＴ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ａ−Ａ
   −Ａ−Ａ−Ａ−Ｇ−Ｔ−ＡｍＧ−Ｇ−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−
   Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−へ−Ａ−Ｃ−Ａ−Ｔ−Ａ−Ｃ
   −Ａ−へ−Ｇ−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ａ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−
   Ｔ−Ｃ−Ａ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−（ニーＣ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ａ−
   Ａ−へ−Ｔ−Ａ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ａ
   −Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−
   Ｔ−Ｃ’−Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ａ−Ａ−Ａ−Ｃ−Ｇ−Ａ−へ−
   Ｇ−へ−＾−へ−へ−Ａ−＾−Ｇ−Ｔ−Ｔ−八−Ｃ−Ｃ
   −Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｇ−八−Ｔ−Ｃ−Ｔ−
   Ｃ−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ａ−Ｃ−Ａ−Ａ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｃ
   −Ｃ−Ｔ−Ａ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ，−Ｔ−Ａ−Ａ−Ｔ
   −Ｃ−Ｔ−Ｃ−へ〜Ｇ−Ｃ−Ｔ−へ−Ａ−Ｇ−Ａ−へ−
   へ一へ一へ〜Ｃ−Ｃ−Δ−Ａ−八−ＡへＧ−八−ＴへＧ
   −Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−ＡｍＴ−Ｔ−Ｃ−Ｃ＝Ａ−
   Ｇ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ｇ−Ｔ−Ｇ
   −Ｇ−Ｃ−Ｃ−Ｇ−へ一へ−Ｇ−Ｇ−Ａ−Ｇ−Ｃ−へ−
   へ−Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−ＡｍＴ−Ｃ−Ｃ
   −Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−八−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ａ−
   Ｃ−Ａ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−３’。 ゛　２２．植物ＤＮＡの前記断片がダイズ植物から得ら
   れ、該断片は次の配列を有するか、もしくは実質的にそ
   れと相同である特許請求の範囲第１７項に記載の組み換
   えＤＮＡプラスミド：　５’　−Ａ−Ｇ−Ａ−Ｃ−Ｃ−
   Ａ−八−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ａ−Ａ−Ｃ−Ｃ−Δ−Ａ−Ｔ
   −Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−八−八−Ｇ−Ａｍ
   Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ｃ，−Ａ−Ａ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｃ−
   Ｇ−Ａ−八−Ａ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−八−Ｇ−、Ｔ−
   Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｇ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−八−八−Ｇ−へ
   一へ−Ｇ−Ｃ−Ｃ−Ａ−Ｇ−Ａ−へ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−
   Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−八−八−Ａ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−八
   −Ｇ−八−八−Ａ−八−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−へ−Ｇ−Ｔ−
   Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−へ−Ｇ−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ａ
   −Ｇ−八−八−Ｇ−Ｔ−Ａ−Ｃ−Ｇ−Ｇ−Ｃ−Ａ−Ｔ−
   Ｇ−Ａ−Ｔ−Ｇ−＾−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ａ−Ｔ−八−八−Ｃ
   −八−八−ＧへＧへ八−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−
   Ｇ−Ａ−Ａ−Ａ−Ｇ−Ｔ−八−Ｃ−Ｔ−ＡｍＴ−＾−Ｔ
   −Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ａ−Ｃ−Ａ−
   Ｔ−Ｃ−八−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ａ−Ａ−Ａ−Ｔ−＾−Ｃ
   −Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ａ−Ｔ−，Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ
   −Ｔ−Ｔ−Ｇ−へ−Ａ−Ｇ−Ａ−Ｃ−へ−Ｃ−へ−Ｔ−
   Ｃ−Ａ−Ｃ−Ａ−Ｇ−Ａ−Ａ−へ〜Ｇ−へ−＾−Ｇ−Ｔ
   −Ｇ−へ−Ａ−Ｇ−Ｇ−Ｃ−Ａ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−
   へ−Ｇ−Ｃ−へ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−へ−Ｇ
   −へ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ａ−Δ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ａ−八−
   Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−へ−Ｇ−＾−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ａ−Ｃ
   −Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ａ−へ−Ｔ−へ−Ｔ−Ａ−Ｔ−
   Ｔ−Ｔ−Ａ−Ｃ−Ａ−Ｃ−八−八−Ｇ−Ａ−Ｃ−Ｔ−Ｇ
   −八−Ｃ−Ｃ−Ｃ−３’。 ２３、植物ＤＮＡの前記断片がダイズ植物から得られ、
   該断片は次の配列を有するか、もしくは実質的にそれと
   相同である特許請求の範囲第１７項に記載の組み換えＤ
   ＮＡプラスミド：５′−＾−Ｇ−八−ＣへＣ−Ａ−八−
   ＴへＣ−Ｃ−Ｔ−へ−Ａ−Ｃ−Ｃ−へ−Ａ−Ｔ−Ｇ−Ｔ
   −Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ａ−Ａ−Ｇ−Ａ−Ｔ−Ｇ−
   Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ａ〜八−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ｇ−Ａ−へ
   一へ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−へ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−
   Ｇ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−八−Ａ−Ｇ−八−Ａ−Ｇ−Ｃ
   −Ｃ−Ａ−Ｇ−Ａ−Ａ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−
   Ｇ−Ａ−Ａ−Ａ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ａ−Ｇ−八−Ａ
   −Ａ−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ａ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−
   Ｇ−Ａ−Ｇ−Δ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ａ−Ｇ−Ａ−Ａ
   −Ｇ−Ｔ−Ａ−Ｃ−Ｇ−Ｇ−Ｃ−八−Ｔ−Ｇ−へ−Ｔ−
   Ｇ−へ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ａ−Ｔ−Ａ−八−Ｃ−へ一へ−Ｇ
   −Ｇ−Ａ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ａ−八−
   八−Ｇ−Ｔ−ＡｍＣ−Ｔ−Ａ−Ｔ−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｃ
   −Ｔ−ＣニーＣ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−八−Ｃ−へ−Ｔ−Ｃ−へ
   −Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ａ−Ａ−八−１−＾−Ｃ−Ｃ−Ｃ−
   Ｃ−Ａ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｇ
   −＾−八へＧ−八へＣ−＾−Ｃ−八へＴ−Ｃ−Ａ−Ｃ−
   Ａ−Ｇ−へ一へ−Ａ−Ｇ−へ一へ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−＾−Ａ
   −Ｇ−Ｇ−Ｃ−＾−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ａ−Ｇ−Ｃ−
   Ａ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−八−Ｇ−Ａ−Ｔ−Ｔ
   −Ｃ−Ａ−Ａ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ａ−＾−Ｔ−Ｔ−Ｔ−
   Ｇ−Ｃ−＾−Ｇ−八−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Δ−Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ｔ
   −Ｃ−Ｔ−八−Ａ−Ｔ−Ａ−Ｔ−Ａ−ＴへＴ−Ｔ−八−
   Ｃ−Δ−Ｃ−Ａ−Ａ−Ｇ−Ａ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ａ−Ｔ−Ａ
   −Ａ−Ｇ−Ａ−Ｇ−Ａ−八−八−八−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−
   Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−八−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ａ−Ａ−Ｇ−Ｔ
   −Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ｃ−
   Ｃ−Ｇ−へ一へ−Ｇ−Ｇ−Ａ−Ｇ−Ｃ−Ａ−Ｇ−Ｔ−Ｇ
   −Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−ＡｍＣ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−
   Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−八−Ｔ−Ｇ−Ｔ
   −Ｇ−Ｔ　ニーＧ−３゛。 ２４、ダイズヒートショソク遺伝子プロモーターの制御
   下で形質転換認識遺伝子を発現させることによりアグロ
   バクテリウム（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）種のＴ−
   ＤＮＡにより形質転換した植物細胞を認識する方法であ
   って５次の工程を含む： ＋ａ＋ダイズヒートショソク遺伝子プロモーター配列、
   ヒートショック遺伝子コード配列および該ヒートショッ
   ク遺伝子配列の下流塩基配列を有するダイズヒートショ
   ソク遺伝子を単離すること。 （ｂｌ前記形質転換認識遺伝子を単離し、そしてポリリ
   ンカーを付着すること。 （Ｃ）前記形質転換認識遺伝子を前記ダイズヒートショ
   ック遺伝子に、前記ヒートショック遺伝子コード配列お
   よび前記形質転換認識遺伝子の読み取りの枠を保存する
   ような位置に挿入して組み換えダイズヒートショック遺
   伝子を生産すること。 該組み換えダイズヒートショック遺伝子内では前記形質
   転換認識遺伝子は前記ダイズヒートショック遺伝子プロ
   モーター配列に対してその制御下で発現できるような方
   向で配置されている。 （ｄ）前記組み換えダイズヒートショック遺伝子をＴ−
   ＤＮＡシャトルベクターへクローニングし共に取り込ま
   れた組み換えＤＮＡ断片を生産すること。 （ｅ）前記共に取り込まれた組み換えＤＮＡ断片を、細
   菌株へ形質転換すること、該細菌株は前記共に取り込ま
   れた組み換えＤＮＡ断片の複製を維持し得る。 （ｆ）前記細菌株をヘルパープラスミドを有する第２の
   細菌株と混合すること、該ヘルパープラスミドは前記共
   に取り込まれた組み換えＤＮＡ断片を第３の細菌株に転
   送することができる。該第３の細菌株は前記共に取り込
   まれた組み換えＤＮＡ断片の複製を維持し得ず、該第３
   の細菌株は内在性プラスミドを有する。 （幻前記共に取り込まれた組み換えＤＮＡ断片および前
   記内在性プラスミド間の組み換え体を選択し組み換え内
   在性プラスミドを生産すること。 （ｈ）前記第３の細菌株を植物に感染させること。 該第３の細菌株は前記組み換え内在性プラスミドを保持
   しかつそこで複製する。そして ＋１１前記組み換えダイズヒートショック遺伝子を保持
   する植物細胞を有する植物を選択すること。 このようにして前記植物細胞の形質転換を証明すること
   。 ２５、前記アグロバクテリウム（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒ
   ｉｕｍ）種がアグロバクテリウム・チューメファシエン
   ス（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｍｅｆａｃｉｅ
   ｎｓ）である特許請求の範囲第２４項に記載の方法。 ２６、前記アグロバクテリウム（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒ
   ｉｕｍ）種がアグロバクテリウム・リゾゲネス（Ａｇｒ
   ｏｂａｃ−ｔｅｒｉｕｍ　ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ　）で
   ある特許請求の範囲第２４項に記載の方法。 ２７、前記ダイズヒートショソク遺伝子がｐＥ２０１９
   または９Ｍ２００５またはｐＬ２００５である特許請求
   の範囲第２４項に記載の方法。 ２８、前記ヒートショックプロモーター配列が次の塩基
   配列を有するか、もしくは実質的にそれと相同である特
   許請求の範囲第２４項に記載の方法：５’−Ｔ−Δ−Ｃ
   −Ａ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−八−Ｇ−Ａ−
   Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−＾−＾−Ｃ−Ｃ−Ａ−＾−Ａ−Ｔ−Ｔ
   −Ｇ−Ｃ−Ａ−Ａ−Ａ−＾−Ａ−Ｇ−Ｔ−Ａ−Ｇ−Ｇ−
   ＾−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ａ−＾−Ｃ
   −＾−Ｔ−八−Ｃ−＾−＾へＧ−＾−Ｔ−Ｔ−Ａ−Ｔ−
   Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−八−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ
   −Ｔ−Ｔ−八−八−＾−Ｔ−八−ＣへＣ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−
   ＣＭＧ−Ｔ−Ａ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｇ
   −Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ａ−Ａ−Ａ−Ｃ−
   Ｇ−Ａ−Ａ−Ｇ−Ａ−八−Ａ−Ａ−＾−＾−Ｇ−Ｔ−Ｔ
   −Ａ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｇ−Ａ−
   Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ａ−Ｔ−Ｔ−八−Ｃ−＾−＾−Ｔ−Ｃ
   −Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−＾−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−
   Ａ−＾−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−＾−Ｇ−Ｃ−Ｔ−Ａ−Ａ−Ｇ
   −Ａ−Ａ−Ａ−Ａ−Ａ−Ｃ−Ｃ−Ａ−八−Ａ−Ａ−Ｇ−
   Ａ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｃ
   −Ｃ−＾−Ｇ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−
   Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ｃ−Ｃ−Ｇ−Ａ−Ａ−Ｇ−Ｇ−ＡｍＧ
   −Ｃ−Ａ−Ａ−Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−＾−
   Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−＾−Ｃ−Ｔ　−
   Ｃ−Ｇ　−Ａ−Ｃ−＾−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−３１゜ ２９、前記ヒートショックプロモーター配列が次の塩基
   配列を有するか、もしくは実質的にそれと相同である特
   許請求の範囲第２４項に記載の方法：５′−＾−Ｇ−Ａ
   −Ｃ−Ｃ−＾−八−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−ＡへＡ−Ｃ−Ｃ−
   Ａ−＾　Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−八−＾
   −Ｇ−Ａ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ａ−＾−Ｔ−Ｃ−
   Ｃ−Ｃ−Ｇ−＾−Ａ−Ａ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−八−Ｇ
   −Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｇ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ａ−＾−
   Ｇ−Ａ−Ａ−Ｇ−Ｃ−Ｃ−＾−Ｇ−八−Ａ−Ｔ−Ｇ’−
   Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−＾−八へ八へＧ−Ｔ−Ｔ−Ｔ
   −Ｃ−＾−Ｇ−Ａ−Ａ−Ａ−ＡｍＴ−Ｔ−！、−Ｔ−Ａ
   −Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ａ−Ｇ−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−
   Ｔ−Ｃ−ＡｍＧ−＾−Ａ−Ｇ−Ｔ−Ａ−Ｃ−Ｇ−Ｇ−Ｃ
   −＾−Ｔ−Ｇ−＾−Ｔ−Ｇ−Ａ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−＾−Ｔ−
   八−ＡへＣ−Ａ−Ａ−Ｇ−Ｇ−ＡｍＣ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ
   −Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ａ−Δ−八へＧ−Ｔ−八へＣ−Ｔ−＾−
   Ｔ−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ａ
   −Ｃ−＾−Ｔ−Ｃ−八−Ｔ−ＴへＴ−Ｔ−＾−Ａ−＾−
   Ｔ−＾−Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ａ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｃ
   −Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ａ−Ａ−Ｇ−＾−Ｃ−Ａ−Ｃ−
   Ａ−Ｔ−Ｃ−＾−Ｃ−＾−Ｇ−＾−Ａ−＾−Ｇ−Ａ−＾
   −Ｇ−Ｔ−Ｇ−＾−Ａ−Ｇ−Ｇ−Ｃ−Ａ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−
   Ｔ−Ｔ−Ａ−Ｇ−Ｃ−＾−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｔ
   −Ａ−Ｇ−八−Ｔ−Ｔ−Ｃ−＾−Ａ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−
   Ａ−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ａ−Ｇ−Ａ−Ｇ−Ｔ−Ｔ
   −八−Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ａ−八−Ｔ−＾−Ｔ−
   Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ａ−Ｃ−＾−Ｃ−Ａ−＾−Ｇ−＾−Ｃ
   −Ｔ−Ｇ−八−Ｔ−Ａ−＾−Ｇ−ＡへＧ−Ａ−八−＾−
   ＾−Ｔ−ＧへＴ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｃ
   −Ｃ−Ａ−Ａ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−
   Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ｃ−Ｃ−Ｇ−Ａ−Ａ−Ｇ−Ｇ−Ａ−Ｇ
   −Ｃ−Ａ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ａ−
   Ｇ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｃ
   −Ｇ−＾−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−３’。 ３０、前記形質転換認識配列がβ−ガラクトシダーゼを
   コードするＺ−遺伝子である特許請求の範囲第２４項に
   記載の方法。 ３１、前記Ｔ−ＤＮＡシャトルベクターがｐ２３３Ｇで
   ある特許請求の範囲第２４項に記載の方法。 ３２、前記第３の細菌株中の前記内在性プラスミドがア
   グロバクテリウム・チューメファシエンス（Ａｇｒｏｂ
   ａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）株１５９
   ５５のＴｉ　−プラスミドである特許請求の範囲第２４
   項に記載の方法。 ３３、ダイズヒートショック遺伝子プロモーター断片の
   制御下で構造遺伝子を発現させる方法であって、以下の
   工程を包含する； （ａ）前記ダイズヒートショソク遺伝子プロモーター断
   片を単離すること。 （ｂ）前記ダイズヒートショソク遺伝子プロモーター断
   片をＴ−ＤＮＡシャトルベクターへクローニングし組み
   換えＤＮＡプラスミドを生産するこｔｃ＞外来構造遺伝
   子もしくはダイズ遺伝子を有するＤＮＡ断片を単離しそ
   して該ＤＮＡ断片を前記組み換えＤＮＡプラスミド中の
   前記ダイズヒートショソク遺伝子プロモーターの読み取
   り鎖３゛−側の位置に挿入しヒートショック発現プラス
   ミドを生産すること、該ヒートショック発現プラスミド
   内では前記ＤＮＡ断片は前記ダイズヒートショック遺伝
   子プロモーターに対してその制御下で発現できるような
   方向に配置されている。 （ｄ）前記ヒートショック発現プラスミドを第１の細菌
   株へ形質転換すること、該細菌株は前記ヒートショック
   発現プラスミドの複製を、維持し得る。 （ｅｌ前記ヒートショック発現プラスミドの複製を維持
   し得る前記細菌株をヘルパープラスミドを有する第２の
   細菌株と混合すること、該ヘルパープラスミドは前記ヒ
   ートショック発現プラスミドを第３の細菌株に転送する
   ことができる。該第３の細菌株は前記ヒートショック発
   現プラスミドの複製を維持し得ず、該第３の細菌株は内
   在性プラスミドを有する。 （ｆ）前記ヒートショック発現プラスミドおよび前記内
   在性プラスミド間の組み換え体を選択し。 組み換え内在性プラスミドを生産すること。 （幻前記第３の細菌株を植物もしくは植物培養細胞に感
   染させること、該第３の細菌株は前記組み換え内在性プ
   ラスミドを保持しかつそこで複製する。そして （ｈ）前記外来構造遺伝子もしくはダイズ遺伝子を保持
   する植物細胞を含有する植物体または植物培養細胞を前
   記ダイズヒートショック遺伝子プロモーターの制御下で
   選択すること、該ダイズヒートショック遺伝子プロモー
   ターは前記組み換え内在性プラスミドから前記植物細胞
   へ転送されたものであり、該外来構造遺伝子もしくはダ
   イズ遺伝子はヒートショック処理または他のストレス処
   理により発現する。 ３４、前記ヒートショック遺伝子プロモーター断片が次
   の塩基配列を有するか、もしくは実質的にそれと相同で
   ある特許請求の範囲第３３項に記載の方法’：　５’−
   Ｔ−＾−Ｃ−Ａ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ａ
   −Ｇ−Ａ−＾−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ａ−Ａ−Ｃ−Ｃ−Ａ−＾−
   Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ａ−＾−Ａ−Ａ−＾−Ｇ−Ｔ−Ａ
   −Ｇ−Ｇ−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ＝Ｔ−Ｇ−Ｇ−
   ７１，−Ａ−Ｃ−Ａ−Ｔ−Ａ−Ｃ−ミーＡ−Ｇ−Ａ−Ｔ
   −Ｔ−＾−Ｔ−Ｃ−（ニーＴ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ａ−Ｃ−Ｔ
   −Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ａ−＾−Ａ−Ｔ−Ａ−Ｃ−
   Ｃ−Ｔ−（１ニーＧ−Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ａ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｃ
   −Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ｔ−
   Ｃ−Ａ−Ａ−Ａ、、Ｃ−Ｇ−Ａ−Ａ−Ｇ−＾−八へ＾−
   ＾−＾−Ａ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−＾−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｔ
   −Ｔ−’Ｇ−Ｃ−Ｇ−＾−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ａ−Ｔ−Ｔ
   −Ａ−Ｃ−＾−＾−Ｔ−Ｃ−Ｔ−（ニーＣ−Ｃ−Ｔ−Ａ
   −Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ａ−Ａ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−
   Ａ−Ｇ−３’。 ３５゜前記ヒートショック遺伝子プロモーター断片が次
   の塩基配列を有するか、もしくは実質的にそれと相同で
   ある特許請求の範囲第３３項に記載の方法　：　５”−
   Ａ−Ｇ−八−Ｃ−Ｃ−八−＾−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−八−八
   −Ｃ−Ｃ−Ａへ八へＴ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ｔ−
   Ｔ−Ａ−Ａ−Ｇ−＾−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ａ−＾
   −Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ｇ−＾−Ａ−Ａ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−
   Ｔ−＾−Ｇ−Ｔ’−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｇ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−
   Ｇ−Ａ−＾−Ｇ−＾−＾−Ｃ−Ｃ−Ｃ−＾−Ｇ−Ａ−＾
   −Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−＾−八へＡ−Ｇ−
   Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−＾−Ｇ−Ａ−＾−Ａ−八−ＴへＴ−Ｃ
   −Ｔ−Ａ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−＾−Ｇ−＾−Ｔ−
   Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−＾−Ｇ−Ａ−＾−Ｇ−Ｔ−Ａ−Ｃ−Ｇ
   −Ｇ−Ｃ−Ａ−Ｔ−Ｇ−Ａ−Ｔ−Ｇ−＾−Ｔ−Ｇ−Ｃ−
   ＾−Ｔ−＾−Ａ−Ｃ−＾−八−Ｇ−Ｇ−Ａ−Ｃ−Ｔ−Ｔ
   −Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ａ−Ａ−Ａ−Ｇ−Ｔ−Ａ−Ｃ−
   Ｔ−Ａ−Ｔ−Ａ−Ｔ、Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｃ
   −Ｔ−Ａ−Ｃ−Ａ−Ｔ−Ｃ−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ａ−
   Ａ−Ａ−Ｔ−Ａ−Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ａ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｇ
   −Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ａ−Ａ−Ｇ−ＡｍＣ−
   ＾−Ｃ−Ａ−Ｔ−Ｃ−Ａ−Ｃ−Ａ−Ｇ−Ａ−Ａ−Ａ−Ｇ
   −Ａ−Ａ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ａ−Ａ−Ｇ−Ｇ−Ｃ−八−Ｔ−
   Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ａ−Ｇ−Ｃ−Ａ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ
   −Ｇ−Ｔ−Ａ−Ｇ−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ａ−Ａ−Ｃ−Ｃ−
   Ｔ−Ｃ−Ａ−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ａ−Ｇ−ＡｍＧ
   −Ｔ−Ｔ−Ａ−Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ａ−Ａ−Ｔ−
   Ａ−Ｔ−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−八−Ｃ−八−Ｃ−Ａ−＾−Ｇ
   −八−ＣへＴ−Ｇ−Ａ−Ｃ−Ｃ−Ｃ−３’。 ３６、前記Ｔ−ＤＮＡシャトルベクターがｐ２３３Ｇで
   ある特許請求の範囲第３３項に記載の方法。 ３７、前記ダイズヒートショソク遺伝子プロモーター断
   片がｈｓｐｒＥ２０１９もしくはｈｓｐｒＭ２００５で
   ある特許請求の範囲第３３項に記載の方法。 ３８、前記組み換えＤＮＡプラスミドがｐ２３３Ｇ／ｈ
   ｓ１３Ａもしくはｐ２３３Ｇ／ｈｓ１３Ｂである特許請
   求の範囲第３３項に記載の方法。 ３９、前記外来構造遺伝子がバシラス・チューリンギエ
   ンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉ
   ｓ）の結晶性毒性蛋白質である特許請求の範囲第３３項
   に記載の方法。 ４０、前記外来構造遺伝子か除草剤耐性遺伝子である特
   許請求の範囲第３３項に記載の方法。 ４１、前記第３の細菌株の前記内在性プラスミドがアグ
   ロバクテリウム・チューメファシェンス（Ａｇｒｏｂａ
   ｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）株１５９５
   ５のＴｉ−プラスミドである特許請求の範囲第３３項に
   記載の方法。 （以下余白）